CN101105495A - 肿瘤标志物质控品的制备方法 - Google Patents

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肿瘤标志物质控品的制备方法，属于生物制品技术领域。包括以下步骤：在成品人血浆中加入氯化钙溶液后在36－38℃温度下孵育1－3小时，以3500－4500转/每分钟速度离心分离，并过滤除去血浆中的纤维蛋白制得质控品血清基质；在质控品血清基质中添加一定含量范围的肿瘤标志物阳性标本后制得的质控品粗成品，再添加防腐剂、混合均匀后进行分装、低温真空干燥和测定。上述肿瘤标志物质控品的制备方法，选用来源充足、易获得的成品人血浆为材料，血浆经处理后其有机物的成份与血清在理论上完全一致，不仅保证了质控品数量和质量，且添加剂和调制物数量少、瓶间差异小、冻干品复溶后稳定性好、质控检测项目齐全、生产成本低、有效期长。

Description

肿瘤标志物质控品的制备方法
技术领域
本发明属于生物制品技术领域，具体为一种肿瘤标志物质控品的制备方法。
背景技术
在肿瘤标志物的检测中，大多数肿瘤标志物由于其结构的复杂性，目前尚缺乏国际标准，所以造成不同的检测方法或不同厂家的检测产品所得的检测结果可能出现不一致性。在肿瘤标志物检测质量管理体系中，应用质控品进行室内质控和参加实验室间的质量评价是保证实验室检测结果质量，减少误差，使不同实验室之间的结果具有较好可比性的重要措施。
目前在免疫质控品制备中基质成分的来源主要有动物血清和混合正常人血清，但采用动物血清或混合正常人血清主要存在以下几方面缺陷：1.医学检验主要是以人血清为检测目的，用动物血清作为基质存在不可比性，在理论上存在不可预知的干扰因素，动物血中可能存在不可知的感染性病原体；2.混合正常人血清来源之一是医学检验日常工作中剩余的标本，由于每个剩余标本血清量一般为2毫升以下，不适合商品化生产要求数千毫升以上的用量，同时对每个标本进行传染性病原体的检测也代价很高；3.混合正常人血清另一来源是志愿者供给，血液采集后自然凝固分离血清，但要浪费血液中的另一主要成分-红细胞，相对于血液资源的宝贵，也是不应取的方法。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明旨在设计提供一种肿瘤标志物质控品的制备方法的技术方案。
所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)采用成品人血浆，在成品人血浆中加入氯化钙溶液，混合均匀，使每升血浆中氯化钙含量为3-8克；
2)上述加入氯化钙溶液的血浆在36-38℃温度下孵育1-3小时，以3500-4500转/每分钟速度离心分离，并过滤除去血浆中的纤维蛋白制得质控品血清基质；
3步骤2)制得的质控品血清基质中添加下列含量范围的肿瘤标志物阳性标本：甲胎蛋白(AFP)500-800μg/l、癌胚抗原(CEA)10-20μg/l、糖类抗原125(CA125)100-200 KU/l、糖类抗原19-9(CA19-9)150-250KU/l、糖类抗原15-3(CA15-3)20-40KU/l、总前列腺特异抗原(TPSA)5-15μg/l、游离前列腺特性抗原(FPSA)0.5-1.5μg/l、鳞状上皮癌细胞抗原(SCC)1-2μg/l、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG)500-800IU/l、β2-微球蛋白(β2-MG)600-1000μg/l、铁蛋白(FER)80-200μg/l、神经元特异性烯醇化酶(NSE)8-20μg/l、糖类抗原72-4(CA72-4)5-20KU/l、甲状腺球蛋白(TG)10-80μg/l、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)1-3μg/l，所述的含量范围是指质控品总体积中所含的量；
4)步骤3)制得的质控品粗成品按常规技术添加防腐剂、混合均匀后进行分装、低温真空干燥和复溶后测定。
所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤1)中每升血浆中氯化钙含量控制为4-6克。
所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤1)中加入的氯化钙溶液浓度为40-60％(W/V)。
所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤2)中的孵育温度为36.5-37.5℃。
所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤2)中的孵育时间为1.5-2.5小时。
所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤2)中的离心速度为3800-4200转/每分钟。
所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤3)中添加的肿瘤标志物阳性标本含量范围为：甲胎蛋白(AFP)600-700μg/l、癌胚抗原(CEA)12-18μg/l、糖类抗原125(CA125)120-180kU/l、糖类抗原19-9(CA19-9)180-220KU/l、糖类抗原15-3(CA15-3)25-35KU/l、总前列腺特异抗原(TPSA)8-12μg/l、游离前列腺特性抗原(FPSA)0.8-1.2μg/l、鳞状上皮癌细胞抗原(SCC)1.2-1.8μg/l、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG)600-700IU/l、β2-微球蛋白(β2-MG)700-900μg/l、铁蛋白(FER)120-150μg/l、神经元特异性烯醇化酶(NSE)12-18μg/l、糖类抗原72-4(CA72-4)12-18KU/l、甲状腺球蛋白(TG)50-60μg/l、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)1.5-2.5μg/l。
上述的肿瘤标志物质控品的制备方法，选用来源充足、易获得的成品人血浆为材料，血浆经处理后其有机物的成份与血清在理论上完全一致，不仅保证了质控品数量和质量，且制备工艺简单、添加剂和调制物数量少、瓶间差异小、冻干品复溶后稳定性好、质控检测项目齐全、生产成本低、有效期长。
具体实施方式
以下给出本发明的具体实施方式，并对本发明作进一步详细描述。
1)采用血液中心或商业血浆采集机构提供的成品人血浆，在成品人血浆中添加氯化钙溶液，氯化钙溶液的浓度选择40％、50％。60％(W/V)；每升血浆中氯化钙含量控制为3克、6克、8克进行分别试验；
2)上述加入氯化钙溶液的血浆在37℃温度下孵育2小时，使其自然凝固后以4000转/每分钟速度进行离心分离，并通过石棉网等方法过滤除去血浆中的纤维蛋白制得质控品血清基质。同时选择孵育温度36℃、38℃；孵育1小时、3小时；离心速度3500转/每分钟、4500转/每分钟分别进行试验；
3)步骤2)制得的质控品而清基质，按下列肿瘤标志物的含量添加肿瘤标志物阳性标本分别进行试验：甲胎蛋白(AFP)500μg/l、700μg/l、800μg/l、癌胚抗原(CEA)10μg/l、15μg/l、20μg/l、糖类抗原125(CA125)100KU/l、150KU/l、200KU/l、糖类抗原19-9(CA19-9)150KU/l、200KU/l、250KU/l、糖类抗原15-3(CA15 3)20KU/l、30KU/l、40KU/l、总前列腺特异抗原(TPSA)5μg/l、10μg/l、15μg/l、游离前列腺特性抗原性(FPSA)0.5μg/l、1.0μg/l、1.5μg/l、鳞状上皮癌细胞抗原(SCC)1μg/l、1.5μg/l、2μg/l、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG)500IU/l、600IU/l、800IU/l、β2-微球蛋白(β02-MG)600μg/l、800μg/l、1000μg/l、铁蛋白(FER)80μg/l、150μg/l、200μg/l、神经元特异性烯醇化酶(NSE)8μg/l、15μg/l、20μg/l、糖类抗原72-4(CA72-4)5KU/l、10KU/l、20KU/l、甲状腺球蛋白(TG)10μg/l、50μg/l、80μg/l、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)1μg/l、2μg/l、3μg/l，所述的含量为质控品总体积中所含的量；
4)步骤3)制得的质控品粗成品按总体积每升添加1～2g/l的NaN3防腐剂，混合均匀后精密分装于玻璃瓶中，每瓶分装量为1ml或2ml，然后敞口经全自动真空冷冻干燥机冷冻真空干燥加胶塞、加盖，分发三家三甲医院临床实验室进行上述肿瘤标志物含量测定，确定参考值。
上述肿瘤标志物质控品的制备方法，成品人血浆经处理后其有机物成份与血清在理论上完全一致。按Clauss法和Ratnoff-Menzie法检测均未能检测到纤维蛋白原，制备得到的质控品室温复溶其外观仍保持清晰透明，瓶间差异小，CV＜1％，2～8℃储藏稳定期大于18个月。瓶间差与稳定性与同类进口产品(Bio-Rad公司出品)比较统计学无显著差异(p＞0.05)且生产成本只有同类进口产品(Bio-Rad公司出品)的50％左右。

Claims (7)

1.肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)采用成品人血浆，在成品人血浆中加入氯化钙溶液，混合均匀，使每升血浆中氯化钙含量为3-8克；
2)上述加入氯化钙溶液的血浆在36-38℃温度下孵育1-3小时，以3500-4500转/每分钟速度离心分离，并过滤除去血浆中的纤维蛋白制得质控品血清基质；
3步骤2)制得的质控品血清基质中添加下列含量范围的肿瘤标志物阳性标本：甲胎蛋白(AFP)500-800μg/l、癌胚抗原(CEA)10-20μg/l、糖类抗原125(CA125)100-200 KU/l、糖类抗原19-9(CA19-9)150-250KU/l、糖类抗原15-3(CA15-3)20-40KU/l、总前列腺特异抗原(TPSA)5-15μg/l、游离前列腺特性抗原(FPSA)0.5-1.5μg/l、鳞状上皮癌细胞抗原(SCC)1-2μg/l、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG)500-800IU/l、β2-微球蛋白(β2-MG)600-1000μg/l、铁蛋白(FER)80-200μg/l、神经元特异性烯醇化酶(NSE)8-20μg/l、糖类抗原72-4(CA72-4)5-20KU/l、甲状腺球蛋白(TG)10-80μg/l、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)1-3μg/l，所述的含量范围是指质控品总体积中所含的量；
4)步骤3)制得的质控品粗成品按常规技术添加防腐剂、混合均匀后进行分装、低温真空干燥和复溶后测定。
2.根据权利要求1所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤1)中每升血浆中氯化钙含量控制为4-6克。
3.根据权利要求1所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤1)中加入的氯化钙溶液浓度为40-60％(W/V)。
4.根据权利要求1所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤2)中的孵育温度为36.5-37.5℃。
5.根据权利要求1所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤2)中的孵育时间为1.5-2.5小时。
6.根据权利要求1所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤2)中的离心速度为3800-4200转/每分钟。
7.根据权利要求1所述的肿瘤标志物质控品的制备方法，其特征在于步骤3)中添加的肿瘤标志物阳性标本含量范围为：甲胎蛋白(AFP)600-700μg/l、癌胚抗原(CEA)12-18μg/l、糖类抗原125(CA125)120-180kU/l、糖类抗原19-9(CA19-9)180-220KU/l、糖类抗原15-3(CA15-3)25-35KU/l、总前列腺特异抗原(TPSA)8-12μg/l、游离前列腺特性抗原(FPSA)0.8-1.2μg/l、鳞状上皮癌细胞抗原(SCC)1.2-1.8μg/l、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG)600-700IU/l、β2-微球蛋白(β2-MG)700-900μg/l、铁蛋白(FER)120-150μg/l、神经元特异性烯醇化酶(NSE)12-18μg/l、糖类抗原72-4(CA72-4)12-18KU/l、甲状腺球蛋白(TG)50-60μg/l、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)1.5-2.5μg/l。
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