CN106361846A - 一种生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法，该方法包括如下步骤：（1）取新鲜苹果果肉组织块5～6mm，放入改进MS+β培养基上，进行苹果果肉组织培养；（2）取培养得到的苹果果肉组织愈伤组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇提取、提取液浓缩、喷雾干燥成粉末。本发明的方法生产的苹果提取物具有农药残留低和根皮苷含量高的特点。

Description

一种生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法
技术领域
本发明属于苹果多酚生产提取纯化方法，特别涉及一种生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法。
背景技术
苹果Malus pumila Mill.是蔷薇科植物苹果属的植物，一般指其果实。苹果中主要含有植物纤维、糖、酸、维生素、多酚等，其中苹果多酚随苹果果实的成熟而逐渐减少，因此，一般提取苹果多酚，均采用未成熟苹果；苹果中多酚物质主要包括绿原酸、儿茶素、表儿茶素、根皮苷、根皮素等，其中含量最高的是绿原酸，而根皮苷含量较低。根皮苷又称根皮甙，具有降低血糖、改善记忆力、抗氧化、抗癌等多种重要的生物活性，根皮苷是苹果树含量最高的多酚物质，但主要分布于苹果树树皮、页、茎中。
根皮苷结构式
苹果提取物，是提取自苹果的提取物，目前主要出口欧美市场，而欧美对农残都提出了很高的要求，为达到这一要求，目前生产厂家主要采用溶剂、树脂等分离脱除农药残留，从而保留和提纯苹果多酚的方法，而本发明采用组织培养的方式，由于培养过程中，并不使用农药，所用物质也均是低农残含量物质，使得引入农药的途径均被堵死，因此得到的苹果提取物也是低农残的。
MS培养基是用于植物组织培养的基础培养基，我们对其配方进行了改进，其改进后配方如下：
以上改进后MS配方的培养基正常情况下需要用去离子水稀释定容到1000mL，本发明在此之前先加入β溶液600-800mL，β溶液为人工种植苹果幼果榨汁液上吸附农残的10号树脂和纯化苹果多酚的3号串联大孔树脂柱时，流出的上柱液和水洗脱液，这两种溶液在提取纯化苹果多酚时往往都是舍弃不要的，而本发明变废为宝，从而使得资源得到了更充分的利用，节约了成本。
鲜苹果果肉中，一般约含有根皮苷0.05%～1%，而经过本专利方法2周组培得到的鲜苹果果肉组织中，根皮苷含量却达到4%-8%。
苹果人工种植时，要喷洒大量的农药，这些农药会残留在苹果果肉中,而本发明组培过程中，并未引入新的农药，所用原料仅2种会带入农药，一是β溶液，但由于β溶液是通过了吸附农残的10号树脂后的上柱流出液和水洗脱液，农药大部分已被树脂吸附，另外由于农药绝大多数均是脂溶性的，溶于水中的很少，因此即使含有农药，也是极其微量的；二是最初残留在组培原始苹果果肉组织中的农药，然而随着4次的扩繁增殖，即使不会在生长过程中降解，也已经被稀释了百倍以上，由此提取得到的提取物，农残含量肯定是极低的。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜苹果果肉组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+β的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养2周，然后切分生长良好的苹果果肉愈伤组织，转换到新的改进MS+β的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述改进MS+β的培养基，是在每配制1000mL的改进MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了600～800mL的β溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的苹果果肉组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在50℃减压回流提取60分钟，苹果果肉组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:3～5，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得苹果提取物。
配置改进MS培养基时所用β溶液为人工种植苹果幼果榨汁液上吸附农残的10号树脂和纯化苹果多酚的3号串联大孔树脂柱时，流出的上柱液和水洗脱液，合并后搅拌均匀的溶液。
本发明的方法使用组培技术得到苹果果肉的愈伤组织，使得农残含量显著降低、根皮苷含量显著提高。
本发明使用正常以苹果为原料提取纯化苹果多酚时，废弃不要的上柱流出液和水洗脱液，不仅变废为宝，而且还提高了扩繁增殖的产量。
具体实施方式
下面通过具体的实施例说明本发明生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法，下面的描述仅是为了使本领域的技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜苹果果肉组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+β的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养2周，然后切分生长良好的苹果果肉愈伤组织，转换到新的改进MS+β的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述改进MS+β的培养基，是在每配制1000mL的改进MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了600mL的β溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的苹果果肉组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在50℃回流提取60分钟，苹果果肉组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:3，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得苹果提取物。根皮苷含量为39.2%，检测出口欧美国家常检的191项农残，含量均小于0.01mg/kg。
实施例2
生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜苹果果肉组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+β的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养2周，然后切分生长良好的苹果果肉愈伤组织，转换到新的改进MS+β的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述改进MS+β的培养基，是在每配制1000mL的改进MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了700mL的β溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的苹果果肉组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在50℃回流提取60分钟，苹果果肉组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:5，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得苹果提取物。根皮苷含量为48.7%，检测出口欧美国家常检的191项农残，含量均小于0.01mg/kg。
实施例3
生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜苹果果肉组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+β的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养2周，然后切分生长良好的苹果果肉愈伤组织，转换到新的改进MS+β的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述改进MS+β的培养基，是在每配制1000mL的改进MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了800mL的β溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的苹果果肉组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在50℃回流提取60分钟，苹果果肉组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:4，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得苹果提取物。根皮苷含量为46.5%，检测出口欧美国家常检的191项农残，含量均小于0.01mg/kg。

Claims (2)

1.一种生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法，其特征是包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜苹果果肉组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+β的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养2周，然后切分生长良好的苹果果肉愈伤组织，转换到新的改进MS+β的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次；所述改进MS+β的培养基，是在每配制1000mL的改进MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了600～800mL的β溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的苹果果肉组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在50℃减压回流提取60分钟，苹果果肉组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:3～5，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得低农残、高根皮苷含量的苹果提取物。
2.根据权利要求1一种生产低农残、高根皮苷含量的苹果提取物的方法，其特征在于所述β溶液为人工种植苹果幼果榨汁液上吸附农残的10号树脂和纯化苹果多酚的3号串联大孔树脂柱时，流出的上柱液和水洗脱液，合并后搅拌均匀的溶液。
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