CN101232865B - 通过在树脂上分级分离可得到的葡萄籽提取物 - Google Patents

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Abstract

用于提取葡萄籽的方法，其包括：a)用溶剂提取葡萄籽(总提取物)；b)去除水不溶性鞣质；c)任选地去除水溶性鞣质；d)通过在柱上的色谱纯化，分离具有不同MW的产物。

Description

通过在树脂上分级分离可得到的葡萄籽提取物
本发明涉及通过在树脂上分级分离可得到的葡萄籽的提取物并涉及用于制备该提取物的方法。
本发明的方法提供来自葡萄籽内的具有可变含量的儿茶素和表儿茶酸(单体)的提取物。根据本发明可得到的产物具有抗氧化剂作用并且主要用作化妆品、补充剂食品补充剂(尤其作为心血管保护补充剂)和营养药。
技术背景
从葡萄籽的加工物中得到的总提取物含有多种代谢物，尤其是儿茶素单体和表儿茶酸单体、相关的原花青素(proanthocyanidole)寡聚体和多聚体(矢车菊苷配基)以及多聚体和高分子量鞣质。
EP275224公开了用于制备葡萄(Vitis vinifera)类黄酮的磷脂复合物的的方法。
WO2005/36988公开了用于提取葡萄籽的方法，即在加工提取物后，立即将种皮与种子分离。得到的提取物以低含量的单体多酚为特征。
EP348781公开了通过用醚或酯或酯与芳香烃的混合物提取葡萄籽和/或通过过滤而得到的富含原矢车菊酚(procyanidol)寡聚体的级分。
EP1035859公开了葡萄提取物的磷脂复合物用于治疗及预防动脉粥样硬化的用途。
已知的方法具有一些缺点，如使用有毒溶剂或需要特定的植物或复杂方法。
因而需要这样的常规方法，其中以简单方式实施该方法并提供其活性成分含量可以随意进行调节的提取物。
发明公开
本发明的方法具有灵活性，因为它允许分离在所含的儿茶素及其表儿茶酸衍生物的分子量(MW)上不同的多种级分。本方法因而允许制备儿茶素及表儿茶酸均得到富集的具有减少含量的原花青素寡聚体和多聚体(矢车菊苷配基)的提取物，和制备具有截然相反特性的提取物，即具有高含量的寡聚体及矢车菊苷配基以及含量减少的单体(儿茶素和表儿茶酸)，以及制备具有任意所需要含量的单体及矢车菊苷配基的提取物。
这种灵活性还涉及有可能混合这些不同的级分，以得到具有预定的单体含量的终产物。
总提取物内所含有的高分子量多聚体和鞣质在第一加工步骤内通过在水中的部分纯化从所需级分中去除，这可以任选地通过随后用聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)处理加以优化。
在水中的部分纯化仅除去部分鞣质(大于50％w/w)，但是PVPP纯化仅减少鞣质含量至小于终提取物重量的5％。
本发明与用于制备从葡萄籽中衍生的产物的现有技术方法在如下重要特征上不同：
i.实施葡萄籽的提取而无需pH控制，也不需要使用碱性化学品或酸性化学品。
ii.提取和整体生产方法可以仅使用水和乙醇作为溶剂实施。
iii.该方法具有灵活性，因为它允许随意调节单体和寡聚体的最终提取含量。
iv.高分子量多聚体和鞣质被除去。
整体而言，本发明的方法涉及4个主要步骤：
a)用溶剂提取葡萄籽(总提取物)；
b)去除水不溶性鞣质；
c)任选地去除水溶性鞣质；
d)用柱上的色谱纯化法分离具有不同MW的产物(还可以在从步骤b中得到的任何溶液上直接实施该步骤，而无需实施步骤c)。
步骤(a)用丙酮或C1-C3醇或溶剂的混合物或其水溶液(只要含水量不超过90％(v/v))提取葡萄籽加以实施。优选40％v/v水-乙醇溶液。提取温度可以是从0℃至溶剂的沸腾温度并且优选地是70℃。
如此实施允许从提取物内除去水不溶物、尤其高分子量鞣质的步骤(b)，即冷却来自步骤(a)的提取物并且过滤或离心去掉不溶物。
步骤(c)是任选的步骤，可以实施该步骤以除去在来自步骤(b)的提取物内仍存在的任何鞣质。这些代谢物可以通过使用聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)加以除去。
优选地，本发明的方法还包括步骤(c)。
步骤(d)允许使提取物分级分离，除去大部分无用的次级代谢物(糖等)，同时保留矢车菊苷配基。该步骤即是通过在聚合树脂上吸附的色谱分离。用于此目的的合适树脂的实例是苯乙烯-DVB树脂如AmberliteHP20
Figure 2006800275313_0
或Rohm and Haas XAD1180，或丙烯酸树脂如Rohm and Haas XAD7HP。
将从葡萄籽中得到的总提取物浓缩至5％至50％w/w、优选10％w/w的干残渣，并且放置在1℃至25℃、优选在4℃的温度下，不搅拌，持续1小时至24小时，优选16小时。
将得到的混悬液在4℃离心直至从水溶液中除去残余沉淀物。将澄清水溶液在旋转蒸发器内浓缩并添加水以得到5％至50％w/w、优选10％w/w的干残渣。在一些例子中，溶液可以是水-醇或水-丙酮，而不仅是水溶液。这取决于所需要的成品：例如当需要具有高含量的儿茶素单体和寡聚体的产物时，优选使用水溶液，否则使用水-醇或水-丙酮溶液。
因此，当将从终产物内除去低分子量级分时，待上样至柱上的溶液应当具有5％至50％w/w的干残渣和5％至30％v/v、优选10％v/v的醇(C1-C3醇)或丙酮含量。因此已制备的溶液吸附于树脂上，而移出未滞留的溶液。
此后，树脂用水-醇(C1-C3醇，优选乙醇)或水-丙酮溶液洗涤以除去不想要的次级代谢物。溶剂应当具有100％至70％v/v、优选90％v/v的含水量。弃去从柱内流出的洗涤溶液。
产物用具有50％至5％v/v、优选30％v/v含水量的水-醇溶液C1-C3醇)、优选地用乙醇(洗脱。醇溶液可以任选地由具有50％至0％v/v、优选30％v/v的含水量的水-丙酮溶液替换。
本发明更详细的在如下实施例中描述。
实施例1
用水-醇溶液提取葡萄籽(步骤a)
在此步骤中，制备作为随后柱色谱分离的原材料使用的总提取物。
将1000g葡萄籽在夹层式静态渗滤器内于70℃用1.5升乙醇(40％v/v)覆盖4小时。4小时后，回收滤液并在相同条件下再提取7次，但是每次提取使用1升溶剂，以得到大约8升总滤液。合并的滤液抽吸加热过滤并通过旋转蒸发器在60℃在减压下浓缩。该提取物具有228g总干残渣，基于原材料的产率是22.8％w/w。将滤液浓缩以得到具有10％w/w干残渣的2.28kg完全水性的混悬液。
实施例2
用水-丙酮溶液提取葡萄籽(步骤a)
在此步骤中，制备作为后续柱色谱分离的原材料使用的总提取物。
将1000g葡萄籽在夹层式静态渗滤器或在配备搅拌器的夹层反应器内于70℃用1.5升40％v/v丙酮覆盖4小时。4小时后，回收滤液并在相同条件下再提取7次，但是每次提取使用1升溶剂，以得到大约8升总滤液。合并的滤液抽吸加热过滤并通过旋转蒸发器在60℃在减压下浓缩。该提取物具有235.6g的总干残渣，基于原材料的产率是23.56％w/w。
将滤液浓缩得到具有10％w/w干残渣的2.35 kg完全水性的混悬液。
实施例3
纯化从葡萄籽中得到的提取物(步骤b)：去除水不溶物
从步骤(a)的水-醇提取(实施例1)中得到的水混悬液在4℃冷却并静止放置16小时，随后将仍冰冷的水混悬液在3000g离心20分钟以从澄清水溶液中分离淀析的残留物。弃去富含高分子量产物的残留物。
得到的澄清溶液具有相当于168g部分纯化提取物的干残渣，具有3.75％w/w儿茶素HPLC含量和2.87％w/w表儿茶酸HPLC含量及6.62％w/w单体总含量(儿茶素+表儿茶酸)的。基于原材料的重量产率是16.8％w/w。
以下所述的全部色谱柱纯化法(4种不同方法)可以适用于该溶液。为简洁起见，仅报道实施例5(利用方法1)作为直接纯化该溶液的实例。后续所述的全部其它方法将适用于PVPP处理的溶液。
实施例4
纯化从葡萄籽中得到的提取物(步骤b)：去除水不溶物
从步骤(a)的水-丙酮提取(实施例2)中得到的水混悬液在4℃冷却并静止放置16小时，随后将仍冰冷的水混悬液在3000g离心20分钟以从澄清水溶液中分离淀析的残留物。弃去富含高分子量产物的残留物。
得到的澄清溶液具有173g部分纯化提取物干残渣，具有4.21％w/w儿茶素HPLC含量和2.70％w/w表儿茶酸HPLC含量及6.91％w/w HPLC单体总含量(儿茶素+表儿茶酸)。基于原材料的重量产率是17.3％w/w。
以下所述的全部色谱纯化方法(4种不同方法)可以适用于该溶液。为简洁起见，仅报道实施例6(利用方法3)作为直接纯化该溶液的实例。后续所述的全部其它方法将适用于PVPP处理的溶液。
实施例5
纯化从葡萄籽中得到的提取物：方法1(步骤d)
将在步骤(b)内描述的部分纯化方法(实施例3)结束时得到的具有168g干残渣的澄清水溶液浓缩成10％w/w的干残渣。已部分纯化提取物的这种澄清溶液具有具有3.75％w/w儿茶素HPLC含量和2.87％w/w表儿茶酸HPLC含量和6.62％w/w HPLC单体总含量(儿茶素+表儿茶酸)的干残渣。
将该水溶液加温至室温、随后上样至含有用水调湿的3300ml Rohmand Haas XAD7HP
Figure 2006800275313_3
树脂的色谱柱上。水溶液吸附至树脂上，而去除从柱中流出的未滞留的溶液。树脂随后用6.6升水洗涤，也去除该溶液，因为该溶液的单体含量可忽略不计并且矢车菊苷配基含量低。这些弃去的水溶液(产物1)具有69g总干残渣(基于原材料的重量产率：6.9％w/w)、0.09％儿茶素HPLC含量、0.10％表儿茶酸HPLC含量，总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)是0.19％w/w。
柱用9升90％v/v含水乙醇洗脱。将得到的洗脱物回收并在60℃在减压下干燥，产生98克干燥产物(产物2)，对应于基于原材料的产率9.80％w/w。该产物具有6.25％儿茶素HPLC含量、4.77％表儿茶酸HPLC含量和11.02％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)。
实施例6
纯化从葡萄籽中得到的提取物：方法2(步骤d)
将通过水-丙酮提取(步骤a；实施例2)并且随后通过步骤(b)内所述的部分纯化(实施例4)而得到的具有173g干残渣的澄清水溶液浓缩成10％w/w的干残渣。
此后，将该水溶液加温至室温，随后上样至含有3300ml Rohm andHaas XAD1180树脂的色谱柱上；去除从柱中流出的未滞留的溶液。树脂随后用6升水洗涤，并且将洗涤溶液与未滞留的溶液合并。产生的水溶液干燥得到产物3，其中产物3具有99.4g干残渣、1.29％w/w儿茶素HPLC含量、0.46％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用6升10％v/v丙酮洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物4)。所述的产物具有23.9g干残渣，13.5％w/w儿茶素HPLC含量、8.41％w/w HPLC表儿茶酸含量。
树脂随后用6升20％v/v丙酮洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物5)。所述的产物具有15.3g干残渣、14.3％w/w儿茶素HPLC含量、10.9％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用6升30％v/v丙酮洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物6)。所述的产物具有14.95g干残渣，2.21％w/w儿茶素HPLC含量、2.04％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用6升40％v/v丙酮洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物7)。所述的产物具有14.2g干残渣，1.06％w/w儿茶素HPLC含量、0.66％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用6升50％v/v丙酮洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物8)。所述的产物具有3.51g干残渣，0.67％w/w儿茶素HPLC含量、0.46％w/w表儿茶酸HPLC含量。
得到的产物可以随意加以混合以得到具有所需单体含量的产物。例如，可以这样得到具有减少的单体含量的产物，即通过3.51g产物8与14.2g产物7混合以得到具有0.98％w/w儿茶素HPLC含量、0.62％w/w表儿茶酸HPLC含量、1.60％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的17.71g产物。或者，3.51g产物8可以与14.2g产物7及与15.0g产物3混合，以得到具有1.12％w/w儿茶素HPLC含量、0.55％w/w表儿茶酸HPLC含量和1.67％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的32.71g产物。
另一方面，可以这样得到具有高含量单体的产物，即通过23.9g产物4与15.3g产物5混合，以得到具有13.81％w/w儿茶素HPLC含量、9.38％w/w表儿茶酸HPLC含量和23.19％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的39.2g产物。
实施例7
去除从葡萄籽得到的提取物中的水溶性鞣质(步骤c)
处理从步骤b的部分纯化(实施例3)中得到的具有168g干残渣的澄清水溶液以除去水溶性鞣质。向溶液添加对应于待处理提取物的大约20％干残渣重量的34g PVPP。
在室温搅拌1小时后，将PVPP经折叠式滤器滤除。得到的溶液具有部分纯化提取物的160g干残渣，鞣质含量为2.7％w/w。
基于原材料的重量产率是16.0％w/w。
实施例8
去除从葡萄籽得到的提取物中的水溶性鞣质(步骤c)
处理从步骤b的部分纯化(实施例4)中得到的具有168g干残渣的澄清水溶液以除去水溶性鞣质。向溶液添加对应于待处理提取物的大约30％w/w干残渣重量的52g PVPP。
在室温搅拌1小时后，PVPP经折叠式滤器滤除。
得到的溶液具有部分纯化提取物的163g干残渣，鞣质含量为1.5％w/w。
基于原材料的重量产率是16.3％w/w。
实施例9
纯化从葡萄籽方法1中得到的提取物(步骤d)
从步骤(c)(实施例7)的部分纯化中得到的具有160g干残渣的澄清水溶液浓缩成10％w/w的干残渣。已部分纯化提取物的这种澄清溶液具有具有3.87％儿茶素HPLC含量、2.96％表儿茶酸HPLC含量和6.83％w/wHPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的干残渣。
将该水溶液加温至室温，随后上样至含有用水调湿的3200ml Rohmand Haas XAD7HP
Figure 2006800275313_5
树脂的色谱柱上。水溶液吸附至树脂上，而去除从柱中流出的未滞留的溶液。树脂随后用6.4升水洗涤，也去除该溶液，因为该溶液的单体含量可忽略不计并且矢车菊苷配基含量低。这些弃去的水溶液(产物9)具有65g的总干残渣(基于原材料的重量产率：6.5％w/w)、0.09％儿茶素HPLC含量、0.10％表儿茶酸HPLC含量、单体总含量(儿茶素+表儿茶酸)是0.19％w/w。
将柱用9升90％v/v含水乙醇洗脱。将得到的洗脱物回收并在60℃在减压下干燥，产生95克干燥产物(产物10)，对应于基于原材料的产率9.50％w/w。该产物具有6.34％儿茶素HPLC含量、4.85％表儿茶酸HPLC含量和11.19％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)。
实施例10
纯化从葡萄籽中得到的提取物：方法3(步骤d)
将从步骤(c)的部分纯化(实施例7)中得到的具有160g干残渣的澄清水溶液浓缩成10％w/w的干残渣。
将该水溶液加温至室温，随后上样至含有1600ml Rohm and HaasXAD1180
Figure 2006800275313_6
树脂的色谱柱上。水溶液吸附至树脂上，而去除从柱中流出的未滞留的溶液。树脂随后用3升水洗涤。收集洗涤溶液并与未滞留的溶液合并。产生的水溶液干燥得到产物(产物11)。所述的产物具有106.2g干残渣、1.39％w/w儿茶素HPLC含量、0.95％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用3升乙醇(10％v/v)洗涤，随后将得到的溶液收集并干燥(产物12)。所述的产物具有12.0g干残渣、12.0％w/w儿茶素HPLC含量、7.80％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用3升乙醇(20％v/v)洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物13)。所述的产物具有14.7g干残渣、11.5％w/w儿茶素HPLC含量、9.23％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用3升乙醇(30％v/v)洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物14)。所述的产物具有20.0g干残渣、6.49％w/w儿茶素HPLC含量、5.76％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用3升乙醇(40％v/v)洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物15)。所述的产物具有5.08g干残渣、2.84％w/w儿茶素HPLC含量、2.59％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用3升乙醇(50％v/v)洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物16)。所述的产物具有1.55g干残渣、0.51％w/w儿茶素HPLC含量、0.35％w/w表儿茶酸HPLC含量。
得到的产物可以随意加以混合以得到具有所需单体含量的产物。可以这样得到具有减少的单体含量的产物，即通过1.55g产物16与5.08g产物15混合以得到具有2.26％w/w儿茶素HPLC含量、2.11％w/w表儿茶酸HPLC含量和4.37％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的6.63g产物，或1.55g产物16可以与7.00g产物11混合以得到具有1.19％w/w儿茶素HPLC含量、0.89％w/w表儿茶酸HPLC含量和的2.08％w/wHPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的8.55g产物。
另一方面，可以这样得到具有高含量单体的产物，即通过12.0g产物12与12.0g产物13和15.0g产物14混合，以得到具有9.73％w/w儿茶素HPLC含量、7.46％w/w表儿茶酸HPLC含量和17.19％w/w的HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的39.0g产物，或12.0g产物12可以与12.0g产物13混合以得到具有11.75％w/w儿茶素HPLC含量、8.52％w/w表儿茶酸HPLC含量和20.27％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的24.0g产物。
实施例11
纯化从葡萄籽中得到的提取物：方法4 (步骤d)
从步骤(c)的部分纯化(实施例7)中得到的具有160g干残渣的澄清水溶液浓缩成10％w/w的干残渣。
将该澄清水溶液浓缩成干残渣(12％w/w)，随后对其添加320ml乙醇(95％v/v)，以得到约10％w/w的干残渣和约20％v/v乙醇含量。将这种水-醇溶液加温至室温，随后上样至含有1600ml Rohm and HaasXAD1180树脂的色谱柱上。去除从柱中流出的未滞留的溶液。树脂随后用9.60升乙醇20％v/v洗涤，也去除洗涤溶液，得到135.6g干残渣，具有4.37％w/w儿茶素HPLC含量、3.35％w/w表儿茶酸HPLC含量和7.72％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)。
柱用6.60升70％v/v含水乙醇洗脱，并且将从柱中流出的洗脱物收集并在60℃在减压下干燥，产生具有24.3g干残渣、0.79％w/w儿茶素HPLC含量、0.62％w/w表儿茶酸HPLC含量和1.41％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的产物(产物17)。
实施例12
纯化从葡萄籽中得到的提取物：方法2(步骤d)
将通过步骤(a)的水-丙酮提取(实施例2)并且随后通过步骤(b)的部分纯化(实施例4)以及步骤(c)的鞣质去除(实施例8)而得到的具有163g干残渣的澄清水溶液浓缩成10％w/w的干残渣。
将该澄清水溶液加温至室温，随后上样至含有用水调湿3200mlRohm and Haas XAD7HP树脂的色谱柱上；水-醇溶液吸附至树脂上，而去除从柱中流出的未滞留的溶液。树脂随后用6.4升水洗涤，也弃去这种溶液，因为该溶液的单体含量可忽略不计并且矢车菊苷配基含量低。这些弃去的水溶液(产物18)具有62.5g的总干残渣(重量产率对原材料：6.3％w/w)、0.11％儿茶素HPLC含量、0.14％表儿茶酸HPLC含量和0.25％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)。
柱用9升90％v/v含水丙酮洗脱，并且将得到的洗脱物回收并在60℃在减压下干燥，产生99.8克干燥产物(产物19)(产物对原材料：10％w/w)。该产物具有7.11％％儿茶素HPLC含量、4.52％表儿茶酸HPLC含量和11.63％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)。
实施例13
纯化从葡萄籽中得到的提取物：方法3(步骤d)
将通过步骤(a)的水-丙酮提取(实施例2)并且随后通过步骤(b)的部分纯化(实施例4)以及步骤(c)的鞣质去除(实施例8)而得到的具有163g干残渣的澄清水溶液浓缩成10％w/w的干残渣。
将该澄清水溶液加温至室温，随后上样至含有用水调湿3200mlRohm and Haas XAD1180
Figure 2006800275313_9
树脂的色谱柱上。
水溶液吸附至树脂上，而去除从柱中流出的未滞留的溶液。树脂随后用6升水洗涤，也弃去这种溶液与未滞留的溶液合并。产生的水溶液干燥得到产物(产物20)。所述的产物具有106.4g干残渣、1.58％w/w儿茶素HPLC含量、0.47％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用6升20％v/v丙酮升洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物22)。所述的产物具有11.7g干残渣、16.8％w/w儿茶素HPLC含量、15.2％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用6升30％v/v丙酮洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物23)。所述的产物具有11.8g干残渣、2.20％w/w儿茶素HPLC含量、2.20％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用6升40％v/v丙酮洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物24)。所述的产物具有10.2g干残渣、1.15％w/w儿茶素HPLC含量、0.75％w/w表儿茶酸HPLC含量。
树脂随后用6升50％v/v丙酮洗涤，将得到的溶液收集并干燥(产物25)。所述的产物具有3.04g干残渣、0.71％w/w儿茶素HPLC含量、0.43％w/w表儿茶酸HPLC含量。
得到的产物可以随意混合以得到具有所需要的单体含量的产物。例如可以这样得到具有减少的单体含量的产物，即通过3.04g产物25与10.2g产物24混合以得到具有1.05％w/w儿茶素HPLC含量、0.68％w/w表儿茶酸HPLC含量和1.73％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的13.24g产物，或3.04g产物25可以与10.2g产物24和15.0g产物20混合以得到具有1.33％w/wHPLC单体含量、0.57％w/w表儿茶酸HPLC含量和1.90％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的28.24g产物。
另一方面，可以这样得到具有高含量单体的产物，即通过19.6g产物21与11.7g产物22混合，以得到具有15.80％w/w儿茶素HPLC含量、11.88％w/w表儿茶酸HPLC含量和27.76％w/w HPLC总单体含量(儿茶素+表儿茶酸)的31.3g产物。

Claims (5)

1.用于提取葡萄籽的方法，其包括：
a)用C1-C3醇或混合物或其水含量不高于90％(v/v)的水溶液提取葡萄籽；
b)通过冷却步骤a)的提取物并且过滤及离心出不溶物而去除水不溶性鞣质；
c)通过加入聚乙烯聚吡咯烷酮去除水溶性鞣质；
d)通过含有苯乙烯-二乙烯苯树脂或丙烯酸树脂的柱色谱纯化，分离具有不同分子量的产物。
2.如权利要求1所述的方法，其中提取溶剂是40％v/v的水-乙醇溶液。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中提取在70℃下实施。
4.具有抗氧化剂活性的矢车菊苷配基提取物，其通过将权利要求1-3任一方法的产物混合可得到。
5.具有抗氧化剂活性的组合物，含有权利要求4的提取物。
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