PT1778720E - Péptidos antimicrobianos compreendendo um motivo com arginina e/ou lisina - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

PÉPTIDOS ANTIMICROBIANOS COMPREENDENDO UM MOTIVO COM ARGININA E/OU LISINA

[0001] A presente invenção fornece péptidos antimicrobianos. A invenção relaciona-se também com composições farmacêuticas compreendendo os péptidos antimicrobianos e a utilização dos péptidos no tratamento de, inter alia, infecções microbianas.

[0002] As beta-defensinas, uma família principal de péptidos endógenos antibacterianos, são excretadas pelas células epiteliais que revestem os tractos digestivo, respiratório e urogenital de mamíferos superiores. Também são produzidas por queratinócitos dentro da pele. O seu papel principal é fornecer uma primeira linha de defesa essencial contra a infecção por estas vias por microrganismos patogénicos.

[0003] As defensinas sao uma das classes de péptidos antimicrobianos mais estudadas. Esta classe é composta por moléculas ricas em cisteína com três ligações dissulfureto. Podem encontrar-se em plantas, insectos e em vários mamíferos. Nos seres humanos, são encontradas duas classes de defensina que diferem uma da outra em termos de espaçamento e ligações entre os seis resíduos de cisteína. A primeira destas classes é a das alfa-defensinas (seis tipos) que foram isoladas dos neutrófilos (HNPl-4, péptido de neutrófilo humano) e nas células de Paneth do tracto gastrointestinal (alfa-defensinas 5 e 6). A segunda classe, as beta-defensinas, são mais compridas, mais básicas, e são expressas em toda a mucosa dentro das células epiteliais e queratinócitos que revestem e/ou compreendem e/ou estão presentes dentro dos tractos digestivo, respiratório e urogenital ou na pele. A hBDl (beta-defensina humana 1) é excretada constitucionalmente e as beta-defensinas humanas 2, 3 e 4 (hBD2, hBD3 e hBD4) são produzidas em resposta à infecção ou inflamação. A expressão e secreção de hBD2 são desencadeadas por simulação bacteriana, particularmente bactérias flageladas (Harder et al, Nature 1997; 387:861) e ILl [alfa] e ILl [beta] (Interleucina 1) (Liu et al, J Invest Dermatol 2002; 118; 275-281). Nalguns locais do tecido, o factor de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) e o lipopolissacarídeo (LPS) podem também desempenhar um papel em induzir a expressão de hBD2. Experiências in vitro revelaram que a hBD2 é activa contra bactérias gram-negativas, tal como Escherichia coli (E. coli) e, em menor escala, bactérias gram-positivas, tal como Streptococcus pneumoniae (Str. pneumoniae). A hBD2 também demonstra actividade destrutiva in vitro contra a levedura Candida albicans. A expressão e a secreção de hBD3 é induzida por estimulação bacteriana, TNF-alfa e especialmente interferão gama (IFNy) que também têm a 1 propriedade comum de ser moléculas envolvidas em processos inflamatórios.

[0004] Para além protecção natural antimicrobiana de largo espectro, potente, constitutiva e regulada, que as beta-defensinas fornecem, estas moléculas, a hBD2 em particular, também têm a capacidade de mobilizar o aspecto adaptativo da resposta imunológica através dos efeitos quimiotáxicos nas células dendriticas imaturas e nos linfócitos T de memória (Yang et al, Science 1999; 286: 525-528).

[0005] Significativamente, têm surgido provas de que as beta-defensinas não só fornecem defesas contra a infecção por microrganismos patogénicos, mas que também são essenciais na regulação e manutenção da densidade e diversidade óptimas dos ecossistemas comensais essenciais do corpo, como os existentes na pele e nos tractos gastrointestinais e genitais (Ganz, T, Nat Rev Immunol. 2003 3(9): 710-20).

[0006] O modo de acção das beta-defensinas é tal que estas são, em grande medida, não tóxicas para as células hospedeiras em concentrações activas. As beta-defensinas têm, assim, sido implicadas como alvos potenciais para a terapêutica de uma ampla gama de infecções. Contudo, as formas naturais de defensinas são dificeis de produzir em sistemas recombinantes, obtendo baixos rendimentos. Além disso, têm surgido mais dados que sugerem que através das suas acções quimiotáxicas as beta-defensinas são compostos inflamatórios potentes (Yang et al, Science 1999; 286: 525-528; Van Wetering et al. Inflamm Res. 2002; 51(1): 8-15; Niyonsaba et al. Curr Drug Targets Inflamm Allergy 2003; 2(3): 224-231). Considerados conjuntamente, estes factores tornam as defensinas naturais inadequadas para aplicações terapêuticas.

[0007] As beta-defensinas são também altamente sensíveis ao sal (Porter et al., Infect. Immun. 1997; 65(6): 2396-401; Bals et al. J Clin Invest. 1998; 102(5): 874-80; Valore et al., J Clin Invest 1998; 101(8): 1633-42; Goldmann et al., Cell 1997; 88(4): 553-609; Singh et al., Proc Natl Acad Sei USA 95(25): 14961-6) . Por este motivo, as beta-defensinas não fornecem protecção antimicrobiana em condições tais como a fibrose quística em que, embora o epitélio respiratório produza beta-defensinas abundantes em resposta às infecções bacterianas persistentes associadas a esta condição, estas são inactivas devido ao desequilíbrio no transporte de iões através das membranas epiteliais respiratórias que resultam no aumento da reabsorção de catiões (Na+ em particular) e no aumento da secreção de cloreto (Donaldson SH and Boucher RC. Curr. Opin. Pulm. Med. 2003 Nov; 9 (6):486—91; Davies JC. Pediatr Pulmonol Suppl. 2004;26:147-8.) 2 [0008] Para além disso, a patente EP-Al 0 502 718 revela péptidos eficazes na inibição do crescimento de agentes patogénicos fúngicos das plantas e constitui outro exemplo de péptidos com actividade anti-microbiana.

[0009] Assim, há a necessidade de outros agentes que possam ser usados para tratar as infecções microbianas.

[0010] Os presentes inventores identificaram péptidos que, surpreendentemente, têm uma maior actividade antimicrobiana do que as defensinas naturais.

[0011] Utilização de um péptido ou sal farmaceuticamente aceitável deste, de acordo com a fórmula I:

((X)l(Y)m)n (D em que o péptido consiste em entre 3 e 200 aminoácidos e em que I e m são números inteiros de 0 a 10; n é um número inteiro de 1 a 10; X e Y são iguais e são arginina, no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma infecção por dermatófitos.

[0012] Os péptidos da invenção são úteis, inter alia, no tratamento ou prevenção de infecções microbianas.

[0013] Num aspecto preferido da invenção, o péptido compreende de 3 a 100 aminoácidos, por exemplo 3, 4, 5, 6 ou 7 até 100 aminoácidos, incluindo 3, 4, 5, 6 ou 7 até 20, 25, 30, 35, 40 ou 42 aminoácidos.

[0014] O péptido de acordo com a invenção pode compreende 100 a 200 aminoácidos, 27 a 100 aminoácidos, 28 a 86 aminoácidos, 7 a 27 aminoácidos ou 3 a 14 aminoácidos.

[0015] De preferência, o péptido compreende de 3 a 15 aminoácidos, por exemplo 3 a 7 aminoácidos.

[0016] Noutro aspecto preferido, os péptidos compreendem um ou mais resíduos de cisteína, por exemplo até 6 resíduos de cisteína, como p. ex. 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 resíduos de cisteína.

[0017] Também é útil um péptido compreendendo aminoácidos de acordo com a Formula II: C( (X)l(Y)m)n C( (Xh(Y)m)n (II) 3 em que C é cisteína, 1, n e m são números inteiros de 0 a 10; e X e Y, que podem ser iguais ou diferentes, são um aminoácido seleccionado do grupo composto por aminoácidos hidrofóbicos e/ou aminoácidos catiónicos.

[0018] O péptido pode igualmente compreender aminoácidos de acordo com a Fórmula III: C ( (X) i (Y)m) nC ( (X) i (Y)m) nC ( (X) i (Ym) n)C( (M) i (Y) m) nC (III) em que C, X Y, 1, m e n são conforme aqui definidos.

[0019] Finalmente, o péptido pode compreender aminoácidos de acordo com a Fórmula IV: C ( (X) ! (Y)m) n C ( (X) ! (Y) m) n C( (X) X (Y ) m) n C ( (X) ! (Y)m) n CC (IV) em que C, X, Y, 1, m e n são conforme aqui definidos.

[0020] Uma vez que os péptidos da invenção são mais simples em termos de estrutura do que as beta-defensinas naturais, são simples e fáceis de produzir. Os péptidos são também substancialmente insensíveis ao sal e não são hepatotóxicos. Além disso, o seu modo de acção, sendo fisico e não metabólico (ou seja, ruptura directa da membrana em vez de visar os componentes das vias metabólicas vitais), minimiza, se não mesmo exclui, a probabilidade dos microrganismos alvo desenvolverem resistência a estes agentes antimicrobianos.

[0021] Conforme é do conhecimento dos especialistas, os aminoácidos podem ser organizados em classes diferentes dependendo principalmente das propriedades químicas e físicas da cadeia lateral de aminoácidos. Por exemplo, alguns aminoácidos são geralmente considerados aminoácidos hidrofílicos ou polares e outros são considerados aminoácidos hidrofóbicos ou não polares. Conforme aqui empregue, os termos "hidrofóbico" e "catiónico" podem referir-se a aminoácidos com uma hidrofobicidade superior ou igual a -1,10 e/ou uma carga líquida que é superior ou igual a 0, conforme descrito em Fauchere and Pliska Eur. j. Med Chem. 10:39 (1983). Um

aminoácido hidrofóbico ou não polar pode também designar um aminoácido com uma cadeia lateral sem carga a um pH fisiológico, que seja não polar e que é geralmente repelido por solução aquosa.

[0022] X e/ou Y são seleccionados do grupo de aminoácidos hidrofóbicos composto por glicina, leucina, fenilalanina, prolina, alanina, triptofano, valina, isoleucina, metionina, tirosina e treonina, e/ou o grupo de aminoácidos catiónicos

composto por ornitina, histidina, arginina e lisina. X e/ou Y 4 podem ser aminoácidos D ou L. Além disso, X e/ou Y podem ser aminoácidos alternados.

[0023] A invenção também inclui isómeros conhecidos (estruturais, estéreo, conformacionais e configuracionais) e análogos estruturais dos aminoácidos acima, e os que foram modificados quer naturalmente (e.g. modificação pós-traducional), quer quimicamente, incluindo, mas não exclusivamente, fosforilação, glicosilação, sulfonilação e/ou hidroxilação.

[0024] No geral, os péptidos da invenção não incluem os aminoácidos ácido aspártico, ácido glutâmico, asparagina, glutamina ou serina, mas alguns péptidos da invenção podem ser activos mesmo na presença desses aminoácidos.

[0025] Os péptidos podem incluir um ou mais resíduos de aminoácidos adicionais adjacentes a um ou ambos os resíduos de cisteína terminal da fórmula II, III ou IV, por exemplo, os péptidos podem compreender até 10 (por exemplo 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9 ou 10) resíduos de aminoácidos adicionais. De preferência, os aminoácidos adicionais são resíduos não de cisteína. Mais preferencialmente, os aminoácidos adicionais são X e/ou Y.

[0026] Para além disso, a sequência de aminoácidos de um péptido pode ser modificada de modo a produzir uma variante do péptido que inclui a substituição de pelo menos um resíduo de aminoácido no péptido por outro resíduo de aminoácido, incluindo substituições que utilizam a forma D em vez da L.

[0027] Um ou mais dos resíduos do péptido podem ser trocados por outro para alterar, reforçar ou preservar a actividade biológica do péptido. Uma tal variante pode ter, por exemplo, pelo menos cerca de 10% da actividade biológica do péptido não variante correspondente. São frequentemente utilizados aminoácidos conservadores, ou seja, substituições de aminoácidos com propriedades similares químicas e físicas, conforme descrito acima.

[0028] Assim, por exemplo, as substituições conservadoras de aminoácidos podem envolver trocar a lisina pela arginina, ornitina ou histidina, trocando um aminoácido hidrofóbico por outro. Depois das substituições terem sido introduzidas, as variantes são examinadas quanto à actividade biológica.

[0029] O péptido pode compreender pelo menos 4 aminoácidos, por exemplo, entre 4 e 50 aminoácidos ou 4 e 50 aminoácidos, tal como entre 20 e 45 aminoácidos, tal como 20, 25, 30, 35, 40, 42 ou 45 aminoácidos. 5 [0030] X e Y podem ser iguais e ser leucina ou glicina.

[0031] Noutro aspecto, X é leucina e Y é glicina.

[0032] Noutro aspecto, X e Y são iguais e são lisina ou arginina. Assim, a invenção fornece péptidos seleccionados entre poli-L-lisina, poli-D-lisina, poli-L-arginina e poli-D-arginina.

[0031] Ainda noutro aspecto, X é lisina e Y é arginina.

[0034] No péptido da invenção, 1 e m podem ser 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 e n pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.

[0035] No péptido da invenção, 1 pode ser 1, n pode ser 1 e m pode estar entre 4 e 9, por exemplo, m pode ser 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou 9.

[0036] No péptido da invenção 1, n e/ou m podem estar entre 1 e 5, por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou 5.

[0037] De preferência, o péptido é aciclico. O péptido pode ser de cadeia linear ou ramificado.

[0038] 0 termo "péptido" como aqui usado, refere-se, em termos gerais, a vários residuos de aminoácidos unidos por ligações peptidicas. É usado alternadamente e significa o mesmo que polipéptido e proteina. CGGGGGGCGGGGCGGGGGGGGGCGGGGGGCC j(i) CLLLLLLCLLLLCLLLLLLLLLCLLLLLLCC 1 (ii) CLGLGLGCGLGLCLGLGLGLGLCGLGLGLCC 1 (iii) CRKRKRRCRKRKCKRKRKRKRKCRKRKRKCC 1 (iv) KKK 1 (V) KKKKKKK I (Vi) RRR 1 (Vii) RRRRRRR |(viii) [0039] Numa modalidade, o péptido compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada do grupo composto por: [0040] Noutro aspecto, o péptido compreende pelo menos uma das sequências de aminoácidos (i) a (viii) e residuos de aminoácidos adicionais adjacentes a um ou ambos os residuos de 6 cisteína terminais. Assim, noutra modalidade da invenção é fornecido um péptido que compreende uma sequência de aminoácidos seleccionada das sequências de aminoácidos apresentadas na Figura 1.

[0041] Os péptidos da invenção geralmente são péptidos sintéticos. Os péptidos podem ser isolados, péptidos purificados ou variantes destes, que podem ser sintetizados in vitro, por exemplo, através de um método de síntese de péptidos em fase sólida, por sintese de péptidos catalisada por enzimas ou por intermédio de tecnologia do DNA recombinante.

[0042] Para identificar péptidos activos com pouca ou nenhuma toxicidade indesejada para células hospedeiras mamíferas, podem ser produzidos péptidos individuais ou bibliotecas de péptidos, e os péptidos individuais ou péptidos destas bibliotecas podem ser examinados quanto à sua actividade antimicrobiana e toxicidade, incluindo, mas não se limitando a, actividade e toxicidade antifúngica, antibacteriana, antiviral, antiprotozoária, antiparasitária.

[0043] Os péptidos da invenção podem existir em formas diferentes, tais como ácidos livres, bases livres, ésteres e outros pró-fármacos, sais e tautómeros, por exemplo, e a invenção inclui todas as formas variantes dos compostos.

[0044] Assim, a invenção inclui o sal ou pró-fármaco de um péptido ou variante da invenção.

[0045] Os péptidos da invenção podem ser administrados sob a forma de sais farmaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do péptido precursor que contém uma fracção básica ou ácida através de métodos químicos convencionais. Geralmente, estes sais podem ser preparados fazendo reagir o ácido livre ou forma base destes péptidos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido em água ou num solvente orgânico, ou numa mistura dos dois; geralmente, são preferidos meios não aquosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol ou acetonitrilo. Listas de sais adequados estão presentes no Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., US, 1985, p. 1418, cuja divulgação é aqui incorporada por referência; ver também Stahl et al, Eds, "Handbook of Pharmaceutical Salts Properties Selection and Use", Verlag Helvetica Chimica Acta and Wiley-VCH, 2002.

[0046] A invenção inclui, assim, sais farmaceuticamente aceitáveis dos péptidos apresentados, nos quais o composto precursor é modificado fazendo sais ácidos ou básicos deste, por exemplo, os sais convencionais não tóxicos ou os sais de 7 amónio quaternário que são formados, p. ex., a partir de ácidos ou bases inorgânicos ou orgânicos. Exemplos destes sais de adição ácida incluem acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canforossulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, fumarato, gluco-heptanoato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloridrato, hidrobrometo, iodidrato, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, sucinato, tartrato, tiocianato, tosilato e undecanoato. Os sais básicos incluem sais de amónio, sais de metais alcalinos como sais de sódio e potássio, sais de metais alcalino-terrosos como sais de cálcio e magnésio, sais com bases orgânicas como os sais de diciclo-hexilamina, N-metil-D-glutamina, e sais com aminoácidos como arginina, lisina e assim por diante. Também, os grupos básicos contendo nitrogénio podem ser quaternizados com agentes tais como halogenetos de alquilo menores, como metilo, etilo, propilo e cloreto de butilo, brometos e iodetos; sulfatos dialquilo como dimetilo, dietilo, dibutilo; e sulfato de diamilo, halogenetos de cadeia longa como decilo, laurilo, miristilo e cloretos de estearilo, brometos e iodetos, halogenetos de aralquilo como brometos de benzilo e fenetilo e outros.

[0047] Sais dos grupos carboxilo de um péptido ou variante de péptido da invenção podem ser preparados do modo habitual colocando o péptido em contacto com um ou mais equivalentes de uma base desejada como, por exemplo, uma base de hidróxido metálico, p. ex. hidróxido de sódio; um carbonato ou bicarbonato de metal como, por exemplo, carbonato ou bicarbonato de sódio; ou uma base amina como, por exemplo, trietilamina, trietanolamina e similares.

[0048] Derivados de N-acilo de um grupo amino do péptido ou variante de péptido da invenção podem ser preparados utilizando um aminoácido protegido de N-acilo para a condensação final ou por acilação de um aminoácido protegido ou desprotegido. Os derivados de O-acilo podem ser preparados, por exemplo, por acilação de um péptido hidróxilo livre ou resina de péptido. A acilação pode ser efectuada utilizando reagentes de acilação Standard tais como halogenetos de acilo, anidridos, acil-imidazóis e similares.

[0049] A invenção inclui pró-fármacos para a espécie farmacêutica activa dos péptidos descritos, por exemplo em que um ou mais grupos funcionais são protegidos ou derivatizados mas podem ser convertidos in vivo para o grupo funcional, como no caso de ésteres de ácidos carboxílicos conversíveis in vivo para o ácido livre ou no caso de aminas protegidas, para o 8 grupo amino livre. 0 termo "pró-fármaco" como aqui usado, representa em particular estruturas que são rapidamente transformadas in vivo na estrutura precursora, por exemplo, por hidrólise no sangue. Uma discussão completa está presente em T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 do A.C.S. Symposium Series, Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987; H Bundgaard, ed, Design of Prodrugs, Elsevier, 1985; e Judkins, et ai. Synthetic Communications, 26(23), 4351-4367 (1996), cada um dos quais é incorporado aqui por referência.

[0050] Os pró-fármacos incluem, assim, fármacos com um grupo funcional que foi transformado num derivado reversível destes. Habitualmente, estes pró-fármacos são transformados no fármaco activo por hidrólise. Como exemplos podem ser mencionados os seguintes:

Grupo Funcional Derivado reversível Ácido carboxilico Ésteres, incluindo p. ex. ésteres aciloxialquilo, amidas Álcool Ésteres, incluindo p. ex. sulfatos e fosfatos, bem como ésteres de ácido carboxilico Amina Amidas, carbamatos, iminas, enaminas Ácido bóronico Éster de diol Carbonilo (aldeídos, cetona) Iminas, oximas, acetais/cetais, ésteres enólicos, oxazolidinas e tiazoxolidinas [0051] Os pró-fármacos também incluem compostos conversíveis no fármaco activo por uma reacção oxidativa ou redutiva. Como exemplos podem ser mencionados:

Activação oxidativa • N- e O- desalquilação • Desaminação oxidativa • N-oxidação • Epoxidação

Activação redutiva

Azo-redução

Redução de sulfóxido

Redução de dissulfureto 9

Alquilação bio-redutora Nitro-redução.

[0052] Também devem ser referidas como activações metabólicas de pró-fármacos a activação por nucleótido, activação por fosforilação e activação por descarboxilação.

[0053] O utilização de grupos de protecção é totalmente descrita em 'Protective Groups in Organic Chemistry', editado por J W F McOmie, Plenum Press (1973), e em 'Protective Groups in Organic Synthesis', 2nd edition, T w Greene & P G M Wutz,

Wiley-Interscience (1991) .

[0054] Assim, os especialistas na arte compreenderão que, embora os derivados protegidos dos péptidos descritos possam não possuir actividade farmacológica em si, eles poderão ser administrados, por exemplo por via parentérica ou oralmente, e posteriormente metabolizados no organismo para formar compostos que são farmacologicamente activos. Estes derivados são assim exemplos de "pró-fármacos". Todos os pró-fármacos dos compostos descritos estão incluídos no âmbito da invenção.

[0055] Um aspecto adicional da invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de pelo menos um dos péptidos da invenção, ou dois ou mais diferentes péptidos da invenção.

[0056] Estes péptidos também incluem um veículo, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável. A frase "farmaceuticamente aceitável" é aqui empregue para designar aqueles compostos, materiais, composições e/ou formas farmacêuticas que são, de acordo com uma avaliação médica idónea, adequados para utilização em contacto com os tecidos de seres humanos ou, conforme o caso, de um animal, sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, tendo em conta uma relação risco-benefício razoável.

[0057] Os péptidos da invenção são úteis, inter alia, como péptidos antimicrobianos para infecção por dermatófitos. O termo "péptido antimicrobiano" pode ser usado aqui para definir qualquer péptido que tenha actividade microbicida e/ou microbiostática e inclui, não exclusivamente, qualquer péptido descrito como tendo propriedades anti-dermatófitos.

[0058] Assim, a invenção fornece um péptido de acordo com a invenção para uso como medicamento. Os péptidos da invenção podem ter aplicação como agentes antimicrobianos ex vivo.

[0059] Num aspecto preferido, a invenção fornece a utilização 10 de um péptido de acordo com a invenção no fabrico de um medicamento para tratar uma infecção por dermatófitos.

[0060] Um patogénio fúngico pode derivar de um patogénio fúngico que é do género Candida spp., (p. ex. C. albicans), Epidermophyton spp., Exophiala spp., Microsporum spp., Trichophyton spp., (p. ex. T. rubrum e T. interdigitale), Tinea spp., Aspergillus spp., Blastomyces spp., Blastoschizomyces spp., Coccidioides spp., Cryptococcus spp., Histoplasma spp., Paracoccidiomyces spp., Sporotrix spp., Absidia spp., Cladophialophora spp., Fonsecaea spp., Phialophora spp., Lacazia spp, Arthrographis spp., Acremonium spp., Actinomadura spp., Apophysomyces spp., Emmonsia spp., Basidiobolus spp., Beauveria spp., Chrysosporium spp., Conidiobolus spp., Cunninghamella spp., Fusarium spp., Geotrichum spp., Graphium spp., Leptosphaeria spp., Malassezia spp., Mucor spp., Neotestudina spp., Nocardia spp., Nocardiopsis spp., Paecilomyces spp., Phoma spp., Piedraia spp., Pneumocystis spp., Pseudallescheria spp., Pyrenochaeta spp., Rhizomucor spp., Rhizopus spp., Rhodotorula spp., Saccharomyces spp., Scedosporium spp., Scopulariopsis spp., Sporobolomyces spp., Syncephalastrum spp., Trichoderma spp., Trichosporon spp., Ulocladium spp., Ustilago spp., Verticillium spp., Wangiella spp..

[0061] Assim, a invenção fornece a utilização de um péptido de acordo com a invenção no fabrico de um medicamento para tratar uma infecção por dermatófitos.

[0062] As infecções fúngicas tópicas ou dermatofiticas, embora não sejam habitualmente causadoras de morte ou doença grave, são prevalentes e são economicamente relevantes porque são dispendiosas de tratar. As infecções fúngicas tópicas ou superficiais podem incluir infecções da pele, lâmina vertebral, estrato córneo, unhas e pele. As infecções cutâneas são infecções da pele, unhas das mãos e unhas dos pés.

[0063] Num aspecto preferido da invenção, a infecção fúngica é onicomicose. A onicomicose pode ser causada, não exclusivamente, por um fungo do género Trichophyton spp., por exemplo, o fungo pode ser Trichophyton interdigitale ou Trichophyton rubrum.

[0064] O termo "onicomicose" inclui, mas não se limita, a tipos de onicomicose subungueal distai e lateral, superficial branca, branca subungueal proximal, distrófica secundária, distrófica primária, candidiase (p. ex. onicólise e doença mucocutânea crónica). A onicomicose revelou ser um factor de risco significativo para complicações clínicas mais graves, como a celulite bacteriana aguda do braço/perna e outras 11 infecções bacterianas secundárias, e como tal a presente invenção inclui o tratamento destas infecções.

[0065] O termo "tratamento" relaciona-se com os efeitos dos péptidos aqui descritos na medida em que oferece um beneficio aos doentes afectados por uma doença (infecciosa), incluindo uma melhoria no estado clinico do doente ou retardamento na progressão da doença.

[0066] Assim, noutro aspecto da invenção é fornecido um substrato ao qual um péptido da invenção é aplicado ou fixado. De preferência, o substrato é adequado para aplicação a feridas ou administração nos locais das feridas. De preferência, o substrato permite a transferência dos péptidos da invenção do substrato para uma ferida para obter o respectivo efeito antibiótico. O substrato pode ser um penso, por exemplo, um penso para ferimentos. 0 penso pode compreender um material de tecido ou pode ser um material de colagénio.

[0067] Os péptidos da invenção podem também ter aplicação como/num desinfectante. Neste contexto, o péptido ou composições farmacêuticas da invenção podem ser aplicados, isoladamente ou em combinação com outros agentes desinfectantes, a uma superfície a tratar. Conforme aqui empregue, uma "superfície a tratar" pode ser um substrato conforme aqui definido ou um dispositivo médico.

[0068] Noutro aspecto, a invenção fornece um método para tratar ou prevenir uma infecção por dermatófitos num sujeito compreendendo a administração a esse sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um péptido de acordo com a invenção.

[0069] No método da invenção, o péptido pode ser aplicado à pele ou unhas do referido sujeito. Mamíferos, aves e outros animais podem ser tratados pelos péptidos, composições ou métodos aqui descritos. Esses mamíferos e aves incluem seres humanos, cães, gatos e animais de quinta, como cavalos, gado bovino, ovelhas, cabras, galinhas e perus ou similares. Além disso, também é possível tratar plantas com os péptidos, composições ou métodos da invenção.

[0070] Quando o sujeito é um animal, o método da invenção pode ser aplicado a estruturas semelhantes a unhas, incluindo, mas não exclusivamente, cascos, garras e patas de porco ou carneiro. [0071] 0 método da invenção pode incluir, para além do tratamento com péptidos, tratamentos que aumentem a permeabilidade ao péptido na unha. Tal poderá ser facilitado 12 por meios químicos ou físicos. Tratamentos físicos, como aplicação de ácido à unha ou a limagem da camada dorsal da unha podem aumentar a permeabilidade aos péptidos da invenção. 0 aumento por meios químicos da permeabilidade da unha aos péptidos da invenção pode ser conseguido quebrando as ligações físicas ou químicas dentro da queratina da placa da unha. Agentes de amolecimento da unha, incluindo, mas não exclusivamente, ureia e ácido salicílico, aumentam a hidratação da unha para reduzir a sua densidade e, deste modo, aumentar a permeabilidade aos péptidos da invenção. Compostos com grupos sulfidril fendem as ligações dissulfureto na queratina da unha, e podem conduzir a desestabilização e aumentar a permeabilidade aos fármacos. Compostos incluindo, mas não exclusivamente, acetilcisteína e derivados de mercaptoetanol podem ser usados em combinação com os péptidos da invenção. Outros excipientes/adjuvantes conhecidos de permeabilidade da unha que podem ser usados em combinação com os péptidos da invenção incluem metilsulfonilmetano, ureia, polietilenoglicol, N-(-2-mercaptoproplonil)glicina, dimetilsulfona e 2-n-nonil-l,3-dioxolano.

[0072] Os péptidos da invenção, incluindo respectivos sais, são administrados de modo a obter uma redução em pelo menos um sintoma associado com uma infecção, indicação ou doença, ou uma redução da quantidade de anticorpos associados com a indicação ou doença.

[0073] Para obter o(s) efeito (s) pretendidos, o péptido, uma variante deste ou uma sua combinação, pode ser administrado em dose única ou em doses divididas, por exemplo, de pelo menos cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 500 a 750 mg/kg, de pelo menos cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 300 a 500 mg/kg, pelo menos cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 100 a 300 mg/kg ou pelo menos cerca de 1 mg/kg a cerca de 50 a 100 mg/kg de peso corporal ou pelo menos cerca de 1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg de peso corporal, embora outras dosagens possam fornecer resultados benéficos. A quantidade administrada varia dependendo de vários factores incluindo, mas não se limitando a, o péptido seleccionado e seus efeitos clínicos, a doença, o peso, o estado físico, a saúde, a idade do mamífero, se se pretende obter a prevenção ou o tratamento, e se o péptido foi quimicamente modificado. Estes factores podem ser facilmente determinados pelo médico que examinar os dados empíricos dos ensaios clínicos e os resultados do modelo animal pré-clínico ou outros sistemas de teste que estão disponíveis na arte.

[0074] A administração dos agentes terapêuticos de acordo com a presente invenção pode ser em dose unitária, em doses múltiplas, de forma contínua ou intermitente, dependendo, por exemplo, da condição fisiológica do sujeito, quer o objectivo da administração seja terapêutico ou profiláctico, e de outros 13 factores conhecido dos especialistas. A administração dos péptidos da invenção pode ser essencialmente continua ao longo de um período de tempo pré-seleccionado ou pode ser efectuada numa série de doses espaçadas. Estão incluídas tanto a administração local como a sistémica.

[0075] Para preparar a composição, os péptidos são sintetizados ou obtidos de outro modo, purificados quando necessário ou desejável, e depois liofilizados e estabilizados. O péptido pode então ser ajustado para a concentração adequada e opcionalmente combinado com outros agentes. O peso absoluto de um determinado péptido incluído numa dose unitária pode variar grandemente. Por exemplo, podem ser administrados cerca de 0,01 a cerca de 2 g ou cerca de 0,01 a cerca de 500 mg, de pelo menos um péptido da invenção, ou uma pluralidade de péptidos específicos para um determinado tipo de célula. Em alternativa, a dosagem unitária pode variar de cerca de 0,01 g a cerca de 50 g, de cerca de 0,01 g a cerca de 35 g, de cerca de 0,1 g a cerca de 25 g, de cerca de 0,5 g a cerca de 12 g, de cerca de 0,5 g a cerca de 8 g, de cerca de 0,5 g a cerca de 4 g, ou de cerca de 0,5 g a cerca de 2 g.

[0076] As doses diárias dos péptidos da invenção podem também variar. Estas doses diárias podem variar, por exemplo, de cerca de 0,001 g/dia a cerca de 100 ou 50 g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 25g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 12 g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 5 g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 2,5g/dia, de cerca de 0,1 g/dia a cerca de 2 g/dia, de cerca de 0,5 g/dia a cerca de 8 g/dia, de cerca de 0,5 g/dia a cerca de 4 g/dia, de cerca de 0,5 g/dia a cerca de 2 g/dia, e de cerca de 0,5 g/dia a cerca de 1 g/dia.

[0077] Assim, uma ou mais formas farmacêuticas unitárias adequadas compreendendo os péptidos terapêuticos da invenção podem ser administradas por uma variedade de vias incluindo oral, parentérica (incluindo subcutânea, intravenosa, intramuscular e intraperitoneal), rectal, dérmica, transdérmica, intratorácica, intrapulmonar e intranasal (respiratória). Os péptidos terapêuticos também podem ser formulados numa formulação lipídica ou para libertação prolongada (por exemplo, utilizando a microencapsulação, ver WO 94/07529 e patente norte-americana n.° 4.962.091). As formulações podem, quando adequado, ser convenientemente apresentadas em formas farmacêuticas unitárias e podem ser preparadas através de qualquer dos métodos conhecidos na arte farmacêutica. Estes métodos podem incluir o passo de misturar o agente terapêutico com veículos líquidos, matrizes sólidas, veículos semi-sólidos, veículos sólidos com partículas muito finas ou combinações destes, e depois, se necessário, introduzir ou moldar o produto no sistema de administração pretendido. 14 [0078] Quando os péptidos terapêuticos da invenção são preparados para administração oral, são geralmente combinados com um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável, para formar uma formulação farmacêutica ou forma farmacêutica unitária. Para administração oral, os péptidos podem estar presentes sob a forma de pó, formulação granular, solução, suspensão, emulsão, ou num polímero ou resina natural ou sintética para ingestão dos ingredientes activos a partir de uma pastilha de mascar. Os péptidos activos podem igualmente ser apresentados como um bolus, electuário ou pasta. Os péptidos terapêuticos administrados oralmente da invenção podem também ser formulados para libertação prolongada, ou seja, os péptidos podem ser revestidos, microencapsulados, ou colocados num dispositivo de libertação prolongada. Os ingredientes activos totais em tais formulações compreendem de 0,1 a 99,9% por peso da formulação.

[0079] As formulações farmacêuticas que contêm os péptidos terapêuticos da invenção podem ser preparadas pelos procedimentos conhecido na arte utilizando ingredientes conhecidos e disponíveis. Por exemplo, o péptido pode ser formulado com excipientes, diluentes ou veículos comuns, e tomar a forma de comprimidos, cápsulas, soluções, suspensões, pós, aerossóis e similares. Exemplos de excipientes, diluentes e veículos que são adequados para estas formulações incluem tampões, assim como aditivos de enchimento e cargas como amido, celulose, açúcares, manitol e derivados de silício. Também podem ser incluídos agentes ligantes como carboximetilcelulose, hidroximetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose e outros derivados de celulose, alginatos, gelatina e polivinilpirrolidona. Podem ser incluídos agentes humidificantes como glicerol, agentes de desintegração como carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio. Também podem ser incluídos agentes para retardar a dissolução como a parafina. Também é possível incluir aceleradores de reabsorção como compostos de amónio quaternário. Agentes tensioactivos como álcool cetílico e monoestearato de glicerina podem também ser incluídos. Podem ser adicionados veículos adsorventes como caulina e bentonite. Lubrificantes como o talco, cálcio e estearato de magnésio, e polietilenoglicóis sólidos também podem ser incluídos. Também podem ser adicionados conservantes. As composições da invenção também podem conter agentes espessantes como celulose e/ou derivados da celulose. Podem igualmente conter gomas como a goma xantana, goma de guar, goma de carbono ou goma de arábica ou, em alternativa, polietilenoglicol, bentonite e montmorilonite ou similares.

[0080] Por exemplo, comprimidos ou cápsulas contendo os péptidos da invenção podem incluir agentes de tampão como 15 carbonato de cálcio, óxido de magnésio e carbonato de magnésio. Agentes tamponizantes adequados podem igualmente incluir ácido acético num sal, ácido cítrico num sal, ácido bórico num sal e ácido fosfórico num sal. Cápsulas e comprimidos podem também incluir ingredientes inactivos como celulose, amido pré-gelanitizado, dióxido de silício, hidroxi-propil-metil celulose, estearato de magnésio, celulose microcristalina, amido, talco, dióxido de titânio, ácido benzóico, ácido cítrico, amido de milho, óleo mineral, polipropilenoglicol, fosfato de sódio, estearato de zinco e similares. Cápsulas de gelatina duras ou moles contendo pelo menos um péptido da invenção podem conter ingredientes inactivos como gelatina, celulose microcristalina, lauril sulfato de sódio, amido, talco e dióxido de titânio, e similares, bem como veículos líquidos como polietilenoglicóis (PEGs) e óleo vegetal. Além disso, cápsulas ou comprimidos com revestimento entérico contendo um ou mais péptidos da invenção são concebidos para resistir à desintegração no estômago e dissolver-se no ambiente mais neuro a alcalino do duodeno.

[0081] As formulações farmacêuticas dos péptidos terapêuticos da invenção também podem assumir a forma de uma solução ou dispersão aquosa ou anídrica, ou em alternativa, a forma de uma emulsão, suspensão ou emplastro.

[0082] Conforme referido acima, podem ser adicionados conservantes para ajudar a manter a validade da forma farmacêutica. Os péptidos activos e outros ingredientes podem formar suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação, tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou dispersão. Em alternativa, os péptidos activos e outros ingredientes podem estar sob a forma de pó, obtido a partir do isolamento asséptico do sólido estéril ou por liofilização a partir da solução para reconstituição com um veículo adequado, p. ex. água estéril e apirógena antes da utilização.

[0083] Estas formulações podem conter veículos e adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis conhecidos na arte. É possível, por exemplo, para preparar soluções utilizando um ou mais solvente(s) orgânicos que é/são aceitáveis do ponto de vista fisiológico, seleccionados, em adição à água, de entre solventes como a acetona, ácido acético, etanol, álcool isopropílico, dimetilsulfóxido, éteres de glicol como os produtos comercializados sob a designação "Dowanol", poliglicóis e polietilenoglicóis, ésteres alquilo Ci-C4 de ácidos de cadeia curta, lactato de etilo ou isopropilo, triglicéridos de ácidos gordos como os produtos comercializados com a designação "Miglyol", mitrisato de isopropilo, óleos vegetais, animais e minerais e polissiloxanos. 16 [0084] De preferência, as formulações farmacêuticas dos péptidos terapêuticos da invenção podem assumir a forma de um solvente ou diluente compreendendo o péptido. Os solventes ou diluentes podem incluir soluções ácidas, dimetilsulfona, N-(2-mercaptopropionil)glicina, 2-n-nonil-l,3-dioxolamo e álcool etílico. De preferência, o solvente/diluente é um solvente ácido, por exemplo, ácido acético, ácido cítrico, ácido bórico, ácido láctico, ácido propiónico, ácido fosfórico, ácido benzóico, ácido butirico, ácido málico, ácido malónico, ácido oxálico, ácido sucinico ou ácido tartárico.

[0085] Mais preferencialmente, o solvente é uma solução de ácido acético. O solvente, por exemplo, solução de ácido acético, pode estar presente na composição com uma concentração de ácido inferior a 1%, 0,5%, 0,25%, 0,1%, 0,05% ou 0,01%, por exemplo ácido acético.

[0086] Conforme aqui empregue aqui, o termo "agente activo" engloba um único péptido de acordo com a invenção, ou uma combinação de péptidos conforme aqui descrito. O termo "agente activo" pode também incluir uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um ácido como aqui descrito. Os agentes activos podem ser administrados simultaneamente, sequencialmente ou separadamente. É geralmente preferido que esta administração seja tópica.

[0087] Os agentes activos podem ser administrados em quantidades sinergeticamente eficazes. A invenção inclui assim: a utilização de quantidades sinergeticamente eficazes dos agentes activos, por exemplo um péptido de acordo com a invenção e uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um ácido conforme aqui descrito, para o fabrico de um produto, p. ex. um medicamento, para administração simultânea, isolada ou sequencial desses agentes no tratamento de uma infecção microbiana.

[0088] É possível adicionar, se necessário, um adjuvante seleccionado entre antioxidantes, surfactantes, outros conservantes, agentes filmogénicos, queratolíticos ou comedolíticos, perfumes, aromatizantes e corantes. Podem ser adicionados antioxidantes como t-butil-hidroquinona, hidroxianisolo butilado, hidroxitolueno butilado, a-tocoferol e seus derivados.

[0089] Igualmente contemplados são produtos de combinação que incluem um ou mais péptidos da presente invenção e um ou mais outros agentes antimicrobianos ou antifúngicos, por exemplo, polienos como anfotericina B, complexo lipídico de anfotericina B (ABCD), anfotericina B lipossomal (L-AMB), e nistatina lipossomal, azóis e triazóis como voriconazol, 17 fluronazol, cetoconazol, itraconazol, pozaconazol e similares; inibidores da glucano sintase, como caspofungina, micafungina (FK463), e V-equinocandina (LY303366); griseofulvina; alilaminas como terbinafina; flucitosina ou outros agentes antifúngicos, incluindo os aqui descritos. Para além disso, os péptidos podem ser combinados com agentes antifúngicos tópicos como a ciclopirox olamina, haloprogina, tolnaftato, undecilenato, nisatina tópica, amorolfina, butenafina, naftifina, terbinafina e outros agentes tópicos.

[0090] Adicionalmente, os péptidos são adequados para a formulação em formas farmacêuticas de libertação prolongada e similares. Revestimentos, invólucros e matrizes protectoras podem ser produzidos, por exemplo, a partir de substâncias poliméricas, como polilactida-glicolatos, liposomas, microemulsões, microparticulas, nanoparticulas ou ceras. Estes revestimentos, invólucros e matrizes protectoras são úteis para revestir dispositivos internos, como p. ex. endopróteses (stent), cateteres, tubos para diálise peritoneal, dispositivos de drenagem e similares.

[0091] Para administração tópica, os agentes activos podem ser formulados como conhecido na arte para aplicação directa a uma área alvo. Formas tratadas principalmente para aplicação tópica assumem a forma, por exemplo, de cremes, leites, géis, pós, dispersões ou microemulsões, loções mais ou menos espessadas, compressas impregnadas, pomadas ou sticks, formulações de aerossóis (p. ex. sprays ou espumas), sabões, sabonetes ou detergentes. Outras formas convencionais para este fim incluem pensos para ferimentos, ligaduras revestidas ou outras coberturas poliméricas, pomadas, cremes, loções, pastas, geleias, sprays, e aerossóis. Assim, os péptidos terapêuticos da invenção podem ser administrados através de adesivos ou ligaduras para administração dérmica. Em alternativa, o péptido pode ser formulado para ser parte de um polimero adesivo, como poliacrilato ou copolímero de acrilato/acetato de vinilo. Para aplicações de longa duração, pode ser desejável utilizar laminados de suporte microporosos e/ou respiráveis, de forma a minimizar a hidratação ou maceração da pele. A camada de suporte pode ter qualquer espessura adequada que garanta as funções de protecção e suporte pretendidas. Uma espessura adequada será habitualmente de cerca de 10 a cerca de 200 microns.

[0092] A administração tópica pode ser sob a forma de uma laca ou verniz para as unhas. Por exemplo, os péptidos antifúngicos podem ser formulados numa solução para administração tópica que contenha acetato de etilo (NF), álcool isopropílico (USP), e monoéster butílico de poli[metilvinil éter/ácido maleico] em álcool isopropílico. 18 [0093] Formulações farmacêuticas para administração tópica podem compreender, por exemplo, uma solução salina tamponada fisiologicamente aceitável contendo entre cerca de 0,001 mg/ml e cerca de 100 mg/ml, por exemplo entre 0,1 mg/ml e 10 mg/ml, de um ou mais dos péptidos da presente invenção específicos para a indicação ou doença a tratar.

[0094] Pomadas e cremes podem, por exemplo, ser formulados com uma base aquosa ou oleosa com a adição de agentes espessantes e/ou gelificantes adequados. As loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e em geral também contêm um ou mais agentes emulsionantes, agentes estabilizadores, agentes dispersores, agentes de suspensão, agentes espessantes ou agentes corantes. Os péptidos activos podem também ser administrados através iontoforese, p. ex., como apresentado nas patentes norte-americanas n.°s 4.140.122; 4.383.529; ou 4.051.842. A percentagem por peso de um agente terapêutico da invenção presente numa formulação tópica depende de vários factores, mas geralmente será de 0,01% a 95% do peso total da formulação e habitualmente 0,1-85% por peso.

[0095] Gotas, como gotas para os olhos ou gotas para o nariz, podem ser formuladas com um ou mais dos péptidos terapêuticos numa base aquosa ou não aquosa compreendendo igualmente um ou mais agentes dispersores, agentes solubilizantes ou agentes de suspensão. Os sprays podem funcionar por bomba ou por embalagem pressurizada. As gotas podem ser administradas por via de um simples frasco com tampa conta-gotas, por via de um frasco de plástico adaptado para administrar o conteúdo liquido gota a gota ou por via de um fecho com formato especial.

[0096] O péptido terapêutico pode ainda ser formulado para administração tópica na boca ou na garganta. Por exemplo, os ingredientes activos podem ser formulados como uma pastilha com uma base aromatizada, habitualmente sacarose e acácia ou adragante; pastilhas compreendendo a composição numa base inerte como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia; e colutórios compreendendo a composição da presente invenção num veículo líquido adequado.

[0097] As formulações farmacêuticas da presente invenção podem incluir, como ingredientes opcionais, veículos farmaceuticamente aceitáveis, diluentes, agentes solubilizantes ou emulsionantes e sais do tipo que está disponível na arte. Exemplos destas substâncias incluem soluções salinas normais tais como soluções salinas fisiologicamente tamponadas e água. Exemplos específicos não limitativos dos veículos e/ou diluentes que são úteis nas formulações farmacêuticas da presente invenção incluem água e 19 soluções salinas tamponadas fisiologicamente aceitáveis, como soluções salinas de tampão fosfato a pH 7,0-8,0.

[0098] Os péptidos terapêuticos da presente invenção podem também ser administrados numa solução aquosa quando administrados em aerossol ou sob a forma de inalador. Assim, outras formulações farmacêuticas em aerossol podem compreender, por exemplo, uma solução salina tamponada fisiologicamente aceitável contendo entre cerca de 0,001 mg/ml e cerca de 100 mg/ml de um ou mais dos péptidos da presente invenção específicos para a indicação ou doença a tratar. O aerossol seco sob a forma de péptido sólido com partículas muito finas ou partículas de ácido nucleico que não são dissolvidas ou suspensas num líquido também são úteis na prática da presente invenção. Os péptidos da presente invenção podem ser formulados como pós e compreender partículas muito finas com um tamanho de partícula entre cerca de 1 e 5 pm, ou em alternativa entre 2 e 3 pm. Partículas muito finas podem ser preparadas por pulverização e filtração, utilizando técnicas conhecidas na arte. As partículas podem ser administradas através de inalação de uma quantidade predeterminada do material com partículas muito finas, que pode estar sob a forma de um pó. É de referir que o conteúdo unitário do ingrediente ou ingredientes activo(s) contidos numa dose individual de aerossol de cada forma farmacêutica não precisa de constituir em si mesmo uma quantidade eficaz para o tratamento da infecção, indicação ou doença particular, uma vez que a quantidade eficaz necessária pode ser obtida através da administração de uma pluralidade de unidades de dosagem. Além disso, a quantidade eficaz pode ser obtida usando menos do que a dose na forma farmacêutica, quer individualmente, quer através de uma série de administrações.

[0099] Para administração ao tracto respiratório superior (nasal) ou inferior por inalação, os péptidos terapêuticos da invenção são fornecidos convenientemente por um nebulizador ou por uma embalagem pressurizada ou outros meios adequados de apresentação de um spray aerossol. As embalagens pressurizadas podem compreender um propulsor adequado como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada através de uma válvula para fornecer uma quantidade calibrada. Os nebulizadores incluem, mas não se limitam aos descritos nas patentes norte-americanas n.°s 4.624.251, 3.703.173, 3.561.444 e 4.635.627. Os sistemas de administração por aerossol do tipo aqui indicado estão disponíveis em numerosos distribuidores comerciais incluindo Fisons Corporation (Bedford, Mass.), Schering Corp. (Kenilworth, NJ) e American Pharmoseal Co. (Valência. CA) . Para administração intranasal, o agente terapêutico pode 20 também ser administrado por via de gotas para o nariz, um spray liquido, como através de um atomizador em frasco de plástico ou inalador-doseador. Atomizadores típicos são o Mistometer (Wintrop) e o Medihaler (Riker).

[0100] Além disso, os ingredientes activos podem também ser usados em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, analgésicos, anti-inflamatórios, anti-histamínicos, broncodilatadores e similares, quer para as condições descritas, quer para outras condições.

[0101] A invenção será agora descrita a título de exemplo apenas por referência às seguintes figuras: A Figura 1 apresenta as sequências de aminoácidos de quatro péptidos de acordo com a invenção; A Figura 2 é um histograma que demonstra o crescimento do fungo, Γ. interdigitale após (a) 4 dias e (b) 7 dias de tratamento com os péptidos da Figura 1; A Figura 3 é um histograma que demonstra o crescimento do fungo, T. rubrum após (a) 4 dias e (b) 7 dias de tratamento com os péptidos da Figura 1; A Figura 4 é um histograma que demonstra o crescimento do fungo, Candida albicans, após (a) 24 dias e (b) 48 dias de tratamento com os péptidos da Figura 1; A Figura 5 é um histograma que mostra os resultados de uma experiência dose-resposta para o péptido 1 (representado na

Figura 1) no crescimento da Candida albicans após um tratamento de 24 horas; A Figura 6 é um gráfico que apresenta a sobrevivência da

Candida spp. às 24 horas na presença de várias doses do péptido 4 conforme representado na Figura 1; A Figura 7 é um gráfico que apresenta a sobrevivência de 3 estirpes diferentes de bactérias às 24 horas na presença de várias doses do péptido 4 conforme representado na Figura 1; A Figura 8 é um histograma que demonstra o impacto sinergético do ácido acético a 0,01% na actividade antifúngica (contra Γ. rubrum) do péptido 4 (1 mg/ml) no dia 3 do crescimento; A Figura 9 é um histograma que demonstra a inibição de r. interdigitale e T. rubrum pelo péptido 4; A Figura 10 é um histograma que demonstra os efeitos do Péptido 3 e 4 no Γ. interdigitale; A Figura 11 é um histograma que demonstra o efeito do ácido acético no T. interdigitale; A Figura 12 é um histograma que demonstra o efeito da polilisina no crescimento do Γ. interdigitale; A Figura 13 é um histograma que demonstra os efeitos da polilisina e da poliarginina no crescimento do T. rubrum; A Figura 14 é um histograma que demonstra a inibição de Γ. interdigitale e T. rubrum pela poli-L-arginina; 21 A Figura 15 é um histograma que demonstra o efeito de uma concentração reduzida de poliarginina em T. rubrum e T. interdigitale; A Figura 16 é um histograma que demonstra o efeito de trímeros no crescimento do T. rubrum; A Figura 17 é um histograma que demonstra os efeitos do Péptido 4 e NaCl no crescimento de T. interdigitale; A Figura 18 é um gráfico que apresenta o efeito do Péptido 4 na Candida albicans a concentrações de sal elevadas; A Figura 19 é um histograma que demonstra os efeitos da polilisina e da poliarginina no crescimento da Candida albicans.

[0102] A Tabela 1 enumera agentes patogénicos humanos bacterianos, fúngicos, parasitários e vírus encapsulados tratáveis pelos péptidos da invenção; [0103] A Tabela 2 pormenoriza os péptidos que correspondem aos códigos poliméricos de aminoácidos apresentados em Resultados e Figuras.

[0104] A invenção será agora descrita por referência aos seguintes exemplos.

EXEMPLOS

Materiais e métodos · Reagentes [0105] Todos os péptidos foram produzidos por síntese em fase sólida por contracto pela Invitrogen-Evoquest, Carlsbad, CA, EUA ou foram adquiridos a um fornecedor de péptidos como a NeoMPS SA (Estrasburgo, França) ou Sigma-Aldrich Chemical Company Ltd. (Poole, RU) . No caso de testes com fungos, o péptido liofilizado foi preparado como uma solução padrão de 1000 pg/ml em tampão de ensaio. Quando referido explicitamente, nas experiências a partir das quais foram geradas as Figs. 2 - 8 e a Fig. 11, foi adicionado ácido acético como solvente a uma concentração final de 0,5%.

Agentes patogénicos

[0106] As estirpes Trichophyton interdigitale (NCPF 117) e Trichophyton rubrum (NCPF 335) foram obtidas na National Collection of Pathogenic Fungi, Bristol e mantidas em cultura por transferência a intervalos aproximadamente mensais em placas com agar Sabouraud e Potato Dextrose Agar a 30 °C. A 22 estirpe de Candida albicans 3179 (obtida na National

Collection of Type Cultures [NCTC], Colindale) foi conservada em meio Oxoid Mueller Hinton Broth a 37 °C. A estirpe Streptococcus pyogenes 8198, a estirpe Staphylococcus aureus 10642 (resistentes à meticilina) e a estirpe E. coli 0157 12900 foram obtidas na NCTC, Colindale e conservadas em meio liquido Oxoid Mueller Hinton a 37 °C.

Ensaios de sensibilidade no crescimento fúngico [0107] Para determinar a sensibilidade das estirpes fúngicas a cada um dos péptidos de teste, o respectivo impacto no crescimento fúngico foi avaliado do modo que se apresenta de seguida. Suspensões com fragmentos de conídios e hifa de T. interdigitale e T. rubrum foram preparadas adicionando 10 ml de meio fresco Nutrient Glucose Broth (NGB) (meio Oxoid Nutrient com 2 % p/v glicose) numa placa de cultura e agitando com uma espátula. A suspensão de fragmentos de conidios/hifa resultante foi filtrada por 2 camadas de gaze cirúrgica estéril para remover grandes emaranhados de hifa e pedaços de agar. 20 μΐ desta suspensão (absorvância a 540 nm em torno de 0,1, correspondendo a aprox. 106 propágulos/ml) foram inoculados em cada poço de placas de microtitulação estéreis de 96 poços, às quais tinha sido previamente adicionado um volume total de 80 μΐ de meio nutriente (NGB) e a quantidade adequada da solução do péptido. Os poços de controlo eram aqueles nos quais o volume final do ensaio (100 μΐ) era composto apenas por meio NGB e solvente (se aplicável e na mesma concentração do que as amostras de péptido, nesse caso). O crescimento fúngico nas placas foi monitorizado por absorvância a 540 nm num leitor de placa Microtek após 24h, 4 dias e 7 dias de incubação a 30 °C.

Ensaios de sobrevivência da Candida albicans [0108] Para determinar a sensibilidade de estirpes fúngicas a cada um dos péptidos de teste, foi avaliado o respectivo impacto na sobrevivência da Candida como se segue. Culturas de C. albicans foram postas a crescer durante 18-24h e depois armazenadas a 4 °C antes da utilização. Culturas frescas postas a crescer de um dia para o outro foram centrifugadas a 2000 x g durante 10 min e lavadas com meio fresco Mueller Hinton Broth, ajustando o número de células viáveis para entre 5 x 106 e 1 x 107 /ml. O tampão de ensaio foi preparado adicionandolOO μΐ de meio NGB a 6,9 ml de tampão fosfato de sódio 10 mM, pH 7,7. 35 μΐ de tampão de ensaio com ou sem variação das concentrações de péptido foram adicionados a um frasco estéril de polipropileno com tampa de enroscar e foram adicionados 15 μΐ do inoculo de Candida albicans descrito 23 acima. Os frascos foram incubados a 37 °C num banho de água durante 2 h, e o número de espécies de Candida sobreviventes foi determinado por diluição em série em solução salina de tampão fosfato estéril (PBS) e colocação em placas de Petri 9 cm Petri com Agar de Sabouraud Oxoid (20 ml). Foram efectuadas contagens após a incubação destas placas a 37 °C durante 18-24h.

Ensaios de sobrevivência bacteriana [0109] A estirpe Streptococcus pyogenes 8198, a estirpe

Staphylococcus aureus 10642 (resistentes à meticilina) e a estirpe E. coli 0157 12900 (todas obtidas na NCTC, Colindale) foram postas a crescer durante 18-24h e conservadas a 4 °C antes da utilização. Culturas frescas postas a crescer de um dia para o outro foram centrifugadas a 2000 x g durante 10 min e lavadas com meio Mueller Hinton Broth fresco. A sensibilidade a cada um dos quatro péptidos foi testada como para a C. albicans conforme acima descrito. Para a E. coli e o S. aureus, o número inicial de células para o ensaio de sensibilidade ao péptido foi de 101 2 3 4 5/ml e o meio usado para enumeração foi o Nutrient Agar (Oxoid). O Str. pyogenes cresceu menos do que outras estirpes em agar Mueller Hinton e assim o número inicial de células para estes ensaios foi inferior ao de outras estirpes, a 10ê/ml. A sobrevivência do Str. pyogenes foi determinada usando Oxoid Tryptose Soya Agar em vez de Nutrient Agar.

Resultados

Inibição do crescimento de Trichophtyon spp. pelos péptidos 1- 24 1 2 [0110] Dois patogénios fúngicos dérmicos clinicamente 3 relevantes, o Tríchopyton rubrum e o Trichopyton 4 interdigitale, foram cultivados, conforme descrito previamente na secção de materiais e métodos, apenas em meio de crescimento (culturas de controlo) ou no meio de crescimento com 50 pg/ml de péptido 1, 2, 3 ou 4 (representado na Figura 5 1). O crescimento de r. interdigitale e Γ. rubrum foi avaliado através da medição da densidade óptica (absorvância a 540nm) após 4 e 7 dias em cultura. Comparativamente a amostras não tratadas de controlo, cada péptido testado inibiu significativamente o crescimento do Γ. interdigitale (Fig. 2) e do T. rubrum (Fig. 3) no dia 4 e 7. As culturas de controlo de cada estirpe de teste continuaram a crescer, conforme indicado pelos aumentos nas leituras de OD (densidade óptica), entre os dias 4 e 7.

Inibição do crescimento e sobrevivência de Candida spp. pelos péptidos 1-4 [0111] A levedura Candida albicans foi cultivada, conforme descrito previamente na secção de materiais e métodos, no meio de crescimento isoladamente (culturas de controlo) ou no meio de crescimento contendo 50pg/ml ou 100pg/ml e 300pg/ml ou 500pg/ml de péptido 1, 2, 3 ou 4. O crescimento de C. albicans foi avaliado por medição da densidade óptica (absorvância a 540 nm) após 24 h (Fig. 4a) e 48 h (Fig. 4b) em cultura. Comparativamente a amostras não tratadas de controlo, todos os péptidos testados inibiram significativamente o crescimento de C. albicans de um modo dependente tanto da dose e como do tempo. A dependência da dose da inibição do crescimento foi ainda confirmada em experiências nas quais o crescimento de C. albicans foi avaliado opticamente após 24h em cultura sob condições de controlo (apenas em meio de crescimento) ou na presença de várias concentrações do péptido 1, de 50pg/ml a 500pg/ml (Fig. 5) . Numa experiência separada, a sobrevivência de C. albicans foi avaliada após 18-24h em culturas postas a crescer apenas em meio (controlos) e em culturas incluindo várias concentrações do péptido 4 de 1 pg/ml a 1000 pg/ml (Fig. 6). A sobrevivência dos microrganismos C. albicans, conforme avaliada pelas contagens de viabilidade após 24h em cultura, diminuiu de um modo dependente da dose (Fig. 6).

Inibição da sobrevivência bacteriana pelo Péptido 4 [0112] Três agentes patogénicos bacterianos clinicamente relevantes, E.coli 0157, Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) e Streptococcus pyogenes, foram expostos, conforme descrito previamente na secção de materiais e métodos, a uma série de concentrações do péptido 4. Após um periodo de 3h, amostras de cada cultura bacteriana foram transferidas para placas com meio de crescimento de fase sólida adequadas e os números de colónias viáveis nas amostras de controlo (apenas meio de crescimento) e tratadas (meio de crescimento contendo o péptido 4) foram avaliadas após 18-24h. Após 3h de exposição, o Péptido 4 inibiu significativamente a sobrevivência de cada estirpe bacteriana (Fig. 7) comparativamente a culturas não tratadas de controlo, de um modo dependente da dose. O ácido acético reforça a actividade antifúngica do péptido 4 [0113] Uma vez que tanto o meio de controlo (sem péptido) como o de teste (contendo o péptido 1, 2, 3 ou 4) nas experiências representadas nas Figs. 2 e 3 continham ácido acético a 0,5% 25 como solvente de péptido (detalhado na secção de materiais e métodos), foi realizada uma experiência à parte para averiguar se o próprio ácido acético pode desempenhar um papel na actividade do péptido e/ou sobrevivência fúngica. Para tal, foram realizadas experiências de crescimento de T. rubrum de acordo com a secção de métodos e materiais, apenas com o meio de crescimento, o meio de crescimento contendo apenas ácido acético a 0,01%, meio de crescimento contendo 1 mg/ml de péptido 4 e meio de crescimento contendo 1 mg/ml de péptido 4 mais ácido acético a 0,01%. O crescimento do fungo foi determinado por OD conforme descrito atrás, após 3 dias em cultura. Tal como esperado, o péptido 4 inibiu o crescimento de T. rubrum. O ácido acético a 0,01% isoladamente não teve um efeito significativo no crescimento de T. rubrum (Fig. 8), mas quando incluído no meio com péptido 4, a presença do ácido acético a 0,01% inibiu significativamente o crescimento de T. rubrum mais do que 1 mg/ml de péptido 4 isoladamente.

Inibição do crescimento de T. interdiqitale e T. rubrum pelo Péptido 4 [0114] Os efeitos inibitórios do Péptido 4 no crescimento de Trychophyton spp. foi determinado pelo ensaio de crescimento fúngico conforme a secção de materiais e métodos. Γ. rubrum e T. interdigitale foram cultivados apenas em meio ou em meio contendo 3 concentrações diferentes do Péptido 4. Nenhum ácido acético estava presente nas amostras. Foram usados controlos apenas de meio para ilustrar a absorvância de fundo do meio. O crescimento do fungo foi determinado pela OD conforme descrito previamente após 96 horas de incubação a 30 °C. Conforme representado na Figura 9, estes ensaios confirmaram o efeito inibitório do Péptido 4 no crescimento de ambas as espécies de fungos, sendo o T. interdigitale consistentemente mais susceptivel aos efeitos inibitórios do tratamento com o Péptido 4 do que ο Γ. rubrum. O crescimento de T. interdigitale foi inibido a concentrações de Péptido de 0,5 mg/ml.

Efeitos dos Péptidos 3 e 4 no crescimento de T. interdigitale [0115] Foi avaliado o potencial antifúngico do Péptido 3 e Péptido 4 no T. interdigitale. Os ensaios de inibição do crescimento foram realizados de acordo com a secção de materiais e métodos na ausência de ácido acético. Uma vez que os Péptidos 1-3 são altamente hidrofóbicos e assim insolúveis, ainda só tinham sido testados anteriormente contra Trichophyton spp. em ácido acético como solvente. Quando as culturas de T. interdigitale foram postas a crescer durante 7 dias na presença do Péptido 3, Péptido 4 ou apenas do meio sem 26 solvente de ácido acético e o crescimento foi medido por OD, o Péptido 4 revelou inibir significativamente o crescimento fúngico (Figura 10), ao passo que o Péptido 3 não revelou qualquer actividade inibitória (Figura 10) . Esta maior actividade do Péptido 4 catiónico em relação ao Péptido 3 hidrofóbico na ausência de ácido acético a 0,5% sugeriu uma contribuição significativa do ácido acético para a actividade observada anteriormente para os péptidos hidrofóbicos.

Efeito do ácido acético no crescimento de T. interdigitale [0116] A inibição do crescimento de Γ. interdigitale por ácido acético foi avaliada através de experiências de crescimento fúngico em conformidade com a secção de materiais e métodos.

As culturas de Γ. interdigitale foram realizadas sem tratamento ou com tratamento com 3 concentrações diferentes de ácido acético a 30 °C durante 96 horas (Figura 11). Tal ilustra que há um efeito significativo do ácido acético a 0,5% na mesma concentração que foi usada com os Péptidos 1-4 anteriormente como solvente. Esta experiência em conjunto com a falta de actividade do Péptido 3 na ausência de ácido acético sugere que o Péptido 4 é o composto mais activo contra Trichophyton spp.

Efeito da poli-L-lisina no crescimento do T. interdigitale [0117] Como o Péptido 4 é um péptido altamente catiónico compreendendo resíduos de lisina e arginina, a actividade antifúngica das formas poli-L destes aminoácidos foi testada contra T. interdigitale usando ensaios de inibição do crescimento conforme detalhado na secção de materiais e métodos, na ausência de ácido acético. Foram estabelecidas culturas T. interdigitale não tratadas de controlo e culturas contendo entre 1 mg/ml e 50 pg/ml de moléculas de poli-L-lisina que variaram entre 27-100 resíduos e 100-200 resíduos de comprimento. O crescimento de Γ. interdigitale em cada cultura foi avaliado após 96 horas a 30 °C. Ambos os tamanhos de molécula de poli-L-lisina inibiram o crescimento de Γ. interdigitale (Figura 12), mas enquanto a molécula maior inibiu o crescimento em todas as concentrações testadas, só foi observada actividade inibitória com a molécula de 27-100 aminoácidos de comprimento em concentrações maiores (Figura 12) . Isto sugere que os efeitos da lisina a nível da inibição do crescimento do Trichophyton spp. dependem tanto do tamanho como da dose.

Efeitos da poli-L-arginina e da poli-L-lisina no crescimento de T. rubrum 27 [0118] A actividade antifúngica da poli-L-arginina versus poli-L-lisina foi então testada contra T. rubrum. A inibição do crescimento foi determinada de acordo com a secção de materiais e métodos na ausência de ácido acético. O T. rubrum foi apenas no meio isoladamente, no meio com poli-L-arginina (28-86 aminoácidos de comprimento) e poli-L-lisina (100-200 aminoácidos). Foi também utilizado um meio não inoculado de controlo. As culturas foram mantidas e o seu crescimento foi monitorizado durante 96 horas a 30 °C. A poli-L-arginina e a poli-L-lisina inibiram ambas o crescimento de T. rubrum (Figura 13). A poli-L-arginina foi mais activa no seu impacto inibitório contra T. rubrum do que a poli-L-lisina quando testada em doses equivalentes, inibindo totalmente o crescimento a 1 mg/ml (Figura 13).

Inibição de T. interdigitale e T. rubrum por poli-L-arginina [0119] A inibição do crescimento de Trychophyton spp. por poli-L-arginina foi testada realizando experiências de crescimento fúngico, de acordo com a secção de materiais e métodos. As culturas de Γ. rubrum e Γ. interdigitale foram postas a crescer apenas em meio ou em meio contendo 3

concentrações diferentes de poli-L-arginina. Nenhum ácido acético estava presente nas amostras. Foram usados controlos de meio para ilustrar a absorvância de fundo do meio. O crescimento do fungo foi determinado pela OD conforme descrito previamente após 96 horas de incubação a 30 °C (Figura 14) . A poliarginina revela ser activa contra ambas as espécies de fungos até ao valor minimo de 0,55 mg/ml (Figura 14).

Efeito da redução da concentração (100 pq/ml) de poliarginina em T. rubrum e T. interdigitale [0120] A inibição do crescimento de Trychophyton spp. por poliarginina foi testada através de experiências de crescimento fúngico em conformidade com a secção de materiais e métodos. As culturas de r. rubrum e r. interdigitale foram postas a crescer sem tratamento ou tratadas com uma única concentração de poliarginina (100 pg/ml), sem ácido acético presente em quaisquer amostras. Foram usados controlos de meio para ilustrar a absorvância de fundo do meio. O crescimento do fungo foi determinado pela OD conforme descrito previamente após 96 horas de incubação a 30 °C (Figura 15). A concentração reduzida leva a perda de actividade, isto ilustra o efeito da dose de poliarginina no Trychophyton spp. 28 0 efeito de trímeros (3 aminoácidos) do péptido no crescimento de T. rubrum [0121] Foi testada a actividade de trímeros do péptido de poli-L-lisina, poli-L-arginina, poli-L-histidina e poli-L-triptofano no crescimento de T. rubrum. A inibição do crescimento foi realizada de acordo com os materiais e métodos e Γ. rubrum foi ou deixado sem tratamento ou exposto a 2 mg/ml de cada um dos trímeros. As culturas foram mantidas durante 96 horas a 30 °C. O crescimento fúngico foi determinado por OD e os resultados apresentados como uma percentagem do crescimento na cultura não tratada (Figura 16) . A poli-L-arginina foi o péptido mais activo contra T. rubrum com apenas um polipéptido de 3 aminoácidos necessário para desencadear uma redução significativa no crescimento de T. rubrum.

Efeito do Péptido 4 (1,2 mg/ml) e NaCl no crescimento de T. interdiqitale [0122] Foi investigado o impacto de várias concentrações de sal na actividade antifúngica do Péptido 4 em relação ao T. interdigitale. Foram realizados ensaios de inibição do crescimento de Γ. interdigitale de acordo com a secção de materiais e métodos na ausência de ácido acético. As culturas foram deixadas sem tratamento ou expostas ao Péptido 4 mais uma série de concentrações de NaCl de 100 mM a 500 mM. As culturas de T. interdigitale foram mantidas a 30 °C durante 96 h e o seu crescimento foi avaliado por OD conforme descrito anteriormente (Figura 17). A actividade antifúngica do Péptido 4 não foi afectada por concentrações de sal próximas ou superiores às encontradas sob condições fisiológicas (Figura 17) . As actividades antimicrobianas das β-defensinas endógenas estão bem documentadas como sendo inibidas mesmo por concentrações de sal reduzidas.

Efeito do Péptido 4 contra Candida albicans a concentrações de sal elevadas [0123] A sobrevivência de C. albicans foi avaliada como detalhado na secção de métodos e materiais após uma incubação a 37 °C durante 2 h com uma série de concentrações do Péptido 4. Duas concentrações de NaCl foram introduzidas no meio de crescimento para averiguar o impacto de condições fisiológicas e de sal muito elevado (que se sabe inibirem a actividade da β-defensina endógena). Foi observada actividade destrutiva significativa do Péptido 4 mesmo com concentrações de sal muito elevadas (Figura 18) . À medida que a concentração do Péptido 4 aumenta pode observar-se que o impacto da concentração de sal mais elevada é reduzido (Figura 18) . Por 29 conseguinte, a actividade fungicida do Péptido 4 não é inibida por sais.

Actividade da poli-L-lisina, poli-D-lisina e poli-D-arginina contra Candida albicans [0124] A actividade antifúngica da poli-L-arginina versus lisina e poli-L versus poli-D-lisina foi avaliada de modo a determinar se alguma destas variantes do péptido demonstraram uma maior actividade contra a Candida albicans. Candida spp. foi incubada conforme descrito na secção de materiais e métodos durante 2 horas a 37 °C na presença de 100 pg/ml, 1 mg/ml e 10 mg/ml de poli-D-lisina, poli-L-lisina e poli-L-arginina. A sobrevivência foi avaliada como detalhado atrás e demonstra uma maior actividade antifúngica da poli-L-arginina em relação à poli-L-lisina (Figura 19) . Também demonstra que a poli-D-lisina tem uma actividade antifúngica muito semelhante à da poli-L-lisina. 30

Claims (9)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um péptido ou sal farmaceuticamente aceitável deste de acordo com a fórmula I: ((X)l(Y)m)n (D em que o péptido consiste em entre 3 e 200 aminoácidos e em que I e m são números inteiros de 0 a 10; n é um número inteiro de 1 a 10; X e Y são iguais e são arginina, no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma infecção por dermatófitos.
2. 2. Utilização conforme reivindicado na reivindicação anterior em que o péptido compreende 3 a 100 aminoácidos.
3. 3. Utilização conforme reivindicado na reivindicação 2 em que o péptido compreende 3 a 50 aminoácidos.
4. 4. Utilização conforme reivindicado na reivindicação 3 em que o péptido compreende 4 a 50 aminoácidos.
5. 5. Utilização conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações anteriores em que a infecção é causada por um patogénio fúngico do género Trichophyton spp.
6. 6. Utilização conforme reivindicado na reivindicação 5 em que o patogénio fúngico é Trichophyton interdigitale.
7. 7. Utilização conforme reivindicado na reivindicação 5 em que o patogénio fúngico é Trichophyton ruhrum.
8. 8. Utilização conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações anteriores em que a infecção fúngica é uma infecção cutânea.
9. 9. Utilização conforme reivindicado em qualquer uma das reivindicações anteriores em que a infecção é onicomicose. 1