CN109342728A - 一种适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种适用肿瘤标志物Pro‑GRP定量检测的质控品，首先选择适合肿瘤标志物Pro‑GRP的去激素血清，解冻后置于2～8℃保存，依次加入0.1‑0.5%的ADP、Proclin300、硫酸庆大霉素，1%‑10%海藻糖，得到基质液置于2～8℃保存；基质液中加入肿瘤标志物Pro‑GRP抗原，然后再加入十二烷基硫酸钠，得到液态肿瘤标志物Pro‑GRP质控品；将其分装在棕色玻璃瓶中，真空冷冻干燥后即得到肿瘤标志物Pro‑GRP质控品成品，置于2～8℃冰箱保存。本发明制备的肿瘤标志物Pro‑GRP质控品均一性和稳定性好，不受运输、温度等因素影响，可适用于不同仪器型号、不同试剂的定量检测。本发明质控品为冻干品，质量可靠，准确度高；制备质控品的原料来源广泛，制备方法简单，成本低廉。

Description

一种适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品

技术领域

本发明涉及肿瘤标志物，尤其是涉及一种适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品。

背景技术

肺癌是目前中国男性发病率第一位、女性发病率第二位的高发肿瘤类型，肺癌的死亡率高居所有恶性肿瘤死亡率榜首。实现肺癌的早发现，早诊断和早治疗对改善患者长期生存有重要的医学价值。

Pro-GRP是胃泌素释放肽（GRP）的前体，与哺乳动物和两栖类的铃蟾肽有相似的结构，在肺的组织病理学分类中已经应用多年。GRP在人的神经系统发挥神经递质的作用，也存在于胃肠道和呼吸道的神经内分泌细胞中。由于GRP在血液中的不稳定性（半衰期只要2分钟），因此一般是将更稳定的Pro-GRP作为血清学标志物。2014年发布的《原发性支气管肺癌早期诊断专家共识》（草案）就推荐Pro-GRP为小细胞肺癌（SCLC）诊断和鉴别诊断的首选标志物。

Pro-GRP主要在小细胞肺癌（SCLC）中显著升高，在局限期SCLC患者血清已有SCLC的明显升高，此外，在少数肿瘤类型甲状腺髓样癌Pro-GRP也有升高报道。但在非小细胞肺癌（NSCLC）和其它肿瘤和肺部良性疾病中，Pro-GRP升高并不显著。

目前肿瘤标志物Pro-GRP质控品的制备方法是：将肿瘤标志物Pro-GRP抗原加入基质液中，然后进行分装冻干。该种工艺制备的质控品肿瘤标志物Pro-GRP在基质液中下降速度较快（由于基质液成分复杂，某些成分使Pro-GRP稳定性较差），导致其稳定性和均匀性较差，不能满足实验室正常使用，给客户带来了不便。且商品化的试剂厂商提供的质控品也不能适用肿瘤标志物Pro-GRP所有定量项目的检测。由于质控品是实现体外诊断试剂临床检测及监督检验结果一致的主要工具，因此，亟待开发出安全、稳定、有效、准确性高的能适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能有效减弱肿瘤标志物Pro-GRP在基质液中的下降速度，产品均一性、稳定性良好且适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品，该质控品能满足临床对肿瘤标志物Pro-GRP的质量控制要求，更准确的保证临床样本检测结果的准确性。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品，包括以下具体制备步骤：

第一步，选择适合肿瘤标志物Pro-GRP的去激素血清（血清中Pro-GRP本底值≤100pg/ml），解冻后放置于2～8℃保存；

第二步，在第一步的去激素血清中依次加入0.1-0.5%的ADP、Proclin300、硫酸庆大霉素，1%-10%海藻糖，充分搅拌混匀，得到澄清透亮的基质液，放置于2～8℃保存；

第三步，在第二步的基质液中加入肿瘤标志物Pro-GRP抗原（根据Pro-GRP抗原的效价确定合适比例），然后再加入0.1%-10%的十二烷基硫酸钠，充分震荡搅拌均匀后，得到液态肿瘤标志物Pro-GRP质控品；

第四步，将液态肿瘤标志物Pro-GRP质控品分装在棕色玻璃瓶中，放入已预冷的真空冷冻干燥机进行真空冷冻干燥（温度-30℃～-40℃、冻干时间18～26h），得到肿瘤标志物Pro-GRP质控品成品，置于2～8℃冰箱保存。

所述第一步中所用的去激素血清可替换为血浆，后续步骤无改变。

本发明的优点在于制备的肿瘤标志物Pro-GRP质控品均一性和稳定性好，不受运输、温度等因素影响，可适用于不同仪器型号、不同试剂的定量检测。本发明基质液的组分和配比科学，并加入了特定浓度的十二烷基硫酸钠，有效减弱了肿瘤标志物Pro-GRP在基质液中的下降速度，复溶后检测过程稳定时间较长，具备检测重复性、准确性高，能满足临床对肿瘤标志物Pro-GRP检测的质量控制要求，可以更准确地检测临床样本检测结果的准确性；本发明质控品成品为冻干品，可使血液中肿瘤标志物Pro-GRP活性稳定，2～8℃环境效期可达24个月，质量可靠，准确度高；同时运输存储方便，可大大降低了存储费用；制备质控品的原料来源广泛，制备方法简单，成本低廉。

具体实施方式

实施例1 制备适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品

具体制备步骤为：

第一步，选择适合肿瘤标志物Pro-GRP的去激素血清（外购的去激素人血清，血清中Pro-GRP本底值≤100pg/ml），解冻后放置于2～8℃保存；

第二步，在第一步的每升去激素血清中依次加入1～5g的ADP、1～5ml的Proclin300、1～5g的硫酸庆大霉素，50～100g的海藻糖，充分搅拌混匀，得到澄清透亮的基质液，放置于2～8℃保存；

第三步，取等体积的基质液五份（各500ml），分别加入0.31μl、1.43μl、2.78μl、3.85μl、5.56μl相同效价的肿瘤标志物Pro-GRP抗原，得到1-80pg/mL、80-200pg/mL、200-800pg/mL、800-1500pg/mL、1500-5000pg/mL五组不同浓度水平的初级液态肿瘤标志物Pro-GRP质控品；注意：为适应各种型号的仪器，各浓度点的设置应涵盖主流生产厂家仪器检测范围内的点值；

第四步，将第三步中得到的浓度不同的每组初级液态肿瘤标志物Pro-GRP质控品分成等量的四份，分别加入0.0%、0.1%、0.2%、0.5%的十二烷基硫酸钠（SDS）,充分震荡搅拌均匀后，在罗氏e601上进行检测；

第五步，经过不同的时间间隔后，再分别进行一次检测，并记录数据，具体数据见下表：

第六步，从记录的数据中可以看出，肿瘤标志物Pro-GRP在基质液中降低最缓慢的SDS百分比为0.2%，SDS用量过多或过少均增加肿瘤标志物Pro-GRP在基质液中的下降速度，然后用同样的方式配制大量的肿瘤标志物Pro-GRP液态质控品，并分装于4mL、10mL等的棕色玻璃瓶中，装样量为1mL/瓶、2mL/瓶、3mL/瓶等；

第七步，将上述棕色玻璃瓶放入已预冷的真空冷冻干燥机进行真空冷冻干燥（温度-30℃～-40℃、冻干时间20～48h），最后将棕色玻璃瓶放置2～8℃冰箱保存，得到肿瘤标志物Pro-GRP质控品。

实施例2 本发明制备的肿瘤标志物Pro-GRP质控品的性能测试

对装量分别为1mL/瓶、2mL/瓶、3mL/瓶的冻干态肿瘤标志物Pro-GRP质控品进行稳定性和均匀性检测，具体结果如下表：

从上表看出，冻干态肿瘤标志物Pro-GRP质控品开瓶复溶后2～8℃可保存7天（降幅≤15%），瓶内变异≤15%，瓶间变异≤10%，有效的提高了Pro-GRP的稳定性和均匀性。

Claims (2)

1.一种适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品，其特征在于：包括以下具体制备步骤：

第一步，选择适合肿瘤标志物Pro-GRP的去激素血清，解冻后放置于2～8℃保存；

第二步，在第一步的去激素血清中依次加入0.1-0.5%的ADP、Proclin300、硫酸庆大霉素，1%-10%海藻糖，充分搅拌混匀，得到澄清透亮的基质液，放置于2～8℃保存；

第三步，在第二步的基质液中加入肿瘤标志物Pro-GRP抗原，然后再加入0.1%-10%的十二烷基硫酸钠，充分震荡搅拌均匀后，得到液态肿瘤标志物Pro-GRP质控品；

第四步，将液态肿瘤标志物Pro-GRP质控品分装在棕色玻璃瓶中，放入已预冷的真空冷冻干燥机进行真空冷冻干燥，得到肿瘤标志物Pro-GRP质控品成品，置于2～8℃冰箱保存。

2.根据权利要求1所述的适用肿瘤标志物Pro-GRP定量检测的质控品，其特征在于：所述第一步中所用的去激素血清替换为血浆。