CN114246252A - 一种植物提取物添加剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种植物提取物添加剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种植物提取物添加剂及其制备方法和应用，该添加剂按质量百分比计包括以下原料组分：20％～70％的五环三萜类活性物质，10％～50％的迷迭香叶粉，10％～30％的杜仲叶提取物，通过将上述原料混合后制备得到。本发明植物提取物添加剂具有成本低、营养成分丰富且含量高、绿色环保等优点，作为畜禽养殖中的饲料添加剂，不仅能够提高饲料的利用率，而且具有抗氧化、增强畜禽机体免疫力和保护肝脏的作用，能够满足畜禽对必需氨基酸的需求，还能够在一定程度上完全替代抗生素的作用，能够很好的代替使用较多的传统添加剂，有着很高的使用价值和很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于饲料添加剂领域，涉及一种植物提取物添加剂及其制备方法和应用。
背景技术
由于优质饲料的缺乏，导致畜禽对饲料的利用率降低。为此，通常采用的方法是在饲料中加入饲料添加剂，以弥补某些营养成分的不足，同时能够提高饲料利用率和畜禽的生产性能。目前，常用的饲料添加剂中存在以下问题：(1)在畜禽养殖过程中添加抗生素和重金属离子，虽然加入抗生素和重金属离子能够提高饲养效率，但它们的含量太高，会给环境和人类也带来了很大的危害，如抗生素的使用会破坏自然环境中微生物的生态平衡，同时药物残留也会影响人的疾病，而重金属在人体内累积会造成慢性中毒危及人的身体健康；(2)在畜禽养殖过程中添加替抗添加剂，如益生菌、天然多糖和天然抗菌肽等，但是目前替抗添加剂正处于研究发展过程中，存在来源较多、有效成分不确定、不稳定、成本高等缺点，这使得替抗添加剂在实际饲养过程中较少使用；(3)植物提取物具有绿色、无污染、无残留、无抗药性、无公害等优点，因而植物提取物畜禽养殖过程中的使用逐渐增多，但是目前采用的单一植物提取物难以满足畜禽生长的需求，同时由于植物提取物在研发使用过程中也存在有效成分不确定、品质不稳定以及提取工艺差异造成的规模较小等缺点，这些缺点和不足极大的限制了植物提取物作为饲料添加剂在畜禽养殖过程中的广泛应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种成本低、营养成分丰富且含量高、绿色环保的植物提取物添加剂及其制备方法和应用。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种植物提取物添加剂，所述植物提取物添加剂按质量百分比计包括以下原料组分：
五环三萜类活性物质 20％～70％，
迷迭香叶粉 10％～50％，
杜仲叶提取物 10％～30％。
上述的植物提取物添加剂，进一步改进的，所述五环三萜类活性物质中包含的活性物质为熊果酸和齐墩果酸；所述五环三萜类活性物质中活性物质的含量为200g/kg～700g/kg；所述迷迭香叶粉中包含的活性物质为迷迭香酸、鼠尾草酸和酚类二萜；所述迷迭香叶粉中活性物质的含量为100g/kg～300g/kg；所述杜仲叶提取物中包含的活性物质为桃叶珊瑚甙、绿原酸、京尼平苷酸和黄酮类化合物；所述杜仲叶提取物中活性物质的含量为100g/kg～500g/kg；
所述植物提取物添加剂中还包括赖氨酸和过瘤胃蛋氨酸，所述赖氨酸的含量≥2000mg/kg，所述过瘤胃蛋氨酸的含量≥1000mg/kg。
作为一个总的技术构思，本发明还提供了一种上述的植物提取物添加剂的制备方法，包括以下步骤：将五环三萜类活性物质、迷迭香叶粉、杜仲叶提取物混合，得到植物提取物添加剂。
上述的植物提取物添加剂的制备方法，进一步改进的，所述五环三萜类活性物质的制备方法包括以下步骤：
S1、将植物原料粉碎；
S2、对步骤S1中得到的粉碎产物进行酶解；
S3、对步骤S2中得到的酶解产物进行回流提取，得到提取液；
S4、对步骤S3中得到的提取液进行过滤，对所得滤液进行浓缩，得到第一浓缩液；
S5、将步骤S4中得到的第一浓缩液分散在水中，加入丙酮，用石油醚脱脂，分离，对所得丙酮溶液进行浓缩，得到第二浓缩液；
S6、对步骤S5中得到的第二浓缩液进行萃取，对所得萃取液进行浓缩，直至浓缩成稠膏，溶解到醇溶液中，过滤，得到溶解液；
S7、将步骤S6中得到的溶解液通过大孔树脂柱分离，先用水洗柱，直至滤液为无色，再用乙醇溶液或酸化乙醇溶液洗柱，收集经乙醇溶液或酸化乙醇溶液洗柱后得到的洗脱液，浓缩，干燥，得到浸提膏；
S8、将步骤S7中得到的浸提膏通过硅胶层析柱进行分离，洗脱，收集洗脱液，加入活性炭脱色，得到脱色洗脱液；
S9、去除步骤S8中得到的脱色洗脱液的溶剂，对所得精制物质进行结晶，分离，得到五环三萜类活性物质。
上述的植物提取物添加剂的制备方法，进一步改进的，步骤S1中，所述植物原料为枇杷叶、迷迭香、木瓜、柿子叶中的至少一种；
步骤S2中，所酶解过程中采用的酶为纤维素酶、果胶酶、蛋白酶中的至少一种；所述酶的添加量为粉碎产物质量的0.5％以上；所述酶解过程中控制体系的pH值为4～6；所述酶解在温度为45℃～65℃下进行；所述酶解的时间为1.5h～2h；
步骤S3中，所述回流提取过程中采用的溶剂为乙酸乙酯、丙酮、醇溶液中的至少一种；所述醇溶液为甲醇溶液、乙醇溶液、异丙醇溶液中的至少一种；所述醇溶液中醇的质量百分含量为30％～100％；所述溶剂的用量为酶解产物体积的10倍～12倍；所述回流提取的次数为2次～3次，每次回流提取的时间为1.5h～2h；
步骤S5中，所述水的用量为第一浓缩液体积的3倍～4倍；所述丙酮的用量为第一浓缩液体积的4倍～6倍；所述石油醚的用量为第一浓缩液体积的3倍～4倍；所述水的温度为50℃～60℃；
步骤S6中，所述萃取过程中采用的萃取剂的极性范围为1.6～4.8；所述萃取剂为乙酸乙酯；所述萃取剂的用量为第二浓缩液体积的6倍；所述萃取在温度为60℃～70℃下进行；所述醇溶液为乙醇溶液；所述醇溶液中醇的质量百分含量为50％～95％；
步骤S7中，所述大孔树脂柱中的大孔树脂为弱碱性大孔阴离子交换树脂；所述弱碱性大孔阴离子交换树脂为弱碱大孔树脂D345、弱碱大孔树脂D380、弱碱大孔树脂D301、弱碱大孔树脂D315、NKA-9大孔吸附树脂中的至少一种；所述乙醇溶液中乙醇的质量百分含量为20％～95％；所述酸化乙醇溶液中乙醇的质量百分含量为20％～95％，pH值为3～4；
步骤S8中，所述硅胶层析柱的径高比为比1∶2～8；所述洗脱过程中采用的洗脱剂为无水乙醇和/或甲醇；所述洗脱剂的洗脱速率为0.7BV/h～2BV/h；所述活性炭的用量为洗脱液总质量的0.5％～5％；
步骤S8中，用浓度梯度从低到高的醇溶液对精制物质进行结晶；所述醇溶液为甲醇溶液或乙醇溶液。
上述的植物提取物添加剂的制备方法，进一步改进的，所述迷迭香叶粉的制备方法，包括以下步骤：将迷迭香叶进行干燥，直至水分含量＜10％，粉碎，过80～120目筛网，得到迷迭香叶粉。
上述的植物提取物添加剂的制备方法，进一步改进的，所述杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将杜仲叶粉碎，过筛，得到杜仲叶粉末；
(2)采用超临界二氧化碳流体萃取法对步骤(1)中得到的杜仲叶粉末进行萃取，在萃取过程中加入夹带剂，得到萃取液和杜仲叶粉渣；
(3)将步骤(2)中得到的萃取液进行浓缩，加入温度为70℃～80℃的水，冷却，分离，得到沉淀物质；
(4)将步骤(3)中得到的沉淀物质烘干，粉碎，过筛，得到杜仲叶提取物。
上述的植物提取物添加剂的制备方法，进一步改进的，步骤(1)中，所述过筛为过40目～60目筛网；
步骤(2)中，所述萃取过程中，温度为30℃～60℃，压力为15MPa～40MPa，萃取时间为1h～6h；所述夹带剂的用量为原料总体积的2％～10％，分2次～3次加入到萃取体系中；所述夹带剂为醇溶液；所述醇溶液为乙醇溶液；所述醇溶液中醇的质量百分数为50％～90％；所述杜仲叶粉渣还包括以下处理：以质量百分含量为50～70％的乙醇溶液为溶剂，对杜仲叶粉渣进行回流提取，提取时间为1h～2h，提取次数2～3次，合并提取液进行浓缩，加水，静置12h～24h，分离，所得水溶液通过孔径为0.05μm～100μm的微滤膜和弱极性大孔树脂层析柱，依次用水、质量百分数为50％～80％的乙醇溶液对弱极性大孔树脂层析柱进行洗脱，收集醇洗脱液，浓缩、干燥、粉碎、过筛，得到杜仲叶提取物；
步骤(4)中，所述过筛为过80目筛网。
作为一个总的技术构思，本发明还提供了一种上述的植物提取物添加剂或上述的制备方法制得的植物提取物添加剂作为饲料添加剂在畜禽养殖中的应用。
上述的应用，进一步改进的，所述应用为将植物提取物添加剂于饲料混合，用于喂养畜禽；所述植物提取物添加剂的用量为饲料质量的0.1％～2％。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
(1)本发明提供了一种植物提取物添加剂，按质量百分比计包括以下原料组分：20％～70％的五环三萜类活性物质，10％～50％的迷迭香叶粉，10％～30％的杜仲叶提取物。本发明中，五环三萜类活性物质中包含的活性物质为熊果酸和齐墩果酸，其中熊果酸降低肠道的炎症反应、调控肠道菌群、促进抗菌肽分泌和抗氧化的作用，齐墩果酸具有保护肝脏、降低血糖血脂的作用，因而作为添加剂用于喂养禽畜时，在养殖过程中能够提高畜禽的免疫力，提高畜禽的抗氧化能力；迷迭香叶粉中包含的活性物质为迷迭香酸、鼠尾草酸和酚类二萜，这些活性物质具有促进消化代谢和血液循环、改善血脂、保护肝脏提高免疫力和很强的抗氧化功效；杜仲叶提取物中包含的活性物质为桃叶珊瑚甙、绿原酸、京尼平苷酸和黄酮类化合物，这些活性物质具有抗菌、消炎和抗氧化的功能；同时，五环三萜类活性物质、迷迭香叶粉和杜仲叶提取物中含有的这些活性物质具有相互促进作用，通过它们的共同作用能够显著提高畜禽的免疫力，提高畜禽的抗氧化能力，如京尼平苷、熊果酸和齐墩果酸能够共同促进畜禽胆汁酸的分泌，三种物质的活性成分均对畜禽抗氧化的能力有促进作用。另外，迷迭香叶粉具有很好的诱食性，能够提高畜禽的采食量。本发明植物提取物添加剂具有成本低、营养成分丰富且含量高、绿色环保等优点，作为畜禽养殖中的饲料添加剂，不仅能够提高饲料的利用率，而且具有抗氧化、增强畜禽机体免疫力和保护肝脏的作用，能够满足畜禽对必需氨基酸的需求，还能够在一定程度上完全替代抗生素的作用，能够很好的代替使用较多的传统添加剂，有着很高的使用价值和很好的应用前景。
(2)本发明还提供了一种植物提取物添加剂的制备方法，通过将五环三萜类活性物质、迷迭香叶粉、杜仲叶提取物混合，即可制备得到植物提取物添加剂。本发明制备方法具有简单易行、生产成本低、生产效率高等优点，适合于大规模制备，有利于工业化应用，对于提高植物提取物添加剂的应用范围具有十分重要的作用。
(3)本发明制备方法中，采用超临界二氧化碳流体萃取法制备杜仲叶提取物，在提取过程中分2次～3次加入占原料总体积2％～10％的夹带剂，能够显著改变CO2的极性和溶解能力，大幅度提高提取率，降低工业提取难度，降低生产成本。同时，该提取工艺中的前处理和精制过程可以去除影响采食和营养物质消化的物质，比如植物单宁类物质，缩合单宁等，不会影响营养物质消化率。
(4)本发明还提供了一种植物提取物添加剂作为饲料添加剂在畜禽养殖中的应用，通过本发明的植物提取物添加剂加入到饲料中用于喂养畜禽，不仅能够提高畜禽对饲料的利用率，还能提高畜禽的机体免疫力，对于促进畜禽的生长以及增加养殖户的收入具有十分重要的意义。
具体实施方式
以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
实施例1：
一种植物提取物添加剂，按质量百分比计包括以下原料组分：
五环三萜类活性物质 50％，
迷迭香叶粉 35％，
杜仲叶提取物 15％。
本实施例中，五环三萜类活性物质中包含的活性物质为熊果酸和齐墩果酸，活性物质的含量为500g/kg。迷迭香叶粉中包含的活性物质为迷迭香酸、鼠尾草酸和酚类二萜，活性物质的含量为350g/kg；杜仲叶提取物中包含的活性物质为桃叶珊瑚甙、绿原酸、京尼平苷酸和黄酮类化合物，活性物质的含量为150g/kg。
本实施例中，植物提取物添加剂中还包括赖氨酸和过瘤胃蛋氨酸，所述赖氨酸的含量≥2000mg/kg，所述过瘤胃蛋氨酸的含量为1500mg/kg。
一种上述本实施例中的植物提取物添加剂的制备方法，包括以下步骤：将五环三萜类活性物质、迷迭香叶粉、杜仲叶提取物混合，得到植物提取物添加剂。
本实施例中，五环三萜类活性物质的制备，包括以下步骤：
S1、将植物原料(木瓜、柿子叶)粉碎。
S2、对步骤S1中得到的粉碎产物进行酶解，具体为：按照酶的添加量为粉碎产物质量的0.5％，将粉碎产物与纤维素酶混合，调节体系的pH值为5，在温度为50℃酶解2h。
S3、对步骤S2中得到的酶解产物进行回流提取，具体为：按照溶剂的用量为酶解产物体积的11倍，将质量百分含量为90％的乙醇溶液与酶解产物混合加热，使溶剂回流，回流提取的次数为3次，每次回流提取的时间为2h，收集提取液。
S4、对步骤S3中得到的提取液进行过滤，去除固体杂质，对所得滤液加热浓缩，回收乙醇，得到第一浓缩液。
S5、按照水的用量为第一浓缩液体积的4倍、丙酮的用量为第一浓缩液体积的6倍、石油醚的用量为第一浓缩液体积的4倍，将步骤S4中得到的第一浓缩液分散在60℃的水中，溶解到丙酮中，用石油醚脱脂，分离，对所得丙酮溶液加热浓缩，得到第二浓缩液。
S6、对步骤S5中得到的第二浓缩液进行萃取，具体为：按照萃取剂的用量为第二浓缩液体积的6倍，将乙酸乙酯与第二浓缩液混合进行萃取，得到萃取液；将所得萃取液加热浓缩，直至浓缩成稠膏，溶解到质量百分含量为90％的乙醇溶液中，过滤，得到溶解液。
S7、将步骤S6中得到的溶解液通过大孔树脂柱(采用的树脂为NKA-9大孔吸附树脂，也可以采用其他的弱碱性大孔阴离子交换树脂，如弱碱大孔树脂D345、弱碱大孔树脂D380、弱碱大孔树脂D301、弱碱大孔树脂D315)分离，先用水洗柱，直至滤液为无色，依次用质量百分含量为30％的乙醇溶液和质量百分含量为80％的乙醇溶液洗柱(同时，也可以采用酸化乙醇溶液洗柱，该酸化乙醇溶液乙醇的质量百分含量为20％～95％，pH值为3～4)，收集经质量百分含量为80％的乙醇溶液洗柱后得到的洗脱液，加热浓缩，干燥，得到浸提膏。
S8、将步骤S7中得到的浸提膏通过硅胶层析柱(硅胶层析柱的径高比为比1∶5)进行分离，以质量百分含量为90％的乙醇溶液作为洗脱剂，按照洗脱速率为1BV/h对硅胶层析柱进行洗脱，收集洗脱液，加入活性炭(该活性炭的用量为洗脱液总质量的3％)对洗脱液进行脱色，得到脱色洗脱液。
S9、去除步骤S8中得到的脱色洗脱液的溶剂(乙醇)，用浓度梯度为低到高的甲醇溶液对所得精制物质进行结晶，分离，得到精制的五环三萜类活性产品，即为五环三萜类活性物质。
本实施例中，杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)杜仲叶经过清选除杂后进行粉碎，过40目筛网，得到杜仲叶粉末。
(2)采用超临界二氧化碳流体萃取法对步骤(1)中得到的杜仲叶粉末进行萃取，在萃取过程中分2-3次加入占原料总体积8％的夹带剂(该夹带剂是质量百分含量为80％的乙醇溶液)，其中萃取过程中控制体系的温度为55℃，压力为35MPa，萃取时间为6h，得到萃取液和杜仲叶粉渣。
(3)将步骤(2)中得到的萃取液加热浓缩，回收乙醇，加入温度为75℃的水，溶解后冷却，分离，得到沉淀物质；
(4)将步骤(3)中得到的沉淀物质烘干，粉碎，过过80目筛网，得到杜仲叶提取物。
步骤(2)中，萃取后的杜仲叶粉渣可继续用于制备杜仲叶提取物，包括以下步骤：将杜仲叶粉渣与质量百分含量为70％的乙醇溶液混合进行回流提取，提取时间2h，提取次数3次，合并提取液加热浓缩，回收乙醇，加水混合，静置12h，分离，所得水溶液通过孔径为20μm的微滤膜、弱极性大孔树脂层析柱，依次用水、质量百分含量为70％的乙醇溶液洗脱，收集醇洗脱液，加热浓缩，干燥，粉碎，过筛，得到杜仲叶提取物。
本实施例中，迷迭香叶粉的制备方法如下：将迷迭香鲜叶或带鲜叶的枝条用脱叶设备处理，分离得到第一步脱杆的迷迭香叶，再将脱杆的鲜叶通过微波干燥或者热风干燥或者真空冷冻干燥，干燥后叶子通过振荡器筛选机等分离得到脱杆的干燥迷迭香叶子，其水分含量小于10.0％，经过两步处理的干燥迷迭香叶子用粉碎机粉碎，过80目筛网，对过筛粉末称量后密封装袋，得到迷迭香叶粉。
本实施例中，制得的植物提取物添加剂中包含的营养成分，如表1所示。
表1本发明实施例1中制得的植物提取物添加剂中包含的营养成分
| 成分 | 含量 |
| 维生素A(IU/Kg) | 20000-60000 |
| 维生素B1(mg/kg) | ≥10 |
| 维生素B2(mg/kg) | ≥30 |
| 维生素D3(IU/Kg) | 5000-100000 |
| 维生素E(mg/kg) | ≥120 |
| 维生素K3(mg/kg) | ≥10 |
| 赖氨酸(mg/kg) | ≥2000 |
| 蛋氨酸(mg/kg) | ≥1000 |
| 泛酸钙(mg/kg) | ≥60 |
| 烟酰胺(mg/kg) | ≥100 |
一种上述本发明制备方法中制得的植物提取物添加剂作为饲料添加剂在畜禽养殖中的应用，包括以下步骤：
按照植物提取物添加剂的用量为饲料质量的0.15％，将植物提取物添加剂与基础饲料混合，喂养湘东黑山羊(从20只湘东黑山羊，随机选出10只，作为试验组)，共56天。
对照组：以另外10只湘东黑山羊为喂养对象，用与试验组相同的基础饲料(不添加任何添加剂)进行喂养，在相同的条件下喂养56天。
考察植物提取物添加剂对湘东黑山羊血浆抗氧化能力的影响，结果如表2所示。
表2本发明植物提取物添加剂对湘东黑山羊血浆抗氧化能力的影响
| 试验组 | 对照组 | SEM | P | |
| 总抗氧化能力T-AOC(mM) | 0.76 | 0.69 | 0.06 | ＜0.01 |
| 超氧化物歧化酶SOD(U/mL) | 18.95 | 17.13 | 2.15 | 0.05 |
| 丙二醛MDA(nmol/mL) | 4.75 | 6.92 | 2.70 | 0.07 |
从表2中可以看出，饲粮中添加0.15％的植物提取物添加剂能够显著提高湘东黑山羊血浆中的抗氧化能力。
考察植物提取物添加剂对湘东黑山羊血液游离氨基酸的影响，结果如表3所示。
表3本发明植物提取物添加剂对湘东黑山羊血液游离氨基酸的影响
| (ug/ml) | 试验组 | 对照组 | SEM | P |
| 天冬氨酸 | 5.29 | 4.91 | 1.38 | 0.57 |
| 苏氨酸 | 40.43 | 33.99 | 6.39 | 0.02 |
| 丝氨酸 | 7.99 | 7.70 | 1.35 | 0.65 |
| 谷氨酸 | 53.44 | 44.24 | 10.62 | 0.06 |
| 甘氨酸 | 55.20 | 63.94 | 11.02 | 0.08 |
| 丙氨酸 | 26.84 | 25.28 | 4.10 | 0.42 |
| 半胱氨酸 | 1.69 | 1.38 | 0.36 | 0.05 |
| 缬氨酸 | 32.15 | 26.39 | 5.64 | 0.02 |
| 蛋氨酸 | 4.80 | 3.93 | 0.85 | 0.02 |
| 异亮氨酸 | 1.12 | 2.12 | 0.65 | ＜0.01 |
| 亮氨酸 | 18.60 | 14.54 | 3.62 | 0.01 |
| 酪氨酸 | 18.92 | 16.32 | 2.92 | 0.05 |
| 苯丙氨酸 | 11.07 | 9.09 | 1.88 | 0.02 |
| 赖氨酸 | 26.95 | 26.24 | 7.06 | 0.84 |
| 组氨酸 | 8.33 | 7.11 | 1.19 | 0.02 |
| 精氨酸 | 32.21 | 30.18 | 7.19 | 0.56 |
| 脯氨酸 | 16.28 | 13.73 | 3.29 | 0.09 |
从表3中可以看出，饲粮中添加0.15％的植物提取物添加剂能够显著提高血液中的苏氨酸、谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸和脯氨酸的含量。
考察植物提取物添加剂对湘东黑山羊瘤胃游离氨基酸的影响，结果如表4所示。
表4本发明植物提取物添加剂对湘东黑山羊瘤胃游离氨基酸的影响
从表4中可以看出，饲粮中添加0.15％的植物提取物添加剂能够显著提高湘东黑山羊瘤胃中游离缬氨酸、脯氨酸、亮氨酸、甘氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸和天冬氨酸的含量。
考察植物提取物添加剂对湘东黑山羊回肠游离氨基酸的影响，结果如表5所示。
表5本发明植物提取物添加剂对湘东黑山羊回肠游离氨基酸的影响
| (ug/g) | 试验组 | 对照组 | SEM | P |
| 缬氨酸 | 92.29 | 46.06 | 43.42 | 0.01 |
| 脯氨酸 | 246.03 | 199.02 | 120.17 | 0.44 |
| 亮氨酸 | 339.41 | 170.13 | 158.34 | 0.01 |
| 甘氨酸 | 15.52 | 7.01 | 6.91 | ＜0.01 |
| 酪氨酸 | 11.53 | 8.08 | 4.86 | 0.11 |
| 组氨酸 | 3.4 | 2.04 | 1.37 | 0.04 |
| 苏氨酸 | 716.28 | 379.36 | 286.35 | ＜0.01 |
| 异亮氨酸 | 318.67 | 164.24 | 144.96 | 0.01 |
| 蛋氨酸 | 364.44 | 46.06 | 166.6 | 0.01 |
| 天冬氨酸 | 387.16 | 199.02 | 190.83 | 0.02 |
| 苯丙氨酸 | 11.78 | 170.13 | 5.95 | 0.20 |
| 谷氨酸 | 7.55 | 7.01 | 4.54 | 0.43 |
从表5中可以看出，饲粮中添加0.15％的植物提取物添加剂能够显著增加回肠中游离缬氨酸、亮氨酸、甘氨酸、组氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸的含量。
考察植物提取物添加剂对湘东黑山羊盲肠游离氨基酸的影响，结果如表6所示。
表6本发明植物提取物添加剂对湘东黑山羊盲肠游离氨基酸的影响
| (ug/g) | 试验组 | 对照组 | SEM | P |
| 缬氨酸 | 6.24 | 11.45 | 5.89 | 0.05 |
| 脯氨酸 | 20.44 | 30.77 | 16.23 | 0.17 |
| 亮氨酸 | 14.65 | 34.41 | 18.14 | 0.01 |
| 甘氨酸 | 11.86 | 13.75 | 6.47 | 0.53 |
| 丙氨酸 | 2.01 | 2.49 | 1.09 | 0.43 |
| 酪氨酸 | 2.37 | 3.21 | 1.57 | 0.27 |
| 苏氨酸 | 119.79 | 186.51 | 85.15 | 0.09 |
| 异亮氨酸 | 16.57 | 37.18 | 18.84 | 0.01 |
| 蛋氨酸 | 22.26 | 11.45 | 23.18 | 0.02 |
| 天冬氨酸 | 19.04 | 30.77 | 21.99 | 0.09 |
从表6中可以看出，饲粮中添加0.15％的植物提取物添加剂能够增加盲肠中游离蛋氨酸的含量，显著降低缬氨酸、亮氨酸、苏氨酸、异亮氨酸和天冬氨酸的含量。
考察不同添加剂对畜禽的影响
选取湘东黑山羊24只，随机分为四组，分别饲喂实施例1中的植物提取物添加剂(A组)、杜仲叶提取物和迷迭香叶分(B组)、杜仲叶和五环三萜类物质(C组)、迷迭香叶分和五环三萜类物质(D组)，进行30天的试验后，对山羊进行颈腔静脉采血，进行血液生化、免疫和抗氧化指标分析。B、C、D对应的添加剂中，两个组分的质量比为1:1。
表7不同添加剂对湘东黑山羊血液生化指标的影响
| A组 | B组 | C组 | D组 | |
| 总抗氧化能力T-AOC(mM) | 0.84 | 0.71 | 0.75 | 0.74 |
| 超氧化物歧化酶SOD(U/mL) | 19.24 | 18.58 | 18.67 | 18.62 |
| 丙二醛MDA(nmol/mL) | 4.32 | 6.83 | 6.54 | 6.72 |
从表7中可以看出，相对于其他两两提取物的混合物，本发明植物提取物添加剂能够提高湘东黑山羊的抗氧化能力。
表8不同添加剂对湘东黑山羊血液生化指标的影响
| A组 | B组 | C组 | D组 | |
| 总蛋白(TP)(g/L) | 76.54 | 74.87 | 75.13 | 74.99 |
| 总蛋白(TP)(g/L) | 35.62 | 33.52 | 35.45 | 34.75 |
| 谷丙转氨酶(ALT)(U/L) | 27.75 | 26.17 | 25.69 | 24.37 |
| 谷草转氨酶(AST)(U/L) | 104.69 | 98.77 | 102.65 | 99.13 |
| 尿素氮(BUN)(mmol/L) | 5.27 | 5.11 | 4.92 | 4.78 |
| 葡萄糖(GLU)(mmol/L) | 3.14 | 2.51 | 2.17 | 2.79 |
| 甘油三酯(TG)(mmol/L) | 0.59 | 0.52 | 0.48 | 0.44 |
| 总胆固醇(CHOL)(mmol/L) | 2.78 | 3.23 | 3.76 | 3.51 |
| 总胆汁酸(OTBA)(μmol/L) | 16.72 | 12.38 | 13.45 | 12.13 |
从表8中可以看出，相对于其他两两提取物的混合物，本发明植物提取物添加剂能够提高湘东黑山羊血液各项生化指标，同时降低胆固醇的含量。
表9不同添加剂对湘东黑山羊血液免疫指标的影响
| A组 | B组 | C组 | D组 | |
| 免疫球蛋白A IgA(mg/mL) | 5.89 | 5.71 | 5.24 | 5.39 |
| 免疫球蛋白G IgG(mg/mL) | 60.19 | 54.78 | 57.12 | 59.38 |
| 免疫球蛋白M IgM(mg/mL) | 5.27 | 4.98 | 5.12 | 4.74 |
从表9中可以看出，相对于其他两两提取物的混合物，本发明植物提取物添加剂能够提高湘东黑山羊血液中免疫球蛋白的含量。
由此可见，本发明植物提取物添加剂具有成本低、营养成分丰富且含量高、绿色环保等优点，作为畜禽养殖中的饲料添加剂，不仅能够提高饲料的利用率，而且具有抗氧化、增强畜禽机体免疫力和保护肝脏的作用，能够满足畜禽对必需氨基酸的需求，还能够在一定程度上完全替代抗生素的作用，能够很好的代替使用较多的传统添加剂，有着很高的使用价值和很好的应用前景。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例。凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应该指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下的改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种植物提取物添加剂，其特征在于，所述植物提取物添加剂按质量百分比计包括以下原料组分：
五环三萜类活性物质 20％～70％，
迷迭香叶粉 10％～50％，
杜仲叶提取物 10％～30％。
2.根据权利要求1所述的植物提取物添加剂，其特征在于，所述五环三萜类活性物质中包含的活性物质为熊果酸和齐墩果酸；所述五环三萜类活性物质中活性物质的含量为200g/kg～700g/kg；所述迷迭香叶粉中包含的活性物质为迷迭香酸、鼠尾草酸和酚类二萜；所述迷迭香叶粉中活性物质的含量为100g/kg～300g/kg；所述杜仲叶提取物中包含的活性物质为桃叶珊瑚甙、绿原酸、京尼平苷酸和黄酮类化合物；所述杜仲叶提取物中活性物质的含量为100g/kg～500g/kg；
所述植物提取物添加剂中还包括赖氨酸和过瘤胃蛋氨酸，所述赖氨酸的含量≥2000mg/kg，所述过瘤胃蛋氨酸的含量≥1000mg/kg。
3.一种如权利要求1或2所述的植物提取物添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将五环三萜类活性物质、迷迭香叶粉、杜仲叶提取物混合，得到植物提取物添加剂。
4.根据权利要求3所述的植物提取物添加剂的制备方法，其特征在于，所述五环三萜类活性物质的制备方法包括以下步骤：
S1、将植物原料粉碎；
S2、对步骤S1中得到的粉碎产物进行酶解；
S3、对步骤S2中得到的酶解产物进行回流提取，得到提取液；
S4、对步骤S3中得到的提取液进行过滤，对所得滤液进行浓缩，得到第一浓缩液；
S5、将步骤S4中得到的第一浓缩液分散在水中，加入丙酮，用石油醚脱脂，分离，对所得丙酮溶液进行浓缩，得到第二浓缩液；
S6、对步骤S5中得到的第二浓缩液进行萃取，对所得萃取液进行浓缩，直至浓缩成稠膏，溶解到醇溶液中，过滤，得到溶解液；
S7、将步骤S6中得到的溶解液通过大孔树脂柱分离，先用水洗柱，直至滤液为无色，再用乙醇溶液或酸化乙醇溶液洗柱，收集经乙醇溶液或酸化乙醇溶液洗柱后得到的洗脱液，浓缩，干燥，得到浸提膏；
S8、将步骤S7中得到的浸提膏通过硅胶层析柱进行分离，洗脱，收集洗脱液，加入活性炭脱色，得到脱色洗脱液；
S9、去除步骤S8中得到的脱色洗脱液的溶剂，对所得精制物质进行结晶，分离，得到五环三萜类活性物质。
5.根据权利要求4所述的植物提取物添加剂的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述植物原料为枇杷叶、迷迭香、木瓜、柿子叶中的至少一种；
步骤S2中，所酶解过程中采用的酶为纤维素酶、果胶酶、蛋白酶中的至少一种；所述酶的添加量为粉碎产物质量的0.5％以上；所述酶解过程中控制体系的pH值为4～6；所述酶解在温度为45℃～65℃下进行；所述酶解的时间为1.5h～2h；
步骤S3中，所述回流提取过程中采用的溶剂为乙酸乙酯、丙酮、醇溶液中的至少一种；所述醇溶液为甲醇溶液、乙醇溶液、异丙醇溶液中的至少一种；所述醇溶液中醇的质量百分含量为30％～100％；所述溶剂的用量为酶解产物体积的10倍～12倍；所述回流提取的次数为2次～3次，每次回流提取的时间为1.5h～2h；
步骤S5中，所述水的用量为第一浓缩液体积的3倍～4倍；所述丙酮的用量为第一浓缩液体积的4倍～6倍；所述石油醚的用量为第一浓缩液体积的3倍～4倍；所述水的温度为50℃～60℃；
步骤S6中，所述萃取过程中采用的萃取剂的极性范围为1.6～4.8；所述萃取剂为乙酸乙酯；所述萃取剂的用量为第二浓缩液体积的6倍；所述萃取在温度为60℃～70℃下进行；所述醇溶液为乙醇溶液；所述醇溶液中醇的质量百分含量为50％～95％；
步骤S7中，所述大孔树脂柱中的大孔树脂为弱碱性大孔阴离子交换树脂；所述弱碱性大孔阴离子交换树脂为弱碱大孔树脂D345、弱碱大孔树脂D380、弱碱大孔树脂D301、弱碱大孔树脂D315、NKA-9大孔吸附树脂中的至少一种；所述乙醇溶液中乙醇的质量百分含量为20％～95％；所述酸化乙醇溶液中乙醇的质量百分含量为20％～95％，pH值为3～4；
步骤S8中，所述硅胶层析柱的径高比为比1∶2～8；所述洗脱过程中采用的洗脱剂为无水乙醇和/或甲醇；所述洗脱剂的洗脱速率为0.7BV/h～2BV/h；所述活性炭的用量为洗脱液总质量的0.5％～5％；
步骤S8中，用浓度梯度从低到高的醇溶液对精制物质进行结晶；所述醇溶液为甲醇溶液或乙醇溶液。
6.根据权利要求3～5中任一项所述的植物提取物添加剂的制备方法，其特征在于，所述迷迭香叶粉的制备方法，包括以下步骤：将迷迭香叶进行干燥，直至水分含量＜10％，粉碎，过80～120目筛网，得到迷迭香叶粉。
7.根据权利要求3～5中任一项所述的植物提取物添加剂的制备方法，其特征在于，所述杜仲叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将杜仲叶粉碎，过筛，得到杜仲叶粉末；
(2)采用超临界二氧化碳流体萃取法对步骤(1)中得到的杜仲叶粉末进行萃取，在萃取过程中加入夹带剂，得到萃取液和杜仲叶粉渣；
(3)将步骤(2)中得到的萃取液进行浓缩，加入温度为70℃～80℃的水，冷却，分离，得到沉淀物质；
(4)将步骤(3)中得到的沉淀物质烘干，粉碎，过筛，得到杜仲叶提取物。
8.根据权利要求7所述的植物提取物添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述过筛为过40目～60目筛网；
步骤(2)中，所述萃取过程中，温度为30℃～60℃，压力为15MPa～40MPa，萃取时间为1h～6h；所述夹带剂的用量为原料总体积的2％～10％，分2次～3次加入到萃取体系中；所述夹带剂为醇溶液；所述醇溶液为乙醇溶液；所述醇溶液中醇的质量百分数为50％～90％；所述杜仲叶粉渣还包括以下处理：以质量百分含量为50～70％的乙醇溶液为溶剂，对杜仲叶粉渣进行回流提取，提取时间为1h～2h，提取次数2～3次，合并提取液进行浓缩，加水，静置12h～24h，分离，所得水溶液通过孔径为0.05μm～100μm的微滤膜和弱极性大孔树脂层析柱，依次用水、质量百分数为50％～80％的乙醇溶液对弱极性大孔树脂层析柱进行洗脱，收集醇洗脱液，浓缩、干燥、粉碎、过筛，得到杜仲叶提取物；
步骤(4)中，所述过筛为过80目筛网。
9.一种如权利要求1或2所述的植物提取物添加剂或权利要求3～8中任一项所述的制备方法制得的植物提取物添加剂作为饲料添加剂在畜禽养殖中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用为将植物提取物添加剂于饲料混合，用于喂养畜禽；所述植物提取物添加剂的用量为饲料质量的0.1％～2％。
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