CN103919759B - 一种含有丹参素钠、丹参丹酚酸f的药物组合物及其制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域,本发明提供了一种含有丹参素钠、丹参丹酚酸F的药物组合物及其制剂。本发明所述活性成分组合物通过筛选试验获得，具有更好的药理作用，活性成分与辅料制得注射液或粉针剂稳定性好，其制备方法简单，易于工业化生产，且生产成本低。<!-- 2 -->

Description

一种含有丹参素钠、丹参丹酚酸F的药物组合物及其制剂

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及含有丹参素钠、丹参丹酚酸F的药物组合物及其制剂。

背景技术

丹参是我国传统医学中常用药物之一，有悠久的临床应用历史。丹参的化学成分主要可分为水溶性成分和脂溶性成分两大部分。20世纪早期的研究主要集中在以丹参酮为代表的脂溶性成分方面，经几十年努力，取得巨大成就。从20世纪80年代初，我国药物研究人员对丹参水溶性成分进行了研究，首先报道了丹参水溶性成分丹参素的结构，此后陆续发现了数十种水溶性成分，并明确其化学结构，其中丹参素钠是丹参干燥根部的水提取液中分离得到的一种有效成分，化学结构如下：

丹参素钠为白色针状结晶，易溶于水，溶于甲醇及乙醇，不溶于氯仿、乙醚、丙酮等有机溶剂。丹参素具有缩小心肌梗死范围和减轻病程的作用，同时对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用；丹参素能明显抑制血小板的聚集，并明显增加血小板膜的流动性；丹参素阻止钙离子内流，显著抑制大鼠腹腔巨噬细胞产生前列腺素E2（DGE2）及血栓丸B2（TXB2）等多项药理作用。

丹参注射剂近年来被广泛用于治疗冠心病等疾病，并取得较好的疗效。该药适用于胸痹血瘀症候，如胸闷、心悸、心绞痛，急慢性心肌梗塞，缺血性脑中风，脑梗塞或中风后遗症。丹参具有扩张冠状动脉，抑制血小板聚集，降低血浆粘度，加速红细胞流速的作用，从而有利于改善微循环和预防血栓的形成。丹参注射剂虽然在临床上具有很好的药理活性，但其是以丹参药材原料的中药注射剂，其物质基础不明确，发生不良反应无法进行追溯，在临床上给医生和患者带来极大的潜在隐患。

发明内容

基于上述原因，申请人研究工作组经过多年的潜心研究，从丹参中若干活性成分中筛选出新的药物组合物，该药物组合物活性成分为丹参素钠和丹酚酸F，通过本发明的方法，可以用工业化手段制备含有丹参素钠、丹参丹酚酸F的注射剂，且在制备粉针时能形成良好的冻干饼状物，复溶良好。该组合物成分明确，提高用药的安全性。

具体而言，本发明提供了：

一种含有丹参素钠、丹参丹酚酸F的药物组合物，所述药物组合物活性成分包括丹参素钠、丹参丹酚酸F。

所述的药物组合物，其中丹参素钠与丹参丹酚酸F的重量比为1-5:0.1-1。

其中药物组合物含有枸橼酸钠。

其中丹参素钠：丹参丹酚酸F：枸橼酸钠的重量比为1-5:0.1-1:0.1-1。

其中丹参素钠：丹参丹酚酸F：枸橼酸钠的重量比为1:0.4:0.4。

上述所述的药物组合物制备成注射液或粉针剂。

注射液的制备方法为：

将丹参素钠、丹参丹酚酸F混匀，在氮气流保护下加热至40～80℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至2/3处方量，加入枸橼酸钠，调节pH到6.6～7.5后，补加注射用水至全量，0.22μm滤膜滤过后，分装，即得。

其中粉针剂的制备方法为：

将丹参素钠、丹参丹酚酸F混匀，在氮气流保护下加热至40-80℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至2/3处方量，加入枸橼酸钠，调节pH到6.6-7.5后，加入冻干支架剂，溶解，补加注射用水至全量，0.22μm滤膜滤过后，分装，冷冻干燥，即得。

其中丹参素钠的方法为：

（1）丹参粉碎，过100-120目筛，用75%-95%乙醇溶液超声提取，料液比为1:3-10，提取次数1-4次，提取温度常温，超声功率50-100W/cm²，提取时间70-90min，提取液经过滤或离心，清液真空浓缩；浓缩后加入60-80%乙醇，静置，过滤，取滤液浓缩；

（2）步骤（1）得到的浓缩液直接采用D101大孔树脂纯化，将水洗液和10-30%乙醇溶液洗脱液弃去，将75%-95%乙醇溶液洗脱液合并，浓缩回收乙醇，得浓缩液；

（3）步骤2）浓缩液经过滤或离心，清液调节A_281nm为500～3000，加0.5～4M氢氧化钠溶液调节pH至12～14，20～50℃强化碱化10-12h，离心得沉淀；沉淀加蒸馏水洗涤2-4次，过滤或离心取沉淀，即得丹参素钠粗品；

（4）上述丹参素钠粗品加甲醇洗涤，离心，真空干燥，或冷冻干燥，得丹参素钠纯品。

本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

本发明研究表明，以丹参素钠作为丹参注射剂的更新换代产品，虽然质量能够得到保证，但在一些动物试验中，显示丹参素钠与丹参注射剂药理作用无统计学意义，而我们研究发现：在丹参素钠基础上，加入一定比例的丹参丹酚酸F，可以达到增强药理作用的效果，从而为代替丹参注射剂提供很好的基础研究。本发明还研究表明，在丹参素钠与丹酚酸F的药物组合物中，丹酚酸F重量比例不能超过一定比例，若超出一定比例，二者就不具有协同作用。

具体实施方式

本发明所述丹参素钠、丹酚酸F均有南京泽朗医药科技有限公司购买所得，其中丹参素钠也可以根据专利申请201010541632.0实施例1所述方法制备。

本发明所述的枸橼酸钠又称柠檬酸钠（sodiumcitrate），购自：淄博星之联化工有限公司。

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

制备制备例

实施例1丹参素钠的制备方法：

（1）丹参粉碎，过100目筛，用75%乙醇溶液超声提取，料液比为1:3，提取次数1次，提取温度常温，超声功率100W/cm²，提取时间90min，提取液经离心，清液真空浓缩；浓缩后加入80%乙醇，静置，过滤，取滤液浓缩；

（2）步骤（1）得到的浓缩液直接采用D101大孔树脂纯化，将水洗液和10%乙醇溶液洗脱液弃去，将75%乙醇溶液洗脱液合并，浓缩回收乙醇，得浓缩液；

（3）步骤2）浓缩液经过滤或离心，清液调节A_281nm为500，加4M氢氧化钠溶液调节pH至12，20℃强化碱化10h，离心得沉淀；沉淀加蒸馏水洗涤2次，过滤或离心取沉淀，即得丹参素钠粗品；

（4）上述丹参素钠粗品加甲醇洗涤，离心，真空干燥，得丹参素钠纯品，纯度99.3%。

实施例2丹参素钠制备方法

（1）丹参粉碎，过120目筛，用95%乙醇溶液超声提取，料液比为1:10，提取次数4次，提取温度常温，超声功率100W/cm²，提取时间70min，提取液经过滤，清液真空浓缩；浓缩后加入60-80%乙醇，静置，过滤，取滤液浓缩；

（2）步骤（1）得到的浓缩液直接采用D101大孔树脂纯化，将水洗液和30%乙醇溶液洗脱液弃去，将95%乙醇溶液洗脱液合并，浓缩回收乙醇，得浓缩液；

（3）步骤2）浓缩液经过滤或离心，清液调节A_281nm为3000，加4M氢氧化钠溶液调节pH至14，50℃强化碱化10h，离心得沉淀；沉淀加蒸馏水洗涤4次，过滤或离心取沉淀，即得丹参素钠粗品；

（4）上述丹参素钠粗品加乙醇洗涤，离心，冷冻干燥，得丹参素钠纯品，纯度99.5%。

实施例3丹参素钠的制备方法

（1）丹参粉碎，过100目筛，用80%乙醇溶液超声提取，料液比为1:5提取次数2次，提取温度常温，超声功率75W/cm²，提取时间75min，提取液经离心，清液真空浓缩；浓缩后加入70%乙醇，静置，过滤，取滤液浓缩；

（2）步骤（1）得到的浓缩液直接采用D101大孔树脂纯化，将水洗液和15%乙醇溶液洗脱液弃去，将80%乙醇溶液洗脱液合并，浓缩回收乙醇，得浓缩液；

（3）步骤2）浓缩液经过滤或离心，清液调节A_281nm为1000，加1M氢氧化钠溶液调节pH至12.5，30℃强化碱化10.5h，离心得沉淀；沉淀加蒸馏水洗涤3次，过滤或离心取沉淀，即得丹参素钠粗品；

（4）上述丹参素钠粗品加甲醇洗涤，离心，冷冻干燥，得丹参素钠纯品，纯度99.3%。

实施例4

丹参素钠的方法：

（1）丹参粉碎，过120目筛，用85%乙醇溶液超声提取，料液比为1:6，提取次数3次，提取温度常温，超声功率75W/cm²，提取时间85min，提取液经离心，清液真空浓缩；浓缩后加入75%乙醇，静置，过滤，取滤液浓缩；

（2）步骤（1）得到的浓缩液直接采用D101大孔树脂纯化，将水洗液和20%乙醇溶液洗脱液弃去，将90%乙醇溶液洗脱液合并，浓缩回收乙醇，得浓缩液；

（3）步骤2）浓缩液经过滤或离心，清液调节A_281nm为2500，加2M氢氧化钠溶液调节pH至13，40℃强化碱化11h，离心得沉淀；沉淀加蒸馏水洗涤4次，过滤或离心取沉淀，即得丹参素钠粗品；

（4）上述丹参素钠粗品加甲醇洗涤，离心，真空干燥，得丹参素钠纯品，纯度99.4%。

实施例5

注射液的制备方法：将丹参素钠2g、丹参丹酚酸F0.2g混匀，在氮气流保护下加热至40℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至140ml，加入枸橼酸钠0.2g，调节pH到6.6后，加入冻干甘露醇40g，溶解，补加注射用水至全量，0.22μm滤膜滤过后，分装，即得。

实施例6

注射液的制备方法：将丹参素钠2g、丹参丹酚酸F0.6g混匀，在氮气流保护下加热至50℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至150ml，加入枸橼酸钠0.6g，调节pH到7.5后，加入乳糖，溶解，补加注射用水至200ml，0.22μm滤膜滤过后，分装，即得。

实施例7

注射液的制备方法：将丹参素钠2g、丹参丹酚酸F1g混匀，在氮气流保护下加热至60℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至180ml，加入枸橼酸钠0.8g，调节pH到7.0后，加入赖氨酸216g，溶解，补加注射用水至200ml，0.22μm滤膜滤过后，分装，即得。

实施例8

注射液的制备方法：将丹参素钠2g、丹参丹酚酸F0.8g混匀，在氮气流保护下加热至45℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至150ml，加入枸橼酸钠2g，调节pH到7.0后，加入乳糖100g，溶解，补加注射用水200ml，0.22μm滤膜滤过后，分装，即得。

实施例9

注射液的制备方法：将丹参素钠2g、丹参丹酚酸F1.5g混匀，在氮气流保护下加热至60℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至120ml，加入枸橼酸钠0.8g，调节pH到6.8后，加入果糖50g，溶解，补加注射用水至200ml，0.22μm滤膜滤过后，分装，即得。

实施例10

注射液的制备方法：将丹参素钠2g、丹参丹酚酸F2g混匀，在氮气流保护下加热至50℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至140ml，加入枸橼酸钠2g，调节pH到7.1后，加入组氨酸30g，溶解，补加注射用水至200ml，0.22μm滤膜滤过后，分装，即得。

实施例11

冻干粉针剂的制备方法：将丹参素钠2g、丹参丹酚酸F0.4g混匀，在氮气流保护下加热至70℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至140ml，加入枸橼酸钠0.9g，调节pH到6.7后，加入葡萄糖80g，溶解，补加注射用水至200ml，0.22μm滤膜滤过后，分装至西林瓶，冻干，即得。

实施例12

冻干粉针剂的制备方法：将丹参素钠2g、丹参丹酚酸F1.6g混匀，在氮气流保护下加热至50℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至160ml，加入枸橼酸钠1g，调节pH到6.6后，加入组氨酸70g，溶解，补加注射用水至200ml，0.22μm滤膜滤过后，分装至西林瓶，冻干，即得。

试验1稳定性试验

1、仪器与药品

高效液相色谱仪（HP1100型，美国惠普公司），DAD检测器，AgilentChemstation色谱工作站：YB-2型澄明度检查仪(天津大学精密仪器厂)；DU640型紫外分光光度仪(美国贝克曼公司)；pHS-3C型数字酸度计(上海雷磁仪器厂)；WS/08-0l型调温调湿箱(杭州蓝天仪器生产有限公司)；METYLER.AE200型分析天平(瑞士)；

试验药物组：

试验1组：丹参素钠3g，丹参丹酚酸F1.2g，碳酸氢钠3g。

试验2组：丹参素钠3g，丹参丹酚酸F1.2g，赖氨酸4.5g。

试验3组：丹参素钠3g，丹参丹酚酸F1.2g，磷酸氢二钠3g。

试验4组：丹参素钠3g，丹参丹酚酸F1.2g，乙醇胺6g。

试验5组：丹参素钠3g，丹参丹酚酸F1.2g，精氨酸4g。

试验6组：丹参素钠3g，丹参丹酚酸F1.2g，枸橼酸钠1.2g。

制备方法：将丹参素钠、丹参丹酚酸F混匀，在氮气流保护下加热至40℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至2/3处方量，加入辅料，调节pH到6.6后，加入冻干支架剂甘露醇，溶解，补加注射用水至全量，0.22μm滤膜滤过后，分装至西林瓶，冻干，即得。

2、方法

2.1色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-磷酸（140:860:1）为流动相A；以乙腈-水-磷酸（250:750:1）为流动相B，检测波长为210nm。按下表进行梯度洗脱；理论板数按丹参素钠峰计算不低于3000，理论板数按丹参丹酚酸F峰计算不低于2000。

时间（min）	流动相A%	流动相B%
			0	58	42
2	47	53
			8	35	65
12	23	77
			15	5	95
25	5	95
			27	58	42
35	58	42

2.2考察项目及方法

2.2.1性状：白色疏松块状物。

2.2.2有关物质：取本品，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）溶解并稀释制成每1ml中含丹参素钠0.5mg的溶液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液2ml，置100ml量瓶中，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%。再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.2.3有效成分含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD）测定。

2.2.3.1对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品0.6mg、丹参丹酚酸F对照品2mg，置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，充分溶解后摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.2.3.2供试品溶液的制备

精密量取本发明样品10ml，置于50ml锥形瓶中，用90%甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算丹参素钠及丹参丹酚酸F含量。

2.3影响因素实验

在上市药品包装条件下，将上述样品在高温(60℃)、强光(4500lx)、高湿条件下考察5、10天，对其酸度、含量及有关物质等指标进行考察，各项指标均符合规定。测定结果见表1。

表1影响因素试验结果

注：A、B、C、D、E、F代表按试验1-6组所述处方制备的样品。

结论：经影响因素试验后的制剂，只有枸橼酸钠作为药用辅料的制剂符合质量要求，充分说明丹参素钠与丹参丹酚酸F组合成新的组合物，制备成制剂时，其选择辅料优选枸橼酸钠。

试验4复溶后的稳定性测定试验

将按实施例7制备三批样品（130305、130307、130309）的样品用注射用水250ml复溶后，置于4℃冰箱中，每天测定一次，连续测定14天，以测定值(Y)对时间(X)进行直线回归分析。

结果如表2、3所示。

表2复溶后的丹参素钠稳定性

P>0.05说明丹参素钠的浓度在所测定的时间内基本稳定。

表3复溶后的丹参丹酚酸F稳定性

P>0.05说明丹参丹酚酸F的浓度在所测定的时间内基本稳定。

结论：从表2、3可知，本发明三批产品复溶后连续测定14天后，丹参素钠、丹参丹酚酸F均保持含量稳定。说明本发明所示方法制备的制剂复溶后性质稳定。

试验例1组合物筛选试验

2、预选试验：小鼠耐缺氧试验

试验动物：昆明种小鼠，体重18-22g。

试验药物：

试验1组：丹参素钠3mg，丹参丹酚酸A1.2mg。

试验2组：丹参素钠3mg，丹参丹酚酸F1.2mg。

试验3组：丹参素钠3mg，丹参酮IIA1.2mg。

试验仪器：广口瓶。

试验方法：将小鼠随机分为对照组、丹参注射剂组、不同组合物试验药物组。尾静脉注射给药，给药量为0.5mg/kg，对照组给予注射用水；给药后1h快速将小鼠放入事先备好的密闭广口瓶内，记录小鼠自入瓶开始至死亡时的存活时间为小鼠耐缺氧时间（以小鼠呼吸停止为死亡指标）。

试验结果见表4。

表4不同试验组对小鼠耐缺氧影响

组别	动物数（只）	存活时间（min）
			对照组	10	11.3±1.7

试验1组	10	16.3±1.2*
			试验2组	10	25.3±6.4**
试验3组	10	21.7±3.1**

注：与对照组比较*P<0.05，**P<0.01

试验结论：上述预实验表明，丹参素钠与丹参丹酚酸F或丹参酮IIA组合具有很好的耐缺氧作用，因此，选择这两组组合进行进一步试验。

2、验证试验：对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

试验动物：健康SD大鼠，体重240-260g。

试验药物：

试验1组：丹参注射剂（四川三精升和制药有限公司）。

试验2组：丹参素钠3mg，丹参丹酚酸F1.2mg，枸橼酸钠1.2g。

试验3组：丹参素钠3mg，丹参酮IIA1.2mg，枸橼酸钠1.2g。

制剂制备方法：将丹参有效成分混匀，在氮气流保护下加热至40℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至2/3处方量，加入枸橼酸钠，调节pH到6.6后，补加注射用水至全量，0.22μm滤膜滤过后，分装即得注射剂。

试验试剂：20%乌拉坦按、碘酒、试剂盒、1%TTC。

试验方法：

将大鼠随机分组：模型组、丹参注射剂组、不同药物组合物试验组。置于相同环境预饲养2天，自由饮食。预饲养结束后，进行试验，动物称重，20%乌拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉满意后，仰卧固定于鼠板上，气管插管，接呼吸机，按10-12ml潮气量，70次/分的频率给予呼气，持续正压呼吸，吸：呼比为1:1。根据呼吸频率及深度调整呼吸参数。随后接心电图机，测正常心电图。剪去胸前手术区毛，碘酒消毒，剪开皮肤、皮下组织、胸前肌肉及筋膜3-4cm，用18#血管钳沿第三肋间钝性分离肋间肌3cm长，打开胸腔及心包膜，记录心电图，撑开3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右侧胸腔，助手用眼科镊将胸腺向上推，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到结扎标志血管左冠状静脉，在左心耳下方2mm处用无创小圆针带6-0丝线穿线，进针深度为1-1.5mm，宽2-3mm，穿线后记录心电图，经尾静脉给予相应药物，给药量为0.3mg/kg，给药10min后记录心电图，并用一带凹槽的小塑料管垫在结扎部位，两端线头在其上结扎。结扎后即刻记录心电图，以左室前壁呈紫绀或II导联S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持续0.5h以上为结扎成功标志（S-T段无改变者淘汰）。结扎后10min再次记录心电图，结扎30min后剪开结扎线，实现再灌注，并记录再灌注即刻心电图，清除胸腔内积血后逐层缝合胸壁，撤呼吸机，动物恢复自主呼吸，气管切口不做处理。再灌3小时，解剖取心脏，冰生理盐水洗去残血，剪去心房及右心室，立即放入冰箱中冷冻。将心脏在冰箱中冷冻10min后，自心尖向心底平行房室沟方向将左室切成相等厚度的5片，放入1%TTC染液中，37℃染色10min，未坏死区为暗红色，坏死区呈灰白色。将坏死区和非坏死区分别称重，计算坏死区占左心室重量的百分比，即梗死范围。

梗死范围（%）=（坏死区心脏重量/心脏重量）×100%

试验结果：筛选结果见表5。

表5

对结扎/再通大鼠左冠状动脉前降支所致心肌缺血/再灌注损伤心肌梗死范围（％)的影响

组别	动物数（只）	心肌梗死范围（%）
			模型组	10	15.33±1.87

试验1组	10	10.03±1.22*
			试验2组	10	4.81±1.04**#
试验3组	10	9.92±2.09*

注：与模型组相比，**p<0.01，*p<0.05；与试验1组比较#P<0.05。

试验结论：通过上述试验表明，丹参素钠与丹参丹酚酸F的组合物与丹参注射剂比较具有显著性差异（P<0.05)，而其它组别与丹参注射剂没有显著性差异，因此，申请人选择丹参素钠与丹参丹酚酸F的组合物。

试验例2对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤保护作用

试验药物：

试验1组：丹参注射剂（四川三精升和制药有限公司）。

试验2组：丹参素钠组。

试验3组：丹参丹酚酸F组。

试验4组：丹参素钠3mg，丹参丹酚酸F0.4mg。

试验5组：丹参素钠3mg，丹参丹酚酸F3.5mg。

试验6组：丹参素钠3mg，丹参丹酚酸F1.2mg。

试验方法：动物随机分组，分别为：空白对照组、试验1-6组。各剂量组连续尾静脉给药3天（给药量为0.3mg/kg），第4天药后20分钟用改良线栓法制成大脑中动脉阻塞（MCAO）模型。大鼠麻醉后，将其仰卧固定。分离右侧颈总动脉（CCA)、颈内动脉（ICA）及颈外动脉（ECA），结扎ECA与CCA，用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于ECA与ICA分叉处作一切口，插入一端加热成光滑球形并涂了0.1%多聚赖氨酸的尼龙线（直径为0.25mm，距球端18mm处作标记，插入前沾肝素溶液），插入深度为18mm，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。结扎入口处，尼龙线外留约lcm，縫合皮肤。2小时后轻轻提拉所留线头至略有阻力，实现大脑中动脉再灌注，造模完成。在缺血2h和再灌注1h内用电热毯维持大鼠的体温，体温維持在肛温36.5-37.5℃。动物入选标准，按Longa五级评分法，取神经功能行为评分为1、2、3、4分的动物，（0分：无神经缺损症状；1分：对侧前肢不能完全伸直；2分：向对侧旋转；3分：向对侧倾倒；4分：不能自己行走或昏迷）。脑梗塞范围測定，模型大鼠再灌注24h，行为学评分后，断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，剰余部分在一20℃冰箱冷冻1Omin，在冰盘上冠状切成6片，迅速将脑片置于TTC染液中，37℃避光温孵1h，取出后置于10%甲醛液中避光保存24h。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量百分比作为脑梗塞范围。

脑含水量測定：TTC染色称重后，将大脑置于120℃真空干燥器内烘干12h称干重。脑含水量=(脑湿重-脑干重）/脑湿重X100%。实验结果详见表6。

表6对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤大鼠脑梗塞范围及脑水含量的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P＜0.01；与试验1组比较#P＜0.05。

注：本发明上述筛选试验，将丹参素钠与丹参各种活性成分进行筛选后，根据本发明的技术方案公开的结论性试验。

小结：

上述试验表明，本发明将丹参素钠与丹参丹酚酸F组合后，获得新的丹参活性成分注射剂，该组合物比市售丹参注射剂具有更好的药理作用；而且，丹参素钠与丹参丹酚酸F的比例在本发明范围内具有更好的药理作用（与试验1组比较#P＜0.05）。

Claims (9)

1.一种含有丹参素钠、丹参丹酚酸F的药物组合物，其特征在于药物组合物活性成分为丹参素钠、丹参丹酚酸F；其中丹参素钠与丹参丹酚酸F的重量比为1-5:0.1-1。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中药物组合物含有枸橼酸钠。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中丹参素钠：丹参丹酚酸F：枸橼酸钠的重量比为1-5:0.1-1:0.1-1。

4.根据权利要求2所述的药物组合物，其中丹参素钠：丹参丹酚酸F：枸橼酸钠的重量比为1:0.4:0.4。

5.根据权利要求1-4任一项所述的药物组合物，其特征在于药物组合物制备成药物制剂。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中药物制剂包括注射液和粉针剂。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中注射液的制备方法为：

将丹参素钠、丹参丹酚酸F混匀，在氮气流保护下加热至40-80℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至2/3处方量，加入枸橼酸钠，调节pH到6.6-7.5后，补加注射用水至全量，0.22μm滤膜滤过后，分装，即得。

8.根据权利要求6所述的药物组合物，其中粉针剂的制备方法为：

将丹参素钠、丹参丹酚酸F混匀，在氮气流保护下加热至40-80℃，持续搅拌下缓慢加入注射用水至2/3处方量，加入枸橼酸钠，调节pH到6.6-7.5后，加入冻干支架剂，溶解，补加注射用水至全量，0.22μm滤膜滤过后，分装，冷冻干燥，即得。

9.根据权利要求1-4任一项所述的药物组合物，其中丹参素钠的制备方法为：

(1)丹参粉碎，过100-120目筛，用75％-95％乙醇溶液超声提取，料液比为1:3-10，提取次数1-4次，提取温度常温，超声功率50-100W/cm²，提取时间70-90min，提取液经过滤或离心，清液真空浓缩；浓缩后加入60-80％乙醇，静置，过滤，取滤液浓缩；

(2)步骤(1)得到的浓缩液直接采用D101大孔树脂纯化，将水洗液和10-30％乙醇溶液洗脱液弃去，将75％-95％乙醇溶液洗脱液合并，浓缩回收乙醇，得浓缩液；

(3)步骤(2)浓缩液经过滤或离心，清液调节A_281nm为500～3000，加0.5-4M氢氧化钠溶液调节pH至12-14，20-50℃强化碱化10-12h，离心得沉淀；沉淀加蒸馏水洗涤2-4次，过滤或离心取沉淀，即得丹参素钠粗品；

(4)上述丹参素钠粗品加甲醇洗涤，离心，真空干燥，或冷冻干燥，得丹参素钠纯品。