CN108740331B - 一种改善鱼体肉质的桉叶多酚饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种改善鱼体肉质的桉叶多酚饲料添加剂，其制备方法包括：将桉树叶原料经过低温冷冻粉碎，装入连续相变萃取釜中密封萃取，收集桉树叶提取液，减压浓缩，离心过滤得到桉树叶水提液，然后真空冷冻干燥得到桉树叶粗提物，再进行柱层析分离，选用乙醇和乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，收集含有桉叶多酚的洗脱液，将洗脱液真空浓缩，然后置于真空干燥即得桉叶多酚。本发明月见草素B，和1,2,3,4,6‑五没食子酰基葡萄糖，英国栎鞣花素以及5‑甲氧基糠醛等桉叶多酚有效活性组分的提取率和纯度高，用于改善鱼体肉质的饲料添加剂可以明显地改善鱼肉质色泽以及风味佳。

Description

一种改善鱼体肉质的桉叶多酚饲料添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种天然植物鱼饲料添加剂，属于水产饲料添加技术领域，特别是涉及一种改善鱼体肉质的桉叶多酚饲料添加剂。

背景技术

近年来，随着生活水平的提高，人们对鱼肉需求量不断增加。这就要求对鱼肉品质的研究需进一步加强，以满足人民的消费需求。一方面，消费者更加关注鱼体和鱼肉的颜色、肉质、口感、营养和安全性；另一方面，养殖者和水产品加工业则更关心怎样改善鱼体、鱼肉颜色，提高出肉率，以及鱼肉的处理和保存等环节以提高经济效益。中草药是天然的动植物，本身含有丰富的养分，在饲料中不仅补充营养，还有促进生长、增强体质、提高抗病力的作用，比化学添加药剂具有更多的优点，因此中草药饲料添加剂在畜牧配合饲料中被广泛应用，在水产配合饲料中所起的作用也越来越引起国内外学者的重视。如中国专利申请公开的“一种改善鱼体肉质的中草药饲料添加剂”（CN105661003A），由杜仲、苦参、甘草、刺五加、金银花、板蓝根、金盏花、鱼腥草、野菊和丁香等组分组成。应用于鱼饲料中添加本发明的中草药添加剂能有效提高鱼肉肉质营养价值，肉质鲜美细嫩。该专利作为中草药配方的应用，未涉及桉叶多酚应用于改善鱼体肉质的饲料添加剂。

我国桉树资源丰富，具有面积大、地域广品种多等特点。目前关于桉叶提取物在动物饲料行业中应用的研究非常少。有研究表明桉叶提取物应用于肉鸡、蛋和猪的日常饲料，有利于显著改善机体生长性能、抗氧化以及肉质相关指标。也有实验表明桉叶多酚提取物在体内和外均具有很强抗氧性活性。如中国专利申请公开的“一种桉叶提取物天然肉质改良剂及其制备方法（CN103766608A），是将桉叶避光阴干，粉碎至40-80目，放入常规提取罐中，加入40～80%乙醇水溶液，在45～55℃常压提取1～3小时，提取后用板框过滤1次再经0.22μm陶瓷膜过滤1次，重复提取一次，合并滤液后于真空浓缩装置，于60～80℃、300±100pa真空度下减压浓缩至乙醇完全去除，将剩余滤液经喷雾干燥而成，并且将桉叶提取物应用于畜禽饲料添加剂，具有增强机体抗氧化能力，减少脂质过氧化，使肉色鲜艳，改善肉的嫩度，减少滴水损失，延长肉品货架时间等效果。但受制备方法所限，其含桉叶多酚有效活性组分偏低（不超过20.75%），因此，其改良肉质的性能有待进一步提高，将其用于鱼类肉质改良效果并不理想。现有技术中，未见桉叶多酚应用于鱼饲料添加剂的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种改善鱼体肉质的桉叶多酚饲料添加剂，其通过特有的制备方法提取得到桉叶多酚高含量的桉叶提取物，用于鱼饲料添加剂，能有效改善肉质色泽、风味佳，所得鱼肉肉质营养价值高，肉质鲜美细嫩。

为实现上述目的，本发明的实施方案为：一种改善鱼体肉质的桉叶多酚饲料添加剂，包括以下步骤的方法制得：

（1）将桉树叶原料经过低温冷冻粉碎，装入连续相变萃取釜中密封萃取，收集桉树叶提取液；

（2）将桉树叶提取液减压浓缩，离心过滤得到桉树叶水提液，然后真空冷冻干燥得到桉树叶粗提物；

（3）桉树叶粗提物进行柱层析分离，选用乙醇和乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，福林-酚比色法监测，收集含有桉叶多酚的洗脱液；

（4）将洗脱液真空浓缩，然后置于真空干燥即得桉叶多酚。

作为优化，步骤（1）中，所述桉树叶采于湛江的9-10 月“广林9 号”桉树叶，粉碎至60-80 目。

作为优化，步骤（1）中，所述连续相变萃取的萃取压力为1～1.5 MPa，萃取温度为50～75℃，解析温度为50～75℃，萃取时间为50～100min，以60-90%乙醇为萃取剂。

作为优化，步骤（2）中，所述离心过滤时，离心速度为4000～6000rpm，离心10～30min。

作为优化，步骤（3）中，所述的柱层析分离采用硅胶或大孔树脂材料，硅胶选用100～300目硅胶，大孔树脂选用聚酰胺，洗脱的流速为40～60mL/min，用乙醇和乙酸乙酯进行梯度洗脱，乙醇和乙酸乙酯的体积配比依次为100:0、85:15、65:35、55:45、45:55、35:65、15:85、5:95，真空浓缩乙醇和乙酸乙酯体积比65:35、45:55的洗脱液，即为桉叶多酚。

本发明制得的桉叶多酚经福林-酚比色法分析测得桉叶多酚含量为80～85%，并利用高效液相色谱分析测定发现其含有大量的月见草素 B，1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖，英国栎鞣花素，5-甲氧基糠醛等成分，其中月见草素 B含量55～65%。

本发明提供的桉叶多酚作为植物天然添加剂在鱼饲料中的添加量为0.08～0.8%。

本发明具有以下积极效果：

（1）桉树叶经过连续相变萃取后，使桉树叶中桉叶多酚的含量得到提高，大量收集有利于后期的提取和纯化。

（2）本专利提出的桉叶多酚提取、精制新的工艺路线:低温连续相变萃取—柱层析分离—浓缩精制，相对于溶剂萃取法，步骤明显简单，收率高。相对于低温连续相变萃取的方法，增加了柱层析分离工序，桉叶多酚的收率却得到很大的提高。桉叶多酚提取、精制工艺过程的总收率在80%以上，纯度达到80%以上。因此，该工艺具有较强的工业应用前景。

（3）本发明所述的桉叶多酚提取率和含量高，纯度较高，有效成分明确。

（4）桉叶多酚具有很好的抗氧化性和抗应激能力，本发明作为鱼料添加剂可以明显改善肉色，提高鱼肉肉质品质，从而提高鱼养殖的经济效益。

具体实施方式

以下结合实际情况，对本发明的具体实施方式进行详细说明。

实施例1：

将桉树叶原料经过低温冷冻粉碎，粉碎至50目，称取粉碎原料10kg，装入连续相变萃取釜中密封萃取，萃取压力为1.2 MPa，萃取温度为65℃，解析温度为75℃，萃取时间为70min，以60%乙醇为萃取剂，收集桉树叶提取液。将桉树叶提取液减压浓缩，离心4000rpm，10min过滤得到桉树叶水提液，然后真空冷冻干燥得到桉树叶粗提物。桉树叶粗提物过200目硅胶柱，洗脱的流速为40ml/min，用乙醇和乙酸乙酯进行梯度洗脱，乙醇和乙酸乙酯的体积配比依次为100:0、85:15、65:35、55:45、45:55、35:65、15:85、5:95，真空浓缩乙醇和乙酸乙酯体积比65:35、45:55的洗脱液，即为桉叶多酚。将洗脱液真空浓缩，真空冷冻干燥即得桉叶多酚529.1g，提取率为58%，液相检测含有58%月见草素B。桉叶多酚作为植物天然添加剂在鱼饲料中的添加量为0.08～0.8%。

实施例2：

将桉树叶原料经过低温冷冻粉碎，粉碎至60目，称取粉碎原料20kg，装入连续相变萃取釜中密封萃取，萃取压力为1.5 MPa，萃取温度为70℃，解析温度为65℃，萃取时间为100min，以90%乙醇为萃取剂，收集桉树叶提取液。将桉树叶提取液减压浓缩，离心6000rpm，10min过滤得到桉树叶水提液，然后真空冷冻干燥得到桉树叶粗提物。桉树叶粗提物过200目硅胶柱，洗脱的流速为30mL/min，用乙醇和乙酸乙酯进行梯度洗脱，乙醇和乙酸乙酯的体积配比依次为100:0、85:15、65:35、55:45、45:55、35:65、15:85、5:95，真空浓缩乙醇和乙酸乙酯体积比65:35、45:55的洗脱液，即为桉叶多酚。将洗脱液真空浓缩，真空冷冻干燥即得桉叶多酚1008.2g，提取率为51%，液相检测含有60%月见草素B。桉叶多酚作为植物天然添加剂在鱼饲料中的添加量为0.08～0.8%。

实施例3：

将桉树叶原料经过低温冷冻粉碎，粉碎至60目，称取粉碎原料20kg，装入连续相变萃取釜中密封萃取，萃取压力为1.5 MPa，萃取温度为70℃，解析温度为65℃，萃取时间为100min，以90%乙醇为萃取剂，收集桉树叶提取液。将桉树叶提取液减压浓缩，离心6000rpm，10min过滤得到桉树叶水提液，然后真空冷冻干燥得到桉树叶粗提物。桉树叶粗提物过大孔树脂柱，洗脱的流速为30mL/min，用乙醇和乙酸乙酯进行梯度洗脱，乙醇和乙酸乙酯的体积配比依次为100:0、85:15、65:35、55:45、45:55、35:65、15:85、5:95，真空浓缩乙醇和乙酸乙酯体积比65:35、45:55的洗脱液，即为桉叶多酚。将洗脱液真空浓缩，真空冷冻干燥即得桉叶多酚1089.2g，提取率为55%，液相检测含有57%月见草素B。桉叶多酚作为植物天然添加剂在鱼饲料中的添加量为0.08～0.8%。

为阐明、验证本发明改善鱼肉品质的效果，特作了以下饲喂试验。

试验罗非鱼鱼苗由茂名市某罗非鱼良种场提供，2017年6月挑选规格相似、体质健康无病的鱼苗1000尾，在水池中用自来水预喂养20 d。幼鱼鱼苗平均质量100 g，按质量随机分成5个试验组，分别为对照(A)、0.1%桉叶多酚(B)、0.4%桉叶多酚(C)、0.8%桉叶多酚(D)，每组200尾，各试验组鱼随机分配。

试验饲养时间共90 d。水温为30℃。

表 1桉叶多酚对罗非鱼肌肉成分的影响

组别

水分/%

粗蛋白质/%

粗脂肪/%

粗灰分/%

羟脯氨酸/（mg/g）

胶原蛋白/（mg/g）

空白对照

76.29±0.98

21.56±1.67

0.85±0.01

1.69±0.23

0.260±0.00

1.891±0.19

0.1%桉叶多酚

74.17±0.99

22.18±1.13

0.77±0.00

1.45±0.13

0.360±0.01*

2.293±0.21*

0.4%桉叶多酚

75.28±0.78

22.96±0.57

0.76±0.01*

1.59±0.15

0.420±0.02*

2.845±0.34*

0.8%桉叶多酚

76.16±0.56

23.56±1.02

0.68±0.02*

1.60±0.10

0.512±0.02*

3.091±0.09*

1.0%桉叶多酚

75.23±0.45

23.16±0.97

0.67±0.04*

1.61±0.11

0.520±0.10*

3.101±0.12*

1.2%桉叶多酚

76.54±0.12

23.78±1.34

0.67±0.01*

1.61±0.13

0.509±0.08*

3.002±0.34*

表2 桉叶多酚对罗非鱼肌肉物理性状的影响

组别	肌原纤维耐折力/μm	失水率/%
			空白对照	50.56±9.98	36.12±2.27
0.1%桉叶多酚	66.24±7.10*	28.20±1.10*
			0.4%桉叶多酚	72.88±6.34*	27.23±1.98*
0.8%桉叶多酚	86.24±10.28*	23.11±1.00*
			1.0%桉叶多酚	84.35±9.78*	24.32±1.23*
1.2%桉叶多酚	85.01±11.12*	23.45±1.12*

表3 桉叶多酚对罗非鱼肌肉肉色的影响

组别	亮度/L*	红度/a*	黄度/b*
				空白对照	60.18±2.98	6.78±0.56	4.19±1.10
0.1%桉叶多酚	62.78±1.90	8.20±0.23*	4.90±0.56
				0.4%桉叶多酚	62.12±2.14	10.78±0.45*	4.10±0.17
0.8%桉叶多酚	70.00±2.12*	11.01±0.36*	5.01±0.78
				1.0%桉叶多酚	68.00±1.23*	10.98±0.17*	5.13±0.54
1.2%桉叶多酚	65.00±1.78*	11.23±0.29*	4.88±0.71

试验结果表明：桉叶多酚可以显著降低罗非鱼肌肉粗脂肪含量和肌肉失水率，显著增加胶原蛋白含量和肌原纤维长度，改善肌肉肉色，提高肌肉红色色度。桉叶多酚剂量在0.1%～0.8%范围内呈现一定的剂量效应，当剂量大于0.8%时，桉叶改善鱼体肉质的效果没有继续提高，与0.8%桉叶多酚组效果无显著提高，因此综合考虑制备成本和应用效果，桉叶多酚作为植物天然添加剂在鱼饲料中的添加量为0.08～0.8%，优化的是0.8%。

Claims (2)

1.一种桉叶多酚用于改善鱼肉质风味的饲料添加剂的应用方法，其特征在于，在鱼饲料中的添加量为鱼饲料重量的0.8%，所述桉叶多酚由包括以下步骤的方法制得：

（1）将桉树叶原料经过低温冷冻粉碎，装入连续相变萃取釜中密封萃取，收集桉树叶提取液；所述连续相变萃取的萃取压力为1～1.5 MPa，萃取温度为50～75℃，解析温度为50～75℃，萃取时间为50～100min，以60-90%乙醇为萃取剂；

（2）将桉树叶提取液减压浓缩，离心过滤得到桉树叶水提液，然后真空冷冻干燥得到桉树叶粗提物；所述的离心过滤时，离心速度为4000～6000rpm，离心10～30min；

（3）桉树叶粗提物进行柱层析分离，选用乙醇和乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱的流速为40～60mL/min，福林-酚比色法监测，收集含有桉叶多酚的洗脱液；梯度洗脱时，乙醇和乙酸乙酯的体积配比依次为100:0、85:15、65:35、55:45、45:55、35:65、15:85、5:95；所述的柱层析分离采用硅胶或大孔树脂，所述硅胶选用100～300目硅胶，所述大孔树脂选用聚酰胺；

（4）真空浓缩乙醇和乙酸乙酯体积比65:35、45:55的洗脱液，然后置于真空干燥即得桉叶多酚。

2.一种权利要求1所述的应用方法，其特征在于，步骤（1）中，所述桉树叶采于9-10 月“广林9 号”桉树叶，粉碎至60-80 目。