CN102406933A - 一种麻疹减毒活疫苗的制备方法 - Google Patents
一种麻疹减毒活疫苗的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102406933A CN102406933A CN2011103829003A CN201110382900A CN102406933A CN 102406933 A CN102406933 A CN 102406933A CN 2011103829003 A CN2011103829003 A CN 2011103829003A CN 201110382900 A CN201110382900 A CN 201110382900A CN 102406933 A CN102406933 A CN 102406933A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- microcarrier
- bioreactor
- preparing
- vaccine
- measles
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及疫苗领域,尤其是一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,包括以下步骤:微载体生物反应器培养;维持液培养;收获和纯化;配苗,冻干。本发明借助生物反应器的高密度培养手段首先保证了病毒滴度比常规工艺高的前提下,进而采取分子筛层析方法或中空纤维过滤方法纯化,去除了绝大多数的杂质成分,因而更加有效的避免了疫苗接种的副反应的发生;此外,本发明借助生物反应器培养病毒,培养条件稳定,易于实现大规模化生产,也提高了疫苗单批次产量,保证了产品的质量均一和稳定。
Description
技术领域
本发明涉及疫苗领域,尤其是一种麻疹减毒活疫苗的制备方法。
背景技术
麻疹是一种古老的传染病,由麻疹病毒感染所致。目前,接种麻疹减毒活疫苗是预防控制该病发生的有效手段。麻疹减毒活疫苗的效果主要依据是活病毒在体内的生存及繁殖。因麻疹病毒对光及热均很敏感,易被灭活,其稳定程度与病毒环境的温度及病毒液中的蛋白含量有关,因此,现行的疫苗为保证疫苗中的麻疹活病毒在储运的过程中不易失活而制备成冻干剂型。
然而,目前麻疹疫苗虽在生产方面对病毒收获物的牛血清白蛋白含量有所控制,但是在鸡胚细胞成分残留物上面并无严格控制,这些异源性蛋白是疫苗接种时副反应发生的重要因素,而常规生产工艺本身病毒培养物的滴度就不高,加之麻疹病毒在液体环境下极易灭活,如果采用纯化等工艺则会导致病毒滴度不符合生产要求而导致疫苗失效。同时,现行的麻疹疫苗采用的是瓶式工艺生产,生产批量小,所生产疫苗的品质均一性较差,且由于复杂操作易出现污染等情况。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足,提供了一种麻疹减毒活疫苗的制备方法。
为达到上述目的,本发明采取了如下技术方案:
一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
步骤一:微载体生物反应器培养:将鸡胚细胞和麻疹病毒毒株混合后接种至微载体生物反应器中,在温度为33℃,pH为7.2~7.6条件下培养混合物,每天更换细胞生长液,培养至细胞浓度达到106个/ml以上;
步骤二:维持液培养:每天观察细胞,当鸡胚细胞开始出现特异性病变时,多次洗涤培养物,并更换无血清的MEM维持液培养病毒;
步骤三:收获和纯化:每天收获病毒培养物,直至细胞脱落比例达到50%以下,合并收获物,并进行纯化和添加糖蛋白保护剂;
步骤四:配苗,冻干。
进一步的技术方案是,所述步骤一的鸡胚细胞取自孵育9~10日龄的SPF鸡胚,微载体生物反应器中鸡胚细胞浓度为1~5×105/ml。
进一步的技术方案是,所述步骤一的麻疹病毒毒株为Schwarz株或Moraten株,微载体生物反应器中病毒接种量为0.001~0.005MOI。
进一步的技术方案是,所述步骤一的微载体生物反应器中的微载体为球形微载体,多孔球形微载体,异性微载体和纤维结构载体中的任一种,微载体生物反应器中微载体浓度为2~10g/L。
进一步的技术方案是,所述步骤二采用的无血清MEM维持液中还加入0.5%的MgCl2溶液和1%的人血白蛋白。
进一步的技术方案是,所述步骤三所收获的病毒液采用分子筛层析方法或中空纤维过滤方法进行纯化。
进一步的技术方案是,纯化病毒的盐溶液为PBS溶液或Earle’s平衡盐溶液,其pH控制在7.2~7.6之间。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:本发明借助生物反应器的高密度培养手段首先保证了病毒滴度比常规工艺高的前提下,进而采取分子筛层析方法或中空纤维过滤方法纯化,去除了绝大多数的杂质成分,因而更加有效的避免了疫苗接种的副反应的发生;此外,本发明借助生物反应器培养病毒,培养条件稳定,易于实现大规模化生产,也提高了疫苗单批次产量,保证了产品的质量均一和稳定。
具体实施方式
实施例1
一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
步骤一:微载体生物反应器培养:将鸡胚细胞和麻疹病毒毒株混合后接种至微载体生物反应器中,在温度为33℃,pH为7.2条件下培养混合物,每天更换营养液,培养至细胞浓度达到106个/ml,所述的鸡胚细胞取自孵育9日龄的SPF鸡胚,其浓度为1×105/ml;所述的麻疹病毒毒株为Schwarz株,其接种量为0.001MOI;所述的微载体生物反应器中的微载体为球形微载体,其浓度为2g/L;
步骤二:维持液培养:每天观察细胞,当鸡胚细胞开始出现特异性病变时,多次洗涤培养物,并更换无血清的MEM维持液培养病毒;
步骤三:收获和纯化:每天收获病毒培养物,直至细胞脱落比例达到50%,合并收获物,并进行纯化和添加糖蛋白保护剂;
步骤四:配苗,冻干。
进一步的技术方案是,所述步骤二采用的无血清MEM维持液中还加入0.5%的MgCl2溶液和1%的人血白蛋白。
进一步的技术方案是,所述步骤三所收获的病毒液采用分子筛层析方法进行纯化。
进一步的技术方案是,纯化病毒的盐溶液为PBS溶液,其pH为7.2。
实施例2
一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
步骤一:微载体生物反应器培养:将鸡胚细胞和麻疹病毒毒株混合后接种至微载体生物反应器中,在温度为33℃,pH为7.6条件下培养混合物,每天更换细胞生长液,培养至细胞浓度达到107个/ml,所述的鸡胚细胞取自孵育10日龄的SPF鸡胚,其浓度为5×105/ml;所述的麻疹病毒毒株为Moraten株,其接种量为0.005MOI;所述的微载体生物反应器中的微载体为多孔球形微载体,其浓度为10g/L;
步骤二:维持液培养:每天观察细胞,当鸡胚细胞开始出现特异性病变时,多次洗涤培养物,并更换无血清的MEM维持液培养病毒;
步骤三:收获和纯化:每天收获病毒培养物,直至细胞脱落比例达到40%,合并收获物,并进行纯化和添加糖蛋白保护剂;
步骤四:配苗,冻干。
进一步的技术方案是,所述步骤二采用的无血清MEM维持液中还加入0.5%的MgCl2溶液和1%的人血白蛋白。
进一步的技术方案是,所述步骤三所收获的病毒液采用中空纤维过滤方法进行纯化。
进一步的技术方案是,纯化病毒的盐溶液为Earle’s平衡盐溶液,其pH为7.6。
实施例3
一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
步骤一:微载体生物反应器培养:将鸡胚细胞和麻疹病毒毒株混合后接种至微载体生物反应器中,在温度为33℃,pH为7.5条件下培养混合物,每天更换营养液,培养至细胞浓度达到106个/ml,所述的鸡胚细胞取自孵育9日龄的SPF鸡胚,其浓度为3×105/ml;所述的麻疹病毒毒株为Schwarz株,其接种量为0.003MOI;所述的微载体生物反应器中的微载体为纤维结构载体,其浓度为6g/L;
步骤二:维持液培养:每天观察细胞,当鸡胚细胞开始出现特异性病变时,多次洗涤培养物,并更换无血清的维持液培养病毒;
步骤三:收获和纯化:每天收获病毒培养物,直至细胞脱落比例达到50%,合并收获物,并进行纯化和添加糖蛋白保护剂;
步骤四:配苗,冻干。
进一步的技术方案是,所述步骤二采用的无血清MEM维持液中加入0.5%的MgCl2溶液和1%的人血白蛋白。
进一步的技术方案是,所述步骤三所收获的病毒液采用中空纤维过滤方法进行纯化。
进一步的技术方案是,纯化病毒的盐溶液为PBS溶液,其pH为7.5。
Claims (7)
1.一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
步骤一:微载体生物反应器培养:将鸡胚细胞和麻疹病毒毒株混合后接种至微载体生物反应器中,在温度为33℃,pH为7.2~7.6条件下培养混合物,每天更换细胞生长液,培养至细胞浓度达到106个/ml以上;
步骤二:维持液培养:每天观察细胞,当鸡胚细胞开始出现特异性病变时,多次洗涤培养物,并更换无血清的MEM维持液培养病毒;
步骤三:收获和纯化:每天收获病毒培养物,直至细胞脱落比例达到50%以下,合并收获物,并进行纯化和添加糖蛋白保护剂;
步骤四:配苗,冻干。
2.根据权利要求1所述的一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,其特征在于:所述步骤一的鸡胚细胞取自孵育9~10日龄的SPF鸡胚,微载体生物反应器中鸡胚细胞浓度为1~5×105/ml。
3.根据权利要求1所述的一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,其特征在于:所述步骤一的麻疹病毒毒株为Schwarz株或Moraten株,微载体生物反应器中病毒接种量为0.001~0.005MOI。
4.根据权利要求1所述的一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,其特征在于:所述步骤一的微载体生物反应器中的微载体为球形微载体,多孔球形微载体,异性微载体和纤维结构载体中的任一种,微载体生物反应器中微载体浓度为2~10g/L。
5.根据权利要求1所述的一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,其特征在于:所述步骤二采用的无血清MEM维持液中还加入0.5%的MgCl2溶液和1%的人血白蛋白。
6.根据权利要求1所述的一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,其特征在于:所述步骤三所收获的病毒液采用分子筛层析方法或中空纤维过滤方法进行纯化。
7.根据权利要求6所述的一种麻疹减毒活疫苗的制备方法,其特征在于:纯化病毒的盐溶液为PBS溶液或Earle’s平衡盐溶液,其pH控制在7.2~7.6之间。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2011103829003A CN102406933A (zh) | 2011-11-25 | 2011-11-25 | 一种麻疹减毒活疫苗的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2011103829003A CN102406933A (zh) | 2011-11-25 | 2011-11-25 | 一种麻疹减毒活疫苗的制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102406933A true CN102406933A (zh) | 2012-04-11 |
Family
ID=45909467
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2011103829003A Pending CN102406933A (zh) | 2011-11-25 | 2011-11-25 | 一种麻疹减毒活疫苗的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102406933A (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103768589A (zh) * | 2012-10-18 | 2014-05-07 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留dna的方法 |
CN107418936A (zh) * | 2017-07-18 | 2017-12-01 | 北京北生研生物制品有限公司 | 细胞工厂制备麻疹病毒原液及麻疹系列减毒活疫苗制剂 |
US10662412B2 (en) | 2015-04-03 | 2020-05-26 | Valneva Se | Aseptic purification process for viruses |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3214340A (en) * | 1961-09-08 | 1965-10-26 | Burroughs Wellcome Co | Stabilized viable attenuated measles virus vaccines and their production |
EP0727484A1 (en) * | 1995-02-15 | 1996-08-21 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Process for growing virus |
CN101524536A (zh) * | 2009-03-26 | 2009-09-09 | 成都康华生物制品有限公司 | 人胚肺成纤维细胞乙型脑炎疫苗及其制备方法 |
CN101618213A (zh) * | 2008-07-03 | 2010-01-06 | 武汉生物制品研究所 | 麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗及其制备方法 |
CN102100910A (zh) * | 2009-12-21 | 2011-06-22 | 北京清大天一科技有限公司 | 一种生产病毒疫苗的方法 |
CN102216450A (zh) * | 2008-09-24 | 2011-10-12 | 米迪缪尼有限公司 | 培养细胞、增殖和纯化病毒的方法 |
-
2011
- 2011-11-25 CN CN2011103829003A patent/CN102406933A/zh active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3214340A (en) * | 1961-09-08 | 1965-10-26 | Burroughs Wellcome Co | Stabilized viable attenuated measles virus vaccines and their production |
EP0727484A1 (en) * | 1995-02-15 | 1996-08-21 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Process for growing virus |
CN101618213A (zh) * | 2008-07-03 | 2010-01-06 | 武汉生物制品研究所 | 麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗及其制备方法 |
CN102216450A (zh) * | 2008-09-24 | 2011-10-12 | 米迪缪尼有限公司 | 培养细胞、增殖和纯化病毒的方法 |
CN101524536A (zh) * | 2009-03-26 | 2009-09-09 | 成都康华生物制品有限公司 | 人胚肺成纤维细胞乙型脑炎疫苗及其制备方法 |
CN102100910A (zh) * | 2009-12-21 | 2011-06-22 | 北京清大天一科技有限公司 | 一种生产病毒疫苗的方法 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
何春艳等: "Vero细胞和流感病毒在无血清条件下的微载体培养", 《中国生物制品学杂志》, vol. 20, no. 2, 28 February 2007 (2007-02-28), pages 125 - 128 * |
吴明: "《生物工程学-过去.现在.将来》", 30 April 1989, article "现代生物工程学的崛起-第三代生物工程产品" * |
李志勇: "《细胞工程》", 31 July 2010, article "动物细胞培养的生物反应器" * |
陈嘉棣等: "细胞微载体培养技术用于鸡胚原代细胞培养及鸡新城疫病毒的增殖", 《上海农业学报》, vol. 7, no. 1, 2 April 1991 (1991-04-02), pages 1 - 7 * |
陈天等: "Vero 细胞无血清培养技术的研究与应用", 《生物技术通讯》, vol. 20, no. 3, 31 May 2009 (2009-05-31), pages 417 - 421 * |
陈恬等: "麻疹疫苗工作种子批培养条件的优化", 《四川大学学报(医学版)》, vol. 34, no. 3, 30 July 2003 (2003-07-30), pages 421 - 423 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103768589A (zh) * | 2012-10-18 | 2014-05-07 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留dna的方法 |
CN103768589B (zh) * | 2012-10-18 | 2016-12-21 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留dna的方法 |
US10662412B2 (en) | 2015-04-03 | 2020-05-26 | Valneva Se | Aseptic purification process for viruses |
US11629339B2 (en) | 2015-04-03 | 2023-04-18 | Valneva Se | Aseptic purification process for viruses |
CN107418936A (zh) * | 2017-07-18 | 2017-12-01 | 北京北生研生物制品有限公司 | 细胞工厂制备麻疹病毒原液及麻疹系列减毒活疫苗制剂 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102816732B (zh) | 适应全悬浮无血清培养的mdck细胞系及其在培养流感病毒、生产流感病毒疫苗中的应用 | |
CN101979515B (zh) | 兽用狂犬病病毒与疫苗及二者的生产方法 | |
CN107142249B (zh) | 一种全悬浮细胞培养生产猪伪狂犬病毒抗原的方法 | |
CN103495166B (zh) | 一种猪繁殖与呼吸综合征复合活疫苗的制备方法 | |
CN101716341B (zh) | 一种人用二倍体细胞狂犬灭活疫苗及其制备方法 | |
CN102690791A (zh) | 应用生物反应器微载体培养st细胞生产猪伪狂犬病病毒的方法 | |
CN105969737B (zh) | 一种规模化生产轮状病毒疫苗的方法 | |
CN107267468A (zh) | 一种无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法 | |
CN102178946A (zh) | Bhk-21细胞无血清悬浮培养技术在口蹄疫疫苗生产中的应用 | |
CN101289655B (zh) | 一种制备猪圆环病毒的工艺 | |
CN102038942B (zh) | 应用生物反应器工业化生产猪蓝耳病疫苗的方法 | |
CN101695572B (zh) | 一种利用生物反应器生产伪狂犬病活疫苗的方法及其制品 | |
CN104232564A (zh) | 一种st细胞制备猪瘟疫苗的培养基及其使用方法 | |
CN104004720B (zh) | 一种大规模高密度生产猪圆环病毒2型抗原的方法 | |
CN102406933A (zh) | 一种麻疹减毒活疫苗的制备方法 | |
CN103386127B (zh) | 用鸡胚传代细胞系和生物反应器培养新城疫病毒制备疫苗的方法 | |
CN102002481B (zh) | 猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒的生产方法 | |
CN102038945B (zh) | 应用生物反应器工业化生产猪细小病毒疫苗的方法 | |
CN105838683A (zh) | 一种应用新型细胞微载体增殖水貂犬瘟热病毒的方法 | |
CN102727877A (zh) | 一种生物反应器制备高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(jxa1-r株)的方法及其应用 | |
CN102002482B (zh) | 猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒的生产方法 | |
CN102038944B (zh) | 应用生物反应器工业化生产猪瘟活疫苗的方法 | |
CN101695571B (zh) | 一种利用生物反应器生产猪瘟细胞活疫苗的方法及其制品 | |
CN102743749B (zh) | 应用篮式生物反应器制备人二倍体细胞风疹减毒活疫苗的方法 | |
CN108159412A (zh) | 一种生产细胞源鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20120411 |