CN101044234A - 具有减少身体脂肪活性的植物乳杆菌以及包含它们的食品 - Google Patents

具有减少身体脂肪活性的植物乳杆菌以及包含它们的食品 Download PDF

Info

Publication number
CN101044234A
CN101044234A CNA2005800294502A CN200580029450A CN101044234A CN 101044234 A CN101044234 A CN 101044234A CN A2005800294502 A CNA2005800294502 A CN A2005800294502A CN 200580029450 A CN200580029450 A CN 200580029450A CN 101044234 A CN101044234 A CN 101044234A
Authority
CN
China
Prior art keywords
strain
cla
lactobacterium plantarum
plantarum strain
lactobacterium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2005800294502A
Other languages
English (en)
Inventor
李莲姬
白璟洙
孙京铉
金泰禛
高志勋
朴范石
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CJ Corp
Original Assignee
CJ Co Ltd
PL BIO CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CJ Co Ltd, PL BIO CO Ltd filed Critical CJ Co Ltd
Publication of CN101044234A publication Critical patent/CN101044234A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A23L19/20—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof by pickling, e.g. sauerkraut or pickles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6431—Linoleic acids [18:2[n-6]]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/25—Lactobacillus plantarum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Dairy Products (AREA)

Abstract

本发明涉及具有减少身体脂肪的活性的乳酸杆菌菌株并提供了植物乳杆菌菌株PL62KCCM－10655P。本发明的菌株可以直接用作减少身体脂肪的功能食品，或者可以用作减少身体脂肪的功能食品的添加剂、或者减少身体脂肪的功能发酵食品的发酵起始菌株。本发明的菌株产生的抑制身体脂肪的物质可加以分离以被利用。另外，在利用所述菌株来生产发酵食品的情况下，本发明提供了能够具有最大程度减少身体脂肪的作用的条件。

Description

具有减少身体脂肪活性的植物乳杆菌以及包含它们的食品
技术领域
本发明涉及具有减少身体脂肪活性的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)和包含它们的食品。
本发明提供了具有减少身体脂肪活性的乳酸杆菌菌株。
本发明还提供了含有具有减少身体脂肪作用的CLA的活的生物、死的生物、破碎的细胞壁部分、培养液、干燥的培养液、培养物提取物(其均由本发明的乳酸杆菌菌株产生)，以及包含它们的减少身体脂肪的功能食品和食品添加剂。
另外，本发明提供了利用具有减少身体脂肪作用的乳酸杆菌菌株作为起始菌株(starter strain)或添加剂的减少身体脂肪的功能食品和饮料。
此外，本发明提供了一种含有本发明的乳酸杆菌菌株的具有减少身体脂肪作用的药物。
背景技术
在现代社会中，肥胖症是具有比癌症更低的完全治愈比例的疾病，并且增加了死亡率以及由此产生的各种成人疾病。在美国，它已经带来了足以使公众与肥胖症进行斗争的严重问题。许多材料被宣称是对预防和治疗肥胖症有效的物质，但是直到目前，根据科学原理，仅有丙酮酸和共轭亚油酸(CLA)被证明是有效的(Lenz TL，Hamilton WR.Supplemental products used for weight loss.2004.J AmPharm Assoc(Wash DC)44：59-67)。有研究表明减少身体脂肪的机制是通过诱导脂肪细胞的凋亡来减少脂肪细胞的数量、减少脂肪细胞的大小、减少能量和食品的摄取、减少脂肪的产生、增加能量的消耗、分解脂肪活性、增加脂质氧化等(Chardigny JM，Hasselwander O，Genty M，Kraemer K，Ptock A，Sebedio JL.2003，Effect of conjugatedFA on feed intake，body composition，and liver FA in mice.Lipids.38(9)：895-902)。
CLA(c9t11-十八碳二烯酸、t10c12-十八碳二烯酸)是通过亚油酸(LA，C18:2顺式9顺式12)的异构化形成的。根据双键的位置，已知CLA具有抗氧化作用、降低胆固醇作用、促进生长作用、以及抗癌作用。最近，已知CLA具有减少身体血浆脂质、减少身体脂肪的作用等。已报道CLA可以在动物肉类、发酵牛奶等中存在。动物实验和临床试验已经证明：CLA异构体中的c9，t11-CLA尤其具有减少身体脂肪的作用。最理想地，c9t11-CLA和t10c12-CLA最优选以同样的量生产。
溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio fibriosolvents)是首先发现的生产CLA的厌氧性微生物，其从反刍动物(如奶牛)中分离出来。它通过两个步骤对LA的生物氢化产生反-11-十八碳烯酸。在对产生的共轭酸进行氢化以产生反-11-十八碳烯酸之前，通过亚油酸异构酶的作用产生顺-9，反-11-十八碳二烯酸。
根据2004年的最新挪威研究(Gaullier JM，Halse J，Hoye K，Kristiansen K，Fagertun H，Vik H，Gudmundsen O.2004.Conjugatedlinoleic acid supplementation for 1 y reduces body fat mass in healthyoverweight humans.Am J Clin Nutr.79(6)：1118-1125)，当将CLA给予180个超重者达一年时，导致4-10％的重量减轻同时没有副作用。
本发明选择并鉴定了过度生产t10c12-CLA的具有减少身体脂肪作用的韩国型乳酸杆菌菌株，确认了菌株的前生命期的特性，如肠内适应性等，并且通过实施证实重量减少的动物试验找到了该菌株能够最大程度生产CLA的条件以及具有减少身体脂肪作用的乳酸杆菌菌株。
发明内容
[技术问题]
因此，鉴于上述问题，形成了本发明，并且本发明的一个目的是提供生产CLA的菌株。
本发明的菌株是植物乳杆菌菌株PL62，保藏编号为KCCM-10655P，于2005年5月9日在韩国微生物培养中心保藏(Korean Culture Center of Microorganisms)。
本发明的另一目的是提供能够减少身体脂肪的乳酸杆菌菌株。
本发明的另一目的是通过减少身体脂肪来预防或治疗各种成人疾病。
本发明的又一目的是提供生产最大量的具有减少身体脂肪作用的CLA的条件。
本发明的又一目的是提供一种菌株，其具有减少身体脂肪的作用，对肠道具有良好的粘附性，以及对酸和胆汁具有强的耐受性。
本发明的又一目的是提供作为前生命期的乳酸杆菌菌株，其不转移抗生素耐受性并且是无害的。
乳酸杆菌菌株可以制成各种组合物，优选这些组合物是组合形式，如胶囊、片剂、粉剂等以及能够被加入到各种食品中的便利形式。这些制剂可以通过已知的方法，利用药学上可接受的载体、赋形剂、溶剂或添加物来制备。这些方法和成分是熟知的，并且详细地披露在标准教科书和手册中，例如出版物(Remington.1995.TheScience and Practice of Pharmacy.Mack Publishing Co.Easton，PA18042，USA)，将其通过引用方式并入本文中。
含有乳酸杆菌菌株的助消化食品可以通过本领域熟知的方法来制备。
具有减少身体脂肪作用的食品和饮料可以通过本领域熟知的方法，利用所述菌株作为含发酵奶制品的发酵食品的起始菌株或添加物来制备。
具有最大程度减少身体脂肪作用的发酵食品可以利用本文提供的条件生产。
[技术方案]
根据本发明的一个方面，上述和其他目的可以通过提供具有减少身体脂肪的功能食品来实现。
根据本发明的另一方面，提供了能够减少身体脂肪的植物乳杆菌菌株PL62KCCM-10655P。
根据本发明的另一方面，提供了包含以1×106-1×1011CFU/g的量的植物乳杆菌菌株PL62KCCM-10655P的减少身体脂肪的功能食品，以便利用减少身体脂肪的作用来预防和治疗成人疾病。
根据本发明的另一方面，提供了包含植物乳杆菌菌株PL62的食品和饮料添加剂。
根据本发明的另一方面，提供了利用植物乳杆菌菌株PL62能够在发酵食品中获得最大程度的减少身体脂肪作用的条件。
在下文中，将通过参照本发明的优选具体实施方式的实施例来更详细地描述本发明，然而，其不应被解释为以任何方式限制本发明。
[有益效果]
本发明的植物乳杆菌菌株PL62具有减少身体脂肪的作用，因而能够预防或治疗由肥胖引起的疾病。另外，本发明的干的植物乳杆菌菌株PL62和植物乳杆菌菌株PL62培养滤液、干燥培养滤液可以用作各种食品和饮料的添加剂，以用于预防和治疗身体肥胖，因此可以被用于预防和治疗所有与肥胖相关的疾病。此外，利用本发明的所述植物乳杆菌菌株PL62的发酵食品可以通过减少身体脂肪作用来预防和治疗肥胖症。
另外，根据本发明，植物乳杆菌菌株PL62必须是在含有LA的培养基中原始培养的，以便生产最大量的CLA。LA的含量为100-1000ppm，吐温-80的含量为0.01～1％，并且糖类(碳水化合物)优选果糖、蔗糖和乳糖，以使利用植物乳杆菌菌株PL62的发酵食品具有最大程度的减少身体脂肪的作用。
附图说明
通过以下结合附图的详细说明将更清楚地理解本发明的上述的和其他目的、特征及其它优点，其中：
图1是鉴定由植物乳杆菌菌株PL62产生的CLA的气相色谱图。
图2是植物乳杆菌菌株PL62的显微照片。
图3示出了植物乳杆菌菌株PL62的16S rRNA序列。
图4示出了植物乳杆菌菌株PL62对Caco-2细胞的适应性(adaptation)的实验结果。
图5示出了植物乳杆菌菌株PL62对人肠道的粘附性的实验结果。
图6为示出了将植物乳杆菌菌株PL62口服给予人后分离的菌落的PCR结果的带状图。
图7示出了服用植物乳杆菌菌株PL62的大鼠体重的变化。
图8示出了服用植物乳杆菌菌株PL62后第9周的各组大鼠的体重的比较图。
图9示出了服用植物乳杆菌菌株PL62后第9周的各组大鼠的肠道重量的比较图。
具体实施方式
实施例1：筛选能够生产共轭亚油酸(下文中称作CLA)的乳酸杆菌菌株
为了选择生产CLA的菌株，筛选在含有LA(CLA的底物)的培养基中生长的乳酸杆菌菌株。然后，确认它们是否表达异构酶(一种涉及生产CLA的酶)。
<材料和方法>
首先，选择在含有亚油酸(LA)的培养基中生长的乳酸杆菌菌株，在其中筛选生产CLA的乳酸杆菌菌株。为此，通过利用异构酶测定可以从大量的乳酸杆菌菌株中容易地筛选生产CLA的菌株(Ogawa J，Matsumura K，Kishino S，Omura Y，and Shimizu S.2001.Conjugated linoleic acid accumulation via10-Hydroxy-12-octadecaenoic acid during microaerobic transformationof linoleic acid by Lactobacillus acidophilus.Appl.Envir.Microbiol.67：1246-1252；T.Y.Lin，C.W.Lin，Y.J.Wang.2002.Linoleic acidisomerase activity in enzyme extracts from Lactobacillus acidophilusand Propionibacterium freudenreichii ssp.Shermanii，J Food Sci.67(4)：1502-1505))。首先，初步选择在含有0.1％LA的MRS培养基中生长的乳酸杆菌菌株。然后，这些乳酸杆菌菌株在MRS肉汤培养基中进行二次传代培养，并在含有0.1％LA 10mL的MRS肉汤培养基中培养2天。在用0.1M磷酸钾缓冲溶液(pH 7.0)洗涤细胞之前，将5mL的培养基在8000rpm下离心10分钟以收集细胞。再次，向其中加入0.1M磷酸钾缓冲溶液(pH 7.0)1.0mL，随后利用超声破碎机(ultrasonic breaker)在冰冷状态下每3分钟破碎并离心混合物，以获得粗制的酶溶液。将该粗制的酶溶液加入到底物溶液(LA0.1mL、0.1M磷酸钾缓冲溶液2.7mL、以及1，3-丙二醇0.2mL)中，以在233nm处测量吸光度。
<结果与讨论>
利用异构酶测定从超过200个乳酸杆菌菌株中筛选出生产CLA的乳酸杆菌菌株。
实验实施例1：利用气相色谱法鉴定CLA的产生
为了证实通过表达异构酶的乳酸杆菌菌株实质上产生了多少CLA，利用气相色谱确定产生的CLA的量。
<材料和方法>
将乳酸杆菌备选菌株接种到含有LA的MRS液体培养基中，然后在37℃下培养该混合物24-48小时。用十七酸和氯仿∶甲醇的混合物提取培养的介质。提取物用硫酸钠处理，以除去湿气(水分)，随后蒸发。将1N氢氧化钠(甲醇中)加入到制备的样品中，随后在100℃下皂化该样品15分钟。向其中加入4％HCl(甲醇中)以甲基化。将己烷∶水(1∶1，v/v)加入到该甲基化的样品中，随后混合并离心。利用氮气带走有机溶剂部分以除去有机溶剂，随后将该样品溶解在1mL己烷中。
根据本发明，通过具有火焰电离检测器(FID)的气相色谱(Hewlett Packard 5890 Series II GC)在除去氧化物之前和之后测量每个样品内的CLA含量。所用的毛细管柱(DB FFAP毛细管柱)具有30m的长度、0.25μm的内径、以及0.25μm的膜厚度。将该柱设置在GC中后，在以下条件下使用GC：炉温(柱温)(210℃)；检测器温度(270℃)；进样温度(250℃)；载气(氦(1mL/min))；分流比(50∶1)；以及进样量(2μl)。每个峰面积利用与GC相连的积分仪(3395，Hewlett Packard)来计算。鉴定CLA，与标准物质的保留时间进行比较。十七酸用作内部标准物质以便测量CLA含量(Lin，T.Y.2000.Conjugated linoleic acid concentration as affected bylactic cultures and additives，Food Chemistry 69.27-31)。
<结果和讨论>
如图1的气相色谱图所示，分离的乳酸杆菌菌株生产CLA的c9t11和t10c12两种异构体。如果以ppm表示具有减少身体脂肪作用的t10c12 CLA的产量，则植物乳杆菌菌株PL62产生的t10c12CLA的量为43.22ppm(Lee SO，Kim CS，Cho SK，Choi HJ，JI GE，Oh DK.2003.Bioconversion of linoleic acid into conjugated linoleic acid duringfermentation and by washed cells of Lactobacillus reuteri.Biotechnol Lett.25(12)：935-938)，并且与所报道的费氏丙酸杆菌费氏亚种(Propionibacterium freudenreichii ssp.freudenreichii)(其生产的CLA的量为26.5ppm)(Jiang J，Bjorck L，Fonden R.1998.Production ofconjugated linoleic acid by dairy starter cultures.J Appl Microbiol.85(1)：95-102)相比，其具有更优异的生产能力。
实验实施例2：乳酸杆菌菌株的鉴定：革兰氏染色，利用API试剂盒、16S rRNA序列分析、多重PCR进行鉴定
为了鉴定生产CLA的乳酸杆菌菌株，要确认它们对革兰氏染色是否表现出革兰氏阳性以及过氧化氢酶阴性。利用API试剂盒进行各种生物化学和生理学试验，并且分析和鉴定16S rRNA序列。另外，为了把紧密相关的物种进行分类，通过多重PCR检测利用种群特异性引物来鉴定菌株。
1.革兰氏染色
将菌株在载玻片上涂片并热固定，然后在其上加入结晶紫溶液，反应约1分钟。所得的载玻片用碘溶液处理以便洗去多余的染料，随后在其上加入碘，处理1分钟。所得的载玻片用95％乙醇脱色30秒，然后用水洗涤2-3秒，用吸管(吸盘)除去水。所得的载玻片用番红精0溶液处理10-30秒用于复染(counter stain)。所得的载玻片用水小心漂洗直到染料不再出来，随后用吸管干燥所得的载玻片，滴上一滴浸渍用油以便通过显微镜观察。
<结果与讨论>
如图2所示，生产CLA的乳酸杆菌菌株表现为革兰氏阳性。
2.利用API试剂盒进行生物化学和生理学试验
在确认菌株是否为完全分离后，在30℃或37℃下，在MRS培养基中培养该菌株24小时。将它们在MRS肉汤培养基中超过两次传代培养，随后从MRS培养基分离菌落。悬浮培养基安瓿瓶被打开以利用棉球制备具有极高浊度的重悬浮液。制备的菌株溶液被逐滴滴入5mL该悬浮培养基直到浊度达到2McFarland。含有该菌株的API 50CHL培养基被分入条形管中并在30℃或37℃、需氧条件下培养48小时。如果产酸，则API试剂盒通过该培养基中的溴甲酚紫指示剂使培养基变为适度的淡黄色。如果在Esculin试验(第25号管)中的颜色从紫色变为黑色，则意味着是阳性反应。
<结果与讨论>
如表1所示，利用API 50CH试剂盒的试验结果表明本发明的乳酸杆菌菌株被鉴定为植物乳杆菌(99.3％)。
[表1]利用API CH50试剂盒鉴定乳酸杆菌菌株的结果
  第1条带管/基质   第1条带管/基质   第1条带管/基质   第1条带管/基质   第1条带管/基质
  -对照   +半乳糖   +D-甘露糖苷   -蜜二糖   +D-松二糖
  -甘油   +D-葡萄糖   +D-葡糖苷   +蔗糖   -D-来苏糖
  -赤藻糖醇   +D-果糖   +葡糖胺   +海藻糖   -D-塔格糖
  -D-树胶醛糖   +D-甘露糖   +扁桃苷   +安茴酰牛扁碱   -D-岩藻糖
  +L-树胶醛糖   -L-山梨糖   +熊果苷   +松三糖   -L-岩藻糖
  +核糖   -鼠李糖   +七叶苷   -D-棉子糖   -D-阿拉伯糖醇
  -D-木糖   -卫矛醇   +水杨苷   -阿米酮   -L-阿拉伯糖醇
  -L-木糖   -肌醇   +纤维二糖   -糖原   -葡糖酸酯
  -核糖醇   +甘露醇   +麦芽糖   -木糖醇   -2-葡糖酸酯
  -木糖苷   +山梨糖醇   +乳糖   +龙胆二糖   -5-葡糖酸酯
                                   植物乳杆菌(99.3％)
3.利用16S rRNA序列分析的鉴定
分离基因组DNA以扩增其16S核糖体DNA片断，随后通过电泳确认扩增的DNA片断。利用Qiagen PCR纯化试剂盒(Qiagen，Hilden，Germany)来纯化DNA片断以便与含有d-若丹明染料标记的dd-NTP的反应物溶液混合，随后进行直接测序以利用乙醇/醋酸钠沉淀来纯化获得的DNA。将纯化的DNA溶解在TSR(模板抑制试剂)中以便用ABI棱镜(prism)310基因分析仪(PE AppliedBiosystems，U.S.A)进行分析。利用基因库(Genebank)( http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)来鉴定所分析的序列。
<结果与讨论>
作为分析生产CLA的乳酸杆菌菌株的结果(图3)，其表现出与植物乳杆菌823/823(100％)的相似性。
实验实施例3：植物乳杆菌PL62的肠道适应性
为了用作前生命期物(probiotic)，它必须对酸和胆汁具有强的耐受性，并且对肠道细胞具有良好的适应性。应该通过人实验来确定肠道适应性。
1.耐酸性试验
为了知晓pH是否影响所选菌株的存活性，在利用10N HCl调整pH为7.0、4.8和4.5后，使用MRS(DeMan-Rogosa-Sharpe)培养基。活化的菌株溶液(O.D＝2.0)以2％的量接种至MRS培养基并在37℃下培养24小时，随后在600nm处测量吸光度。利用所测得的吸光度考察pH是否影响所选菌株的生长。pH7.0的O.D被稀释至1/10以测量并记录吸光度(Conway PL，Gorback SL，Goldin BR，1987.Survival of lactic acid bacteria in the human stomach andadhesion to intestinal cells.J.Dairy Sci.70：1-12)。
<结果与讨论>
作为低酸存在下的存活性实验的结果，即使所述菌株被处理24小时，它们仍存活，因此对酸具有强的耐受性，如表2所示。
[表2]植物乳杆菌菌株PL62的耐酸性实验结果(在600nm处的O.D)
  时间   0hr   3hr   6hr   24hr
  PH7.0   0.032   0.090   0.597   7.720
  PH4.8   0.036   0.094   0.374   6.120
  PH4.5   0.028   0.073   0.262   5.540
2.胆汁耐受性试验
为了知晓胆汁是否影响所选菌株的生长，将牛胆(ox-gall)(OXOID)以0.125％和0.25％的量加入MRS(DeMan-Rogosa-Sharpe)培养基以消毒灭菌。活化的菌株溶液(O.D＝2.0)以2％的量被接种至该无菌的培养基并在37℃下培养24小时，随后在600nm处测量吸光度。0％胆汁中的O.D被稀释至1/10以测量并记录吸光度(Ibrahim SA，Bezkorovainy A.1993.Survival of bifidobacteria inthe presence of bile salt.J.Sci.Food Agric.62：351-354)。
<结果和讨论>
健康人小肠内具有0.06％的胆汁浓度。该菌株甚至在0.250％的胆汁中仍存活，因此具有强的胆汁耐受性。
[表3]
  时间   0hr   3hr   6hr   24hr
  胆汁0.000％   0.032   0.090   0.597   7.720
  胆汁0.250％   0.005   0.026   0.291   3.030
3.肠道粘附性试验
为了知晓对人肠道的粘附性，将植物乳杆菌菌株PL62粘附至来源于肠上皮细胞的Caco-2细胞系。为此，将Caco-2细胞系在含有碳酸氢钠2.7g/L、20％(v/v)的胎牛血清(FBS)和抗生素antimicotics的DMEM培养基(pH 7.0)中进行培养。将3×105个细胞接种至30mm皮氏培养皿的2mL培养基中，以培养为单层。该培养基每2天更换一次。6天后，用2mL磷酸盐缓冲盐水(PBS)漂洗该细胞单层两次。将1×107个细胞的该乳酸杆菌菌株悬浮在2mL的介质中并加入到皮氏培养皿，随后在5％CO2-95％空气下、在37℃下培养该混合物达60-90分钟。用无菌的PBS漂洗该细胞两次并用甲醇固定10分钟。在革兰氏染色后通过光学显微镜观察它们。在100倍显微镜下观察20个视野用于定量分析。计数粘附菌株的数量并以每100个Caco-2细胞粘附的菌株数量表示(Bibiloni R，Perez PF，DeAntoni GL.1999.Anaerobe 5，483-485；Edited by R.Fuller(1997)Probiotics 2，10-22)。
<结果与讨论>
如图4所示，植物乳杆菌菌株PL62对Caco-2细胞具有良好的粘附性。如果用20个视野来计算每个视野的粘附菌株的数量来计算每个视野的粘附菌株的平均数量，则每个视野粘附了8.49±0.98个乳酸杆菌菌株。这意味着每个培养皿中超过1000个乳酸杆菌菌株粘附至这些细胞，具有比常见的乳酸杆菌菌株更好的肠道粘附性。
4.对人肠道的适应性试验
为了确定乳酸杆菌菌株在人大量服用它们后是否对肠道适应，以1010CFU的量口服植物乳杆菌菌株PL62，每天一次，服用8天。次日，在MRS(具有1％溴代酚蓝，30μg/mL万古霉素)中培养粪便48小时。所有类似的菌落通过革兰氏染色来考察、传代培养、以及完全分离。利用完全分离的菌落进行种群特异性PCR试验。
<结果与讨论>
如图5所示，在服用植物乳杆菌菌株PL62后一到五天进行检测并在检测到后立即停止服用。通过种群特异性PCR试验证明所检测的乳酸杆菌菌落为植物乳杆菌(图6)。这证明植物乳杆菌菌株PL62适应肠道。尤其是，如图6所示，认为在给予植物乳杆菌菌株PL62后，通过肠道内的细菌群落的事实进行的判断变得更简单，该乳酸杆菌菌株具有肠道调节性。
实验实施例4：乳酸杆菌菌株的安全性试验
对于人服用量，应该进行乳酸杆菌菌株的安全性试验。为此，要确认乳酸杆菌菌株是否产生毒性物质，如氨、吲哚、溶血素等，以及有毒的酶是否存在。
1.溶血试验
当将植物乳杆菌菌株PL62接种入羊血琼脂中并在37℃下培养24小时时，仅发现α-溶血作用，未发现β-溶血作用。
2.明胶液化试验
将植物乳杆菌菌株PL62接种入由MRS明胶培养基(0.3g浓缩牛肉汁、0.5g蛋白胨、12g明胶、以及100mLMRS肉汤)制成的斜面培养基中并在35℃下培养6周。当它与对照一起在4℃冷却大约4小时以检查明胶液化时，由于没有观察到明胶液化，因此认为明胶酶不存在。
3.氨形成试验
将尿素琼脂培养基(尿素20g、NaCl 5g、KH2PO4 2g、蛋白胨1g、葡萄糖1g、苯酚12mg、以及蒸馏水100mL)过滤并灭菌，随后将15g琼脂溶解在900mL蒸馏水中以被湿灭菌(wet-sterilized)，并与制备的尿素琼脂培养基混合以调节总体积至1L(pH 6.9)。将植物乳杆菌菌株PL62接种至其上并在37℃下培养约12小时，随后观察该培养基的颜色变化。因为黄色培养基意味着阴性，因此证明植物乳杆菌菌株PL62不产氨。
4.吲哚形成试验
将植物乳杆菌菌株PL62接种到含0.1％胰胨的MRS琼脂中并培养约18小时。当加入5滴Kovac试剂(p-二甲氨基苯甲醛10g、丁醇150mL、以及盐酸50mL)后，没有颜色变化。这表明没有产生吲哚。
5.苯丙氨酸脱氨试验
将植物乳杆菌菌株PL62接种至含0.2％D，L-苯丙氨酸的MRS培养基中并培养约24小时。在将5-10滴10％氯化铁滴落其上以流到斜面培养基上后，在1-5分钟内观察到颜色改变。在阳性反应的情况下，则产生的苯丙酮酸与氯化铁反应而使培养基呈现绿色。植物乳杆菌菌株PL62表现出阴性反应。
6.β-葡糖醛酸糖苷酶试验
将p-硝基苯基-β-D-葡糖苷酸溶解在0.1M磷酸钠缓冲液(pH6.0)中至0.2％的浓度。将植物乳杆菌菌株PL62悬浮在磷酸盐缓冲液中至Ab600＝4以形成悬浮液。将具有基质(底物)的200μl缓冲溶液加入到200μl所述悬浮液中并在37℃下处理16小时。如果培养液变黄，则为阳性。然而，这个试验表现为阴性反应。将该培养液离心以获取上清液。在405nm处确定该上清液的吸光度为0.078。
7.硝基还原酶活性试验
在MRS液体培养基中过夜培养的植物乳杆菌菌株PL62在3000xg下离心10分钟以收集生物质(菌体，biomass)，随后声波处理该生物质5分钟。将4-硝基苯甲酸(最终浓度为300μg/mL)和三氯乙酸(最终浓度为0.21％)加入到该上清液中并在37℃下处理1小时，随后加入亚硝酸钠(最终浓度为0.007％)以在室温下处理20分钟。其中加入氨基磺酸铵(最终浓度为0.04％)并在室温下处理3分钟。向其加入NEDD(N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐)(最终浓度为0.35％)并在4℃下生长。当在540nm的分光光度计下观察生长的上清液时，它表现为阴性反应。将它与由加入1μg/mL 4-氨基苯甲酸获得的阳性反应进行比较。
8.抗生素耐受性
前生命期物具有的抗生素耐受性越强，则在肠内的存活能力越强。因此，抗生素耐受性越强，则越好。然而，如果抗生素耐受性转移，则会导致耐受性问题。要确认抗生素耐受性是否转移至其它细菌。
[表4]植物乳杆菌菌株PL62的抗生素耐受性
  抗生素   生长抑制的直径(mm)
  氨苄青霉素   34
  羧苄青霉素   29
  头孢哌酮(Cefoperazone)   22
  头孢金素(Cephalothin)   25
  氯霉素   30
  氯林肯霉素   20
  红霉素   32
  庆大霉素   12
  苯甲异噁唑青霉素   11
  青霉素   29
  哌拉西林   37
  利福平   24
  链霉素   8
  四环素   24
  Trimethpprime/磺胺甲噁唑   28
  万古霉素   6
9.抗生素耐受性的转移试验
为了考察抗生素耐受性的转移，实施了滤器结合测定(Givers，D.，G.Huys，and J，Swings.2003.In vitro conjugal transfer oftetracycline resistance from Lactobacillus isolates to otherGram-positive bacteria.FEMS Microb.Letters 225：125-130)。将植物乳杆菌菌株PL62培养至对数生长期中期(约4-5小时)。将1mL培养菌株与1mL粪肠球菌(Enterococcus faecalis)CCARM 5510混合，随后通过无菌的醋酸纤维素滤器过滤该混合物以用PPS(蛋白胨生理盐水溶液)洗涤。滤纸放在非选择性琼脂培养基上并在37℃下培养16小时。在该滤纸上生长的生物质用2mLPPS洗涤并与该滤纸分离，随后稀释该生物质以接种至含有各种抗生素的Enterococcosal选择性培养基中并在37℃下培养24-48小时。观察是否存在具有抗生素耐受性的粪肠球菌，但在培养物中不存在具有抗生素耐受性的粪肠球菌。这说明抗生素耐受性没有转移。
[用于本发明的实施方式]
实施例2：用于生产CLA的最佳条件
我们找到了可以最大程度地生产CLA的LA的浓度和基质(底物)的种类。
1.能够生产最大量CLA的LA的浓度
由于高浓度的LA抑制细菌自身的生长，因此LA不能以高浓度加入培养基中(Jenkins JK，Courtney PD.2003.Lactobacillusgrowth and membrane composition in the presence of linoleic orconjugated linoleic acid.Can J Microbiol.2003 49(1)：51-57)。另外，为了节约培养基上消耗的LA，找到了能够生产最大量CLA的LA的浓度。
<材料和方法>
将各种浓度的水溶性LA酯加入脱脂乳培养基和MRS培养基并过夜培养，随后测量在介质中产生的CLA的量。为此，提取培养基中的脂质并甲基化，然后利用GC来测量产生的CLA的量。为此，将1000ppm的十七酸和200mL的氯仿∶甲醇(2∶1)加入到20mL培养液中，随后向其中加入玻璃珠，剧烈摇晃5分钟并均化5分钟。
将该混合物在6000rpm下离心15分钟(4℃)并分为两部分。用硫酸钠处理有机溶剂部分以除去残留水分，随后蒸发有机溶剂以用氮气干燥。将1N氢氧化钠(甲醇)3mL加入该干燥的样品中并在100℃下皂化15分钟。此时，使用用特弗隆胶带处理的螺帽盖住的试管并且将该螺帽用石蜡膜(parafilm)包裹。向其加入4％HCl(甲醇)6mL以甲基化20分钟。将该甲基化的样品与2mL己烷∶水(1∶1，v/v)混合并剧烈摇晃10分钟，随后在8000rpm下(4℃)离心混合物15分钟。提取有机溶剂部分并利用氮气干燥，随后将该干燥的物质溶解在1mL己烷中。
<结果与讨论>
假定标准参考物质十七酸(heptodecanoic acid)的峰面积为100，则当LA以超过100ppm的量加入培养基中时，CLA以足够的量产生(表5)。另外，如果LA分别以1000ppm和500ppm的量加入，则它们之间在生产CLA方面没有显著的差别。优选地，LA以100-1000ppm的量加入以便生产CLA。考虑到成本和效率，500ppm是最优选的。
[表5]根据加入到培养基中的LA浓度的CLA生产
  保留时间(min)            加入培养基中的LA浓度(ppm)
  0ppm   10ppm   100ppm   500ppm   1000ppm
  6.867   十七酸   100   100   100   100   100
  12.002   CLA(c9，t11)   8002   11270   13789   17549   1332241
  12.332   CLA(t10，c12)   2397   2990   3602   4171   4093
  13.000   9967   8158   7466   4603   5791
2.用于生产最大量CLA的乳化剂添加条件
考察当加入乳化剂以提高LA在培养液中的溶解度时，CLA的产量是否提高。为此，将LA以0.1％的浓度加入至脱脂乳培养基和MRS培养基。此时，LA以三种形式加入：LA、LA盐、以及LA和吐温-80(0.2％)，并过夜培养，随后确定植物乳杆菌菌株PL62的CLA生产能力。利用上述方法，提取培养液中的脂质以被甲基化，随后通过GC确定CLA的量。
<结果与讨论>
与LA盐相比，所使用的用于提高培养液中LA的溶解度的吐温-80三倍地提高了t10c12 CLA的生产(表6)。非常重要的是，在将LA加入培养基时加入乳化剂，提高LA的溶解度。
[表6]吐温-80的加入对CLA生产的影响
                  植物乳杆菌菌株PL62
  RT(min)   脱脂乳(空白)   脱脂乳   脱脂乳+LA盐   脱脂乳+LA+吐温-80
  6.859   414941   429862   313101   471799
  12.010   8414   9688   15260   23141
  12.320   2323   2687   3259   8851
  13.000   4505   3036   5734   10321
3.在原始培养物上用于诱导CLA生产的乳化剂添加条件
为了在获取植物乳杆菌菌株PL62本身、或起始菌株或其添加物(additive)后立即最大程度生产CLA，要考察当培养植物乳杆菌菌株PL62以产生如冻干干粉的产物时，加入吐温-80以提高LA的溶解度是否是有效的条件。为此，将LA盐、0.1％的LA和吐温-80、0.2％的LA和吐温-80、以及0.5％的LA和吐温-80加入到其中有原始培养的起始菌株的培养基中。将原始培养的植物乳杆菌菌株PL62在生产CLA的培养基(含0.1％LA的脱脂乳)中培养以测量产生的CLA的量。
<结果与讨论>
为了在商业生产所用的脱脂乳培养基(乳清培养基)中最大程度地生产CLA，当在含有0.1％的LA和0.1-0.5％的吐温-80的脱脂乳培养基中培养植物乳杆菌菌株PL62以诱导CLA生产时，CLA的生产能力为最佳(表7)。认为0.2％的吐温-80比0.5％的吐温-80的CLA生产能力更高的原因是0.5％的吐温-80对乳酸杆菌菌株有生长抑制作用。
[表7]依赖于用于在培养基中溶解LA的吐温-80的浓度的植物乳杆菌菌株PL62的CLA生产能力
  对照(没有LA)                       含0.1％LA的脱脂乳
LA盐   LA+吐温80(0.01％)   LA+吐温80(0.1％)   LA+吐温80(0.2％)   LA+吐温80(0.5％)
  6.857   100   100   100   100   100   100
  12.002c9t11   8002   10230   15846   13972   17510   14872
  12.332t10c12   3397   3883   4154   4276   5978   5042
  13.000   9967   9520   10312   11912   11176   9784
4.用于生产最大量CLA的糖类添加条件
我们找到了能够最大程度生产CLA的糖种类。为此，将6％浓度的果糖、蔗糖、以及乳糖各自加入到含0.1％LA的脱脂乳培养基中以测量CLA的生产。
<结果与讨论>
在加入果糖后生产的CLA最多，其次为蔗糖和乳糖。当加入葡萄糖时，没有观察到有效的CLA生产。
[表8]根据各种糖的CLA生产的变化
                             脱脂乳
RT   没有PL62 对照 乳糖 果糖 葡萄糖 蔗糖
  6.895   306968   432143   311253   330425   332955   420686
  12.124   28760   30722   26172   30375   27515   52851
  12.45   17850   18148   12821   19046   15277   29339
  13.000   15088   20574   22464   18299   29688   21649
实施例3：给予生产CLA的植物乳杆菌菌株PL62的大鼠体重和肠重量的变化
1.给予生产CLA的植物乳杆菌菌株PL62的大鼠体重的变化
将冻干的植物乳杆菌菌株PL62(其在利用脱脂乳作为赋形剂的含0.1％LA和0.2％吐温-80的培养基中培养)以109CFU/天和107CFU/天的剂量给予大鼠，并同时给予高脂肪饮食，随后观察大鼠体重的变化。
<材料和方法>
将C57BL/6N大鼠(Charles river laboratory animal facility，USA)分为五组，每组四只。第一组给予常规饮食(Purina rodent chow#5057(3.28cal/g))；第二组给予高脂肪饮食(Research饮食45％高脂肪饮食D12451(5.252cal/g))；第三组为对照组，给予高脂肪饮食和赋形剂的脱脂乳；第四组给予高脂肪饮食和高浓度(109CFU/天)的植物乳杆菌菌株PL62；第五组给予高脂肪饮食和低浓度(107CFU/天)的植物乳杆菌菌株PL62。当三周大的大鼠吃饱高脂肪饮食和水时，观察它们体重和喂养饮食量的变化。大鼠在第9周被解剖，以便在染色后利用显微镜观察肠道脂肪和肠的重量。
<结果与讨论>
表9示出了给予植物乳杆菌菌株PL62的大鼠体重的变化。根据表9，虽然给予高浓度植物乳杆菌菌株PL62的组，在第4周几乎没有表现出显著的统计量，但与对照组相比，它的重量增加较小，在第8周超过3g(表9，图8和图9)。如表9所示，常规饮食组的平均重量为22.3g，高脂肪饮食组的平均重量为25.5g，脱脂乳组的平均重量为25.7g，给予高浓度植物乳杆菌菌株PL62组的平均重量为22.5g，而给予低浓度植物乳杆菌菌株PL62组的平均重量为23.8g。高浓度组的重量增加比高脂肪饮食组的重量增加少3.2g，少了12.4％。低浓度组的重量增加比高脂肪饮食组少1.9g，少了7.3％。与脱脂乳组相比，高浓度组和低浓度组分别表现出较少的重量增加，为3.5g(10.2％)和3.8g(11.1％)。
[表9]
  组   No.   6/11(0W)   6/17(1W)   6/25(2W)   7/2(3W)   7/9(4W)   7/16(5W)   7/23(6W)   7/30(7W)   8/6(8W)   8/10(8.5W)
  常规饮食   1   9.8   14.8   19.9   21.9   22.5   23.0   24.2   23.5   24.3   24.3
  2   9.0   12.3   20.8   21.8   22.8   23.5   24.2   25.5   26.8   26.4
  3   9.0   14.2   19.1   21.3   22.8   23.6   24.5   25.3   26.0   26.1
  4   9.2   14.6   19.2   20.9   21.0   21.9   23.1   24.5   24.6   24.4
  平均   9.5   14.0   19.8   21.5   22.3   23.0   24.0   24.7   25.4   25.3
  高脂肪饮食   1   8.9   16.0   20.9   22.9   24.0   26.5   28.7   31.6   33.6   34.5
  2   10.1   16.8   23.5   23.1   25.8   27.8   29.8   33.5   35.8   36.4
  3   9.8   17.2   21.9   22.9   25.0   28.2   31.5   33.6   35.7   36.5
  4   9.0   15.7   24.1   25.0   27.1   29.5   31.0   33.4   35.5   35
  平均   9.5   16.4   22.6   23.5   25.5   28.0   30.3   33.0   35.2   35.6
  对照   1   8.2   14.6   21.4   23.0   25.2   27.1   28.5   30.4   33.1   33.9
  2   10.0   17.1   21.2   22.9   24.1   25.6   27.7   31.1   33.7   33.7
  3   9.3   16.8   23.3   24.5   26.8   28.6   30.5   32.8   34.1   34.9
  4   10.3   17.3   22.5   24.1   26.5   28.0   30.5   33.3   34.9   36.0
  平均   9.5   16.5   22.1   23.6   25.7   27.3   29.3   31.9   34.0   34.6
  高脂肪+PL62(109)   1   10.0   16.8   20.0   21.5   23.2   25.4   27.3   30.0   32.4   32.6
  2   8.4   14.7   21.1   22.1   23.2   24.4   25.4   27.3   29.5   30.0
  3   10.2   17.8   21.0   21.6   21.9   23.3   24.6   26.9   29.3   31.2
  4   8.8   15.6   19.5   20.5   21.5   23.3   25.6   28.8   30.6   31.9
  平均   9.3   16.2   20.4   21.4   22.5   24.1   25.7   28.3   30.5   31.4
  高脂肪+PL62(107)   1   9.8   16.6   20.8   22.6   23.2   25.0   25.9   27.7   29.5   30.4
  2   9.5   16.4   21.8   23.2   25.4   26.7   27.8   28.8   29.9   30.6
  3   9.7   14.9   20.5   21.6   22.5   24.5   25.4   28.5   30.1   31.1
  4   9.9   16.1   21.2   22.9   24.1   25.7   26.5   28.5   31.4   33.3
  平均   9.6   16.0   21.1   22.6   23.8   25.5   26.4   28.4   30.2   31.4
2.给予生产CLA的植物乳杆菌菌株PL62的大鼠肠道重量的变化
将给予植物乳杆菌菌株PL62的大鼠在第8周解剖，以观察肠道脂肪的重量和在所有器官中的变化。结果示于表10中。
根据表10，与对照组相比，主要器官(包括肾、脾、脑、肝等)的重量几乎没有表现出显著统计性的差异。而积累肠道脂肪的器官(包括肾脏边缘(renal limbus)、腹股沟区、附睾等)的重量在给予植物乳杆菌菌株PL62的组中减少。也就是说，与对照组相比，给予植物乳杆菌菌株PL62的组的肾脏边缘的重量分别减少至0.63g和0.62g，其为0.2g(25％)。并且，给予植物乳杆菌菌株PL62的组的腹股沟区的重量分别减少至1.17g和1.16g，其为0.23g(16.43％)。给予植物乳杆菌菌株PL62的组的附睾的重量分别减少至1.63g和1.47g，其分别为0.14g(7.9％)和0.3g(16.9％)。
因此，给予植物乳杆菌菌株PL62的大鼠的体重减少是由肠道脂肪重量的减少引起的。
[表10]
  肝   肾   脾   脑   肠系膜   肾脏边缘   腹股沟区   附睾
  NC   1.07   0.31   0.05   0.45   0.20   0.06   0.12   0.35
  PC   1.18   0.40   0.07   0.44   0.58   0.90   1.69   2.01
  对照   1.03   0.35   0.07   0.43   0.60   0.83   1.40   1.77
  PL62(109)   0.94   0.34   0.07   0.42   0.45   0.63   1.17   1.63
  PL62(107)   0.94   0.35   0.07   0.43   0.60   0.62   1.16   1.47
[工业应用]
本发明的植物乳杆菌菌株PL62具有减少身体脂肪的作用。所述乳酸杆菌菌株可以直接用作减少身体脂肪的功能食品，用于预防或治疗由肥胖导致的所有疾病，或可用作减少身体脂肪的功能食品的添加剂。
本发明的植物乳杆菌菌株PL62具有减少身体脂肪的作用，因而能够预防或治疗由肥胖引起的疾病。另外，本发明的干的植物乳杆菌菌株PL62和植物乳杆菌菌株PL62培养滤液、干燥培养滤液可以用作各种食品和饮料的添加剂，以用于预防和治疗身体肥胖，因此可以被用于预防和治疗所有肥胖相关疾病。此外，利用本发明的所述植物乳杆菌菌株PL62的发酵食品可以通过减少身体脂肪作用来预防和治疗肥胖症。
用于专利程序的微生物保藏的国际承认的布达佩斯条约
                              国际表格
至：韩国首尔中区                            由在本页底认定的
南大门路5街500                              国际保藏单位
CJ株式会社                                  依据条约第7.1条做出的
                                            原始情况下的接收
  I.微生物的鉴定
由保藏人给予的鉴定名称：植物乳杆菌PL62   国际保藏单位给予的保藏编号：KCCM-10655P
  II.科学描述和/或提出的分类名称
  在以上第1项中鉴定的微生物具有：□科学描述□提出的分类名称(在相应方框内标出)
  III.收到和接受
  该国际保藏单位接受上述第I项鉴定的微生物，其为在2005年5月9日(原始保藏日期)1接收的微生物。
  IV.国际保藏单位
  名称：韩国微生物培养中心地址：韩国首尔120-091西大门区弘济-1-洞儒林B/D 361-221   有权代表国际保藏单位的人员或权威官员的签名日期：2005年5月12日
1其中采用6.4(d)条，该日期为国际保藏单位获得的日期，其中在获得国际保藏单位保藏后，布达佩斯条约外的保藏变为布达佩斯条约下的保藏，该日期为国际保藏单位收到该微生物的日期。

Claims (14)

1.一种将亚油酸转化为共轭亚油酸的植物乳杆菌菌株。
2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌菌株，其中，所述菌株为植物乳杆菌菌株PL62KCCM-10655P。
3.根据权利要求1或2所述的植物乳杆菌菌株，其中，所述菌株为活菌株或干菌株。
4.一种用于生产CLA的组合物，包含根据权利要求1至3中任一项所述的菌株。
5.一种利用植物乳杆菌菌株大量生产CLA的方法，原始培养根据权利要求1至3中任一项所述的菌株。
6.根据权利要求5所述的利用植物乳杆菌菌株大量生产CLA的方法，其中，将0.01-1.0％的LA或红花籽油加入到所述菌株的原始培养基中。
7.根据权利要求6所述的利用植物乳杆菌菌株大量生产CLA的方法，其中，将0.01-1.0％吐温-80加入到所述菌株的原始培养基中。
8.根据权利要求7所述的利用植物乳杆菌菌株大量生产CLA的方法，其中，将果糖、蔗糖、或乳糖作为糖底物加入到所述菌株的原始培养基中。
9.减少身体脂肪的功能食品，包含作为添加剂的根据权利要求1至3中任一项所述的菌株。
10.根据权利要求9所述的减少身体脂肪的功能食品，其中，所述食品为保健食品或含有酸奶、乳制品、干酪、泡菜、苦椒酱(kochujang，混合有红辣椒的韩国稠大豆糊)、以及大酱(doenjang，韩国发酵大豆糊)的发酵食品。
11.利用植物乳杆菌菌株PL62 KCCM-10655P作为起始菌株制备的乳制品。
12.利用植物乳杆菌菌株PL62 KCCM-10655P作为发酵起始菌株制备的源自谷物的发酵食品。
13.一种用于预防和治疗肥胖相关疾病的药物，包含植物乳杆菌菌株PL62 KCCM-10655P的活菌株、干菌株、或培养滤液。
14.根据权利要求13所述的用于预防和治疗肥胖相关疾病的药物，其中，平均体重为60kg的健康人以1×106-1×1011CFU/剂量的量服用植物乳杆菌菌株PL62 KCCM-10655P，每天1-2次。
CNA2005800294502A 2004-09-02 2005-06-30 具有减少身体脂肪活性的植物乳杆菌以及包含它们的食品 Pending CN101044234A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020040070132 2004-09-02
KR1020040070132A KR100686558B1 (ko) 2004-09-02 2004-09-02 체지방 저하 기능성 락토바실러스 플랜타륨와 이를 함유한 식품

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101044234A true CN101044234A (zh) 2007-09-26

Family

ID=36000264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2005800294502A Pending CN101044234A (zh) 2004-09-02 2005-06-30 具有减少身体脂肪活性的植物乳杆菌以及包含它们的食品

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20080057044A1 (zh)
EP (1) EP1791946A4 (zh)
JP (1) JP2008511312A (zh)
KR (1) KR100686558B1 (zh)
CN (1) CN101044234A (zh)
BR (1) BRPI0515618A (zh)
CA (1) CA2579022C (zh)
MX (1) MX2007002528A (zh)
WO (1) WO2006025643A1 (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102548566A (zh) * 2009-10-09 2012-07-04 抗体抗生素股份有限公司 植物乳杆菌菌株用作降血胆固醇试剂
CN103314099A (zh) * 2010-07-30 2013-09-18 株式会社明治 具有代谢综合症改善效果的乳酸菌
CN109549195A (zh) * 2017-09-27 2019-04-02 家宝农产 具有抗肥胖活性的含有发酵香橙渣的食物成分
CN109694832A (zh) * 2017-10-20 2019-04-30 葡萄王生技股份有限公司 胚芽乳酸杆菌及其降血脂、肝功指数、尿酸和抗发炎用途
CN111676157A (zh) * 2020-06-05 2020-09-18 杭州娃哈哈科技有限公司 一种基于植物乳杆菌的组合物及其制备方法
CN111714572A (zh) * 2020-06-08 2020-09-29 杭州娃哈哈科技有限公司 一种基于植物乳杆菌的益生菌片剂及其制备方法

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5025930B2 (ja) * 2005-09-13 2012-09-12 株式会社桃屋 ラクトバチルス・プランタラムの菌体を有効成分とする体脂肪率低減剤
JP5036020B2 (ja) * 2005-11-30 2012-09-26 雪印メグミルク株式会社 腎周囲脂肪蓄積抑制剤
CN101410128A (zh) 2006-01-27 2009-04-15 丹尼斯科公司 益生微生物用于治疗和预防肥胖及相关病症的用途
WO2008029505A1 (fr) * 2006-09-04 2008-03-13 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Agent d'accélération de l'accroissement et/ou la prévention de diminution dans le niveau d'adiponectine dans le sang, et inhibiteur de l'accumulation de graisse viscérale
WO2008075949A1 (en) * 2006-12-20 2008-06-26 Friesland Brands B.V. Modulation of human microsomal triglyceride transfer protein (mtp or mttp) gene expression by food-grade/ingested dietary microorganisms
JP5201832B2 (ja) * 2006-12-25 2013-06-05 花王株式会社 脂肪分解促進用皮膚外用剤
JP2008214253A (ja) * 2007-03-02 2008-09-18 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 内臓脂肪減少剤
JPWO2008120712A1 (ja) * 2007-03-30 2010-07-15 サントリーホールディングス株式会社 交感神経活動亢進作用を有する医薬組成物又は飲食物
WO2009043856A2 (en) * 2007-10-01 2009-04-09 University College Cork, National University Of Ireland, Cork Modulation of tissue fatty acid composition of a host by human gut bacteria
KR101010914B1 (ko) * 2008-04-28 2011-01-26 주식회사 엔유씨전자 항비만 및 뇌기능개선 관련 생리활성 기능을 가지는 프로바이오틱 유산균 락토바실러스 플란타늄
KR101068524B1 (ko) * 2008-07-07 2011-09-30 한국식품연구원 락토바실러스 프란타럼 μ23 균주를 포함하는 발효유 및이의 제조방법
CN101748083B (zh) * 2008-12-11 2012-01-04 吉林省农业科学院 植物乳杆菌发酵剂及其制备方法与专用菌株
KR100996577B1 (ko) 2009-04-01 2010-11-24 주식회사한국야쿠르트 혈중 콜레스테롤 강하와 비만 억제 효능을 갖는 신규의 락토바실러스 커베터스 에이취와이7601 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품
WO2010117255A1 (en) * 2009-04-09 2010-10-14 Universiti Putra Malaysia (Upm) Monogastric animal feed
FR2955774A1 (fr) 2010-02-02 2011-08-05 Aragan Preparation destinee a traiter l'exces ponderal et les desordres associes et applications de ladite preparation
WO2013168310A1 (ja) * 2012-05-10 2013-11-14 国立大学法人京都大学 オキソ脂肪酸及び希少脂肪酸の製造法
KR101580732B1 (ko) * 2013-01-31 2015-12-28 부산대학교 산학협력단 신규한 스타터 균주 및 이를 이용한 김치를 포함하는 기능성 발효식품의 제조방법
KR101566989B1 (ko) 2014-09-03 2015-11-06 조선대학교산학협력단 김치로부터 분리된 콜레스테롤 저하능을 갖는 유산균 및 그의 용도
CN104388482B (zh) * 2014-10-28 2017-07-11 南昌大学 一种利用静息乳酸菌技术转化菜油脚料生产共轭亚油酸的方法
KR102125548B1 (ko) 2015-02-10 2020-06-24 주식회사 지니스 비만 억제능을 갖는 균주 및 이를 함유하는 약학 조성물
JP2018154649A (ja) * 2018-06-08 2018-10-04 株式会社東洋新薬 コラーゲン産生促進用組成物、コラーゲン吸収促進用組成物、抗肥満用組成物
TWI824127B (zh) * 2018-12-11 2023-12-01 生合生物科技股份有限公司 胚芽乳酸桿菌ｔｗｋ１０用於製備降體脂醫藥組合物之用途
KR102198827B1 (ko) * 2020-07-24 2021-01-05 주식회사 리부트라이프 신규 락토바실러스 플란타럼 균주 및 이를 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물
CN115960767B (zh) * 2022-11-09 2024-04-26 厦门元之道生物科技有限公司 一种植物乳植杆菌及其应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5554646A (en) * 1992-04-29 1996-09-10 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for reducing body fat in animals
US5856149A (en) 1995-06-01 1999-01-05 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of producing conjugated fatty acids
US5976580A (en) * 1995-06-07 1999-11-02 Novus International, Inc. Nutrient formulation and process for enhancing the health, livability, cumulative weight gain or feed efficiency in poultry and other animals
WO2002089593A1 (fr) * 2000-02-03 2002-11-14 Kabushiki Kaisha Yakult Honsha Aliments fermentes et procede de production de ces aliments
EP1264893A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-11 Teagasc Dairy Products Research Centre CLA biosynthesis by bifidobacteria
US7250226B2 (en) * 2001-08-31 2007-07-31 Nippon Hoso Kyokai Phosphorescent compound, a phosphorescent composition and an organic light-emitting device
AU2003221135A1 (en) * 2002-04-12 2003-10-27 Chebigen Inc. New strains capable of producing conjugated linoleic acid, capsulated composition comprising them, and the preparation methods thereof
ATE445707T1 (de) 2002-04-12 2009-10-15 Yakult Honsha Kk Verfahren zur herstellung konjugierter fettsäure und mit diesem verfahren produzierte lebensmittel/getränke
KR100470460B1 (ko) * 2003-01-09 2005-02-05 대한민국 씨엘에이를 생산하는 락토바실러스 퍼멘텀 및 이를 이용한다량의 씨엘에이를 함유하는 배양액 제조방법

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102548566A (zh) * 2009-10-09 2012-07-04 抗体抗生素股份有限公司 植物乳杆菌菌株用作降血胆固醇试剂
CN102548566B (zh) * 2009-10-09 2014-07-09 抗体抗生素股份有限公司 植物乳杆菌菌株用作降血胆固醇试剂
CN103314099A (zh) * 2010-07-30 2013-09-18 株式会社明治 具有代谢综合症改善效果的乳酸菌
CN103314099B (zh) * 2010-07-30 2014-12-03 株式会社明治 具有代谢综合症改善效果的乳酸菌
CN109549195A (zh) * 2017-09-27 2019-04-02 家宝农产 具有抗肥胖活性的含有发酵香橙渣的食物成分
CN109694832A (zh) * 2017-10-20 2019-04-30 葡萄王生技股份有限公司 胚芽乳酸杆菌及其降血脂、肝功指数、尿酸和抗发炎用途
CN109694832B (zh) * 2017-10-20 2022-04-29 葡萄王生技股份有限公司 胚芽乳酸杆菌及其降血脂、肝功指数、尿酸和抗发炎用途
CN111676157A (zh) * 2020-06-05 2020-09-18 杭州娃哈哈科技有限公司 一种基于植物乳杆菌的组合物及其制备方法
CN111714572A (zh) * 2020-06-08 2020-09-29 杭州娃哈哈科技有限公司 一种基于植物乳杆菌的益生菌片剂及其制备方法
CN111714572B (zh) * 2020-06-08 2024-02-09 杭州娃哈哈科技有限公司 一种基于植物乳杆菌的益生菌片剂及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
MX2007002528A (es) 2007-07-04
EP1791946A4 (en) 2008-01-09
CA2579022C (en) 2012-09-11
KR100686558B1 (ko) 2007-02-23
US20080057044A1 (en) 2008-03-06
JP2008511312A (ja) 2008-04-17
KR20060021240A (ko) 2006-03-07
WO2006025643A1 (en) 2006-03-09
CA2579022A1 (en) 2006-03-09
EP1791946A1 (en) 2007-06-06
BRPI0515618A (pt) 2008-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101044234A (zh) 具有减少身体脂肪活性的植物乳杆菌以及包含它们的食品
CN101068918A (zh) 具有减少身体脂肪活性的鼠李糖乳杆菌以及包含它们的食品
CN105132322B (zh) 一株植物乳杆菌及其应用
CN101541947B (zh) 分离自母乳的具有益生菌活性和抑制体重增加活性的乳酸菌
TWI241912B (en) Novel Acid-and bile salt-resistant Lactobacillus isolates having the ability to lower and assimilate cholesterol
CN1342196A (zh) 用于治疗炎性疾病的双歧杆菌
CN108251335B (zh) 一种具有乳酸活性的粪肠球菌hkf7及其筛选培养方法和应用
Thwe et al. Isolation, characterization, and utilization of γ-aminobutyric acid (GABA)-producing lactic acid bacteria from Myanmar fishery products fermented with boiled rice
CN102317435B (zh) 雌马酚产生菌及其利用
CN105121627B (zh) 含有乳杆菌属菌的组合物
CN1406274A (zh) 新颖的抗幽门螺杆菌和大肠杆菌157:h7的类干酪乳杆菌类干酪亚种菌株的抗细菌剂
CN110964658A (zh) 一种具有免疫调节功能的副干酪乳杆菌et-22
JP2009159955A (ja) クルマエビ腸内から分離したプロバイオティクス乳酸菌
CN114561320B (zh) 乳酸杆菌益生菌CGMCC No.1.13855在制备肝病治疗药物中的应用
KR102130646B1 (ko) 신규한 락토바실러스 살리바리우스 및 이를 유효성분으로 포함하는 양식 어류 및 갑각류용 사료첨가제
KR20160063024A (ko) 락토바실러스 플란타룸 kcc-24 및 이를 포함하는 조성물
CN105143438B (zh) 乳杆菌属菌
CN114231472B (zh) 乳酸杆菌益生菌CGMCC No.23437及在制备降脂药物中的应用
CN113755396B (zh) 格氏乳杆菌rw2014及在制备降脂药物中的应用
KR20140087518A (ko) Gaba 생산 활성을 갖는 신규 유산균 균주 및 이의 발효 배양물을 함유하는 조성물
AU2022392707A1 (en) Bacterial strain and the use thereof
CN1348989A (zh) 鼠李糖乳酸杆菌菌株及其用途
Abedi et al. Isolation and identification of Lactobacillus strains from dairy products and evaluation of carbon sources effects on bacterial growth and phytase activity: supplement for fish feed.
EP2367950B1 (en) Production of omega-3 fatty acids by myxobacteria
JP2003012534A (ja) 酵素活性抑制剤

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20080104

Address after: Seoul, South Kerean

Applicant after: PL biological plant

Co-applicant after: CJ Corp.

Address before: Seoul, South Kerean

Applicant before: PL biological plant

Co-applicant before: CJ Co., Ltd.

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1112938

Country of ref document: HK

C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20070926