CN107440963A - 一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮及其制备方法和应用，包含以下制备步骤：(1)将柿叶残渣，经过干燥粉碎得到柿叶残渣粉末；(2)将柿叶残渣粉末，加入8倍重量份的无水乙醇，均匀分散后，在75℃水浴恒温煎煮2次，各1～2小时，过滤得滤液；(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；(4)将浓缩液置于分液装置中，加入有机萃取剂进行萃取，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。本发明具有抑制酪氨酸酶、清除自由基、减少活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)，同时增加过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH‑Px)，起到美白抗衰老的功效。

Description

一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮及其制备方法和应用。
背景技术
柿叶为柿树科柿树属植物柿的新鲜或干燥叶。柿叶的主要成分包含机酸类、黄酮类、三萜类、多酚类、挥发性成分、脂肪酸、香豆素类、植物甾醇、多糖以及胡萝卜素等，其医疗保健作用主要有治疗心脑血管疾病、抗氧化、抗癌、活血止血、抗菌、解热、抗老化、防晒等。
柿叶黄酮(PLF)对酪氨酸酶的抑制效果明显，其IC50值为2.38mg/mL，抑制作用属于可逆过程，其抑制类型为混合型，KI为0.33，KIS为0.48。研究表明，PLF对(DPPH·)、超氧阴离子自由基(O2-·)和羟自由基(·OH)均有较好的清除率，对Cu2+有较强的络合能力。说明PLF对酪氨酸酶的抑制与其较强的抗氧化能力及其络合金属离子的能力有关。
柿叶黄酮具有清除自由基的能力，其提取物(TFPL)能明显减少活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)，同时增加过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)，这进一步说明柿叶黄酮是一种优良的抗氧化剂。
发明内容
基于此，本发明的目的在于提供一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的制备方法，包含以下制备步骤：
(1)将柿叶残渣，经过干燥粉碎得到柿叶残渣粉末；
(2)将柿叶残渣粉末，加入8倍重量份的无水乙醇，均匀分散后，在75℃水浴恒温煎煮2次，各1～2小时，过滤得滤液；
(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；
(4)将浓缩液置于分液装置中，加入有机萃取剂进行萃取，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。
在其中一些实施例中，所述柿叶残渣为柿叶经过水提取后剩余的残渣。
在其中一些实施例中，所述步骤(1)中的柿叶残渣的干燥粉碎具体为：30～40℃热泵干燥后，粉碎并过60～80目筛。
在其中一些实施例中，所述步骤(2)中的柿叶残渣粉末的提取过程中添加有0.005～0.015％的纤维素酶。
在其中一些实施例中，所述步骤(4)中的萃取步骤为使用丙酮进行1～5次萃取。
本发明还提供了根据上述制备方法所制得的具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮。
本发明还提供了上述具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮在制备化妆品中的应用。
在其中一些实施例中，所述化妆品剂型包括膏霜、乳液、水剂。
本发明还提供了一种化妆品，其包括如前所述的具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮。
本发明还提供了一种美白隔离霜，包含如下质量百分比成分：如前所述的具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮0.5～3％、甘油1～5％、尿囊素1～5％、丁二醇1～5％、液体石蜡0.05～0.5％、异十六烷1～5％、聚二甲基硅氧烷0.05～3％、辛酸/癸酸甘油三酯1～5％、二氧化钛1～2％、滑石粉3～5％、聚甘油-3二异硬脂酸酯1～5％、矿脂1～5％、聚甘油-2二聚羟基硬脂酸酯0.5～3％、聚二甲基硅氧烷醇2～4％、聚甲基硅氧烷1～2％、硬脂酸镁1～5％、氢化卵磷脂0.5～5％、烟酰胺1～5％、氢氧化铝0.8～1％、硫酸镁0.1～1％、羟苯甲酯0.1～0.2％、羟苯乙酯0.1～0.2％、羟苯丙酯0.1～0.2％、咪唑烷基脲0.1～0.5％、去离子水余量。
本发明具有以下有益效果：本发明通过发明人大量的实验以及经验优选了制备方法的各种条件，得到了优化的制备方法，加入酶进行酶促催化，有助于有效成分柿叶黄酮的析出，提高柿叶黄酮提取率。本发明对酪氨酸酶的抑制效果明显，能够有效减少黑色素的生成，起到美白作用；对(DPPH·)、超氧阴离子自由基(O2-·)和羟自由基(·OH)均有较好的清除能力，能够延缓皮肤老化，保持皮肤弹力和光滑；能明显减少活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)，同时增加过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)，起到抗衰老功效。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步阐述：
文中所出现的所有成分均为INCI(International Nomenclature CosmeticIngredient)，即国际化妆品原料明明说对其规定的名称。
实施例1
一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的制备方法，包含以下制备步骤：
(1)将水提后剩余的柿叶残渣，35℃热泵干燥后，粉碎过70目筛得柿叶残渣粉末；
(2)将柿叶残渣粉末，加入8倍重量份的无水乙醇，加入0.01％的纤维素酶，均匀分散后，在75℃水浴恒温煎煮2次，各1.5小时，过滤得滤液；
(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；
(4)将浓缩液置于分液装置中，加入丙酮进行萃取3次，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。
实施例2
一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的制备方法，包含以下制备步骤：
(1)将水提后剩余的柿叶残渣，30℃热泵干燥后，粉碎过60目筛得柿叶残渣粉末；
(2)将柿叶残渣粉末，加入8倍重量份的无水乙醇，加入0.005％的纤维素酶，均匀分散后，在75℃水浴恒温煎煮2次，各1小时，过滤得滤液；
(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；
(4)将浓缩液置于分液装置中，加入丙酮进行萃取2次，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。
实施例3
一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的制备方法，包含以下制备步骤：
(1)将水提后剩余的柿叶残渣，40℃热泵干燥后，粉碎过80目筛得柿叶残渣粉末；
(2)将柿叶残渣粉末，加入8倍重量份的无水乙醇，加入0.015％的纤维素酶，均匀分散后，在75℃水浴恒温煎煮2次，各2小时，过滤得滤液；
(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；
(4)将浓缩液置于分液装置中，加入丙酮进行萃取5次，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。
对比例1
一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的制备方法，包含以下制备步骤：
(1)将水提后剩余的柿叶残渣，25℃热泵干燥后，粉碎过50目筛得柿叶残渣粉末；
(2)将柿叶残渣粉末，加入5倍重量份的无水乙醇，加入0.004％的纤维素酶，均匀分散后，在80℃水浴恒温煎煮2次，各3小时，过滤得滤液；
(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；
(4)将浓缩液置于分液装置中，加入丙酮进行萃取3次，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。
对比例2
一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的制备方法，包含以下制备步骤：
(1)将水提后剩余的柿叶残渣，35℃热泵干燥后，粉碎过70目筛得柿叶残渣粉末；
(2)将柿叶残渣粉末，加入8倍重量份的无水乙醇，在75℃水浴恒温煎煮2次，各1.5小时，过滤得滤液；
(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；
(4)将浓缩液置于分液装置中，加入丙酮进行萃取3次，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。
对比例3
一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的制备方法，其特征在于，包含以下制备步骤：
(1)将水提后剩余的柿叶残渣，35℃热泵干燥后，粉碎过70目筛得柿叶残渣粉末；
(2)将柿叶残渣粉末，加入8倍重量份的70％乙醇，加入0.02％的纤维素酶，均匀分散后，在75℃水浴恒温煎煮2次，各1小时，过滤得滤液；
(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；
(4)将浓缩液置于分液装置中，加入丙酮进行萃取3次，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。
结果分析：实施例1-3和对比例1-3的制备条件具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的含量如下表1。
表1
由表1数据分析可知：实施例1-3的制备条件下得到的柿叶黄酮的含量明显比对比例1-3的制备条件下得到的柿叶黄酮的含量明显要高；对比例1改变了制备工艺的所有参数，结果对比例1得到柿叶黄酮的含量明显低于实施例1；对比例2中没有加入纤维素酶，但是对比例2的柿叶黄酮的提取量比实施例1明显少，加入酶进行酶促催化，有助于有效成分柿叶黄酮的析出，提高柿叶黄酮提取率；对比例3也改变制备参数，但是得到柿叶黄酮的含量较少且杂质较多，说明发酵条件是影响提取率的重要因素之一；而经过多次的变化工艺参数，步骤等实验，得到本发明要保护的制备方法。
将实施例1-3制备得到的具有抗辐射抗衰老活性的柿叶黄酮应用在制备美白隔离霜中，具体如下表2。
表2
功效验证
抗老化能力测定：
原理：DPPH含有奇数电子的稳定自由基，利用其甲醇溶液在517nm可见光下具有极强的吸光度，但当与其任一自由基结合或被抗氧化剂还原时，其吸光度会下降；吸光度越低，表示样品清除DPPH的能力越强。
步骤：取0.2ml柿叶黄酮、2moL/L隔离霜稀释液，VE作为对照组，分别加入2L甲醇溶液和1L DPPH甲醇溶液(2x10-4mol/L)，充分混合均匀，静置30分钟后，以分光光度计测517nm处吸光度，并计算自由基清除率。
自由基清除率(％)＝[Ac-As/Ac]x100％；
As:含有待测物的样品在517nm处的吸光度；
Ac：不含有待测物的样品在517nm处的吸光度。
结果如下表3。
表3
成分 柿叶黄酮 隔离霜 VE
清除率％ 92.4 86.8 96.3
由表3数据分析可知，柿叶黄酮的DPPH的清除率比VE稍低，但是从清除率数据来分析，柿叶黄铜具有显著的抗老化作用，将其应用在化妆品隔离霜中，能赋予化妆品良好的抗老化效果。
络合亚铁离子能力：
原理：Fe2+通常为较好的促氧化剂，可以促使脂质氧化作用进行。利用Fe2+与菲咯嗪复合物子啊562nm处有呈色反应，可测得样品对Fe2+的络合能力。当样品络合Fe2+会造成吸光度降低，吸光度高表示络合能力越好。
步骤：取不同0.2mol/l的柿叶黄酮，0.2mol/L隔离霜稀释液，各加入0.1ml的FeCl2，30s后加入0.2ml(5mmol/L)的菲咯嗪反应，10min后，使用分光光度计检测吸光度，空白试验以样品溶剂取代样品。
结果如下表4。
表4
成分 柿叶黄酮 隔离霜 VE
络合率％ 89.7 82.5 90.2
由表4数据分析可知，柿叶黄酮和隔离霜对黑色素的生成途径中的亚铁离子有很好的络合能力，反映了产品的美白作用。
抑制酪氨酸酶能力：
原理：络氨酸转化成黑色素的过程中，络氨酸酶的催化作用主要发生在络氨酸酶转化为多巴及多巴转化成多巴醌的过程，多巴醌为一种有色物质，在475nm处有吸收，可利用分光光度计测量含量。L-DOPA为底物，测定防晒霜的络氨酸酶抑制活性。
方法：准确吸取隔离霜并用磷酸缓冲液稀释成不同浓度的液体，分别稀释为原体积1倍、3倍、5倍、7倍，在30℃水浴中孵育10分钟后加入300μ/mL的络氨酸酶溶液，继续培育十分钟，立即在475nm测定其吸光值。
结果如下表5。
表5
组别 1倍 3倍 5倍 7倍 空白
抑制率％ 85.3 80.2 75.1 70.6 9.8
由表5的数据分析可知：隔离霜有良好的抑制酪氨酸酶的作用，间接反映了其隔离防晒效果好。
为了更近一步验证其效果，采用受试者感官评价产品的功效。
选择20名健康的志愿者，年龄在20-45岁，身体健康，试验产品一个月，在第30天时做产品功效自评。结果有18名志愿者认为隔离霜有优异的隔离防晒效果，使用后皮肤更加水润、有弹性。
以上实施例仅表明本发明的几种实施例，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利的限制范围。应当指出的是：任何从事本专业的技术人员，都有能力利用已揭示的技术内容，对其作出一些更动或修饰，成为等同变化的等效实施例。根据本发明技术实质，对本发明进行简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮的制备方法，其特征在于，包含以下制备步骤：
(1)将柿叶残渣，经过干燥粉碎得到柿叶残渣粉末；
(2)将柿叶残渣粉末，加入8倍重量份的无水乙醇，均匀分散后，在75℃水浴恒温煎煮2次，各1～2小时，过滤得滤液；
(3)将滤液采用旋转蒸发仪回收液中乙醇溶液，得浓缩液；
(4)将浓缩液置于分液装置中，加入有机萃取剂进行萃取，弃去有机层，减压浓缩，真空冷冻干燥，得柿叶黄酮。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述柿叶残渣为柿叶经过水提取后剩余的残渣。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述柿叶残渣的干燥粉碎具体为：30～40℃热泵干燥后，粉碎并过60～80目筛。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述柿叶残渣粉末的提取过程中添加有0.005～0.015％的纤维素酶。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述萃取步骤为使用丙酮进行1～5次萃取。
6.根据权利要求1～5任一项所述制备方法所制得的具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮。
7.根据权利要求6所述的具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮在制备化妆品中的应用。
8.根据权利要求7所述的具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮在制备化妆品中的应用，其特征在于，所述化妆品剂型包括膏霜、乳液、水剂。
9.一种化妆品，其特征在于，包括有权利要求6所述的具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮。
10.一种美白隔离霜，其特征在于，所述美白隔离霜包含如下质量百分比成分：权利要求6所述的具有美白抗衰老活性的柿叶黄酮0.5～3％、甘油1～5％、尿囊素1～5％、丁二醇1～5％、液体石蜡0.05～0.5％、异十六烷1～5％、聚二甲基硅氧烷0.05～3％、辛酸/癸酸甘油三酯1～5％、二氧化钛1～2％、滑石粉3～5％、聚甘油-3二异硬脂酸酯1～5％、矿脂1～5％、聚甘油-2二聚羟基硬脂酸酯0.5～3％、聚二甲基硅氧烷醇2～4％、聚甲基硅氧烷1～2％、硬脂酸镁1～5％、氢化卵磷脂0.5～5％、烟酰胺1～5％、氢氧化铝0.8～1％、硫酸镁0.1～1％、羟苯甲酯0.1～0.2％、羟苯乙酯0.1～0.2％、羟苯丙酯0.1～0.2％、咪唑烷基脲0.1～0.5％、去离子水余量。
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