CN101031583A - 包含含有精氨酸和/或赖氨酸的基序的抗微生物肽 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及作为药物用途的包含通式(I)所示的氨基酸的肽：((X)l(Y)m)n其中l、m和n是0至10的整数；X和Y是选自疏水性氨基酸和/或阳离子氨基酸的氨基酸，所述X和Y可以是相同的或不同的。

Description

包含含有精氨酸和/或赖氨酸的基序的抗微生物肽
本发明提供抗微生物肽。本发明还涉及包含该抗微生物肽的药物组合物以及该肽在治疗尤其是微生物感染中的用途。
内源性抗菌肽的一重要家族，即β-防御素是由内衬高等哺乳动物的消化道、呼吸道和泌尿生殖道的上皮细胞分泌的。皮肤中的角质化细胞也生产该β-防御素。它们的主要作用是提供抵御由病原微生物通过上述途径引起的感染的第一道重要防线。
防御素是被研究得最多的一类抗微生物肽。该类物质由具有三个二硫桥的富含半胱氨酸的分子组成。其存在于植物、昆虫和多种哺乳动物中。在人类中存在两类防御素，这两类防御素在6个半胱氨酸残基间的间距和键上存在不同。这两类防御素中的第一种是α-防御素(6种类型)，其是从中性粒细胞(HNP 1-4，人嗜中性肽)中分离的并且位于胃肠道的Paneth细胞中(α-防御素5和6)的。第二类，即β-防御素更长、碱性更强，并且在内衬和/或包含和/或存在于消化道、呼吸道和泌尿生殖道和皮肤中的上皮细胞和角质化细胞中的粘膜中表达。hBD1(人β-防御素1)是组成型分泌的并且人β-防御素2、3和4(hBD2、hBD3和hBD4)响应感染或炎症而产生。细菌尤其是鞭毛菌的刺激(Harder et al，Nature 1997；387：861)和IL1[α]和IL1[β](白细胞介素1)(Liu et al，J Invest Dermatol 2002；118；275-281)引起hBD2的表达和分泌。在某些组织位置，肿瘤坏死因子α(TNF-α)和脂多糖(LPS)还也可以起诱导hBD2的表达的作用。体外实验已经揭示，hBD2具有对抗诸如大肠埃希杆菌(E.coli)等革兰氏阴性菌的活性，并且在较小范围内低程度上具有抗诸如肺炎链球菌(Str.pneumoniae)等革兰氏阳性菌的活性。hBD2还显示出体外对酵母白色念珠菌(yeast Candida albicans)的杀灭活性。细菌刺激、TNF-α并且尤其是干扰素γ(IFNγ)诱导hBD3的表达和分泌，这些因素具有共同特性，即都为涉及炎性过程的分子。
β-防御素除了提供有效的、组成型的以及调节的广谱固有抗微生物保护以外，这些分子，尤其是hBD2还具有通过对未成熟树突状细胞和记忆T淋巴细胞的趋化性影响调动免疫应答适应臂(adaptive arm)的能力(Yang et al，Science 1999；286：525-528)。
重要的是，有证据表明β-防御素不仅提供抵御由病原微生物引起的感染，而且对调节并维持机体必需的诸如皮肤上、胃肠道和生殖道内的共生微生物生态系统的最佳密度和多样性起关键作用(Ganz，T，Nat Rev Immunol.20033(9)：710-20)。
β-防御素的作用方式为在活性浓度下其对宿主细胞基本没有毒性。因此，β-防御素成为用于治疗广泛感染的潜在目标。然而，在重组体系统中生产天然形式的防御素具有技术上的挑战性，导致其产率低。此外，越来越多的证据表明，通过其趋化性作用，β-防御素是有效的炎性化合物(Yang et al，Science 1999；286：525-528；Van Weteringet al.Inflamm Res.2002；51(1)：8-15；Niyonsaba et al.Curr Drag TargetsInflamm Allergy 2003；2(3)：224-231)。这些因素一起使得天然防御素不适于治疗应用。
β-防御素是高度盐敏感的(Porter et al.，Infect.Immun.1997；65(6)：2396-401；Bals et al.J Clin Invest.1998；102(5)：874-80；Valore et al.，JClin Invest 1998；101(8)：1633-42；Goldmann et al.，Cell 1997；88(4)：553-609；Singh et al.，Proc Natl Acad Sci USA 95(25)：14961-6)。由于该原因，在诸如囊性纤维化的条件下，β-防御素不能提供抗微生物保护，其中，虽然呼吸上皮响应与该疾病状态相关的持续细菌感染而产生大量的β-防御素，但是由于跨呼吸上皮膜的离子转运的不平衡，β-防御素失活，所述不平衡导致增加的阳离子再吸收(尤其是Na+)和增加的氯化物分泌Donaldson SH and Boucher RC.Curr.Opin.PuIm.Med.2003Nov；9(6)：486-91；Davies JC.Pediatr Pulmonol Suppl.2004；26：147-8)。
因此，需要可以用于治疗微生物感染的其它试剂。
本发明鉴别出了与天然防御素相比，意想不到地具有改善的抗微生物活性的肽。
根据本发明的第一方面，提供了包含3至200个D和/或L氨基酸的肽，该氨基酸可以是相同的或不同的，其中该氨基酸选自疏水性氨基酸和/或阳离子氨基酸。所述肽可以包含3至约100个D和/或L氨基酸，例如3至50个D和/或L氨基酸，包括4至约50个D和/或L氨基酸。
本发明的肽尤其可以用于治疗或预防微生物感染。
本发明的另一方面，提供了包含如通式I所示的氨基酸的肽：
((X)l(Y)m)n    (I)
其中l和m是0至10的整数，例如0至5；n是1至10的整数；X和Y是选自疏水性氨基酸和/或阳离子氨基酸的氨基酸，所述X和Y可以是相同的或不同的。
本发明的优选方面中，所述肽具有3至200个氨基酸，例如3、4、5、6或7至100个氨基酸，包括3、4、5、6或7至20、25、30、35、40或42个氨基酸。
本发明的肽可以包含100至200个氨基酸、27至100个氨基酸、28至86个氨基酸、7至27个氨基酸或3至14个氨基酸。
优选地，所述肽包含3至15个氨基酸，例如3至7个氨基酸。
另一优选方面中，所述肽还包含一个或多个半胱氨酸残基，例如包含多达6个的半胱氨酸残基，例如包含1、2、3、4、5、6个半胱氨酸残基。
在本发明的优选方面中，，提供了包含如通式II所示的氨基酸的肽：
C((X)l(Y)m)nC((X)l(Y)m)n    (II)
其中C是半胱氨酸，l、n和m是0至10的整数，X和Y是选自疏水性氨基酸和/或阳离子氨基酸的氨基酸，所述X和Y可以是相同的或不同的。
在本发明的另一优选方面中，提供了包含如通式III所示的氨基酸的肽：
C((X)l(Y)m)nC((X)l(Y)m)nC((X)l(Y)m)nC((X)l(Y)m)nC    (III)
其中C、X、Y、l、m和n如本文所定义。
在本发明的另一优选方面中，，提供了包含如通式IV所示的氨基酸的肽：
C((X)l(Y)m)nC((X)l(Y)m)nC((X)l(Y)m)nC((X)l(Y)m)nCC    (IV)
其中C、X、Y、l、m和n如本文所定义。
因为本发明的肽在结构上比天然β-防御素简单，所以本发明的肽易于生产并且产率较高。而且所述肽基本上对盐不敏感并且是非肝毒的。此外，其物理形式的而非生物代谢的(即，直接的膜破坏相对靶向重要生物代谢途径的组成元素)作用方式，如果没有排除，但也最小化了靶微生物可能形成对所述抗微生物剂抗性的可能性。
本领域技术人员已知，主要根据氨基酸侧链的化学和物理性质可以将氨基酸分成不同的类型。例如，通常将某些氨基酸认为是亲水的或极性氨基酸而将其它氨基酸认为是疏水的或非极性氨基酸。本文使用的术语“疏水的”和“阳离子的”可以指具有Fauchere and Pliska Eur.J.Med Chem.10：39(1983)中所述的疏水性大于等于-1.10和/或净电荷大于等于0的氨基酸。疏水性或非极性氨基酸还可以指具有在生理pH下不带电的侧链的氨基酸，所述氨基酸是非极性的并且通常与水溶液不相溶。
本发明的优选方面中，X和/或Y选自由甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸和苏氨酸组成的疏水性氨基酸和/或由鸟氨酸、组氨酸、精氨酸和赖氨酸组成的阳离子氨基酸。X和/或Y可以是D或L-氨基酸。此外，X和/或Y可以是交替使用氨基酸。
本发明还包括已知的异构体(结构的、立体的、构象的和构型的)和上述氨基酸的结构类似物，以及天然(例如翻译后修饰)或包括但不仅限于磷酸化、糖基化、磺酰化和/或羟基化等化学修饰的类似物。
通常，本发明的肽不包含的氨基酸有天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺或丝氨酸，但是即使存在这些氨基酸，本发明的某些肽也可以具有活性。
本发明的肽可以包含与通式II、III或IV的一个或两个末端的半胱氨酸残基相邻的一个或多个额外的氨基酸残基，例如所述肽可以含有多达10个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)的额外的氨基酸残基。优选地，该额外的氨基酸残基是非半胱氨酸残基。更优选地，该额外氨基酸是X和/或Y。
此外，可以修饰肽的氨基酸序列以便得到包括至少肽的一个氨基酸残基替代了另一个氨基酸残基的肽变体，所述替代包括使用D型替代L型。
肽的一个或多个残基可以与另一个交换以改变、加强或保护肽的生物活性。例如，这样的变体可以具有相应非变体肽的至少约10％的生物活性。经常使用保守氨基酸，即使用具有上述的类似化学和物理性质的氨基酸进行替换。
因此，例如保守氨基酸替代可以涉及将赖氨酸替换为精氨酸、鸟氨酸或组氨酸；将一个疏水性氨基酸替换为另一个。在引入替代后，筛选变体的生物活性。
所述肽可以含有至少4个氨基酸，例如4至50个氨基酸，或诸如20至45个氨基酸的4至50个氨基酸，所述20至45个氨基酸例如20、25、30、35、40、42或45个氨基酸。
本发明的优选方面中，X和Y是相同的并且是亮氨酸或甘氨酸。
本发明的另一优选方面中，X是亮氨酸并且Y是甘氨酸。
另一优选方面中，X和Y是相同的并且是赖氨酸或精氨酸。因此本发明提供选自多-L-赖氨酸、多-D-赖氨酸、多-L-精氨酸和多-D-精氨酸的肽。
另一优选方面中，X是赖氨酸并且Y是精氨酸。
在本发明的肽中，l和m可以是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10并且n可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的肽中，l可以是1，n可以是1并且和m可以是4至9，例如m可以是3、4、5、6、7、8或9。
在本发明的肽中，l、n和/或m可以是1至5，例如1、2、3、4或5。
优选的肽是非环状的。所述肽可以是直链的，即线形的或支链的。
本文使用的术语“肽”指，通常来说是通过肽键相结合的大量氨基酸残基。它可以与多肽和蛋白质相互交换使用并且与其意义相同。
在本发明的一实施方案中，所述肽包含选自下列的氨基酸序列：
CGGGGGGCGGGGCGGGGGGGGGCGGGGGGCC    (i)
CLLLLLLCLLLLCLLLLLLLLLCLLLLLLCC    (ii)
CLGLGLGCGLGLCLGLGLGLGLCGLGLGLCC    (iii)
CRKRKRRCRKRKCKRKRKEKRKCRKRKRKCC    (iv)
KKK                                (v)
KKKKKKK                            (vi)
RRR                                (vii)
RRRRRRR                            (viii)
在本发明另一方面中，所述肽包含氨基酸序列(i)至(viii)中的至少一个以及与一个或两个末端半胱氨酸残基相邻的额外的氨基酸残基。因此，在本发明另一实施方案中，提供了包含选自图1所示氨基酸序列的氨基酸序列的肽。
本发明的肽通常是合成的肽。所述肽可以是分离的、纯化的肽或其变体，它们可以在体外合成，例如通过固相肽合成法、酶催化的肽合成或使用重组DNA技术。
为了鉴定对哺乳动物细胞具有极小或不具有不期望的毒性的活性肽，可以制备个别肽或肽文库并且可以筛选该个别肽或来自该肽文库的肽的抗微生物活性和毒性，其包括但不限于抗真菌的、抗细菌的、抗病毒的、抗原虫的、抗寄生物的活性和毒性。
本发明的肽可以以不同的形式存在，例如游离酸、游离碱、酯或其它前药、盐和互变异构体，并且本发明包括化合物的全部变体形式。
因此，本发明包括本发明的肽或肽变体的盐或前药。
可以以药物可接受盐的形式给药本发明的肽。可以通过常规的化学方法由包含碱性或酸性部分的母体肽合成本发明的药物可接受盐。通常，通过将这些游离酸或游离碱的形式的肽与水或有机溶剂或二者的混合物中化学计量的合适的碱或酸反应来制备所述的盐，通常优选诸如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈的非水溶剂。Remington′sPharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)，17th ed.，Mack PublishingCompany，Easton，Pa.，US，1985，p.1418中给出了合适的盐，本文引入其作为参考；还可以参见Stahl et al，Eds，″Handbook of PharmaceuticalSalts Properties Selection and Use″(药物盐性质的选择与用途手册)，Verlag Helvetica Chimica Acta and Wiley-VCH，2002。
因此本发明包括所公开的肽的药物可接受盐，其中通过形成母体化合物的酸性盐或碱性盐来修饰该母体化合物，例如由诸如无机或有机酸或碱形成的常规的非毒性盐或季铵盐。酸加合盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢氯化物、氢溴化物、氢碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。碱性盐包括铵盐、诸如钠盐和钾盐的碱金属盐、诸如钙盐和镁盐的碱土金属盐、与诸如二环己胺和N-甲基-D-谷酰胺等有机碱所形成的盐，以及与诸如精氨酸和赖氨酸等氨基酸所形成的盐。可以使用诸如低级卤代烷、二烷基硫酸盐、长链卤化物和芳烷基卤化物等试剂季铵化含有碱性氮的基团，所述低级卤代烷例如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘；所述二烷基硫酸盐例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐；所述长链卤化物例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯、溴和碘；所述芳烷基卤化物例如苄基和苯乙基溴等。
可以使用通常的方法通过将所述肽与一当量或多当量的期望的碱接触来制备本发明的肽或肽变体的羧基盐，该碱例如是诸如氢氧化钠的金属氢氧化物碱；诸如碳酸钠或碳酸氢钠的金属碳酸盐或碳酸氢盐；或诸如三乙胺、三乙醇胺等的胺。
可以通过使用用于最终浓缩的N-酰基被保护的氨基酸、或通过酰化被保护的或未被保护的氨基酸来制备本发明的肽或肽变体的氨基的N-酰基衍生物。可以通过例如酰化具有游离羟基的肽或肽树脂来制备O-酰基衍生物。可以使用诸如酰卤、酐、酰基咪唑等的标准酰化剂进行上述的任何一种酰化作用。
本发明包括所述肽的活性药物种类的前药，例如其中被保护或衍生修饰的一个或多个官能团了可以在体内被转化为所述官能团，例如羧酸酯类在体内可以转化为游离酸的的情况，或被保护的胺可以转化为游离氨基的情况。本文使用的术语“前药”尤其表示可以在体内迅速转化为母体结构的结构，例如通过在血液中的水解作用。T.Higuchiand V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems(前药作为新的输送系统)，Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series，Edward B.Roche，ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press，1987；H Bundgaard，ed，Design ofProdrugs，Elsevier，1985；and Judkins，et al.Synthetic Communications，26(23)，4351-4367(1996)提供了详细的讨论，此处引入上述文献作为参考。
因此，前药包括具有已经转化为其可逆衍生物的官能团的药物。通常，这些前药通过水解作用转化为活性药物。可能提及的实例如下：
  官能团   可逆衍生物
  羧酸   酯，包括酰氧烷基酯、酰胺
  醇   酯，包括硫酸酯和磷酸酯以及羧酸酯
  胺   酰胺、氨基甲酸酯、亚胺、烯胺
  硼酸   二醇酯
  羰基(醛、酮)   亚胺、肟、缩醛/缩酮、烯醇酯、唑烷和thiazoxolidines
前药还包括通过氧化或还原反应可以转化为活性药物的化合物。可能提及的实例如下：
氧化活化作用
·N-和O-脱烷基化
·氧化脱氨
·N-氧化
·环氧化
还原活化作用
·偶氮还原
·亚砜还原
·二硫化物还原
·生物还原烷基化
·硝基还原
还应提及前药的代谢活化是核苷酸活化、磷酸化活化和脱羧活化。
″Protective Groups in Organic Chemistry″(有机化学中的保护基)，edited by J W F McOmie，Plenum Press(1973)和″Protective Groups inOrganic Synthesis″(有机合成中的保护基)，2nd edition，T W Greene & PG M Wutz，Wiley-Interscience(1991)中充分描述了保护基的用途。
因此，本领域技术人员应该理解，虽然被保护的所述肽的衍生物可能本身不具有药物活性，但是可以将其例如肠胃外或口服给药，并且其后在机体内进行代谢以形成具有药物活性的化合物。因此，这样的衍生物是“前药”的实例。本发明的范围内包括所述化合物的全部前药。
本发明的另一方面提供药物组合物，其包含药物有效剂量的至少一种本发明的肽，或两种或更多种本发明的肽。
这些肽还包括药物可接受的载体、赋形剂或稀释剂。本文使用的术语“药物可接受的”指在合理的医学评判范围内，具有合理的利益/风险比的，适合用于与人类或某些情况中动物的组织接触的化合物、材料、组合物和/或剂型而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题或合并症。
本发明的肽尤其可以用作抗微生物肽，例如可以用于抗细菌、真菌、酵母、寄生虫、原生动物和病毒。本文使用的术语“抗微生物肽”定义为具有杀灭微生物和/或只抑制其生长(microbistatic)的活性的任何肽，并且非排他地包括据称具有抗细菌、抗真菌、抗霉菌、抗寄生虫、抗原虫、抗病毒、抗传染、抗感染和/或杀菌、杀灭藻、杀灭阿米巴、杀灭微生物、杀灭细菌、杀灭真菌、杀灭寄生虫、杀灭原生动物(protozoacidal)、杀灭原虫(protozoicidal)性质的任何肽。
因此，本发明还提供用作药物的本发明的肽。本发明的肽可以用作体内和用于体内回输的体外处理(ex vivo)的抗微生物剂。
在优选方面中，本发明提供本发明的肽在制造治疗微生物感染的药物中的用途。
“微生物感染”指由细菌、寄生虫、原生动物、病毒或真菌病原体造成的感染。通常将“病原体”定义为引起疾病的任何生物体。
细菌病原体可以来自于选自下列的细菌种类：葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)，例如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)；肠球菌属(Enterococcusspp.)，例如粪肠球菌(Enterococcus faecalis)；化脓链球菌(Streptococcuspyogenes)；利斯特菌属(Listeria spp.)；假单胞菌属(Pseudomonas spp.)；分枝杆菌属(Mycobacterium spp.)，例如结核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)；肠杆菌属(Enterobacter spp.)；弯曲杆菌属(Campylobacterspp.)；沙门菌属(Salmonella spp.)；链球菌属(Streptococcus spp.)，例如链球菌A群或B群(Streptococcus Group A or B)、肺炎链球菌(Streptoccocus pneumoniae)；螺杆菌属(Helicobacter spp.)，例如幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)；奈瑟菌属(Neisseria spp.)，例如淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhea)、脑膜炎萘瑟菌(Neisseria meningitidis)；伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)；志贺杆菌属(Shigella spp.)，例如弗氏志贺菌(Shigella flexneri)；大肠埃希杆菌(Escherichia coli)；嗜血杆菌属(Haemophilus spp.)，例如流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)；衣原体属(Chlamydia spp.)，例如沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)；土拉弗朗西丝菌(Francisella tularensis)；芽胞杆菌属(Bacillus spp.)，炭疽杆菌(Bacillus anthracis)；梭状芽孢杆菌属(Clostridia spp.)，例如肉毒梭菌(Clostridium botulinum)；耶尔森菌属(Yersinia spp.)，例如鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)；密螺旋体属(Treponema spp.)；伯尔霍尔德菌属(Burkholderia spp.)，例如鼻疽伯尔霍尔德菌(Burkholderia mallei)和假鼻疽伯尔霍尔德菌(B pseudomallei)。
病毒病原体可以来自于选自下列的病毒：人免疫缺陷症病毒(HIV1&2)(Human Immunodeficiency Virus(HIV1&2))；人T细胞白血病病毒(HTLV1&2)(Human T Cell Leukaemia Virus(HTLV1&2))；埃博拉病毒(Ebola virus)；人乳头状瘤病毒(human papillomavirus)(例如HPV-2、HPV-5、HPV-8HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-52、HPV-54和HPV-56)；乳多空病毒(papovavirus)；鼻病毒(rhinovirus)；脊髓灰质炎病毒(poliovirus)；疱疹病毒(herpesvirus)；腺病毒(adenovirus)；EB病毒(Epstein Barr virus)；流感病毒(influenzavirus)；乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒(hepatitis B and C viruses)；类天花病毒(Variola virus)；轮状病毒(rotavirus)或SARS冠状病毒(SARScoronavirus)。
寄生病原体可以来自于选自下列的寄生病原体：锥虫属(Trypanosoma spp.)(克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、布氏锥虫(Trypansosoma brucei))、利什曼原虫属(Leishmania spp.)、贾第虫属(Giardia spp.)、毛滴虫属(Trichomonas spp.)、内阿米巴属(Entamoebaspp.)、耐格里原虫属(Naegleria spp.)、棘阿米巴属(Acanthamoeba spp.)、血吸虫属(Schistosoma spp.)、疟原虫属(Plasmodium spp.)、隐孢子虫属(Crytosporidium spp.)、等孢子球虫属(Isospora spp.)、小袋虫属(Balantidium spp.)、罗阿丝虫(Loa Loa)、人蛔虫(Ascaris lumbricoides)、犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)、弓形体属(Toxoplasma ssp.)，例如鼠弓形体(Toxoplasma gondii)。
真菌病原体可以来自于选自下列的真菌病原体：念珠菌属(Candida spp.)(例如白色念珠菌(C.albicans))、表皮癣菌属(Epidermophyton spp.)、外瓶柄霉属(Exophiala spp.)、小孢霉属(Microsporum spp.)、发癣菌属(Trichophyton spp.)(例如深红色发癣菌(T.rubrum)和趾间发癣菌(T.interdigitale))、癣属(Tinea spp.)、曲霉菌属(Aspergillus spp.)、芽生菌属(Blastomyces spp.)、芽生裂殖菌属(Blastoschizomyces spp.)、球孢子菌属(Coccidioides spp.)、隐球菌属(Cryptococcus spp.)、组织胞浆菌属(Histoplasma spp.)、副球孢子菌属(Paracoccidiomyces spp.)、孢子丝菌属(Sporotrix spp.)、犁头菌属(Absidia spp.)、支孢霉属(Cladophialophora spp.)、产色芽生菌属(Fonsecaea spp.)、瓶霉菌属(Phialophora spp.)、Lacazia spp.、爪甲白癣菌属(Arthrographis spp.)、支顶孢菌属(Acremonium spp.)、马都拉放线菌属(Actinomadura spp.)、鳞质霉属(Apophysomyces spp.)、金孢子菌属(Emmonsia spp.)、团担子菌属(Basidiobolus spp.)、白僵菌属(Beauveria spp.)、金孢子菌属(Chrysosporium spp.)、耳霉属(Conidiobolus spp.)、小克银汉霉属(Cunninghamella spp.)、镰孢霉属(Fusarium spp.)、地菌属(Geotrichum spp.)、粘束孢属(Graphium spp.)、小球腔菌属(Leptosphaeria spp.)、马拉塞霉菌属(Malassezia spp.)、毛霉菌属(Mucor spp.)、新龟甲属(Neotestudina spp.)、诺卡尔菌属(Nocardiaspp.)、诺卡尔土壤菌属(Nocardiopsis spp.)、拟青霉属(Paecilomycesspp.)、茎点霉属(Phoma spp.)、毛孢子菌属(Piedraia spp.)、肺孢子虫属(Pneumocystis spp.)、伪霉样真菌属(Pseudallescheria spp.)、须壳孢属(Pyrenochaeta spp.)、根毛霉属(Rhizomucor spp.)、酒曲菌属(Rhizopusspp.)、红酵母属(Rhodotorula spp.)、酵母菌属(Saccharomyces spp.)、足放线病菌属(Scedosporium spp.)、帚霉属(Scopulariopsis spp.)、掷孢酵母属(Sporobolomyces spp.)、并头状菌属(Syncephalastrum spp.)、木霉属(Trichoderma spp.)、毛孢子菌属(Trichosporon spp.)、龈枝孢属(Ulocladium spp.)、黑粉菌属(Ustilago spp.)、轮枝孢菌属(Verticilliumspp.)、万吉拉菌属(Wangiella spp.)。
本发明的肽可以治疗的微生物感染可以选自如表1所示的任何人细菌、真菌、寄生虫、包膜病毒病原体。
因此，本发明提供本发明的肽在制造治疗微生物感染的药物中的用途，其中该微生物感染是全身的、局部的、皮下的、皮肤的或粘膜的真菌感染。
霉菌感染可以分为全身的或局部的感染，所述全身感染指感染程度较重并且影响内脏或经血液传播，局部(皮肤真菌的)感染指感染是表面的并且发生在皮肤上。此外，酵母感染可以影响机体的粘膜。酵母感染也可以是全身的(例如念珠菌血症和其它经常是致命性的疾病状态)。通常可以使用乳膏或软膏(局部抗真菌药)治疗皮肤上的真菌感染。然而，全身感染、酵母感染或在使用乳膏或软膏治疗后没有消除的局部感染可能需要使用全身性抗真菌药物(口服或静脉内)来进行治疗。使用这些药物来治疗诸如癣(癣菌病)或念珠菌病的普通真菌感染，所述癣发生在皮肤上，所述念珠菌病(酵母感染，也被成为真菌性口炎)发生在咽喉、阴道或机体的其它部分。全身性抗真菌药物还被用来治疗诸如组织胞浆菌病、芽生菌病和曲霉病等可以影响肺部和其它器官的其它深层的真菌感染。有时使用这些药物来预防或治疗诸如骨髓或器官移植和HIV-AIDS患者等免疫系统被削弱的人的感染。
通常不会引起死亡或严重疾病的局部或皮肤真菌感染是广泛流行的并且经济上是重要的，因为对其进行治疗是昂贵的。局部或表面真菌感染可以包括皮肤、蹄叶、角质层、甲和毛发的感染。皮肤感染是皮肤、指甲和趾甲的感染。
在本发明的优选方面中，真菌感染是甲癣。来自但不限于发癣菌属(Trichophyton spp.)的真菌可以引起甲癣，例如该真菌可以是趾间发癣菌(Trichophyton interdigitale)或深红色发癣菌(Trichophytonrubrum)。
术语“甲癣”包括但不限于末端侧生甲下的、表面白色的、接近白色的甲下的、继发营养不良的、原发营养不良的、endonyx、念珠菌属引起的(例如甲松离和慢性粘膜皮肤病)类型的甲癣。已经证明甲癣是诸如手臂/腿的急性细菌性蜂窝织炎以及其它继发细菌感染的多种严重慢性并发症的重要危险因子，因此本发明包括这些感染的治疗。
对于多种病原生物体来说，本发明的肽是有效的抗微生物肽。然而，本发明的肽还可以用于包括但不限于囊性纤维化以及诸如胃肠感染、泌尿生殖器感染或呼吸感染的与粘膜感染相关的其它疾病状态的其它疾病状态的治疗。
本发明的肽还可以尤其用于创伤、溃疡和损伤的治疗或预防，例如割伤或烧伤的表皮创伤以及与其相关的疾病状态。
术语“治疗”涉及本文所述的肽给予患有(传染性的)疾病的患者益处的效果，其包括患者疾病状态的改善或疾病进程的延缓。
本文使用的“创伤治疗”可以包括创伤愈合以及促进、加强或加速组织愈合并且包括术后瘢痕、烧伤、牛皮癣、诸如整形手术和器官移植后的组织重塑的加速的相关条件和疗法。
因此，本发明的另一方面提供了应用本发明的肽的基质或与本发明的肽连接的基质。优选地，该基质适合用于创伤或向创伤部位输送。优选地，该基质允许本发明的肽从基质转移至创伤床以实现其抗菌效果。该基质可以是敷料，例如创伤敷料。该敷料可以包括织物材料或者其可以是胶原样材料。
本发明的还可以用作消毒剂或用于消毒剂之中。在这方面，可以将本发明的肽或药物组合物单独应用于需要处理的表面，或将其与其它消毒剂联合应用于需要处理的表面。本文使用的“需要处理的表面”可以是本文定义的基质或医疗器械。
在另一方面中，本发明提供治疗或预防个体微生物感染的方法，其包括对所述个体给药治疗有效量的本发明的肽。
在本发明的优选方法中，所述微生物感染是真菌感染。在本发明的方法中，所述肽可以用于所述个体的皮肤或甲上。
可以使用本文所述的肽、组合物或方法来治疗哺乳动物、鸟和其它动物。这样的哺乳动物和鸟包括人、狗、猫和家畜，该家畜例如马、牛、绵羊、山羊、鸡、火鸡等等。此外，还可以使用本发明的肽、组合物或方法来治疗植物。
当所述个体为动物时，可以将本发明的方法用于非排他地包括蹄、爪和脚的甲样部分。
除了肽治疗以外，本发明的方法可以包括增强肽向甲中渗透的治疗。可以通过化学或物理方法促进上述的治疗。诸如刻蚀或挫蚀甲背层的物理处理可以增强本发明的肽的渗透性。可以通过破坏甲板角蛋白的物理或化学键来实现化学增强本发明的肽的甲渗透性。甲软化剂增强了甲的水合作用以减小甲的密度，因此可以提高本发明的肽的渗透性，所述甲软化剂非排他地包括脲和水杨酸。含有巯基基团的化合物将破坏甲角蛋白中的双硫键，并且可以导致不稳定以及增强的药物渗透性。非排他地包括乙酰半胱氨酸和巯基乙醇衍生物等的化合物可以与本发明的肽组合使用。其它已知的可以与本发明的肽组合使用的甲渗透性赋形剂/佐剂包括甲磺酰基甲烷、脲、聚乙二醇、N-(-2-巯丙酰基)甘氨酸、二甲砜和2-n-壬基-1，3-二氧戊环。
另一方面，本发明提供治疗个体创伤的方法，其包括对个体的创伤应用治疗有效剂量的本发明的肽或基质。
可以将包括其盐在内的本发明的肽给药以便实现降低与感染、征候或疾病相关的至少一种症状，或降低与症候或疾病相关的抗体的量。
为了达到期望的效果，可以将所述肽、其变体或其组合以单一剂量或分立剂量给药，所述剂量例如至少约0.01mg/kg体重至约500至750mg/kg体重、至少约0.01mg/kg体重至约300至500mg/kg体重、至少约0.1mg/kg体重至约100至300mg/kg或至少约1mg/kg体重至约50至100mg/kg体重或至少约1mg/kg体重至约20mg/kg体重，虽然其它剂量也可能提供有益结果。根据包括但不限于所选择的肽及其临床效果、疾病、哺乳动物的体重、身体条件、健康状况、年龄、是要实现预防还是要实现治疗、以及所述肽是否是化学修饰的等多种因素，给药量是可以变化的。通过临床医生检查临床试验的经验数据以及检查临床前动物模型的结果或其它本领域可以得到的测试体系，可以容易地确定这些因素。
例如根据受体的生理条件、给药的目的是治疗的还是预防、以及技术人员已知的其它因素，可以以连续的或间断的方法将本发明的治疗剂进行单次剂量、多次剂量给药。可以在预定的时间段内基本上连续地给药本发明的肽，也可以以一系列间隔剂量给药本发明的肽。可以进行局部给药和全身给药。
为了制备组合物，合成所述肽或者以其它方式得到所述肽，如果必须或愿意，可以纯化所述肽，然后冻干并使其稳定。然后将所述肽调节至合适的浓度并任意地与其它试剂混合。包含在单位剂量中的给定肽的绝对重量可以大范围地变化。例如可以给药约0.01至约2g或约0.01至约500mg的至少一种本发明的肽或对特定细胞类型特异的多种肽。或者，单位剂量可以是约0.01g至约50g、约0.01g至约35g、约0.1g至约25g、约0.5g至约12g、约0.5g至约8g、约0.5g至约4g、或约0.5g至约2g。
本发明的肽的日剂量也可以变化。例如该日剂量可以是约0.001g/天至约100或50g/天、约0.1g/天至约25g/天、约0.1g/天至约12g/天、约0.1g/天至约5g/天、约0.1g/天至约2.5g/天、约0.1g/天至约2g/天、约0.5g/天至约8g/天、约0.5g/天至约4g/天、约0.5g/天至约2g/天、以及约0.5g/天至约1g/天。
因此，可以通过包括口服、肠胃外(包括皮下、静脉、肌内和腹膜内)、直肠、皮肤、经皮肤、胸内、肺内和鼻内(呼吸)途径在内的多种途径将一种或多种包含本发明的治疗肽的合适单位剂型进行给药。还可以将所述治疗肽组方为脂质剂型或持续释放(例如使用微囊法，参见WO 94/07529和美国专利第4,962,091号)。如果合适，所述制剂可以方便地存在于不连续的单位剂型中并且可以通过制药领域公知的任何方法制备。这样的方法可以包括将治疗剂与脂质载体、固体基质、半固体基质、精细分离的固体载体或其组合进行混合的步骤，然后，如果需要，将产物引入或成型至期望的输送体系中。
当制备本发明的治疗肽用于口服给药时，通常将其与药物可接受载体、稀释剂或赋形剂混合以形成药物制剂，或单位剂型。对于口服给药，所述肽可以以粉末、颗粒制剂、溶液、混悬液、乳液的形式存在或存在于天然的或合成的聚合物或树脂中，以便于从口香糖中吸收所述活性成分。所述活性肽还可以以大药丸、药糖剂或糊剂的形式存在。还可以将口服给药的本发明的治疗肽进行组方使其持续释放，例如可以将所述肽包被、微囊化或者置于持续输送的装置中。在这样的制剂中总活性成分为制剂重量的0.1至99.9％。
可以通过本领域已知的方法，使用公知的并易于获得的原料来制备含有本发明的治疗肽的药物制剂。例如，可以使用普通的赋形剂、稀释剂或载体与所述肽进行组方，形成片剂、胶囊剂、溶液、混悬液、粉末、气雾剂等等。适于这些制剂的赋形剂、稀释剂和载体的实例包括缓冲液、填充物以及诸如淀粉、纤维素、糖、甘露醇和硅衍生物等膨胀剂。所述制剂还可以包括结合剂，例如羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和其它纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮。所述制剂可以包括诸如甘油的增湿剂，诸如碳酸钙和碳酸氢钠的崩解剂。还可以包括诸如石蜡等的延缓溶出的试剂。还可以包括诸如季胺类化合物的吸收加速剂。可以包括诸如十六醇和单硬脂酸甘油酯等的表面活化剂。可以加入诸如高岭土和膨润土等吸附载体。还可以包括诸如滑石、硬脂酸钙和硬脂酸镁以及固态聚乙二醇等润滑剂。还可以加入防腐剂。本发明的组合物还可以含有诸如纤维素和/或纤维素衍生物等的增稠剂。它们还可以含有诸如黄原胶、瓜儿胶或卡波胶或阿拉伯胶等树胶，或者含有聚乙二醇、膨润土和蒙脱石等等。
例如，含有本发明的肽的片剂或胶囊药片(caplet)可以含有诸如碳酸钙、氧化镁和碳酸镁等缓冲剂。合适的缓冲剂还可以包括乙酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐和磷酸盐。胶囊药片和片剂还可以含有非活性成分，诸如纤维素、预胶化淀粉、二氧化硅、羟丙基甲基纤维素、硬脂酸镁、微晶纤维素、淀粉、滑石、二氧化钛、苯甲酸、柠檬酸、玉米淀粉、矿物油、聚丙二醇、磷酸钠、硬脂酸锌等等。含有至少一种本发明的肽的硬明胶胶囊或软明胶胶囊可以含有诸如明胶、微晶纤维素、十二烷基硫酸钠、淀粉、滑石、二氧化钛等非活性成分，以及诸如聚乙二醇(PEGs)和植物油等液体载体。此外，含有一种或多种本发明的肽的包有肠溶衣的胶囊药片或片剂被设计为在胃中抵抗崩解以及在十二指肠的更加中性至碱性的环境中溶解。
还可以将本发明的治疗肽组方为酏剂或用于方便口服给药的溶液或适于通过诸如肌内、皮下、腹膜内或静脉内等途径肠胃外给药的溶液。本发明的肽的药物制剂还可以是水溶液或无水溶液或分散液的形式，或者是乳液、混悬液或药膏的形式。
因此，可以将所述治疗肽进行组方用于肠胃外给药(例如通过诸如团注或连续输注等注射)，并且其可以以单位剂型存在于安瓿、预装注射器、小体积输注容器或者多次剂量容器中。如上所述，可以加入防腐剂以帮助保持剂型的货架寿命。所述活性肽和其它成分可以在油介质或水介质中形成混悬液、溶液或乳液，并且可以含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂等组方剂。或者，所述活性肽和其它成分可以是通过无菌固体的无菌分离或通过将溶液冻干获得的粉末形式，其在使用前与诸如无菌无热原水的合适载体组成。
这些制剂可以含有本领域公知的药物可接受的载体、介质和佐剂。例如除了水以外，可以使用一种或多种生理学观点可以接受的有机溶剂制备溶液，所选的有机溶剂可以是丙酮、乙酸、乙醇、异丙醇、二甲基亚砜、乙二醇醚(例如以名字″Dowanol″出售的产品)、聚乙二醇(polyglycol)和聚乙二醇(polyethylene glycol)、短链酸的C1-C4烷基酯、乳酸乙酯或乳酸异丙酯、甘油三脂肪酸酯(例如以名字″Miglyol″销售的产品)、肉豆蔻酸异丙酯、动物油、矿物油和植物油以及聚硅氧烷。
优选地，本发明的治疗肽的药物制剂还可以是含有该肽的溶剂或稀释剂的形式。溶剂或稀释剂可以包括酸溶液、二甲砜、N-(-2-巯丙酰基)甘氨酸、2-n-壬基-1，3-二氧戊环和乙醇。该溶剂/稀释剂优选为酸性溶剂，例如乙酸、柠檬酸、硼酸、乳酸、丙酸、磷酸、苯甲酸、丁酸、苹果酸、丙二酸、草酸、琥珀酸或酒石酸。
更优选地，所述溶剂是乙酸溶液。诸如乙酸溶液的所述溶剂可以以低于1％、0.5％、0.25％、0.1％、0.05％或0.01％酸的浓度存在于所述组合物中，该酸例如是乙酸。
本发明的另一方面提供了酸在制造治疗微生物感染，尤其是真菌感染的药物中的用途。所述真菌感染可以是甲癣。甲癣可以由来自但不限于发癣菌属(Trichophyton spp.)的真菌引起的，例如该真菌可以是趾间发癣菌(Trichophyton interdigitale)或深红色发癣菌(Trichophytonrubrum)。所述酸可以是上文所述的。优选的酸是乙酸。优选地，在溶液中以低于1％、0.5％、0.25％、0.1％、0.05％或0.01％酸的浓度提供所述酸，该酸例如乙酸。通常使所述药物适合局部给药来治疗例如甲。
下文使用的术语“活性剂”包括单一一种本发明的肽或本文所述肽的组合。术语“活性剂”还可以包括药物有效量的本文所述的酸。可以将该活性剂同时、连续或分别给药。通常优选局部给药。
可以将所述活性剂以协同有效量给药。因此，本发明包括：协同有效量的活性剂的用途，例如本发明的肽和药物有效量的本文所述酸用于制造例如药物的产品，用于在治疗微生物感染中同时、分别或连续给药所述活性剂。
如果需要，可以加入选自抗氧化剂、表面活性剂、其它防腐剂、成膜剂、角质分离剂或剥离剂、香料、调味剂和着色剂的佐剂。可以加入诸如叔丁基对苯二酚、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯和α-生育酚及其衍生物等抗氧化剂。
本发明还涉及包含一种或多种本发明的肽以及一种或多种其它抗微生物剂或抗真菌剂的组合产品，所述抗微生物剂或抗真菌剂例如两性霉素B、两性霉素B脂质体复合物(ABCD)、脂质体两性霉素B(L-AMB)和脂质体制霉菌素、唑类和三唑类，例如伏立康唑(voriconazole)、氟康唑、酮康唑、伊曲康唑、pozaconazole等等；葡聚糖合成酶抑制剂，例如卡泊芬净(caspofungin)、米卡芬净(micafungin，FK463)和V-棘白菌素(LY303366)；灰黄霉素；丙烯胺类，例如特比萘芬；氟胞嘧啶或包括本文所述的抗真菌剂在内的其它抗真菌剂。此外，本发明还涉及所述肽可以与诸如环吡酮胺(ciclopirox olamine)、卤普罗近、发癣退、十一烯酸酯、局部制霉菌素、阿莫罗芬(amorolfine)、布替萘芬(butenafine)、萘替芬、特比萘芬和其它局部用试剂等局部抗真菌剂混合。
此外，所述肽还适用于持续释放剂型等的制剂。该制剂可以以特定方式组成，使得其例如在一定时间段内在肠道或呼吸道特定部分释放活性肽。可以由诸如聚交酯-甘醇酸酯、脂质体、微乳剂、微粒、纳米颗粒或蜡等聚合基质制备包被、包膜和保护性基质。这些包被、包膜和保护性基质可以用于包被内置的装置，例如支架、导管、腹膜透析管、引流装置等等。
对于局部给药，可以将所述活性剂如本领域已知的那样组方以直接应用于靶区。局部应用的主要习惯形式是乳膏、乳状物、凝胶、粉末、分散剂或微乳剂、或多或少增稠的洗液、浸渍垫、软膏或棒状物、气雾剂制剂(例如喷雾剂或泡沫)、肥皂、去污剂、肥皂洗液或肥皂块。用于该目的的其它常规形式包括创伤敷料、涂敷的绷带或其它聚合物覆盖物、软膏、乳膏、洗液、糊剂、凝胶、喷雾剂和气雾剂。因此，可以通过贴剂或绷带来输送本发明的治疗肽以用于皮肤给药。或者，可以将所述肽组方为诸如聚丙烯酸酯或丙烯酸酯/乙酸乙烯酯共聚物等粘性聚合物的一部分。对于长期应用，也许需要使用微多孔和/或透气的衬背层，以便将水合作用或皮肤浸渍最小化。衬背层可以是提供需要的保护和支撑功能的任何合适的厚度。合适的厚度通常为10至200微米。
可以以甲涂层或甲漆层的形式局部给药。例如，可以将抗真菌肽组方在含有乙酸乙酯(NF)、异丙醇(USP)和聚[甲基乙烯基醚/马来酸]的丁基单酯的异丙醇溶液的溶液中以局部给药。
局部给药的药物制剂可以包含例如生理学可接受的缓冲盐溶液，该盐溶液含有约0.001mg/ml至约100mg/ml的一种或多种对于要治疗的征候或疾病特异的本发明的肽，该肽的浓度例如约0.1mg/ml至约10mg/ml。
可以用加入合适的增稠剂和/或胶凝剂的水性基质或油性基质组方软膏和乳膏。可以用水性基质或油性基质组方洗液，该洗液通常还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。还可以通过美国专利第4,140,122、4,383,529或4,051,842号公开的离子电渗疗法输送活性肽。存在于局部制剂中的本发明的治疗剂的重量百分比将取决于多种因素，但是通常为制剂总重的0.01％至95％，典型为0.1-85％重量比。
可以用水性或非水性基质中的一种或多种所述治疗肽组方诸如滴眼剂和滴鼻剂等滴剂，该水性或非水性基质还含有一种或多种分散剂、增溶剂或助悬剂。液体喷雾剂可被泵出，或方便地从压力包装中输出。可以通过简单的封口眼滴瓶、通过适于逐滴输送液体内容物的塑料瓶或者通过特殊形状的封装物输送滴剂。
还可以将所述治疗肽组方用于口或咽喉内的局部给药。例如，可以将所述活性成分组方为锭剂、软锭剂和漱口剂，所述锭剂含有通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶等调味基质，所述软锭剂在诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶等惰性基质中含有所述组合物，所述漱口剂在合适的液体载体中含有本发明的组合物。
本发明的药物制剂可以包括作为可选成分的药物可接受的载体、稀释剂、增溶剂或乳化剂，以及本领域中可得到的类型的盐。这样的物质的实例包括通常的盐溶液，例如生理缓冲盐溶液和水。可以用于本发明的药物制剂的载体和/或稀释剂的具体但非限制性实例包括水和生理学可接受的缓冲盐溶液，例如pH 7.0-8.0的磷酸盐缓冲盐溶液。
还可以将本发明的肽对呼吸道给药。因此，本发明还提供气雾剂药物制剂和用于本发明方法的剂型。通常，这些剂型包括一定量的有效治疗或预防特定感染、征候或疾病的临床症状的至少一种本发明的试剂。依照本发明方法进行治疗的感染、征候或疾病的任何统计学显著的减弱均被认为是在本发明的范围内对这些感染、征候或疾病的治疗。
或者，对于吸入吹入给药，可以将组合物制成干粉的形式，例如治疗剂和诸如乳糖和淀粉等合适的粉末基质的粉末混合物。粉末组合物可以以单位剂型存在于胶囊或药筒内，或例如明胶或水泡眼包装内，使用吸入器或吹入器，或定量吸入器从上述包装中将所述粉末给药(例如参见Newinan，S.P.in Aerosols and the Lung，Clarke，S.W.and Davia，D.eds.，pp.197-224，Butterworths，London，England，1984中公开的压力定量吸入器(MDI)和干粉吸入器)。
当以气雾剂或吸入形式给药时，可以将本发明的治疗肽以水溶液形式给药。因此，其它气药物制剂可以含有例如生理学可接受的缓冲盐溶液，该盐溶液含有约0.001mg/ml至约100mg/ml的对于要治疗的征候或疾病特异的一种或多种本发明的肽。精细分离的固体肽或者不溶于液体的或不混悬于液体中的核酸颗粒形式的干气雾剂也可以用于本发明的实践中。还可以将本发明的肽组方为扑粉并且含有具有平均粒径为约1至5μm或者2至3μm的精细分离的颗粒。可以使用本领域公知的技术，通过粉碎或筛选过滤制备精细分离的颗粒。可以通过吸入预定量的精细分离的物质给药所述颗粒，该精细分离的物质可以是粉末形式。应该理解，活性成分的单位含量或每一剂型的单独气雾剂剂量中所含的成分其自身并不需要构成治疗特定感染、征候或疾病的有效量，因为可以通过多次单位剂量的给药达到必需的有效量。此外，可以在一次给药或多次给药中使用低于剂型中的剂量而达到有效量。
对于通过吸入向上呼吸道(鼻)或下呼吸道给药，可以方便地从喷雾器或压力包装或其它输送气溶胶喷雾剂的合适装置中输送本发明的治疗肽。压力包装可以含有合适的压缩气体，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适气体等。在压力气雾剂的情况下，可以通过提供阀输送计量的量来确定剂量单位。喷雾器包括但不限于美国专利第4,624,251、3,703,173、3,561,444和4,635,627号中公开的喷雾器。可以从包括Fisons Corporation(Bedford，Mass.)、Schering Corp.(Kenilworth，NJ)和American Pharmoseal Co.(Valencia，CA)在内的许多商业来源获得本文公开类型的气雾剂输送系统。对于鼻内给药，还可以通过滴鼻剂、液体喷雾剂给药所述治疗剂，例如通过塑料瓶喷雾器或定量吸入器将。通常的喷雾器是Mistometer(Wintrop)和Medihaler(Riker)。
此外，无论是用于所述疾病状态还是某些其它疾病状态，所述活性成分还可以与诸如镇痛剂、抗炎剂、抗组胺剂、支气管扩张剂等其它治疗剂组合使用。
本发明还提供对特定肽的筛选分析，该特定肽对普通人或其它动物细胞具有低毒性但具有期望的诸如抗真菌等抗微生物特性(渗透真菌的细胞膜、溶解或以其它方式杀死或抑制真菌的生长)。
可以从本文所述的本发明的肽文库中得到候选肽。还可以单独或理性地设计所述肽以使其具有特定的结构特征。
参考以下附图并藉实施例来说明本发明：
图1显示了本发明的4种肽的氨基酸序列；
图2是显示在使用图1的肽治疗(a)4天和(b)7天以后，真菌趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的直方图；
图3是显示在使用图1的肽治疗(a)4天和(b)7天以后，真菌深红色发癣菌(T.rubrum)生长的直方图；
图4是显示在使用图1的肽治疗(a)24小时和(b)48小时以后，真菌白色念珠菌(Candida albicans)生长的直方图；
图5是显示治疗24小时以后，肽1(图1所示)对白色念珠菌(Candida albicans)生长的剂量响应实验的结果的直方图；
图6是显示在图1所示的肽4的不同剂量下，念珠菌属(Candidaspp.)的24小时存活率的图；
图7是显示在图1所示的肽4的不同剂量下，3种不同的细菌菌株的24小时存活率的图；
图8是显示在生长3天时，0.01％的乙酸对肽4(1mg/ml)的抗真菌(抗深红色发癣菌(T.rubrum))活性的协同影响的直方图；
图9是显示肽4对趾间发癣菌(T.interdigitale)和深红色发癣菌(T.rubrum)的抑制的直方图；
图10是显示肽3和肽4对趾间发癣菌(T.interdigitale)的影响的直方图；
图11是显示乙酸对趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的影响的直方图；
图12是显示多聚赖氨酸对趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的影响的直方图；
图13是显示多聚赖氨酸和多聚精氨酸对深红色发癣菌(T.rubrum)生长的影响的直方图；
图14是显示多聚-L-精氨酸对趾间发癣菌(T.interdigitale)和深红色发癣菌(T.rubrum)的抑制的直方图；
图15是显示降低浓度的多聚精氨酸对深红色发癣菌(T.rubrum)和趾间发癣菌(T.interdigitale)的影响的直方图；
图16是显示三聚体对深红色发癣菌(T.rubrum)生长的影响的直方图；
图17是显示肽4和NaCl对趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的影响的直方图；
图18是显示在增加的盐浓度下，肽4对白色念珠菌(Candidaalbicans)的影响的图；
图19是显示多聚赖氨酸和多聚精氨酸对白色念珠菌(Candidaalbicans)存活的影响的直方图；
表1列出了本发明的肽可以治疗的人类细菌、真菌、寄生虫和包膜病毒病原体；
表2详细说明了与结果和附图中所示的氨基酸聚合物代码相应的肽。
通过参考下列实施例来描述本发明。
实施例
材料与方法试剂
或者通过与Invitrogen-Evoquest，Carlsbad，CA，USA签订合同，使用固相合成生产，或者从肽供应商NeoMPS SA(Strasbourg，France)或Sigma-Aldrich Chemical Company Ltd.(Poole，UK)处得到全部的肽。对于使用真菌的测试，在分析缓冲液中将冻干的肽配制为1,000μg/ml的储液。当得出图2至8和图11的实验中明确说明时，加入作为溶剂的乙酸使其最终浓度达到0.5％。
病原体
从National Collection of Pathogenic Fungi，Bristol得到趾间发癣菌(T.interdigitale)(NCPF 117)和深红色发癣菌(T.rubrum)(NCPF 335)菌株，并且以约一个月的时间间隔将菌种转移至Sabuoraud′s琼脂斜面和马铃薯右旋糖琼脂斜面上，在30℃下保持培养。在37℃下将白色念珠菌(Candida albicans)菌株3179(从National Collection of TypeCultures[NCTC]，Colindale获得)供养在Oxoid Mueller Hinton Broth中。从NCTC，Colindale获得化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)菌株8198、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)菌株10642(抗甲氧西林)和E.coli O157菌株12900并在37℃下将其供养在Oxoid MuellerHinton Broth中。
真菌生长敏感性分析
为了确定真菌菌株对每一测试肽的敏感性，如下评价该测试肽对真菌生长的影响。通过向斜面培养基中加入10ml的新鲜营养葡萄糖肉汤(NGB)(含有2％w/v葡萄糖的Oxoid Nutrient broth)并使用刮刀搅拌来制备趾间发癣菌(T.interdigitale)和深红色发癣菌(T.rubrum)的分生孢子和菌丝段的混悬液。通过2层无菌外科纱布过滤所得的分生孢子/菌丝段混悬液以除去较大的菌丝丛和琼脂块。向已经加入了总体积为80μl营养培养基(NGB)和适量肽溶液的无菌96孔微滴定板的每一孔中接种20μl的该混悬液(540nm处的吸光度为约0.1，对应约106繁殖体/ml)。对照孔是只使用NGB培养基和溶剂(如果适用，并且如果使用的话与肽样品的浓度相同)所得到的最终分析体积为100μl的孔。在30℃下孵育24小时、4天、7天后，通过Microtek板读数器读取在540nm处的吸光度来监测板内的真菌生长。
白色念珠菌(Candida albicans)存活分析
为了确定真菌菌株对每一测试肽的敏感性，如下评价该测试肽对白色念珠菌(Candida albicans)存活的影响。白色念珠菌(C.albicans)培养物生长18至24小时，然后使用前在4℃下储存。将过夜生长的新鲜培养物以2000xg离心分离10分钟并使用新鲜的Mueller HintonBroth洗涤，调整活细胞数目至5×106至1×107/ml。通过向6.9ml的10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.7)中加入100μl的NGB培养基来制备分析缓冲液。向无菌的螺旋帽封的聚丙烯小瓶中加入35μl含有或不含有一定浓度的肽的分析缓冲液，并加入15μl上述的白色念珠菌(Candidaalbicans)接种物。在37℃下在水浴中孵育所述小瓶2小时，并且通过在无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的连续稀释并在9cm含有OxoidSabouraud′s Agar(20ml)的Petri培养皿上涂板来确定存活的念珠菌属(Candida spp.)的数目。将这些板在37℃下孵育18至24小时后计数。
细菌存活率分析
化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)菌株8198、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)菌株10642(抗甲氧苯青霉素)和E.coli O157菌株12900(均从NCTC，Colindale获得)生长18至24小时，然后使用前在4℃下储存。将过夜生长的新鲜培养物以2000xg离心分离10分钟并使用新鲜的Mueller Hinton Broth洗涤。根据上述白色念珠菌(C.albicans)的方法对4种肽中的每一种进行分析。对于E.coli和金黄色葡萄球菌(S.aureus)，肽敏感性分析种使用的细胞的起始数目为108/ml，并且用于计数的培养基是Nutrient Agar(Oxoid)。在MuellerHinton agar上化脓性链球菌(Srt.pyogenes)不如其它菌株生长的好并且因此用于这些分析的起始细胞数目要比用于其它菌株的少，后者的细起始胞数目为106/ml。使用Oxoid Tryptose Soya Agar代替NutrientAgar来确定化脓性链球菌(Srt.pyogenes)的存活。
结果
肽1至肽4对发癣菌属(Trichophtyon spp.)生长的抑制
如材料与方法部分所述，在单独的生长培养基(对照培养)或含有50μl/ml的肽1、肽2、肽3或肽4的生长培养基中培养两种临床相关的皮肤真菌病原体深红色发癣菌(Trichophtyon rubrum)和趾间发癣菌(Trichophtyon interdigitale)(如图1所示)。培养4天和7天后，通过测量光密度(540nm处的吸光度)来评定趾间发癣菌(T.interdigitale)和深红色发癣菌(T.rubrum)的生长。与对照样品、未处理样品相比，在第4天和第7天每一测试肽均显著地抑制了趾间发癣菌(T.interdigitale)(图2)和深红色发癣菌(T.rubrum)(图3)的生长。在4至7天如OD读数增加所显示的那样，每一测试菌株的对照培养物继续生长。
肽1至肽4对念珠菌属(Candida spp.)生长和存活的抑制
如材料与方法部分所述，在单独的生长培养基(对照培养)或含有50μl/ml或100μl/ml和300μl/ml或500μl/ml的肽1、肽2、肽3或肽4的生长培养基中培养酵母白色念珠菌(Candida albicans)。培养24小时(图4a)和48小时(图4b)后，通过测量光密度(540nm处的吸光度)来评价白色念珠菌(C.albicans)的生长。与对照样品、未处理样品相比，每一测试肽均以时间和剂量依赖的方式显著地抑制了白色念珠菌(C.albicans)的生长。在对照(单独的生长培养基)条件下或存在50μg/ml至500μg/ml的肽1时培养24小时后光学评价白色念珠菌(C.albicans)生长的实验中进一步证明了生长抑制的剂量依赖性(图5)。在另一实验中，在单独培养基(对照)或含有1μg/ml至1000μg/ml的肽4的培养基中培养生长18至24小时后，评价白色念珠菌(C.albicans)的存活(图6)。通过培养24小时后的生存计数，白色念珠菌(C.albicans)的存活以剂量依赖的方式降低(图6)。
肽4对细菌存活的抑制
如材料与方法部分所述，将三种临床相关的细菌病原体E.coliO157、甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)暴露于含有一定浓度肽4中。3小时后将每一细菌培养样品转移至合适的固体生长培养基平板上，并且在18至24小时后评价对照(仅有生长培养基)和经处理(含有肽4的生长培养基)的样品中的成活菌落的数目。暴露3小时后，与对照培养物、未处理的培养物相比，肽4以剂量依赖的方式显著地抑制了每一细菌菌株的存活(图7)。
乙酸增强了肽4的抗真菌活性
因为在图2和图3所示的实验中，对照(不含肽)和测试(含有肽1、肽2、肽3或肽4)培养基均含有0.5％乙酸作为肽溶剂(材料与方法部分有详细说明)，所以进行单独实验以确定乙酸自身是否可以在肽活性和/或真菌存活中起作用。为此，根据材料与方法部分，使用仅有生长培养基、含有0.01％乙酸的生长培养基、含有1mg/ml肽4的生长培养基以及含有1mg/ml肽4和0.01％乙酸的生长培养基来建立深红色发癣菌(T.rubrum)生长实验。如上述培养3天后通过OD确定真菌的生长。正如所预期的那样，肽4抑制深红色发癣菌(T.rubrum)的生长。单独的0.01％乙酸对深红色发癣菌(T.rubrum)的生长没有显著影响(图8)，但是被包括在含有肽4的培养基中时，存在0.01％乙酸比单独的1mg/ml肽4更显著地抑制了深红色发癣菌(T.rubrum)的生长。
肽4对趾间发癣菌(T.interdigitale)和深红色发癣菌(T.rubrum)生长的抑制
根据材料与方法，通过真菌生长分析来确定肽4对发癣菌属(Trichophtyon spp.)生长的抑制作用。在单独的培养基或含有3种不同浓度的肽4的培养基中培养深红色发癣菌(T.rubrum)和趾间发癣菌(T.interdigitale)。任何样品中均不含乙酸。使用对照培养基以说明培养基的背景吸光度。如前所述在30℃下孵育96小时后通过OD来确定真菌的生长。如图9所示，这些分析证明了肽4对两种真菌的生长均具有抑制作用，趾间发癣菌(T.interdigitale)始终比深红色发癣菌(T.rubrum)更易感于肽4的抑制作用。在肽的浓度为0.55mg/ml时抑制了趾间发癣菌(T.interdigitale)的生长。
肽3和肽4对趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的影响
评价了肽3和肽4对趾间发癣菌(T.interdigitale)的抗真菌潜力。在不含乙酸的条件下，根据材料与方法，进行生长抑制分析。因为肽1至肽3是非常疏水的并且因此不溶，所以从前只在作为溶剂的乙酸中测试了其对发癣菌属(Trichophtyon spp.)的抑制。当在不含乙酸溶剂的存在肽3、肽4或单独的培养基中使趾间发癣菌(T.interdigitale)生长7天且通过OD测量其生长时，观察到肽4显著地抑制了真菌的生长(图10)，而肽3没有显示出抑制活性(图10)。在不存在0.5％乙酸时，阳离子肽4高于疏水肽3的活性表明乙酸对之前观察到的上述疏水肽的活性有显著贡献。
乙酸对趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的影响
根据材料与方法部分，通过建立真菌生长实验来评价乙酸对趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的抑制。在30℃下，未经处理的趾间发癣菌(T.interdigitale)培养物或使用3种不同浓度的乙酸处理的(T.interdigitale)培养物生长96小时(图11)。这表明与上述作为肽1至肽4溶剂的浓度相同的0.5％乙酸存在显著影响。本实验与乙酸不存在时肽3缺乏活性的实验共同表明，肽4是抗发癣菌属(Trichophtyon spp.)的最具活性的化合物。
多聚-L-赖氨酸对趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的影响
因为肽4是包含赖氨酸和精氨酸残基的高度阳离子肽，所以使用材料与方法中详细描述的生长抑制分析，在不存在乙酸的条件下，测试了这些氨基酸的多聚-L形式对趾间发癣菌(T.interdigitale)的抗真菌活性。建立到了对照趾间发癣菌(T.interdigitale)培养物、未处理的趾间发癣菌(T.interdigitale)培养物以及含有1mg/ml至50μg/ml长度为27-100个残基至100-200个残基的多聚-L-赖氨酸分子的发癣菌属(Trichophtyon spp.)培养物。在30℃下培养96小时后评价每一培养物中的趾间发癣菌(T.interdigitale)的生长。两种大小的多聚-L-赖氨酸均抑制了发癣菌属(Trichophtyon spp.)的生长(图12)，但是尽管更大的分子在所有测试浓度下均抑制生长，长度为27-100个氨基酸的分子仅在较高浓度下具有抑制活性(图12)。这表明赖氨酸对发癣菌属(Trichophtyon spp.)的生长抑制作用是大小和剂量依赖的。
多聚-L-精氨酸和多聚-L-赖氨酸对深红色发癣菌(T.rubrum)生长的影响
然后测试多聚-L-精氨酸与多聚-L-赖氨酸对深红色发癣菌(T.rubrum)的抗真菌活性。在不存在乙酸的条件下，根据材料与方法，确定生长的抑制。在单独的培养基、含有多聚-L-精氨酸(长28-86个氨基酸)和多聚-L-赖氨酸(100-200个氨基酸)的培养基中培养深红色发癣菌(T.rubrum)。建立非接种的对照培养基。在30℃下保持并监测生长96小时。多聚-L-精氨酸和多聚-L-赖氨酸均抑制了深红色发癣菌(T.rubrum)的生长(图13)。当在相同剂量下测试时，多聚-L-精氨酸对深红色发癣菌(T.rubrum)抑制影响的活性高于多聚-L-赖氨酸，多聚-L-精氨酸在1mg/ml下完全抑制生长(图13)。
多聚-L-精氨酸对趾间发癣菌(T.interdigitale)和深红色发癣菌(T.rubrum)的抑制
根据材料与方法部分，通过建立真菌生长实验来测试多聚-L-精氨酸对发癣菌属(Trichophtyon spp.)生长的抑制。在单独的培养基或含有3种不同浓度的多聚-L-精氨酸的培养基中培养深红色发癣菌(Trichophtyon rubrum)和趾间发癣菌(Trichophtyon interdigitale)。在任何样品中均不存在乙酸。使用对照培养基以说明培养基的背景吸光度。如前所述在30℃下孵育96小时后通过OD来确定真菌的生长(图14)。观察到浓度低至0.55mg/ml的多聚精氨酸对抗两种真菌均具有活性(图14)。
降低浓度(100μg/ml)的多聚精氨酸对深红色发癣菌(T.rubrum)和趾间发癣菌(T.interdigitale)的影响
根据材料与方法部分，通过建立真菌生长实验来测试多聚精氨酸对发癣菌属(Trichophtyon spp.)生长的抑制。在任何样品中均不存在乙酸的条件下，未经处理的深红色发癣菌(Trichophtyon rubrum)和趾间发癣菌(Trichophtyon interdigitale)培养物生长，或使用单一浓度的多聚精氨酸(100μg/ml)处理深红色发癣菌(Trichophtyon rubrum)和趾间发癣菌(Trichophtyon interdigitale)培养物。使用对照培养基以说明培养基的背景吸光度。如前所述在30℃下孵育96小时后通过OD来确定真菌的生长(图15)。浓度降低导致活性丢失，这说明了多聚精氨酸对发癣菌属(Trichophtyon spp.)的剂量影响。
肽三聚体(3个氨基酸)对深红色发癣菌(T.rubrum)生长的影响
测试了多聚-L-赖氨酸、多聚-L-精氨酸、多聚-L-组胺酸和多聚-L-色氨酸的肽三聚体对深红色发癣菌(T.rubrum)生长的活性。根据材料和方法建立生长抑制，并且或者不对深红色发癣菌(T.rubrum)进行处理或者将其暴露于2mg/ml的每一三聚体。在30℃下供养培养物96小时。通过OD测量真菌的生长，并且以未处理培养物中的生长的百分比来表示结果(图16)。多聚-L-精氨酸是抗深红色发癣菌(T.rubrum)的最具活性的肽，并且只需要含有3个氨基酸的多肽即可引起深红色发癣菌(T.rubrum)生长的显著降低。
肽4(1.2mg/ml)和NaCl对趾间发癣菌(T.interdigitale)生长的影响
研究了不同盐浓度对肽4的抗趾间发癣菌(T.interdigitale)抗真菌活性的影响。在不存在乙酸的条件下，根据材料与方法，建立趾间发癣菌(T.interdigitale)的生长抑制分析。不对培养物进行处理或将其暴露于肽4和浓度为100mM至500mM的NaCl中。在30℃下供养趾间发癣菌(T.interdigitale)96小时，并如前所述通过OD来评价生长(图17)。接近或超过生理条件的盐浓度并不影响肽4的抗真菌活性(图17)。关于低盐浓度抑制内源性β-防御素的抗微生物活性已有充分报道。
在高盐浓度下，肽4对白色念珠菌(Candida albicans)的影响
使用不同浓度的肽4在37℃下孵育2小时后，如方法与材料所述，评价白色念珠菌(C.albicans)的存活。向生长培养基中引入两种浓度的NaCl以确定生理条件和极高盐条件(已知抑制内源性β-防御素肽的活性)的影响。在极高盐条件下观察到肽4的显著杀灭活性(图18)。当增加肽4的浓度时，可以观察到更高盐浓度的影响降低了(图18)。因此，盐并没有抑制肽4的抗真菌活性。
多聚-L-赖氨酸、多聚-D-赖氨酸和多聚-D-精氨酸抗白色念珠菌(Candida albicans)的活性
评价了多聚-L-精氨酸对赖氨酸和多聚-L-赖氨酸对多聚-D-赖氨酸的抗真菌活性以便确定这些肽变体中是否有任何一种显示出抗白色念珠菌(Candida albicans)的增强的活性。如材料与方法部分所述，在存在100μg/ml、1mg/ml和10mg/ml的多聚-D-赖氨酸，多聚-L-赖氨酸和多聚-L-精氨酸下，在37℃下将念珠菌属(Candida spp.)孵育2小时。如前所述评价存活并且显示出多聚-L-精氨酸的抗真菌活性高于多聚-L-赖氨酸(图19)。还表明多聚-D-赖氨酸具有与多聚-L-赖氨酸非常相似的抗真菌活性。

Claims (38)

1.具有药物用途的包含通式I所示的氨基酸的肽、其变体或其药物可接受的盐：
((X)l(Y)m)n      (I)
其中l和m是0至10的整数；n是1至10的整数；X和Y是选自精氨酸和赖氨酸的氨基酸，所述X和Y可以是相同的或不同的。
2.如权利要求1所述的肽或肽变体，其中X和/或Y是D-氨基酸或L-氨基酸。
3.如权利要求1所述的肽或肽变体，其中X和Y是交替氨基酸。
4.如权利要求1所述的肽或肽变体，其中X和Y是相同的。
5.如权利要求1所述的肽或肽变体，其中X是赖氨酸并且Y是精氨酸。
6.如权利要求1所述的肽或肽变体，其中所述肽包含3至约200个氨基酸。
7.如权利要求6所述的肽或肽变体，其中所述肽包含3至100个氨基酸。
8.如权利要求1所述的肽或肽变体，其中所述肽包含3至50个氨基酸。
9.如权利要求8所述的肽或肽变体，其中所述肽包含3至15个氨基酸。
10.如权利要求9所述的肽或肽变体，其中所述肽包含3至7个氨基酸。
11.如前述任一权利要求所述的肽或肽变体，其中所述肽是非环状的。
12.组合物，其包含药物有效剂量的至少一种前述任一权利要求所述的肽以及药物可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
13.如权利要求12所述的组合物，其中所述组合物包含至少两种前述任一权利要求所述的肽，其中所述肽是不同的。
14.如权利要求12或13所述的组合物，其中所述赋形剂或稀释剂选自酸、二甲砜、N-(-2-巯丙酰基)甘氨酸、2-n-壬基-1，3-二氧戊环和乙醇。
15.如权利要求14所述的组合物，其中所述赋形剂或稀释剂是选自乙酸、柠檬酸、硼酸、乳酸、丙酸、磷酸、苯甲酸、丁酸、丙二酸、苹果酸、草酸、琥珀酸或酒石酸的酸。
16.如权利要求15所述的组合物，其中所述酸是乙酸。
17.如权利要求16所述的组合物，其中所述乙酸以低于1％、0.5％、0.25％、0.1％、0.05％或0.01％乙酸的浓度存在于所述组合物中。
18.权利要求1至11中任一权利要求所述的肽或肽变体在制造治疗微生物感染的药物中的用途。
19.如权利要求18所述的用途，其中所述微生物感染是由细菌、寄生虫、原生动物、病毒或真菌病原体引起的。
20.如权利要求19所述的用途，其中所述细菌病原体来自于选自下列的细菌：葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)，例如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)；肠球菌属(Enterococcus spp.)，例如粪肠球菌(Enterococcus faecalis)；化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)；利斯特菌属(Listeria spp.)；假单胞菌属(Pseudomonas spp.)；分枝杆菌属(Mycobacterium spp.)，例如结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)；肠杆菌属(Enterobacter spp.)；弯曲杆菌属(Campylobacter spp.)；沙门菌属(Salmonella spp.)；链球菌属(Streptococcus spp.)，例如链球菌A群或B群(Streptococcus Group Aor B)、肺炎链球菌(Streptoccocus pneumoniae)；螺杆菌属(Helicobacterspp.)，例如幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)；奈瑟菌属(Neisseria spp.)，例如淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhea)、脑膜炎萘瑟菌(Neisseriameningitidis)；伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)；志贺杆菌属(Shigellaspp.)，例如弗氏志贺菌(Shigella，flexneri)；大肠埃希杆菌(Escherichiacoli)；嗜血杆菌属(Haemophilus spp.)，例如流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)；衣原体属(Chlamydia spp.)，例如沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)；土拉弗朗西丝菌(Francisella tularensis)；芽胞杆菌属(Bacillus spp.)，炭疽杆菌(Bacillus anthracis)；梭状芽孢杆菌属(Clostridia spp.)，例如肉毒梭菌(Clostridium botulinum)；耶尔森菌属(Yersinia spp.)，例如鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)；密螺旋体属(Treponema spp.)；伯尔霍尔德菌属(Burkholderia spp.)，例如鼻疽伯尔霍尔德菌(Burkholderia mallei)和假鼻疽伯尔霍尔德菌(Bpseudomallei)。
21.如权利要求19所述的用途，其中所述病毒病原体来自于选自下列病毒的病毒：人免疫缺陷症病毒(HIV 1&2)；人T细胞白血病病毒(HTLV 1&2)；埃博拉病毒；人乳头状瘤病毒(例如HPV-2、HPV-5、HPV-8HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-52、HPV-54和HPV-56)；乳多空病毒；鼻病毒；脊髓灰质炎病毒；疱疹病毒；腺病毒；Epstein Barr病毒；流感病毒；乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒；类天花病毒；轮状病毒或SARS冠状病毒。
22.如权利要求19所述的用途，其中所述寄生虫病原体来自选自下列寄生虫的寄生虫病原体：锥虫属(Trypanosoma spp.)(克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、布氏锥虫(Trypansosoma brucei))、利什曼原虫属(Leishmania spp.)、贾第虫属(Giardia spp.)、毛滴虫属(Trichomonasspp.)、内阿米巴属(Entamoeba spp.)、耐格里原虫属(Naegleria spp.)、棘阿米巴属(Acanthamoeba spp.)、血吸虫属(Schistosoma spp.)、疟原虫属(Plasmodium spp.)、隐孢子虫属(Crytosporidium spp.)、等孢子球虫属(Isospora spp.)、小袋虫属(Balantidium spp.)、罗阿丝虫(Loa Loa)、人蛔虫(Ascaris lumbricoides)、犬恶丝虫(Dirofflaria immitis)、弓形体属(Toxoplasma ssp.)，例如鼠弓形体(Toxoplasma gondii)。
23.如权利要求19所述的用途，其中所述真菌病原体来自选自下列属的真菌病原体：念珠菌属(Candida spp.)(例如白色念珠菌(C.albicans))、表皮癣菌属(Epidermophyton spp.)、外瓶柄霉菌属(Exophiala spp.)、小孢霉属(Microsporum spp.)、发癣菌属(Trichophytonspp.)(例如深红色发癣菌(T.rubrum)和趾间发癣菌(T.interdigitale))、癣属(Tinea spp.)、曲霉菌属(Aspergillus spp.)、芽生菌属(Blastomycesspp.)、芽生裂殖菌属(Blastoschizomyces spp.)、球孢子菌属(Coccidioidesspp.)、隐球菌属(Cryptococcus spp.)、组织胞浆菌属(Histoplasma spp.)、副球孢子菌属(Paracoccidiomyces spp.)、孢子丝菌属(Sporotrix spp.)、犁头菌属(Absidia spp.)、支孢霉属(Cladophialophora spp.)、产色芽生菌属(Fonsecaea spp.)、瓶霉菌属(Phialophora spp.)、Lacazia spp.、爪甲白癣菌属(Arthrographis spp.)、支顶孢菌属(Acremonium spp.)、马都拉放线菌属(Actinomadura spp.)、鳞质霉属(Apophysomyces spp.)、金孢子菌属(Emmonsia spp.)、团担子菌属(Basidiobolus spp.)、白僵菌属(Beauveria spp.)、金孢子菌属(Chrysosporium spp.)、耳霉属(Conidiobolus spp.)、小克银汉霉属(Cunninghamella spp.)、镰孢霉属(Fusarium spp.)、地菌属(Geotrichum spp.)、粘束孢属(Graphium spp.)、小球腔菌属(Leptosphaeria spp.)、马拉塞霉菌属(Malassezia spp.)、毛霉菌属(Mucor spp.)、新龟甲属(Neotestudina spp.)、诺卡尔菌属(Nocardiaspp.)、诺卡尔土壤菌属(Nocardiopsis spp.)、拟青霉属(Paecilomycesspp.)、茎点霉属(Phoma spp.)、毛孢子菌属(Piedraia spp.)、肺孢子虫属(Pneumocystis spp.)、伪霉样真菌属(Pseudallescheria spp.)、须壳孢属(Pyrenochaeta spp.)、根毛霉属(Rhizomucor spp.)、酒曲菌属(Rhizopusspp.)、红酵母属(Rhodotorula spp.)、酵母菌属(Saccharomyces spp.)、足放线病菌属(Scedosporium spp.)、帚霉属(Scopulariopsis spp.)、掷孢酵母属(Sporobolomyces spp.)、并头状菌属(Syncephalastrum spp.)、木霉属(Trichoderma spp.)、毛孢子菌属(Trichosporon spp.)、龈枝孢属(Ulocladium spp.)、黑粉菌属(Ustilago spp.)、轮枝孢菌属(Verticilliumspp.)、万吉拉菌属(Wangiella spp.)。
24.如权利要求23所述的用途，其中所述病原体是发癣菌属(Trichophyton spp.)。
25.如权利要求24所述的用途，其中所述病原体是趾间发癣菌(Trichophyton interdigitale)。
26.如权利要求24所述的用途，其中所述病原体是深红色发癣菌(Trichophyton rubrum)。
27.如权利要求19所述的用途，其中所述真菌感染是甲癣。
28.权利要求1至11中任一权利要求所述的肽或肽变体在制造治疗粘膜感染的药物中的用途。
29.如权利要求28所述的用途，其中所述感染是囊性纤维化。
30.基质，权利要求1至11中任一权利要求所述的肽或肽变体或权利要求12或13所述的组合物附着于所述基质或应用于所述基质。
31.如权利要求30所述的基质，其中所述基质包括织物材料或者胶原材料。
32.权利要求1至11中任一权利要求所述的肽或肽变体在制造治疗创伤的药物中的用途。
33.如权利要求32所述的用途，其中所述创伤是割伤或烧伤。
34.权利要求1至11中任一权利要求所述的肽或肽变体在制造治疗溃疡的药物中的用途。
35.治疗或预防个体微生物感染的方法，所述方法包括对所述个体给药治疗有效剂量的权利要求1至11中任一权利要求所述的肽或肽变体或权利要求12或13所述的组合物。
36.如权利要求31所述的方法，其中所述微生物感染是真菌感染。
37.如权利要求35或36所述的方法，其中对所述个体的皮肤或甲局部给药所述肽、肽变体或组合物。
38.治疗个体创伤的方法，所述方法包括对所述创伤应用治疗有效剂量的权利要求1至11中任一权利要求所述的肽或肽变体或权利要求12或13所述的组合物或权利要求30或31所述的基质。
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