CN1686183A - 一种蟾酥冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蟾酥冻干粉针剂及其制备方法。它是由蟾酥经提取得到的蟾酥提取物的HP-β-CD包合物和药用辅料制备而成。其中蟾酥提取物中吲哚类总生物碱含量为25-40mg/g,华蟾酥毒基含量为85-120mg/g,脂蟾毒配基含量为40-60mg/g。药理实验结果说明,本发明蟾酥冻干粉针剂具有更好的药理作用。
Description
所属技术领域
本发明属中药制药技术领域,具体涉及一种蟾酥冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术
蟾酥Venenuum Bufonis为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bu fo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物,蟾酥源于《本草衍义》,为名贵中药,其性味甘辛、温,有毒,具有解毒、止痛、开窍、醒神等作用。用于痈疽疔疮,咽喉肿痛、中暑神昏,腹痛吐泻,其在临床上被广泛应用于治疗多种癌症、结核病、心脏病、恶性血液病、顽固性呃逆、周期性面神经麻痹、急性咽炎和慢性乙肝等感染病,还可以用于局部麻醉、表面麻醉及慢性牙髓炎的无痛切髓术等。因其药理活性较强,作用广泛,早已引起国内外的广泛关注。
以蟾酥为原料制成的蟾酥注射液收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂分册第17册,具有清热、解毒功效。用于急性、慢性化脓性感染;并作为抗肿瘤、抗放射辅助用药。蟾酥注射液有改善全身状况,恢复细胞免疫功能,提升白血球等作用,对白血病、肝癌、食管癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、肠癌有显著疗效;还可用于肺结核、骨结核、附睾结核、淋巴结结核病和淋巴结核、抢救呼吸及循环衰竭等。
蟾酥注射液是蟾酥经加工制成的灭菌水溶液,由于蟾酥的毒性和刺激性较大,因此蟾酥注射液使用时经常会出现一些毒副反应;该注射液制备方法未能有效提取蟾毒内酯类成分,质量标准中只测定了以5-羟色胺计的吲哚类总生物碱的量,而没有对既是毒性又是活性成分的蟾毒内酯类成分进行测定和控制,难以保证注射液的质量和疗效;注射液对稳定性要求高,而水针剂存在的固有缺陷稳定性问题和携带、储藏、运输时容易破碎也带来许多麻烦。静脉滴注剂量过大时,输液部位可能会有疼痛。
在资料检索中未发现有关蟾酥冻干粉针剂的任何报道。
发明内容
本发明的目的是公开一种有效成分含量高、疗效好、毒性小、方便使用的蟾酥冻干粉针制剂。
本发明的另一个目的是提供上述冻干粉针制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现。
一、制备方法
(1)原料药:蟾酥。
(2)取蟾酥,粉碎过20-40目筛,加80%-95%乙醇回流提取3-5小时,回流液减压回收乙醇并浓缩,真空干燥,得蟾酥提取物。
(3)将蟾酥提取物采用饱和水溶液法用HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)进行包合:HP-β-CD以20ml/g-30ml/g的比例加水,加热溶解,冷至室温,按照蟾酥提取物∶HP-β-CD=1∶10-30的比例(v/g)加入蟾酥提取物,搅拌时间2-4小时,取出冷藏20小时,抽滤,滤渣常温下干燥36小时,得到蟾酥提取物包合物。
(4)制剂处方:蟾酥提取物包合物1-4.5重量份,药用辅料3-6重量份。
(5)取上述蟾酥提取物包合物和药用辅料混合,加注射用水溶解后,加注射用水至规定量,调节pH值至5.0-7.0,微孔滤膜过滤,灌装,冷冻干燥,即得。
在蟾酥冻干粉针剂的制备中,我们将蟾酥采用乙醇回流提取,该提取工艺既可以提取蟾酥水溶性的吲哚类总生物碱,又可以提取出蟾酥中的蟾毒内酯类成分,最大程度地保留了发挥作用的活性成分,采用本发明工艺制备的蟾酥提取物中吲哚类总生物碱含量大于25mg/g,华蟾酥毒基含量大于85mg/g,脂蟾毒配基含量大于40mg/g。
由于蟾酥为一类毒性较强的中药,刺激性较大,因此我们经反复试验研究,将蟾酥提取物进行了包合,利用HP-β-CD的环状中空特殊结构,将药物分子全部或部分包裹于其中形成一类非键合化合物,HP-β-CD为水溶性的包合物,用其包合的蟾酥提取物制成粉针剂溶解性好,注射时易吸收,生物利用度高,患者痛感小,易于被患者愉快的接受;蟾酥提取物经HP-β-CD包结后,其对血管和粘膜的刺激作用明显减轻;而且用HP-β-CD对蟾酥进行包合,增加了有效成分的稳定性,提高了疗效。
由于蟾毒内酯类既是重要的活性成分,又是毒性成分,我们对华蟾酥毒基和脂蟾毒配基进行定量检测,能更好保证制剂的有效性、安全性和稳定性,同时考虑到有效成分含量增加后其毒副作用增大,经多次实验研究,确定本发明蟾酥提取物的适宜含量范围为吲哚类总生物碱含量为25-40mg/g,华蟾酥毒基含量为85-120mg/g,脂蟾毒配基含量为40-60mg/g。在该范围内,既保证了本发明制剂的良好疗效,毒副作用和刺激性又比较小。
药理实验表明,本发明的蟾酥冻干粉针剂具有更好的药理作用和更小的刺激性。
二、制剂含量分析
1、制剂中的吲哚类总生物碱含量
1.1仪器与试药:Hitach UV-2000紫外分光光度计,蟾酥注射液(广东麒瑞药业有限公司);本发明蟾酥冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供);5-羟色胺对照品(中国药品生物制品检定所)。
1.2实验方法:参照蟾酥注射液(WS3-B-30)质量标准中的含量测定方法进行测定,结果见表1。
表1 制剂中吲哚类总生物碱(以5-羟色胺计)含量(μg/支)
蟾酥注射液 本发明蟾酥冻干粉针剂
组别
1 2 3 1 2 3
吲哚类总生物碱含量 62.0 66.0 60.5 76.0 78.2 77.0.
以上制剂含量测定结果说明,本发明的蟾酥冻干粉针剂由于采用新的制备方法,有效成分吲哚类总生物碱(以5-羟色胺计)含量比蟾酥注射液有显著提高。
2、制剂中蟾酥毒基和脂蟾毒配基类成分含量
2.1仪器与试药:Waters高效液相色谱仪(600泵,2487检测器),Millinium32色谱处理软件;蟾酥注射液(广东麒瑞药业有限公司);本发明蟾酥冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供);华蟾酥毒基对照品和脂蟾毒配基对照品(中国药品生物制品检定所)。
2.2实验方法:参照《中国药典》2000版一部316页蟾酥项下含量测定方法进行测定,结果见表2。
表2 制剂中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量(μg/支)
蟾酥注射液 本发明蟾酥冻干粉针剂
组别
1 2 3 1 2 3
华蟾酥毒基含量 197.2 175.5 201.0 276.3 265.0 280.5
脂蟾毒配基含量 96.1 84.4 98.2 125.1 121.8 132.7
以上含量测定结果表明,本发明蟾酥冻干粉针剂华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量与蟾酥注射液比较明显提高,说明本发明制备方法更加科学。
三、提取物的含量分析
提取物1(按照蟾酥注射液的工艺方法制备);提取物2(按本发明的工艺方法制备);以上提取物均由广东天之骄药物开发有限公司实验室制备。
参照制剂的含量测定方法分别测定提取物中各有效成分含量,结果见表3。
表3 提取物的含量测定结果(mg/g)
提取物1 提取物2
组别
1 2 3 1 2 3
吲哚类总生物碱含量 23.5 23.8 24.7 26.0 28.2 29.1
华蟾酥毒基含量 42.0 40.1 45.6 88.2 86.9 91.2
脂蟾毒配基含量 20.3 21.5 22.6 41.5 43.7 46.9
以上含量测定结果表明,采用本发明制备工艺得到的提取物有效成分含量明显提高,特别是华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量提高显著,研究证明华蟾酥毒基和脂蟾毒配基具有较好的药效,后述药理实验也证明由本发明提取物制成的冻干粉针剂药理作用更强,说明本发明的提取方法更加科学合理。
三、包合工艺HP-β-CD最佳用量的确定
为了进一步筛选本发明HP-β-CD包合的最佳用量,根据本发明工艺制备方法用饱和水溶液法以下述试验设计对包合工艺最佳用量进行了进一步确定,并测定包合率,结果见表4。
表4 不同HP-β-CD用量包合效果比较
蟾酥提取物∶HP-β-CD 包合率(%)
1∶3 60.3
1∶5 67.2
1∶8 72.4
1∶10 91.2
1∶12 92.4
1∶15 92.8
1∶18 91.5
1∶20 87.0
1∶25 86.4
1∶30 85.7
1∶35 71.9
由以上试验结果可知,HP-β-CD包合蟾酥提取物具有一定的选择性,客体的投入量对包合率有较大的影响,其中蟾酥提取物∶HP-β-CD比例为1∶10时比1∶8时包合率显著提高,继续增加比例至1∶30时,包合率都在85%以上,且比较稳定,而∶HP-β-CD比例增加至1∶35后包合率反而明显降低,因此选择确定本发明蟾酥提取物用HP-β-CD包合时的用量为1∶10至1∶30。
四、药理实施例
试药与动物:蟾酥注射液(广东麒瑞药业有限公司);本发明蟾酥冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供);实验动物:健康小鼠,体重18-22g,雌雄各半。瘤株:肉瘤S180,腹水型肝癌HepA,由广东药物所引进,广州肿瘤研究所传代接种。
1对小鼠移植性肿瘤S180的生长抑制作用
取健康、肿瘤生长旺盛的肉瘤S180荷瘤小鼠,处死后取出瘤块,在匀浆器中加入生理盐水,制成肿瘤匀浆液,再以生理盐水1∶3稀释,然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下,24小时称重,取实验药物,每组10只,每日小鼠尾静脉给药一次,给药剂量为0.2ml(相当于0.2g蟾酥/kg),对照组给予0.2ml生理盐水,连续给药10天。停药次日处死小鼠,称体重并小心剥离皮下瘤块,于EM50电子天平称取瘤重。结果见表5。
表5 对小鼠肉瘤S180的生长抑制作用
组别 瘤体重量(g) 抑瘤率%
生理盐水组 2.0191
蟾酥注射液组 1.0469 48.15*
本发明蟾酥冻干粉针剂组 0.9153 54.67*Δ
注:与生理盐水组比较*P<0.01,与蟾酥注射液组比较ΔP<0.05
以上药理实验结果表明本发明蟾酥冻干粉针剂与蟾酥注射液相比具有更好的抗移植性肿瘤S180作用。
2.对小鼠腹水型肝癌HepA的影响
无菌抽取HepA腹水,以生理盐水1∶2倍稀释,每鼠腹腔接种0.2ml,24h后分组称体重并给药,分组和给药剂量同前,连续10d,以后观察小鼠的死亡时间(以天计算),结果用平均存活天数和生命延长率表示。试验结果见表6。
表6 对移植性肝癌HepA的抑瘤作用(X±SD)
组别 平均存活天数 生命延长率(%)
生理盐水组 13.0±1.50
蟾酥注射液组 16.5±2.20 26.92*
本发明蟾酥冻干粉针剂组 19.5±2.50 50.00**
注:与生理盐水组比较*p<0.05,**p<0.01
结论:由上述实验结果表明本发明蟾酥冻干粉针剂具有比蟾酥注射液更显著的抗腹水型肝癌HepA作用。
3.对小鼠耳二甲苯致炎的影响
取小鼠30只,雌雄各半,分生理盐水组、蟾酥注射液组、本发明蟾酥冻干粉针剂组,每日尾静脉给药一次,给药剂量为0.2ml(相当于蟾酥0.2g蟾酥/kg),生理盐水组给予等容量生理盐水,于末次给药后30min,将二甲苯0.02ml涂于小鼠左耳,1h后脱臼处死小鼠,剪下二耳,打孔称重,以左耳与右耳片重量差值为肿胀度,结果见表7。
表7 对小鼠耳二甲苯致炎的影响结果(X±SD)
组别 肿胀度差值(mg) 抑制率(%)
生理盐水组 8.0±1.5
蟾酥注射液组 4.5±1.3 43.8±5.0**
本发明蟾酥冻干粉针剂 3.2±1.0 60.0±5.8**Δ
注:与生理盐水组比较:**P<0.01,与蟾酥注射液组比较ΔP<0.05
结果表明本发明的蟾酥冻干粉针剂抗炎作用明显好于蟾酥注射液。
4.镇痛试验
4.1对小鼠热板致痛作用的影响
取雌性小鼠30只,随机分为3组,即空白对照组、蟾酥注射液组、本发明蟾酥冻干粉针剂组,给药组每日尾静脉给药一次,给药剂量为0.2ml(相当于蟾酥0.2g蟾酥/kg),生理盐水组给予等容量生理盐水,连续给药3天,末次给药后1h将各鼠分别固定于55±0.5℃的热板仪中,以舔后足作为“疼痛”的反应指标,观察给药后小鼠对热板痛的反应时间,结果见表8。
4.2对醋酸引起的扭体反应的影响
取小鼠30只,雌雄各半,分组及给药方法同4.1,连续给药3天,末次给药后1h,腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/20g体重,观察10min内的小鼠扭体次数,结果见表7。
表8 镇痛试验结果(X±SD)
组别 热板痛反应时间(s) 扭体次数
生理盐水组 11.0±4.1 28.0±3.5
蟾酥注射液 15.0±3.8* 21.8±2.7*
本发明蟾酥冻干粉针剂 18.6±4.4** 16.3±2.4**
注:与生理盐水组比较:*P<0.05**P<0.01
试验结果表明本发明蟾酥冻干粉针剂的镇痛作用比蟾酥注射液更为显著。
四、刺激性试验:
血管刺激性试验:取家兔8只,随机均分2组,每组4只,分别于左耳把家兔置于固定器中,且头用兔头固定仪固定,耳缘静脉滴注蟾酥注射液和本发明蟾酥冻干粉针剂,滴注速度为20滴/min,每天上午滴注1次(相当于60kg人1次静滴量的3倍),连续1周。观察耳缘静脉反应,每日观察注射部位血管有无发红、水肿、周围有无渗血,触摸血管有无变硬现象,左右耳比较观察。于末次给药后24h,将动物处死,取下左耳,进行组织切片检查,切片部位为进针部位的向心端,距进针部位1-4cm,分1-2.5cm和2.5-4cm两段取样。
观察指标及评分标准:观察方法包括肉眼观察和显微镜下病理观察。观察给药血管及其周围组织的变化,显微镜下观察耳缘静脉有无血栓形成、内皮损伤及血管周围组织的病理变化情况。对各项指标评分。①血管变化。肉眼观察无明显充血记0分,轻度充血发红、纹路清晰记1分,充血发红、纹路不清记2分,重度充血、呈紫红色记3分;显微镜观察血管内皮及血管壁完整记0分,有内皮损伤记1分,有血栓栓塞记2分,血管破裂记3分。②血管周围组织变化。肉眼观察无明显水肿记0分,轻微水肿记1分,明显水肿记2分,严重水肿记3分;显微镜观察周围组织正常记0分,水肿记1分,出血记2分,有炎症细胞浸润记3分。将每组4只家兔各项观察指标得分累加,计算各组平均得分值,见表9。
表9 刺激性试验结果
组别 刺激性评分
蟾酥注射液组 1.5
本发明蟾酥冻干粉针剂组 0.5
由以上实验结果可知:本发明蟾酥冻干粉针剂与蟾酥注射液比较刺激性具有明显改善。
五、制备实施例
实施例1:
(1)原料药:蟾酥2g。
(2)取蟾酥,粉碎过20目筛,加80%乙醇回流提取3小时,回流液减压回收乙醇并浓缩,真空干燥,得蟾酥提取物。
(3)将蟾酥提取物采用饱和水溶液法用HP-β-CD进行包合:HP-β-CD以20ml/g-30ml/g的比例加水,加热溶解,冷至室温,按照蟾酥提取物∶HP-β-CD=1∶10的比例(v/g)加入蟾酥提取物,搅拌时间2小时,取出冷藏20小时,抽滤,滤渣常温下干燥36小时,得到蟾酥提取物包合物10g。
(4)制剂处方:蟾酥提取物包合物10g,甘露醇30g。
(5)取上述蟾酥提取物包合物和药用辅料混合,加注射用水溶解后,加注射用水至规定量,调节pH值至5.0-7.0,微孔滤膜过滤,灌装,冷冻干燥,即得本发明冻干粉500瓶。
实施例2:
(1)原料药:蟾酥2g。
(2)取蟾酥,粉碎过30目筛,加85%乙醇回流提取4小时,回流液减压回收乙醇并浓缩,真空干燥,得蟾酥提取物。
(3)将蟾酥提取物采用饱和水溶液法用HP-β-CD进行包合:HP-β-CD以20ml/g-30ml/g的比例加水,加热溶解,冷至室温,按照蟾酥提取物∶HP-β-CD=1∶20的比例(v/g)加入蟾酥提取物,搅拌时间2-4小时,取出冷藏20小时,抽滤,滤渣常温下干燥36小时,得到蟾酥提取物包合物31g。
(4)制剂处方:蟾酥提取物包合物31g,葡萄糖49g。
(5)取上述蟾酥提取物包合物和甘露醇混合,加注射用水溶解后,加注射用水至规定量,调节pH值至5.0-7.0,微孔滤膜过滤,灌装,冷冻干燥,即得本发明冻干粉500瓶。。
实施例3:
(1)原料药:蟾酥2g。
(2)取蟾酥,粉碎过40目筛,加90%乙醇回流提取4小时,回流液减压回收乙醇并浓缩,真空干燥,得蟾酥提取物。
(3)将蟾酥提取物采用饱和水溶液法用HP-β-CD进行包合:HP-β-CD以20ml/g-30ml/g的比例加水,加热溶解,冷至室温,按照蟾酥提取物∶HP-β-CD=1∶30的比例(v/g)加入蟾酥提取物,搅拌时间4小时,取出冷藏20小时,抽滤,滤渣常温下干燥36小时,得到蟾酥提取物包合物45g。
(4)制剂处方:蟾酥提取物包合物45g,右旋糖酐55g。
(5)取上述蟾酥提取物包合物和右旋糖酐混合,加注射用水溶解后,加注射用水至规定量,调节pH值至5.0-7.0,微孔滤膜过滤,灌装,冷冻干燥,即得本发明冻干粉500瓶。
实施例4:
(1)原料药:蟾酥1.8g。
(2)取蟾酥,粉碎过30目筛,加95%乙醇回流提取3小时,回流液减压回收乙醇并浓缩,真空干燥,得蟾酥提取物。
(3)将蟾酥提取物采用饱和水溶液法用HP-β-CD进行包合:HP-β-CD以20ml/g-30ml/g的比例加水,加热溶解,冷至室温,按照蟾酥提取物∶HP-β-CD=1∶15的比例(v/g)加入蟾酥提取物,搅拌时间3小时,取出冷藏20小时,抽滤,滤渣常温下干燥36小时,得到蟾酥提取物包合物21g。
(4)制剂处方:蟾酥提取物包合物21g,乳糖39g。
(5)取上述蟾酥提取物包合物和乳糖混合,加注射用水溶解后,加注射用水至规定量,调节pH值至5.0-7.0,微孔滤膜过滤,灌装,冷冻干燥,即得本发明冻干粉500瓶。
实施例5:
(1)原料药:蟾酥2.2g。
(2)取蟾酥,粉碎过40目筛,加95%乙醇回流提取4小时,回流液减压回收乙醇并浓缩,真空干燥,得蟾酥提取物。
(3)将蟾酥提取物采用饱和水溶液法用HP-β-CD进行包合:HP-β-CD以20ml/g-30ml/g的比例加水,加热溶解,冷至室温,按照蟾酥提取物∶HP-β-CD=1∶25的比例(v/g)加入蟾酥提取物,搅拌时间2小时,取出冷藏20小时,抽滤,滤渣常温下干燥36小时,得到蟾酥提取物包合物40g。
(4)制剂处方:蟾酥提取物包合物40g,甘露醇40g,葡萄糖20g。
(5)取上述蟾酥提取物包合物和甘露醇、葡萄糖混合,加注射用水溶解后,加注射用水至规定量,调节pH值至5.0-7.0,微孔滤膜过滤,灌装,冷冻干燥,即得本发明冻干粉500瓶。
实施例6:
(1)原料药:蟾酥2g。
(2)取蟾酥,粉碎过40目筛,加95%乙醇回流提取5小时,回流液减压回收乙醇并浓缩,真空干燥,得蟾酥提取物。
(3)将蟾酥提取物采用饱和水溶液法用HP-β-CD进行包合:HP-β-CD以20ml/g-30ml/g的比例加水,加热溶解,冷至室温,按照蟾酥提取物∶HP-β-CD=1∶20的比例(v/g)加入蟾酥提取物,搅拌时间4小时,取出冷藏20小时,抽滤,滤渣常温下干燥36小时,得到蟾酥提取物包合物32g。
(4)制剂处方:蟾酥提取物包合物32g,甘露醇38g,葡聚糖20g。
(5)取上述蟾酥提取物包合物和甘露醇、葡聚糖混合,加注射用水溶解后,加注射用水至规定量,调节pH值至5.0-7.0,微孔滤膜过滤,灌装,冷冻干燥,即得本发明冻干粉500瓶。
Claims (2)
1.一种蟾酥冻干粉针剂,其特征在于它是由蟾酥提取物包合物1-4.5重量份和药用辅料3-6重量份混合制备而成;其特征还在于蟾酥提取物中吲哚类总生物碱含量为25-40mg/g,华蟾酥毒基含量为85-120mg/g,脂蟾毒配基含量为40-60mg/g。
2.根据权利要求1所述的一种蟾酥冻干粉针剂,其制备方法包括以下步骤:
(1)原料药:蟾酥。
(2)取蟾酥,粉碎过20-40目筛,加80%-95%乙醇回流提取3-5小时,回流液减压回收乙醇并浓缩,真空干燥,得蟾酥提取物。
(3)将蟾酥提取物采用饱和水溶液法用HP-β-CD进行包合:HP-β-CD以20ml/g-30ml/g的比例加水,加热溶解,冷至室温,按照蟾酥提取物∶HP-β-CD=1∶10-30的比例(v/g)加入蟾酥提取物,搅拌时间2-4小时,取出冷藏20小时,抽滤,滤渣常温下干燥36小时,得到蟾酥提取物包合物。
(4)按处方取上述蟾酥提取物包合物和药用辅料混合,加注射用水溶解后,加注射用水至规定量,调节pH值至5.0-7.0,微控滤膜过滤,灌装,冷冻干燥,即得。
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2005
- 2005-03-25 CN CNA2005100567751A patent/CN1686183A/zh active Pending
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