CN1382478A - 桑枝提取物及其提取方法和新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及桑枝提取物制备成预防高尿酸血症和痛风疾病的保健食品和治疗高尿酸血症和痛风疾病的药物。该桑枝提取物由单味药材桑枝用0～95%乙醇水溶液或氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶剂或它们的组合在10－100℃温度条件下提取1次或1次以上,合并提取液,回收溶剂即得;或用下列方法进一步纯化:提取液调pH为7.5－9.5,离心后上清液调pH为4－6,沉淀水洗至中性,干燥即得;提取液经石油醚或汽油脱脂而得;提取液经石油醚或汽油脱脂后,用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分别或依次提取而得;提取液经大孔吸附树脂吸附后,用10－95%乙醇水溶液解吸附而得;提取液经硅藻土、氧化铝等吸附后,用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等溶剂洗脱后,浓缩干燥而得;提取液经聚酰胺、硅胶或离子交换树脂等柱层析分离。以上纯化方法可单用或采用几种方法的组合。所得的桑枝提取物中含有大量黄酮类成分,包括芦丁、槲皮素、桑色素等。

Description

桑枝提取物及其提取方法和新用途

技术领域：

本发明涉及天然植物提取物及其提取工艺和新用途，特别是将桑枝提取物制备成预防高尿酸血症和痛风疾病的保健食品和治疗高尿酸血症和痛风疾病的药物。

背景技术：

痛风是一组嘌呤代谢紊乱的慢性终身性疾病，其发病机理复杂，临床特点为高尿酸血症及由此引起的痛风性关节炎反复发作、痛风石沉积、痛风性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和形成尿酸肾结石。

高尿酸血症是指血中尿酸超过正常的一种状态，它是痛风的前奏，也是痛风的重要临床表现。痛风性关节炎是过多的尿酸盐沉积在关节组织，刺激关节组织并引起一系列的炎性反应而造成的，可分为急性和慢性两种。急性痛风性关节炎以发作性的关节红、肿、热、痛及活动障碍为突出表现，经过几天后可逐渐消退，关节功能亦恢复正常，不留关节损害。慢性痛风性关节炎是指在急性关节炎反复发作的基础上，导致关节结构及软组织的破坏，关节出现不同程度的畸形和活动受限，有的出现痛风石。慢性痛风性关节炎一旦形成后，往往是不可恢复的，在慢性的基础上仍可有反复发作的急性发作，使关节损害更加明显。

随着人类物质文明的进步和饮食结构的显著变化，痛风在欧洲、北美、日本、非洲等地区和国家越来越普遍。如在美国，所有人群中痛风发病率接近1％，并且发病率随着年龄的增长而增高，65岁以上男性发病率已超过5％；在欧洲，痛风已侵犯13％的成年男性和5％的成年女性。女性绝经后痛风发病率更高，有报道国内为69.2％，国外达91％。痛风已成为当今世界性常见病、疑难病之一。

我国痛风发病率增高趋势很明显，一些大中城市痛风发病率已与发达国家相近。有专家预测，痛风在我国可能成为仅次于糖尿病的第二号代谢性疾病。

和其他疾病不同，痛风的危害性往往没有引起足够的注意。不论是原发性痛风还是部分继发性痛风，都是终身罹患性疾病，其病程长，极易反复发作，病患者常痛苦不堪。根据临床资料分析显示，41％痛风患者有显著肾功能损害，25％痛风患者死于肾功能衰竭。此外，痛风患者常伴发心脑血管疾病(如高血压、冠心病、动脉粥样硬化)、高血脂症、肥胖症、糖尿病等老龄病和代谢病。因此，痛风极其严重的危害性应当引起我们高度重视。

高尿酸血症动物模型是国际上普遍用于评价抗高尿酸血症和痛风药物作用的实验模型。该模型以一种尿酸酶抑制剂---氧嗪酸钾盐作为化学诱导剂，抑制尿酸分解，增加体内血清尿酸水平。

现有西药治疗药物针对痛风患者在不同时期所表现的症状具有选择性应用疗效。如抗炎镇痛药物秋水仙碱和消炎痛用于痛风急性发作治疗，排泄尿酸药物如丙磺舒、苯溴马龙用于间隙期及慢性期治疗，黄嘌呤氧化酶抑制剂药物别嘌呤醇(唯一在临床上使用)抑制尿酸合成。但由于上述药物毒副作用大，患者往往不能坚持长期服用，难以控制病情。如秋水仙碱和消炎痛具有胃肠道刺激作用，前者还产生白细胞降低和脱发等副作用；丙磺舒、苯溴马龙具有胃肠道反应、肾绞痛及激发痛风急性发作等副作用；别嘌呤醇有致变态反应(发生率高达10-15％)、超敏Stevena-Johnson综合症(可导致27.5％出现斑丘疹患者死亡)、骨髓抑制(虽较少见，但后果严重)等严重的毒副作用。

现代医学的痛风归属于中医“历节痛”、“黄汗”、“痛风”、“白虎历节”或“脚气病”范畴，也有笼统贯之以“痹证”。中医药根据辨证施治、辨病用药的原则，治疗痛风已取得较好的效果，且副作用少，易被患者接受，从而达到长期用药，最终根治疾病的目的。风寒湿痹者以温经散寒、除湿通络为主，可用薏以仁汤加减或者防己茯苓汤加减治疗；风湿热痹者以清热解毒利湿、活血化瘀止痛为主，可用白虎桂枝汤或四妙丸加减治疗；痰瘀痹阻者以宣壅理气为主，可用桃红饮加味治疗；阴血不足者，应以养血活血为主，兼以疏风祛湿，可用四物汤加味治疗。根据辨病用药的原则，土茯苓、蚕砂、虎杖等具有增加尿酸排泄，降低血尿酸水平的作用，可用于治疗高尿酸血症；海风藤、威灵仙、白芥子、玄参等，可用于治疗关节变形僵硬、痛风结节；金钱草、海金砂等用于治疗尿结石。

中国专利局先后公开了多个治疗痛风的中药复方制品，如在1997年3月12日公开了“痛风灵药酒及其制备工艺”[公开号CN 1144676A，申请号961028513]，在1998年4月15日公开了“治疗痛风的药酒”[公开号CN 1178689，申请号97107775.4]，在1999年9月29日公开了“复方三痹痛风药酒”[公开号CN 1229658，申请号98111903.4]，在1994年1月19日公开了“一种治疗坐骨神经痛和痛风病的中药”[公开号CN1080868A，申请号93111076.9]，在1996年2月14日公开了“一种治疗坐骨神经痛和痛风病的中药”[公开号CN 1116528，申请号94109349.2]，在1998年8月5日公开了“治疗痛风病的中药”[公开号CN 1189374A，申请号98110667.6]，在2000年4月5日公开了“一种治疗痛风病的中药”[公开号CN 1249192A，申请号98121618.8]，在2000年4月19日公开了“一种治疗痛风病的中药”[公开号CN 1250664A，申请号991187725]。上述各种抗痛风中药复方，所含中药味数较多，并为粗制剂，其中主要药物和有效部位及成分没有突出或者不明，不具有科学的质量标准。部分专利产品系酒制品，而现代研究表明，各种酒类和酒制食物均可引起痛风发作，其原因有：酒中的乙醇可直接加快体内嘌呤合成速度，使嘌呤产量增加，并能刺激人体内乳酸合成，而乳酸可抑制肾脏排泄尿酸的功能，容易引起泌尿系统结石；某些酒类，尤其是啤酒在发酵过程中可产生大量嘌呤。因此从现代科学角度上讲，上述涉及药酒治疗痛风的专利中药不适宜为痛风患者或孕妇患者，或伴有心脏病、高血压等患者服用。

桑枝为桑科植物Morus alba L.的嫩枝，系药食两用常用中药。桑枝能祛风湿、利关节、行水气，治风寒湿痹，四肢拘挛，脚气浮肿，肌体风痒，可用于治疗臂痛、水气脚气、高血压、紫癜风。桑枝含鞣质、糖类和多羟基生物碱等，并含有大量的黄酮类化合物，如芦丁(Rutin)、槲皮素(Quercetin)和桑色素(Morin)等。临床上桑枝复方制剂主要用于治疗中风后遗症、II型糖尿病等疾病，但未见有治疗高尿酸血症和痛风的相关报道。中国专利局曾在1998年9月16日公开了“治疗痛风病的中药”[公开号CN 1192916，申请号97107394.5]，该中药复方系含由桑枝炒炙品以及其它22种中草药，现代研究证实桑枝经炒制后，主要成分总黄酮含量明显降低，另外，该复方有效部位及有效成分均不明确。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题，提出一种桑枝提取物及其提取工艺和药物新用途，该新用途是桑枝提取物在防治高尿酸血症和痛风疾病的保健食品制备中的应用以及在治疗高尿酸血症和痛风药物制备中的应用。

本发明的技术解决方案之一是：桑枝提取物，系由单味药材桑枝用0～95％乙醇水溶液或氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等有机溶剂或它们的组合为提取溶媒在10-100℃温度条件下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶剂即得。

本发明的技术解决方案之二是：桑枝提取物的提取方法，单味药材桑枝用0～95％乙醇水溶液、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶剂或它们的组合为提取溶媒在10-100℃温度下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶剂即得。

所得提取物可用下列方法进一步纯化：①所得提取液用氢氧化钠等碱性物质调pH至7.5-9.5，静置，离心后上清液用盐酸调pH至4-6，静置，取沉淀，水洗至中性，干燥即得，总黄酮含量为10-60％；②所得提取液用石油醚或汽油等脱脂后，浓缩、干燥即得，总黄酮含量为1-5％；③所得提取液用石油醚或汽油等脱脂后，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分别或顺次提取，各提取液分别浓缩、干燥即得，总黄酮含量依次为5-20％、10-30％、5-30％、1-10％、1-10％；④所得提取液用大孔树脂吸附，以10～95％乙醇解吸附，解析液浓缩，干燥即得，总黄酮含量为20-80％；⑤所得提取液进一步经硅藻土、氧化铝等吸附剂吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂洗脱后，回收溶剂，浓缩干燥，即得，总黄酮含量为10-80％；⑥以聚酰胺、硅胶、离子交换树脂为填料，用柱层析分离，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂或水为洗脱剂，洗脱液浓缩，干燥即得，总黄酮含量为10-80％；⑦以上纯化方法可单用或采用几种方法的组合，桑枝提取物中总黄酮含量为0.5-80％，其中含有芦丁、槲皮素和桑色素等。

本发明的技术解决方案之三是：桑枝提取物及以桑枝提取物为有效组分制成的药物(包括口服、注射制剂及外用制剂)以及保健食品在预防和治疗高尿酸血症和痛风等疾病中的应用。

本发明的优点是，弥补现有技术的不足，提供了一种药食两用，具有预防或治疗高尿酸血症和痛风作用的新型中药制剂或保健食品。

本发明所得的桑枝提取物对正常血清尿酸水平无影响，具有很好的安全性，适于不同年龄层次和各类型高尿酸血症和痛风患者以及伴发心血管和糖尿病等疾病的患者使用。

本发明在高尿酸血症模型上科学地评价并确定桑枝提取物治疗高尿酸血症和痛风的有效性，并以总黄酮和芦丁、槲皮素、桑色素的含量为指标，建立科学的质量标准，药效可靠稳定，工艺流程可控性强。

由本发明获得的治疗高尿酸血症和痛风病的药物来源单一，主要药效成分明确。

本发明采用不同溶剂系统提取或经大孔吸附树脂富集获得具有治疗高尿酸血症和痛风药效提取物，工艺合理，操作性强，便于工业生产。

随着社会发展、饮食结构的改变和人类寿命的延长，痛风发病率逐年升高，已成为当今世界性常见病、疑难病之一。其危害性日趋严重，国际范围内对防治痛风药品的需求量猛增，本发明解决了目前国内外药品市场上缺少高效、质优、安全、可控的抗痛风中药的问题，获得的产品具有疗效好、安全可靠、质量可控，易于产业化，且易于服用、价格低廉等多种西药不可比拟的优点，可使国内外众多患者摆脱病痛，提高生活质量，具有广阔的市场前景。

本发明的实验研究充分证明，临床上唯一使用的黄嘌呤氧化酶抑制剂药物别嘌呤醇，虽能很显著的抑制尿酸的合成，降低高尿酸血症动物血清尿酸水平，但同时对正常动物血清水平也有显著降低作用。桑枝提取物具有降低高尿酸血症小鼠和大鼠血清尿酸水平的作用，但对正常动物的尿酸水平无显著影响。而且桑枝提取物能显著抑制大鼠尿酸钠引起的痛风性关节肿胀，降低炎症组织中K⁺含量和外周神经递质，保护炎症组织，减轻胶原纤维断裂状况。因此，与别嘌呤醇相比，由桑枝提取物制备获得的中药新制剂具有安全性高、有效性佳的优点。

以本发明获得的桑枝各提取物作为主要有效成分的药物，可以用于治疗高尿酸血症和痛风等疾病。桑枝各提取物配以适当药用辅料，可制成片剂、颗粒剂、胶囊剂或注射剂等制剂。这些剂型是按照本领域的技术人员所熟知的方法制备的。用于制造片剂、颗粒剂、胶囊剂等成型工艺的辅料是常用的助剂，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇，等等，表面活性剂、润滑剂、崩解剂、防腐剂、矫味剂、色素，等等。用于制造注射剂的溶剂是常用的注射用水、注射用油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺等，制剂中还含有其它附加剂，例如增溶剂、湿润剂、乳化剂、缓冲剂和混悬剂等。

具体实施方式

以下实施例仅作为进一步阐述发明之用，不能用来限制本发明。

实施例1：桑枝提取物WE对高尿酸血症和正常小鼠和大鼠血清尿酸水平和大鼠尿酸钠引起的痛风性关节炎的影响

取干燥的桑枝饮片，分别用10倍、8倍、6倍量水煎煮三次，每次1小时。合并煎煮液，减压浓缩、干燥，即得WE，得率为11.52％，总黄酮含量为1.1％。

WE对高尿酸血症和正常小鼠和大鼠尿酸水平的影响结果分别见表1和表2。在此实验条件下，WE高、中、低剂量组均非常显著地降低高尿酸血症小鼠和大鼠血清尿酸水平，其中WE高、中剂量组可将高尿酸血症小鼠血清尿酸水平恢复至正常；WE中、低剂量和高剂量组均可将高尿酸血症大鼠血清尿酸水平恢复至正常，WE高剂量组作用强度与阳性药物别嘌呤醇相近。

WE高、中、低剂量组对正常小鼠和大鼠血清尿酸水平无显著性影响，而别嘌呤醇组可显著地降低正常小鼠和大鼠血清尿酸水平。表1桑枝提取物WE对高尿酸血症小鼠和大鼠尿酸水平的影响( x±s)组别          剂量(mg/kg)      血清尿酸水平(mg/100ml)

                            小鼠           大鼠生理盐水组       -            8.87±0.17      10.26±0.27模型空白组       -            12.39±0.28     12.58±0.28WE组             26           9.64±0.19^*    10.26±0.18^**

             52           8.72±0.12^**   10.53±0.12^***

             104          8.62±0.10^***   9.63±0.28^***别嘌呤醇组       10           7.62±0.17^***   9.36±0.17^***

与模型空白组比较：P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.005表2  桑枝提取物WE对正常动物血清尿酸水平的影响( x±s)组别             剂量       血清尿酸水平(mg/100ml)

             mg/kg      小鼠             大鼠生理盐水组       -        3.52±0.12       3.40±0.26WE               26       3.38±0.15       3.54±0.34

             52       3.16±0.16       3.37±0.12

             104      2.91±0.19       3.20±0.29别嘌呤醇         10       1.99±0.16^***   2.21±0.16^***

与生理盐水组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

桑枝提取物WE对大鼠尿酸钠引起痛风性关节炎模型的影响结果显示，WE显著地抑制尿酸钠引起的大鼠痛风性关节炎肿胀，，作用与秋水仙碱相当(如下见表3)。受试关节周围软组织组织学研究表明，WE和秋水仙碱组能保护炎症组织，减轻胶原纤维断裂状况。WE能显著地降低炎症组织中K⁺含量(P＜0.001)和5-HT含量，作用强度与秋水仙碱相当(如下见表3)。而对受试关节周围软组织中NE、DA的含量有一定降低作用，但无显著性影响(数据略)。表3  桑枝提取物WE对大鼠尿酸钠引起痛风性关节炎肿胀程度的影响

                          ( x±s)

          剂量    踝关节周径      K⁺含量        5-HT含量

        (mg/kg)     (cm)          (mol/mg)         (g/g)生理盐水组    -       2.22±0.08      2.10±0.02     382±2.14模型空白组    -       3.28±0.12      7.42±0.06     723±9.45WE组          52      2.76±0.09      3.02±0.04^*   395±4.54^*秋水仙碱组    12.5    2.56±0.14      3.72±0.03^*   401±5.12^*与模型空白组比较：^*P＜0.001

实施例2：桑枝提取物AE-PH对高尿酸血症和正常小鼠血清尿酸水平的影响

取干燥的桑枝饮片，分别用8倍、8倍、6倍量80％乙醇水溶液热回流提取三次，每次2小时。提取液合并，减压回收乙醇，用10％NaOH调pH8.5，充分静置后离心，上清液用盐酸调至pH为4-6，静置，取沉淀，用蒸馏水洗涤至中性，干燥后即得AE-PH，得率为0.5％，总黄酮含量为23％。

AE-PH可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，具有良好的量效关系(表4)，而对正常小鼠血清尿酸水平无显著影响(数据略)。表4 桑枝提取物AE-PH对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响( x±s)组别               剂量(mg/kg)    血清尿酸水平(mg/100m1)生理盐水组             -             8.30±1.25模型空白组             -             12.01±1.19AE-PH                  68            7.97±1.05^***

                   34            8.17±2.64^***

                   17            10.44±2.01^*别嘌呤醇组             10            7.01±0.13^***

与模型空白组比较：P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

实施例3：桑枝提取物AE1、AE1-PE及AE1-1～AE1-4对高尿酸血症和正常小鼠血清尿酸水平的影响

取干燥的桑枝饮片，分别用8倍、8倍、6倍量80％乙醇水溶液热回流提取三次，每次2小时。提取液合并，减压浓缩，干燥后即得AE1，得率为4.18％，总黄酮含量为2.0％。

AE1与硅藻土拌和后，采用索氏回流法，经石油醚脱脂后，干燥即得AE1-PE，得率为3.2％，总黄酮含量为3.5％。

AE1与硅藻土拌和后，采用索氏回流法，经石油醚脱脂后，依次用氯仿、乙酸乙酯、甲醇和水提取至无色，各提取液分别浓缩、干燥，即得AE1-1、AE1-2、AE1-3和AE1-4，得率分别为3.16％、9.85％、64.17％、0.7％，总黄酮含量分别为10.1％、12.7％、6.0％和5.6％。

AE1、AE-1-PE及AE1-1～AE1-4均可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(表5)，而对正常小鼠血清尿酸水平均无显著影响(数据略)。表5 桑枝提取物AE1、AE-1-PE及AE1-1～AE1-4对高尿酸血症小鼠血

              清尿酸水平的影响( x±s)组别         剂量(mg/kg)    血清尿酸水平(mg/100ml)生理盐水组       -               8.10±1.45模型空白组       -               11.70±1.09AE1              550             8.02±1.15^***AE-1-PE          360             7.81±1.10^***AE1-1            17              7.87±2.94^***AE1-2            54              10.24±4.04^*AE1-3            350             8.09±2.25^***AE1-4            4.5             8.70±1.92^***别嘌呤醇组       10              7.21±0.16^***

与模型空白组比较：P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

实施例4：桑枝提取物AE2～AE6对高尿酸血症和正常小鼠尿酸水平的影响

取干燥的桑枝饮片，以4倍体积20％乙醇水溶液，热回流三次，每次2小时，提取液合并，减压浓缩，干燥即得AE2，得率为8.8％，总黄酮含量为2.3％；取干燥的桑枝饮片，以4倍体积40％乙醇水溶液，热回流三次，每次2小时，提取液合并，减压浓缩，干燥即得AE3，得率为5.8％，总黄酮含量为3.3％；桑枝饮片，以4倍体积60％乙醇水溶液，热回流2次，每次1小时，提取液合并，减压浓缩，干燥即得AE4，得率为4.8％，总黄酮含量为3.2％；桑枝饮片，以4倍体积70％乙醇水溶液，热回流1次，每次1.5小时，提取液合并，减压浓缩，干燥即得AE5，得率为2.7％，总黄酮含量为2.5％；桑枝饮片，以4倍体积95％乙醇水溶液，热回流1次，每次1.5小时，提取液合并，减压浓缩，干燥即得AE6，得率为2.1％，总黄酮含量为2.4％。

桑枝提取物AE2～AE6均非常显著地降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，并恢复至正常(表6)，而对正常小鼠血清尿酸水平无显著影响(数据略)。表6  桑枝提取物AE2～AE6对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影响( x±s)组别           剂量(mg/kg)    血清尿酸水平(mg/100ml)生理盐水组         -               7.78±1.39模型空白组         -               9.77±7.55AE2                712             8.15±0.19^**AE3                605             7.05±0.19^**AE4                500             7.18±0.45^**AE5                283             7.15±0.66^**AE6                240             7.25±0.66^**别嘌呤醇组         5               5.90±1.20^***

               10              5.31±2.34^***

与模型空白组比较：P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.005

实施例5：桑枝提取物AE7～AE10对高尿酸血症和正常小鼠尿酸水平的影响

取干燥的桑枝饮片，以7倍体积60％乙醇水溶液，热回流三次，每次2小时。提取液合并，减压浓缩，除去乙醇后经由大孔吸附树脂吸附，依次用20％、40％、60％、80％乙醇解析，解析液分别浓缩，干燥后即得AE7、AE8、AE9、AE10，得率分别为1.3％、0.91％、0.57％、0.34％，总黄酮含量分别为27.6％、54.2％、60.0％、67.9％。

AE7～AE10能显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(表7)，但对正常小鼠血清尿酸水平均无显著性影响(数据略)。

表7  桑枝提取物AE7～AE10对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影响

                      ( x±s)组别           剂量(mg/kg)      血清尿酸水平(mg/100ml)生理盐水组         -                4.85±0.04模型空白组         -                5.70±0.06AE7                94               5.37±0.03^*AE8                67               4.34±0.02^***AE9                39               4.92±0.06^***AE10               24               5.13±0.05^**别嘌呤醇组         5                4.97±0.05^**

               10               4.01±0.06^***

与模型空白组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

实施例6：桑枝提取物AE11～AE13对高尿酸血症和正常小鼠尿酸水平的影响

取干燥的桑枝饮片，以7倍体积60％乙醇水溶液，热回流三次，每次2小时。提取液合并，减压浓缩，除去乙醇后经硅藻土吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、甲醇等有机溶剂依次洗脱，分别回收溶剂，浓缩干燥，即得AE11～AE13，得率分别为1.3％、5.69％、2.57％，总黄酮含量分别为10.6％、54.2％、36.0％。

AE11～AE13能显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(表8)，但对正常小鼠血清尿酸水平均无显著性影响(数据略)。表8  桑枝提取物AE11～AE13对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影响

                       ( x±s)组别          剂量(mg/kg)        血清尿酸水平(mg/100ml)生理盐水组        -                   6.85±0.03模型空白组        -                   8.70±0.02AE11              44                  7.37±0.05^*AE12              192                 6.98±0.03^***AE13              87                  7.45±0.05^***别嘌呤醇组        5                   6.98±0.04^**

              10                  5.59±0.07^***

与模型空白组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

实施例7：桑枝提取物AE14～AE17对高尿酸血症和正常小鼠尿酸水平的影响

取干燥的桑枝饮片，以7倍体积60％乙醇水溶液，热回流三次，每次2小时。提取液合并，减压浓缩，除去乙醇后经聚酰胺柱层析，用水、30％乙醇、60％乙醇和80％乙醇依次洗脱，分别回收溶剂，浓缩干燥，即得AE14～AE17，得率分别为2.52％、8.48％、7.67％、8.88％，总黄酮含量分别为1.1％、48.5％、63.6％、21.3％。

AE14～AE17能显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(表9)，但对正常小鼠血清尿酸水平均无显著性影响(数据略)。表9  桑枝提取物AE14～AE17对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影响( x±s)组别        剂量(mg/kg)    血清尿酸水平(mg/100ml)生理盐水组      -               5.85±0.04模型空白组      -               7.87±0.02AE14            56              7.47±0.02AE15            188             6.68±0.03^*AE16            170             5.75±0.06^***AE17            197             6.80±0.05^*别嘌呤醇组      5               5.98±0.03^**

            10              5.07±0.05^***

与模型空白组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

实施例8：成型制剂的制备

取上述桑枝提取物1000g，加入500-5000g淀粉或糊精，混合均匀，制粒，压片，制得片剂；取上述桑枝提取物1000g，加入500-5000g淀粉，混合均匀，装胶囊，即得胶囊剂；取上述桑枝提取物1000g，加入1000-10000g植物油或聚乙二醇等高分子辅料，混合均匀，制成软胶囊。

取上述桑枝提取物1000g，加入1000-10000g糖粉或乳糖或可溶性淀粉等，混合均匀，制粒，得颗粒剂。取上述桑枝提取物1000g，加水及适量增溶剂溶解，分装，灭菌，制成口服液

取上述桑枝提取物1000g，加注射用添加剂和注射用水至1000ml，溶解，过滤，滤液调pH 5.0-9.0，灭菌，即得注射剂。

取上述桑枝提取物1000g，用乙醇溶解，制备成擦剂或喷雾剂；

取上述桑枝提取物1000g，用乙醇溶解，加入抛射剂后制成气雾剂。

取上述桑枝提取物1000g，与适量水溶性基质或橡胶等辅料混匀，涂布，制成巴布剂或橡胶剂。

Claims (9)

1、一种中药桑枝提取物，其特征在于该提取物是用下述方法提取获得：桑枝提取用溶媒可用以下数种溶媒中的一种或几种的组合：0～95％乙醇水溶液、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶剂，用以上溶媒在10-100℃温度下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶剂即得，桑枝提取物中总黄酮含量为0.5-80％。

2、根据权利要求1所述的桑枝提取物，其特征在于所述的提取方法中，提取液可用以下方法进一步纯化：①所得提取液用氢氧化钠等碱性物质调pH至7.5-9.5，静置，离心后上清液用盐酸调pH至4-6，静置，取沉淀，水洗至中性，干燥即得，总黄酮含量为10-60％；②所得提取液用石油醚或汽油等脱脂后，浓缩、干燥即得，总黄酮含量为1-5％；③所得提取液用石油醚或汽油等脱脂后，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分别或顺次提取，各提取液分别浓缩、干燥即得，总黄酮含量依次为5-20％、10-30％、5-30％、1-10％、1-10％；④所得提取液用大孔树脂吸附，以10～95％乙醇解吸附，解析液浓缩，干燥即得，总黄酮含量为20-80％；⑤所得提取液进一步经硅藻土、氧化铝等吸附剂吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂洗脱后，回收溶剂，浓缩、干燥即得，总黄酮含量为10-80％；⑥以聚酰胺、硅胶、离子交换树脂为填料，用柱层析分离，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂或水为洗脱剂，洗脱液浓缩，干燥即得，总黄酮含量为10-80％；⑦以上纯化方法可单用或采用几种方法的组合。

3、根据权利要求1所述的桑枝提取物，其特征在于其中含有黄酮类成分，包括芦丁、槲皮素、桑色素等，用总黄酮、芦丁、槲皮素、桑色素作为质量控制的指标。

4、根据权利要求1所述的提取物，其特征在于桑枝提取物可制成包括口服制剂、注射制剂或外用制剂等在内的药物或保健食品。

5、一种中药桑枝提取物的提取方法，其特征在于该方法采用的提取用溶媒可单用以下数种溶媒中的一种或几种的组合：0～95％乙醇水溶液、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等有机溶剂，用以上溶媒在10-100℃温度下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶剂即得。

6、根据权利要求5所述桑枝提取物的提取方法，其特征在于所述的提取方法中，提取液可用以下方法进一步纯化：①所得提取液用氢氧化钠等碱性物质调pH至7.5-9.5，静置，离心后上清液用盐酸调pH至4-6，静置，取沉淀，水洗至中性，干燥即得，总黄酮含量为10-60％；②所得提取液用石油醚或汽油等脱脂后，浓缩、干燥即得，总黄酮含量为1-5％；③所得提取液用石油醚或汽油等脱脂后，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分别或顺次提取，各提取液分别浓缩、干燥即得，总黄酮含量依次为5-20％、10-30％、5-30％、1-10％、1-10％；④所得提取液用大孔树脂吸附，以10～95％乙醇解吸附，解析液浓缩，干燥即得，总黄酮含量为20-80％；⑤所得提取液进一步经硅藻土、氧化铝等吸附剂吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂洗脱后，分别回收溶剂，浓缩、干燥即得，总黄酮含量为10-80％；⑥以聚酰胺、硅胶、离子交换树脂等为填料，用柱层析分离，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有机溶剂或水为洗脱剂，洗脱液浓缩，干燥即得，总黄酮含量为10-80％；⑦以上纯化方法可单用或采用几种方法的组合。

7、根据权利要求5所述桑枝提取物的提取方法，其特征在于采用该方法提取所得的提取物中含有黄酮类成分，包括芦丁、槲皮素、桑色素等，所得提取物可以总黄酮、芦丁、槲皮素、桑色素等作为质量控制的指标。

8、一种桑枝提取物的新用途，其特征在于以上述提取的桑枝提取物为有效成分制备成预防或治疗高尿酸血症和痛风的药物或保健食品。

9、根据权利要求8所述的桑枝提取物的新用途，其特征在于桑枝提取物在制备以下相关用途的药物或保健食品中的应用：①制备降低高尿酸血症血清尿酸水平的药物或保健食品中的应用；②制备预防或治疗痛风性关节炎药物或保健食品中的应用；③制备保护痛风性关节炎的炎症组织，减轻胶原纤维断裂状况的药物或保健食品中的应用；④制备降低痛风性关节炎的炎症组织中K⁺含量和外周神经递质的药物或保健食品中的应用。