CN105287672A - 一种生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法，该方法包括如下步骤：（1）取新鲜人参根组织块10～12mm，放入MS+A培养基上，进行人参根组织培养；（2）取培养得到的人参根愈伤组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇提取、提取液浓缩、喷雾干燥成粉末。本发明的方法生产的人参提取物具有农药残留低，人参皂苷Ro高的特点。

Description

一种生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法
技术领域
本发明属于人参皂苷生产提取纯化方法，特别涉及一种生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法。
背景技术
人参PanaxginsengC.A.Mey.是五加科植物人参属的植物，一般指其根茎，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺等功效，人参中富含各种人参皂苷，是人参中的主要活性物质，人参皂苷Ro也是其中一种，是齐墩果酸型人参皂苷，具有抗肿瘤、抗炎、抗补体活性等药理作用。
MS培养基是用于植物组织培养的基础培养基，可以在市场上买到，其配方如下。
组成 成分 分子量 使用浓度 (mg/L)
大量元素 硝酸钾　 KNO3 101.11 1900
硝酸铵　 NH4NO3 80.04 1650
磷酸二氢钾　 KH2PO4 136.09 170
硫酸镁　 MgSO4.7H2O 246.47 370
氯化钙　 CaCl2.2H2O 147.02 440
微量元素 碘化钾　 KI 166.01 0.83
硼酸　 H3BO3 61.83 6.2
硫酸锰　 MnSO4.4H2O 223.01 22.3
硫酸锌　 ZnSO4.7 H2O 287.54 8.6
钼酸钠　 Na2MoO4.2 H2O 241.95 0.25
硫酸铜　 CuSO4.5 H2O 249.68 0.025
氯化钴　 CoCl2.62 237.93 0.025
铁盐 乙二胺四乙酸二钠　 Na2.EDTA 372.25 37.3
硫酸亚铁　 FeSO24.7H2O 278.03 27.8
有机成分 肌醇 　 100
甘氨酸 　 2
盐酸硫胺素　 VB1 　 0.1
盐酸吡哆醇　 VB6 　 0.5
烟酸　 VB5 或 VPP 　 0.5
其他 蔗糖　 sucrose 342.31 30g /L
琼脂　 agar 　 7 g /L
经研究人参皂苷Ro含量鲜人参高于干燥人参和红参，平均含量在0.4%左右，而经过组培得到的人参根组织中，人参皂苷含量均超过种植参数倍。对比试验发现，MS培养基中未加入A溶液培养得到的人参根组织，人参皂苷Ro含量在1～2%左右，而按照本发明在MS培养基中加入A溶液后培养得到的人参根组织，人参皂苷Ro含量均在8%以上。
A溶液为种植人参根水提液上25号大孔树脂柱纯化人参皂苷时，流出的上柱液和水洗脱液，这两种溶液在提取纯化人参皂苷时往往都是舍弃不要的，而本发明变废为宝，从而使得种植参得到了更充分的利用，节约了成本。
人参人工种植时，要喷洒大量的农药，这些农药会残留在人参根中,而本发明组培过程中，并未引入新的农药，而最初残留在组培原始根组织中的农药，随着4次的扩繁增殖，即使不会在生长过程中降解，也已经被稀释了百倍以上。由此提取得到的提取物，农残含量也是极低的。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法。
本发明的技术方案概述如下。
1．一种生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜人参根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入MS+A的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养4周，然后切分生长良好的人参根愈伤组织，转换到新的MS+A的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述MS+A的培养基，是在每配制1000mL的MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了200～300mL的A溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的人参根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，人参根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:3～5，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得人参提取物。
2．所述A溶液为种植人参根水提液上25号大孔树脂柱纯化人参皂苷时，流出的上柱液和水洗脱液，合并后搅拌均匀的溶液。
本发明的方法使用组培技术得到人参根的愈伤组织，使得人参皂苷含量显著提高，农残含量显著降低；
本发明使用提取纯化园参的人参皂苷时，废弃不要的上柱流出液和水洗脱液，不仅变废为宝，而且还提高了产品中人参皂苷Ro的含量。
具体实施方式
下面通过具体的实施例说明本发明生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法，下面的描述仅是为了使本领域的技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜人参根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入MS+A的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养4周，然后切分生长良好的人参根愈伤组织，转换到新的MS+A的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述MS+A的培养基，是在每配制1000mL的MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了200mL的A溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的人参根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，人参根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:3，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得人参提取物。人参皂苷Ro含量为25.6%人参皂苷总含量为68.3%，农残含量检测如下：
农药 人参原料含量mg/kg 人参提取物含量mg/kg
腐霉利 0.67 <0.01
烯酰吗啉 0.49 <0.01
实施例2
生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜人参根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入MS+A的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养4周，然后切分生长良好的人参根愈伤组织，转换到新的MS+A的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述MS+A的培养基，是在每配制1000mL的MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了300mL的A溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的人参根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，人参根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:5，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得人参提取物。人参皂苷Ro含量为28.2%人参皂苷总含量为75.8%，农残含量检测如下：
农药 人参原料含量mg/kg 人参提取物含量mg/kg
腐霉利 0.45 <0.01
烯酰吗啉 0.28 <0.01
实施例3
生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜人参根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入MS+A的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养4周，然后切分生长良好的人参根愈伤组织，转换到新的MS+A的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述MS+A的培养基，是在每配制1000mL的MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了250mL的A溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的人参根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，人参根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:4，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得人参提取物。人参皂苷Ro含量为27.1%人参皂苷总含量为70.2%，农残含量检测如下：
农药 人参原料含量mg/kg 人参提取物含量mg/kg
腐霉利 0.56 <0.01
烯酰吗啉 0.12 <0.01

Claims (2)

1.一种生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法，其特征是包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜人参根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入MS+A的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养4周，然后切分生长良好的人参根愈伤组织，转换到新的MS+A的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次；所述MS+A的培养基，是在每配制1000mL的MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了200～300mL的A溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的人参根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，人参根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:3～5，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得人参提取物。
2.根据权利要求1一种生产低农残高人参皂苷Ro含量的人参提取物的方法，其特征在于所述A溶液为种植人参根水提液上25号大孔树脂柱纯化人参皂苷时，流出的上柱液和水洗脱液，合并后搅拌均匀的溶液。
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