WO2009107984A2 - 식물의 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물 - Google Patents

식물의 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물 Download PDF

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WO2009107984A2
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for inhibiting skin aging containing a sprout extract of a plant, specifically, a sprout extract extracted from sequoia sprout, bilberry sprout, peach sprout, germinated cabbage, germinated broccoli, germinated sunflower and germinated kale It relates to a composition for inhibiting skin aging comprising a.
  • Epidermal stem cells are typical of adult stem cells in the skin. Epidermal stem cells located at the epidermal and dermal borders of the skin divide into two, one remains as epidermal stem cells, and the other continues to divide and rise out to differentiate into epidermal cells. Therefore, in terms of developmental aspects, the epidermal and dermal boundaries maintained in the adult are flattened by endogenous aging and photoaging, and the area thereof is reduced. Accordingly, the loss of a part of epidermal stem cells is observed.
  • epidermal stem cells occur around the missing portion, and wound healing ability is known to decrease.
  • the number of epidermal stem cells is not reduced or reduced in activity to the extent that the human body does not perform the function of the skin, but from a cosmetic point of view, it may cause a level of concern.
  • epidermal cells also affect fibroblasts, which are the dermis cells underneath, to promote collagen production (El. Goudrezouri, et al., J Invest Dermatol. 124: 79-86 (2005)). Cells are known to inhibit the production of collagen fibers and elastic fibers in the dermal layer.
  • the collagen is an important fibrous protein that accounts for about 25% of the total protein of the human body, is an important component of the extracellular matrix and occupies most of the connective tissue. In addition, collagen accounts for about 75% of dry skin weight and about 90% of dermal fiber components, and performs important functions such as intercellular matrix, structural support, and providing tensile strength of skin. If the production and degradation of collagen is not properly controlled, it is reported that it acts as a major cause of skin aging, such as decreased skin elasticity and wrinkles (M. Tzaphlidou, Micron 35: 173 (2004)). Therefore, if the collagen biosynthesis, which is a component of the connective tissue, is properly regulated, a considerable level of skin aging improvement can be expected.
  • the skin epidermal stem cells which play an important role in skin regeneration, express characteristic proteins, such as p63, a6-integrin, b1-integrin, and telomerase. This is known.
  • the high expression of these proteins means that the number of epidermal stem cells is high, and stem stem cells are maintained, that is, the skin has high regenerative capacity.
  • the skin composition comprising a sprout extract extracted from sequoia sprout, bilberry sprout, peach sprout, germinated cabbage, germinated broccoli, germinated sunflower and germinated kale as an active ingredient
  • the present invention has been accomplished by discovering that skin aging can be suppressed or improved by promoting skin regeneration and proliferation.
  • the composition for inhibiting skin aging is a composition containing sequoia sprout extract, sunflower sprout extract, and kale sprout extract.
  • composition for inhibiting skin aging essentially includes Sequoia sprout extract, sunflower sprout extract, and kale sprout extract, bilberry sprout extract, peach (Peach)
  • the composition for inhibiting skin aging essentially includes Sequoia sprout extract, sunflower sprout extract, and kale sprout extract, bilberry sprout extract, peach (Peach)
  • the sprout extract is used in combination within the weight ratio, it is possible to increase the effect of delaying and improving aging as much as possible.
  • composition for inhibiting skin aging according to another embodiment of the present invention, as an active ingredient, Sequoia sprout extract, sunflower sprout extract, kale sprout extract, Bilberry sprout extract, Peach sprout extract It is a composition containing both Chinese cabbage sprout extract and broccoli sprout extract.
  • the weight ratio between the extract may be 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5.
  • the sprout extract is used in combination within the weight ratio, it is possible to increase the effect of delaying and improving aging as much as possible. As such, when all seven sprout extracts are combined, the effect of delaying and improving aging may be increased as much as possible.
  • composition containing the sprout extract according to the present invention the activity of the skin epidermal stem cells, not only promote the proliferation of skin cells, but also has the effect of increasing the antioxidant power, thereby contributing to the inhibition and improvement of skin aging It is admitted.
  • 1 is a graph showing the results of comparing the antioxidant power of the seven kinds of sprout extract according to the present invention.
  • Figure 2 shows the growth factor is increased expression by seven kinds of sprout extract in keratinocytes.
  • Figure 3 is a graph showing that the mixture of the seven kinds of sprout extract in the photo-aging animal model using hairless mice to increase the amount of collagen in the skin by inhibiting collagen degradation by ultraviolet light.
  • composition including the sprout extract according to the present invention, the sprout extract extracted from sequoia sprout, bilberry sprout, peach sprout, germinated cabbage, germinated broccoli, germinated sunflower and germinated kale as an active ingredient.
  • sprouts are the stem cells of plants. Unlike animals, plants have the potential to become stem cells for the entire plant. This is because plants have only tissues and do not differentiate into organs. Representative adult stem cells of the plant are cells at the growth point of the root or stem end, and seeds can correspond to embryonic stem cells of the animal.
  • the root, stem or leaf part can also be a stem cell that divides constantly under certain conditions, and in particular, the shoots are rich in various substances necessary for growth.
  • the present invention provides a composition containing a sprout extract excellent in activating skin epidermal stem cells and promoting the growth of skin cells, as well as increasing the expression of various growth factors affecting skin regeneration and skin aging delay. to provide.
  • Sequoia is the only species belonging to the genus Sequoia, the genus Sequoia, is a tall tree native to California. It is so vital that it can live for more than 3000 years, and in some cases more than 150 meters have been reported.
  • the thick shell of Sequoia contains tannins that keep insects out of reach, and the auxin in the tree is a natural substance that gives life and strength to the tree's longevity.
  • Bilberry is a kind of herbal medicine that is a very powerful antioxidant. It has the effect of making the capillary wall strong and flexible, and the effect of making the red blood cell wall flexible so that red blood cells do not break when passing through the capillaries is recognized. In addition, by strengthening the collagen constituting the body of the body to suppress the growth of bacteria, bring about anti-inflammatory effect, it is known to have anti-aging and anti-cancer effect. There are some examples of manufacturing cosmetic raw materials using bilberry sprout extract, but the related patents are not specifically mentioned about the beauty of the skin.
  • Peach contains polyphenols, amagdaline, camphor, beta-carotene and vitamin C. These include antioxidants, carcinogenesis, diuresis, nerve stabilization, constipation prevention and immune function enhancement. It is known to have.
  • Korean Patent No. 2007-079467 discloses the whitening activity using peach pulp
  • Korean Patent Application Publication No. 2004-039042 treats acne using peach flowers. Although some have been mentioned, no application of peach sprout extract to the skin has been reported.
  • Chinese cabbage is good for the stomach and clear the mind, relieves thirst as well as the large intestine is known to be effective in constipation.
  • Chinese cabbage contains cystine, vitamin C, soda, chlorine, and lactic acid. Among these, amino acids called cystine help to recover from fatigue. Vitamin C, soda, chlorine, and lactic acid help to keep the stomach healthy and clear the head. There is.
  • Chinese cabbage is a particularly good food in the summer to reduce the heat and quench thirst, it is known that the effect of treating the constipation by smoothing the bowel movements.
  • Korean Patent Application Publication No. 2006-02630 discloses a part of cosmetics using germinated cabbage extract, but it does not specifically provide the effects of skin aging.
  • Germinated broccoli is known to be effective in preventing cancer and suppressing cancer cells because it contains a large amount of an anticancer substance called sulfolafan. In addition, it contains beta carotene, vitamin B and C.
  • Germinated sunflower contains calcium, which is good for bones and teeth. Fat and carbohydrates improve muscle tissue and nervous system. In addition, it contains calcium, iron and iodine.
  • kale is a cruciferous vegetable known to have cancer-preventing effects, and contains a lot of vitamins, minerals, chlorophyll and dietary fiber.
  • There are patents on beauty packs and whitening cosmetics using kale but there are no patents related to beauty using germinated kale extract.
  • the method for obtaining the sprout extract according to the present invention is not particularly limited, and preferably, a method obtained from the shoots of the tree or a method obtained by germinating the seed may be used.
  • the sequoia, bilberry and peach obtain sprout extract from the shoots of the tree, and cabbage, broccoli, sunflower and kale can be obtained by germinating seeds.
  • the selected seeds are soaked in water for 6 to 10 hours, and then the cotton or cotton cloth is put together with water in a container to be incubated, and the seeds are evenly spread so that the seeds do not overlap, and the water is not dried until the sprouts are formed. Supply. At this time, cover with a black cloth or foil until the buds are about 2/3 open, and then leave it in a sunny place afterwards.
  • the water is sprayed with a nebulizer 1 to 3 times a day, and harvested after 3 to 7 days. Immediately after harvesting, they are dried or frozen and preferably frozen between minus 20 ° C and minus 30 ° C.
  • the sprouts prepared by the above method can be obtained as is or by grinding to extract through a solvent to obtain the required extract.
  • the solvent used at this time can select the solvent generally used when extracting the component of the said plant from a plant, It does not specifically limit.
  • the solvent used for example, hot water or water; Lower alcohols such as methanol, ethanol, isopropyl alcohol and n-butanol; Polyhydric alcohols such as propylene glycol and 1,3-butylene glycol; Water-containing products of these alcohols: hydrocarbon solvents such as n-hexane and toluene; and the like, and lower alcohols such as methanol and ethanol are preferably used as the extraction solvent.
  • the lower alcohol is used as the extraction solvent
  • the obtained extract can be blended into the composition according to the present invention as it is, but the extraction solvent can be combined after drying by distillation if necessary.
  • the composition containing the sprout extract is 0.001 to 10% by weight, preferably 0.01 to 10% by weight, based on the in vitro and in vivo experiments It may be contained in an amount of 5% by weight.
  • compositions according to the invention can be prepared in various forms of formulation.
  • the composition according to the invention may be a composition for oral administration.
  • the composition according to the present invention may be a cosmetic composition, a health food composition or a pharmaceutical composition.
  • the composition according to the present invention may be a cosmetic composition having a formulation of softening longevity, nourishing longevity, massage cream, nutrition cream, pack, gel or skin adhesive cosmetic.
  • the composition may be prepared in the form of a transdermal dosage form such as lotion, ointment, gel, cream, patch or spray.
  • composition of the various dosage forms in addition to the essential components described above, various materials may be selected and blended according to the formulation of the external preparation or the purpose of use without particular limitation in view of the level of skill of those skilled in the art.
  • the extract can be formulated into an oral or parenteral dosage form in solid, semi-solid or liquid form by adding a commercially available inorganic or organic carrier as an active ingredient.
  • preparations for oral administration include tablets, pills, granules, soft capsules, powders, fine granules, powders, emulsions, syrups, pellets, and the like. have.
  • preparations for parenteral administration include injections, drops, ointments, lotions, sprays, suspensions, emulsions, suppositories, and the like.
  • the active ingredient of the present invention it can be easily formulated according to the conventional method, and surfactants, excipients, coloring agents, spices, preservatives, stabilizers, buffers, suspensions, and other commonly used auxiliaries can be suitably used.
  • composition according to the present invention may be administered orally, parenteral, rectal, topical, transdermal, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, subcutaneous.
  • the dosage of the active ingredient will vary depending on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathology to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration, and the judgment of the prescriber. Dosage determination based on these factors is within the level of those skilled in the art, and generally the dosage ranges from 0.001 mg / kg / day to approximately 2000 mg / kg / day. More preferred dosages are from 0.5 mg / kg / day to 2.5 mg / kg / day.
  • the present invention also provides a functional food or food additive comprising the extract. It can be processed into fermented milk, cheese, yogurt, juice, probiotic and health supplements, including the composition comprising the gall bladder fermentation, it can be used in the form of various other food additives. Functional food or food additives containing the extract may exhibit various effects such as improvement of skin condition, inhibition of inflammation, antioxidant and anti-aging.
  • the composition may contain other ingredients and the like that can give a synergistic effect to the main effect within a range that does not impair the main effect of the present invention.
  • it may further include additives such as perfumes, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives, moisturizers, thickeners, inorganic salts, emulsifiers and synthetic polymer materials to improve physical properties.
  • additives such as perfumes, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives, moisturizers, thickeners, inorganic salts, emulsifiers and synthetic polymer materials to improve physical properties.
  • supplementary ingredients such as water soluble vitamins, oil soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides and seaweed extract may be further included.
  • the components may be appropriately selected and blended by those skilled in the art according to the formulation or purpose of use, and the amount of the additives may be selected within a range that does not impair the object and effect of the present invention.
  • the addition amount of the components may be in the range of 0.01 to 5% by weight, more specifically 0.01 to 3% by weight, based on the total weight of the composition.
  • formulation of the composition according to the present invention may also be in various forms such as solution, emulsion, viscous mixture, tablet, powder, etc., which may be administered by various methods such as simple drinking, injection, spray or squeeze method. .
  • Example 1 Skin external preparation composition containing sprout extract as an active ingredient
  • This embodiment is to effectively elute sequoia, bilberry, peach, Chinese cabbage, broccoli, sunflower and kale sprouts or germinated plant active ingredients.
  • sprouts were harvested between spring and summer in sequoia, bilberry and peach trees, and frozen and stored at -20 ° C to -30 ° C in order to prevent browning due to enzymatic reactions.
  • the shoots prepared through the above process were ground and then extracted using methanol as a solvent.
  • the solvent was distilled off from the obtained extract, and the sprout extract of each plant was prepared.
  • Example 1-1 100 ml of 95% hydrous alcohol was added to 100 g of the sprout extract prepared in Example 1-1.
  • the active ingredient was extracted by heating at 50 to 100 ° C. for 10 hours while the cooling condenser was mounted. The extracted component was filtered, concentrated under reduced pressure, and dried to obtain 5 g of bud extract.
  • a skin external composition was prepared in the composition of Table 1 below.
  • the raw materials 1 to 6 shown in Table 1 were mixed to dissolve at 70 ° C. to form an aqueous phase, and then the raw materials 7 to 14 were dissolved at 70 ° C. to obtain an oil phase. Then, the oil phase was added to the aqueous phase, stirred first with a homomixer (Tokushu Kika, Japan) and emulsified, and the raw material 15 was added to increase. After the bubble was removed, the composition was cooled to room temperature.
  • a homomixer Yamashu Kika, Japan
  • Example 1-2 Compared to Example 1-2, the external preparation composition was prepared in the same manner, except that no sprout extract was added.
  • the keratinocytes isolated from the human epidermis were placed in a 24-hole plate incubator at a concentration of 2 ⁇ 10 5 , and then cultured in DMEM medium containing 2% fetal bovine serum. Then, the sprout extract prepared in Example 1 was incubated for 48 hours after replacing with a medium containing 50 and 500 ppm concentration, respectively.
  • the negative control group which did not contain any sprout extract in the medium, was used as the positive control group by adding 10% fetal calf serum instead of 2% fetal calf serum.
  • the supernatant was removed, washed twice with phosphate buffer solution, and then 50 ⁇ l of cell lysis buffer (20 mM Tris-HCl, pH 7.4), 250 mM NaCl, 1% Triton X-100) was added. Left for 30 minutes. After washing twice with phosphate buffer solution, it was attached to the surface of the nitrocellulose membrane in a fixed amount using a vacuum apparatus.
  • the primary antibody of p63 a representative protein marker of epidermal stem cells
  • the germination kale expression was slightly reduced, but it can be seen that the expression of p63 protein was increased by the seven kinds of sprout extract. This means that the activity of epidermal stem cells is increased by the sprout extract according to the present invention, showing that the sprout extract can enhance the stem cell power of the epidermis.
  • Keratinocytes isolated from human epidermis were added to 96-well plate incubator at a concentration of 5000 per hole, and cultured in KGM (keratinocyte growth medium, Lonza) medium for 24 hours. Then, the sprout extract prepared in Example 1 was replaced with KBM (keratinocyte basal medium) medium containing 50 and 500 ppm, respectively, and cultured for 48 hours.
  • the WST-1 solution (Roche) was added 1 / 10-fold and reacted in a 37 ° C. incubator for 2 hours. The culture plate was incubated at 450 nm to quantify the proliferation of the cells. The results are shown in Table 3 below.
  • Fibroblasts isolated from human dermis were grown for 24 hours at a concentration of 5000 cells per 96-well plate incubator for 24 hours, and then incubated in DMEM medium (Welgene) containing 10% fetal bovine serum for 24 hours. Then, sprout extract was replaced with DMEM medium medium containing 1% fetal bovine serum containing 50 and 500 ppm concentration, respectively, and cultured for 48 hours.
  • the WST-1 solution (Roche) was added to 1/10 times and reacted for 2 hours in a 37 °C incubator. After the culture, the plate incubator measured the color development at 450 nm to quantify the proliferation of the cells. The results are shown in Table 4 below.
  • fibroblast proliferation was further increased when treating three or seven species together than when using sprout extract alone.
  • the sprout extract in combination was found to be very effective than the case of using a mixture of kale, sunflower, sequoias three species.
  • seven species it can be seen that it shows a better effect than the three species, it was confirmed that there is a synergy effect when using three or seven species compared to the single use.
  • Example 1 For the seven kinds of sprout extracts prepared by the method of Example 1, 100 g of dry weight was prepared by dissolving to 10% concentration in DMSO. Positive control was prepared by dissolving vitamin C in water at a concentration of 1%. Dissolving the DPPH (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl) in ethanol was adjusted to 100 ⁇ M concentration. The prepared sprout extract solution and the vitamin C solution were serially diluted in ethanol for 1/2 successive dilutions to prepare solutions at 5 concentrations, and then 10 ⁇ l of each solution and 190 ⁇ l of DPPH solution were mixed and incubated at 37 ° C. for 30 minutes. . The OD value was measured at 540 nm, and the measured result is shown in FIG. 1.
  • bilberry sprouts, germinated sunflower, sequoia sprouts, germinated kale, germinated cabbage can be confirmed that the antioxidant efficacy is excellent.
  • keratinocytes and sprout extracts were treated.
  • Media cultured for 48 hours were harvested and sprayed with at least 1 ml on a membrane for cytokine array kit (# AAH-GF-1: Ray Biotech) and incubated for 13 hours at 4 ° C. Subsequently, replace with 1 ⁇ wash buffer I (cytokine array kit, # AAH-GF-1: Ray Biotech), wash three times for 5 minutes, and then wash buffer II (cytokine array kit, # AAH-GF-1: Ray). Biotech) was washed twice for 5 minutes. A blocking buffer containing a biotin-conjugated anti-cytokine antibody was added to the prepared membrane and allowed to react at room temperature for 2 hours.
  • the membrane was washed with the washing buffer in the same manner as the previous method. After washing, the membrane was replaced with a secondary antibody buffer diluted 1000-fold using 1x blocking buffer (# AAH-GF-1: Ray Biotech) and reacted at room temperature for 2 hours. After repeating the above washing process once again, 2 ml of ECL plus reagent was sprayed, and the results were confirmed using a luminescence analyzer.
  • each sprout extract is expressed in the form of black spots.
  • Each sprout extract increases the expression of different growth factors, thereby inducing proliferation of keratinocytes.
  • Example 1 and Comparative Example 1 in which 7 kinds of sprout extracts were mixed, were prepared and applied to the back of the hairless mouse for 11 weeks with UV irradiation. UV irradiation every other day, material application was carried out every day, and after application of the material, biopsy of the back skin of hairless mice to obtain protein and Western blotting test for collagen to inhibit collagen reduction by UV The effect was confirmed, and the result is shown in FIG.
  • the composition containing the sprout extract according to the present invention increases the activity of skin epidermal stem cells, and enhances the cell proliferation of keratinocytes of the epidermis and fibroblasts of the dermis. There is. In addition, one mechanism of anti-aging, the antioxidant effect is also recognized, when using a combination of seven species was confirmed that the degradation of collagen is delayed. The proliferation of the skin cells and the enhancement of stem cell activity show that it can be used as an effective material for preventing and improving skin aging through skin wrinkle and elasticity improvement.

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Abstract

본 발명은 식물의 새싹 추출물을 함유한 조성물에 관한 것으로, 세쿼이어 새싹, 빌베리 새싹, 복숭아 새싹, 발아 배추, 발아 브로콜리, 발아 해바라기 및 발아 케일로부터 추출한 새싹 추출물을 유효성분으로 포함하고 있다. 상기 조성물은 피부 세포의 증식을 촉진하고, 피부 줄기 세포의 생존과 증식을 증진시킴으로써, 피부 노화를 지연 및 개선하는 효능이 뛰어나다.

Description

식물의 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물
본 발명은 식물의 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 세쿼이어 새싹, 빌베리 새싹, 복숭아 새싹, 발아 배추, 발아 브로콜리, 발아 해바라기 및 발아 케일로부터 추출한 새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제용 조성물에 관한 것이다.
피부 속에 있는 성체 줄기세포 중 대표적인 것이 표피 줄기세포이다. 피부의 표피와 진피 경계 부위에 위치하고 있는 표피 줄기세포는 두 개로 분열하여 하나는 표피 줄기세포로 남아 있고, 다른 하나는 계속 분열하면서 밖으로 올라가 표피 세포로 분화된다. 따라서, 발생학적인 측면에서 성체에서 유지되는 표피와 진피 경계부가 내인성 노화와 광노화에 의해서 편평해지면서 그 면적이 줄어들게 되고, 그에 따라 표피 줄기세포의 일정 부분의 소실이 관찰된다.
상기 소실된 부분을 중심으로 주름이 발생하며, 더불어 상처 치유능력이 저하되는 것으로 알려져 있다. 물론 인체가 가지는 피부의 기능을 수행하지 못할 정도로 표피 줄기세포의 수가 줄어들거나 활성이 저하되는 것은 아니지만, 미용학적인 측면에서 볼 때, 우려할 만한 수준의 문제점을 유발할 수 있다. 여기서, 표피 세포는 그 아래에 있는 진피 세포인 섬유 아세포에도 영향을 주어서 콜라겐 생성을 증진시키는데(El. Ghalbzouri, et al., J Invest Dermatol. 124: 79-86 (2005)), 소실된 표피 줄기세포로 인하여 진피층의 교원섬유와 탄력섬유의 생산이 저해되는 것으로 알려져 있다.
상기 콜라겐은 인체의 단백질 총질량 중 약 25%를 차지하는 중요한 섬유성 단백질로서, 세포외기질의 중요한 구성성분이며 결체조직의 대부분을 차지한다. 또한, 콜라겐은 건조피부 중량의 약 75%, 진피 섬유성분의 약 90%를 차지하며, 세포간 매트릭스 역할, 구조적 지지체 기능 및 피부의 인장강도 제공 등의 중요한 기능을 수행하고 있다. 이러한 콜라겐의 생성과 분해가 적절하게 조절되지 못하게 되면, 피부 탄력이 감소하고 주름이 생겨나는 등 피부노화의 주된 원인으로 작용하는 것으로 보고되고 있다(M. Tzaphlidou, Micron 35:173(2004)). 따라서, 결체조직의 구성성분인 콜라겐 생합성을 적절히 조절한다면 상당한 수준의 피부노화 개선을 기대할 수 있을 것으로 판단된다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 피부 재생에 중요한 역할을 하는 피부 표피 줄기 세포는 특징적인 단백질들을 발현하는데, 그 중에 대표적인 것으로는 p63, a6-인테그린(integrin), b1-인테그린 및 텔로머라아제(Telomerase) 등이 알려져 있다. 이러한 단백질의 발현도가 높다는 것은, 표피 줄기세포의 수가 많이 있고, 줄기세포성(stemness)이 유지된다는 것을 의미하며, 다시 말해서 피부의 재생능력이 높다는 것을 뜻한다.
이에, 본 발명에서는, 여러 가지 새싹 추출물을 이용하여 사람의 피부세포에 긍정적인 영향을 줄 수 있는지 여부를 다양한 실험을 통하여 살펴보았다.
본 출원의 발명자들은 심도 있는 연구와 다양한 실험들을 계속한 끝에, 세쿼이어 새싹, 빌베리 새싹, 복숭아 새싹, 발아 배추, 발아 브로콜리, 발아 해바라기 및 발아 케일로부터 추출한 새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 조성물이 피부 재생과 증식을 촉진함으로써 피부 노화를 억제 내지 개선할 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명의 일실시예에 따른 피부 노화 억제용 조성물은, 유효성분으로서, 세쿼이어(Sequoia) 새싹 추출물, 해바라기 새싹 추출물 및 케일 새싹 추출물을 함유한 조성물이다.
본 발명의 또 다른 일실시예에 따른 피부 노화 억제용 조성물은, 유효성분으로서, 세쿼이어(Sequoia) 새싹 추출물, 해바라기 새싹 추출물 및 케일 새싹 추출물을 필수적으로 포함하며, 빌베리(Bilberry) 새싹 추출물, 복숭아(Peach) 새싹 추출물, 배추 새싹 추출물 및 브로콜리 새싹 추출물로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 새싹 추출물을 부가적으로 더 함유한 조성물이다.
본 발명의 또 다른 일실시예에 따른 피부 노화 억제용 조성물은, 유효성분으로서, 세쿼이어(Sequoia) 새싹 추출물, 해바라기 새싹 추출물 및 케일 새싹 추출물을 필수적으로 포함하며, 빌베리(Bilberry) 새싹 추출물, 복숭아(Peach) 새싹 추출물, 배추 새싹 추출물 및 브로콜리 새싹 추출물로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 새싹 추출물을 부가적으로 더 함유한 조성물로서, 상기 새싹 추출물은 세쿼이어(Sequoia) 새싹 추출물, 해바라기 새싹 추출물 및 케일 새싹 추출물을 1~5 : 1~5 : 1~5의 중량비로 함유한 조성물이다. 여기에서 상기 중량비 이내로 새싹 추출물들이 조합되어 사용되는 경우, 노화를 지연 및 개선하는 효과를 최대한 상승시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 일실시예에 따른 피부 노화 억제용 조성물은, 유효성분으로서, 세쿼이어(Sequoia) 새싹 추출물, 해바라기 새싹 추출물, 케일 새싹 추출물, 빌베리(Bilberry) 새싹 추출물, 복숭아(Peach) 새싹 추출물, 배추 새싹 추출물 및 브로콜리 새싹 추출물 모두를 포함한 조성물이다. 이때 추출물간의 중량비는 1~5 : 1~5 : 1~5: 1~5 : 1~5 : 1~5: 1~5으로 할 수 있다. 여기에서 상기 중량비 이내로 새싹 추출물들이 조합되어 사용되는 경우, 노화를 지연 및 개선하는 효과를 최대한 상승시킬 수 있다. 이와 같이, 7종의 새싹 추출물이 모두 조합되는 경우 노화를 지연 및 개선하는 효과가 최대한 상승할 수 있다.
[발명의 효과]
본 발명에 따른 새싹 추출물을 포함한 조성물은, 피부 표피 줄기세포의 활성을 증진시키고, 피부세포의 증식을 촉진할 뿐만 아니라, 항산화력을 높이는 효과가 있으며, 이를 통해 피부노화의 억제 및 개선에 기여할 것으로 인정된다.
도 1은 본 발명에 따른 7 종의 새싹 추출물의 항산화력을 비교 실험한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 각질형성 세포에서 7 종의 새싹 추출물에 의해 발현이 증가되는 성장인자를 나타낸 것이다.
도 3은 무모생쥐를 이용한 광노화 동물모델에서 7 종의 새싹 추출물의 혼합물이 자외선에 의한 콜라겐 분해를 억제하여 피부 내 콜라겐 양을 증진시킨 것을 나타내는 그래프이다.
따라서, 본 발명에 따른 새싹 추출물을 포함한 조성물은, 세쿼이어 새싹, 빌베리 새싹, 복숭아 새싹, 발아 배추, 발아 브로콜리, 발아 해바라기 및 발아 케일로부터 추출한 새싹 추출물을 유효성분으로 포함하고 있다.
일반적으로, 새싹은 식물의 줄기 세포라고 할 수 있다. 식물은 동물과 달리 식물체 전체가 줄기 세포가 될 수 있는 가능성을 가지고 있다. 이는 식물체가 조직만을 가지고 있고 기관으로까지 분화되어 있지 않기 때문이다. 식물의 대표적인 성체 줄기 세포는 뿌리나 줄기 끝의 생장점에 있는 세포이고, 씨앗 등은 동물의 배아줄기 세포에 대응된다고 할 수 있다. 따라서, 뿌리, 줄기 혹은 잎 부분도 일정한 조건에서 끊임없이 분열하는 줄기 세포가 될 수 있으며, 특히 새싹에는 성장에 필요한 다양한 물질들이 풍부하게 포함되어 있다.
따라서, 본 발명에서는 피부 표피 줄기 세포를 활성화하고 피부세포의 성장을 촉진할 뿐만 아니라, 피부재생과 피부노화 지연에 영향을 주는 각종 성장인자들의 발현을 증가시키는 효능이 뛰어난 새싹 추출물을 함유하는 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물에 유효성분으로 함유되는 7종의 새싹에 대하여 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.
먼저, 세쿼이어(Sequoia)는 측백나무과, 세쿼이아속에 속하는 유일한 종으로 캘리포니아가 원산지인 키가 큰 나무이다. 생명력이 매우 강하여 3000년 이상 살 수 있으며, 경우에 따라서는 150 미터가 넘는 개체가 보도된 바도 있다. 세쿼이아의 두꺼운 껍질에는 벌레가 접근하지 못하도록 하는 탄닌이 들어 있으며, 나무에 함유된 옥신은 나무가 장수하도록 생기와 강인함을 주는 천연 물질이다. 세쿼이어 나무 자체를 추출하여 만든 추출액을 함유한 화장품은 일부 보고된 바 있으나, 세쿼이어 새싹의 추출물을 이용하여 피부에 적용한 예는 보고된 바 없다.
빌베리(Bilberry)는 약초의 일종으로 매우 강력한 항산화제 역할을 한다. 모세혈관 벽을 강하고 유연하게 하는 효과가 있으며, 적혈구 벽을 유연하게 만들어 적혈구가 모세혈관을 통과할 때 부서지지 않도록 하는 효능이 인정된다. 또한 우리 몸의 조직을 이루는 콜라겐을 강화하여 세균의 증식을 억제하며 항 염증 효과를 가져오고, 노화 억제와 항암 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 빌베리 새싹 추출물을 이용하여 화장품 원료를 제조한 예도 일부 있으나, 관련 특허들에는 피부 미용에 대한 내용이 특별히 언급되어 있지는 않은 실정이다.
복숭아(Peach)에는 폴리페놀류, 아마그달린, 캠페놀, 베타 카로틴 및 비타민 C 등을 함유하고 있으며, 이는 항산화 작용, 발암 방지, 이뇨작용, 신경 안정작용, 변비 예방 및 면역 기능 증강 등의 효과를 가지는 것으로 알려져 있다. 피부와 관련해서는, 예를 들어, 한국 등록특허 제2007-079467호에서는 복숭아의 과육을 이용한 미백 활성에 대한 내용이 게재되어 있고, 한국 특허출원공개 제2004-039042호에서는 복숭아 꽃을 이용한 여드름 치료 효과에 대하여 일부 언급된 바는 있으나, 복숭아의 새싹 추출물을 피부에 적용한 경우는 아직 보고된 바 없다.
배추는 위장에 좋고 정신을 맑게 하며 갈증을 덜어줄 뿐만 아니라 대소장을 원할하게 하여 변비에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 배추에는 시스틴, 비타민C, 소다, 염소 및 유산 등이 함유되어 있으며, 이중 시스틴이라는 아미노산은 피로회복에 도움을 주고, 비타민 C, 소다, 염소 및 유산 등은 위장을 건강하게 하고 머리를 맑게 하는 효과가 있다. 또한, 배추는 열을 내리고 갈증을 덜어주어 여름철에 특히 좋은 식품이며, 배변을 원활하게 하여 변비를 치료하는 효과도 있다고 알려져 있다. 특히, 발아 배추와 관련하여, 한국 특허출원공개 제2006-02630호에서는 발아 배추 추출물을 이용한 화장품에 대한 내용이 일부 게재되어 있으나, 구체적으로 피부 노화의 효능을 제공하는 것은 아니다.
발아 브로콜리는 설포라팬이라는 항암물질을 다량 함유하고 있어서 암예방과 암세포를 억제하는데 효과가 있다고 알려져 있다. 그외에도 베타카로틴, 비타민B, C 등을 함유하고 있다.
발아 해바라기는 칼슘을 함유하여 뼈와 치아에 좋고 지방과 탄수화물은 근육조직의 상태와 신경계를 좋게 한다. 그 외에도, 칼슘, 철, 요오드를 함유하고 있다. 해바라기, 특히, 씨앗을 이용한 오일 황토팩 제조 방법에 대한 관련 특허가 있으나, 발아 해바라기 추출물을 이용한 피부 미용에 관한 특허는 보고되어 있지 않다.
마지막으로, 케일은 암 예방효과가 있다고 알려진 십자화과 채소로서, 비타민, 무기질, 클로로필 및 식이섬유소 등을 많이 함유하고 있다. 케일을 이용한 미용팩이나 미백 화장품에 대한 특허는 있으나, 발아 케일 추출물을 이용한 미용 관련 특허는 없다.
본 발명에 따른 새싹 추출물을 수득하는 방법에는, 특별한 제한은 없으며, 바람직하게는 해당 나무의 싹으로부터 얻는 방법 또는 해당 씨앗을 발아시켜 얻는 방법 등이 사용될 수 있다.
하나의 실시예에서, 상기 세쿼이어, 빌베리 및 복숭아는 해당 나무의 싹으로부터 새싹 추출물을 수득하고, 배추, 브로콜리, 해바라기 및 케일은 씨앗을 발아시켜 수득할 수 있다.
상기 세콰이어, 빌베리 및 복숭아의 경우에는, 일년 중 새싹이 많이 생성되는 봄에서 여름철 사이에 수확하며, 효소 반응 등에 의한 갈변을 막기 위하여 바로 건조하거나 냉동하게 되고, 바람직하게는 영하 20℃ 내지 영하 30℃ 사이에서 냉동 보관하게 된다.
상기 배추, 브로콜리, 해바라기 및 케일의 경우에는, 별도의 넓은 재배 면적이 요구되지 않고 수경재배가 가능하다. 먼저, 선별된 씨앗을 6 내지 10시간 정도 물에 불린 후, 배양 하고자 하는 용기에 물과 함께 솜 또는 면 재질의 천을 깔고 씨앗이 겹쳐지지 않게 고르게 뿌린 다음 싹이 트기 전까지 솜 또는 천이 마르지 않도록 물을 공급한다. 이 때, 싹이 2/3 정도 트기 전까지는 검은 천이나 호일로 덮어 주고, 그 이후에는 햇볕을 잘 드는 곳에 방치한다. 하루에 1 내지 3회 정도 분무기로 물을 뿌려주면서, 3 내지 7일 정도 경과한 후에 수확하게 된다. 수확 후, 바로 건조하거나 냉동 보관하게 되며, 바람직하게는 영하 20℃ 내지 영하 30℃ 사이에서 냉동 보관한다.
상기의 방법으로 준비된 새싹들을, 그대로 또는 분쇄하여 용매를 통해 추출함으로써 필요한 추출물을 수득할 수 있다. 이때 사용하는 용매는 식물로부터 당해 식물의 성분을 추출할 때 일반적으로 사용되는 용매를 선택할 수 있으며 특별히 한정되지 않는다.
사용되는 용매로는, 예를 들면, 열수 또는 물; 메탄올, 에탄올, 이소프로필 알콜, n-부탄올 등의 저급 알콜; 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜 등의 다가 알콜; 이들 알콜류의 함수물: n-헥산, 톨루엔 등의 탄화수소계 용매 등을 들 수 있지만 메탄올이나 에탄올 등의 저급 알콜을 추출 용매로서 사용하는 것이 바람직하다. 상기 저급 알콜을 추출 용매로 사용하는 경우에는, 수득되는 추출물을 그대로 본 발명에 따른 조성물에 배합할 수 있지만, 추출 용매를 증류 제거한 다음 필요에 따라 건조 후 배합할 수 있다.
본 발명에 따른 하나의 실시예에서, 상기 새싹 추출물을 함유하는 조성물은, 시험관 실험 및 생체(in vivo) 실험을 근거로 볼 때, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%의 양으로 함유될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있다.
하나의 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 경구 투여용 조성물일 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 조성물은 화장료 조성물, 건강식품 조성물 또는 의약 조성물일 수 있다.
하나의 실시예에서, 본 발명에 따른 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있다.
또 다른 하나의 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형의 제형으로 제조될 수 있다.
상기 다양한 제형의 조성물에 있어서, 상기한 필수 구성성분 이외에도 당해 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자의 기술 수준에 비추어 특별한 제한 없이 외용제의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 다양한 물질들을 선정하여 배합할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물을 의약품에 적용할 경우에는, 상기 추출물을 유효성분으로 하여 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구 투여제 혹은 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다.
상기 경구 투여를 위한 제재로서는 정제 (錠劑), 환제 (丸劑), 과립제 (顆粒劑), 연경 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제 (乳濁濟), 시럽제, 펠렛제 등을 들 수 있다. 또한, 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 (坐劑) 등을 들 수 있다. 본 발명의 유효성분을 제제화하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존료, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.
또한, 상기 유효성분의 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 대략 2000mg/kg/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 0.5mg/kg/일 내지 2.5mg/kg/일이다.
본 발명은 또한, 상기 추출물을 포함하는 기능성 식품 또는 식품첨가제를 제공한다. 오배자 발효물을 포함하는 조성물을 포함하는 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강보조식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품첨가제의 형태로 사용될 수 있다. 상기 추출물을 포함하는 기능성 식품 또는 식품첨가제는, 피부상태의 개선, 염증의 억제, 항산화 및 항노화 등의 다양한 효능을 나타낼 수 있다.
일실시예에서 상기 조성물은, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01~5 중량%, 보다 구체적으로는 0.01~3 중량% 범위일 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 조성물의 제형 역시 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
이하, 실시예 및 실험예 등을 통해 본 발명을 더욱 상술하지만, 하기 실시예 등은 본 발명을 예시하기 위한 것이며, 본 발명의 범주가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1] 새싹 추출액을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물
1-1. 새싹 추출액의 제조
본 실시예는 세쿼이어, 빌베리, 복숭아, 배추, 브로콜리, 해바라기 및 케일의 새싹 혹은 발아 된 식물의 유효성분을 효과적으로 용출하기 위한 것이다.
먼저, 세콰이어, 빌베리 및 복숭아의 나무에서는 봄 내지 여름철 사이에 새싹을 수확하였으며, 효소 반응 등에 의한 갈변을 방지하기 위하여 영하 20℃ 내지 영하 30℃ 사이에서 냉동 보관하였다.
다음으로, 배추, 브로콜리, 해바라기 및 케일의 경우에는 선별된 씨앗을 6 내지 10시간 정도 물에 불린 후, 배양 용기에 솜을 깔고 씨앗이 겹쳐지지 않게 고르게 뿌린 다음 싹이 트기 전까지 솜이 마르지 않도록 물을 공급하였다. 싹이 2/3 정도 트기 전까지는 검은 천으로 덮어 주었고, 그 이후에는 햇볕을 잘 드는 곳에 방치하였다. 하루에 1 내지 3 회씩 분무기로 물을 뿌려주었고, 3 에서 7 일이 경과한 후 수확하여 영하 20℃ 내지 영하 30℃에서 냉동 보관하였다.
상기의 과정을 통해 준비된 새싹들을 분쇄한 후, 메탄올을 용매로 이용하여 추출하였다. 수득된 추출물에서 용매를 증류 제거하여 각 식물의 새싹 추출액을 준비하였다.
1-2. 새싹 추출물을 포함하는 외용제 조성물의 제조
상기 실시예 1-1에서 제조한 새싹 추출액 100 g에 건조 중량 대비 95% 함수 알코올 100 ml를 첨가하였다. 유효성분이 증발되는 것을 방지하기 위하여 냉각 콘덴서가 장착된 상태에서 50 내지 100℃로 10 시간 가열하여 유효성분을 추출하였다. 추출된 성분을 여과하고 감압 농축한 다음, 이를 건조하여 5 g의 새싹 추출물을 얻었다.
얻어진 새싹 추출물을 이용하여, 하기 표 1의 조성으로 피부 외용제 조성물을 제조하였다.
구체적으로는, 먼저 하기 표 1의 원료 1 내지 6을 혼합하여 70℃에서 용해하고 수상으로 한 다음, 원료 7 내지 14를 70℃에서 용해하여 오일상으로 하였다. 그런 다음, 상기 오일상을 수상에 첨가하고 호모믹서(일본 Tokushu Kika 사)로 교반하여 1차 유화하고, 원료 15를 첨가하여 점증시켰다. 기포를 제거한 후, 실온으로 냉각시켜 조성물을 제조하였다.
표 1
원료 성분 첨가량
1 정제수 to 100
2 글리세린 8.0
3 부틸렌글리콜 4.0
4 히아루론산 추출액 5.0
5 베타글루칸 7.0
6 카모머 0.1
7 7종의 새싹 추출물 농축액(중량비, 1:1:1:1:1:1:1) 0.5
8 카크릴릭 카프릭 트리글리세라이드 8.0
9 스쿠알란 5.0
10 세테아릴 글루코사이드 1.5
11 소르비탄 스테아레이트 0.4
12 세테아릴 알코올 1.0
13 방부제 적량
14 향 적량
15 트리에탄올아민 0.1
[비교예 1]
상기 실시예 1-2와 비교하여, 새싹 추출물을 첨가하지 않았다는 점을 제외하고는, 동일한 방법으로 외용제 조성물을 제조하였다.
[실험예 1] 피부 표피 줄기 세포의 활성 증가 관찰
인체 표피에서 분리한 각질형성 세포를 24 공 평판배양기에 2 x 105 개의 농도로 넣은 후, 2% 우태아혈청이 들어있는 DMEM 배지에서 배양하였다. 그런 다음, 상기 실시예 1에서 제조한 새싹 추출물이 각각 50, 500 ppm 농도로 포함된 배지로 교체한 후에 48 시간 동안 배양하였다. 음성대조군은, 상기 배지에 어떤 새싹추출물도 넣지 않은 것이고, 상기배지에 2% 우태아혈청대신 10% 우태아 혈청을 넣은 것으로 양성대조군으로 삼았다. 상층액을 제거하고, 인산 버퍼용액으로 2회 세척을 실시한 후, 세포 분해 버퍼(Cell lysis buffer; 20 mM Tris-HCl(pH 7.4), 250 mM NaCl, 1% Triton X-100) 50 ㎕를 첨가하여 30 분간 정치하였다. 다시 인산 버퍼용액으로 2 회 세척을 실시한 후, 진공장치를 이용하여 나이트로셀룰로오스 멤브레인의 표면에 일정한 양으로 부착시켰다.
상기 단백질이 부착된 표면에 블로킹 용액(Blocking solution)으로 2 시간 이상 반응시킨 후, 표피 줄기세포의 대표적인 단백질 마커인 p63의 일차 항체를 블로킹 용액에 1:500으로 현탁하여 1 시간 동안 처리하여 웨스턴 블러팅을 실시하였다.
새싹 추출액을 넣지 않은 음성대조군과 비교하여, 상대적인 p63 단백질의 발현량을 측정하여 하기 표 2에 나타내었다.
표 2
시험군 농도(ppm) 상대적 발현량(%)
음성 대조군 　 100
양성 대조군 　 120
세쿼이어 새싹 50 105.24
500 101.3
빌베리 새싹 50 98.68
500 103.84
복숭아 새싹 50 102.31
500 103.22
발아 배추 50 99.52
500 106.6
발아 브로컬리 50 114.59
500 97.5
발아 해바라기 50 99.68
500 107.34
발아 케일 50 89.11
500 84.68
상기 표 2를 참조하면, 발아 케일의 경우 발현량이 다소 감소하였지만, 7 종의 새싹 추출물에 의해 대부분 p63 단백질의 발현량이 증가하였음을 확인할 수 있다. 이는 본 발명에 따른 새싹 추출물에 의하여 표피 줄기세포의 활성이 증가된 것을 의미하며, 새싹 추출물은 표피의 줄기 세포력을 증진시킬 수 있다는 것을 보여주는 것이다.
[실험예 2] 새싹 추출물에 의한 피부 세포의 증식 증가 관찰
2-1. 각질형성 세포의 증식
인체 표피에서 분리한 각질형성 세포를 96 공 평판배양기에 1 공당 5000 개의 농도로 첨가하고, KGM(keratinocyte growth medium, Lonza) 배지에서 24 시간 배양하였다. 그런 다음, 상기 실시예 1에서 제조한 새싹 추출물이 각각 50, 500 ppm 농도로 포함된 KBM(keratinocyte basal medium) 배지로 교체한 후, 48 시간 배양하였다. 여기에 WST-1 용액(Roche)을 1/10배로 넣은 후, 37℃ 인큐베이터에서 2 시간 동안 반응시켰다. 배양이 끝난 평판 배양기는 450 nm에서 발색 정도를 측정하여 세포의 증식 정도를 정량하였다. 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
표 3
원료명 대조군 대비 상대적 발현량(%)
50 ppm 500 ppm
빌베리 새싹 106 71
복숭아 새싹 111 107
세쿼이어 새싹 102 120
발아 케일 107 129
발아 해바라기 152 173
발아 배추 148 161
발아 브로콜리 158 119
상기 표 3을 참조하면, 7 가지 추출물 각각에서 각질형성 세포의 증식이 촉진 되었음을 알 수 있다. 각각의 새싹 추출물 모두 각질형성 세포의 증식을 대략 105 내지 180%의 범위에서 증가시키는 것을 확인하였다.
2-2. 섬유아세포의 증식
인체의 진피에서 분리한 섬유아세포를 96 공 평판배양기에 1 공당 5000 개의 농도로 각각 24 시간 키운 후, 10% 우태아혈청이 들어있는 DMEM 배지(Welgene)에서 24 시간 배양하였다. 그런 다음, 새싹 추출물이 각각 50, 500 ppm 농도로 포함된 1% 우태아혈청이 들어있는 DMEM 배지 배지로 교체한 후, 48 시간 배양하였다. 여기에 WST-1 용액(Roche)을 1/10배로 넣은 후, 37℃ 인큐베이터에서 2 시간 동안 반응 시켰다. 배양이 끝난 평판 배양기는 450 nm에서 발색 정도를 측정하여, 세포의 증식 정도를 정량하였다. 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
표 4
원료명 대조군 대비 상대적 발현량(%)
50 ppm 500 ppm
빌베리 새싹 96.32 91.81
복숭아 새싹 109.56 110.65
세쿼이어 새싹 106.36 108.05
발아 케일 116.69 134.08
발아 해바라기 85.99 106.85
발아 배추 102.75 124.56
발아 브로콜리 101.54 123.22
상기 표 4를 참조하면, 빌베리 새싹을 제외한 6 가지 추출물 각각에서 섬유아세포의 증식이 촉진되었음을 알 수 있다. 상기 새싹 추출물에 의하여 대략 105 내지 130%의 범위에서 섬유아세포의 증식이 증가되었음을 확인하였다.
2-3. 새싹 추출물 복합체의 섬유아세포의 증식 시너지 효과 확인
상기 실험예 2-2와 동일한 방법으로 세포를 준비하였다. 그런 다음, 새싹 추출물중 케일, 해바라기 및 세쿼이어 추출물을 각각 10ppm씩 단일 혹은 3종 추출물의 조합(중량비 1:1:1), 혹은 상기 실험예 2-2에서 사용한 7종 추출물의 조합(중량비 1:1:1:1:1:1:1)이 각 10 ppm 농도로 포함된 1% 우태아혈청이 들어있는 DMEM 배지로 교체한 후, 48 시간 배양하였다. 음성대조군은 1% 우태아혈청을 의미하며, 양성대조군은 10% 우태아혈청을 사용하였다. 우태아혈청은 세포배양시 필수적으로 넣어주는 물질로, 다양한 성장인자를 포함한 성장에 영향을 주는 물질들이 포함되어 있어, 세포증식에 효과가 매우 뛰어나다. 일반적으로 세포를 증식시켜야 하는 조건에서 10% 우태아혈청을 사용한다. 여기에 WST-1 용액(Roche)을 1/10배로 넣은 후, 37℃ 인큐베이터에서 2 시간 동안 반응 시켰다. 배양이 끝난 평판 배양기는 450 nm에서 발색 정도를 측정하여, 세포의 증식 정도를 정량하였다. 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
표 5
원료명 음성대조군 대비 상대적 발현량(%)
각 10ppm
양성대조군 125.82
발아 케일 108.18
발아 해바라기 84.36
세쿼이어 새싹 101.45
케일+ 해바라기 + 세쿼이어의 3종 추출물 조합 (중량비 1:1:1) 126.12
7종 추출물 조합 (중량비 1:1:1:1:1:1:1) 130.67
상기 표 5를 참조하면, 새싹 추출물을 단독으로 사용했을 때보다, 3종 혹은 7종을 함께 처리시 섬유아세포의 증식이 더욱 증가 되는 것이 확인 되었다. 특히 새싹추출물을 조합해서 사용할 경우 케일, 해바라기, 세쿼이어 3종을 혼합하여 사용하는 경우 각각을 사용하는 경우보다 효과가 매우 뛰어남을 알 수 있었다. 즉, 3종을 혼합하여 사용시 세포증식효과가 매우 뛰어난 양성대조군인 우태아 혈청에 비해 우수한 효과가 있었다. 또한, 7종의 경우 3종에 비해 더 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있어 단독사용에 비해 3종 또는 7종 사용시 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
[실험예 3] 새싹 추출물의 항산화력 측정
상기 실시예 1의 방법으로 제조된 7 종의 새싹 추출물에 대하여, 건조 중량 100 g을 DMSO에 10% 농도가 되도록 녹여 준비하였다. 양성 대조군은 비타민 C를 물에 녹여 1% 농도로 준비하였다. DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)를 에탄올에 녹여서 100 μM 농도가 되도록 하였다. 준비된 새싹 추출물 용액과 비타민 C 용액을 에탄올로 1/2 연속 희석(serial dilution)하여 5 개 농도로 용액을 만든 다음, 각각의 용액 10 ㎕와 DPPH 용액 190 ㎕를 혼합하여 37℃에서 30 분간 인큐베이션 하였다. 540 nm에서 OD값을 측정하고, 측정된 결과를 하기 도 1에 나타내었다.
도 1을 참조하면, 빌베리 새싹, 발아 해바라기, 세쿼이어 새싹, 발아 케일, 발아 배추순으로 항산화 효능이 뛰어난 것을 확인할 수 있다.
[실험예 4] 각질형성 세포에서의 각종 성장인자 발현 증가 관찰
상기 실험예 2와 동일한 방법으로 각질형성 세포와 새싹 추출물을 처리하였다. 48 시간 동안 배양된 배지를 수거 하여 사이토카인 어레이(cytokine array kit, #AAH-GF-1: Ray Biotech)용 멤브레인 상에 최소 1 ml을 뿌리고 4℃에서 13 시간 동안 인큐베이션 하였다. 그런 다음, 1x 세척 버퍼 I(cytokine array kit, #AAH-GF-1: Ray Biotech)로 교체한 후 5 분씩 세 번 씻어준 다음, 세척 버퍼 II(cytokine array kit, #AAH-GF-1: Ray Biotech)로 멤브레인을 5 분씩 두 번 씻어주었다. 이렇게 준비된 멤브레인에 1차 항체(Biotin-conjugated anti-cytokine antibody)가 포함된 블로킹 버퍼를 넣어 상온에서 2 시간 동안 반응 시켰다. 반응이 끝난 멤브레인은 앞에서 사용한 방법과 동일하게 세척 버퍼로 세척하였다. 세척이 끝난 멤브레인은 1x 블로킹 버퍼(cytokine array kit, #AAH-GF-1: Ray Biotech)를 이용하여 1000 배 희석된 2 차 항체 버퍼로 교체하여 상온에서 2 시간 동안 반응시킨다. 앞에서 실시한 세척 과정을 다시 한번 반복한 후, ECL plus 시약을 2 ml 뿌리고, 발광분석기를 이용하여 결과를 확인하였다.
본 실험예에서 사용한 사이토카인 어레이(Cytokine array; Ray biotech)의 맵(map)은 하기 표 6에 나타내었다(사이토카인 어레이의 맵(ray biotech.)). 또한, 실험 결과는 하기 도 2에 도시하고, 그 결과를 하기 표 7에 정리하였다.
표 6
Figure PCTKR2009000912-appb-T000001
표 7
새싹 추출물의 종류 발현이 증가되는 성장인자
세쿼이어 새싹 bFGF, EGF, PDGF-AB, TGFb, TGFb2, VEGF
발아 해바라기 EGF, FGF4, IGFBP-6, PDGF-rb. PIGF
복숭아 새싹 bFGF, EGF, FGF4
발아 케일 FGF4, IGFBP-2, PDGF-AA,
발아 브로콜리 FGF4
빌베리 새싹 EGF, TGFb-2
발아 배추 IGF-II
도 2와 표 7을 함께 참조하면, 각각의 새싹 추출물에 의하여 주요하게 발현되는 성장인자들이 검은 반점의 형태로 발현되어 있는 것을 확인할 수 있다. 각각의 새싹 추출물들은 서로 다른 성장인자들의 발현을 증가시키며, 이를 통해 각질형성 세포의 증식을 유도함을 알 수 있다.
[실험예 5] 무모생쥐 광노화 동물모델을 이용한 콜라겐 감소 억제 확인
실제 자외선에 의한 피부 주름 콜라겐 분해 억제 효능을 알아보기 위해서 약 7주령의 무모생쥐(SKH-1 female hairless mouse)를 이용하여 도포시험을 실시하였다. 상기의 표 1에서와 같이 새싹 추출물 7종이 복합되어 함유된 실시예 1 및 비교예 1을 조제하여 무모생쥐의 등부위에 자외선조사와 함께 11주간 도포하였다. 자외선 조사는 격일로, 물질도포는 매일 진행하였고 또한 물질 도포가 끝난 후 무모생쥐의 등부위 피부를 생검하여 단백질을 얻은 후 콜라겐에 대한 웨스턴 블라팅(western blotting) 실험을 통해 자외선에 의한 콜라겐 감소 억제 효과를 확인하였으며, 그 결과는 도 3에 나타내었다.
도 3을 통해, 7종의 새싹추출물을 함께 복합으로 처리한 경우가 대조군(비교예)에 비해 자외선에 의한 피부 내 콜라겐 감소가 회복됨을 확인할 수 있었다.
상기 실험예 1 내지 5의 결과를 종합하면, 본 발명에 따른 새싹 추출물을 함유한 조성물은 피부 표피 줄기 세포의 활성을 증가시키고, 표피의 각질형성 세포와 진피의 섬유아세포의 세포 증식을 증진하는 효과가 있다. 또한, 노화방지의 하나의 기작인 항산화 효능도 인정되며, 7종을 복합적으로 사용시 콜라젠의 분해가 지연됨을 확인할 수 있었다. 이러한 피부세포의 증식과 줄기세포 활성의 증진은 피부주름 및 탄력개선을 통해 피부 노화방지 및 개선에 효과적인 물질로 활용할 수 있음을 보여주는 것이다.

Claims (9)

  1. 유효성분으로서, 세쿼이어(Sequoia) 새싹 추출물, 해바라기 새싹 추출물 및 케일 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 피부 노화 억제용 조성물은,
    유효성분으로서, 빌베리(Bilberry) 새싹 추출물, 복숭아(Peach) 새싹 추출물, 배추 새싹 추출물 및 브로콜리 새싹 추출물로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 새싹 추출물을 더 함유한 것을 특징으로 하는 피부 노화 억제용 조성물.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 새싹 추출물은 세쿼이어(Sequoia) 새싹 추출물, 해바라기 새싹 추출물 및 케일 새싹 추출물을 1~5 : 1~5 : 1~5의 중량비로 함유하는 것을 특징으로 하는 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 새싹 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 새싹 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 5 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 새싹 추출물은 열수, 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매에 온침으로 추출, 여과하고 감압 농축하여 제조되는 것을 특징으로 하는 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물.
  7. 제 2 항에 있어서,
    상기 새싹 추출물은, 세콰이어, 빌베리 및 복숭아는 해당 나무의 새싹으로부터 추출하고, 배추, 브로콜리, 해바라기 및 케일은 해당 씨앗을 발아시켜 추출하는 것을 특징으로 하는 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물.
  8. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형인 것을 특징으로 하는 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물.
  9. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제인 것을 특징으로 하는 새싹 추출물을 함유한 피부 노화 억제용 조성물.
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