CN1895220A - 20(R)－人参皂苷Rg3药用水溶性中间体及制备方法 - Google Patents

20(R)－人参皂苷Rg3药用水溶性中间体及制备方法 Download PDF

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Abstract

一种20(R)－人参皂苷Rg3药用水溶性中间体含20(R)－人参皂苷Rg30.5～2.0毫克/毫升；其制备方法主要是将20(R)－人参皂苷Rg3溶于混合有机溶剂中制成0.1～2％的人参皂苷溶液，将2－羟丙基－β－环糊精溶于水中制成20～65％的水溶液并加热，使其温度维持在40～100℃，在搅拌条件下匀速滴加人参皂苷溶液，其中20(R)－人参皂苷Rg3∶2－羟丙基－β－环糊精＝1∶220～400，滴加完人参皂苷溶液停止搅拌，减压回收溶剂近干，加入注射用水摇匀溶解。本发明的20(R)－人参皂苷Rg3水溶性中间体干燥后可得到完全溶解于水、不含残留有机溶剂的粉末，该中间体或粉末可制成注射剂，其绝对生物利用度为100％，且制剂的成本明显低于该成分的包合物。

Description

20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体及制备方法
技术领域  本发明涉及一种人参皂苷药用水溶性中间体及其制备方法。
背景技术  人参皂苷Rg3是存在于人参中的一种四环三萜类皂苷化合物，分子量为784.13，它又以20(R)-人参皂苷Rg3和20(s)-人参皂苷Rg3两种光学异构体形式存在，其中20(R)-人参皂苷Rg3化学性质稳定，不溶于水，而20(s)-人参皂苷Rg3化学性质不稳定，易溶于水，它们的结构式分别是：
20(R)-人参皂苷Rg3                                 20(S)-人参皂苷Rg3
分子结构式                                        分子结构式
人们发现，20(R)-人参皂苷Rg3具有较强的抑制肿瘤和抗转移作用，但它又是一种不溶于水的物质，因此其口服制剂的生物利用度很低，极大地限制了其临床药效的发挥，同时也限制了非肠道给药途径。
为使20(R)-人参皂苷Rg3溶于水，人们对此进行了研究，如在2003年1月29日发明专利公报上公开的一种<人参皂甙Rg3羟丙基-β-环糊精包合物及制剂和制备方法>(申请号01119929.6)其主要内容是：人参皂甙Rg3的羟丙基-β-环糊精包合物，它是由下述原料按下述重量比组成的，即人参皂甙∶羟丙基-β-环糊精＝1∶1～200；其制备方法是(1)将人参皂甙Rg3溶于有机溶剂中，(2)将羟丙基-β-环糊精溶于水中，(3)在强烈搅拌下将人参皂甙Rg3溶液缓慢滴加到含羟丙基-β-环糊精的水溶液中，全部加完后继续搅拌2～24小时，使用0.45μm微孔滤膜过滤，将滤液浓缩，除尽有机溶剂，加入注射水重新溶解，过0.22μm膜，滤液冷冻干燥，得疏松白色粉末，即为人参皂甙包合物。
它的不足之处是：(1)包合物在制备过程中，将其反应液回收至原体积的1/3时，经测定仍有较多有机溶剂残留，而冷冻干燥对除去残留溶剂无效，因而该包合物粉末用于制备注射剂难于符合注射剂残留溶剂的限定标准。(2)包合物在制备过程中，由于残留有机溶剂的存在，有助于人参皂甙Rg3与羟丙基-β-环糊精以1∶1～200的比例形成溶于水的包合物，如果将残留有机溶剂真正除尽，则在上述比例范围内不能形成稳定的易溶于水的包合物，人参皂甙Rg3很快会从其包合物水溶液中析出沉淀，使得该包合物不能用于制备注射剂。(3)人参皂甙Rg3不能全部形成包合物，利用率仅为86％，使注射剂的产率降低和生产成本明显增高。
发明内容  本发明的目的在于提供一种产品成本低又容易被人体吸收的20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体及其注射剂的制备方法及医药用途。
本发明的主原料(简称主料)为20(R)-人参皂苷Rg3，辅原料(简称辅料)为2-羟丙基-β-环糊精(英文缩写：2-HP-β-CD)；上述主药与辅料的重量比为1∶220～400。
20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体的制备方法：
1.将20(R)-人参皂苷Rg3溶于混合有机溶剂中，制成0.1～2％的人参皂苷溶液。所用的混合有机溶剂及它们的比例如下：(1)氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝10～25∶30～45∶18～30∶5～15，下层；(2)氯仿∶甲醇∶水＝70～60∶40～30∶10，下层；(3)乙醇∶水＝90～95∶10～5，(4)甲醇∶水＝85～90∶15～10，(5)乙腈∶水＝40～60∶60～40，(6)二氯甲烷∶甲醇∶水＝60～65∶40～35∶10，(7)乙腈∶甲醇＝70～80∶30～20。
2.将2-羟丙基-β-环糊精溶于水中，制成20～65％的水溶液。
3.将2-羟丙基-β-环糊精的水溶液加热，使其温度维持在40～100℃，匀速滴加人参皂苷Rg3溶液，并搅拌之，当人参皂苷Rg3溶液滴加完即停止搅拌。
4.减压回收上述溶液近干，其真空度0.01～0.08MPa，温度60～100℃。最好向浓缩膏中加入注射用水将其溶解，再进行减压回收操作，重复两次，以便除尽有机溶剂。
5.向浓缩物中加入注射用水至原体积，摇动使之溶解，得到的水溶液即为含量0.5～2毫克/毫升的20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体，并且20(R)-人参皂苷Rg3全部形成水溶性中间体，即所得水溶性中间体收率为100％。
用上述20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体作原料，可制备冻干粉针注射剂：(1)将上述水溶液用超滤器或加入其重量0.1％的针剂用活性炭混合均匀，于80℃保温30分钟后，用0.45μm滤膜过滤除热源，无菌条件下用0.22μm微孔滤膜过滤除菌分装，冷冻干燥得白色疏松粉末，即为20(R)-人参皂苷Rg3冻干粉针剂。(2)将上述水溶液进行真空、喷雾或冷冻干燥(见下表)，制得Rg3水溶性粉末，再加入注射用水复溶，然后再重复(1)的操作。
                     不同干燥设备、干燥方法及干燥条件一览表
  干燥设备   干燥方法   干燥条件
  SZG-4500型双锥回转真空干燥机(常州) 真空干燥 在30-60℃温度，0.01～0.08Mpa压力下，真空干燥48小时。
  ZLG300型浸膏喷雾干燥机(常州) 喷雾干燥   采用超音速射流技术，射流速度300-990米/秒，在30～60℃温度，0.01～0.05Mpa压力下，以超音速速度瞬时干燥。
  FD-1压盖型冷冻干燥机(北京)   冷冻干燥   先于-45℃预冻5小时，按程序升温冷冻干燥：-45～-15℃升华干燥20小时，-15～30℃真空干燥10小时。
用上述20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体制成的药物制剂具有抑制肿瘤生长和转移、提高人体免疫功能及与放疗和化疗合并用药增效减毒的作用。因此，该20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体冻干粉针剂可作为制备抗肿瘤、增加化疗药物的疗效和减轻其毒副反应并提高机体免疫功能药物的应用。
本发明相比现有技术具有如下优点：
1.本发明的20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体经干燥后可得到完全溶解于水、不含残留有机溶剂的粉末，由此可制成符合注射剂质量要求的冻干粉针注射剂，经注射可100％进入动物及人体的血液中，其绝对生物利用度为100％，比现有的由20(R)-人参皂苷Rg3制成的口服胶囊剂(参一胶囊)的生物利用度明显提高。
2.本发明的20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体制备的注射剂，所投入的20(R)-人参皂苷Rg3原料药可100％的制成水溶性中间体，使其制备注射剂的成本明显低于该成分的包合物注射剂成本。
3.由本发明水溶性中间体制成的注射剂静脉注射后药物的绝对生物利用度为100％，在大鼠及犬的肝脏、胃肠壁分布浓度较高，使其对消化道肿瘤及转移具有良好的治疗作用。
附图说明
图1是20(R)-人参皂苷Rg3标准品高效液相色谱谱图。
图2是20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体高效液相色谱含量测定谱图1mg/ml。
图3是20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体直接冻干品高效液相色谱含量测定谱图(5mg/支)。
图4是20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体真空干燥后再冻干品高效液相色谱含量测定谱图(5mg/支)。
图5是20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体真空干燥后再冻干品高效液相色谱含量测定谱图(5mg/支)。
图6是20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体喷雾干燥后再冻干品高效液相色谱含量测定谱图(5mg/支)。
图7是20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体喷雾干燥后再冻干品高效液相色谱含量测定谱图(5mg/支)。
具体实施方式
实施例1
将100克20(R)-人参皂苷Rg3用氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝20∶40∶25∶10，下层；的混合有机溶剂100升溶解。取22000克2-羟丙基-β-环糊精，加40升蒸馏水溶解，之后将该溶液加热至40℃，在搅拌条件下，以80毫升/分匀速滴加20(R)-人参皂苷Rg3溶液，滴加完该溶液即停止搅拌，于旋转蒸发器上减压回收近干。加50升蒸馏水将其溶解，再进行减压回收溶剂操作，重复两次。用100升注射用水溶解浓缩物，得到的水溶液即为20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体。产品测定：精密吸取20(R)-人参皂苷Rg3溶液及直接精密吸取20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体溶液各20微升，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算该水溶性中间体含人参皂苷Rg3为1毫克/毫升，100升水溶性中间体中共含人参皂苷Rg3为100克，收率为100％，其测定结果见图2。
实施例2
取实施例1制得的20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体50升，加入50克针剂用活性炭混合均匀，于80℃保温30分钟后用0.45μm滤膜滤过除热原，无菌条件下用0.22μm微孔滤膜滤过除菌，于无菌条件下分装至10ml管制无菌西林瓶中，装量每瓶约5ml，并将装好后的西林瓶加半塞，置冻干机盘上，开动冻干机，先于-45℃预冻5小时后，开动真空干燥，并按程序升温：-45～-15℃升华干燥20小时，-15～30℃真空干燥10小时。冷冻干燥后压塞，轧铝盖，取样检测，合格后包装，即制得10000支注射用冻干粉针剂。产品测定：精密称量冻干品1.10克，用蒸馏水溶解并定容于100毫升容量瓶中，精密吸取20(R)-人参皂苷Rg3溶液和20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体溶液各20微升，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算该水溶性中间体含人参皂苷Rg3为1毫克/毫升，其测定结果见图3。
实施例3
取实施例1制得的20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体5升，于30℃、0.01Mpa压力下真空干燥48小时，得水溶性粉末。再加入2.5升注射用水复溶，然后再重复实施例2除热源、除菌及冷冻干燥操作步骤，制得11000克冻干粉，无菌分装，可制得500支注射用冻干粉针剂，产品测定：精密称量冻干品2.20克，用蒸馏水溶解并定容于100毫升容量瓶(A)中，从(A)中精密吸取5毫升稀释并定容于10毫升容量瓶(B)，精密吸取20(R)-人参皂苷Rg3溶液和(B)中20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体溶液各20微升，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算该水溶性中间体中含人参皂苷Rg3为2毫克/毫升，其测定结果见图4。
实施例4
取实施例1制得的20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体10升，于60℃、0.08Mpa压力下真空干燥48小时，得水溶性粉末。再加10升注射用水复溶，然后再重复实施例2除热源、除菌及冷冻干燥操作步骤，制得22000克冻干粉，无菌分装，可制得2000支注射用冻干粉针剂，产品测定：精密称量冻干品1.10克，用蒸馏水溶解并定容于100毫升容量瓶中，精密吸取20(R)-人参皂苷Rg3溶液和20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体溶液各20微升，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算该水溶性中间体含人参皂苷Rg3为1毫克/毫升，其测定结果见图5。
实施例5
取实施例1制得的20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体10升，用浸膏喷雾干燥机、采用超音速射流技术进行喷雾干燥，射流速度300米/秒，在30℃温度、0.01Mpa压力下，以超音速速度瞬时干燥，得水溶性粉末。再加入20升注射用水复溶，然后再重复实施例2除热源、除菌及冷冻干燥操作步骤，制得22000克冻干粉，无菌分装，可制得4000支注射用冻干粉针剂，产品测定：精密称量冻干品1.10克，用蒸馏水溶解并定容于100毫升容量瓶中，从(A)中精密吸取5毫升稀释并定容于10毫升容量瓶(B)，精密吸取20(R)-人参皂苷Rg3溶液和(B)中20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体溶液各10微升，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算该水溶性中间体中含人参皂苷Rg3为0.5毫克/毫升，其测定结果见图6。
实施例6
取实施例1制得的20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体20升，用浸膏喷雾干燥机、采用超音速射流技术进行喷雾干燥，射流速度990米/秒，在60℃温度、0.05Mpa压力下，以超音速速度瞬时干燥，得水溶性粉末。再加入20升注射用水复溶，然后再重复实施例2除热源、除菌及冷冻干燥操作步骤，制得44000克冻干粉，无菌分装，可制得4000支注射用冻干粉针剂，产品测定：精密称量冻干品1.10克，用蒸馏水溶解并定容于100毫升容量瓶中，精密吸取20(R)-人参皂苷Rg3溶液和20(R)-人参皂苷Rg3水溶性中间体溶液各20微升，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算该水溶性中间体含人参皂苷Rg3为1毫克/毫升，其测定结果见图7。
实施例7～20
实施例 原料(g) 溶解原料的混合有机溶剂(ml) 辅料(g)   溶解辅料的蒸馏水(ml)   助溶反应温度(℃)   Rg3液滴速(ml/min)   水溶性中间体(ml)   Rg3含量(毫克/毫升)
  7   1   氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(10∶30∶18∶5，下层)1000ml  220g   338   95   3   2000   0.5
  8   10   氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(25∶45∶30∶15，下层)500ml  2250g   11250   100   1.5   10000   1
  9   5   氯仿-甲醇-水(70∶30∶10，下层)500ml  1150g   4600   95   1.5   2500   2
  10   50   氯仿-甲醇-水(60∶40∶10，下层)2500ml  11000g   55000   40   5.0   25000   2
  11   1   乙醇-水(95∶5)100ml  225g   375   90   0.5   1100   0.9
  12   1   乙醇-水(90∶10)200ml  230g   418   85   1.0   1500   0.67
  13   1   甲醇-水(90∶10)150ml  235g   392   75   0.5   1800   0.56
14 1 甲醇-水(85∶15)130ml 240g 560 50 0.5 1200 0.83
  15   0.5   乙腈-水(40∶60)180ml  110g   169   100   1.0   1000   0.5
  16   1   乙腈-水(60∶40)190ml  245g   465   55   0.5   1600   0.62
  17   5   二氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10，下层)625ml  1250g   6250   60   3.0   3000   .67
  18   5   二氯甲烷-甲醇-水(60∶40∶10，下层)555ml  1300g   3250   55   3.0   5000   1
  19   2   乙腈-甲醇(70∶30)200ml  800g   2000   50   1.0   4000   0.5
  20   2   乙腈-甲醇(80∶20)100ml  700g   1155   45   0.5   1000   2
实施例21-20(R)人参皂苷Rg3冻干粉针剂抗肿瘤药效学试验
1受试药物
1.1名称  人参皂苷Rg3冻干粉针剂及相应的辅料。
1.2提供单位  大连富生天然药物开发有限公司。
1.3批号  人参皂苷Rg3冻干粉针剂20030519，相应辅料。
1.4含量  人参皂苷Rg3冻干粉针剂：5mg/支。
1.5配制方法  精密量取一定量的人参皂苷Rg3冻干粉针剂或相应辅料加入生理盐水至所需浓度即可，给药体积0.5ml/鼠。
2实验材料
2.1溶剂  生理盐水。
2.2阳性对照品  注射用环磷酰胺(CTX)，上海华联制药集团生产；每天一次，连续七天；5Fu注射液，上海旭东海普药业有限公司生产；注射用丝裂霉素(MMC)，日本协和发酵工业株式会社生产。
2.3瘤源  人体乳腺癌Bcap-37模型、人体肺癌A549模型、人体肠癌LOVO模型、人体胃癌MGC模型及人体肝癌QGY均第二代以上的肿瘤用作瘤源；小鼠B16黑色素瘤细胞、小鼠Lewis肺癌模型、小鼠肉瘤S180模型等均由上海医药工业研究院药理室传代维持。
3实验动物
3.1来源  裸小鼠由上海市中科院实验动物中心提供，合格证号：SCXK2003-0003。C57BL/6及昆明种小鼠由本院实验动物组提供，实验动物使用许可证号：SYXK(沪)2004-0015。
3.2体重  裸小鼠为6周龄，昆明种小鼠及C57BL/6小鼠为18～22克。
3.3性别  雌雄皆可，每批实验使用同一种性别。
3.4动物数试验组及阳性对照组裸小鼠每组6只小鼠，其他小鼠每组8-10只，阴性对照各为两组。
4试验设计
4.1剂量设置  人参皂苷Rg3冻干粉针剂给药剂量设为：1.5mg/kg/d、0.75mg/kg/d，0.375mg/kg/d。
4.2给药方案  静脉给药，每天2次，人体肿瘤模型及细胞接种的小鼠模型iv×14bid，小鼠肿瘤接种的模型iv×10bid的方案治疗。
4.3试验对照  阴性对照：给以与试验组相应辅料，给药方案同试验组；阳性对照：环磷酰胺CTX30mg/kg、MMC2mg/kg及5Fu30mg/kg腹腔或静脉给药每天一次，连续七天。
5试验方法及结果
5.1试验方法
5.1.1抗肿瘤试验
5.1.1.1胃原位接种模型
无菌条件下取生长旺盛的体内传2代的MGC胃癌，以匀浆法制备成约2×107/ml细胞悬液，经手术于裸小鼠的胃大弯肌层内注射细胞悬液0.05ml，次日按实验设计方案给药，按下列公式计算荷瘤宿主生命延长率：
生命延长率％＝给药组平均生存天/对照组平均生存天×100％
5.1.1.2肝原位接种模型
无菌条件下取生长旺盛的体内传第二代QGY瘤源，以匀浆法1∶6制备成约1-2×107/ml细胞悬液，匀浆经100目不锈钢筛网过滤，备用。裸小鼠常规消毒，麻醉于腹腔正中剑突下切开皮肤和腹腔，暴露肝脏，经肝实质部以进口的28ga 1/2ml注射器注射0.05ml细胞悬液，关闭腹腔，逐层缝合腹腔及皮肤。裸小鼠置于层流架中饲养，所用的饲料、垫料、笼具及接触的器械等均应高压消毒后使用。次日按实验设计方案给药，观察各组动物45天内的生存时间，与阴性对照组进行比较，统计生命延长率。
5.1.2增效试验
人参皂苷Rg3冻干粉针剂与化疗药的剂量详见试验结果表。肿瘤接种方法如下。
5.1.2.1腋皮下接种模型
无菌条件下取生长旺盛的瘤源，以匀浆法制备成约1～2×107/ml细胞悬液；于相应宿主腋皮下接种0.2ml/每鼠，次日按实验设计方案给药，三周左右处死各组动物，剖取肿瘤称重，按下列公式计算肿瘤抑制率：
肿瘤抑制率％＝[(对照组平均瘤重—给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重]×100％
5.1.2.2尾静脉接种模型
无菌条件下取对数生长期的B16小鼠黑色素瘤培养细胞，制备成约2.5×105/ml细胞悬液，于C57BL/6小鼠尾静脉接种0.2ml/鼠，次日按实验设计方案给药，三周后处死各组动物，剖取各组小鼠的肺脏，计测每鼠肺脏所转移的集落数，以各组肿瘤平均集落数，按下列公式计算肿瘤抑制率：
肿瘤抑制率％＝[(对照组平均集落数-给药组平均集落数)/对照组平均集落数]×100％
5.1.2减毒试验
观察对人参皂苷Rg3冻干粉针剂化疗药所致小鼠白细胞变化的影响。取C57BL/6小鼠80只，从每鼠眼静脉丛取血，按常规白细胞玻片计数法，计测各鼠白细胞数，选择7500±300个白细胞/mm3的小鼠，随机分组，每组10个小鼠。第0、2天除空白对照组以外，其余各组均给以化疗药CTX100mg/kgip×2。按上述方案给药，第0天开始测各组白细胞数，而后实验期间每隔三天，检测各组小鼠白细胞数，计算各时相各组小鼠的白细胞数均值及标准差，直至阳性对照组白细胞恢复正常数为止。
5.1.4免疫试验
5.1.4.1对荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠的NK细胞活性试验
取C57BL/6小鼠，趾皮下接种无菌制备的Lewis肺癌混悬液0.05ml/鼠(约1×106个肿瘤细胞)。次日随机分组，按实验设计给药，末次给药后次日在无菌条件下取小鼠脾脏，用100目筛网制成单个脾细胞悬液，低渗除去红细胞，将细胞悬液转入培养瓶中，37℃5％CO2条件培养1小时后去除贴壁细胞，计数活细胞并调整细胞浓度为3×106个细胞/ml作为效应细胞。靶细胞取L929体外培养细胞，常规培养24小时，以培养液调整细胞浓度为1.5×105个细胞/ml，使效靶细胞之比为20∶1。取96孔培养板分别加入效应细胞和靶细胞，另设效应细胞和靶细胞对照，于37℃5％CO2条件培养4小时后，加入MTT染色液，再培养2小时后加入消化液于次日测各孔OD值，按公式计算NK细胞毒活性。
NK细胞毒活性％＝{[靶细胞对照组OD均值-(实验组OD均值-效应细胞OD均值)]/靶细胞对照组OD均值}×100％
5.1.4.2对正常昆明种小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能试验
取雄性昆明种小鼠随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后各组小鼠腹腔注射0.5％水解蛋白1.5ml/只，24小时后腹腔注射每毫升1×106的鸡红细胞悬液0.2ml/只；隔40分钟后用生理盐水洗脱、收集小鼠腹腔液；离心，取细胞沉淀液制成涂片，用甲醇固定，吉姆萨染色封片，用油镜计数100个巨噬细胞中吞噬鸡红血球的巨噬细胞数及吞噬鸡红血球的总数，按下列公式计算吞噬百分比和吞噬指数。
吞噬百分比％＝(100个巨噬细胞中吞噬鸡红血球的巨噬细胞数/100个巨噬细胞)×100％
吞噬指数＝100个巨噬细胞中吞噬鸡红血球的总数/100个巨噬细胞
试验结果
1.人参皂苷Rg3冻干粉针剂抗消化道肿瘤疗效试验结果见表1-2；
2.人参皂苷Rg3冻干粉针剂增加化疗药物疗效试验结果见表3-4；
3.人参皂苷Rg3冻干粉针剂减轻化疗药物疗效毒副作用疗效试验结果见表5；
4.人参皂苷Rg3冻干粉针剂提高机体免疫功能疗效试验结果见表6-7。
表1人参皂苷Rg3冻干粉针剂对人体胃癌MGC(原位接种)疗效试验(n＝3)
样品   剂量mg/kg/d 给药方案   动物数(只)始/终  动物体重(g)开始   平均生存(d)X±SD   生命延长率T/C×％
  注射用Rg3注射用Rg3注射用Rg3注射用Rg3CTX阴性对照组   3.01.50.750.37530相应辅料   iv×14bidiv×14bidiv×14bidiv×14bidip×7qdiv×14bid   6/06/06/06/06/212/0  21.021.020.820.821.220.8   36.83±3.0***35.67±3.1***33.0±3.6***29.17±4.7***41.17±3.8***22.75±2.14   161.90156.79145.05128.22180.97
表2 人参皂苷Rg3冻干粉针剂对人体肝癌QGY(原位接种)疗效试验(n＝3)
样品   剂量mg/kg/d  给药方案   动物数(只)始/终  动物体重(g)开始   平均生存(d)X±SD   生命延长率T/C×％
  注射用Rg3注射用Rg3注射用Rg3注射用Rg3CTX阴性对照组   3.01.50.750.37530相应辅料  iv×14bidiv×14bidiv×14bidig×14qdip×7qdiv×14bid   6/06/06/06/06/012/0  21.821.721.721.820.821.8   31.83±2.5***30.67±2.9***29.30±3.1***30.17±2.5***36.67±3.4***23.33±2.31   136.43131.46125.59129.32157.18
表3 人参皂苷Rg3冻干粉针剂合并5Fu对小鼠肉瘤S180疗效试验(n＝3)
样品   剂量mg/kg/d 给药方案   动物数(只)始/终   动物体重(g)始/终   瘤重(g)X±SD   抑瘤率％
  注射用Rg3注射用Rg3注射用Rg3Rg3+5FuRg3+5FuRg3+5Fu5Fu5Fu阴性对照组   1.50.750.3751.5+150.75+150.375+151530相应辅料   iv×14bidiv×14bidiv×14bidiv×14bid+ip×7qdiv×14bid+ip×7qdiv×14bid+ip×7qdip×7qdip×7qdiv×14bid   10/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1020/20   20.1/26.720.3/27.220.2/27.619.8/26.120.0/26.420.3/25.920.0/26.320.4/25.519.9/27.3   1.36±0.19***1.71±0.13***1.92±0.13***1.16±0.11***1.25±0.09***1.57±0.11***1.92±0.17***1.30±0.10***2.91±0.27   53.2641.2434.0260.1457.0446.0534.02755.33
表4  人参皂苷Rg3冻干粉针剂合并CTX对小鼠黑色素B16疗效试验(n＝3)
样品   剂量mg/kg/d 给药方案   动物数(只)始/终   动物体重(g)始/终   肺克隆数(只)X±SD   抗转移率％
  注射用Rg3注射用Rg3注射用Rg3注射用Rg3Rg3+CTXRg3+CTXRg3+CTXRg3+CTXCTXCTX阴性对照组   3.01.50.750.3753.0+151.5+150.75+150.375+151530相应辅料   iv×14bidiv×14bidiv×14bidiv×14bidiv×14bid+ip×7qdiv×14bid+ip×7qdiv×14bid+ip×7qdiv×14bid+ip×7qdip×7qdip×7qdiv×14bid   10/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1020/20   20.0/25.120.1/25.119.8/24.920.2/25.619.7/23.919.9/24.219.7/24.019.7/24.420.1/24.519.8/22.920.0/25.3   19.5±7.9***22.6±6.9***27.6±8.7***30.6±7.3***14.5±3.6***16.5±6.1***19.6±4.7***22.0±7.6***26.1±5.2***3.20±2.6***50.3±13.1   61.0355.0745.1339.1771.1767.2061.0356.2648.1193.64
表5  人参皂苷Rg3冻干粉针剂对化疗药CTX所致C57BL/6小鼠WBC影响试验一(n＝8)
样品   给药方案mg/kg/d 动物体重(g)                                     白细胞计数(个/mm3)
  0天   3天   6天   9天   12天   15天
  Rg3   3.0mgiv×10bid   21.7/24.2   8125±977   4363±568   2550±504   3400±689   5625±440   8013±724
  Rg3   1.5mgiv×10bid   21.6/24.9   7763±1080   4313±569   2313±673   3425±512   5750±493   7650±460
  Rg3   0.75mgiv×10bid   21.5/25.3   7800±800   4375±388   2250±417   3413±503   5750±545   7625±902
  Rg3   0.375mgiv×10bid   21.2/24.5   7850±748   4413±538   2125±358   3525±542   4950±595   87275±663
  云芝糖肽   2gig×10qd   21.3/24.7   8075±792   4225±358   2150±321   3538±515   5625±639   7525±861
  CTX   100mgip×2   21.7/24.1   8013±990   4513±412   2138±316   3060±407   4463±475   6350±1020
  空白对照   相应辅料iv×10bid   21.4/24.6   8088±1090   8038±1000   8350±802   8350±786   8300±685   7625±812
表6  人参皂苷Rg3冻干粉针剂对荷Lewis肺癌小鼠NK活性的影响试验(n＝3)
组别   剂量mg/kg/d   给药方案   动物数(只)   OD值#X±SD   NK活性％
  Rg3Rg3Rg3香菇多糖阴性对照   3.01.50.752g/kg相应溶剂   iv×10iv×10iv×10ig×10iv×10   66666   0.414±0.05***0.389±0.04***0.412±0.05***0.417±0.05***0.553±0.04   53.1155.9553.3452.7737.37
与阴性对照组相比***P＜0.01；2#指(效应细胞+靶细胞)-效应细胞的OD值；3香菇多糖为阳性对照。
表7  人参皂苷Rg3冻干粉针剂对正常昆明种小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能试验(n＝3)
组别   剂量mg/kg/d  给药方案   动物数(只)   吞噬百分率％ 吞噬指数
  注射用Rg3注射用Rg3注射用Rg3云芝糖肽阴性对照   3.0mg1.5mg0.75mg2g溶剂  iv×10bidiv×10iv×10po×10iv×10   1010101010   41.5±10.0***41.0±7.9***39.5±11.0***38.9±8.8***22.3±5.7   0.542±0.14***0.540±0.10***0.560±0.09***0.527±0.09***0.322±0.04
与阴性对照组相比***P＜0.01

Claims (7)

1.一种20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体，其特征在于：该水溶性中间体中20(R)-人参皂苷Rg3的含量为0.5～2.0毫克/毫升。
2.上述20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体的制备方法，其特征在于：
(1)将20(R)-人参皂苷Rg3溶于混合有机溶剂中，制成0.1～2％的人参皂苷溶液，
(2)将2-羟丙基-β-环糊精溶于水中，制成20～65％的水溶液，
(3)将2-羟丙基-β-环糊精的水溶液加热，使其温度维持在40～100℃，在搅拌条件下匀速滴加人参皂苷溶液，其中20(R)-人参皂苷Rg3∶2-羟丙基-β-环糊精＝1∶220～400，滴加完人参皂苷溶液停止搅拌，
(4)减压回收溶剂近干，
(5)加入注射用水摇匀溶解，该水溶液即为20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体。
3.根据权利要求2所述的20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体的制备方法，其特征在于：20(R)-人参皂苷Rg3纯度为95～97％，2-羟丙基-β-环糊精分子量为1540。
4.根据权利要求2或3所述的20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体的制备方法，其特征在于：所用的混合有机溶剂为：
(1)氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝10～25∶30～45∶18～30∶5～15，下层，
(2)氯仿∶甲醇∶水＝70～60∶40～30∶10，下层，
(3)乙醇∶水＝90～95∶10～5，
(4)甲醇∶水＝85～90∶15～10，
(5)乙腈∶水＝40～60∶60～40，
(6)二氯甲烷∶甲醇∶水＝60～65∶40～35∶10，下层，
(7)乙腈∶甲醇＝70～80∶30～20。
5.一种20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：将20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体用超滤器或加入是其重量0.1％针剂用活性炭混合均匀，于80℃保温30分钟后，用0.45μm滤膜过滤除热源，无菌条件下用0.22μm微孔滤膜过滤除菌分装，冷冻干燥。
6.一种20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：将20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体进行真空、喷雾或冷冻干燥，制得Rg3水溶性粉末，再加入注射用水复溶，然后再用超滤器或加入是其重量0.1％针剂用活性炭混合均匀，于80℃保温30分钟后，用0.45μm滤膜过滤除热源，无菌条件下用0.22μm微孔滤膜过滤除菌分装，冷冻干燥。
7.一种20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体冻干粉针剂，其特征在于：它作为制备抗肿瘤、增加化疗药物的疗效和减轻其毒副反应并提高机体免疫功能药物的应用。
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