CN101759672B

CN101759672B - 丹参丹酚酸b

Info

Publication number: CN101759672B
Application number: CN2008102276449A
Authority: CN
Inventors: 顾群; 李志刚; 渠守峰; 孙德杰; 姜威; 阮爱华; 金治刚; 林治荣
Original assignee: BENCAO TIANYUAN PHARMACEUTICAL RESEARCH INST BEIJING
Current assignee: BENCAO TIANYUAN PHARMACEUTICAL RESEARCH INST BEIJING
Priority date: 2008-11-28
Filing date: 2008-11-28
Publication date: 2012-11-14
Anticipated expiration: 2028-11-28
Also published as: CN101759672A

Abstract

本发明公开了标准有效成分:丹参丹酚酸B，丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其特征在于杂质包括1％-4％的迷迭香酸、1％-4％紫草酸和0.1％-1.5％的丹酚酸B甲酯中的一种或几种。本发明的丹参丹酚酸B物质基础初步明确，药理实验表明本发明标准有效成分中主成分丹参丹酚酸B与杂质具有协同药理作用，可以作为标准有效成分，可以成为药物制剂的原料药。

Description

丹参丹酚酸B

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种标准有效成分的丹参丹酚酸B。

本发明提供了一种标准中药有效成分。

背景技术

对丹参的化学成分研究开始于20世纪30年代，日本学者Nakao首先得到了3种脂溶性成分，此后我国学者在化学研究方面进行了深入系统的探索，做了大量工作，先后分离得到了一系列水溶性化合物，首先报道了丹参水溶性成分丹参素的结构，即3，4-二羟基苯乳酸，是各丹酚酸的基本化学结构，此后发现了一系列即有咖啡酰缩酚酸结构，又有新木脂素骨架的水溶性成分，如丹酚酸A、B、C、D、E、F、G、H、I、四甲基丹酚酸F、异丹酚酸C，还有迷迭香酸、紫草酸等。丹酚酸多数是由丹参素与其他有机酸类化合物结合而成。丹参丹酚酸B是丹参水溶性有效成分之一，丹酚酸B是丹参主要水溶性有效成分之一，又称为丹参酸B，也属于酚酸类化合物，是由3分子的丹参素和1分子咖啡酸缩合而成。丹酚酸B作为丹参中的主要水溶性成分，在治疗心血管疾病、慢性肝炎、抗肝纤维化、抗动脉粥样硬化和改善记忆功能障碍等方面发挥着重要作用。2005年版《中国药典》将丹酚酸B的含量测定收入其中，作为丹参药材项下测定的法定项目。

丹参丹酚酸B是丹参水溶性成分中具有较好的药理作用的活性成分之一，吸引着很多医药科研工作人员进行研究，准备开发成新的临床制剂，中药有效成分虽然活性成分的含量很大(新药注册要求需要达到90％以上)，但还有10％作用的成分是未知的，将这样的有效成分制备成制剂进入临床，在发生不良反应或副作用时，无法进行追踪，给新药上市的临床实验或医生用药依据带来巨大的困难，这主要应该归结为中药有效成分的物质基础还不是十分明确，因此，对丹参丹酚酸B的研究首要重点的是：以现有的技术手段为基础，将其物质基础在一定程度上研究透彻。

发明内容

基于上述原因，我们的科研人员通过创造性的劳动，对含量大于90％以上的丹参丹酚酸B进行深入的分析，确定其含量较大的杂质及含量，得到标准有效成分丹参丹酚酸B，该标准有效成分可以作为标准原料药，用于市场销售、制剂制备等方面，这样，，有利于中药原料的标准化，有利于中药制剂生产的标准化，有助于中药有效成分的进入国际市场；

本发明通过以下技术方案实现的。

本申请在于提供一种标准的丹参丹酚酸B，即标准的中药有效成分：将有效成分进行含量确定，以现有的技术为基础，对含量较大的杂质进行物质确定和含量确定；本申请的标准丹参丹酚酸B有效成分可以作为药物制剂原料药使用，在符合药物制剂要求的基础上，制备的含有丹参丹酚酸B药物制剂可以用于治疗人体疾病。

本申请的标准的丹参丹酚酸B有效成分为：

(1)一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质包括1％—4％的迷迭香酸、1％—4％紫草酸和0.1％—1.5％的丹酚酸B甲酯中的一种或几种。

(2)一种丹参丹酚酸B，丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质迷迭香酸的含量为2％—3％。

(3)一种丹参丹酚酸B，丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质紫草酸的含量为2％—3％。

(4)一种丹参丹酚酸B，丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质丹酚酸B甲酯含量为0.5％—1％。

上述标准有效成分中含有的杂质迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B甲酯一种或几种是含量较大的杂质，可以进行分离检测，上述杂质进行分离和结构确证，确定其物质基础和含量。

上述标准有效成分可以由丹参提取，再经过高效液相色谱制备方法进行纯化得到，也可以由硅胶柱层析进行单体分离，高效液相色谱法控制终点得到，等等；

本发明标准丹参丹酚酸B也可以由下述方法制备得到：

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8，水洗弃去，10—20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，30％—50％乙醇洗脱，弃去洗脱液，50％—70％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值1—4，用有机溶剂萃取，有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、异丙醇中的一种，有机相浓缩，真空干燥，即得。

本发明标准有效成分丹参丹酚酸B为活性成分制备的药物制剂。

其中制剂为单位剂量的片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、口服液、微丸剂、滴丸剂、水针剂、输液剂、粉针剂。

其中片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、口服液、微丸剂、滴丸剂的单位剂量为1—5000mg。

其中水针剂、输液剂、粉针剂单位剂量为1—1500mg。

本发明标准有效成分丹参丹酚酸B，在制备治疗心脑血管疾病、肝损伤、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤、衰老药物中的应用。

一、检测分析

色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温35℃；检测波长286nm；以乙腈-0.2％醋酸水溶液为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行90分钟；

0-15分钟时，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分钟时，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分钟时，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分钟时，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分钟时，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分钟时，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分钟时，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10：90的比例进行洗脱；

对照品溶液的配制：精密称取丹酚酸B对照品到容量瓶中，加乙醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

供试品溶液的配制：精密称取或量取样品到容量瓶中，加乙醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，即得。

实验结果：见表1

表1 标准有效成分丹参丹酚酸B检测结果

实验结论：通过上述实验表明，本发明标准有效成分丹参丹酚酸B含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质包括1％—4％的迷迭香酸、1％—4％紫草酸和0.1％—1.5％的丹酚酸B甲酯中的一种或几种；丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质迷迭香酸的含量为2％—3％；丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质紫草酸的含量为2％—3％；丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质丹酚酸B甲酯含量为0.5％—1％。

二、标准有效成分中杂质的结构确证资料

取本申请标准丹参丹酚酸B有效成分，经过硅胶柱层析分离，结合高效液相色谱液法，将含量较大的杂质、丹参丹酚酸B分别分离，得到杂质单体，进行结构确证，确证资料如下：

1、迷迭香酸结构确证资料

C₁₈H₁₆O₈，黄色无定形粉末，EI-MS：360，136，123，3337，2923，1689，1603，1518，1445，1360，1284，1175，1157，1116，1071，974，853，811，784。

表2 ¹HNMR谱测定数据

表3 ¹³NNMR谱测定数据

结论：通过结构确证实验，我们确定本发明标准有效成分丹参丹酚酸B的杂质之一是迷迭香酸。

2、紫草酸结构确证资料

C₂₇H₂₂O₁₂，浅黄色无定形粉末，EI-MS：3313，2923，1697，1609，1508，1446，1364，1286，1264，1173，1157，1114，1043，974，864，810，778。ESI-MSm/e：537[M-H]^-，493[M-COOH]^-，¹HNMR、¹³CNMR数据见表4、5。

表4 ¹HNMR谱测定数据

表5 ¹³NNMR谱测定数据

实验结论：通过上述实验表明，本发明标准有效成分丹参丹酚酸B含量较大的杂质之一是紫草酸。

3、丹酚酸B甲酯结构确证资料

C₃₇H₃₂O₁₆，浅黄色无定形粉末，EI-MS：3368，2956，1731，1609，1521，1446，1363，1286，1262，1178，1114，1071，1042，975，866，810，779，588。ESI-MS m/e：731[M-H]^-，¹HNMR、¹³CNMR数据见表6、7。

表6 ¹HNMR谱测定数据

表7 ¹³NNMR谱测定数据

实验结论：通过上述实验表明，本发明标准有效成分丹参丹酚酸B含量较大的杂质之一是丹酚酸B甲酯。

三、比较实验

本申请丹参丹酚酸B与现有技术得到的丹参丹酚酸B进行比较，具有以下有点：(现有技术得到丹参丹酚酸B是指中国专利03151476.6、02137375.2、02160771.0、200610170981.x等相关专利)

1、本发明将丹参丹酚酸B中含量较大的杂质进行归属，确定了其含量，进一步明确了物质基础，而现有技术中只是得到了一定含量的丹参丹酚酸B，没有进行深入的研究，物质基础模糊，不能作为药物制备的原料；

2、本发明标准有效成分可以作为药物制剂的原料，在临床应用中，发生任何不良反应或副作用，因为物质基础较明确，特别是杂质的明确可以在后续的药物临床研究中，明确出药物本身成分引起的，还是药物制剂制备过程中引入的无关物质(比如热源、污染等因素)造成的，有利于药物的发展，而现有技术中的丹参丹酚酸B虽然是有效成分，但还存在着一定的暗箱，特别是发生不良反应或副作用时，无法追索渊源，造成药物发展的障碍(比如鱼腥草注射液事件)；

3、本发明在研究中，确定杂质属于有效杂质，并且限定了其范围，在一定范围内与有效成分丹参丹酚酸B具有协同作用，属于有效杂质，而现有技术只是明确了丹参丹酚酸B的含量，对其余物质属于有效杂质、无效杂质或有害杂质一无所知，研究属于起始阶段。

4、与现有技术的丹参丹酚酸B比较，本发明的标准有效成分丹参丹酚酸B属于质量提高的产品，可以作为标准成分在市场上进行销售，包括国际市场。

5、将本发明丹参丹酚酸B与现有技术的丹参丹酚酸B进行澄明度实验比较，现有技术丹参丹酚酸B澄明度合格率只有42.3％，并且产生大量的白色析出，而本发明丹参丹酚酸B澄明度合格率达到99％以上，可以作为中药制剂包括注射剂的原料药使用。

四、药理实验

实验1

1.对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

实验方法：

取健康SD大鼠108只，体重240-260g，随机分组：空白对照组、丹参总酚酸组、丹参丹酚酸B组、本发明标准有效成分丹参丹酚酸B组。置于相同环境预饲养2天，自由饮食。预饲养结束后，进行试验，动物称重，20％乌拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉满意后，仰卧固定于鼠板上，气管插管，接呼吸机，按10～12ml潮气量，70次/分的频率给予呼气，持续正压呼吸，吸∶呼比为1∶1。根据呼吸频率及深度调整呼吸参数。随后接心电图机，测正常心电图。剪去胸前手术区毛，碘酒消毒，剪开皮肤、皮下组织、胸前肌肉及筋膜3～4cm，用18#血管钳沿第三肋间钝性分离肋间肌3cm长，打开胸腔及心包膜，记录心电图，撑开3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右侧胸腔，助手用眼科镊将胸腺向上推，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到结扎标志血管左冠状静脉，在左心耳下方2mm处用无创小圆针带6-0丝线穿线，进针深度为1～1.5mm，宽2～3mm，穿线后记录心电图，经尾静脉给予相应药液，给药10min后记录心电图，并用一带凹槽的小塑料管垫在结扎部位，两端线头在其上结扎。结扎后即刻记录心电图，以左室前壁呈紫绀或II导联S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持续0.5h以上为结扎成功标志(S-T段无改变者淘汰)。结扎后10min再次记录心电图，结扎30min后剪开结扎线，实现再灌注，并记录再灌注即刻心电图，清除胸腔内积血后逐层缝合胸壁，撤呼吸机，动物恢复自主呼吸，气管切口不做处理。再灌即刻、10min、20min、40min、1h、2h、3h分别记录心电图。将心脏在冰箱中冷冻10min后，自心尖向心底平行房室沟方向将左室切成相等厚度的5片，放入1％TTC染液中，37℃染色10min，未坏死区为暗红色，坏死区呈灰白色。数码相机拍照。将坏死区和非坏死区分别称重，计算坏死区占左心室重量的百分比，即梗死范围。

表8 对结扎/再通过大鼠左冠状动脉前降支所致心肌缺血/再灌注损伤心肌梗死范围(％)的影响 (x±s)

注：与空白对照组比较，^**P<0.01；与阳性丹参丹酚酸B组比较#P<0.05

实验2

对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤保护作用的研究

实验方法：

动物随机分组，分别为：空白对照组、丹参总酚酸组、丹参丹酚酸B组、本发明丹参丹酚酸B组。各剂量组连续灌胃给药3天，第4天药后20分钟用改良线栓法制成大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。大鼠麻醉后，将其仰卧固定。分离右侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，结扎ECA与CCA，用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于ECA与ICA分叉处作一切口，插入一端加热成光滑球形并涂了0.1％多聚赖氨酸的尼龙线(直径为0.25mm，距球端18mm处作标记，插入前沾肝素溶液)，插入深度为18mm，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留约1cm，缝合皮肤。2小时后轻轻提拉所留线头至略有阻力，实现大脑中动脉再灌注，造模完成。在缺血2h和再灌注1h内用电热毯维持大鼠的体温，体温维持在肛温36.5～37.5℃。动物入选标准，按Longa五级评分法，取神经功能行为评分为1、2、3、4分的动物，(0分：无神经缺损症状；1分：对侧前肢不能完全伸直；2分：向对侧旋转；3分：向对侧倾倒；4分：不能自己行走或昏迷)。脑梗塞范围测定，模型大鼠再灌注24h，行为学评分后，断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，剩余部分在—20℃冰箱冷冻10min，在冰盘上冠状切成6片，迅速将脑片置于TTC染液中，37℃避光温孵1h，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量百分比作为脑梗塞范围。

脑含水量测定：TTC染色称重后，将大脑置于120℃真空干燥器内烘干12h称干重。脑含水量＝(脑湿重-脑干重)/脑湿重×100％。实验结果详见表9。

表9 对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤大鼠脑梗塞范围及脑水含量的影响(X±S)

小结：通过上述实验表明，本发明标准有效成分丹参丹酚酸B组比现有文献中丹参丹酚酸B组具有更好的药理作用(P<0.05)，充分说明本发明丹参丹酚酸B标准有效成分中主要成分与杂质之间具有协同的药理作用。

实验3

对CCl₄致大鼠肝纤维化的影响

实验方法：选择雄性健康Wistar大鼠60只，体重180-200g，将大鼠均随机分正常组、秋水仙碱组(0.17mg/kg)、本发明丹参丹酚酸B组，除正常对照组外，其余各组大鼠首次于皮下注射CCl₄5ml/kg，以后每周2次背部皮下注射40％CCl4橄榄油3ml/kg，共6周。在实验期间除正常组外，第1～2周各组均给予20％猪油加0.5％胆固醇的玉米粉饲料，第3～6周饲以普通饲料。各给药组在造模开始时即同时灌胃给予相应剂量的药液，给药体积1ml/100g，给药时间共12周。各组用药周期完成后，乙醚麻醉下剖腹，经下腔门静脉采血，分别检测血清ALT、AST、Alb，并取一部分肝组织制成肝匀浆，用于检测羟脯氨酸(Hyp)含量。另取肝组织作HE染色用于组织病理学观察。实验结果见表10：

表10 对肝纤维化模型大鼠肝组织中Hyp的影响(X±S)

注：与空白对照组比较，^**P<0.01；与阳性组比较#P<0.05

实验4

对小鼠肺纤维化模型的影响

实验方法：

动物：8—12周龄、雄性、昆明种小鼠，体重18—22g。试剂：注射用博莱霉素A5，天津河北制药厂，醋酸泼尼松片：仙居制药有限公司生产，用时研成粉末，以蒸馏水溶解配成50％的混悬液。PBS液，自己配制。采用博莱霉素A5复制动物弥漫性肺间质纤维化模型。将小鼠用乙醚麻醉后仰卧于实验台上，固定头部及四肢，切开颈部皮肤，由气管一次性注入博莱霉素A5溶液0.05ml(含药0.1mg，5mg/kg)。注药完毕后缝合皮肤，将小鼠直立、旋转，尽量使药液在肺内均匀分布。手术过程严格无菌操作。空白对照组以同样方法注入等量生理盐水代替博莱霉素A5，动物清醒后随意进食。小鼠造模24小时后随机分为6组，分别为空白对照组、醋酸泼尼松组(6.5mg/kg)、本发明丹参丹酚酸B组、每组10只。空白对照组灌胃给予蒸馏水0.2ml/10g，每日三次；阳性对照组，造模后灌胃给予醋酸泼尼松，6.5mg/kg、0.2ml/10g，每日三次；给药组，造模后按0.2ml/10g灌胃给予各相应剂量的药液。以上各组，连续给药28天。结果详见表11。

表11对肺纤维化模型小鼠肺系数的影响(X±S)

注：与空白对照组比较，^**P<0.01

实验5

MTT还原法检测制剂抗肿瘤活性试验

实验材料：

MTT：用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解MTT终浓度5mg/ml，过滤除菌，分装后4℃避光保存。

MTT裂解液的配制：80g十二烷基磺酸钠溶解在200ml的N—N—二甲基甲酞胺中，水浴加热助溶，加入200ml蒸馏水，用80％乙酸与1N盐酸(1:1)混合调pH至4.7。

细胞株选用：人正常细胞株，人肝癌细胞株和人大细胞肺癌细胞株。

实验方法：单细胞悬液接种于96孔板(用RPM-1640基础培养基将细胞稀释至30000/ml，每孔加入200μl稀释好的细胞)，37℃、5％二氧化碳饱和湿度下培养24小时；每组四个平行样；去除培养基，取新配制培养基按系列浓度制备抗癌药物(本申请制剂)溶液，每孔20μl，培养48小时；每孔加入2mg/ml的MTT20μl，孵育4小时；吸出孔内培养液(尽量完全)，加入DMSO液(150μl/孔)，振荡10分钟，使结晶物充分溶解；酶标仪检测各孔OD值，(检测波长560nm)；绘制细胞活力曲线图，求出IC50值。实验结果如表8所示：

表12 细胞毒性实验结果

小结：本发明丹参丹酚酸B具有较强的细胞毒，其毒性对正常细胞和癌细胞具有一定的选择性，本发明丹参丹酚酸B可用于制各抗肿瘤药物。

实验6

对大鼠肝肿瘤抑制的比较

实验动物：大鼠，150g—180g，雌雄不分。

实验药物：生理盐水；本发明各组制剂；市售斑蝥素钠片剂。

实验方法：取大鼠分为生理盐水组、斑蝥素钠片剂组、本发明丹参丹酚酸B组，作W₂₅₆的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a*b²)/2＝V(肿瘤体积)。分离胃、十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远端，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按实验分组分别注入受试药物，术后拔管结扎胃十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续饲养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积，实验结果见表13：

表13 各组制剂对肿瘤的抑制比较

注：与生理盐水组比较^**P<0.01；与阳性对照组比较#P<0.05

实验7

抗衰老实验

实验方法：

将老龄上海系小鼠随机分组，14只/组，雌雄各半，给药组每天灌胃本发明制剂45mg/kg，共给药3周。将小鼠断尾取血50μl，按照邻苯三酚自氧化的方法测定SOD的活性。将小鼠断头处死，取出肝脏，用滤纸吸去残血，剪碎称重，加生理盐水，制备成1％匀浆，采用硫代巴比妥酸法测定肝组织中LPO的含量。实验结果见表14：

表14 对SOD、LPO的影响

注：与对照组比较^**P<0.01，^*P<0.05；与阳性对照组比较#P<0.05

实验结论：上述药理实验表明，本发明标准有效成分丹参丹酚酸B具有很好的药理作用，充分说明本发明具有科学意义。

五、实施例

实施例1

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量90％，杂质包括4％的迷迭香酸、4％紫草酸和1.5％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.5％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

药物制剂包括单位剂量的片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、口服液、微丸剂、滴丸剂、水针剂、输液剂、粉针剂；其中片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、口服液、微丸剂、滴丸剂的单位剂量为1—5000mg；其中水针剂、输液剂、粉针剂单位剂量为1—1500mg。

上述丹参丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肝损伤、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤、衰老药物中的应用。

实施例2

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量97.7％，杂质包括1％的迷迭香酸、1％紫草酸和0.1％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.2％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例3

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量94.1％，杂质包括1.4％的迷迭香酸、3.7％紫草酸，其余杂质0.8％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例4

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量95.9％，杂质包括3.1％的迷迭香酸、0.1％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.59％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例5

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量95.4％，杂质包括2％的迷迭香酸、2％紫草酸和0.5％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.1％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例6

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量92.2％，杂质包括3％的迷迭香酸、3％紫草酸和1％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.8％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例8

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量94.4％，杂质包括2.5％的迷迭香酸、2.1％紫草酸和0.6％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.4％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例9

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量94.9％，杂质包括2.8％的迷迭香酸、2.2％紫草酸，其余杂质0.1％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例10

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量96.2％，杂质包括2.7％的迷迭香酸、0.9％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.2％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例11

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量95.9％，杂质包括2.9％紫草酸和0.8％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.4％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例12

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量95.9％，杂质包括4％的迷迭香酸，其余杂质0.1％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例12

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量98.7％，杂质包括1％紫草酸，其余杂质0.3％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例13

一种丹参丹酚酸B，含有丹参丹酚酸B和杂质，丹参丹酚酸B的含量97.9％，杂质包括1.5％的丹酚酸B甲酯，其余杂质0.6％。

将上述丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

实施例14

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过HPD-100大孔吸附树脂柱，水洗弃去，10％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，50％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值1，用有机溶剂正丁醇萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

实施例15

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过HPD-100A大孔吸附树脂柱，水洗弃去，20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，50％乙醇洗脱，弃去洗脱液，70％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值4，用有机溶剂乙酸丙酯萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

实施例16

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过1400，水洗弃去，15％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，40％乙醇洗脱，弃去洗脱液，60％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值2.5，用有机溶剂乙酸乙酯萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

实施例17

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过HPD-300大孔吸附树脂柱，水洗弃去，10％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，35％乙醇洗脱，弃去洗脱液，55％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值1.5，用有机溶剂异丙醇萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

实施例18

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过HPD-400大孔吸附树脂柱，水洗弃去，20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，45％乙醇洗脱，弃去洗脱液，65％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值2，用有机溶剂乙酸丁酯萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

实施例19

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过HPD-400A大孔吸附树脂柱，水洗弃去，20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，40％乙醇洗脱，弃去洗脱液，65％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值3，用有机溶剂乙酸乙酯萃取，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

实施例20

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过HPD-450大孔吸附树脂柱，水洗弃去，15％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，70％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值3.5，用有机溶剂乙酸丙酯萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

实施例21

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过D101大孔吸附树脂柱，水洗弃去，10％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，45％乙醇洗脱，弃去洗脱液，55％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值1.5，用有机溶剂乙酸丁酯萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得。

实施例22

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过1300-I大孔吸附树脂柱，水洗弃去，20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，50％乙醇洗脱，弃去洗脱液，65％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值4，用有机溶剂正丁醇萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

实施例23

取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过AB-8大孔吸附树脂柱，水洗弃去，20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，50％乙醇洗脱，弃去洗脱液，70％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节PH值2.5，用有机溶剂异丙醇萃取，有机相浓缩，真空干燥，即得本发明丹参丹酚酸B。

将上述实施例14—23制备得到丹参丹酚酸B进行检测分析，丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质包括1％—4％的迷迭香酸、1％—4％紫草酸和0.1％—1.5％的丹酚酸B甲酯中的一种或几种；或者丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质迷迭香酸的含量为2％—3％；或者丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质紫草酸的含量为2％—3％；或者丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，其中杂质丹酚酸B甲酯含量为0.5％—1％。

将上述实施例13—24得到的丹参丹酚酸B制备成药物制剂；

上述实施例13—24得到的丹参丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肝损伤、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤、衰老药物中的应用。

注：本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。

Claims

1.一种含有杂质的丹参丹酚酸B，其特征在于丹参丹酚酸B的含量大于等于90％且小于100％，杂质的含量大于0且小于等于10％，杂质包括1％-4％的迷迭香酸、1％-4％紫草酸和0.1％-1.5％的丹酚酸B甲酯中的一种或几种，其制备方法为：取丹参药材，乙醇提取，滤过，合并滤液，浓缩，离心，取上清液过非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8，水洗弃去，10-20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至乙醇至尽，离心，取上清液过聚酰胺吸附树脂柱，水洗弃去，30％-50％乙醇洗脱，弃去洗脱液，50％-70％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至乙醇至尽，浓缩液调节pH值1-4，用有机溶剂萃取，有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、异丙醇中的一种，有机相浓缩，真空干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸B，其中杂质迷迭香酸的含量为2％-3％。

3.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸B，其中杂质紫草酸的含量为2％-3％。

4.根据权利要求1所述的一种丹参丹酚酸B，其中杂质丹酚酸B甲酯含量为0.5％-1％。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种丹参丹酚酸B为活性成分制备的药物制剂。

6.根据权利要求5所述的一种丹参丹酚酸B为活性成分制备的药物制剂，其中制剂为单位剂量的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、微丸剂、滴丸剂、水针剂、输液剂、粉针剂。

7.根据权利要求6所述的一种丹参丹酚酸B为活性成分的药物制剂，其中片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、微丸剂、滴丸剂的单位剂量为1-5000mg。

8.根据权利要求7所述的一种丹参丹酚酸B为活性成分的药物制剂，其中水针剂、输液剂、粉针剂单位剂量为1-1500mg。

9.根据权利要求1-4任一项所述的一种丹参丹酚酸B在制备治疗心脑血管疾病、肝损伤、肝纤维化、肺纤维化、肿瘤、衰老药物中的应用。