CN101220347A - 一种人胚肾293细胞扩增无蛋白培养基 - Google Patents

一种人胚肾293细胞扩增无蛋白培养基 Download PDF

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黄宗堂
唐贺文
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Abstract

本发明涉及一种培养基及其用途，更具体地说涉及一种人胚肾293细胞扩增培养基及其用途。属于生物制品领域。一种人胚肾293细胞扩增无蛋白培养基，其中，包括基本培养基，还包括：磷脂酰胆碱和微量元素。此人胚肾293细胞无蛋白培养基，不含任何动物血清，不含蛋白质，以氨基酸，维生素，无机盐，糖类，磷脂酰胆碱和微量元素组成。此人胚肾293细胞无血清培养基，可以直接替换含血清常规培养基，人胚肾293细胞不需要适应过程。

Description

一种人胚肾293细胞扩增无蛋白培养基
技术领域
发明涉及一种培养基，更具体地说涉及一种人胚肾293细胞扩增培养基。属于生物制品领域。
背景技术
细胞培养基是生物制品领域中常用的物质，在细菌和细胞培养中十分必要。人胚肾293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系。目前培养人胚肾293细胞的培养基的缺点是：目前，动物血清作为哺乳动物细胞培养基的关键成分被广泛应用，以牛血清为主。但是动物血清缺点是：价格昂贵，成分不明确，产品批间差异大，含有细胞生长抑制成分，且更为严重的是可能含有细菌、病毒等，导致潜在生物性污染。
发明内容
【要解决的问题】
本发明的目的，是提供一种人胚肾293细胞扩增培养基及其用途。
【技术方案】
本发明的一种人胚肾293细胞扩增无蛋白培养基，其中，包括基本培养基，还包括：磷脂酰胆碱和微量元素。
上述的基本培养基包括的组份及含量为：
成份                         Mg/L
甘氨酸                       30-120
L-丙氨酸                     5-50
L-精氨酸                     100-800
一水L-门冬酰胺                      3-60
L-天冬氨酸                          5-80
一水L-半胱氨酸盐酸盐                10-120
L-胱胺酸二盐酸盐                    10-120
L-谷氨酸                            10-100
L-谷氨酰胺                          200-3000
一水L-组氨酸盐酸盐                  3-50
L-羟脯氨酸                          5-50
L-异亮氨酸                          30-150
L-亮氨酸                            30-300
L-赖氨酸                            5-50
L-甲硫氨酸                          10-100
L-苯丙氨酸                          2-50
L-脯氨酸                            5-100
L-丝氨酸                            10-300
L-苏氨酸                            10-150
L-色氨酸                            10-150
L-酪氨酸钠盐                        50-500
L-缬氨酸                            5-50
L-鸟氨酸盐酸盐                      50-400
L-瓜氨酸                            40-350
D-生物素                            0.001-0.8
氯化胆碱                            0.1-3
D-泛酸                              0.001-0.8
叶酸                                0.001-0.8
肌醇                                0.001-0.2
烟酰胺                              0.001-0.5
P-氨基苯甲酸                        0.02-2
盐酸吡哆醛                      0.01-1
盐酸吡哆辛盐酸盐                0.01-2
核黄素                          0.001-0.3
硫胺素盐酸盐                    0.001-0.4
维生素B12                       0.02-0.6
消旋生育酚醋酸酯                0.01-0.2
烟酸                            0.001-0.5
维生素A醋酸                     0.001-0.6
钙化醇                          0.001-0.1
腺嘌呤                          0.01-1
胆固醇                          0.01-0.2
一水柠檬酸                      0.0001-0.01
2-脱氧-D-核糖                   3.5-15
二水氯化钙                      0.5-6.5
六水氯化镁                      0.5-7
七水硫酸镁                      6.5-25
氯化钾                          0.8-4.5
氯化钠                          2500-10000
碳酸氢钠                        500-4500
葡萄糖                          1500-6000
酚红钠                          0.8-25
丙酮酸钠                        45-250
黄嘌呤                          0.9-15
亚油酸                          0.01-0.8
DL-硫辛酸                       0.1-6.0
腐胺                            0.01-1.2
谷胱甘肽                        0.01-0.98
胸苷                            0.2-3.0
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)                1500-6500
D-核糖                               0.05-3.0
乙二胺四乙酸钠                       1.5-15
鸟嘌呤盐酸盐                         0.01-0.9
草酸乙酸                             0.5-15
胆固醇                               0.001-0.08
亚硝基铁氰化钠                       0.5-15
牛磺酸                               10.0-45
聚山梨酯80(即Tween80，
Sigma-Aldrich公司，货号
P1754)                               0.5-6.5
七水硫酸亚铁                         0.5-3.5
九水硝酸亚铁                         0.1-0.85
七水硫酸锌                           0.5-3.5
磷酸氢二钠                           45-300
上述的优选的组分和含量为
成份                                 Mg/L
甘氨酸                               65
L-丙氨酸                             20
L-精氨酸                             300
一水L-门冬酰胺                       15
L-天冬氨酸                           20
一水L-半胱氨酸盐酸盐                 50
L-胱胺酸二盐酸盐                     50
L-谷氨酸                             40
L-谷氨酰胺                           1000
一水L-组氨酸盐酸盐                   15
L-羟脯氨酸            20
L-异亮氨酸            52
L-亮氨酸              72.5
L-赖氨酸              15
L-甲硫氨酸            32
L-苯丙氨酸            11.5
L-脯氨酸              30
L-丝氨酸              66
L-苏氨酸              40
L-色氨酸              42
L-酪氨酸钠盐          95
L-缬氨酸              16
L-鸟氨酸盐酸盐        104
L-瓜氨酸              94
D-生物素              0.01
氯化胆碱              0.5
D-泛酸                0.01
叶酸                  0.01
肌醇                  0.05
烟酰胺                0.025
P-氨基苯甲酸          0.05
盐酸吡哆醛            0.025
盐酸吡哆辛盐酸盐      0.025
核黄素                0.01
硫胺素盐酸盐          0.01
维生素B12             0.1
消旋生育酚醋酸酯      0.05
烟酸                  0.01
维生素A醋酸               0.01
钙化醇                    0.025
腺嘌呤                    0.1
胆固醇                    0.09
一水柠檬酸                0.0035
2-脱氧-D-核糖             8.98
二水氯化钙                2.24
六水氯化镁                2.65
七水硫酸镁                12.6
氯化钾                    2.02
氯化钠                    6900
碳酸氢钠                  2250
葡萄糖                    3000
酚红钠                    7.3776
丙酮酸钠                  98.6
黄嘌呤                    4.756
亚油酸                    0.09744
DL-硫辛酸                 0.754
腐胺                      0.09338
谷胱甘肽                  0.0348
胸苷                      0.87
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)     3654
D-核糖                    0.232
乙二胺四乙酸钠            4.872
鸟嘌呤盐酸盐              0.116
草酸乙酸                  3.48
胆固醇                    0.00464
亚硝基铁氰化钠            3.48
牛磺酸                      23.2
聚山梨酯80(即Tween80，
Sigma-Aldrich公司，货号
P1754)                      2.9
七水硫酸亚铁                1.2504
九水硝酸亚铁                0.3126
七水硫酸锌                  1.563
磷酸氢二钠                  125
上述的磷脂酰胆碱包括的组份及含量为：
成份                                              Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)  0.5-3.5
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin) 0.1-1.8
上述的磷脂酰胆碱包括的组份及含量为
成份                                               Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)   1.2504
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin)  0.9378
上述的微量元素包括的组份及含量为：
成份                         Mg/L
五水硫酸铜                   0.001-0.08
五水亚硒酸钠                 0.001-0.05
氟化钠                       0.001-0.08
九水亚硒酸钠                 0.001-0.5
六水氯化钴                   0.001-0.045
二水氯化钡                   0.001-0.08
氯化锂                       0.0031-0.015
二水钼酸钠                   0.00001-0.0007
偏钒酸铵           0.0001-0.006
氯化镍             0.000008-0.0002
硝酸镍             0.00002-0.002
氯化铷             0.000003-0.0005
氯化亚锡           0.0006-0.03
二氧化钛           0.001-0.0085
氯化银             0.000001-0.00009
六水三氯化铝       0.0005-0.035
硫酸铬钾           0.0006-0.036
氧化锗             0.0001-0.0096
溴化钾             0.00001-0.00025
碘化钾             0.00006-0.0032
氯化锰             0.00006-0.0033
上述的微量元素包括的组份及含量为：
成份               Mg/L
五水硫酸铜         0.007815
五水亚硒酸钠       0.007127
氟化钠             0.009378
九水亚硒酸钠       0.012504
六水氯化钴         0.003126
二水氯化钡         0.00719
氯化锂             0.007815
二水钼酸钠         0.000156
偏钒酸铵           0.000625
氯化镍             0.000016
硝酸镍             0.000313
氯化铷             0.000013
氯化亚锡          0.002188
二氧化钛          0.002501
氯化银            0.000009
六水三氯化铝      0.002501
硫酸铬钾          0.002188
氧化锗            0.000938
溴化钾            0.000078
碘化钾            0.00025
氯化锰            0.00025
上述的培养基具有在培养人胚肾293细胞中的用途，所述的培养基，可以直接替换含血清常规培养基，人胚肾293细胞不需要适应过程。
培养基使用的条件如下：培养条件：温度37℃，CO2浓度5％，相对湿度＞95％。
【发明产品的优点】
此人胚肾293细胞无蛋白培养基，不含任何动物血清，不含蛋白质，以氨基酸，维生素，无机盐，糖类，磷脂酰胆碱和微量元素组成。此人胚肾293细胞无血清培养基，可以直接替换含血清常规培养基，人胚肾293细胞不需要适应过程。
附图说明
图1为无血清培养基人胚肾293细胞扩增培养基实施例5的培养图；
图2为无血清培养基人胚肾293细胞扩增培养基实施例4的培养图.
具体实施方式
以下的实施例在于解释说明书中的内容，为内容的具体实施方式，并不意在限制发明的保护范围。
实施例1
培养基由基本培养基、磷脂酰胆碱和微量元素组成，其中，基本培养基的组成和成份如下：
成份                                  Mg/L
甘氨酸                  65
L-丙氨酸                20
L-精氨酸                300
一水L-门冬酰胺          15
L-天冬氨酸              20
一水L-半胱氨酸盐酸盐    50
L-胱胺酸二盐酸盐        50
L-谷氨酸                40
L-谷氨酰胺              1000
一水L-组氨酸盐酸盐      15
L-羟脯氨酸              20
L-异亮氨酸              52
L-亮氨酸                72.5
L-赖氨酸                15
L-甲硫氨酸              32
L-苯丙氨酸              11.5
L-脯氨酸                30
L-丝氨酸                66
L-苏氨酸                40
L-色氨酸                42
L-酪氨酸钠盐            95
L-缬氨酸                16
L-鸟氨酸盐酸盐          104
L-瓜氨酸                94
D-生物素                0.01
氯化胆碱                0.5
D-泛酸                  0.01
叶酸                    0.01
肌醇               0.05
烟酰胺             0.025
P-氨基苯甲酸       0.05
盐酸吡哆醛         0.025
盐酸吡哆辛盐酸盐   0.025
核黄素             0.01
硫胺素盐酸盐       0.01
维生素B12          0.1
消旋生育酚醋酸酯   0.05
烟酸               0.01
维生素A醋酸        0.01
钙化醇             0.025
腺嘌呤             0.1
胆固醇             0.09
一水柠檬酸         0.0035
2-脱氧-D-核糖      8.98
二水氯化钙         2.24
六水氯化镁         2.65
七水硫酸镁         12.6
氯化钾             2.02
氯化钠             6900
碳酸氢钠           2250
葡萄糖             3000
酚红钠             7.3776
丙酮酸钠           98.6
黄嘌呤             4.756
亚油酸             0.09744
DL-硫辛酸          0.754
腐胺                     0.09338
谷胱甘肽                 0.0348
胸苷                     0.87
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)    3654
D-核糖                   0.232
乙二胺四乙酸钠           4.872
鸟嘌呤盐酸盐             0.116
草酸乙酸                 3.48
胆固醇                   0.00464
亚硝基铁氰化钠           3.48
牛磺酸                   23.2
聚山梨酯80(即Tween80，
Sigma-Aldrich公司，货号
P1754)                   2.9
七水硫酸亚铁             1.2504
九水硝酸亚铁             0.3126
七水硫酸锌               1.563
磷酸氢二钠               125
磷脂酰胆碱包括的组份及含量为
成份                                                    Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)        1.2504
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin)       0.9378
微量元素包括的组份及含量为：
成份                     Mg/L
五水硫酸铜               0.007815
五水亚硒酸钠             0.007127
氟化钠                   0.009378
九水亚硒酸钠    0.012504
六水氯化钴      0.003126
二水氯化钡      0.00719
氯化锂          0.007815
二水钼酸钠      0.000156
偏钒酸铵        0.000625
氯化镍          0.000016
硝酸镍          0.000313
氯化铷          0.000013
氯化亚锡        0.002188
二氧化钛        0.002501
氯化银          0.000009
六水三氯化铝    0.002501
硫酸铬钾        0.002188
氧化锗          0.000938
溴化钾          0.000078
碘化钾          0.00025
氯化锰          0.00025
实施例2
培养基由基本培养基、磷脂酰胆碱和微量元素组成，其中，基本培养基的组成和成份如下：
成份            Mg/L
甘氨酸          30
L-丙氨酸        50
L-精氨酸        100
一水L-门冬酰胺  60
L-天冬氨酸      5
一水L-半胱氨酸盐酸盐             120
L-胱胺酸二盐酸盐                 10
L-谷氨酸                         100
L-谷氨酰胺                       200
一水L-组氨酸盐酸盐               50
L-羟脯氨酸                       5
L-异亮氨酸                       150
L-亮氨酸                         30
L-赖氨酸                         50
L-甲硫氨酸                       10
L-苯丙氨酸                       50
L-脯氨酸                         5
L-丝氨酸                         300
L-苏氨酸                         10
L-色氨酸                         150
L-酪氨酸钠盐                     50
L-缬氨酸                         50
L-鸟氨酸盐酸盐                   50
L-瓜氨酸                         350
D-生物素                         0.001
氯化胆碱                         3
D-泛酸                           0.001
叶酸                             0.8
肌醇                             0.001
烟酰胺                           0.5
P-氨基苯甲酸                     0.02
盐酸吡哆醛                       1
盐酸吡哆辛盐酸盐                 0.01
核黄素                          0.3
硫胺素盐酸盐                    0.001
维生素B12                       0.6
消旋生育酚醋酸酯                0.01
烟酸                            0.5
维生素A醋酸                     0.001
钙化醇                          0.1
腺嘌呤                          0.01
胆固醇                          0.2
一水柠檬酸                      0.0001
2-脱氧-D-核糖                   15
二水氯化钙                      0.5
六水氯化镁                      7
七水硫酸镁                      6.5
氯化钾                          4.5
氯化钠                          2500
碳酸氢钠                        4500
葡萄糖                          1500
酚红钠                          25
丙酮酸钠                        45
黄嘌呤                          15
亚油酸                          0.01
DL-硫辛酸                       6.0
腐胺                            0.01
谷胱甘肽                        0.98
胸苷                            0.2
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)           6500
D-核糖                          0.05
乙二胺四乙酸钠                 15
鸟嘌呤盐酸盐                   0.01
草酸乙酸                       15
胆固醇                         0.001
亚硝基铁氰化钠                 15
牛磺酸                         10
聚山梨酯80(即Tween80，
Sigma-Aldrich公司，货号
P1754)                         6.5
七水硫酸亚铁                   0.5
九水硝酸亚铁                   0.85
七水硫酸锌                     0.5
磷酸氢二钠                     300
磷脂酰胆碱包括的组份及含量为
成份                                                  Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)      0.5
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin)     1.8
微量元素包括的组份及含量为：
成份                           Mg/L
五水硫酸铜                     0.001
五水亚硒酸钠                   0.05
氟化钠                         0.001
九水亚硒酸钠                   0.5
六水氯化钴                     0.001
二水氯化钡                     0.08
氯化锂                         0.0031
二水钼酸钠                     0.0007
偏钒酸铵                        0.0001
氯化镍                          0.0002
硝酸镍                          0.00002
氯化铷                          0.0005
氯化亚锡                        0.0006
二氧化钛                        0.0085
氯化银                          0.000001
六水三氯化铝                    0.035
硫酸铬钾                        0.0006
氧化锗                          0.0096
溴化钾                          0.00001
碘化钾                          0.0032
氯化锰                          0.00006
实施例3
培养基由基本培养基、磷脂酰胆碱和微量元素组成，其中，基本培养基的组成和成份如下：
成份                            Mg/L
甘氨酸                          120
L-丙氨酸                        5
L-精氨酸                        800
一水L-门冬酰胺                  3
L-天冬氨酸                      80
一水L-半胱氨酸盐酸盐            10
L-胱胺酸二盐酸盐                120
L-谷氨酸                        10
L-谷氨酰胺                      3000
一水L-组氨酸盐酸盐              3
L-羟脯氨酸        50
L-异亮氨酸        30
L-亮氨酸          300
L-赖氨酸          5
L-甲硫氨酸        100
L-苯丙氨酸        2
L-脯氨酸          100
L-丝氨酸          10
L-苏氨酸          150
L-色氨酸          10
L-酪氨酸钠盐      500
L-缬氨酸          5
L-鸟氨酸盐酸盐    400
L-瓜氨酸          40
D-生物素          0.8
氯化胆碱          0.1
D-泛酸            0.8
叶酸              0.001
肌醇              0.2
烟酰胺            0.001
P-氨基苯甲酸      2
盐酸吡哆醛        0.01
盐酸吡哆辛盐酸盐  2
核黄素            0.001
硫胺素盐酸盐      0.4
维生素B12         0.02
消旋生育酚醋酸酯  0.2
烟酸              0.001
维生素A醋酸           0.6
钙化醇                0.001
腺嘌呤                1
胆固醇                0.01
一水柠檬酸            0.01
2-脱氧-D-核糖         3.5
二水氯化钙            6.5
六水氯化镁            0.5
七水硫酸镁            25
氯化钾                0.8
氯化钠                10000
碳酸氢钠              500
葡萄糖                6000
酚红钠                0.8
丙酮酸钠              250
黄嘌呤                0.9
亚油酸                0.8
DL-硫辛酸             0.1
腐胺                  1.2
谷胱甘肽              0.01
胸苷                  3.0
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸) 1500
D-核糖                3.0
乙二胺四乙酸钠        1.5
鸟嘌呤盐酸盐          0.9
草酸乙酸              0.5
胆固醇                0.08
亚硝基铁氰化钠        0.5
牛磺酸                 45
聚山梨酯80(即Tween80，
Sigma-Aldrich公司，货号
P1754)                 0.5
七水硫酸亚铁           3.5
九水硝酸亚铁           0.1
七水硫酸锌             3.5
磷酸氢二钠             45
磷脂酰胆碱包括的组份及含量为
成份                                                  Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)      3.5
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin)     0.1
微量元素包括的组份及含量为：
成份                  Mg/L
五水硫酸铜            0.08
五水亚硒酸钠          0.001
氟化钠                0.08
九水亚硒酸钠          0.001
六水氯化钴            0.045
二水氯化钡            0.001
氯化锂                0.015
二水钼酸钠            0.00001
偏钒酸铵              0.006
氯化镍                0.000008
硝酸镍                0.002
氯化铷                0.000003
氯化亚锡              0.03
二氧化钛             0.001
氯化银               0.00009
六水三氯化铝         0.0005
硫酸铬钾             0.036
氧化锗               0.0001
溴化钾               0.00025
碘化钾               0.00006
氯化锰               0.0033
实施例4
培养基由基本培养基、磷脂酰胆碱和微量元素组成，其中，基本培养基的组成和成份如下：
成份                  Mg/L
甘氨酸                30
L-丙氨酸              5
L-精氨酸              100
一水L-门冬酰胺        3
L-天冬氨酸            5
一水L-半胱氨酸盐酸盐  10
L-胱胺酸二盐酸盐      10
L-谷氨酸              10
L-谷氨酰胺            200
一水L-组氨酸盐酸盐    3
L-羟脯氨酸            5
L-异亮氨酸            30
L-亮氨酸              30
L-赖氨酸              5
L-甲硫氨酸          10
L-苯丙氨酸          2
L-脯氨酸            5
L-丝氨酸            10
L-苏氨酸            10
L-色氨酸            10
L-酪氨酸钠盐        50
L-缬氨酸            5
L-鸟氨酸盐酸盐      50
L-瓜氨酸            40
D-生物素            0.001
氯化胆碱            0.1
D-泛酸              0.001
叶酸                0.001
肌醇                0.001
烟酰胺              0.001
P-氨基苯甲酸        0.02
盐酸吡哆醛          0.01
盐酸吡哆辛盐酸盐    0.01
核黄素              0.001
硫胺素盐酸盐        0.001
维生素B12           0.02
消旋生育酚醋酸酯    0.01
烟酸                0.001
维生素A醋酸         0.001
钙化醇              0.001
腺嘌呤              0.01
胆固醇              0.01
一水柠檬酸               0.0001
 2-脱氧-D-核糖           3.5
二水氯化钙               0.5
六水氯化镁               0.5
七水硫酸镁               6.5
氯化钾                   0.8
氯化钠                   2500
碳酸氢钠                 500
葡萄糖                   1500
酚红钠                   0.8
丙酮酸钠                 45
黄嘌呤                   0.9
亚油酸                   0.01
DL-硫辛酸                0.1
腐胺                     0.01
谷胱甘肽                 0.01
胸苷                     0.2
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)    1500
D-核糖                   0.05
乙二胺四乙酸钠           1.5
鸟嘌呤盐酸盐             0.01
草酸乙酸                 0.5
胆固醇                   0.001
亚硝基铁氰化钠           0.5
牛磺酸                   10.0
聚山梨酯80(即Tween80，
Sigma-Aldrich公司，货号
P1754)                   0.5
七水硫酸亚铁         0.5
九水硝酸亚铁         0.1
七水硫酸锌           0.5
磷酸氢二钠           45
磷脂酰胆碱包括的组份及含量为
成份                                                  Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)      0.5
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin)     0.1
微量元素包括的组份及含量为：
成份                 Mg/L
五水硫酸铜           0.001
五水亚硒酸钠         0.001
氟化钠               0.001
九水亚硒酸钠         0.001
六水氯化钴           0.001
二水氯化钡           0.001
氯化锂               0.0031
二水钼酸钠           0.00001
偏钒酸铵             0.0001
氯化镍               0.000008
硝酸镍               0.00002
氯化铷               0.000003
氯化亚锡             0.0006
二氧化钛             0.001
氯化银               0.000001
六水三氯化铝         0.0005
硫酸铬钾                0.0006
氧化锗                  0.0001
溴化钾                  0.00001
碘化钾                  0.00006
氯化锰                  0.00006
实施例5
培养基由基本培养基、磷脂酰胆碱和微量元素组成，其中，基本培养基的组成和成份如下：
成份                    Mg/L
甘氨酸                  120
L-丙氨酸                50
L-精氨酸                800
一水L-门冬酰胺          60
L-天冬氨酸              80
一水L-半胱氨酸盐酸盐    120
L-胱胺酸二盐酸盐        120
L-谷氨酸                100
L-谷氨酰胺              3000
一水L-组氨酸盐酸盐      50
L-羟脯氨酸              50
L-异亮氨酸              150
L-亮氨酸                300
L-赖氨酸                50
L-甲硫氨酸              100
L-苯丙氨酸              50
L-脯氨酸                100
L-丝氨酸                300
L-苏氨酸          150
L-色氨酸          150
L-酪氨酸钠盐      500
L-缬氨酸          50
L-鸟氨酸盐酸盐    400
L-瓜氨酸          350
D-生物素          0.8
氯化胆碱          3
D-泛酸            0.8
叶酸              0.8
肌醇              0.2
烟酰胺            0.5
P-氨基苯甲酸      2
盐酸吡哆醛        1
盐酸吡哆辛盐酸盐  2
核黄素            0.3
硫胺素盐酸盐      0.4
维生素B12         0.6
消旋生育酚醋酸酯  0.2
烟酸              0.5
维生素A醋酸       0.6
钙化醇            0.1
腺嘌呤            1
胆固醇            0.2
一水柠檬酸        0.01
2-脱氧-D-核糖     15
二水氯化钙        6.5
六水氯化镁        7
七水硫酸镁                     25
氯化钾                         4.5
氯化钠                         10000
碳酸氢钠                       4500
葡萄糖                         6000
酚红钠                         25
丙酮酸钠                       250
黄嘌呤                         15
亚油酸                         0.8
DL-硫辛酸                      6.0
腐胺                           1.2
谷胱甘肽                       0.98
胸苷                           3.0
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)          6500
D-核糖                         3.0
乙二胺四乙酸钠                 15
鸟嘌呤盐酸盐                   0.9
草酸乙酸                       15
胆固醇                         0.08
亚硝基铁氰化钠                 15
牛磺酸                         45
聚山梨酯80(即Tween80，
Sigma-Aldrich公司，货号P1754)      6.5
七水硫酸亚铁                   3.5
九水硝酸亚铁                   0.85
七水硫酸锌                     3.5
磷酸氢二钠                     300
磷脂酰胆碱包括的组份及含量为
成份                                               Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)   3.5
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin)  1.8
微量元素包括的组份及含量为：
成份                   Mg/L
五水硫酸铜             0.08
五水亚硒酸钠           0.05
氟化钠                 0.08
九水亚硒酸钠           0.5
六水氯化钴             0.045
二水氯化钡             0.08
氯化锂                 0.015
二水钼酸钠             0.0007
偏钒酸铵               0.006
氯化镍                 0.0002
硝酸镍                 0.002
氯化铷                 0.0005
氯化亚锡               0.03
二氧化钛               0.0085
氯化银                 0.00009
六水三氯化铝           0.035
硫酸铬钾               0.036
氧化锗                 0.0096
溴化钾                 0.00025
碘化钾                 0.0032
氯化锰                 0.0033

Claims (10)

1.一种人胚肾293细胞扩增无蛋白培养基，其特征在于：包括基本培养基，还包括：磷脂酰胆碱和微量元素。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于：其中所述的基本培养基包括的组份及含量为：
成份                     Mg/L
甘氨酸                   30-120
L-丙氨酸                 5-50
L-精氨酸                 100-800
一水L-门冬酰胺           3-60
L-天冬氨酸               5-80
一水L-半胱氨酸盐酸盐     10-120
L-胱胺酸二盐酸盐         10-120
L-谷氨酸                 10-100
L-谷氨酰胺               200-3000
一水L-组氨酸盐酸盐       3-50
L-羟脯氨酸               5-50
L-异亮氨酸               30-150
L-亮氨酸                 30-300
L-赖氨酸                 5-50
L-甲硫氨酸               10-100
L-苯丙氨酸               2-50
L-脯氨酸                 5-100
L-丝氨酸                 10-300
L-苏氨酸                 10-150
L-色氨酸                 10-150
L-酪氨酸钠盐        50-500
L-缬氨酸            5-50
L-鸟氨酸盐酸盐      50-400
L-瓜氨酸            40-350
D-生物素            0.001-0.8
氯化胆碱            0.1-3
D-泛酸              0.001-0.8
叶酸                0.001-0.8
肌醇                0.001-0.2
烟酰胺              0.001-0.5
P-氨基苯甲酸        0.02-2
盐酸吡哆醛          0.01-1
盐酸吡哆辛盐酸盐    0.01-2
核黄素              0.001-0.3
硫胺素盐酸盐        0.001-0.4
维生素B12           0.02-0.6
消旋生育酚醋酸酯    0.01-0.2
烟酸                0.001-0.5
维生素A醋酸         0.001-0.6
钙化醇              0.001-0.1
腺嘌呤              0.01-1
胆固醇              0.01-0.2
一水柠檬酸          0.0001-0.01
2-脱氧-D-核糖       3.5-1 5
二水氯化钙          0.5-6.5
六水氯化镁          0.5-7
七水硫酸镁          6.5-25
氯化钾              0.8-4.5
氯化钠                   2500-10000
碳酸氢钠                 500-4500
葡萄糖                   1500-6000
酚红钠                   0.8-25
丙酮酸钠                 45-250
黄嘌呤                   0.9-15
亚油酸                   0.01-0.8
DL-硫辛酸                0.1-6.0
腐胺                     0.01-1.2
谷胱甘肽                 0.01-0.98
胸苷                     0.2-3.0
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)    1500-6500
D-核糖                   0.05-3.0
乙二胺四乙酸钠           1.5-15
鸟嘌呤盐酸盐             0.01-0.9
草酸乙酸                 0.5-15
胆固醇                   0.001-0.08
亚硝基铁氰化钠           0.5-15
牛磺酸                   10.0-45
聚山梨酯80(即Tween 80，
Sigma-Aldrich公司，货号
P1754)                   0.5-6.5
七水硫酸亚铁             0.5-3.5
九水硝酸亚铁             0.1-0.85
七水硫酸锌               0.5-3.5
磷酸氢二钠               45-300。
3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于：优选的组分和含量为
成份                   Mg/L
甘氨酸                 65
L-丙氨酸               20
L-精氨酸               300
一水L-门冬酰胺         15
L-天冬氨酸             20
一水L-半胱氨酸盐酸盐   50
L-胱胺酸二盐酸盐       50
L-谷氨酸               40
L-谷氨酰胺             1000
一水L-组氨酸盐酸盐     15
L-羟脯氨酸             20
L-异亮氨酸             52
L-亮氨酸               72.5
L-赖氨酸               15
L-甲硫氨酸             32
L-苯丙氨酸             11.5
L-脯氨酸               30
L-丝氨酸               66
L-苏氨酸               40
L-色氨酸               42
L-酪氨酸钠盐           95
L-缬氨酸               16
L-鸟氨酸盐酸盐         104
L-瓜氨酸               94
D-生物素               0.01
氯化胆碱               0.5
D-泛酸                 0.01
叶酸                0.01
肌醇                0.05
烟酰胺              0.025
P-氨基苯甲酸        0.05
盐酸吡哆醛          0.025
盐酸吡哆辛盐酸盐    0.025
核黄素              0.01
硫胺素盐酸盐        0.01
维生素B12           0.1
消旋生育酚醋酸酯    0.05
烟酸                0.01
维生素A醋酸         0.01
钙化醇              0.025
腺嘌呤              0.1
胆固醇              0.09
一水柠檬酸          0.0035
2-脱氧-D-核糖       8.98
二水氯化钙          2.24
六水氯化镁          2.65
七水硫酸镁          12.6
氯化钾              2.02
氯化钠              6900
碳酸氢钠            2250
葡萄糖              3000
酚红钠              7.3776
丙酮酸钠            98.6
黄嘌呤              4.756
亚油酸              0.09744
DL-硫辛酸             0.754
腐胺                  0.09338
谷胱甘肽              0.0348
胸苷                  0.87
MES(2-(N-吗啉)乙磺酸) 3654
D-核糖                0.2 32
乙二胺四乙酸钠        4.872
鸟嘌呤盐酸盐          0.116
草酸乙酸              3.48
胆固醇                0.00464
亚硝基铁氰化钠        3.48
牛磺酸                23.2
聚山梨酯80(即Tween80，
Sigma-Aldrich公司，货号
P1754)                2.9
七水硫酸亚铁          1.2504
九水硝酸亚铁          0.3126
七水硫酸锌            1.563
磷酸氢二钠            125。
4.如权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述的磷脂酰胆碱包括的组份及含量为：
成份                                                  Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)      0.5-3.5
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin)     0.1-1.8。
5.如权利要求4所述的培养基，其特征在于：所述的磷脂酰胆碱包括的组份及含量为
成份                                                 Mg/L
二亚油酰磷脂酰胆碱(Dilineoyl-phosphatidylcholin)    1.2 504
二硬脂酰磷脂酰胆碱(Distearoyl-phosphatidylcholin)   0.9378。
6.如权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述的微量元素包括的组份及含量为：
成份                      Mg/L
五水硫酸铜                0.001-0.08
五水亚硒酸钠              0.001-0.05
氟化钠                    0.001-0.08
九水亚硒酸钠              0.001-0.5
六水氯化钴                0.001-0.045
二水氯化钡                0.001-0.08
氯化锂                    0.0031-0.015
二水钼酸钠                0.00001-0.0007
偏钒酸铵                  0.0001-0.006
氯化镍                    0.000008-0.0002
硝酸镍                    0.00002-0.002
氯化                      0.000003-0.0005
氯化亚锡                  0.0006-0.03
二氧化钛                  0.001-0.0085
氯化银                    0.000001-0.00009
六水三氯化铝              0.0005-0.035
硫酸铬钾                  0.0006-0.036
氧化锗                    0.0001-0.0096
溴化钾                    0.00001-0.00025
碘化钾                    0.00006-0.0032
氯化锰                    0.00006-0.0033。
7.如权利要求6所述的培养基，其特征在于：所述的微量元素包括的组份及含量为：
成份                      Mg/L
五水硫酸铜                0.007815
五水亚硒酸钠              0.007127
氟化钠                    0.009378
九水亚硒酸钠              0.012504
六水氯化钴                0.003126
二水氯化钡                0.00719
氯化锂                    0.007815
二水钼酸钠                0.000156
偏钒酸铵                  0.000625
氯化镍                    0.000016
硝酸镍                    0.000313
氯化铷                    0.000013
氯化亚锡                  0.002188
二氧化钛                  0.002501
氯化银                    0.000009
六水三氯化铝              0.002501
硫酸铬钾                  0.002188
氧化锗                    0.000938
溴化钾                    0.000078
碘化钾                    0.00025
氯化锰                    0.00025。
8.如权利要求1-7中任意一项所述的培养基在培养人胚肾293细胞中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于：所述的培养基，可以直接替换含血清常规培养基，人胚肾293细胞不需要适应过程。
10.如权利要求8或9所述的用途，其特征在于：使用的条件如下：培养条件：温度37℃，CO2浓度5％，相对湿度＞95％。
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