CN101011335A - 保护和再生性组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种保护和再生性组合物。该组合物包括含有干葡萄蔓提取物的第一美容活性成分和含有四氢嘧啶类物质组分的第二美容活性成分的组合。该组合物能够起到抗衰老美容护理作用和皮肤再生的功效。

Description

保护和再生性组合物
技术领域
本发明涉及保护和再生性组合物。
具体而言,本发明涉及一种组合物,其包括含有葡萄蔓(枝)提取物的第一美容活性成分和含有四氢嘧啶类或族物质成分(即四氢嘧啶组分)的第二美容活性成分的组合。更具体而言,所述第二成分选自四氢嘧啶类、羟基四氢嘧啶类及其混合物。
本发明更具体地涉及含有这种组合物的用于局部施用至皮肤的美容组合物。
本发明另外涉及美容护理的方法,包括将该组合物局部涂抹到期望得到美容护理之人的皮肤。
背景技术
文献WO 01/03713公开了一种方法,用于从干的葡萄蔓中提取白藜芦醇和/或viniferine。其指出,viniferine是白藜芦醇的二聚体。该文献也指出,白藜芦醇一般是单体形式,但是也存在含有高达4单体的低聚物(第1页,第11~17行)。
由于干芽获得白藜芦醇和viniferine的产率比用鲜芽获得白藜芦醇和viniferine的产率高得多,因此强调使用干芽的价值。(第2页第31行至第3页第2行)
该文献预见了获得葡萄藤提取物的可能性,这种葡萄藤的提取物对于白藜芦醇要比从葡萄蔓获得的商业化提取物浓一千倍,能够制成具有高白藜芦醇含量的液体、粉末或片剂,适宜于这类产品的传统工业用途,该文献还广泛地提及了在制药、饮食和美容领域的应用(第5页25~32行和权利要求18)。
而且,应该可以看到,在所述现有技术文献中描述的葡萄蔓的干燥是在露天下进行的,但是所用时间段不超过4个月(实施例1:干燥4个月;实施例2:干燥3个月;实施例3:干燥最长的时间是3个月)。
发明内容
本发明的一个主要目的是提供一种包括活性成分的协同性组合的新组合物,更具体而言是一种局部施用于皮肤的美容组合物。
本发明的另一主要目的是提供来自美容上可接受的活性成分的组合物,即对皮肤细胞不具有可检测毒性的活性成分,其可以以合理的价格大量获得,以用于美容工业规模化的美容组合物生产。
本发明还有另一个主要目的是提供一种具有限制含量的白藜芦醇(其低聚物更为有利)的组合物
本发明同时以在美容工业规模上易于实施的简单方式实现上述目的。
因此,根据第一方面,本发明提供一种包括含有干葡萄蔓提取物的第一美容活性成分和含有四氢嘧啶类物质成分的第二美容活性成分的组合的组合物。
在本发明的范围内,“四氢嘧啶类物质的成分”的表达应理解为是指(S)-1,4,5,6-四氢嘧啶-4-羧酸及其美容上可接受的盐和酯,其为未取代或由至少一个C1~C6低级烷基自由基(radical)取代,尤其是2-位取代,和/或由至少一个羟基或甲氧基取代,尤其是5-位取代。
优选地,所述第二成分选自四氢嘧啶类物质,或(S)-1,4,5,6-四氢-2-甲基嘧啶-4-羧酸,和羟基四氢嘧啶类物质,或(S,S)-1,4,5,6-四氢-5-羟基-2-甲基嘧啶-4-羧酸,及其美容上可接受的盐或酯。
在本发明另一个特定的具体实施方式中,该组合物含有0.1wt%至20wt%,优选0.1wt%至10wt%的第一成分;和0.1wt%至20wt%,优选0.1wt%至10wt%的第二成分,但是这两种成分的总量基于该组合物总重量,最好小于或等于20wt%,优选低于10wt%。
在本发明又一个特定的具体实施方式中,第一成分和第二成分各自的重量比在1/10至10/1之间,特别是约1/1。
在本发明的一个特定的具体实施方式中,所述第二成分是重量比基本相等的四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶的混合物。
根据第二方面,本发明还涉及一种用于局部施用至皮肤的美容组合物,其含有如上限定的或由以下描述获得的组合物,并与美容上可接受的赋形剂组合。
在另一种变化形式中,该组合物含有至少一种其他的美容活性成分,特别是具有抗衰老活性,特别是防止、修正或延缓皮肤衰老影响的另一种美容活性成分,例如维生素A、维生素E或维生素C;或一种实现皮肤再生护理的美容活性成分,例如羟基积雪草甙;或一种具有保湿功效的美容活性成分,例如蜕皮类固醇、含有蜕皮类固醇的植物提取物诸如土耳其斯坦筋骨草(Ajuga turkestanica)提取物;或一种防光化辐射的美容活性成分,例如美容上可接受的物理或化学防晒剂,如甲氧基肉桂酸酯(盐)。
根据第三方面,本发明还涉及一种美容护理方法,包括给期望得到美容护理效果之人的皮肤局部施用如上所定义的组合物或如上所定义的或由以下描述获得的美容组合物。
在该方法的一个特定的变化形式中,所述美容护理选自抗衰老护理,尤其是防止、修正或延缓皮肤衰老的影响,和皮肤再生护理。其对抗皮肤衰老的效果主要包括阻止皮肤随年龄而发生的衰老或光化学引起的衰老。
在本发明的范围内,已经能够证明由含有葡萄蔓提取物的第一美容活性成分和含有四氢嘧啶类物质组分的第二美容活性成分因组合而产生的协同效应。
在本发明的范围内,葡萄蔓提取物是葡萄园收获的葡萄蔓(嫩枝)的任何提取物。各种葡萄藤的芽都能够使用,具体的品种是梅鹿辄、品丽珠、加美、西拉、赛美蓉和苏维翁(农)。根据本发明的优选葡萄蔓是赛美蓉和/或苏维翁(农)品种的藤嫩芽。
在一个特定的具体实施方式中,使用的是干葡萄蔓。干葡萄蔓应理解为是指实施过干燥步骤使其水分含量最好低于20wt%,优选低于5wt%的藤嫩芽。
在一个具体的变化形式中,所述藤嫩芽或者在露天进行,在干燥之处或在适度温度例如不超过约40℃的干燥炉中干燥,在上述每一种情况下都是直至使水分含量低于20wt%,优选低于5wt%。
例如,所述干燥步骤能够在露天的干燥之处,根据上述文献WO 01/03713推荐的干燥方法进行天然干燥,具体而言,其包括至少2个月优选至少4个月的干燥期间。
这种在露天的天然干燥有利于随后进行的活性成分提取,特别是有利于白藜芦醇低聚物的生成。
用于本发明范围的葡萄蔓提取物最好通过最终提供富含多酚分子特别是白藜芦醇低聚物的提取物的方法获得,这是在本发明范围内为获得美容效果所追求的。
在本发明目前优选的具体实施方式中,提取工序主要包括以下步骤:
a)从葡萄园收获葡萄蔓;
b)进行最少为期4个月的干燥;
c)用极性有机溶剂例如C1~C6低级醇诸如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、戊醇或己醇(要么使用纯的,要么与水混合,要么是含水溶液)或酮特别是丙酮(或酮和水的混合物)进行提取的至少一个提取步骤,以得到第一极性溶剂提取物;
d)用非极性有机溶剂如己烷对所述第一极性溶剂提取物的至少一个洗涤步骤,以得到第二提取物,其能如此使用;
e)可选地,为获得更高纯度的提取物,可以在层析柱,特别是硅胶柱中进行纯化,借此所需的活性物质主要是多酚物质特别是白藜芦醇低聚物被固定,然后用合适的洗脱混合物如乙酸乙酯/己烷(特别是相对比例为80/20(v/v))选择性地洗脱,以获得高纯化的第三提取物,其也能够如此使用;和
f)可选地,特别是通过蒸发能够除去洗脱溶剂,以获得米色粉末,其构成了根据本发明的优选的最终纯化葡萄蔓提取物。
在本发明一个具体的变化形式中,所述最终粉末能够再溶解于例如80/20(v/v)相对比例的醇/水混合物,特别是80/20(v/v)的丁二醇/水混合物。
在该最终溶液中,该再溶解于80/20(v/v)醇/水混合物中的粉末提供至少约1%,有利地至少10%的viniferine(白藜芦醇的二聚体)。
关于含有四氢嘧啶类物质成分的第二美容活性成分,是可以商购获得。例如,可以使用MERCK销售的例如商标名为RONACAREhydroine的产品。由MERCK商购的该产品是特别有价值的,因为四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶的相对比例基本上相等(50wt%至60wt%四氢嘧啶,40wt%至50wt%的羟基四氢嘧啶)。该产品也具有很好的稳定性,而勿需加入抗氧剂或防腐剂,且属于美容级。
由以下解释性说明并参照本发明的实施例,本发明的其他目的、特征和优点会显得清楚明了,其只是通过举例说明的方式给出,因此并不能以任何方式限制本发明的范围。
在实施例中,除非另外指出,所有的百分比都是重量比,温度为摄氏度,而压力为大气压。
附图说明
图1显示了实施例3中描述的细胞生长实验的结果,该实验借助BOEHRINGER的称为“细胞增殖试剂盒II”的商业化XTT测试用品而进行,其分别显示了对于未经处理的对照品、单独的葡萄蔓提取物I3、“hydroine”产品(Merck的RONACARE)以及提取物I3和hydroine组合的细胞生长动力学。所述动力学是由6h、9h、15h和18h的细胞生长测定建立起来的,以这些时间为横坐标,细胞数为纵坐标作图,其中细胞数计为相对6h时的细胞数(计为100%)的百分数。
图2是由图1衍生的曲线图,其以条状形式分别显示了经18h细胞处理时间的、对于未经处理的对照品、提取物I3、“hydroine”产品(Merck的RONACARE)和最后的根据本发明的组合以百分数表示的细胞数,其中根据本发明的组合使用了提取物I3和“hydroine”产品的组合,表现出了所述组合的协同效应。
图3显示了实施例4中实施的抗自由基保护测试的结果,以保护百分数为纵坐标,对使用提取物I3、“hydroine”产品(Merck的RONACARE)和这两种活性组分的组合分别获得的以条状形式的结果作为横坐标作图,显示了与单一采用每一种产品相比较通过这种组合所产生保护作用的意外优势。
具体实施方式
实施例1
根据本发明制备葡萄蔓提取物(称为I3)的方法
根据本发明,提取工序主要包括以下步骤:
a)在3至4月份从波尔多(Bordeaux)东南部葡萄园收获1kg苏维翁(农)(Sauvignon)品种的葡萄蔓;
b)在露天的干燥之处对收集的葡萄蔓进行最低4个月的干燥,直至水分含量低于5wt%;
c)进行提取,把干燥的葡萄蔓碾磨成平均粒度小于4mm的颗粒。用极性有机溶剂(在这种情况下为丙酮)进行至少一个提取步骤,其中磨碎的藤嫩芽与溶剂的各自重量比至少为1/1O,时间至少为20h,温度为室温或30℃左右的温度;所述固体残渣通过过滤除去。
从含有溶解提取物的丙酮溶液中蒸发掉丙酮获得基本上干燥的第一粗提取物,其被再溶解于50/50(v/v)的乙醇/水混合物,该粗提取物称重约30g,需要约225ml所述溶剂。含有所溶解的提取物的水/乙醇溶液在室温或25至30℃维持1h,搅拌,并通过过滤分离出上清液。
呈固体状的纯化提取物要么通过蒸发完全除去乙醇获得,要么通过蒸发部分除去乙醇使纯化提取物沉淀,其通过传统方式干燥获得粉末形式的纯化提取物。
d)然后,通过把所获得的粉末再溶解于相对比例为80/20(v/v)的丙酮/水混合物中而将上述纯化提取物再次纯化。
加入己烷直至获得两相溶液,有机相基本上是己烷,水相基本上包括丙酮/水混合物。这样,通过在室温下强烈搅拌几分钟如约10min进行提取操作。
混合物经过静置,通过倾析实现相分离。
回收含有期望的纯化藤嫩芽提取物的水相。
e)蒸发掉溶液,获得所需的第一纯化藤嫩芽提取物,其同样能够使用,并称为本发明的产物I1。
f)所述产品最好在硅胶柱上纯化,由此所需活性物质、主要是多酚物质尤其是白藜芦醇低聚物被固定。在本实施例中使用的硅胶柱是用Merck的60-型硅胶填充的柱子。固定于所述硅胶上的多酚物质然后用洗脱溶剂选择性地洗脱,该洗脱溶剂包括相对比例为80/20(v/v)的乙酸乙酯/己烷混合物,其以1L溶剂/克干提取物的比率引入所述柱;
g)除去洗脱溶剂,特别是通过蒸发除去,以获得米色粉末,其构成了根据本发明的最终纯化的第二葡萄蔓提取物,称为I2;和
h)为了促进其在组合物特别是美容组合物中的应用,有利地,可以将该最终粉末I2再溶解于醇/水混合物中,在该情况下为80/20(v/v)的丁二醇/水。
根据本发明的该再溶解的粉末(称为产品或提取物I3)的分析表明,其含有约68%的白藜芦醇低聚物,其中约24%是vinferine。
实施例2
根据本发明的组合物
制备一组合物,其含有50wt%的实施例1获得的提取物I3(含有约68%的白藜芦醇低聚物),和约50%商购获得的四氢嘧啶类成分,即MERCK的hydroine产品RONACARE
该组合物能够以各种比例进行稀释,以便进行实验形成以下实施例的目标物。
实施例3
细胞生长实验
A-细胞生长模型
测试实施例2的组合物,以测定其对细胞生长的影响,其中使用可商业获得的XTT,其来自BOEHRINGER,称为“Cellproliferation kit II”(细胞增殖试剂盒II)测试。
在该模型中,通过在线粒体呼吸链中存在的脱氢酶把四唑盐转化成甲瓒(formazan)——一种橙色化合物,其由可商购的如商标TECAN分光光度计于450nm处检测。因此,仅仅活细胞能够生成甲瓒。
反应如下:
Figure A20071000328600151
用根据本发明实施例2的组合物,但是组合物中对两种活性组分中每一种都稀释至1.56μg/ml的浓度(即1.56μg/ml实施例2的组合物和1.56μg/ml来自MERCK的RONACARE),处理该细胞24小时的时间,或者,以比较的方式,仅仅采用实施例2组合物的溶液或hydroine产品RONACARE但是浓度为3.52μg/ml以使之具有相同的总浓度。
用XTT试剂每3h进行测定,以便跟踪细胞生长动力学。
应该注意的是,所考虑的第一时间,即实验开始之后的6h,被设定对应于100%的细胞。取T0或T3是不可能的,因为标准偏差太大,可能是由于介质变化相关的扰动所致。
B-处理策略
D0天
在D0天把HaCaT型的无限增殖化转化的人角朊细胞(对本领域的那些技术员是已知的,参见http:/cat.inist.fr/?aModele=afficheN&cpsidt=15688132?,其引述了POZZI等在Journal ofEndocrinal中的论文.Invest.2004,Vol 27,N°2,p 147至149),以每孔10000细胞的比率接种到96孔微孔板。
D24天
在D24天用上面所提及的预定产品以指定浓度开始处理,接着进行细胞培养。
C-在3h=T3、6h=T6、9h=T9、15h=T15和18h=T18处理效果的观
在上述标题中指定的每一步处理步骤,都除去培养介质(从Gibco补足的KSFM)。
这些细胞要么用根据本发明实施例2的组合物处理,要么单独用提取物I3处理,或用由Merck商购的hydroine产品RONACARE,处理。
为了完成这项工作,在无菌条件下,由DMSO(二甲基亚砜)中的5%原液首先制备1/16和1/32的稀释液,以在单一产品存在的情况下获得3.12mg/ml的浓度,在混合物的情况下对于每一种产品获得1.56mg/ml的浓度。
然后在罩子(通风柜,hood)下下制备培养介质中1/1000的稀释液,以获得对于混合物3.12μg/ml的最终浓度、对于每一种成分1.56μg/ml的最终浓度。
因此,对于所执行的测试,该处理为:
—对于实施例1的提取物I3为3.12μg/ml;
—对于MERCK的hydroine产品RONACARE为3.12μg/ml;
—在本发明实施例2含有混合物的组合物的情况下,对于实施例1的I3为1.56μg/ml,对于MERCK的hydroine产品RONACARE为1.56μg/ml。
D-所述测试的继续
为了继续所述测试,通过翻转微孔板除去培养介质。
漂洗细胞一次:用200μL/孔,在37℃用PBS漂洗所述细胞。
以100μL/孔的比率加入制备在补足的(complemented)KSFM介质中用于立即使用的浓度为0.2mg/ml(1mg/ml原液的1/5稀释液)的XTT溶液。
制备无细胞的空白样。
把微孔板包裹于铝箔纸中,并在37℃于含有5%的CO2的炉中培养3h。
在3h的培养结束时,在商购的Tecan分光光度计上于450nm处读出光密度(OD)。
所获得的结果表示如下:
E-结果的表示
6h=T6的处理时间被设为对应于孔中100%的细胞。
通过以下公式给出活力百分比:
%活力=(OD×100)/(OD对照-100)
结果
所述结果表示如下表:
表I
在D24时的处理时间     未经处理的%活力   使用实施例1I3的%活力     使用RONACAREhydroine的%活力  使用本发明实施例2组合物的%活力
6h     100   100     100  100
9h     106   108     108  113
15h     110   112     111  127
18h     126   130     133  142
所获得的结果在图1中以曲线形式给出。
从这些结果可以看出,对于用根据本发明实施例2的组合物处理的细胞,由于该组合物含有本发明产品I3(主要含有白藜芦醇低聚物)和hydroine类物质的组合,因而与未经处理的细胞或仅仅用实施例1的产品I3或MERCK的hydroine-类产品RONACARE处理的细胞相比,获得了更持续的生长。
然而,应该注意,单独的实施例1的产品I3和hydroine-类产品表现出低活性。
而且,由于使用根据本发明的组合物,细胞生长动力学在相同的18-小时结束点要好很多。
图2表示经过18h的处理时间的结果的对照,并清楚地表明根据本发明的组合具有协同作用,这对于本领域的那些技术员而言完全是出乎意料的。
实施例4
抗自由基保护测试
模型:3D测试(ASE实验室)
该测试能够证实分子的对于由过氧化氢产生的羟基自由基的DNA-保护作用。
为了表征具有抗氧或抗自由基性能的分子或混合物,和因此保护人细胞不受到起因于反应性氧化物种(ROS)的氧化损伤,必须考虑由Barry Halliwell建立的3个标准:
—必须证明分子在细胞中是具有活性的;纯化学测试会给出启示但无法证实;
—分子必须有效对抗生物氧化剂,即存在于细胞中的氧化剂。某些抗氧剂对某些氧化剂具有特异性的保护活性;和
—所用氧化剂的浓度必须与活体内能够使用的那些相容。
这些Barry Halliwell,一个氧化剂专家的观点摘自1995年发表在Journal Biochemical Pharmacology(Vol.49,1341至1348)的题名为“Antioxidant characterization-Methodology and Mechanism”论文。
因此,该3D测试可能证实分子对由过氧化氢在FeCl2存在下产生的羟基自由基的DNA-保护作用。
另外,在细胞上进行的该D测试极好地满足了Barry Halliwell的标准。
原理:
S.F.R.I.和I.P.B.S.CNRS,Toulouse的抗毒研究小组已经开发出一种系统,用于检测微孔板(Analytical Biochemistry, 1995,232,37-42)上收集的DNA的损伤(3D测试)。
把DNA吸附到敏化的孔上,然后用氧化剂(过氧化氢+铁)培养。所产生的损伤被识别,然后用存在于纯人源细胞提取物中的特异性蛋白络合物进行修复。这种损伤的修复涉及损伤切除阶段,然后才是DNA片段或所切除碱基的再合成。
在修复性合成步骤期间,把经修饰的核苷酸(生物素-偶联的dUTP)引入DNA。然后通过过氧酶偶联的抗生物素蛋白分子识别这些生物素化的核苷酸。然后加入化学发光过氧化物酶底物,所发出的信号用光度计(Spectrafluorplus,Tecan)测定。所测信号的强度(此后用RLU标示)是DNA上修复损伤数的函数。对于大多数损伤,在每6个千碱基1至15个损伤的限度内,观察到剂量效应。
该系统能够修复所有类型的损伤,因为存在不同的DNA损伤修复路径(NER和BER),并且在该研究中所制备和使用的细胞提取物中具有活性。因此,在该系统中能够识别这种氧化性损伤。
原料和方法
1.原料
所使用的试剂描述于Analytical Biochemistry, 1995,232,37-42的论文。
化学发光信号用Spectrafluorplus光度计(Tecan)检测。
2.活体外3D测试方法
2.1测试样品的稀释
嫩芽提取物I3和hydroine的样品以50mg/ml的原始浓度溶解于甲醇中。
所研究的浓度通过在超纯水中连续稀释原液而得到。所有的稀释液以2倍浓度制备,以致在加入1体积的过氧化氢+FeCl2氧化溶液之后获得所需的浓度。
为了证实修复信号降低的特异性,在相同的条件下在由过氧化氢+FeCl2损伤的DNA上培养相同的稀释液(1X)。如果观察到在氧化剂存在下修复信号的下降,以及观察到在先前损伤的DNA没有显著的信号改变,则稀释液仅仅表示出了保护作用。在损伤的DNA上修复信号的抑制作用能够通过例如样品与DNA的直接相互作用来解释,这种直接相互作用具有阻滞蛋白修复络合物接近该损伤的作用。
2.2在微孔板孔中DNA靶的吸附
通过轻微晃荡,让超纯质粒DNA(pBS)(主要是超螺旋形式)在30℃与敏化的孔接触30min,在这些条件下,DNA的吸附是定量进行的。
加入正修复对照,其包括先前用H2O2+FeCl2损伤的质粒DNA。
2.3搜索样品抗反应性氧物种的保护作用
羟基自由基OH·是由芬顿反应(过氧化氢+FeCl2)产生。
芬顿反应:通过加入H2O2+FeCl2混合物进行
H2O2+Fe2+→Fe3++OH-+OHo
这些是强亲电体的自由基的寿命很短(10-9s级)。因此其与DNA碱基反应非常迅速,而产生不同类型的损伤,诸如碱基的修改或缺失。这些非常有遗传毒性的损伤通过修复系统进行识别。
过氧化氢在超纯水(来自Millipore的MilliQ级)中以4mM的浓度制备。FeCl2在超纯水中以2μM的浓度制备。两种溶液在使用之前立即以等体积进行稀释。
该溶液在使用之前立即与测试样品等体积的不同稀释液混合。把50μL混合物加入吸附了质粒DNA的孔中。然后整个在30℃进行培养30min,并轻微振荡。
然后进行漂洗步骤,以仅仅保留被氧化剂或多或少损伤的DNA。
随后用特异性修复络合物进行损伤修复步骤。在切除的DNA链再合成阶段,生物素标记的核苷酸被引入DNA中(在30℃培养3h,勿需振荡)。
再进行漂洗步骤,以除去没有结合到DNA中的生物素。
接下来是通过与过氧化酶分子偶联的抗生物素蛋白分子(在轻微振荡下,于30℃培养15min)进行生物素识别的步骤。
然后进一步进行漂洗步骤,以除去与未固定至生物素的过氧化酶分子偶联的抗生物素蛋白。
最后,通过加入化学发光过氧酶底物进行修复反应的步骤(在轻微振荡下,于30℃培养5min),然后读出发光度。
结果的解释
通过把这些结果表示成在DNA上形成氧化损伤的保护百分数或抑制百分数而改进了结果的可视化。值0%对应于单独被氧化剂损伤DNA的修复信号。
在ROS存在下的保护百分数被计算为由于OH·或1O2自由基所产生损伤作用的相对降,即:
Figure A20071000328600231
修复信号的非特异性抑制(不存在ROS的情况下)有时也能观察到。这或许是由于化合物与DNA直接相互作用(DNA从孔上解吸,与DNA非特异性缔合,其会将损伤屏蔽于修复蛋白,等)所致。因此,加入由用先前损伤的DNA培养的检测试剂构成的对照样品。在该条件下的信号衰减,反映了化合物不依赖于其可能的抗自由基性能的非特异性抑制作用。
在ROS存在的情况下对修复的抑制作用可能是以下作用的结果:
—真实的保护
—于测试分子与DNA或处理过的微孔板的直接相互作用导致的损伤DNA修复的效能降低;或
—该2种现象同时发生。
因此,对非特性抑制作用评价。从对样品获得的结果进行计算,其中该样品是在先前损伤的DNA上培养的。
特异性抑制作用或特异性保护作用等于存在ROS时的抑制作用与非特异性抑制作用之间的差值。这反映了单独由分子产生的抗自由基活性。
表II
抗自由基保护测试
             样品    %保护
   溶剂对照     -
   I3     43
   RONACAREhydroine     47
   I3+RONACAREhydroine(本发明)     62
藤嫩芽提取物I3和hydroine的样品表现出抗自由基的保护活性。在用本发明组合物的处理中保护效能增加了约40%。
因此,确实存在两分子之间的协同作用。
推荐的剂量为0.1%至10%的1/1藤嫩芽提取物/hydroine组分混合物至。
从表II和所附的图3明显看出,产品I3和hydroine产品的每一个样品都表现出了抗自由基保护性活性。
通过对照,根据本发明的组合物,由于组合使用了产品I3和hydroine,在保护效能上增加了接近40%,这证实了两种分子之间的协同效应,这对于本领域那些技术人员是完全出乎意料的。
实施例5
根据本发明的组合产生抗自由基活性的证明
由于不同侵蚀性因素如UV射线、应激反应和炎性反应,在皮肤内产生了氧自由基物质。
这些氧化性分子进攻皮肤组分,特别是脂质、蛋白质、多糖和细胞DNA,扰乱了生物功能。
此处用来证实根据本发明的葡萄蔓提取物和四氢嘧啶类成分的组合在施用于皮肤之后保护效应的测试,是基于P.Girard,L.Lempereur,P.Buche和L.Violin在Curr.Probl.Dermatol.,1998, 26,99-107中发表的题名“A new method for assessing in vivo,in humansubjects,the basal or UV-induced peroxydation of the stratum corneum.Application to test the efficacy of free-radical-scavenging products”的综述所描述的内容。
该测试的原理是基于存在于皮肤表面的氧自由基与由DCF(H)-DA(2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯)的反应,其能够生成荧光产物,记录为DCF*,其发出的荧光用荧光计测定。该荧光的测定能够定量出自由基的存在,继而测定保护产物的活性度。
选择出30个是白种人并且是女性的健康自愿者。
把待检测的产品通过涂抹以2μL/cm2的量施加于前臂的内侧区域。每间隔2h涂施一次,进行四次涂施。
测试的人此后准许使用其通常所用的清洗产品但不得使用任何皮肤护理产品。
在所述测试产品的第一次施涂之后24h,借助于标准透明的粘着盘(以商标名D-Squames销售)进行剥离。
由此除掉的角化细胞数量通过用商购获得的名为Squameter的仪器测定透射过所述D-Squames的红外光来评价。以讨论在测定结果统计分析中的squamae数目。
然后不同的D-squames盘在37℃、pH值为7.4、浓度为66mM并且含有DCF*磷酸盐缓冲溶液中培养32h,。在每一种情况下所述溶液的荧光在培养之后用商标名为Fluroskan Ascent(Labsystems)的荧光计定量测定。
已经检测的以下产品:
产品1(本发明的):乳剂(面霜)含有1wt%的提取物I3和1wt%的MERCK公司的hydroine RONACARE,其后称为“hydroine”,
产品2(本发明的):含有1wt%提取物I3和1.5wt%hydroine的洗液,
产品3:含有葡萄籽多酚的乳剂,
产品4:含有0.5%艾地苯醌(已知的抗氧剂)的乳剂,
产品5:含有1%的艾地苯醌的乳剂。
荧光测定结果报告于此处的下表III:
表III
    荧光度    与TNT的比较(%)
    产品1(本发明的)     106.6    -19%
    产品2(本发明的)     101.0    -23%
    产品     121.1    NS
    产品     126.5    NS
    产品     114.7    -13%
    对照(未经处理的对象)(“TNT”)     131.7
s(<0.01)
这样,荧光度直接与存在的自由基数相关,根据上述结果很清楚地表明自由基数由于本发明产品的存在发生了非常显著地降低。因此,本发明产品在活体内提供了非常好的抗自由基作用。
下面给出根据本发明组合物的美容配方的不同实施例,这些不同的成分可以由本领域技术人员以传统方式进行配制。
实施例6
根据本发明以面霜形式的美容组合物
硬脂醇醚-21(steareth-21)(Brij 721)    2.5%
硬脂酸甘油酯(Tegin)                   1.1
硬脂醇                                5
甘油三癸酸酯/辛酸酯        11.5
丁二醇                     3
甘油                       2
防腐剂                     0.5
芳香剂浓缩物               0.5
水                         62.4
实施例2的组合物            5
甲氧基肉桂酸辛酯           7.5
实施例7
以凝胶形式的美容组合物
甘油                       3%
AMPS聚合物(Sepigel305)     3
氢化蓖麻油(Cremophor CO-60)2
聚乙二醇                   1.5
防腐剂                     0.5
芳香剂浓缩物               0.3
水                         85.7
实施例2的组合物            3
二苯甲酮4                  1
实施例8
以洗剂形式的美容组合物
丁二醇                     3
EDTA                       0.1
增溶剂             1
芳香剂浓缩物       0.3
醇                 5
水                 80.47
实施例2的组合物    10
二苯甲酮4          0.13

Claims (22)

1.一种组合物,包括含有干葡萄蔓提取物的第一美容活性成分和含有四氢嘧啶类物质成分的第二美容活性成分的组合。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述四氢嘧啶类物质成分是(S)-1,4,5,6-四氢嘧啶-4-羧酸及其美容上可接受的盐和酯,其为未取代或由至少一个C1~C6低级烷基自由基取代,尤其是2-位取代,和/或由至少一个羟基或甲氧基取代,尤其是5-位取代。
3.根据权利要求1所述的组合物,其中所述第二成分选自四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶及其美容上可接受的盐或酯。
4.根据权利要求1所述的组合物,其中所述第二成分是基本上等重量比的四氢嘧啶类物质和羟基四氢嘧啶类物质的混合物。
5.根据权利要求1所述的组合物,其含有0.1wt%至20wt%的所述第一成分;和0.1wt%至20wt%的所述第二成分。
6.根据权利要求1所述的组合物,其含有0.1wt%至10wt%的所述第一成分;和0.1wt%至10wt%的所述第二成分。
7.根据权利要求1所述的组合物,其中第一成分和第二成分的总量小于或等于20wt%。
8.根据权利要求1所述的组合物,其中所述第一成分和所述第二成分各自重量比在1/10~10/1之间,特别是约1/1。
9.一种局部施用于皮肤的美容组合物,其包括含有干葡萄蔓提取物的第一美容活性成分和含有四氢嘧啶类物质成分的第二美容活性成分与美容上可接受赋形剂的组合。
10.根据权利要求9所述的组合物,其中所述四氢嘧啶类物质成分是(S)-1,4,5,6-四氢嘧啶-4-羧酸及其美容上可接受的盐和酯,其为未取代或由至少一个C1~C6低级烷基自由基取代,尤其是2-位取代,和/或由至少一个羟基或甲氧基取代,尤其是5-位取代。
11.根据权利要求所述9的组合物,其中所述第二成分选自四氢嘧啶类物质和羟基四氢嘧啶类物质及其美容上可接受的盐或酯。
12.根据权利要求9所述的组合物,其含有0.1wt%至20wt%的所述第一成分;和0.1wt%至20wt%的所述第二成分。
13.根据权利要求9所述的组合物,含有至少一种其他的美容活性成分,其选自由具有抗衰老活性的美容活性成分;具有皮肤再生功效的美容活性成分;具有保湿功效的美容活性成分;和防光化辐射的美容活性成分构成的组。
14.根据权利要求13所述的组合物,其中所述具有抗衰老活性的美容活性成分选自维生素A、维生素E和维生素C;所述具有皮肤再生功效的美容活性成分是羟基积雪草甙;所述具有保湿功效的美容活性成分选自蜕皮类固醇、含有蜕皮类固醇的植物提取物和土耳其斯坦筋骨草提取物;所述防光化辐射的美容活性成分选自美容上可接受的物理防晒剂和美容上可接受的化学防晒剂。
15.根据权利要求14所述的组合物,其中所述美容上可接受的化学防晒剂是甲氧基肉桂酸酯(盐)。
16.一种美容护理的方法,包括给期望得到美容护理效果的人的皮肤局部施用一种用于局部涂抹的美容组合物,所述组合物包括含有干葡萄蔓提取物的第一美容活性成分和含有四氢嘧啶类物质成分的第二美容活性成分与美容上可接受的赋形剂的组合。
17.根据权利要求16所述的方法,其中所述四氢嘧啶类物质成分是(S)-1,4,5,6-四氢嘧啶-4-羧酸及其美容上可接受的盐和酯,其为未取代或由至少一个选自C1~C6低级烷基自由基、羟基或甲氧基的取代基取代。
18.根据权利要求16所述的方法,其中所述第二成分选自四氢嘧啶类物质和羟基四氢嘧啶类物质及其美容上可接受的盐或酯。
19.根据权利要求16所述的方法,其含有0.1wt%至20wt%的所述第一成分;和0.1wt%至20wt%的所述第二成分。
20.根据权利要求16所述的方法,其中所述美容组合物含有至少一种其他美容活性成分,其选自由具有抗衰老活性的美容活性成分、具有皮肤再生功效的美容活性成分、具有保湿功效的美容活性成分以及具有防光化辐射的美容活性成分构成的组。
21.根据权利要求20所述的方法,其中所述具有抗衰老活性的美容活性成分选自维生素A、维生素E和维生素C;所述具有皮肤再生功效的美容活性成分是羟基积雪草甙;所述具有保湿功效的美容活性成分选自蜕皮类固醇、含有蜕皮类固醇的植物提取物和土耳其斯坦筋骨草提取物;所述防光化辐射的美容活性成分选自美容上可接受的物理防晒剂和美容上可接受的化学防晒剂。
22.根据权利要求16所述的方法,其中所述美容护理选自由抗衰老护理和皮肤再生护理构成的组。
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