CN101618213A - 麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法，其步骤包括：(1)分别制备麻疹疫苗原液、腮腺炎疫苗原液和乙型脑炎疫苗原液；(2)将三种单价疫苗原液分别与疫苗保护剂明胶蔗糖和人血白蛋白混合，得麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液；(3)将三种单价疫苗液，按麻疹单价疫苗液∶腮腺炎单价疫苗液∶乙型脑炎单价疫苗液的体积比1～3∶1～5∶2～7的比例混合，分装，冷冻干燥，即制成麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗。本发明对现有技术中各单价疫苗与疫苗保护剂的混合时间、各单价疫苗的混合比例、联合疫苗的配制顺序和疫苗保护剂四项关键工艺做了较大的改进和调整，与现有技术相比，具有制备工艺简单、疫苗效价稳定性、成本低廉、适合规模化生产等优点。

Description

麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗及其制备方法

技术领域

本发明涉及疾病预防用疫苗，特别涉及联合疫苗技术，具体涉及麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗。

背景技术

随着各种新疫苗的迅速发展，预防接种的疫苗越来越多，纳入儿童计划免疫(EPI)中疫苗种类不断增加，婴幼儿接种次数也随之增多，从出生到入学前要注射各种疫苗达22～26次之多，这不仅使防疫部门和儿童的免疫负担大大加重，费用增加，同时增加了交叉感染的机会。为了降低疫苗接种费用，减少儿童接种针次，提高免疫覆盖率，加速实现疫苗的防病、灭病效果，迫切需要研究开发联合疫苗。1990年WHO等5个国际组织共同发起并创立了“全球儿童免疫计划”(CVI)，CVI的宗旨是研究开发理想的联合疫苗，即研究开发通过一剂或两剂接种即可预防多种疾病的联合疫苗。

2007年3月5日，温家宝总理在十届全国人大会议上指出，今年将扩大国家免疫规划的范围，将甲肝、流脑等15种可以通过接种疫苗有效预防的传染病纳入国家免疫规划的范围。国家免疫规划的扩容，由6苗防7病扩大为14苗防15病，其中疫防的15种传染病中包括麻疹、腮腺炎、乙型脑炎。但我国目前使用的疫苗大部分还是几十年前的品种，多是单抗原疫苗，这必定增多接种次数，影响免疫覆盖率。要解决这些问题，疫苗品种更新换代，研制开发联合疫苗是最好的办法之一。因此，研究开发出安全有效的联合疫苗，是实现国家免疫规划扩容，做好卫生防疫工作面临的重要课题。麻疹、腮腺炎、乙型脑炎是三种由不同病毒引发的急性传染病，均具有高度传染性，可能导致严重并发症甚至死亡，对这三种疾病的预防是卫生防疫工作的重要任务。

麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗的工艺和生产用原料相似，制品产量大、工艺稳定，这三种单价苗接种对象和接种部位相同，免疫程序相近，研制成联合疫苗后，按照免疫程序8个月时初免，7岁时加强免疫，给预防接种带来很大方便，可以减轻防疫部门及儿童的免疫负担，既减少防疫部门工作量，降低儿童接种费用，减少儿童的接种次数及交叉感染的机会，同时可以扩大接种面，提高免疫覆盖率，便于医案的保管，达到一针多免的效果，更快更好的实现国家免疫规划的扩容。

本发明专利申请人武汉生物制品研究所于2000年开始进行麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的研究工作，2001年本发明专利申请人将麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗原液，按体积比1∶1∶1的比例进行混合的方案，进行了该联合疫苗200支/批，连续3批的小规模试制，并对制成的联合疫苗的安全性、病毒滴度及热稳定性、乙脑病毒的免疫原性等四项关键指标进行了检测，结果均达到各单价苗要求，结果见表1、表2。该研究结果以“乙型脑炎、麻疹、腮腺炎三联疫苗的研究”为题，发表在中国煤炭工业医学杂志2004年7月第7卷第7期第688-689页上。

表1：联合疫苗对乙脑的免疫力试验

表2：联合疫苗的病毒滴度及热稳定性

2002年及2005年，本发明专利申请人按以上小规模试制方案进行了20000支/批，共计4批麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的中试，在对中试联合疫苗病毒滴度及热稳定性两项关键指标进行检测时发现，不仅病毒滴度及热稳定性两项指标波动性大，且均不能达到各单价苗要求，见表3。说明按原方法制备的联合疫苗关键性质量指标不稳定，原麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗技术方案不适合中试及中试以上的规模化生产。

表3原工艺联合疫苗中试病毒滴度及热稳定性

注：2005年版《中华人民共和国药典》三部规定，37℃一周病毒滴度下降不得超过1lg

发明内容

本发明的任务是提供一种麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法，使其能够适合规模化生产。

为使麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的技术方案能够适合规模化生产，本发明对原麻疹腮思腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的各单价疫苗与疫苗保护剂的混合时间、各单价疫苗的混合比例、联合疫苗的配制顺序和疫苗保护剂四项关键工艺做了较大的改进和调整。

本发明提供的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法包括以下步骤：

(1)分别制备病毒效价在5.0～6.0lgCCID₅₀/ml的麻疹疫苗原液、病毒效价在5.5～6.5lgCCID₅₀/ml的腮腺炎疫苗原液和病毒效价在6.8～7.4lgPFU/ml的乙型脑炎疫苗原液；

(2)将三种单价疫苗原液分别与疫苗保护剂明胶蔗糖和人血白蛋白混合，按各单价疫苗原液与疫苗保护剂明胶蔗糖的体积比10∶1的比例混合，充分混匀后，再加入蛋白含量为20％的人血白蛋白，加入的体积比例为：单价疫苗原液与疫苗保护剂明胶蔗糖的混合液∶20％人血白蛋白＝38∶1至13∶1，即得到麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液；

(3)将步骤(2)配制成的麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液，按麻疹单价疫苗液∶腮腺炎单价疫苗液∶乙型脑炎单价疫苗液的体积比为1～3∶1～5∶2～7的比例混合，然后分装，再冷冻干燥，即制成麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗。

本发明提供的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗所选用的3种毒株为：麻疹沪191疫苗株、腮腺炎Wm₈₄疫苗株和乙型脑炎SA14-14-2疫苗株。

麻疹沪191疫苗株由中国上海生物制品研究所分离获得，自1966年批准作为疫苗株生产麻疹减毒活疫苗已使用40余年，安全性和免疫原性好，在人工封闭区内初免成功者中，大部分免疫持久性达14年以上。[参见：1.戴斌.麻疹疫苗.见：卢锦汉等.医学生物制品学.北京：人民卫生出版社，1995，568-580；2.徐特璋，关霆，章以浩.麻疹.见：耿贯一.流行病学.第二版，北京：人民卫生出版社，1996，510-539.]

腮腺炎Wm₈₄疫苗株由中国武汉生物制品研究所引进国际通用株Jeryl-Lynn经原代鸡胚细胞传代适应获得，该毒株生产的腮腺炎减毒活疫苗已使用十余年，流行病学调查显示抗体阳转率达96.4-100％，几何平均滴度(GMT)4.5-6.2，降低发病率87.5％，对流行性腮腺炎有很好的预防作用。[参见：魏树源，钟绍基，李秀兰.流行性腮腺炎WM₈₄株疫苗的有效免疫反应.同济医科大学学报.2000，29(6)：529-531.]

乙型脑炎SA14-14-2疫苗株由中国药品生物制品检定所研制，该毒株生产的乙脑减毒活疫苗处于世界领先水平，研究表明SA14-14-2生产毒种及其不同年度不同批次疫苗的生物表型和E区核苷酸的特性十分稳定，[参见：贾丽丽，俞永新等流行性乙型脑炎减毒活疫苗生产毒种(SA14-14-2株)及其疫苗的表型和E基因稳定性研究.Chin J Biologicals January2004，VOl.17No.112-15]。该疫苗经过十多年、数亿人次的使用，证明在乙脑非流行区的保护率为85-100％，流行区为86-99％，接种1针1个月后再加强免疫1针至加强免疫后的第6年，中和抗体阳性率仍可维持在57.1-75.0％[参见：Yu Yongxin.Safety And EfficacyOf Live Attenuated Japanese Encephalitis Vaccine SA14-14-2In Human Vaccination.National Institute for the Pharmaceutical and Biological Products.July 2006.]

本发明专利申请人武汉生物制品研究所拥有符合国家菌毒种管理要求，获国家批准使用的麻疹沪191疫苗株、腮腺炎Wm₈₄疫苗株和乙型脑炎SA14-14-2疫苗株，建立有这三种毒株的毒种库，拥有这三种单价疫苗的生产文号，并已长期投入批量生产。

三种单价疫苗原液的制备：按2005年版《中华人民共和国药典》三部的要求，利用现有技术，在已通过国家GMP认证的疫苗生产车间制备符合2005年版《中华人民共和国药典》三部要求的三种单价苗原液。

疫苗保护剂明胶蔗糖的配制方法是：将明胶在100℃热水浴助溶条件下溶于欧氏液，实时搅拌，待完全溶解、清亮后，0.11MPa30分钟灭菌，得明胶溶液；将药用级蔗糖在100℃热水浴助溶条件下溶于欧氏液，实时搅拌，使溶解完全，得蔗糖溶液；将上述明胶溶液和蔗糖溶液混合，用欧氏液定容，使明胶浓度为5％～10％，使蔗糖浓度为30％～50％；将混合后的明胶蔗糖溶液用两层绢布过滤除去残渣后，0.07MPa30分钟灭菌，即得明胶蔗糖疫苗保护剂，于37℃存放备用。

人血白蛋白：武汉生物制品研究所生产，蛋白含量为20％的人血白蛋白。

冷冻干燥方法是：

(1)预冻阶段：疫苗降温至-40℃以下，保温2～4小时后转入抽真空阶段；

(2)抽真空阶段：冷凝器温度在-50℃以下时，启动真空泵抽真空，冻干箱压力控制在5pa以下；

(3)第一阶段干燥：搁板温度控制在-47℃至-15℃，疫苗温度控制在-47℃至-27℃，干燥15～24小时；第一阶段干燥完毕后，待温度上升至23℃～28℃，升温时间约7～10小时，进入第二阶段干燥；

(4)第二阶段干燥：疫苗在23℃～28℃下保温6～10小时，即冻干完毕，方可停机，压胶塞后出柜。

本发明技术方案与文献已公开的技术方案相比，优势在于：1.本发明制备方法是先将各单价疫苗原液分别与保护剂混合，制成三种单价疫苗液，然后再将三种单价疫苗液按比例混合。2.本发明制备方法中三种单价疫苗液的混合比例也与文献公开的技术方案不同。3.本发明配制联合疫苗时对单价疫苗液的混合顺序没有要求，可按任何顺序混合，不仅使联合疫苗制备工艺简单化，更为重要的是保证了联合疫苗主要指标“疫苗效价”的稳定性。4.本发明还对疫苗保护剂中各成分含量进行了调整。而文献公开的方法中则要求各单价疫苗原液按规定顺序混合，且易导致联合疫苗主要指标“疫苗效价”不稳定，这种配制步骤使联合疫苗制备工艺的复杂程度大大加大，导致主要指标“疫苗效价”难以控制，不适宜麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的规模化生产。

本发明专利申请人用本发明提供的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗制备方法在三个不同年份进行了20000～50000瓶/批规模的联合疫苗中试，共试制7批，经全面检定，各项指标均符合2005年版《中华人民共和国药典》三部中各单价苗要求(表5)。

表5本发明联合疫苗中试检测结果

用动物昆明鼠进行的乙脑免疫原性试验结果显示，用乙脑病毒强毒P3株攻击(攻击毒腹腔滴定为600LD₅₀)，本发明联合疫苗ED₅₀＝2.49lgPFU，单价乙型脑炎减毒活疫苗ED₅₀＝2.5lgPFU，均不高于3.0lgPFU，攻击对照组小鼠死亡率不低于80％，符合2005年版《中华人民共和国药典》三部单价乙型脑炎减毒活疫苗免疫原性规定。说明本发明联合疫苗具有与单价乙型脑炎减毒活疫苗同样的保护效果，见表6。

表6本发明联合疫苗中乙型脑炎免疫原性试验结果

注：单价乙脑苗保护性试验结果判定：ED₅₀应不高于3.0lgPFU，攻击对照组小鼠死亡率应不低于80％，乙脑攻击毒病毒量应不低于500腹腔滴定的LD₅₀。

用1日龄SPF级乳鼠、体重8.5克～10.5克SPF级昆明鼠、体重220克～250克豚鼠，注射联合疫苗后观察不同动物的反应原性，同时设三种单价疫苗对照，连续观察28天。不同动物反应原性试验显示，注射后5分钟-10分钟均未见任何异常反应；观察期28天内，联合疫苗与三种单价疫苗一样，均未见反应原性增加，三种动物无任何异常反应，全部健存，体重增加(表7)。

表7本发明联合疫苗对不同动物的反应原性试验结果

本发明联合疫苗长期稳定性观察：将20050701、20050702批麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗，置4-8℃保存，采用留样观察法，每3个月取样一次，对不同时间(0月、3月、6月、9月、12月、15月、18月)关键性质量指标，包括病毒滴度、水分、安全性、异常毒性，进行实时监控。结果显示(表8)，本发明联合疫苗4℃-8℃保存18个月时，各项关键性质量指标(病毒滴度、水分、安全性、异常毒性)均符合2005年版《中华人民共和国药典》三部单价疫苗质量标准。以上结果进一步说明，新工艺进行麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗规模化生产，疫苗质量稳定，能生产出安全有效的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗。结果见表8。

表8本发明联合疫苗4-8℃保存18个月病毒滴度和水分稳定性检测结果

效价单位：麻疹、腮腺炎为lgCCID₅₀/ml，乙脑为lgPFU/ml

单苗效价标准：麻疹≥3.3lgCCID₅₀/ml；腮腺炎≥4.0lgCCID₅₀/ml；乙脑≥5.7lgPFU/ml；水分＜3.0％

以上结果表明，本发明提供的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗制备方法，有效克服了现有技术在规模化生产中存在的病毒效价波动性大、疫苗稳定性不好等关键性质量问题，本发明中试规模制备的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗各项指标均符合2005年版《中华人民共和国药典》三部各单价苗要求，既保证了中试规模疫苗效价的稳定性和质量标准的控制，见表5、表8，又保持了与单价苗一致的良好免疫应答，见表6，同时又不增加反应原性，见表7。说明本发明提供的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗制备方法适合规模化生产。

麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗的工艺和生产用原料相似，制品产量大、工艺稳定，这三种单价苗接种对象和接种部位相同，免疫程序相近，研制成联合疫苗后，按照免疫程序8个月时初免，7岁时加强免疫，给预防接种带来很大方便，可以减少工作量，降低接种费用，扩大接种面，便于医案的保管，同时可大大减少儿童的接种次数，减少交叉感染的机会，提高免疫覆盖率，达到一针多免的效果。生产成本上，现有的这三种单价苗均为冻干制剂，冻干保护剂成本较高。本发明将其制成联合疫苗，可大大降低生产成本，另外还可节约冻干费用、包装费用和运输费用等。因此，本发明将单价麻疹、腮腺炎及乙型脑炎疫苗制成联合疫苗，既有利于计划免疫，扩大免疫接种面，减轻防疫部门及儿童的免疫负担，又能降低生产成本。

本发明麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的接种对象为8月龄以上的麻疹、流行性腮腺炎和乙型脑炎易感者。接种本发明疫苗后，可刺激机体产生抗麻疹病毒、抗腮腺炎病毒和抗乙型脑炎病毒的免疫力，用于预防麻疹、流行性腮腺炎和乙型脑炎。具体用法和用量为：(1)按标示量加入疫苗稀释剂(灭菌注射用水)，待疫苗完全溶解并摇匀后使用。(2)于上臂外侧三角肌下缘附着处皮下注射。(3)8月龄儿童首次注射0.5ml；7岁再注射0.5ml，以后不再免疫。本发明疫苗的禁忌包括：(1)发热，患严重疾病、中耳炎、活动性结核或心脏、肾脏及肝脏等疾病者，急性或慢性感染者。(2)体质衰弱，有过敏史或癫痫史者，对鸡蛋有过敏史者。(3)先天性免疫缺陷者，近期或正在进行免疫抑制剂治疗者。(4)妊娠期妇女。(5)注射过免疫球蛋白者，应间隔1个月以上再接种本疫苗。

附图说明

图1是本发明提供的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗制备方法的工艺流程图。

具体实施方式：

实施例1

本发明提供的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法如下：

1.三种单价疫苗原液的制备：在武汉生物制品研究所已通过国家GMP认证的疫苗生产车间，按2005年版《中华人民共和国药典》三部要求，分别

1.1按2005年版《中华人民共和国药典》三部，P98～99，要求，用麻疹沪191疫苗株接种原代鸡胚细胞，制备病毒效价在5.0lgCCID₅₀/ml～6.0lgCCID₅₀/ml的麻疹疫苗原液；

1.2按2005年版《中华人民共和国药典》三部，P107～108，要求，用腮腺炎Wm₈₄疫苗株接种原代鸡胚细胞，制备病毒效价在5.5lgCCID₅₀/ml～6.5lgCCID₅₀/ml的腮腺炎疫苗原液；

1.3按2005年版《中华人民共和国药典》三部，P77～78，要求，用乙脑SA14-14-2疫苗株接种原代地鼠肾细胞，制备病毒效价在6.8lgCCID₅₀/ml～7.4lgCCID₅₀/ml的乙型脑炎疫苗原液。

2.疫苗保护剂配制，在洁净度十万级车间内操作：

2.1疫苗保护剂明胶蔗糖的配制

配制1000ml浓度为8％明胶40％蔗糖的明胶蔗糖疫苗保护剂：

2.1.1称取明胶84克，在100℃热水浴助溶下溶于250毫升欧氏液，实时搅拌，待完全溶解、清亮后，0.11MPa30分钟灭菌，得明胶溶液250毫升；所用明胶为Fluka公司生产销售的产品，其货号为48722，规格为500克/瓶，批号为1356004。

2.1.2称取药用级蔗糖420克，在100℃热水浴助溶下溶于500毫升欧氏液，实时搅拌，使溶解完全，得蔗糖溶液500毫升；

2.1.3将以上250毫升明胶溶液和500毫升蔗糖溶液混合，补足欧氏液，使明胶溶液和蔗糖溶液混合后的总体积达1000毫升，混合后的明胶蔗糖溶液用两层绢布过滤除去残渣后，0.07MPa30分钟灭菌后，即得1000ml 8％明胶 40％蔗糖疫苗保护剂。37℃存放备用，此液应在一周内使用。

2.2人血白蛋白：由武汉生物制品研究所提供获国家批签发的20％人血白蛋白，2℃-8℃保存备用。批签发，即生物制品批签发，是指国家对疫苗类制品、血液制品、用于血源筛查的体外生物诊断试剂以及国家食品药品监督管理局规定的其他生物制品，每批制品出厂上市或者进口时进行强制性检验、审核的制度。检验不合格或者审核不被批准者，不得上市或者进口。

3.三种单价疫苗原液与疫苗保护剂的混合

在通过国家GMP认证的疫苗生产车间，先将按上述1项制备的三种单价疫苗原液分别加入到2.1项配制的疫苗保护剂明胶蔗糖中，加入的体积比例为，各单价疫苗原液：明胶蔗糖疫苗保护剂的体积比为10∶1，充分混匀后，再各加入20％人血白蛋白，加入的体积比例为：单价疫苗原液与疫苗保护剂明胶蔗糖的混合液∶20％人血白蛋白＝38∶1至13∶1，加入量为750ml～250ml，即制成麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液。

4.联合疫苗的制备：将步骤3配制的麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液，按麻疹单价疫苗液∶腮腺炎单价疫苗液∶乙型脑炎单价疫苗液的体积比为1～3∶1～5∶2～7的比例混合，然后分装，分装规格0.5ml/西林瓶，再冷冻干燥，冷冻干燥步骤方法如下：

1.预冻

1.1温度：疫苗温度-40℃以下

1.2时间：达到上述温度后，保温2～4小时，转入抽真空阶段。

2.抽真空阶段

冷凝器温度在-50℃以下时，可启动真空泵抽真空，冻干箱压力控制在5pa以下。

3.第一阶段干燥

3.1温度：搁板温度在-47℃至-15℃，疫苗温度在-47℃至-27℃；

3.2时间：15～24小时。

3.3第一阶段干燥完毕后，待温度上升至23℃~28℃，(升温时间约7～10小时)，进入第二阶段干燥。

4.第二阶段干燥

疫苗在23℃～28℃下保温6～10小时，即冻干完毕，方可停机，压胶塞后出柜。至此，即制备成麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗。其规格为：复溶后每瓶0.5ml，每1次人用剂量为0.5ml；每剂含麻疹活病毒应不低于3.0lgCCID₅₀，含腮腺炎活病毒应不低于3.7lgCCID₅₀，含乙型脑炎活病毒应不低于5.4lgPFU。于8℃以下避光保存和运输，有效期为1年6个月。

实施例2

制备本发明联合疫苗

在通过国家GMP认证的疫苗生产车间内操作。

先按实施例1的步骤1制备病毒效价在5.0lgCCID₅₀/ml的麻疹疫苗原液，制备病毒效价在6.0lgCCID₅₀/ml的腮腺炎疫苗原液，制备病毒效价在7.0lgPFU/ml的乙脑疫苗原液；再按实施例1的步骤2配制疫苗保护剂；然后再按实施例1的步骤2配制的8％明胶40％蔗糖保护剂1000ml中，加入已制备好的麻疹疫苗原液8600ml，混匀，再加入400ml 20％人血白蛋白，混匀。此时已配制体积为10000ml的单价麻疹疫苗液，内含终浓度为0.8％明胶、4％蔗糖、0.8％人血白蛋白。按同样方法分别配制体积10000ml的单价腮腺炎疫苗液和体积10000ml的单价乙型脑炎疫苗液。最后将以上配制的麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液按麻疹∶腮腺炎∶乙型脑炎＝2∶3∶2的体积比混合，即麻疹疫苗液2000ml+腮腺炎疫苗液3000ml+乙型脑炎疫苗液2000ml配制成麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗疫苗液，分装，按实施例1的冷冻干燥方法进行冷冻干燥，即制备成麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗。规格为复溶后每西林瓶0.5ml，每1次人用剂量为0.5ml；每剂含麻疹活病毒应不低于3.0lgCCID₅₀；含腮腺炎活病毒应不低于3.7lgCCID₅₀，含乙型脑炎活病毒应不低于5.4lgPFU。于8℃以下避光保存和运输，有效期为1年6个月。

Claims (6)

1.一种麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

(1)分别制备病毒效价在5.0～6.01gCCID₅₀/ml的麻疹疫苗原液、病毒效价在5.5～6.51gCCID₅₀/ml的腮腺炎疫苗原液和病毒效价在6.8～7.41gPFU/ml的乙型脑炎疫苗原液；

(2)将三种单价疫苗原液分别与疫苗保护剂明胶蔗糖和人血白蛋白混合，具体操作是：按各单价疫苗原液与疫苗保护剂明胶蔗糖的体积比10∶1的比例混合，充分混匀后，再加入蛋白含量为20％的人血白蛋白，加入的体积比例为：单价疫苗原液与疫苗保护剂明胶蔗糖的混合液∶20％人血白蛋白＝38∶1至13∶1，即得到麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液；

(3)将步骤(2)配制成的麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液，按麻疹单价疫苗液∶腮腺炎单价疫苗液∶乙型脑炎单价疫苗液的体积比1～3∶1～5∶2～7的比例混合，然后分装，再冷冻干燥，即制成麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗。

2.根据权利要求1所述的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法，其特征在于，所述的疫苗保护剂明胶蔗糖的配制方法是：将明胶在100℃热水浴助溶条件下溶于欧氏液，实时搅拌，待完全溶解、清亮后，0.11MPa30分钟灭菌，得明胶溶液；将药用级蔗糖在100℃热水浴助溶条件下溶于欧氏液，实时搅拌，使溶解完全，得蔗糖溶液；将上述明胶溶液和蔗糖溶液混合，用欧氏液定容，使明胶浓度为5％～10％，使蔗糖浓度为30％～50％；将混合后的明胶蔗糖溶液用两层绢布过滤除去残渣后，0.07MPa30分钟灭菌，即得明胶蔗糖疫苗保护剂，于37℃存放备用。

3.根据权利要求1或2所述的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法，其特征在于，所述的麻疹、腮腺炎、乙型脑炎三种单价疫苗液的混合比例为：麻疹单价疫苗液∶腮腺炎单价疫苗液∶乙型脑炎单价疫苗液的体积比为1～3∶1～5∶2～7。

4.根据权利要求1或2所述的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法，其特征在于，所述的冷冻干燥的方法是：

(1)预冻阶段：疫苗降温至-40℃以下，保温2～4小时后转入抽真空阶段；

(2)抽真空阶段：冷凝器温度在-50℃以下时，启动真空泵抽真空，冻干箱压力控制在5pa以下；

(3)第一阶段干燥：搁板温度控制在-47℃至-15℃，疫苗温度控制在-47℃至-27℃，干燥15～24小时；第一阶段干燥完毕后，待温度上升至23℃～28℃，升温时间约7～10小时，进入第二阶段干燥；

(4)第二阶段干燥：疫苗在23℃～28℃下保温6～10小时，即冻干完毕，方可停机，压胶塞后出柜。

5.根据权利要求3所述的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法，其特征在于，所述的冷冻干燥的方法是：

(1)预冻阶段：疫苗降温至-40℃以下，保温2～4小时后转入抽真空阶段；

(2)抽真空阶段：冷凝器温度在-50℃以下时，启动真空泵抽真空，冻干箱压力控制在5pa以下；

(3)第一阶段干燥：搁板温度控制在-47℃至-15℃，疫苗温度控制在-47℃至-27℃，干燥15～24小时；第一阶段干燥完毕后，待温度上升至23℃～28℃，升温时间约7～10小时，进入第二阶段干燥；

(4)第二阶段干燥：疫苗在23℃～28℃下保温6～10小时，即冻干完毕，方可停机，压胶塞后出柜。

6.按权利要求1至5中任一项所述的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗的制备方法制备的麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗。

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