CN101209264B

CN101209264B - 具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物、其制备方法及用途

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Publication number: CN101209264B
Application number: CN2006101673786A
Authority: CN
Inventors: 吴宗好
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Current assignee: Individual
Priority date: 2006-12-31
Filing date: 2006-12-31
Publication date: 2012-01-04
Anticipated expiration: 2026-12-31
Also published as: CN101209264A

Abstract

本发明公开了具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物，还公开了该提取物的制备方法以及在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明总蟾毒内酯提取物由干蟾皮经有机溶剂提取、柱色谱分离、纯化而得，总蟾毒内酯含量大于80％，其中脂蟾毒配基含量大于12％，华蟾酥毒基含量大于4％，蟾毒灵含量大于10％。与现有技术相比，本发明去除了具刺激性、易致超敏反应且不具有抗肿瘤活性的蟾毒色胺类生物碱成分，高效富集具有显著抗肿瘤活性的有效部位总蟾毒内酯，药理作用更强、临床疗效高、毒副作用更低。总蟾毒内酯提取物可制备成各种供临床使用的药物制剂，具有杀灭肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞分化、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成、降低肿瘤转移率等作用。

Description

具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物、其制备方法及用途

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤作用的活性成分提取物，尤其涉及一种从干蟾皮中提取具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯(蟾毒配基类、蟾蜍毒素类)提取物以及该提取物的制备方法，本发明还涉及该总蟾毒内酯提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，属于中药领域。

背景技术

癌症是危害人类生命的一大杀手，研究开发有效的抗癌药物，是世界药物研究者面临的一个共同课题。在抗癌新药的研究开发领域，寻找能将肿瘤细胞转化为正常细胞(诱导肿瘤细胞分化)、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成、降低肿瘤转移，是近年来抗肿瘤药物研究开发的热点，同时也是临床上最迫切需要的抗肿瘤药物。

总蟾毒内酯冻干粉针的主要成分脂溶性化合物是中药干蟾皮的主要药效成分。总蟾毒内酯系由传统药材蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo bufo melantictusos Schneider)阴干全皮为主要原料提取的脂溶性化合物。蟾皮，始载于《本经逢源》，又名虾蟆皮。全国各地均产，鲜用或干用。蟾蜍之名首载于《名医别录》，早在《神农本草经》就载有“虾蟆”的性味与主治。《本草蒙荃》：“味辛、气凉、微毒”，《本草再新》：“入心、肝、脾、肾四经”。古今验方广泛应用蟾蜍、蟾酥拔毒消肿、定痛杀虫、强心利尿。在我国有长期内服或外敷蟾蜍、蟾酥制剂治疗肝癌等多种癌症的历史，发现含有脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵、蟾毒它灵、日蟾毒它灵-3-半辛二酸酯、蟾蜍灵3-丁二酰精氨酸酯、华蟾毒精3-丁二酰精氨酸酯等混合物的总蟾毒内酯不但在动物实验上具有明显的抗肿瘤作用，而且还能将肿瘤细胞转化为正常细胞(诱导肿瘤细胞分化)、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成、降低肿瘤转移等作用。

现有从干蟾皮中提取有效成分的方法大致分为两种：一种是水直接提取，然后醇沉两次，再制成成品。经检测，主要含有生物碱类成分及微量的蟾毒内酯类成分，且两类成分纯度极低；另一种是采用乙醇提取，提取物上大孔吸附树脂柱，用30～50％乙醇洗脱，回收乙醇，干燥，再制成成品。醇提取物中生物碱类成分含量30％以上；蟾毒内酯类成分华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量分别为0.02％和0.014％。根据现有的研究文献(①赵建斌等：华蟾毒精抗癌作用的体外研究.第四军医大学学报，2001；22(16)：1504-1507。②黄应申等：脂蟾毒配基通过线粒体途径诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究.中国肿瘤临床，2006；33(20)：1141-1145。③徐瑞成等：蟾蜍灵诱导人白血病HL60细胞凋亡的初步研究.中国中药杂志，2001；26(1)：59-61。④赵明芳等：蟾蜍毒素对S180小鼠移植瘤的抑制作用及其毒副作用的实验研究.山西医药杂志2006；35(3)：189-193。⑤Inada A蟾蜍二烯羟酸内酯抗促癌作用.国外医学中医中药分册，2000；22(4)：233-234)：干蟾皮制剂(如华蟾素注射液、华蟾素片、华蟾素口服液等)抗肿瘤有效成分应为总蟾毒内酯。

目前尚未有生物碱类成分为抗肿瘤活性成分的研究报道。蟾皮的水溶性成分吲哚类生物碱具有调节免疫，抑制HBV、DNA的复制，具有较强的抗病毒作用，改善鸭肝的病理变化。临床用于治疗人病毒性乙型肝炎。据文献[龚爱平、刘金秀等：华蟾素的不良反应(附201例临床观察).徐州医学院学报，1998；18(5)：418-420]报道：蟾皮的水溶性注射剂——华蟾素注射液(主要含水溶性、吲哚类生物碱，如5-羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黄等及极微量的蟾毒内酯类成分)其临床不良反应率高达43.28％，作者认为临床上出现的心律失常、局部静脉刺激反应、皮肤反应、哮喘、超敏反应等不良反应均为蟾皮的水溶性吲哚类生物碱(5-羟色胺衍生物)成分的药理作用所致。

由此可见，上述专利方法提取的大部分为生物碱类成分，而脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾蜍灵等具有显著抗肿瘤活性的蟾毒内酯类成分损失殆尽，且这些方法工艺过于简单，有效成分含量低，杂质多，制剂稳定性差，质控指标低，临床疗效不稳定，不良反应严重且难以控制。

发明内容

本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种可以从干蟾皮中的提取高纯度具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物(有效部位)。

本发明首先所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物(有效部位)，该提取物中总蟾毒内酯含量≥80％；其中脂蟾毒配基含量为12-30％，华蟾酥毒基含量为4-15％，蟾毒灵含量10-25％；

优选的，该提取物中总蟾毒内酯含量为80-98.92％；其中，脂蟾毒配基含量为12-16.87％；华蟾酥毒基含量为4-6.31％；蟾毒灵含量为10-13.92％。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种制备上述具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物的方法。

本发明所要解决的另一个技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种制备具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物的方法，包括：

(1)将干蟾皮粉碎或切块，用有机溶剂回流提取1-8次，合并提取液；

(2)提取液减压浓缩后，得浓缩液，浓缩液离心，取上清液，上清液上柱色谱，用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，回收有机溶剂，得总蟾毒内酯粗品；或提取液减压浓缩后，得浓缩液，浓缩液离心，取上清液，用氯仿或乙醇-氯仿混合溶剂萃取，回收有机溶剂，得总蟾毒内酯粗品

(3)总蟾毒内酯粗品经有机溶剂提取和/或柱色谱分离，回收有机溶剂，得总蟾毒内酯提取物。

上述制备方法中，步骤(1)或步骤(3)中所述的有机溶剂优选为50-95％乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿或石油醚，更优选为50-95％乙醇；步骤(1)中将干蟾皮粉碎或切块，用有机溶剂回流提取的次数优选2-5次；步骤(2)或步骤(3)中柱色谱中所使用的吸附剂优选为硅胶、阳离子交换树脂、聚酰胺、氧化铝或大孔树脂；步骤(2)中所述的洗脱剂优选为甲醇、乙醇、乙醚、乙酸乙酯或氯仿，或它们中的一种以上以任意比例所组成的混合溶剂。

本发明先将干蟾皮用有机溶剂提取，得粗提取物(含蟾毒内酯及蟾毒色胺生物碱)，再将粗提取物上柱色谱或有机溶剂提取去除了具刺激性、易致超敏反应且不具有抗肿瘤活性的蟾毒色胺类生物碱成分(为水溶性、吲哚类生物碱，如5-羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黄等)，高效富集具有显著抗肿瘤活性的有效部位总蟾毒内酯(主要含有脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵、蟾毒它灵、日蟾毒它灵-3-半辛二酸酯、蟾蜍灵3-丁二酰精氨酸酯、华蟾毒精3-丁二酰精氨酸酯等抗肿瘤有效成分)，使总蟾毒内酯含量达80％以上，其中脂蟾毒配基含量大于12％，华蟾酥毒基含量大于4％，蟾毒灵含量大于10％。与现有技术相比，本发明总蟾毒内酯提取物去除了具刺激性、易致超敏反应、心律失常且不具有抗肿瘤活性的蟾毒色胺类生物碱成分(为水溶性、吲哚类生物碱，如5-羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黄等)，高效富集具有显著抗肿瘤活性的有效部位总蟾毒内酯，提取分离方法简单，产品纯度高，质量易控，药理作用更强、临床疗效高、毒副作用更低。

本发明总蟾毒内酯提取物可制备成各种供临床使用的药物制剂，具有杀灭肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞分化、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成、降低肿瘤转移率等作用。主要用于治疗原发性肝癌、中晚期肺癌、乳腺癌、消化道癌、白血病等各种肿瘤。

本发明总蟾毒内酯提取物可以加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接受的赋形剂或载体后，以常规的中药制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂，例如可以是注射剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)、片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊、滴丸等，优选为注射用冻干粉针剂。

其中，所述的辅料可以是抗氧络合剂、填充剂、骨架材料等；

所述的药学上可接受的载体是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种，优选为甘露醇或乳糖。

将本发明总蟾毒内酯提取物制成冻干粉针，可参照以下制备方法：向干蟾皮的总蟾毒内酯提取物中加入增溶剂丙二醇或吐温80，再加入活性炭吸附剂和药用载体；搅拌加热、溶解、过滤、除热源、灭菌、灌装；冷冻干燥，即得。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

说明：总蟾毒内酯各成分含量测定按照以下方法进行：

1.材料与方法

1.1仪器与试药：UV1700紫外分光光度计，本发明总蟾毒内酯提取物；脂蟾毒配基(中国药品生物制品检定所)。

1.2实验方法：参照中国药典1995年版一部第340～341页中蟾酥中蟾毒内酯含量测定方法；波长：299nm；本方法采用紫外分光光度法。

2.提取物中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵的含量测定。

脂蟾毒配基R₁＝CH₃，R₂＝R₃＝H 蟾毒灵

华蟾毒精R₁＝CH₃，R₂＝H，R₃＝OCOCH₃

日蟾毒它灵-3-半辛二酸酯蟾蜍灵-3-丁二酰精氨酸酯R＝Oac

华蟾毒精-3-丁二酰精氨酸酯R＝H

2.1仪器与试药：LC-10ATvp型液相色谱仪泵主机、SPD-10Avp型紫外检测器(日本岛津公司)；色谱柱：Hypersil ODS 2，5μm，4.6mm×25cm(大连依利特分析仪器有限公司)；本发明总蟾毒内酯；脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵(均为中国药品生物制品检定所提供)。

2.2实验方法：参照中国药典2005年版一部第265～266页蟾酥项下含量测定方法进行测定。

实施例1

将干蟾皮500g切块，用50～95％甲醇回流提取2～5次，合并提取液，回收甲醇，浓缩液离心，取上清液，上聚酰胺柱吸附，先以水洗涤，再用10～95％乙醇洗脱，合并主要含有蟾毒内酯的洗脱液，回收溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经氯仿(或乙醇-氯仿混合溶剂)提取，回收有机溶剂即得具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物；

本实施例所制备的提取物中，总蟾毒内酯含量、脂蟾毒配基含量，华蟾酥毒基含量和蟾毒灵含量的测定结果见表1。

表1

组别	总蟾毒内酯	脂蟾毒配基	华蟾酥毒基	蟾毒灵
					含量	80.06％	13.11％	4.72％	10.70％

总蟾毒内酯加入增溶剂丙二醇或吐温80，再用注射用水调节至1mg/ml，加入2％～10％木糖醇和0.1％～0.5％活性炭，煮沸20分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。

实施例2

将干蟾皮500g切块，用乙醚回流提取2～5次，合并提取液，回收乙醚至干，加乙醇溶解，上硅胶柱吸附，用乙醚洗脱，合并主要含有蟾毒内酯的洗脱液，回收溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经氯仿(或乙醚-氯仿混合溶剂)提取，回收有机溶剂即得具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物；

本实施例所制备的提取物中，总蟾毒内酯含量、脂蟾毒配基含量，华蟾酥毒基含量和蟾毒灵含量的测定结果见表2。

表2

组别	总蟾毒内酯	脂蟾毒配基	华蟾酥毒基	蟾毒灵
					含量	80.30％	13.21％	5.42％	11.98％

总蟾毒内酯加入增溶剂丙二醇或吐温80，再用注射用水调节至含1mg/ml，加入2％～10％乳糖和0.1％～0.5％活性炭，煮沸20分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。

实施例3将干蟾皮500g切块，用50～95％乙醇回流提取2～5次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩液离心，取上清液，上阳离子交换树脂柱吸附，先以水洗涤，再用氨水洗脱，合并主要含有蟾毒内酯的洗脱液，回收溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经乙醇(或乙醇-乙醚混合溶剂)提取，回收溶剂即得具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物；

本实施例所制备的提取物中，总蟾毒内酯含量、脂蟾毒配基含量，华蟾酥毒基含量和蟾毒灵含量的测定结果见表3。

表3

组别	总蟾毒内酯	脂蟾毒配基	华蟾酥毒基	蟾毒灵
					含量	90.96％	15.41％	5.03％	11.83％

总蟾毒内酯加入增溶剂丙二醇或吐温80，再用注射用水调节至含1mg/ml，加入2％～10％甘露醇和0.1％～0.5％活性炭，煮沸20分钟，滤过，，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。

实施例4将干蟾皮500g切块，用乙酸乙酯回流提取2～5次，合并提取液，回收乙酸乙酯，残渣加甲醇溶解，上氧化铝柱吸附，用乙酸乙酯洗脱，合并主要含有蟾毒内酯的洗脱液，回收溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经乙醚(或乙醚-乙酸乙酯混合溶剂)提取，回收有机溶剂即得具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物；

本实施例所制备的提取物中，总蟾毒内酯含量、脂蟾毒配基含量，华蟾酥毒基含量和蟾毒灵含量的测定结果见表4。

表4

组别	总蟾毒内酯	脂蟾毒配基	华蟾酥毒基	蟾毒灵
					含量	95.47％	15.64％	5.63％	12.73％

总蟾毒内酯加入增溶剂丙二醇或吐温80，再用注射用水调节至含1mg/ml，加入2％～10％果糖和0.1％～0.5％活性炭，煮沸20分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。

实施例5将干蟾皮500g切块，用氯仿回流提取2～5次，合并提取液，回收氯仿至干，浓缩液离心，取上清液，用氯仿(或乙醇-氯仿混合溶剂)萃取，回收有机溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经溶解后上硅胶柱吸附，用丙酮洗脱，回收有机溶剂即得具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物；

本实施例所制备的提取物中，总蟾毒内酯含量、脂蟾毒配基含量，华蟾酥毒基含量和蟾毒灵含量的测定结果见表5。

表5

组别	总蟾毒内酯	脂蟾毒配基	华蟾酥毒基	蟾毒灵
					含量	88.32％	14.46％	5.19％	11.78％

总蟾毒内酯加入增溶剂丙二醇或吐温80，再用注射用水调节至含生药0.5g/ml，加入2％～10％葡萄糖和0.1％～0.5％活性炭，煮沸20分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。

实施例6将干蟾皮500g切块，用50～95％乙醇回流提取2～5次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩液离心，取上清液，用乙酸乙酯或氯仿(或乙醇-乙酸乙酯混合溶剂)萃取，回收有机溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经溶解后上聚酰胺柱吸附，用10～95％乙醇洗脱，回收溶剂即得具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物；

本实施例所制备的提取物中，总蟾毒内酯含量、脂蟾毒配基含量，华蟾酥毒基含量和蟾毒灵含量的测定结果见表6。

表6

组别	总蟾毒内酯	脂蟾毒配基	华蟾酥毒基	蟾毒灵
					含量	80.87％	13.21％	4.77％	10.79％

总蟾毒内酯加入增溶剂丙二醇或吐温80，再用注射用水调节至含生药0.5g/ml，加入2％～10％氯化钠和0.1％～0.5％活性炭，煮沸20分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。

实施例7将干蟾皮500g切块，用50～95％乙醇回流提取2～5次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩液离心，取上清液，用乙酸乙酯或氯仿(或乙醇-乙酸乙酯混合溶剂)萃取，回收有机溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经溶解后上氧化铝柱吸附，用10～95％乙醇洗脱，回收溶剂即得具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物；

本实施例所制备的提取物中，总蟾毒内酯含量、脂蟾毒配基含量，华蟾酥毒基含量和蟾毒灵含量的测定结果见表7。

表7

组别	总蟾毒内酯	脂蟾毒配基	华蟾酥毒基	蟾毒灵
					含量	98.92％	16.87％	6.31％	13.92％

总蟾毒内酯加入增溶剂丙二醇或吐温80，再用注射用水调节至含1mg/ml，加入2％～10％聚乙烯吡咯烷酮和0.1％～0.5％活性炭，煮沸20分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。

实施例8将干蟾皮500g切块，用50～95％乙醇回流提取2～5次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩液离心，取上清液，用乙酸乙酯或氯仿(或乙醇-乙酸乙酯混合溶剂)萃取，回收有机溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经溶解后上大孔树脂柱吸附，用乙醇洗脱，回收溶剂即得具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物；

本实施例所制备的提取物中，总蟾毒内酯含量、脂蟾毒配基含量，华蟾酥毒基含量和蟾毒灵含量的测定结果见表8。

表8

组别	总蟾毒内酯	脂蟾毒配基	华蟾酥毒基	蟾毒灵
					含量	82.53％	13.50％	4.87％	11.04％

总蟾毒内酯加入增溶剂丙二醇或吐温80，再用注射用水调节至含1mg/ml，加入2％～10％低分子右旋糖酐和0.1％～0.5％活性炭，煮沸20分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。

本发明总蟾毒内酯提取物除了制成冻干粉针外还可以制成注射液、口服液、注射用脂质体、片剂、分散片、胶囊、软胶囊、滴丸、丸剂、颗粒剂等，其制备方法如下：

1.制成注射液：

取总蟾毒内酯适量，加入适量增溶剂，研磨，再加少量注射用水稀释，混匀，然后加入氯化钠适量，溶解后再加注射用水至规定量，滤过，灌封，灭菌，即得。

2.制成注射用脂质体：

取卵磷脂、胆固醇及总蟾毒内酯适量，溶于氯仿中，40℃下减压除去氯仿，加入注射用水至规定量，于超声水浴中处理15分钟，高压均化，滤过，灭菌，灌装，冻干，即得。

3.制成口服液：

取总蟾毒内酯适量，加入适量增溶剂，研磨，再加少量水稀释，混匀，然后加入矫味剂及防腐剂，混匀，加水至规定量。混匀，分装，灭菌，即得。

4.制成片剂：

取总蟾毒内酯适量，加入辅料适量，混匀，制成颗粒，干燥，压制成片，即得。

5.制成分散片：

取总蟾毒内酯适量，加入交联羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、微粉硅胶、蛋白糖适量，混匀，制粒，干燥，压制成片，即得。

6.制成胶囊：

取总蟾毒内酯适量，加入辅料适量，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得。

7.制成软胶囊：

取总蟾毒内酯适量，粉碎成细粉，备用；取复合稳定剂适量，于60℃水浴加热熔化，加入大豆色拉油内，搅拌混溶；将上述提取物细粉加入油液中，搅拌混匀，调节胶体磨细度在5～15μm之间，加入药液循环碾磨0.5小时，充分混匀，滤过(过100目篩)，制得软胶囊内容物；取明胶、甘油、蒸馏水、色素适量，经化胶后制成胶皮，灌封压丸，干燥12小时，酒精洗丸、干燥、即得。

8.制成滴丸：

取总蟾毒内酯适量，粉碎成细粉，备用；另取混合聚乙二醇(PEG6000∶PEG1500＝1∶1)适量，加热至90～100℃，待全部熔融后，加入总蟾毒内酯细粉，充分混匀并保温在70～80℃，由上往下，滴入液体石蜡中，将成型的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，40℃以下干燥，即得。

9.制成颗粒剂：

取总蟾毒内酯适量，加入适量辅料及矫味剂，混匀，制成颗粒，干燥，即得。

10.制成丸剂：

取总蟾毒内酯适量，加入淀粉、饴糖适量，置糖衣锅内混匀，制丸，加入少量滑石粉滚动均匀后，微波干燥，用虫白蜡适量打光，即得。

试验例1本发明干蟾皮总蟾毒内酯提取物对小鼠H22的抗肿瘤作用

取体重17～23克的昆明种小白鼠，随机分组，每组10只。分别在其右前肢腋下部皮下接种H22瘤细胞2×10⁷个，24小时后尾静脉注射给药(本发明实施例所制备的注射剂)，每天给药一次，连续注射10次后停药，处死动物，取瘤称重，计算抑瘤率。

表9本发明干蟾皮总蟾毒内酯提取物对小鼠H22肝癌的抑制作用

试验结果表明，本发明干蟾皮总蟾毒内酯提取物对小鼠H22肝癌具有显著的抑制作用。

试验例2本发明干蟾皮总蟾毒内酯提取物对小鼠S180的抗肿瘤作用

取体重18～22克的昆明种小白鼠，随机分组，每组10只。分别在其右前肢腋下部皮下接种S180瘤细胞2×10⁷个，24小时后尾静脉注射给药(本发明实施例所制备的注射剂)，每天给药一次，连续注射10次后停药，处死动物，取瘤称重，计算抑瘤率。

表10本发明干蟾皮总蟾毒内酯提取物对小鼠S180实体瘤的抑制作用

试验结果表明，本发明干蟾皮总蟾毒内酯提取物对小鼠S180实体瘤具有显著的抑制作用。

Claims

1.具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物，其特征在于：该提取物中总蟾毒内酯含量＝98.92％，其中脂蟾毒配基含量为16.87％，华蟾酥毒基含量为6.31％，蟾毒灵含量13.92％；其制备方法包括：将干蟾皮500g切块，用50～95％乙醇回流提取2～5次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩液离心，取上清液，用乙酸乙酯、氯仿或乙醇-乙酸乙酯混合溶剂萃取，回收有机溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经溶解后上氧化铝柱吸附，用10～95％乙醇洗脱，回收溶剂，即得。

2.具有抗肿瘤作用的总蟾毒内酯提取物，其特征在于：该提取物中总蟾毒内酯含量＝95.47％，其中脂蟾毒配基含量为15.64％，华蟾酥毒基含量为5.63％，蟾毒灵含量12.73％；其制备方法包括：将干蟾皮500g切块，用乙酸乙酯回流提取2～5次，合并提取液，回收乙酸乙酯，残渣加甲醇溶解，上氧化铝柱吸附，用乙酸乙酯洗脱，合并主要含有蟾毒内酯的洗脱液，回收溶剂即得总蟾毒内酯粗品，再经乙醚或乙醚-乙酸乙酯混合溶剂提取，回收有机溶剂，即得。

3.一种制剂，其特征在于，将权利要求1或2的总蟾毒内酯提取物，以常规的中药制剂方法制备成粉针、输液、片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂或滴丸。

4.权利要求1或2总蟾毒内酯提取物在制备治疗肿瘤药物中的用途。

5.按照权利要求4的用途，其特征在于：所述的肿瘤是肝癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌或白血病。