CN1267665A - 高效止血原料药三七素的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明是由中药材三七制备三七素原料药的方法。凝血酶类止血药难以解决迅速止血有效急救的问题。本发明方法依次包括以下步骤:三七原料粉碎过4.0目或更细目筛→用75%以上浓度的醇提取→提取液另作用途,渣用水提取→过滤、浓缩→用正丁醇于40—70℃下萃取→正丁醇部份废弃,水溶部份经一次或一次以上树脂层析→从层析液中收集提取物。所得产品及其制剂能高效快速止血,且剂量极小给药途径便捷,易于在危重病情时起有效急救的作用。

Description

高效止血原料药三七素的制备方法

本发明属于一种以药用植物为原料生产药物的方法，特别是以中药材三七(Panaxnotoginseng(Burk)F.H Chen)为原料制备三七素(dencichine)原料药的方法。

中药材三七具有止血散瘀、活血化瘀、消肿定痛、舒筋活络诸功能，其中尤以止血功能称著。《本草纲目》称“三七止血散血定痛”；《本草拾遗》称“三七止血活血，止血不伤新”。历版《中华人民共和国药典》对三七的主治功能均界定其为止血。数百年来，历代医家将三七作为止血上品，广泛用于跌打损伤、内伤出血等内外出血症。但作为速效止血药，国内外至今尚无专门的三七止血成份提纯物及其制备方法，更无止血成份提纯物制剂。而生化药凝血酶类止血药，由于使用剂量较大，给药过程较慢，难以解决迅速止血有效急救的问题。

本发明的目的是提供一种制备高效止血原料药——三七素(dencichine)的方法。

本发明方法依次包括以下步骤：

三七原料粉碎过40目或更细目筛→用75％以上浓度的醇提取→提取液另作用途，渣用水提取→过滤、浓缩→用正丁醇于40-70℃下萃取→正丁醇部份废弃，水溶部份经一次或一次以上树脂层析→从层析液中收集提取物。

以上步骤和工艺参数的进一步优化：所说树脂层析为两次，第一次层析采用SephadexLH-20凝胶树脂，第二次层析采用CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂。从层析液中收集提取物的过程依次包括浓缩→脱色→结晶→过滤、干燥→成品。脱色分氧化铝过滤和活性炭吸附两次完成；干燥采用真空干燥。

再进一步优化的步骤和工艺参数为：

(1)、粉碎：过60目筛，

(2)、醇提取：用80％以上甲醇或乙醇，连续渗漉循环提取2-3次，每次24～48小时，合并提取液，

(3)、水提取；用去离子水于常温条件下，连续渗漉循环提取2-4次，每次24～48小时，合并提取液，

(4)、过滤：先粗滤，再用精密滤棒真空吸滤，

(5)、浓缩：真空减压浓缩至8～10波美度，

(6)、正丁醇萃取：将浓缩液注入已清洗好的萃取锅中，加入3～5倍量正丁醇，在55-65℃条件下搅拌20-40分钟，静置3-5小时，待分层后，收集水溶液，废弃含杂质的正丁醇液，

(7)、层析：分别将Sephadex LH-20凝胶树脂和CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂装入两个层析柱中，预处理至中性水饱和状，滤析时，先关闭柱底阀，缓缓注入水提浓缩液使分布均匀，吸附饱和后，再开启柱底阀排出废液，并用乙醇冲洗，吸附物(三七素)用蒸馏水反复洗脱、收集合并，

(8)、脱色：洗脱液过氧化铝柱，脱去深色素，滤液加3～5％活性炭，在反应釜中加热至75-85℃，搅拌15-25分钟，脱去浅色素，精滤除去活性炭后，得纯三七素水溶液，

(9)、浓缩结晶：纯三七素水溶液减压浓缩至15～20波美度后，排出静置20小时以上，结晶析出，过滤干燥后即为成品三七素原料药。

用本发明方法从三七中提取得到的三七素(dencichine)为β-N-乙二酸-草酰基-L-α，β-二氨基丙酸，化学结构式为：

性状：无色板状结晶，味苦涩。可溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙醇等有机溶剂；

熔点：207～208℃；

鉴别：(1)本品与荧光胺试剂反应，产生强烈荧光；(2)高效薄层(HPTCL)扫描测定(检出量4ng)，最大吸收波长395nm；(3)氨基酸层析谱测定，保留吸收峰值为5.40～5.41。

药效学研究：1、分别用大鼠、家兔作血小板生成与聚集试验，结果证明本品具有极强的血小板生成和聚集作用。与对照品止血环酸(transamine)比，最大聚集率为4∶1；2、用绒膜激素(HCG)2单位引起未成熟雌小鼠卵巢出血点动物数为指标，注射三七素，观察到能使卵巢出血点动物显著减少；3、分别用毛细管折断法、小鼠断尾动脉法，设止血环酸为对照品，测得注射本品2mg/kg，小鼠出血缩短时间为7分钟；而注射止血环酸100mg/kg，小鼠出血缩短时间仅为0.5分钟。三七素的止血活性，是等量止血环酸的700倍。

毒理研究：1、神经毒作用：30～40g仔鸡腹腔给药20mg，2～6小时后呈现神经毒症状。表现为颈僵硬，腿肌麻痹伸直，6小时后症状逐渐消失，说明本品在过高剂量时有神经毒作用；2、急性毒性试验：大鼠每3天断尾动脉一次，注射本品低剂量组1mg/kg，高剂量组5mg/kg，连续给药9天，未显毒副作用。半数致死量(LD₅₀)为1043mg/kg，为人用剂量的522倍；3、长期毒性试验：上法连续给药90天，恢复期30天，动物外观无明显变化，血液生化指标，除血小板数增多外，其他各项无明显变化；心、肺、肝、胆、脾、肾、肠、胃、肾上腺等组织无明显变化。本品的明显副作用是创伤处止血后留瘀。研究结论表明：

(1)三七素具有极强的止血活性，其等量药效，大大超过国内外已有止血药；

(2)本品药效高，显效快，可广泛用于内外出血症的治疗，用于外科手术止血，可大大减少手术期间的失血量，提高手术安全性；对血小板缺少症、血小板聚集无力症，同时具有治疗作用。

(3)本品一次使用剂量轻微，仅1～2mg即达到止血作用，不宜使用过高剂量，避免出现神经毒作用。

(4)本品有止血留瘀作用，应与三七皂甙等化瘀类药物配合使用，以便祛除血瘀。

本发明的积极效果是提供了一种获取三七止血成份提纯物的方法，所得产品为高效止血原料药——三七素(dencichine)。该药物及其制剂具有高效快速止血的特点，且剂量极小，给药途径便捷，易于在危重病情时起有效急救的作用。

实施例1：

将三七块根洗净，粉碎，过60目筛，放入提取罐中用4倍量80％乙醇循环浸提3次，每次36小时，排出、合并滤液另作用途(提取三七皂甙等)；残渣用4倍量去离子水常温循环浸提3次，每次48小时，排出并合并提取液。经粗滤、精滤(精密沙棒吸滤)，再注入真空浓缩锅中，加热减压浓缩至8波美度，排出，转入萃取锅中，再加4倍量正丁醇，于65℃条件下自动搅拌30分钟后，静置4小时，待混合液完全分层后，排出水溶液，废弃含杂质的正丁醇液。水溶液先过Sephadex LH-20凝胶树脂柱层析，用蒸馏水洗脱；洗脱液再过CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂柱层析，用蒸馏水洗脱，得粗三七素液。粗三七素液先注入氧化铝柱滤去深色素，再放入萃取锅中，加热至80℃，加入4％活性炭，开启自动搅拌器搅拌20分钟，待色素吸附完全后，用精密滤棒吸滤，除去活性炭，得纯三七素液。纯三七素液倾入清洗干净的真空浓缩锅中，加热减压浓缩至20波美度，排出静置24小时，结晶析出。再用滤布滤去废液，晶体放入真空干燥器中，在40℃条件下抽干水份，即得含量达95％以上三七素成品。成品抽检合格后，称量，以塑袋密封包装入库。

实施例2：

将三七块根洗净，粉碎，过40目筛，放入提取罐中用5倍量80％以上乙醇循环浸提3次，每次24小时，排出、合并滤液另作用途(提取三七皂甙等)；残渣用3倍量去离子水常温循环浸提3次，每次24小时，排出并合并提取液。经粗滤、精滤(精密沙棒吸滤)，再注入真空浓缩锅中，加热减压浓缩至8-10波美度，排出，转入萃取锅中，再加4倍量正丁醇，于60℃条件下自动搅拌30分钟后，静置4小时，待混合液完全分层后，排出水溶液，废弃含杂质的正丁醇液。水溶液先过Sephadex LH-20凝胶树脂柱层析，用蒸馏水洗脱；洗脱液再过CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂柱层析，用蒸馏水洗脱，得粗三七素液。粗三七素液先注入氧化铝柱滤去深色素，再放入萃取锅中，加热至80℃，加入5％活性炭，开启自动搅拌器搅拌20分钟，待色素吸附完全后，用精密滤棒吸滤，除去活性炭，得纯三七素液。纯三七素液倾入清洗干净的真空浓缩锅中，加热减压浓缩至15～20波美度，排出静置24小时，结晶析出。再用滤布滤去废液，晶体放入真空干燥器中，在40℃条件下抽干水份，即得含量达95％以上三七素成品。成品抽检合格后，称量，以塑袋密封包装入库。

用以上实施例制得的三七素原料药，可进一步制得单方或复方三七素注射剂，供静脉注射；或制为单方或复方三七素片剂、三七素硬胶囊剂或软胶囊剂供口服；或制为三七素散剂供外敷；或制为单方或复方三七素喷雾剂供外用；或制为单方或复方三七素止血贴供创面敷贴；或制为微纤三七素胶原，有极强的吸附与被创伤组织吸收溶解的功能，可供出血创面或手术创伤组织部位的紧急止血。

总之，用三七素原料药可生产各种剂型药品，他们具有剂量小、高疗效、显效快、易使用、便携带等特点，可广泛用于各种内外出血症、手术止血的治疗，并具急救的特点。由于毒副作用极微，使用安全，具有较高经济和社会效益。

以上实施利仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。

Claims (3)

1、一种高效止血原料药三七素的制备方法，其特征是依次包括以下步骤：三七原料粉碎过40目或更细目筛→用75％以上浓度的醇提取→提取液另作用途，废渣用水提取→过滤、浓缩→用正丁醇于40-70℃下萃取→正丁醇部份废弃，水溶部份经一次或一次以上树脂层析→从层析液中收集提取物。

2、如权利要求1所说的高效止血原料药三七素的制备方法，其特征是：第一次层析采用Sephadex LH-20凝胶树脂，第二次层析采用CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂，从层析液中收集提取物的过程依次包括浓缩→脱色→结晶→过滤、干燥→成品，脱色分氧化铝过滤和活性炭吸附两次完成，干燥采用真空干燥。

3、如权利要求2所说的高效止血原料药三七素的制备方法，其特征是：

(1)、粉碎：过60目筛，

(2)、醇提取：用80％以上甲醇或乙醇，连续渗漉循环提取2-3次，每次24～48小时，合并提取液，

(3)、水提取：用去离子水于常温条件下，连续渗漉循环提取2-4次，每次24～48小时，合并提取液，

(4)、过滤：先粗滤，再用精密滤棒真空吸滤，

(5)、浓缩：真空减压浓缩至8～10波美度，

(6)、正丁醇萃取：将浓缩液注入已清洗好的萃取锅中，加入3～5倍量正丁醇，在55-65℃条件下搅拌20-40分钟，静置3-5小时，待分层后，收集水溶液，废弃含杂质的正丁醇液，

(7)、层析：分别将Sephadex LH-20凝胶树脂和CM-Sephadex-C-25°离子交换树脂装入两个层析柱中，预处理至中性水饱和状，滤析时，先关闭柱底阀，缓缓注入水提浓缩液使分布均匀，吸附饱和后，再开启柱底阀排出废液，并用乙醇冲洗，吸附物(三七素)用蒸馏水反复洗脱、收集合并，

(8)、脱色：洗脱液过氧化铝柱，脱去深色素，滤液加3～5％活性炭，在反应釜中加热至75-85℃，搅拌15-25分钟，脱去浅色素，精滤除去活性炭后，得纯三七素水溶液，

(9)、浓缩结晶：纯三七素水溶液减压浓缩至15～20波美度后，排出静置20小时以上，结晶析出，过滤干燥后即为成品三七素原料药。