CN1456337A - 含多个降血糖活性成分的苦瓜制品及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种含多个降血糖活性成分的苦瓜制品及其制备方法，是以鲜苦瓜为原料制成苦瓜汁后的微滤截留物以及纳滤截留物的冻干制品，其中保存了鲜苦瓜的酶活性，鲜苦瓜中的多种蛋白质、鲜苦瓜中的皂苷。其制备方法是将新鲜苦瓜去籽，磨浆，酶处理，过滤弃去粗纤维，再经沉降离心分离，得到的苦瓜汁采用微滤—纳滤分离，收集微滤截流液并与纳滤截流液合并，冷冻干燥后得到降血糖物质，加入适量辅料，灌装成胶囊，或冲压成片剂、制成颗粒剂、制成含片、制成丸剂，供糖尿病人服用。

Description

含多个降血糖活性成分的苦瓜制品及制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有降低血糖的中药，特别是以苦瓜为原料提取得到的治疗糖尿病的中药制剂。

背景技术

糖尿病是当今危害人类健康的重要疾病，目前全世界约有5％-7％的人受糖尿病困扰，被认为是继心脑血管疾病、恶性肿瘤之后，导致人类伤残、死亡的第三大杀手。

糖尿病分为I型和II型，I型糖尿病是一种自身免疫疾病，患者的存活需要注射胰岛素。II型糖尿病占众多糖尿病患者总数的95％左右。II型糖尿病的原因是胰岛细胞代谢发生障碍，胰岛素分泌不足，或者产生胰岛素抵抗，是以胰岛素抵抗为主伴胰岛素分泌相对不足，或者以胰岛素分泌相对不足为主伴胰岛素抵抗导致的代谢性疾病。胰岛素分泌不足，或者产生胰岛素抵抗都可造成血液中葡萄糖过量，当血糖含量超过肾阈时，葡萄糖就转移到尿中排出，从而产生葡萄糖尿。

目前临床应用的几种药物均不能够治愈糖尿病，主要是通过不同的作用机制，降低患者的血糖水平。糖尿病患者必须终生服药，药物本身对人体的毒副作用同样威胁着糖尿病人的健康。在中国，目前使用药物能够控制血糖达到正常标准的，还不到糖尿病患者总数的20％(邹大进，2型糖尿病的祸首---胰岛素抵抗，大众医学，2002，(6)：17)，直接导致了许多糖尿病患者的并发症发生早，进展快。显然，除了筛选更加安全有效的新型药物之外，寻找其它的辅助治疗手段有效控制血糖水平，对于提高糖尿病人的健康水平同样是十分重要的。

苦瓜(Momordica charantia)是一种人类有长期安全食用历史的蔬菜。近二十年来，人们在苦瓜的果实中发现了许多具有降血糖活性的成分，一些苦瓜果实的提取物，或者直接用苦瓜果实干燥后制成的茶饮料，已经推荐给糖尿病人使用，某些苦瓜成分已经被申请作为治疗糖尿病药物的专利。但是，从科技文献中介绍以及已有的专利或产品，主要是基于对苦瓜诸多降血糖活性成分中对某个已知成分的认识，并没有意识到，苦瓜中具有降血糖活性的成分已知的就有多种，并且化学性质各不相同，此外，苦瓜中还有某些具有降血糖的活性成分是未知的。所以，已有的文献、专利或产品，其局限性也是明显的。

美国专利(us 6391854B1)和中国专利(CN 98805001，苦瓜中的口服活性成分，其活性肽，及它们治疗糖尿病的用途；<申请人>美国卡里克斯治疗公司)提供了苦瓜的一种水溶性提取物称为MC6，MC6的特征中它含有三种肽，它的制备方法的特征是：离心澄清的苦瓜汁依次通过30kDal，10kDal及3kDal的超滤膜。MC6分子量小于10kDal，能够通过10kDal超滤膜，而为3kDal滤膜截留。有活性的MC6的特征是在SDS-PAGE凝胶电泳上以单一条带形式迁移，分子量小于10kDal，包含三种肽。同时提供的还有MC6的肽成分，称为MC6.1，以及MC6.1的衍生物和模拟物。活性MC6、MC6.1、MC6.2、MC6.3有降血糖作用，尤其是糖尿病，其中优选口服给予这些活性药物。在这一专利中，所利用的苦瓜降血糖活口服给药后也有这种活性。同时提供的还有利用这些活性药物治疗高血糖疾病的方法性成分仅仅是够透过超滤膜的水溶性蛋白(多肽)。专利申请者描述，MC6没有提高模型动物血浆中胰岛素水平的活性。

一则国际专利申请(PCT/IN99/00052 1999.9.28)的发明，提供了一种高效降血糖多肽-k，它提取自苦瓜。专利申请者介绍的多肽-k制备方法是：用非极性溶剂处理苦瓜种子(或果实)，去除不需要的油脂、黄酮类和皂苷配基，然后用含水80％的丙酮提取残留物中的蛋白质，最后选择性地结晶分离出多肽-k。申请者描述，多肽-k不溶于水，其降血糖的作用机理是激活血液中无活性的胰岛素。

很明显，MC6与多肽-k都是苦瓜中具有降血糖活性的蛋白质，但是，MC6溶于水，而多肽-k不溶于水，按照MC6的制备方法，则损失了苦瓜中的多肽-k；而按照多肽-k的制备方法，同样损失了苦瓜中的MC6。

还有一些中国专利公开了从苦瓜中提取降糖物质或制成中药的内容：

1、<申请号>99115925<发明名称>一种苦瓜降糖胶囊及其制备工艺，该发明是以新鲜苦瓜为原料，经清洗冷冻，低温制浆，压滤，将滤渣经烘干过100目筛，制成苦瓜渣粉；滤液澄清再过滤，经酸性(pH3.0)乙醇在15℃条件下搅拌3小时，静置沉淀12小时，过滤后将沉淀物经低温干燥，过100目筛，制成苦瓜蛋白；过滤液经60℃真空浓缩，加2倍水溶解，加2倍乙醚脱脂，50℃真空浓缩回收乙醚，60℃真空回收乙醇制成粗苦瓜总皂苷，再经无水丙酮在4℃条件下沉淀洗涤数次，30℃以下真空浓缩制成苦瓜总皂苷，最后将总皂苷，苦瓜蛋白粉和苦瓜渣按10∶2∶88重量比经混匀，装入胶囊制成苦瓜降糖胶囊。具有原料来源广泛，工艺简单，服用方便，价格便宜，无毒副作用的优点，可做为治疗糖尿病的辅助制剂。

2、<申请号>98110802<授权公告日>2001年08月15日<发明名称>天然苦瓜素降糖药及其制备方法，发明公开了一种天然苦瓜素降糖药的制作方法，包括下述步骤：a.将成熟苦瓜切成片，并进行干燥处理；b.把干燥的苦瓜片浸泡于水中，并提取浸液；c.把苦瓜浸液浓缩成浓缩液；d.将浓缩液进行生物酶解，得高活性降解液；e.把降解液进行恒温干燥喷粉制粒；f.将颗粒装入胶囊成药；该方法工艺设备简单，符合大规模生产要求，产品得率高，治疗效果好，无毒副作用。

3、<申请号>95103732<发明名称>治疗糖尿病的中药及其生产方法，该发明是一种治疗糖尿病的中药，该中药的主要成分是动物胰脏、苦瓜、南瓜、黄芪，山药，生产方法是动物胰脏粉碎干燥，与用水提法或醇析法得到的苦瓜、南瓜、黄芪提取物混合再加入山药粉得到，该药物具有益气生津，健脾润燥，滋阴降火功率效，并有提高机体免疫功能，促进胰岛素分泌，降低血糖作用。

4、<申请号>93119351.6<发明名称>植物降血糖活性蛋白新组份PA及其制备，该发明涉及生物制药领域。从植物材料苦瓜中提取降血糖活性蛋白新组分PA，制备工艺中材料净化处理-低温冰冻-破碎-酸醇浸渍-高速匀浆-酸醇提取-抽滤-离心净化-沉淀-重新溶解-Sephadex凝胶过柱-紫外检测分部收集-浓缩-干燥的苦瓜降血糖活性蛋白新组份PA的制备方法，其特点是采用了等电点沉淀和凝胶过柱、紫外检测分部收集的方法。发明人认为该物质具有分离提取简便、消耗有机溶剂少、得率高等优点，经动物试验证明降血糖效果明显。

5、<申请号>02102754<发明名称>一种快速高效提取植物类胰岛素的方法，苦瓜种子含有较丰富的植物类胰岛素，是目前治疗糖尿病的一种有效成分。发明技术特征是：苦瓜种子脱壳，种仁粉碎过60或100目筛，然后采用酸性乙醇进行萃取，离心取上清液，加入NaCl占体积3％～5％，用1～5Mol/LNaOH调节溶液至pH值7.0±7.5溶液变浑浊、离心、去上液，用丙酮洗涤沉淀部分三次，真空干燥，得到植物类胰岛素粗品。用0.1MTris.cl溶液(pH7.5)溶解进行凝胶亲和层析，收集洗脱峰溶液，用丙酮或乙醇浓缩真空干燥得到植物类胰岛素精品。该方法可以提取制备高纯度的植物类胰岛素成分，可用于糖尿病的治疗。

6、<申请号>98102198.0<发明名称>一种苦瓜含片及其制备方法，该发明为一种苦瓜含片及其制备方法。本苦瓜含片主要含有苦瓜粉、糊精、柠檬酸和甘露醇等，制备时，先将鲜苦瓜经榨汁、过滤、冷冻干燥制得苦瓜冻干粉，再与其它成分进行混合，并压制成片。采用本发明的制备方法科学合理，充分保留了苦瓜中的多种营养成分，所制含片常温下不失苦瓜的活性，具有清热解毒、宽胸利气、生津止渴、降低血糖、提高免疫力、抑制癌细胞等功效，是日常生活，特别是在灾区救援、军事行动、以及旅游、探险活动中，可迅速补充体力，提高免疫力的方便必需品。主权项(A61K35/78)要求是：一种苦瓜含片，其特征是含有苦瓜粉、糊精、甘露醇、香料、色素及硬脂酸镁。

已有的研究表明，苦瓜中除蛋白质之外，皂苷也是一种极为有效的降血糖活性的成分。

一些科技文献报道，苦瓜皂苷为四环三萜类化合物，有多个不同成分，均难溶于水，可用乙醇从干燥的苦瓜果实中提取出(常凤岗：苦瓜化学成分研究，中草药，1995，26(10)：507-510)。苦瓜皂苷并不影响受试动物模型血浆中胰岛素含量，主要是促进增加肌糖原和肝糖原的合成(王先远，金宏，许志勤等：苦瓜皂苷降血糖作用及机制初探，氨基酸和生物资源，2001，23(3)：42-45)，因而具有显著的降血糖作用(孙淑卿，苦瓜的药理和临床研究概况，中药材，1997，(8)：428--429)，动物试验证明，其血糖降低幅度甚至优于“优降糖”(孙宝莹等，苦瓜皂苷的药效学实验研究，河南中医药学刊，1994，9(6)：19--21)。

水溶多肽MC6、水不溶的多肽-k及苦瓜皂苷，由于它们化学性质的差异，因而属于彼此不同的物质。

并且，苦瓜降血糖活性成分并不仅仅是已知的皂苷和蛋白质。

从新鲜苦瓜的水煮液中分离出了可溶于乙醚和不溶于乙醚的两个未知的成分，已经鉴定不为皂苷、黄酮和生物碱，这两种成分都表现出明显的降血糖活性(王勇庆：苦瓜降血糖作用研究，湖南中医药杂志，1998，(6)：51-52)。由此证明，苦瓜中降血糖成分除皂苷和植物蛋白之外，还有其它的降糖活性化合物。

将苦瓜的几种不同方法提取物对四氧嘧啶诱导的化学性糖尿病模型小鼠的降糖效果进行比较，结果表明，苦瓜的未被加热的直接压榨的果汁较其它方法提取的有效部位的降血糖效果更好，并推断其降血糖活性物可能为水溶性的受热易被破坏的成分(范玉玲；崔福德，苦瓜有效部位降糖活性的比较研究，沈阳药科大学学报2001 18(1)50-52)。

动物实验表明，鲜苦瓜汁能使能使四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠已经受损伤的胰岛β细胞得到修复，并再生出新的β细胞，提高了血浆中的胰岛素含量(Ahmed，I.，Adeghate，E.，Sharma，A.K.，Pallot，D.J.et al.Effects of Momordica charantia fruit juice on isletmorphology in the pancreas of the streptozotocin-diabetic rat.Diabetes researchand clinical practice.1998，40，145-151)。体内和离体的进一步研究表明，鲜苦瓜汁的这种作用机理是减轻了糖尿病小鼠的胰腺，RIN细胞及胰岛的脂质过氧化，并降低了RIN细胞中四氧嘧啶诱导的apoptosis，从而对RIN细胞，胰岛及胰腺β细胞的起保护作用(Sitasawad，S.L.，Shewade.Y。，Bhonde，R。，Role of bittergourd fruit juice instz-induced diabetic state in vivo and in vitro.Journal of Ethno-pharmacology，2000，73(1)：71-79)。而在苦瓜的已知降糖活性化合物中，尚未能确定具有这种修复或再生胰岛细胞，提高胰岛素水平的生物活性。

由上述事实可知，苦瓜的降血糖功能活性物，有已知的，也还有属于未知的，苦瓜的降血糖功能，实际是其中所含的多种具有降血糖活性的成分协同作用的结果。就已知的活性成分而言，因其化学性质不同，很难用一种溶剂将它们同时提取出来。此外，在苦瓜的降血糖活性物中，包含有不耐热的成分，其提取的过程不应当受热。

用磨浆的办法将新鲜的苦瓜果肉组织细胞充分破碎，细胞的所有内含物，包括溶于水与难溶于水的降血糖活性成分，都将被释放到果浆中。将果浆中的粗纤维(来自于果肉细胞壁)滤去，然后冷冻干燥，这种苦瓜汁的冻干制品无疑包含了比较全面的降血糖活性成分。但是，苦瓜汁中降血糖活性物的含量其实很低，直接冻干成本昂贵，另一方面，苦瓜汁中存在的糖类物质极易潮解，使这种冻干制品根本无法在正常条件下分装、贮藏和使用。加入大量的干燥助剂或防潮剂虽然可以解决苦瓜汁的冻干制品的潮解问题，但将无法制得高含量的苦瓜降血糖制品。

综上所述，文献和专利公开的苦瓜有效成分的制备，基本上是采用物理法和化学法提取某个或若干个明确的化学成分为主，或者是苦瓜在加热条件下的某种溶媒(如水，乙醇或其混合物)的总提取物，它们或者未提及如何利用苦瓜中那些化学性质未知的降血糖活性成分，或者未明确苦瓜中某些热敏性降血糖活性物的受热破坏问题。

99115925号中国发明专利，一种苦瓜降糖胶囊及其制备工艺提出了苦瓜蛋白与苦瓜皂苷的利用，但在制备过程使用了乙醇，丙酮，乙醚等有机溶剂。98110802号专利，天然苦瓜素降糖药及其制备方法中提到将苦瓜浓缩液进行生物酶解，得高活性降解液，但未提及生物酶解中采用的是什么酶。98102198.0号专利，一种苦瓜含片及其制备方法中使用的是冷冻干燥苦瓜汁工艺，但它没有考虑去除苦瓜中已知的不具有降血糖活性的成分的问题。

基于上述原因，开发一套能全面利用苦瓜中理化性质不同的各类降血糖活性物，并且活性成分含量高，理化性质稳定的苦瓜降血糖制品的制备方法，不仅是开发高活性的苦瓜降血糖制品的必由之路，而且对于充分而合理地利用苦瓜资源，也是十分必要的。

技术内容

本发明主要针对苦瓜中含有多种降血糖活性成分，其化学性质各不相同：有水溶的，也有难溶于水而易溶于极性有机溶剂的，某些成分则不溶于水和极性有机溶剂，而只能溶于非极性有机溶剂，因而以任何一种溶媒(包括水)都不能全面提取出全部活性成分，同时某些未知的活性成分不耐热这一问题而提出的。所提供的一套苦瓜降血糖活性物制备工艺，不仅全面地利用了苦瓜中的各种降血糖活性成分，而且最大限度地去除已知的非活性物，同时避免了热敏性活性物的受热损失问题。因而采用本发明苦瓜制品，降血糖活性物含量高，使用剂量小而降血糖作用突出，并且加工性能稳定。

本发明的技术方案如下：

本发明的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，它包括制品中存在的鲜苦瓜中的酶活性，鲜苦瓜中的多种蛋白质、鲜苦瓜中的主要的皂苷成分以及最大限度地去除已知的非活性物，具体的是新鲜的、经酶解处理的苦瓜浆，经过滤、离心分离之后所得苦瓜汁的微滤截留物及纳滤截留物。

以上所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品的酶活性，是指以多酚氧化酶活力为标誌的酶活性。

以上所述的多种蛋白质为制品中存在的、其蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳谱与鲜苦瓜中的蛋白质谱基本一致的物质。

以上所述的皂苷为制品中存在的、其薄层层析图谱具有与鲜苦瓜原料皂苷色谱一致的特征斑点的物质。

以上所述的已知的非活性物葡萄糖含量(对样品可溶性固形物)低于鲜苦瓜汁的葡萄糖糖含量(对鲜苦瓜汁可溶性固形物)。

以上所述的新鲜苦瓜浆是将新鲜的苦瓜去籽后用打(磨)浆机打(磨)制成的浆汁；酶解处理是指在苦瓜浆中加入纤维素酶，半纤维素酶，果胶酶中的一种，或它们的混合物，酶解苦瓜细胞壁的纤维素、半纤维素及果浆中的果胶。

以上所述的微滤截留物是将酶解处理后的苦瓜浆经过滤或离心除去果肉残渣，所得苦瓜汁采用微滤装置收集的不能透过孔径为0.2μm-0.45μm微孔滤膜的灰白色不溶物。

以上所述的纳滤截留物是指能透过0.2μm-0.45μm微孔滤膜，但可为截留分子量为0.2--1Kdal的纳滤膜所截留的物质。

本发明的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品的制备方法包括以下几个步骤：

1、首先将新鲜苦瓜去除种子，采用食品工业中现有的磨(打)浆机械将苦瓜肉组织充分破碎，使苦瓜果肉细胞内含物能充分析出，得带有磨碎果肉的苦瓜浆汁。

2、在上述苦瓜浆汁中加入约0.02％-0.08％果胶酶、纤维素酶或半纤维素酶，在30-40℃条件下保温1-4小时时间，然后经过滤除去果肉纤维残渣，沉降离心除去残余在果汁中的细碎果肉颗粒，得出一种含有灰白色粉末状悬浮物的混浊苦瓜汁。经检验，这种灰白色悬浮物的主要成分是苦瓜皂苷。

3、采用微滤装置(过滤孔径0.2μm-0.45μm)过滤上述含有灰白色悬浮物的苦瓜汁，收集不能透过滤器的灰白色不溶物，得组分A。

4、上述透过微滤装置的澄清苦瓜汁用纳滤分离装置进一步分离，保留不能透过截留分子量0.2--1Kdal纳滤膜的溶质，除去能透过滤膜的糖类、有机酸。纳滤后期，在截留液中反复加入纯水，继续纳滤操作，以较为充分地除去截留液中的糖、有机酸。收集纳滤截留液，得组分B。

5、将上述步骤3、所得的组分A与步骤4、所得的组分B合并，冷冻干燥收藏。得到含多个苦瓜降血糖活性成分的制品。

本发明的这种含多个苦瓜降血糖活性成分的制品，具有明显的降血糖活性，可直接，或根据需要加入适量辅料，灌装成胶囊，或冲压成片剂、制成颗粒剂、制成含片、制成丸剂，供糖尿病人服用。所述的辅料为上述制备方法步骤2、离心沉淀所获得的细碎果肉之干燥物以及采用现行国家标准、国际标准通用的食品或药物辅料。

本发明制品包含了鲜苦瓜除去果肉纤维残渣之后，除叶绿素之外果汁中的全部水不溶性成分，以及除去糖类、有机酸后的水溶性成分和因疏水性较强而不能透过纳滤膜的小分子成分。由于本发明制品是在常温或冷冻条件下完成操作，因而保存新鲜果实中的某些酶活性特征。

本发明制品所含成分的化学特性，所保持的酶活性，可以通过下述方法分别检测证实：1.多酚氧化酶活性检测

本发明制品1g，溶于10ml蒸馏水，离心，取上清液1ml，加入0.3％焦性没食子酸水溶液3ml，滴加4滴低浓度过氧化氢，即可见溶液发生棕色反应，证实制品中存在多酚氧化酶活性。2.蛋白质电泳检测

本发明制品1g，溶于蒸馏水10ml，离心，取上清液进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，并用苦瓜果肉原汁作为对照。电泳后的凝胶经考马斯亮蓝染色，本发明制品的蛋白质谱与苦瓜果肉原汁蛋白质谱基本一致，见图2.。表明本发明制品包含了鲜苦瓜中的多种蛋白质。3.苦瓜皂苷薄层层析检测

本发明制品1g溶于甲醇2ml，取甲醇液点样于硅胶G高效薄板上，以氯仿-甲醇(7∶2.5)水饱合后作展开剂，展开，取出，晾干，10％硫酸液喷雾后加热显色。另取苦瓜原料的甲醇提取物点样于同一薄板上。本发明制品具有1、2两个与苦瓜原料色谱一致的特征斑点，见图3.。证实本发明制品保留了苦瓜中主要的皂苷成分。4.糖类色谱检测

本发明制品溶于蒸馏水，离心除去沉淀物，加蒸馏水调节至可溶性固形物含量2.5％(折光仪测定)。另榨取鲜苦瓜汁，也用蒸馏水将可溶性固形物含量调节至2.5％。经Benson碳水化合物柱(BC-100，Ca⁺²)进行高效液相色谱(HPLC)柱层析，本发明制品与鲜苦瓜汁均洗脱为两个峰，第一峰在9.7分钟时流出，第二峰(葡萄糖)在15.0分钟时流出，糖色谱峰保留时间完全重合，可知两者所含糖类一致。以相同可溶性固形物含量为基准，用葡萄糖吸收峰面积表征相对含糖量，本发明制品相对含糖量低于鲜苦瓜汁，证实本发明制品经过了脱糖工艺处理。

附图说明

图1.是本发明的工艺流程图。

图2.是本发明制品的蛋白质聚丙烯凝胶电泳检测结果图。

图3.是本发明制品的苦瓜皂苷薄层层析检测结果图。

图4.-图9.是本发明制品的降血糖效果图。

从图1了解到：本发明制品的生产工艺是将新鲜苦瓜去籽，磨浆，果浆加入酶制剂并保温1-4小时，过滤弃去果肉残渣，收集的苦瓜汁(1)再经沉降式离心去除沉淀物，得到的苦瓜汁(2)。苦瓜汁(2)经微滤，得微滤截流液(A)和澄清的苦瓜汁(3)，将苦瓜汁(3)用纳滤装置分离，弃去纳滤透过液，回收纳滤截流液(B)并与微滤截流液(A)合并，冻干后得到降血糖制品物。这种降血糖制品可直接、或加入上述离心沉淀所获得的细碎的果肉、也可加入其它符合国家和国际标准的辅料做成各类中药制剂，如灌装成胶囊，冲压成片剂，或制成颗粒剂，供糖尿病人服用。

图2.显示了本发明制品与新鲜苦瓜汁的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质谱，两者的蛋白质色带位置基本一致，以此检测证实本发明制品中包含了鲜苦瓜中的多种蛋白质。

图3.显示了本发明制品与苦瓜原料中苦瓜皂苷在薄层层析中相一致的特征斑点，以此检测证实本发明制品保留了苦瓜中主要的皂苷成分。

图4.给出了患者服用本发明制品前四周血糖下降情况，服用本发明制品一周后，血糖即有明显下降，直至第四周；在随后的八个月中，患者减服了西药，继续服用本发明制品，血糖水平保持正常平稳，如图5.。

图6.图示了患者服用本发明制品四周前后血糖变化，患者同时停服一切降糖药物，至一周后，血糖下降过多，逐减少服用量一半，血糖随即稍有升高，继续服用，血糖又开始下降，效果显著。

图7.图示了患者服用本发明制品四周前后血糖变化，配合西药服用，一周后血糖即明显下降，四周后，血糖已降至较低水平。

图8.图示了患者服用本发明制品四周前后血糖变化，配合西药服用，一周后血糖即明显下降，从第三周始减少西药服用量，血糖仍维持较低的正常水平。

图9.图示了患者服用本发明制品四周前后血糖变化，配合西药服用，本发明制品服用量大于前几例患者，血糖下降明显。

具体实施方式：

实施例1

新鲜苦瓜100Kg，剖开除去种子，磨碎果肉，加入果胶酶14g，35℃保温2h，过滤式离心除去纤维残渣，得浅绿色苦瓜汁70Kg，沉降式离心除去沉淀的叶绿素，细碎果肉，得外观为浅黄色至灰白色的混浊苦瓜汁。

用孔径为0.45μm的微滤装置对混浊苦瓜汁进行精滤，至微滤截留液只剩下小体积时，加入适量纯水置换。收集经置换微滤后的混浊截留液。

透过微滤装置的澄清苦瓜汁加入到纳滤装置中进行纳滤处理，保留不能透过截留分子量0.2--1Kdal纳滤膜的溶质，收集纳滤截留液，弃去纳滤透过液。纳滤截留液剩下小体积时，加适量纯水置换纳滤。

微滤截留液与纳滤截留液合并冷冻干燥，得冻干制品520g，加入适量淀粉后灌装成胶囊。实施例2

新鲜苦瓜150Kg，剖开除去种子，磨成果浆，加入纤维素酶(含半纤维素酶活性)50克，果胶酶30g，40℃保温1h，过滤式离心除去纤维残渣，得浅绿色苦瓜汁120Kg，经沉降式离心得沉淀物和外观为浅黄色至灰白色的混浊苦瓜汁。

用孔径为0.45μm的微滤装置对混浊苦瓜汁进行精滤，当微滤截留液只剩下小体积时，加入适量纯水置换。收集经置换微滤后的混浊截留液。

微滤装置透过的澄清苦瓜汁，加入到纳滤装置，保留不能透过截留分子量0.2--1Kdal纳滤膜的溶质，纳滤截留液剩下小体积时，加适量纯水置换纳滤。收集纳滤截留液，弃去纳滤透过液。

沉降离心沉淀物经灭菌处理，然后与微滤截留液、纳滤截留液混合并冷冻干燥，得制品1300克。冲压成片剂。应用实施1.

患者张先生，65岁，患慢性糖尿病十余年，服用多种降糖西药其空腹血糖仍高居不下，并发生了手脚麻木、皮肤骚痒、眼底出血等并发症。加服本发明制品后，血糖很快降至正常水平。一个月后，减服西药，直至西药服用量为原来的三分之一，患者服用本发明制品八个月来，血糖水平保持正常，并发症状消失，身体健康。服用本发明制品前后的血糖变化见图4.、图5.。应用实施2.

患者梁女士，60岁，慢性糖尿病，自服用本发明制品后，停服一切降糖药物，结果血糖水平保持正常。服用本发明制品前后的血糖变化见图6.。应用实施3.

患者韦女士，72岁，糖尿病史4年，空腹血糖水平为8.5mmol/L。常期服用西药，服用本发明制品后，血糖水平平稳下降，经减少西药及调节本发明制品服用量，其血糖水平保持正常。服用本发明制品前后的血糖变化见图7.。应用实施4.

患者梁女士，66岁，患慢性糖尿病5年，并发患有高血压、视力模糊。加服本发明制品后，血糖水平平稳下降，减少西药后，血糖水平仍保持正常，并使血压得到控制，身体健康。服用本发明制品前后血糖变化见图8.应用实施5.

患者张女士，60岁，患糖尿病一年，空腹血糖水平达18mmol/L，服用多种降糖药物效果不佳，患者视力模糊，腿疼无力，手脚麻木。服用本发明制品后，血糖明显下降，病人感觉精神。服用本发明制品前后血糖变化见图9.。

Claims (10)

1、一种含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于：它包括制品中存在的鲜苦瓜中的酶活性、鲜苦瓜中的多种蛋白质、鲜苦瓜中的主要的皂苷成分以及最大限度地去除已知的非活性物，具体的是新鲜的、经酶解处理的苦瓜浆，经过滤、离心分离之后所得苦瓜汁的微滤截留物及纳滤截留物。

2、根据权利要求1所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于：所述鲜苦瓜中的酶活性是指以多酚氧化酶活力为标誌的酶活性；

3、根据权利要求1所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于：所述多种蛋白质为制品中存在的、其蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳谱与鲜苦瓜中的蛋白质谱基本一致的物质。

4、根据权利要求1所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于：所述皂苷为制品中存在的、其薄层层析图谱具有与鲜苦瓜原料皂苷色谱一致的特征斑点的物质。

5、根据权利要求1所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于：已知的非活性物葡萄糖含量(对样品可溶性固形物)低于鲜苦瓜汁的葡萄糖含量(对鲜苦瓜汁可溶性固形物)。

6、根据权利要求1所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于：新鲜苦瓜浆是将新鲜的苦瓜去籽后用打(磨)浆机打(磨)制成的浆汁；酶解处理是指在苦瓜浆中加入纤维素酶，半纤维素酶，果胶酶中的一种，或它们的混合物，酶解苦瓜细胞壁的纤维素、半纤维素及果浆中的果胶。

7、根据权利要求1所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于：所述的微滤截留物是将酶解处理后的苦瓜浆经过滤或离心除去果肉残渣，所得苦瓜汁采用微滤装置收集的不能透过孔径为0.2μm-0.45μm微孔滤膜的灰白色不溶物。

8、根据权利要求1所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品，其特征在于：所述的纳滤截留物是指能透过0.2μm-0.45μm微孔滤膜，但可为截留分子量为0.2-1Kdal的纳滤膜所截留的物质。

9、一种含多个降血糖活性成分的苦瓜制品的制备方法，其特征在于：制备方法包括以下几个步骤：

(1)新鲜苦瓜去除种子，将苦瓜肉磨制成浆，使苦瓜肉细胞内含物能充分析出，得带有磨碎果肉的苦瓜浆汁；

(2)在上述苦瓜浆汁中加入约0.02％-0.08％果胶酶、纤维素酶或半纤维素酶，在30-40℃条件下保温1-4小时时间，然后经过滤除去果肉纤维残渣，沉降离心除去残余在果汁中的细碎果肉颗粒，得出一种含有灰白色粉末状悬浮物的混浊苦瓜汁；

(3)采用微滤装置(过滤孔径0.2μm-0.45μm)过滤上述含有灰白色悬浮物的苦瓜汁，收集不能透过滤器的灰白色不溶物，得组分A；

(4)将上述透过微滤装置的澄清苦瓜汁，放入纳滤分离装置，保留不能透过1Kdal滤膜的溶质，纳滤除去糖类，有机酸，纳滤后期，在截留液中反复加入纯水，继续纳滤操作，收集纳滤装置中截留液，得组分B；

(5)将本发明第3步所得的组分A与本发明第4步所得的组分B合并，冷冻干燥得到含多个苦瓜降血糖活性成分的制品。

10、根据权利要求9所述的含多个降血糖活性成分的苦瓜制品的制备方法，其特征在于：将含多个苦瓜降血糖活性成分的制品直接、或加入适量辅料后灌装成胶囊，或冲压成片剂、制成颗粒剂、制成含片、制成丸剂，所述的辅料包括离心沉淀所获得的细碎果肉之干燥物，或者是符合国家、国际标准的，生理上可接受的药物辅料。

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