CN101033244B - 罗汉果醇的提纯制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种罗汉果醇的提纯制备方法，属于高纯度物质的提纯制备方法。本发明包括步骤：(1)先将罗汉果粉碎，加入乙醇提取得醇浸膏；(2)醇浸膏悬浮于水，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯浸膏，取母液；(3)母液中加入盐酸溶液和乙酸乙酯，加热进行酸水解；水解后分取乙酸乙酯层，用碱液调节至中性，分离乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到含罗汉果醇的浸膏；(4)将浸膏进行硅胶柱层析，氯仿洗脱，回收氯仿；再用氯仿-甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得罗汉果醇粗品；(5)取罗汉果醇粗品进行重结晶，即得纯度大于95％以上的罗汉果醇。通过酸水解制备高纯度罗汉果醇的简便方法，具有纯度高、得率高、工艺简单、成本低等优点。
Description
技术领域
本发明属于高纯度物质的提纯制备方法，具体说是一种罗汉果醇的提纯制备方法。
背景技术
罗汉果醇为葫芦烷型四环三萜类化合物，目前仅局限分布在葫芦科植物罗汉果Momordica grosvenori Swingle的干燥果实中。其结构式如下图所示：
罗汉果醇为罗汉果属植物的特征性成分，高纯度的罗汉果醇可作为化学对照品用于罗汉果药材及含罗汉果制剂的鉴别及质量控制。罗汉果醇具有抗肿瘤等药理作用，同时罗汉果醇可通过结构修饰合成高甜度的罗汉果苷，如罗汉果苷V、罗汉果苷IV等一系列甜味剂，因此制备罗汉果醇具有重要意义。
罗汉果醇虽然存在于罗汉果中，但含量低微，难以分离纯化和大量制备。如直接从罗汉果中分离罗汉果醇，则工艺复杂，收率低，成本高，难以工业化生产。
经对现有技术文献检索发现，《农业与食品化学》(《J Agric Food Chem.》)于2002年11月，6710页-6715页，名称为“罗汉果葫芦烷型皂苷及其他三萜类成分对促癌剂12-O-十四酰基-佛波醇-13-乙酸酯诱导的早期EB病毒抗原的抑制作用”(“Inhibitory effects of cucurbitane glycosides and other triterpenoids fromthe fruit of Momordica grosvenori on epstein-barr virus early antigen induced bytumor promoter 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate”)公开了一种从罗汉果直接分离罗汉果醇的方法，罗汉果用99％的乙醇回流提取后得醇提物，醇提物用乙酸乙酯萃取，萃取物经大孔树脂层析后再用制备型高效液相分离后得到罗汉果醇。这种方法收率非常低，不到十万分之五，且操作繁琐，成本高，不利于大量制备罗汉果醇。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种罗汉果醇的提纯制备方法，通过酸水解制备高纯度罗汉果醇的简便方法，具有纯度高、得率高、工艺简单、成本低等优点。
本发明是通过以下技术方案实现的，包括如下步骤：
(1)先将罗汉果粉碎，加入70％～95％的乙醇回流提取得醇浸膏。
(2)将步骤(1)中的醇浸膏悬浮于水，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯浸膏，取母液。
(3)母液中加入盐酸溶液和乙酸乙酯，加热进行酸水解；水解后分取乙酸乙酯层，用碱液调节至中性，分离乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到含罗汉果醇的浸膏。
(4)将步骤(3)中的含罗汉果醇的浸膏进行硅胶柱层析(硅胶用量为浸膏重量的50～100倍)，氯仿洗脱，回收氯仿，弃去氯仿洗脱物；继续用氯仿-甲醇(100∶2～100∶5)洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得罗汉果醇粗品。
(5)取罗汉果醇粗品进行重结晶，即得纯度大于95％以上的罗汉果醇。
其中中和用碱可选用NaOH、碳酸钠或氨水。
盐酸水解时其浓度为5％～15％。
本发明所得化合物为白色鳞片状结晶或白色针状结晶。
本发明有益效果：
(1)通过用乙醇从罗汉果中提取总苷，然后通过酸水解，水解液用乙酸乙酯抽提得到苷元，然后将苷元通过一次硅胶柱层析的方法就可得到高纯度罗汉果醇。采用上述方法分离制备的罗汉果醇，纯度高，均在95％以上；工艺简便、得率高，可达1％以上。
(2)采用乙醇加热回流提取的方法，无毒副作用且溶剂可回收利用，同时也提高了提取的效率。
(3)采用乙酸乙酯萃取的方法既去除了提取物中大部分脂溶性成分(如油脂、蜡质、黄酮)，乙酸乙酯又可回收反复使用，节约了成本。
(4)水解时加入乙酸乙酯，使水解后产生的目标产物罗汉果醇及时进入乙酸乙酯层，既避免了长时间与酸接触可能产生的化学变化，同时又使水解和萃取两步操作一步完成，大大简化了工艺。同时加入乙酸乙酯萃取，也避免了水解液中大量糖分的干扰，因而通过一次常压硅胶柱层析即可得到纯品。
(5)采用去杂后的水溶液进行酸水解，大大提高的罗汉果醇的收率。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例1是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：
1)罗汉果干果100g，粉碎成极粗粉，加入600mL 70％的工业乙醇回流提取3h，滤过，滤液回收乙醇(可再次用于药材提取)，得醇浸膏9.5g。
2)取醇浸膏，加入100mL的水悬浮，然后用50mL水体积的水饱和的乙酸乙酯萃取，分离乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯(可再次用于萃取)，得乙酸乙酯浸膏1.1g。
3)乙酸乙酯萃取后的水溶液加入盐酸溶液使盐酸的浓度达5％，然后加入乙酸乙酯100mL，加热回流8h。冷却至室温，分取乙酸乙酯液，向乙酸乙酯液中加入NAOH溶液，调节pH至7后，分离乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯(可反复使用)，得含罗汉果醇的浸膏1.9g。
4).将含罗汉果醇的浸膏进行硅胶柱层析(硅胶300-400目，用量95g；(柱直径3.5cm，干法装柱，干法上样)，800mL氯仿洗脱，回收氯仿(可反复使用)，弃去氯仿洗脱物；1500mL氯仿-甲醇(100∶2)洗脱，流速5mL/min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得罗汉果醇粗品1.2g。
5)罗汉果醇粗品用甲醇重结晶1次，得罗汉醇针状结晶950mg，经检验其纯度为97.1％。
实施例2
本实施例2是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：
1)罗汉果干果100g，粉碎成粗粉，加入800mL 95％的工业乙醇回流提取6h，滤过，滤液回收乙醇(可再次用于药材提取)，得浸膏。重复上述操作，合并两次提取所得浸膏，得醇浸膏17.2g。
2)取醇浸膏，加入200mL的水悬浮，然后用150mL的水饱和的乙酸乙酯萃取，分离乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯(可再次用于萃取)，得浸膏。重复上述操作1次，合并两次萃取所得浸膏，得乙酸乙酯浸膏2.2g。
3)乙酸乙酯萃取后的水溶液加入盐酸溶液使盐酸的浓度达15％，然后加入乙酸乙酯100mL，加热回流4h。冷却至室温，分取乙酸乙酯液，向乙酸乙酯液中加入碳酸钠溶液，调节pH至7后，分离乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯(可反复使用)，得含罗汉果醇的浸膏2.7g。
4)将含罗汉果醇的浸膏进行硅胶柱层析(硅胶100-200目，用量为270g，柱直径4.5cm，湿法装柱，干法上样)，1000mL氯仿洗脱，回收氯仿(可反复使用)，弃去氯仿洗脱物；1200mL氯仿-甲醇(100∶5)洗脱，流速8mL/min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得罗汉果醇粗品1.7g。
5)取罗汉果醇粗品用丙酮重结晶1次，得鳞片状罗汉果醇结晶1260mg，经检验其纯度为99.1％。
实施例3
本实施例3是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：
1)罗汉果干果100g，粉碎成极粗粉，加入750mL 80％的工业乙醇回流提取4h，滤过，滤液回收乙醇(可再次用于药材提取)，得浸膏。重复上述操作1次，合并两次提取所得浸膏，得醇浸膏13.0g.
2)取醇浸膏，加入100mL的水悬浮，然后用100mL的水饱和的乙酸乙酯萃取，分离乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯(可再次用于萃取)，得浸膏。重复上述操作1次，合并两次萃取所得浸膏，得乙酸乙酯浸膏1.6g。
3)乙酸乙酯萃取后的水溶液加入盐酸溶液使盐酸的浓度达10％，然后加入乙酸乙酯100mL，加热回流6h。冷却至室温，分取乙酸乙酯液，向乙酸乙酯液中加入氨水溶液，调节pH至7后，分离乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯(可反复使用)，得含罗汉果醇的浸膏2.4g。
4)将含罗汉果醇的浸膏进行硅胶柱层析(硅胶200-300目，用量为192g，柱直径3.5cm，湿法装柱，湿法上样)，1000mL氯仿洗脱，回收氯仿(可反复使用)，弃去氯仿洗脱物；1600mL氯仿-甲醇(100∶3)洗脱，流速5mL/min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得罗汉果醇粗品1.5g。
5)取罗汉果醇粗品用氯仿进行重结晶，即得高纯度的罗汉果醇针状结晶1126mg，经检验其纯度为98.4％。
实施例4
本实施例4是在以下实施条件和技术要求条件下实施的：
1)罗汉果干果100g，粉碎成极粗粉，加入800mL 70％的工业乙醇回流提取4h，滤过，滤液回收乙醇(可再次用于药材提取)，得浸膏。加入500mL 70％的工业乙醇回流提取2h，滤过，滤液回收乙醇(可再次用于药材提取)，得浸膏。合并两次提取所得浸膏，得醇浸膏12.5g.
2)取醇浸膏，加入100mL的水悬浮，然后用100mL的水饱和的乙酸乙酯萃取，分离乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯(可再次用于萃取)，得浸膏。重复上述操作1次，合并两次萃取所得浸膏，得乙酸乙酯浸膏1.5g。
3)乙酸乙酯萃取后的水溶液加入盐酸溶液使盐酸的浓度达10％，然后加入乙酸乙酯100mL，加热回流6h。冷却至室温，分取乙酸乙酯液，向乙酸乙酯液中加入氨水溶液，调节pH至7后，分离乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯(可反复使用)，得浸膏含罗汉果醇的浸膏2.2g。
4)将含罗汉果醇的浸膏进行硅胶柱层析(硅胶300-400目，用量为150g，柱直径3.5cm，湿法装柱，湿法上样)，750mL氯仿洗脱，回收氯仿(可反复使用)，弃去氯仿洗脱物；1000mL氯仿-甲醇(100∶4)洗脱，流速5mL/min，收集洗脱液，减压回收溶剂，得罗汉果醇粗品1.4g。
5)取罗汉果醇粗品用氯仿-甲醇溶液(1∶1)进行重结晶，即得高纯度的罗汉果醇鳞片状结晶1105mg，经检验其纯度为99.4％。
Claims (6)
1.一种罗汉果醇的提纯制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)先将罗汉果粉碎，加入乙醇回流提取得醇浸膏；
(2)将步骤(1)中的醇浸膏悬浮于水，乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯浸膏，取母液；
(3)母液中加入盐酸溶液和乙酸乙酯，加热进行酸水解；水解后分取乙酸乙酯层，用碱液调节至中性，分离乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到含罗汉果醇的浸膏；
(4)将步骤(3)中的含罗汉果醇的浸膏进行硅胶柱层析，氯仿洗脱，回收氯仿，弃去氯仿洗脱物；继续用氯仿-甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得罗汉果醇粗品；
(5)取罗汉果醇粗品进行重结晶，即得纯度在95％以上的罗汉果醇。
2.如权利要求1所述的罗汉果醇的提纯制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的乙醇，其质量百分比浓度为70％～95％。
3.如权利要求1所述的罗汉果醇的提纯制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的盐酸溶液水解时，其质量百分比浓度为5％～15％。
4.如权利要求1所述的罗汉果醇的提纯制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的碱液为NaOH溶液或碳酸钠溶液或氨水。
5.如权利要求1至4任一所述的罗汉果醇的提纯制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的硅胶柱层析，其硅胶用量为浸膏重量的50～100倍。
6.如权利要求1至4任一所述的罗汉果醇的提纯制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的氯仿-甲醇，其配比比例为100∶2～100∶5。
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