CN101057927A - 一种药物组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

一种药物组合物，由重楼、昆明山海棠、云威灵、黄芪、叶下花、川牛膝、紫丹参、红花、地龙、伸筋草、续断混合制成，属于纯中药制剂，取1/3重量份重楼、1/3重量份昆明山海棠、红花、地龙用乙醇洗净，烘干，粉碎成细粉；剩余昆明山海棠粉碎成粗粉醇提，趁热滤过，合并滤液，回收乙醇，药液备用；云威灵、黄芪、叶下花、川牛膝、紫丹参、伸筋草、续断与剩余重楼加水煎煮滤过，合并滤液；与上述药液合并，减压浓缩至50℃下相对密度为1.34～1.36的稠膏，再加入上述第一步制得的细粉，混匀，干燥，即可。本发明具有解毒化瘀，活络止痛的功效，用于治疗类风湿性关节炎、强直脊柱炎等疾病，质量控制稳定，总有效率达100％。

Description

一种药物组合物及其制备方法和质量控制方法 

技术领域：

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和质量控制方法，尤其是涉及一种用于治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎的药物组合物及其制备方法和质量控制方法。

背景技术：

类风湿性关节炎是一种慢性的全身免疫性疾病，多见于青壮年。其早期表现为关节肿胀、疼痛、僵硬，晚期可引起关节强直、畸形和功能严重受损，此外还可伴有低热、贫血、体重减轻等全身症状和类风湿性结炎、类风湿性血管炎、心肺肾受损等关节外表现。从发病看，本病发生于世界各地。据国外资料统计，发病率约为1.0％，国内对北京和广东地区人口进行了调查，其发病率约为0.3％-0.5％，最近，通过与国际抗风湿病联盟合作调查，确定我国类风湿关节炎的发病率为0.3％，全国大约有500万左右的类风湿患者，可见该病并非罕见；强直性脊柱炎是一种主要侵犯脊柱，并可不同程度的累积骶髂关节和周围关节的慢性进行性炎性疾病，通过对本省人口的初步调查，其发病率为0.5‰-0.7‰。由此可见，类风湿性关节炎和强直性脊柱炎等中医痹症可严重影响人类的生命质量，给家庭与社会带来较重的负担，因此其防治研究已成为世界卫生组织研究的课题之一。目前，国内外对于风湿性关节炎和强直性脊柱炎的治疗大多停留在非甾体类药物、抗痛风药及甾体类抗炎免疫药等西药基础上。由于这类西药的毒副作用及应用范围所限，因而使得类风湿性关节炎、强直性脊柱炎未得到有效控制。实践证明，祖国医药学在治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎疾病方面积累了丰富的经验，中医更强调整体的治疗，标本兼治预防为主，中药以不良反应少而著称，因此，研制一种治疗该病的新型中药复方制剂是很有意义和必要的。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一种治疗类风湿性关节炎、强直性脊柱炎的疗效突出、无毒副作用的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。

本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(重量份)：

重楼140-340重量份       昆明山海棠100-350重量份

云威灵200-500重量份     黄芪240-560重量份

叶下花100-400重量份     川牛膝50-180重量份

紫丹参100-300重量份     红花20-120重量份

地龙30-110重量份        伸筋草20-100重量份

续断100-400重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选配比如下(重量份)：

重楼260重量份   昆明山海棠200重量份   云威灵300重量份

黄芪340重量份   叶下花200重量份       川牛膝100重量份

紫丹参200重量份 红花50重量份          地龙60重量份

伸筋草50重量份           续断200重量份。

本发明药物组合物的制备方法：

取1/3重量份重楼、1/3重量份昆明山海棠、红花、地龙用50-90％乙醇洗净，烘干，粉碎成细粉，灭菌，备用；剩余昆明山海棠粉碎成粗粉，用50-85％乙醇分别以4-8倍量、2-6倍量、2-7倍量回流提取3次，每次1-3小时，趁热滤过，合并滤液，回收乙醇，药液备用；云威灵、黄芪、叶下花、川牛膝、紫丹参、伸筋草、续断与剩余重楼加水煎煮三次，第一次加水4-12倍量，煎煮1-4小时，第二、三次加水6-12倍量，各煎煮1-3小时，滤过，合并滤液；将上述第二、三步制备的药液合并，减压浓缩至50℃下相对密度为1.34～1.36的稠膏，再加入上述第一步制得的细粉，混匀，干燥，粉碎，最后经过常规工序直接或加入药学上接受的赋型剂制成临床接受的颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液中的任意剂型。

本发明优选片剂。

本发明质量控制方法中的鉴别及含量测定方法为：

鉴别方法选自如下方法中的一种或几种：

a.取本品25片，除包衣，研细，加甲醇100ml，回流提取3小时，取续滤液50ml，蒸干，残渣用水30ml分次溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚20ml或30ml振摇提取2次，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次30ml，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30ml，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，上5g、1.5cm中性氧化铝柱，用30％乙醇10ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2，10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取本品12片，除包衣，研细，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸8∶1∶1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中显色，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取本品25片，除包衣，研细，加80％丙酮溶液20ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，加80％丙酮溶液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇7∶2∶3∶0.4为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d.取本品8片，除包衣，研细，加氨试液5ml、三氯甲烷50ml，密塞，超声提取30分钟，静置过夜，滤过，滤液用4％盐酸溶液30ml，振摇提取，分取酸液，用浓氨溶液调节pH至10，用三氯甲烷振摇提取2次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取续断对照药材3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

含量测定方法为：

a.总生物碱：取本品10片，除包衣，研匀，取2g，精密称定，精密加甲醇100ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣用0.5mol/L盐酸溶液30ml，分次溶解并转移至分液漏斗中，用三氯甲烷分别以30ml、30ml、20ml振摇提取3次，弃去三氯甲烷液，水液用浓氨溶液调节pH至10，再用三氯甲烷分别以30ml、30ml、20ml、20ml振摇提取4次，合并三氯甲烷液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥至恒重，精密称定，以干燥品计算，含总生物碱不得少于0.93％；

b.羟基红花黄色素A：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4％磷酸溶液32∶68为流动相，检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000，精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含25.8μg的溶液，即为对照品溶液；取本品10片，除包衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，功率250W，频率25kHz，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每片含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计，不得少于0.3mg。

本发明具有解毒化瘀，活络止痛的功效。用于类风湿性关节炎、强直脊柱炎的治疗，其片剂剂量准确，质量稳定，疗效好。

本发明用法用量：口服，一次2～3片，一日3次。

以下通过实验例进一步说明本发明。

实验例1    本发明片剂的药效学实验

将Wistar大鼠按体重、性别随机分为组，灌胃给药。

①对实验性关节炎的治疗

注：+为治疗好转的程度

通过大鼠佐剂关节炎实验，骨风宁片对大鼠佐剂关节炎原发期、继发期足肿胀皆有明显抑制作用，给药组大鼠的耳部红斑及尾部结节等损害均比对照组风湿痹康胶囊明显减轻。在整个实验过程中，未见动物摄食明显减少及外观形态等的变化。

②对免疫功能的影响

组别、剂量(mg/kg)	动物数	K值	A值
				360	10只	0.0402±0.0100	6.06±0.68
180	10只	0.0320±0.0090	5.69±0.51
				90	10只	0.0300±0.0076	5.69±0.52
阳性药物9750	10只	0.0440±0.0139	6.18±0.86
				对照组	10只	0.0286±0.0121	5.62±0.97

通对DNCB所致小鼠耳廓皮肤迟发型超敏反应的实验，骨风宁片对DNCB所致迟发型超敏反应有明显抑制作用；通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的实验，骨风宁片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有显著的促进作用；通过对小鼠血清中溶血素含量的实验，骨风宁片可显著提高小鼠血清中溶血素含量。

③抗炎作用

对大鼠棉球肉芽组织增生的影响

组别、剂量(mg/kg)	动物数	棉球肉芽肿重量	抑制率(％)
				250	10只	31.1±8.63	28.67
125	10只	32.2±9.52	26.15
				62.5	10只	32.9±10.66	24.54
氢化可的松200	10只	26.2±6.44	39.91
				对照	10只	43.6±8.12

通过大鼠角叉菜胶性足肿胀的实验，骨风宁片对大鼠角叉菜胶性足肿胀有明显抑制作用；通过大鼠棉球肉芽组织增生的实验，骨风宁片可明显降低肉芽组织重量，且有明显抑制棉球肉芽组织增生的作用；通过小鼠腹腔毛细血管通透性的实验，骨风宁片对醋酸所致小鼠的腹腔毛细血管通透性增强有明显的抑制作用。

④镇痛作用

组别、剂量(mg/kg)	动物数	扭体次数
			360	10只	20.1±3.84
180	10只	24.7±3.83
			90	10只	24.0±3.77
阿司匹林200	10只	18.1±6.01
			对照组	10只	25.0±4.03

通过热板所致小鼠疼痛反应的实验，骨风宁片可明显延长热板所致小鼠疼痛反应的潜伏期，有明显镇痛作用；通过醋酸所致小鼠扭体反应的实验，骨风宁片可明显减少醋酸所致小鼠腹部疼痛的扭体次数，有明显镇痛作用。

结果：上述实验研究均采用风湿痹康胶囊做对照药物，骨风宁片多数药理作用好于风湿痹康胶囊。

实验例2    临床观察见下表

检查指标	例数	治疗前指标分级				治疗后指标分级
												0	I	II	III	0	I	II	III
晨僵(h)	400	6	71	139	184	204	130	61	5
										关节疼痛指数	400	0	73	144	183	162	156	74	3
关节肿胀指数	400	4	63	176	152	161	132	69	18
										关节活动障碍指数	400	27	58	137	178	112	169	98	21
类风湿因子	400	273例阳性  152例转阴  转阴率55.8％
										血沉	400	297例≥20mm/h80例正常，173例平均降30mm/h下降率82.2％
抗“O”	400	152例＞1∶500  125例恢复正常，或下降率82.2％
										血红蛋白	400	242例轻中重度贫血208例恢复王常或改善，改善率85.9％
白细胞	400	203例轻中度升高  196例恢复正常或改善，改善率96.5％

结果：98％患者临床症状改善，85％患者实验室指标改善，55.8％患者RF转阴，对红、白细胞及肝肾功能无不良影响，总有效率100％。骨风宁片组愈显率及总有效率明显高于消炎痛组。

 实验例3    本发明组合物提取工艺研究

1、工艺条件的筛选

(1)药材的来源、鉴定及前处理

处方中的十一味药材，除昆明山海棠、云威灵、叶下花、紫丹参分别收载于《广西中药材标准》、《云南省药品标准》以外，其余七味均收载于《中国药典》2005年版一部。各药材挑出杂质及非药用部位，筛出灰尘，经检验合格后入药。

(2)粉碎部分的考察

工艺中重楼1600g，昆明山海棠1200g、红花1000g、地龙1200g药材需要粉碎，现考察其出粉率，见下表。

批次	药材总量(g)	粉末重(g)	出粉率％
				123	500050005000	4259.14413.04378.4	85.1888.2687.57

由上表结果可见，重楼等四味药材出粉率在85.18～88.26％之间。

(3)昆明山海棠药材加醇量提取的确定

取昆明山海棠2800g，加不同倍数的醇回流提取，回收乙醇至干，得干膏结果见下表。昆明山海棠用70％乙醇提取出膏率考察

试验序号	加醇量(倍数)	提取时间(h)	提取次数	干膏重(g)	出膏率(％)
						123	6/5/56/4/45/3/3	1.0/1.0/1.01.0/1.0/1.01.0/1.0/1.0	333	117.88116.285.40	4.214.153.05

由上表结果可见，用6/5/5和6/4/4倍量的70％醇提时，出膏率无明显变化，因此设定分别用70％乙醇6倍、4倍、4倍量提取昆明山海棠为最佳。

(4)水提取部分水的用量考察

水煎煮工艺的优选试验：以出膏率为指标筛选加水量。现将考察条件及结果描述如下。

按处方比例称取各药材，每份重楼3600g、云威灵6000g、黄芪6800g、叶下花4000g、川牛膝2000g、紫丹参4000g、伸筋草1000g、续断4000g，按下表要求依次煎煮，浓缩，干燥，得干浸膏，见下表。

                                  水煎煮出膏率

批次	加水量(倍数)	提取次数	提取时间(h)	干膏重(g)	出膏率(％)
						123	12/10/1010/8/88/6/6	333	2.0/1.5/1.52.0/1.5/1.52.0/1.5/1.5	3039.522882.522373.84	9.689.187.56

*总量31400g

由上表可见，加水12倍、10倍量，出膏率相差不大，故三次加水最佳分别为10倍、8倍、8倍量即可完全煎出。

实验例4    浓缩与干燥工艺研究

1、浓缩工艺研究

浓缩的程度以相对密度来衡量，过低会延长干燥时间，过高会粘锅、甚至糊化，成分不同，提取液性质不同，浓缩的相对密度也会有区别，由于下一步工艺要进行膏粉的混合，因此，浓缩膏的性质直接影响收膏量和混合的效果及干燥的难易。经过中试试验，确定将药液浓缩至50℃相对密度为1.34-1.36的清膏，这样易于收膏，混合及干燥。

按处方比例称取各药材，每份昆明山海棠，用70％乙醇(6倍、4倍、4倍量)回流提取三次，每次1小时，趁热过滤，合并滤液，减压回收乙醇，药液备用；其余黄芪七味与其余重楼，加水(10倍量、8倍、8倍量，煎煮三次，第一次2小时，第二次、三次各1.5小时，滤过，合并三次滤液，与上述药液合并，减压浓缩至50℃相对密度为1.35的稠膏，即可。

2、干燥工艺研究

在中试生产中采用减压干燥方法，即可防止有效成分的损失，又可缩短干燥时间，同时所得干膏松脆，易于粉碎和保存；经中试样品试验，确定减压干燥条件为80℃(0.07Mpa)。

按处方比例称取各药材三份，昆明山海棠2800g，按拟定70％乙醇提取方法操作，药液备用，重楼3600g、云威灵6000g、黄芪6800g、叶下花4000g、川牛膝2000g、紫丹参4000g、伸筋草1000g、续断4000g，按制定水提取方法操作，得煎液，将上述药液与煎液合并，减压浓缩至相对密度为1.34～1.36(50℃)清膏，减压干燥即可。

3、出膏率的测定

按上述干燥的干膏，粉碎，称定重量，得出膏率，测定结果如下。

                  出膏率试验

批次	药材总量(g)	干膏重(g)	出膏率％
				123	342003420034200	362535913899	10.610.511.4

根据上表可见，出膏率在10.5～11.4％之间。

实验例5    制剂成型工艺研究

本品优选片剂，成型工艺比较复杂。在完成提取、干燥、粉碎的工作基础上，得到药物原料细粉(过100目)，为了得到容易流动，具有一定的粘着性，迅速崩解，硬度适当的优良片剂，还必须另加辅料等赋形剂才可成型。针对本处方所得到的药物细粉的性质，对赋形剂的种类以及用量进行了筛选，结果如下：

1、辅料的选择

经过提取、干燥、粉碎后所得到的浸膏粉，由于浸膏含量较高，粘性较大，流动性差，易吸朝，不易制粒和压片，需加入一定辅料，改善其中间体的性质，使其易于制粒和压片，崩解迅速，试验中选择性质稳定的羟丙基纤维素作为崩解剂，外加法加入，同时配合加入一定量的硬脂酸镁，改善药片的流动性，试验中分别采用羧甲基淀粉钠、羟丙基纤维素进行试验，试验结果，所用辅料以羟丙基纤维素制得的素片硬度适中，崩解时间约为30分钟，羟丙基纤维素用量约为2％。

2、制粒条件

颗粒的质量是片剂的关键，制粒的乙醇浓度、颗粒的干燥温度、粒度和水分直接影响片剂的质量，通过试验，确定采用80％乙醇制粒，湿颗粒的干燥温度为60-65℃，干颗粒大小应通过10-12目筛，含水量应控制在3～5％之间。在完成上述提取、浓缩、干燥的基础上，对半成品质量进行检查。

3、压片

压片前的颗粒应具有良好的流动性，才能保证其填充良好，分布均匀，压出的素片完整光洁，重量差异符合规定，经试验，在颗粒中加入0.2％的硬酯酸镁，得到的颗粒具有良好的流动性。

实施例1

重楼    260g    昆明山海棠  200g   云威    300g  黄芪  340g

叶下花  200g    川牛膝      100g   紫丹参  200g  红花  50g

地龙    60g     伸筋草      50g    续断    200g

以上十一味，取重楼80g、昆明山海棠60g、红花、地龙用75％乙醇洗净，烘干，粉碎成细粉，灭菌，备用；剩余昆明山海棠粉碎成粗粉，用70％乙醇以6倍量、4倍量、4倍量回流提取3次，每次1小时，趁热滤过，合并滤液，回收乙醇，药液备用，其余黄芪等七味与剩余重楼，加水煎煮三次，第一次加水10倍量，煎煮2小时，第二、三次加水8倍量，各煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，与上述药液合并，减压浓缩至50℃相对密度为1.34～1.36的稠膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎，制粒，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

实施例2

重楼    140g   昆明山海棠  100g   云威灵  200g    黄芪  240g

叶下花  100g   川牛膝      50g    紫丹参  100g    红花  20g

地龙    30g    伸筋草      20g    续断    100g

以上十一味，取重楼40g、昆明山海棠30g、红花、地龙用75％乙醇洗净，烘干，粉碎成细粉，灭菌，备用；剩余昆明山海棠粉碎成粗粉，用50％乙醇以4倍量、2倍量、2倍量回流提取2次，每次1小时，趁热滤过，合并滤液，回收乙醇，药液备用，其余黄芪等七味与剩余重楼，加水煎煮三次，第一次加水4倍量，煎煮1小时，第二、三次加水6倍量，各煎煮1小时，滤过，合并滤液，与上述药液合并，减压浓缩至50℃相对密度为1.34～1.36的稠膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎，制粒，包薄膜衣，即得。

实施例3

重楼    340g    昆明山海棠  350g    云威灵  500g  黄芪  560g

叶下花  400g    川牛膝      180g    紫丹参  300g  红花  120g

地龙    110g    伸筋草      100g    续断    400g

以上十一味，取重楼100g、昆明山海棠100g、红花、地龙用75％乙醇洗净，烘干，粉碎成细粉，灭菌，备用；剩余昆明山海棠粉碎成粗粉，用70％乙醇以8倍量、6倍量、7倍量回流提取4次，每次2小时，趁热滤过，合并滤液，回收乙醇，药液备用，其余黄芪等七味与剩余重楼，加水煎煮三次，第一次加水12倍量，煎煮4小时，第二、三次加水12倍量，各煎煮2.5小时，滤过，合并滤液，与上述药液合并，减压浓缩至50℃相对密度为1.34～1.36的稠膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎，制粒，包薄膜衣，即得。

实施例4

本发明组合物制剂的质量控制方法

鉴别：

a.取本品25片，除包衣，研细，加甲醇100ml，回流提取3小时，取续滤液50ml，蒸干，残渣用水30ml分次溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚20ml或30ml振摇提取2次，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次30ml，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30ml，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，上5g、1.5cm中性氧化铝柱，用30％乙醇10ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2，10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取本品12片，除包衣，研细，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸8∶1∶1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中显色，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取本品25片，除包衣，研细，加80％丙酮溶液20ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，加80％丙酮溶液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇7∶2∶3∶0.4为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d.取本品8片，除包衣，研细，加氨试液5ml、三氯甲烷50ml，密塞，超声提取30分钟，静置过夜，滤过，滤液用4％盐酸溶液30ml，振摇提取，分取酸液，用浓氨溶液调节pH至10，用三氯甲烷振摇提取2次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取续断对照药材3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

含量测定方法为：

a.总生物碱：取本品10片，除包衣，研匀，取2g，精密称定，精密加甲醇100ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣用0.5mol/L盐酸溶液30ml，分次溶解并转移至分液漏斗中，用三氯甲烷分别以30ml、30ml、20ml振摇提取3次，弃去三氯甲烷液，水液用浓氨溶液调节pH至10，再用三氯甲烷分别以30ml、30ml、20ml、20ml振摇提取4次，合并三氯甲烷液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥至恒重，精密称定，以干燥品计算，含总生物碱不得少于0.93％；

b.羟基红花黄色素A：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4％磷酸溶液32∶68为流动相，检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000，精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含25.8μg的溶液，即为对照品溶液；取本品10片，除包衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，功率250W，频率25kHz，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每片含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计，不得少于0.3mg。

Claims (7)

1、一种药物组合物，其特征在于：该药物组合物是由下述原料药制成的：

重楼140-340重量份      昆明山海棠100-350重量份

云威灵200-500重量份    黄芪240-560重量份

叶下花100-400重量份    川牛膝50-180重量份

紫丹参100-300重量份    红花20-120重量份

地龙30-110重量份       伸筋草20-100重量份

续断100-400重量份。

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：该药物组合物是由下述原料药制成的：

重楼260重量份    昆明山海棠200重量份  云威灵300重量份

黄芪340重量份    叶下花200重量份      川牛膝100重量份

紫丹参200重量份  红花50重量份         地龙60重量份

伸筋草50重量份   续断200重量份。

3、如权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：该方法为：取1/3重量份重楼、1/3重量份昆明山海棠、红花、地龙用50-90％乙醇洗净，烘干，粉碎成细粉，灭菌，备用；剩余昆明山海棠粉碎成粗粉，用50-85％乙醇分别以4-8倍量、2-6倍量、2-7倍量回流提取3次，每次1-3小时，趁热滤过，合并滤液，回收乙醇，药液备用；云威灵、黄芪、叶下花、川牛膝、紫丹参、伸筋草、续断与剩余重楼加水煎煮三次，第一次加水4-12倍量，煎煮1-4小时，第二、三次加水6-12倍量，各煎煮1-3小时，滤过，合并滤液；将上述第二、三步制备的药液合并，减压浓缩至50℃下相对密度为1.34～1.36的稠膏，再加入上述第一步制得的细粉，混匀，干燥，粉碎，最后经过常规工序直接或加入药学上接受的赋型剂制成临床接受的颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液中的任意剂型。

4、如权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：该方法为：取1/3重量份重楼、1/3重量份昆明山海棠、红花、地龙用75％乙醇洗净，烘干，粉碎成细粉，灭菌，备用；剩余昆明山海棠粉碎成粗粉，用70％乙醇以6倍量、4倍量、4倍量回流提取3次，每次1小时，趁热滤过，合并滤液，回收乙醇，药液备用，其余黄芪等七味与剩余重楼，加水煎煮三次，第一次加水10倍量，煎煮2小时，第二、三次加水8倍量，各煎煮1.5小时，滤过，合并滤液，与上述药液合并，减压浓缩至50℃相对密度为1.34～1.36的稠膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎得浸膏粉，加入浸膏粉重量的2％的羟丙基纤维素，制粒，再加入浸膏粉重量的0.2％的硬脂酸镁，压片，包薄膜衣，即得片剂。

5、如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于：该方法中的鉴别方法包括如下鉴别方法中的一种或几种：

a.取本品25片，除包衣，研细，加甲醇100ml，回流提取3小时，取续滤液50ml，蒸干，残渣用水30ml分次溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚20ml或30ml振摇提取2次，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次30ml，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30ml，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，上5g、1.5cm中性氧化铝柱，用30％乙醇10ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2，10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取本品12片，除包衣，研细，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸8∶1∶1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中显色，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取本品25片，除包衣，研细，加80％丙酮溶液20ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，加80％丙酮溶液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇7∶2∶3∶0.4为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d.取本品8片，除包衣，研细，加氨试液5ml、三氯甲烷50ml，密塞，超声提取30分钟，静置过夜，滤过，滤液用4％盐酸溶液30ml，振摇提取，分取酸液，用浓氨溶液调节pH至10，用三氯甲烷振摇提取2次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取续断对照药材3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

6、如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于：该方法中的含量测定方法为：

a.总生物碱：取本品10片，除包衣，研匀，取2g，精密称定，精密加甲醇100ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣用0.5mol/L盐酸溶液30ml，分次溶解并转移至分液漏斗中，用三氯甲烷分别以30ml、30ml、20ml振摇提取3次，弃去三氯甲烷液，水液用浓氨溶液调节pH至10，再用三氯甲烷分别以30ml、30ml、20ml、20ml振摇提取4次，合并三氯甲烷液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥至恒重，精密称定，以干燥品计算，含总生物碱不得少于0.93％；

b.羟基红花黄色素A：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4％磷酸溶液32∶68为流动相，检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000，精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含25.8μg的溶液，即为对照品溶液；取本品10片，除包衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，功率250W，频率25kHz，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每片含红花以羟基红花黄色素A计，不得少于0.3mg。

7、如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法包括如下步骤：

a.取本品25片，除包衣，研细，加甲醇100ml，回流提取3小时，取续滤液50ml，蒸干，残渣用水30ml分次溶解并转移至分液漏斗中，用乙醚20ml或30ml振摇提取2次，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇液，用2％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次30ml，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30ml，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，上5g、1.5cm中性氧化铝柱，用30％乙醇10ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2，10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取本品12片，除包衣，研细，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸8∶1∶1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中显色，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取本品25片，除包衣，研细，加80％丙酮溶液20ml，密塞，振摇15分钟，静置，取上清液，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，加80％丙酮溶液10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇7∶2∶3∶0.4为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d.取本品8片，除包衣，研细，加氨试液5ml、三氯甲烷50ml，密塞，超声提取30分钟，静置过夜，滤过，滤液用4％盐酸溶液30ml，振摇提取，分取酸液，用浓氨溶液调节pH至10，用三氯甲烷振摇提取2次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取续断对照药材3g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

a.总生物碱：取本品10片，除包衣，研匀，取2g，精密称定，精密加甲醇100ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣用0.5mol/L盐酸溶液30ml，分次溶解并转移至分液漏斗中，用三氯甲烷分别以30ml、30ml、20ml振摇提取3次，弃去三氯甲烷液，水液用浓氨溶液调节pH至10，再用三氯甲烷分别以30ml、30ml、20ml、20ml振摇提取4次，合并三氯甲烷液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥至恒重，精密称定，以干燥品计算，含总生物碱不得少于0.93％；

b.羟基红花黄色素A：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4％磷酸溶液32∶68为流动相，检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000，精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含25.8μg的溶液，即为对照品溶液；取本品10片，除包衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，功率250W，频率25kHz，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每片含红花以羟基红花黄色素A计，不得少于0.3mg。