JP3022615B2 - ε−ポリリジンの製造方法 - Google Patents
ε−ポリリジンの製造方法Info
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は重合度２〜１９のε−ポ
リリジンを製造する方法に関する。
リリジンを製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】重合度２０〜２５のε−ポリリジンが、
グラム陽性菌、グラム陰性菌、真菌、乳酸菌、酵母菌等
の種々の菌類に対する抗菌作用、バクテリオファージに
対する抗ファージ作用を有していることが知られてお
り、そのような特性に基づいて食品保存料等としての使
用が提案されている。また、本発明者らの研究の結果、
上記の重合度を有するε−ポリリジンが血清や肝臓のコ
レステロールレベルの上昇を抑制する作用および低下さ
せる作用があることが発見された。
グラム陽性菌、グラム陰性菌、真菌、乳酸菌、酵母菌等
の種々の菌類に対する抗菌作用、バクテリオファージに
対する抗ファージ作用を有していることが知られてお
り、そのような特性に基づいて食品保存料等としての使
用が提案されている。また、本発明者らの研究の結果、
上記の重合度を有するε−ポリリジンが血清や肝臓のコ
レステロールレベルの上昇を抑制する作用および低下さ
せる作用があることが発見された。
【０００３】ところで、上記の重合度を有するε−ポリ
リジンは持続性の強いえぐ味（あくの強い不快な味）を
有している。そのため、それをそのまま直接摂取した場
合は勿論のこと、飲食物中に少量添加した場合にもえぐ
味を感じ、その摂取を困難または不快なものにし、また
飲食物の食感や風味を不良なものにしている。特に、上
記の重合度を有するε−ポリリジンをコレステロール抑
制剤として飲食物中に添加する場合は、１％以上の添加
が効果の発現の点から望ましいが、１％以上の添加は飲
食物の味をえぐいものにし、飲食物本来の食感や風味を
大幅に低下させる傾向がある。
リジンは持続性の強いえぐ味（あくの強い不快な味）を
有している。そのため、それをそのまま直接摂取した場
合は勿論のこと、飲食物中に少量添加した場合にもえぐ
味を感じ、その摂取を困難または不快なものにし、また
飲食物の食感や風味を不良なものにしている。特に、上
記の重合度を有するε−ポリリジンをコレステロール抑
制剤として飲食物中に添加する場合は、１％以上の添加
が効果の発現の点から望ましいが、１％以上の添加は飲
食物の味をえぐいものにし、飲食物本来の食感や風味を
大幅に低下させる傾向がある。
【０００４】
【発明の内容】 本発明者らは、抗菌作用、抗ファージ
作用、コレステロール抑制作用等の上記した有用な特性
を保ちながら、ε−ポリリジンの呈味をえぐ味のないも
のにすることを目的として研究を続けてきた。その結
果、重合度が１９以下のε−ポリリジンはえぐ味がかな
り少なく、しかも重合度２０〜２５のε−ポリリジンと
同様に抗菌作用、抗ファージ作用、コレステロール抑制
作用を有すること、そしてそのような重合度１９以下の
ε−ポリリジンは上記した重合度２０〜２５のε−ポリ
リジンまたはそれより大きな重合度を有するε−ポリリ
ジンを中性プロテアーゼ、特にアスペルギルス属菌が産
生する中性プロテアーゼを使用して加水分解することに
よって得ることができることを見出した。
作用、コレステロール抑制作用等の上記した有用な特性
を保ちながら、ε−ポリリジンの呈味をえぐ味のないも
のにすることを目的として研究を続けてきた。その結
果、重合度が１９以下のε−ポリリジンはえぐ味がかな
り少なく、しかも重合度２０〜２５のε−ポリリジンと
同様に抗菌作用、抗ファージ作用、コレステロール抑制
作用を有すること、そしてそのような重合度１９以下の
ε−ポリリジンは上記した重合度２０〜２５のε−ポリ
リジンまたはそれより大きな重合度を有するε−ポリリ
ジンを中性プロテアーゼ、特にアスペルギルス属菌が産
生する中性プロテアーゼを使用して加水分解することに
よって得ることができることを見出した。
【０００５】 すなわち、本発明は、重合度が２０以上
のε−ポリリジンを、アスペルギルス属菌が産生する中
性プロテアーゼで加水分解することにより重合度が２〜
１９のε−ポリリジンを製造する方法である。ε−ポリ
リジンは、下記の化学式１で表される。
のε−ポリリジンを、アスペルギルス属菌が産生する中
性プロテアーゼで加水分解することにより重合度が２〜
１９のε−ポリリジンを製造する方法である。ε−ポリ
リジンは、下記の化学式１で表される。
【０００６】
【化１】
【０００７】本発明では、重合度が２０以上のε−ポリ
リジンのいずれもが原料として使用できる。その場合
に、ε−ポリリジン原料は、その大半が重合度２０以上
のε−ポリリジンからなるものであれば一つの重合度の
みからなる単一のε−ポリリジンであっても、種々の重
合度のε−ポリリジンの混合物であってもよく、更に場
合によっては重合度が１９以下のε−ポリリジンを少量
含有していてもよい。２０以上の重合度を有するε−ポ
リリジンとしては、チッソ株式会社等により市販されて
いる重合度が２０〜２５のε−ポリリジンが、目的とす
る重合度２〜１９のε−ポリリジンを高効率で製造で
き、且つ入手が容易であり望ましい。
リジンのいずれもが原料として使用できる。その場合
に、ε−ポリリジン原料は、その大半が重合度２０以上
のε−ポリリジンからなるものであれば一つの重合度の
みからなる単一のε−ポリリジンであっても、種々の重
合度のε−ポリリジンの混合物であってもよく、更に場
合によっては重合度が１９以下のε−ポリリジンを少量
含有していてもよい。２０以上の重合度を有するε−ポ
リリジンとしては、チッソ株式会社等により市販されて
いる重合度が２０〜２５のε−ポリリジンが、目的とす
る重合度２〜１９のε−ポリリジンを高効率で製造で
き、且つ入手が容易であり望ましい。
【０００８】中性プロテアーゼによる加水分解処理は、
原料である重合度２０以上のε−ポリリジンを、水溶液
または水性分散液の形態にして行うのがよい。そして、
本発明者らの研究の結果、上記の中性プロテアーゼとし
ては、多数の中性プロテアーゼのうちで、アスペルギル
ス（Aspergillus）属菌の産生する中性プロテアーゼ
が、目的とする重合度２〜１９のε−ポリリジンの生成
に有利であること、そのうちでも特にアスペルギルスソ
ーヤ（Aspergillus sojae）菌、アスペルギルスオリゼ
ー（Aspergillus oryzae）菌、およびアスペルギルスメ
レウス（Aspergillus melleus）菌の産生する中性プロ
テアーゼが適することがわかった。
原料である重合度２０以上のε−ポリリジンを、水溶液
または水性分散液の形態にして行うのがよい。そして、
本発明者らの研究の結果、上記の中性プロテアーゼとし
ては、多数の中性プロテアーゼのうちで、アスペルギル
ス（Aspergillus）属菌の産生する中性プロテアーゼ
が、目的とする重合度２〜１９のε−ポリリジンの生成
に有利であること、そのうちでも特にアスペルギルスソ
ーヤ（Aspergillus sojae）菌、アスペルギルスオリゼ
ー（Aspergillus oryzae）菌、およびアスペルギルスメ
レウス（Aspergillus melleus）菌の産生する中性プロ
テアーゼが適することがわかった。
【０００９】 したがって、本発明は、上記したよう
に、アスペルギルス（Aspergillus）属菌の産生する中
性プロテアーゼ（以下単に「中性プロテアーゼ」という
ことがある）を使用して、重合度が２０以上のε−ポリ
リジンから重合度が２〜１９のε−ポリリジンを製造す
る方法である。ここで、「アスペルギルス（Aspergillu
s）属菌の産生する中性プロテアーゼ」とは、アスペル
ギルス（Aspergillus）属菌により産生され且つｐＨ６
〜８の中性領域で反応性を示す、すなわちペプチド結合
を加水分解するプロテアーゼをいう。
に、アスペルギルス（Aspergillus）属菌の産生する中
性プロテアーゼ（以下単に「中性プロテアーゼ」という
ことがある）を使用して、重合度が２０以上のε−ポリ
リジンから重合度が２〜１９のε−ポリリジンを製造す
る方法である。ここで、「アスペルギルス（Aspergillu
s）属菌の産生する中性プロテアーゼ」とは、アスペル
ギルス（Aspergillus）属菌により産生され且つｐＨ６
〜８の中性領域で反応性を示す、すなわちペプチド結合
を加水分解するプロテアーゼをいう。
【００１０】そして、上記したアスペルギルス（Asperg
illus）属菌の産生する中性プロテアーゼのうち、アス
ペルギルスソーヤ（Aspergillus sojae）菌の産生する
中性プロテアーゼは、ＩＰ酵素［盛進製薬（株）］、Ｐ
ＲＯＴＥＡＳＥ７０２６（ＳＩＧＭＡ社）として、アス
ペルギルスオリゼー（Aspergillus oryzae）菌の産生す
る中性プロテアーゼは、デナチームＡＰ［長瀬産業
（株）］、プロチンＦＮ［大和化成（株）］、プロテア
ーゼＡおよびプロテアーゼＭ［天野製薬（株）］、スミ
チームＬＰ［新日本化学工業（株）］、オリエンターゼ
ＯＮ［上田化学工業（株）］、ＰＲＯＴＥＡＳＥ４０３
２（ＳＩＧＭＡ社）等として、またアスペルギルスメレ
ウス（Aspergillus melleus）菌は、プロテアーゼＰ
［天野製薬（株）］等として市販されており、容易に入
手可能である。それらのプロテアーゼのうちでも、デナ
チームＡＰが分解効率が良いので、特に好ましい。
illus）属菌の産生する中性プロテアーゼのうち、アス
ペルギルスソーヤ（Aspergillus sojae）菌の産生する
中性プロテアーゼは、ＩＰ酵素［盛進製薬（株）］、Ｐ
ＲＯＴＥＡＳＥ７０２６（ＳＩＧＭＡ社）として、アス
ペルギルスオリゼー（Aspergillus oryzae）菌の産生す
る中性プロテアーゼは、デナチームＡＰ［長瀬産業
（株）］、プロチンＦＮ［大和化成（株）］、プロテア
ーゼＡおよびプロテアーゼＭ［天野製薬（株）］、スミ
チームＬＰ［新日本化学工業（株）］、オリエンターゼ
ＯＮ［上田化学工業（株）］、ＰＲＯＴＥＡＳＥ４０３
２（ＳＩＧＭＡ社）等として、またアスペルギルスメレ
ウス（Aspergillus melleus）菌は、プロテアーゼＰ
［天野製薬（株）］等として市販されており、容易に入
手可能である。それらのプロテアーゼのうちでも、デナ
チームＡＰが分解効率が良いので、特に好ましい。
【００１１】中性プロテアーゼは、遊離の状態で使用し
ても、担体に固定化して使用してもよい。また中性プロ
テアーゼによる加水分解処理は、連続法で行ってもバッ
チ法で行ってもよい。中性プロテアーゼを遊離の状態で
使用するかまたは固定化して使用するか、加水分解処理
を連続法で行うかまたはバッチ法で行うか等に応じて、
中性プロテアーゼの種類、その使用量、処理時の温度、
圧力、ｐＨ、処理時間等の諸条件を適宜選んで処理を行
うとよい。一般に、中性プロテアーゼの使用量が多いほ
ど、目的とする重合度のε−ポリリジンを短時間で得る
ことができる。アスペルギルス（Aspergillus）属菌の産
生する中性プロテアーゼを使用する場合は、通常、液の
ｐＨを約６〜８にして、約３５〜４５℃の温度で加水分
解を行うのがよい。
ても、担体に固定化して使用してもよい。また中性プロ
テアーゼによる加水分解処理は、連続法で行ってもバッ
チ法で行ってもよい。中性プロテアーゼを遊離の状態で
使用するかまたは固定化して使用するか、加水分解処理
を連続法で行うかまたはバッチ法で行うか等に応じて、
中性プロテアーゼの種類、その使用量、処理時の温度、
圧力、ｐＨ、処理時間等の諸条件を適宜選んで処理を行
うとよい。一般に、中性プロテアーゼの使用量が多いほ
ど、目的とする重合度のε−ポリリジンを短時間で得る
ことができる。アスペルギルス（Aspergillus）属菌の産
生する中性プロテアーゼを使用する場合は、通常、液の
ｐＨを約６〜８にして、約３５〜４５℃の温度で加水分
解を行うのがよい。
【００１２】２０以上の重合度を有するε−ポリリジン
は、中性プロテアーゼにより加水分解されて、次第に重
合度が１９以下の低重合度ε−ポリリジンになってゆ
く。その場合に、加水分解が過度に行われると、最終的
にはアミノ酸であるリジンになり、目的とする重合度が
２〜１９のε−ポリリジンが得られない。したがって、
加水分解処理に際しては、加水分解の途中で経時的に反
応液を採取して、生成物中の重合度が２〜１９のε−ポ
リリジンの割合を逆相クロマトグラフィーやその他適当
な方法によって分析して、加水分解反応の継続または停
止を決定するのが望ましい。
は、中性プロテアーゼにより加水分解されて、次第に重
合度が１９以下の低重合度ε−ポリリジンになってゆ
く。その場合に、加水分解が過度に行われると、最終的
にはアミノ酸であるリジンになり、目的とする重合度が
２〜１９のε−ポリリジンが得られない。したがって、
加水分解処理に際しては、加水分解の途中で経時的に反
応液を採取して、生成物中の重合度が２〜１９のε−ポ
リリジンの割合を逆相クロマトグラフィーやその他適当
な方法によって分析して、加水分解反応の継続または停
止を決定するのが望ましい。
【００１３】通常は、原料である重合度２０以上のε−
ポリリジンの約８０重量％以上、好ましくは約９０重量
％以上が加水分解された時点で、加水分解反応を停止さ
せるのがよい。加水分解反応は加熱やその他の適当な手
段で中性プロテアーゼを失活させることにより停止する
ことができる。加熱により中性プロテアーゼを失活させ
る場合は、一般に約８０〜１００℃に加熱するとよい。
ポリリジンの約８０重量％以上、好ましくは約９０重量
％以上が加水分解された時点で、加水分解反応を停止さ
せるのがよい。加水分解反応は加熱やその他の適当な手
段で中性プロテアーゼを失活させることにより停止する
ことができる。加熱により中性プロテアーゼを失活させ
る場合は、一般に約８０〜１００℃に加熱するとよい。
【００１４】例えば、重合度２０〜２５のε−ポリリジ
ンを濃度５０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ約６〜８の水溶液とし、
これに約１２５units／ｍｌのアスペルギルス（Aspergi
llus）属菌の産生する中性プロテアーゼを加えて、約３
５〜４５℃の温度で加水分解処理を行う場合は、約２４
〜４８時間後にプロテアーゼを失活させると、原料とし
て用いたε−ポリリジンの約９５〜９９重量％が加水分
解されて、重合度２〜１９のε−ポリリジンを約９４〜
９８重量％含有する生成物が得られる。
ンを濃度５０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ約６〜８の水溶液とし、
これに約１２５units／ｍｌのアスペルギルス（Aspergi
llus）属菌の産生する中性プロテアーゼを加えて、約３
５〜４５℃の温度で加水分解処理を行う場合は、約２４
〜４８時間後にプロテアーゼを失活させると、原料とし
て用いたε−ポリリジンの約９５〜９９重量％が加水分
解されて、重合度２〜１９のε−ポリリジンを約９４〜
９８重量％含有する生成物が得られる。
【００１５】上記液中に含まれる重合度２〜１９のε−
ポリリジン以外の成分としては、少量のリジンや重合度
２０以上のε−ポリリジン等である。上記液を、例えば
噴霧乾燥、凍結乾燥、その他適当な乾燥手段によって乾
燥して、目的とする重合度２〜１９のε−ポリリジンを
多量に含む粉体としてもよい。以上のようにして得られ
る重合度が２〜１９のε−ポリリジンは、えぐ味が生じ
ない程度の少量（通常約１０％以下）の重合度２０以上
のε−ポリリジンを含んでいてもよい。
ポリリジン以外の成分としては、少量のリジンや重合度
２０以上のε−ポリリジン等である。上記液を、例えば
噴霧乾燥、凍結乾燥、その他適当な乾燥手段によって乾
燥して、目的とする重合度２〜１９のε−ポリリジンを
多量に含む粉体としてもよい。以上のようにして得られ
る重合度が２〜１９のε−ポリリジンは、えぐ味が生じ
ない程度の少量（通常約１０％以下）の重合度２０以上
のε−ポリリジンを含んでいてもよい。
【００１６】より純度の高い生成物を得たい場合は、上
記で得た重合度２〜１９のε−ポリリジンを含有する液
を、イオン交換、限外濾過、ゲル濾過等の分離手段の１
つまたは複数を組合せて処理することにより、目的とす
るε−ポリリジンを重合度別に単独で、または重合度２
〜１９のうちの任意の重合度のものの混合物の形態で分
離回収することができる。
記で得た重合度２〜１９のε−ポリリジンを含有する液
を、イオン交換、限外濾過、ゲル濾過等の分離手段の１
つまたは複数を組合せて処理することにより、目的とす
るε−ポリリジンを重合度別に単独で、または重合度２
〜１９のうちの任意の重合度のものの混合物の形態で分
離回収することができる。
【００１７】上記で得られた重合度２〜１９のε−ポリ
リジンは、重合度２０以上のε−ポリリジンと同様にコ
レステロールレベルの上昇抑制作用や低下作用、抗菌作
用、抗ファージ作用を有している。しかも、重合度２０
以上のε−ポリリジンとは異なり、えぐ味がないので摂
取しやすく、それ自体でコレステロール抑制剤、抗菌
剤、抗ファージ剤等として有効に使用することができ
る。重合度２〜１９のε−ポリリジンをそれ自体で投与
する場合は、水溶液；澱粉、タルク、炭酸カルシウム等
の担体に担持させた固型剤（錠剤、丸剤、顆粒剤、カプ
セル剤等）等の任意の剤型を採ることができる。また、
種々の飲食物（例えば、パン、クッキー、ビスケット、
めん類、チューインガム、飲料等）に添加して使用する
ことができ、その場合にえぐ味がないので、飲食物の食
感や風味を損なうことがない。
リジンは、重合度２０以上のε−ポリリジンと同様にコ
レステロールレベルの上昇抑制作用や低下作用、抗菌作
用、抗ファージ作用を有している。しかも、重合度２０
以上のε−ポリリジンとは異なり、えぐ味がないので摂
取しやすく、それ自体でコレステロール抑制剤、抗菌
剤、抗ファージ剤等として有効に使用することができ
る。重合度２〜１９のε−ポリリジンをそれ自体で投与
する場合は、水溶液；澱粉、タルク、炭酸カルシウム等
の担体に担持させた固型剤（錠剤、丸剤、顆粒剤、カプ
セル剤等）等の任意の剤型を採ることができる。また、
種々の飲食物（例えば、パン、クッキー、ビスケット、
めん類、チューインガム、飲料等）に添加して使用する
ことができ、その場合にえぐ味がないので、飲食物の食
感や風味を損なうことがない。
【００１８】
【実施例】《実施例 １》 チッソ（株）社製のε−ポ
リリジン（重合度２０〜２５のε−ポリリジンを５０重
量％含有）２００ｇを水２０００ｍｌに溶解した後、６
Ｎ塩酸を使用して水溶液のｐＨを７．０に調整した。
このε−ポリリジン水溶液の一部を採取して、逆相クロ
マトグラフィー［使用ラム：Ｗａｔｅｒｓ μ Ｂｏｎ
ｄａｐａｋ Ｃ１８：日本ウオーターズ社製：内径３．
９ｍｍ長さ３０ｃｍ］に供した。次いで、トリフルオロ
酢酸０．１％を含有する水溶液（Ａ液）、トリフルオロ
酢酸０．１％を含有するアセトニトリル８０％水溶液
（Ｂ液）を使用して、Ａ液とＢ液の混合液中において、
６０分間でＢ液の濃度が０％から２０％まで直線的に増
加する濃度勾配にて１．０ｍｌ／分の流速で溶出させ
た。この流出液を波長２２０ｎｍのＵＶで検出したとこ
ろ、図１のクロマトグラムを示した。
リリジン（重合度２０〜２５のε−ポリリジンを５０重
量％含有）２００ｇを水２０００ｍｌに溶解した後、６
Ｎ塩酸を使用して水溶液のｐＨを７．０に調整した。
このε−ポリリジン水溶液の一部を採取して、逆相クロ
マトグラフィー［使用ラム：Ｗａｔｅｒｓ μ Ｂｏｎ
ｄａｐａｋ Ｃ１８：日本ウオーターズ社製：内径３．
９ｍｍ長さ３０ｃｍ］に供した。次いで、トリフルオロ
酢酸０．１％を含有する水溶液（Ａ液）、トリフルオロ
酢酸０．１％を含有するアセトニトリル８０％水溶液
（Ｂ液）を使用して、Ａ液とＢ液の混合液中において、
６０分間でＢ液の濃度が０％から２０％まで直線的に増
加する濃度勾配にて１．０ｍｌ／分の流速で溶出させ
た。この流出液を波長２２０ｎｍのＵＶで検出したとこ
ろ、図１のクロマトグラムを示した。
【００１９】重合度２０〜２５のε−ポリリジンを含有
するｐＨ７.０の上記の水溶液に、デナチームＡＰ［長
瀬産業（株）社製：アスペルギルスオリゼー（Aspergil
lusoryzae）産生の中性プロテアーゼ］５ｇを添加し
て、４０℃で２４時間反応させ、その時点で９０℃に３
０分間保ってプロテアーゼを失活させた。その結果、原
料である重合度２０〜２５のε−ポリリジンの約９５重
量％が加水分解されていた。こうして得られた加水分解
液を噴霧乾燥して粉末状の生成物１９０ｇを得た。加水
分解処理前のε−ポリリジン水溶液に対して行ったのと
全く同様にして、この加水分解液を逆相クロマトグラフ
ィーに供してクロマトグラムをとったところ、図２に示
す結果を得た。この実施例１で得られた上記粉末状生成
物中には、重合度２〜１９のε−ポリリジンが約４７重
量％含まれていた。
するｐＨ７.０の上記の水溶液に、デナチームＡＰ［長
瀬産業（株）社製：アスペルギルスオリゼー（Aspergil
lusoryzae）産生の中性プロテアーゼ］５ｇを添加し
て、４０℃で２４時間反応させ、その時点で９０℃に３
０分間保ってプロテアーゼを失活させた。その結果、原
料である重合度２０〜２５のε−ポリリジンの約９５重
量％が加水分解されていた。こうして得られた加水分解
液を噴霧乾燥して粉末状の生成物１９０ｇを得た。加水
分解処理前のε−ポリリジン水溶液に対して行ったのと
全く同様にして、この加水分解液を逆相クロマトグラフ
ィーに供してクロマトグラムをとったところ、図２に示
す結果を得た。この実施例１で得られた上記粉末状生成
物中には、重合度２〜１９のε−ポリリジンが約４７重
量％含まれていた。
【００２０】《実施例 ２》デナチームＡＰによる加水
分解処理を４０℃で４８時間行った以外は実施例１と同
様にして、加水分解処理を行い、その結果得られた加水
分解液を噴霧乾燥したところ、粉末状の生成物１９２ｇ
を得た。この加水分解液を上記実施例１と同様にして逆
相クロマトグラフィーに供してクロマトグラムをとった
ところ、図３に示す結果を得た。この実施例２で得られ
た上記粉末状生成物中には、重合度２〜１９のε−ポリ
リジンが約４９重量％含まれていた。
分解処理を４０℃で４８時間行った以外は実施例１と同
様にして、加水分解処理を行い、その結果得られた加水
分解液を噴霧乾燥したところ、粉末状の生成物１９２ｇ
を得た。この加水分解液を上記実施例１と同様にして逆
相クロマトグラフィーに供してクロマトグラムをとった
ところ、図３に示す結果を得た。この実施例２で得られ
た上記粉末状生成物中には、重合度２〜１９のε−ポリ
リジンが約４９重量％含まれていた。
【００２１】官能（食味）試験 実施例１および実施例２で得られた粉末状生成物、並び
に加水分解処理を施す前の上記チッソ(株)社製のε−ポ
リリジン（重合度２０〜２５のε−ポリリジンを５０％
含有）の各々を使用して、下記の表１に示す配合のグレ
ープフルーツジュースＡ〜Ｃをつくった。各々のグレー
プフルーツジュースを１３名のパネラーにより飲食して
もらって、下記の評価基準にしたがってその食味の良否
を試験した。その結果を、表１に示す。
に加水分解処理を施す前の上記チッソ(株)社製のε−ポ
リリジン（重合度２０〜２５のε−ポリリジンを５０％
含有）の各々を使用して、下記の表１に示す配合のグレ
ープフルーツジュースＡ〜Ｃをつくった。各々のグレー
プフルーツジュースを１３名のパネラーにより飲食して
もらって、下記の評価基準にしたがってその食味の良否
を試験した。その結果を、表１に示す。
【００２２】ここで、表１における食味の点数は、１３
名のパネラーの付した点数の平均値を採ったものであ
る。 ［評 価 基 準］ ５点・・・非常に強いえぐ味を感じ、食味が極めて劣る ４点・・・強いえぐ味を感じ、食味が大きく劣る ３点・・・えぐ味を感じ、食味が劣る ２点・・・ややえぐ味を感じ、食味がやや劣る １点・・・かすかにえぐ味を感じ、食味が少し劣る ０点・・・えぐ味を感じず、食味が良好
名のパネラーの付した点数の平均値を採ったものであ
る。 ［評 価 基 準］ ５点・・・非常に強いえぐ味を感じ、食味が極めて劣る ４点・・・強いえぐ味を感じ、食味が大きく劣る ３点・・・えぐ味を感じ、食味が劣る ２点・・・ややえぐ味を感じ、食味がやや劣る １点・・・かすかにえぐ味を感じ、食味が少し劣る ０点・・・えぐ味を感じず、食味が良好
【００２３】
【表１】
【００２４】表１の結果から、本発明の実施例１および
実施例２で製造された重合度２〜１９のε−ポリリジン
を含むグレープフルーツジュースＡおよびＢは、ε−ポ
リリジンを含有しない対照のグレープフルーツジュース
とほぼ同様にえぐ味がなく良好な食味を有するか、また
はそのえぐ味が少ないのに対して、重合度２０以上のε
−ポリリジンを含有するグレープフルーツジュースＣは
えぐ味が強く食味が劣ることがわかる。
実施例２で製造された重合度２〜１９のε−ポリリジン
を含むグレープフルーツジュースＡおよびＢは、ε−ポ
リリジンを含有しない対照のグレープフルーツジュース
とほぼ同様にえぐ味がなく良好な食味を有するか、また
はそのえぐ味が少ないのに対して、重合度２０以上のε
−ポリリジンを含有するグレープフルーツジュースＣは
えぐ味が強く食味が劣ることがわかる。
【００２５】《参 考 例》コレステロール抑制作用試
験 ５週令のFisher系雌ラットを各群７匹づつ４群準備し、
群毎に個別の金網ケージで４日間予備飼育後、１１日間
各群毎に表２に示す配合組成の飼料および水を自由に摂
取させた。飼育環境条件は、湿度６０±１０％、温度２
３．０±１．０℃とし、照明期間を毎日２２時から翌１
０時までとした。表２から明らかなように、第１群（標
準群）のラットに対する飼料は、コレステロール、ラー
ドおよびコール酸ナトリウムを含まない標準飼料であ
り、第２群（対照群）、第３群および第４群（いずれも
本発明群）のラットに対する飼料は、コレステロール、
ラードおよびコール酸ナトリウムを含む高コレステロー
ル飼料である。そして、第２群〜第４群の高コレステロ
ール飼料のうち、第３群と第４群の飼料は、実施例１お
よび実施例２で得られた重合度２〜１９のε−ポリリジ
ンを更に含有している。
験 ５週令のFisher系雌ラットを各群７匹づつ４群準備し、
群毎に個別の金網ケージで４日間予備飼育後、１１日間
各群毎に表２に示す配合組成の飼料および水を自由に摂
取させた。飼育環境条件は、湿度６０±１０％、温度２
３．０±１．０℃とし、照明期間を毎日２２時から翌１
０時までとした。表２から明らかなように、第１群（標
準群）のラットに対する飼料は、コレステロール、ラー
ドおよびコール酸ナトリウムを含まない標準飼料であ
り、第２群（対照群）、第３群および第４群（いずれも
本発明群）のラットに対する飼料は、コレステロール、
ラードおよびコール酸ナトリウムを含む高コレステロー
ル飼料である。そして、第２群〜第４群の高コレステロ
ール飼料のうち、第３群と第４群の飼料は、実施例１お
よび実施例２で得られた重合度２〜１９のε−ポリリジ
ンを更に含有している。
【００２６】
【表２】
【００２７】上記第１群〜第４群のラットの飼育開始時
の初体重、飼育終了時の終体重、増体重、飼育期間中の
飼料摂取量および飼料効率を調べたところ、下記の表３
に示すとおりであった。なお、表３の値はラット１匹当
たりの平均値であり、また飼料効率は下記の式で表され
る。 飼料効率 ＝ （増体重／飼料摂取量）×１００
の初体重、飼育終了時の終体重、増体重、飼育期間中の
飼料摂取量および飼料効率を調べたところ、下記の表３
に示すとおりであった。なお、表３の値はラット１匹当
たりの平均値であり、また飼料効率は下記の式で表され
る。 飼料効率 ＝ （増体重／飼料摂取量）×１００
【００２８】
【表３】
【００２９】上記表３の結果から、標準飼料を給与した
第１群のラットおよび高コレステロール飼料を給与した
第２〜４群のラットのいずれもが成長が良好であるこ
と、飼料摂取量では第１群のラットと第２〜４群のラッ
トとの間に有意な差がみられるものの、増体重について
は第１群のラットと第２〜４群のラットの間に有意な差
がないことがわかる。
第１群のラットおよび高コレステロール飼料を給与した
第２〜４群のラットのいずれもが成長が良好であるこ
と、飼料摂取量では第１群のラットと第２〜４群のラッ
トとの間に有意な差がみられるものの、増体重について
は第１群のラットと第２〜４群のラットの間に有意な差
がないことがわかる。
【００３０】また、上記飼育期間中、４日目と７日目に
尾静脈から、そして１１目に下大動脈から採血して血液
中の総コレステロールをRichmoncl Ｗ．らの方法により
定量したところ、下記の表４に示す結果を得た。
尾静脈から、そして１１目に下大動脈から採血して血液
中の総コレステロールをRichmoncl Ｗ．らの方法により
定量したところ、下記の表４に示す結果を得た。
【００３１】
【表４】
【００３２】更に、１１日間の飼育期間終了日の１９時
から翌日９時まで１４時間絶食させた後に、エーテル麻
酔下に解剖して肝臓を摘出してその重量を測定すると共
に、Ｆolchらの方法により摘出した肝臓から脂質を抽出
して、総コレステロール、遊離コレステロール、リン脂
質および中性脂質を分析した。その結果を下記の表５に
示す。
から翌日９時まで１４時間絶食させた後に、エーテル麻
酔下に解剖して肝臓を摘出してその重量を測定すると共
に、Ｆolchらの方法により摘出した肝臓から脂質を抽出
して、総コレステロール、遊離コレステロール、リン脂
質および中性脂質を分析した。その結果を下記の表５に
示す。
【００３３】
【表５】
【００３４】上記表４および表５の結果から、本発明の
方法により製造された重合度２〜１９のε−ポリリジン
を含有する高コレステロール飼料を給与した第３群と第
４群のラットは、標準飼料を給与した第１群のラットに
比べて血液中および肝臓におけるコレステロール量が多
くなっているものの、上記ε−ポリリジンを含まない高
コレステロール飼料を給与した第２群のラットに比べ
て、血液中および肝臓におけるコレステロール量が少な
くなっており、重合度２〜１９のε−ポリリジンがコレ
ステロールレベルの抑制作用を有することがわかる。
方法により製造された重合度２〜１９のε−ポリリジン
を含有する高コレステロール飼料を給与した第３群と第
４群のラットは、標準飼料を給与した第１群のラットに
比べて血液中および肝臓におけるコレステロール量が多
くなっているものの、上記ε−ポリリジンを含まない高
コレステロール飼料を給与した第２群のラットに比べ
て、血液中および肝臓におけるコレステロール量が少な
くなっており、重合度２〜１９のε−ポリリジンがコレ
ステロールレベルの抑制作用を有することがわかる。
【００３５】《実施例 ３》下記の表６に示した種々の
プロテアーゼを使用して、実施例１と同様にして重合度
２０〜２５のε−ポリリジンの加水分解処理を行った。
その際に、該ε−ポリリジン含有水溶液のｐＨは、各プ
ロテアーゼの活性に対して最適であるとされている表６
に示すｐＨ値を採用した。各々で得られた加水分解液を
実施例１と同じようにして逆相クロマトグラフィーに供
して、そこに含まれる生成物のクロマトグラムを採っ
た。その結果、重合度２０〜２５の中重合度ε−ポリリ
ジンに対する各プロテアーゼの加水分解能は、表６に示
すとおりであった。
プロテアーゼを使用して、実施例１と同様にして重合度
２０〜２５のε−ポリリジンの加水分解処理を行った。
その際に、該ε−ポリリジン含有水溶液のｐＨは、各プ
ロテアーゼの活性に対して最適であるとされている表６
に示すｐＨ値を採用した。各々で得られた加水分解液を
実施例１と同じようにして逆相クロマトグラフィーに供
して、そこに含まれる生成物のクロマトグラムを採っ
た。その結果、重合度２０〜２５の中重合度ε−ポリリ
ジンに対する各プロテアーゼの加水分解能は、表６に示
すとおりであった。
【００３６】表６において、プロテアーゼの加水分解能
は次の基準で判定した。プロテアーゼの加水分解能の判定基準 ＋・・・ε−ポリリジンが加水分解された。 −・・・ε−ポリリジンがまったく加水分解されなかっ
た。
は次の基準で判定した。プロテアーゼの加水分解能の判定基準 ＋・・・ε−ポリリジンが加水分解された。 −・・・ε−ポリリジンがまったく加水分解されなかっ
た。
【００３７】
【表６】
【００３８】表６の結果から、アスペルギルス（Asperg
illus）属菌の産生する中性プロテアーゼが、重合度２
０以上のε−ポリリジンから重合度２〜１９のε−ポリ
リジンを製造する際のプロテアーゼとして特に適してい
ることがわかる。
illus）属菌の産生する中性プロテアーゼが、重合度２
０以上のε−ポリリジンから重合度２〜１９のε−ポリ
リジンを製造する際のプロテアーゼとして特に適してい
ることがわかる。
【００３９】
【発明の効果】 アスペルギルス（Aspergillus）属菌
の産生する中性プロテアーゼを使用して重合度が２０以
上のε−ポリリジンを加水分解する本発明の方法によ
り、重合度が２〜１９のε−ポリリジンを高収率で円滑
に製造することができる。本発明の方法により製造され
た重合度２〜１９のε−ポリリジンは、えぐ味がかなり
少なく、しかもコレステロールレベルの上昇抑制および
低下作用、抗菌作用、抗ファージ作用を有しており、そ
のままでまたは飲食物中に添加して有効に使用できる。
の産生する中性プロテアーゼを使用して重合度が２０以
上のε−ポリリジンを加水分解する本発明の方法によ
り、重合度が２〜１９のε−ポリリジンを高収率で円滑
に製造することができる。本発明の方法により製造され
た重合度２〜１９のε−ポリリジンは、えぐ味がかなり
少なく、しかもコレステロールレベルの上昇抑制および
低下作用、抗菌作用、抗ファージ作用を有しており、そ
のままでまたは飲食物中に添加して有効に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】市販の重合度２０〜２５のε−ポリリジンを含
む液を逆相クロマトグラフィーに供し、次いで溶出させ
たときの流出液を波長２２０ｎｍのＵＶで検出したクロ
マトグラムを示す図である。
む液を逆相クロマトグラフィーに供し、次いで溶出させ
たときの流出液を波長２２０ｎｍのＵＶで検出したクロ
マトグラムを示す図である。
【図２】実施例１で得た加水分解液を逆相クロマトグラ
フィーに供し、次いで溶出させたときの流出液を波長２
２０ｎｍのＵＶで検出したクロマトグラムを示す図であ
る。
フィーに供し、次いで溶出させたときの流出液を波長２
２０ｎｍのＵＶで検出したクロマトグラムを示す図であ
る。
【図３】実施例２で得た加水分解液を逆相クロマトグラ
フィーに供し、次いで溶出させたときの流出液を波長２
２０ｎｍのＵＶで検出したクロマトグラムを示す図であ
る。
フィーに供し、次いで溶出させたときの流出液を波長２
２０ｎｍのＵＶで検出したクロマトグラムを示す図であ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 13/02 Ｃ１２Ｒ 1:66） (Ｃ１２Ｐ 13/08 Ｃ１２Ｒ 1:66） (72)発明者 児玉 俊明 埼玉県和光市本町31番２−1316号 (56)参考文献 特開 平２−72852（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−56501（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−247084（ＪＰ，Ａ) 特公 昭59−20359（ＪＰ，Ｂ２) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 1/00 - 41/00 C12N 9/00 - 9/99 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】 重合度が２０以上のε−ポリリジンを、
アスペルギルス属菌の産出する中性プロテアーゼで加水
分解することにより重合度が２〜１９のε−ポリリジン
を製造する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3072052A JP3022615B2 (ja) | 1991-03-13 | 1991-03-13 | ε−ポリリジンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3072052A JP3022615B2 (ja) | 1991-03-13 | 1991-03-13 | ε−ポリリジンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04287693A JPH04287693A (ja) | 1992-10-13 |
| JP3022615B2 true JP3022615B2 (ja) | 2000-03-21 |
Family
ID=13478226
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3072052A Expired - Lifetime JP3022615B2 (ja) | 1991-03-13 | 1991-03-13 | ε−ポリリジンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3022615B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102206166A (zh) * | 2011-03-14 | 2011-10-05 | 南京工业大学 | 一种制备l-2,4-二氨基丁酸的方法 |
| US20110269673A1 (en) * | 2004-08-18 | 2011-11-03 | Novabiotics Limited | Antimicrobial Peptides |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108998481A (zh) * | 2018-08-02 | 2018-12-14 | 宁德师范学院 | 一种采用细胞固定化和离位、间歇吸附分离ε-聚赖氨酸的发酵方法 |
-
1991
- 1991-03-13 JP JP3072052A patent/JP3022615B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110269673A1 (en) * | 2004-08-18 | 2011-11-03 | Novabiotics Limited | Antimicrobial Peptides |
| US8350003B2 (en) * | 2004-08-18 | 2013-01-08 | Novabiotics Limited | Method of treatment of non-dermatophytic fungal infections |
| CN102206166A (zh) * | 2011-03-14 | 2011-10-05 | 南京工业大学 | 一种制备l-2,4-二氨基丁酸的方法 |
| CN102206166B (zh) * | 2011-03-14 | 2013-11-20 | 南京工业大学 | 一种制备l-2,4-二氨基丁酸的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04287693A (ja) | 1992-10-13 |
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