CN100594919C - 含有枸杞提取活性物质的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了枸杞提取物，用于抑制、干扰和/或控制细胞组织的病理性血管新生或新血管形成。通过把有效量的枸杞提取物送入到细胞或组织中，本发明还提供了一种抑制组织中新血管形成的方法。这里提供的还有一种通过向受治者投入有效量的枸杞提取物而治疗内皮细胞高增生和/或新血管形成相关的某种疾病之方法。

Description

含有枸杞提取活性物质的药物组合物及其应用

发明领域

本发明涉及到枸杞(Lycium barbarum)提取物、其药物组合物及其应用。枸杞提取物具有抗血管新生之性能，可用于防止和/或治疗癌细胞转移及与病理性血管新生和新血管形成相关的健康类疾病，由此本发明亦涉及新血管及癌细胞转移病理形成的新奇干预治疗法。

发明背景

构杞(Lycium barbarum)的药物学名称为Fructuslycii，通常称为枸杞子，主要源自亚洲(宁夏、甘肃、青海、西藏、内蒙古和河北)，但现在美国许多地区也在广泛种植。亚洲人几千年前就开始使用枸杞和甘草强身健体。枸杞是一种传统中药，能够改善视力，防止因肝脏和肾脏疾病引起的头痛和头晕症状。枸杞在治疗轻度糖尿病方面也具有一定疗效。相信枸杞能够改善和调节免疫系统；降低血脂含量；保护肝脏功能；在化疗过程中增加白细胞数量；降低血糖和血压。

血管新生是一个新血管生成的过程，即原先已有血管的派生物。在这一过程中，当蛋白水解酶进行降解作用时，内皮细胞逐渐与基底膜产生分离。然后，这些内皮细胞游离于母体血管之外，分裂并形成一种新的变异血管组织(Risau，(1997)《自然》386：671-674；Wilting等，(1995)《细胞分子生物学》，参考41(4)：219-232)。目前发现，多种不同的生物因子都对控制血管的形成产生作用(Bussolino等，(1997)“生物化学的发展趋势”，《科学》，22(7)：251-256；Folkman和D’Amore，(1996)细胞87：1153-1155)。这些生物因子包括具有不同功能的蛋白质，如生长因子、细胞表面受体、蛋白酶、蛋白酶抑制物和细胞外母体蛋白质(Achen和Stacker，(1998)Int.J.Exp.Pathol.79：255-265；Devalaraja和1Richmond，(1999)发展趋势；《科学》，20(4)：151-156；Hanahan，(1997)《科学》277：48-50；Maisonpierre等，(1997)《科学》277：55-60；Suri等，(1996)细胞87：1171-1180；Sato等，(1995)《自然》376：70-74；Mignatti和Rifkin，(1996)酶蛋白49：117-137；Pintucci等，(1996)Semin Thromb Hemost22(6)517-524；Vernon和Sage，(1995)《美国药理学期刊》147(4)：873-883；Brooks等，(1994)《科学》264：569-571；Koch等，(1995)《自然》376：517-519)。

血管新生参与了许多基本的生理活动，如发育、繁殖及伤口愈合等。在正常的条件下，血管新生都是在严格控制及高度调节的方式发生的，一般是在胚胎发育期间、成长期间以及一些特殊的情形下，如伤口愈合及女性生殖周期中(Wilting和Christ，(1996)《自然科学》83：153-164；Goodger和Rogers，(1995)《微循环》2：329-343；Augustin等，(1995)《美国药理学期刊》147(2)：339-351)。

然而，许多疾病或健康失调，如癌细胞转移、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎和其它诸如牛皮癣之类的感染疾病等，都是由长期没有规律的血管新生引起的(Folkman，(1995)《自然医学》1(1)：27-31；Polverini，(1995)《风湿病学》38(2)：103-112；Healy等，(1998)《人类生殖新知》4(5)：736-396)。例如，在风湿性关节炎中，新的毛细血管侵袭关节并破坏了软骨组织。在糖尿病视网膜病变中，视网膜中的新毛细血管入侵玻璃状体，造成出血并引起失明。因此，对病理性血管新生进行有效的治疗干预、控制和/或抑制可以减轻许多重要的疾病。

这一血管新生的过程为控制体内血管形成的干预性治疗提供了节点。在实验模式中，我们发现了控制血管形成的血管新生蛋白质抑制剂如血管阻断素(O’Reilly等，(1994)《细胞》79(2)：315-328)内皮抑素(O’Reilly等，(1997)《细胞》88(2))。不过，这类蛋白质疗法生产起来非常昂贵，且发现它们很难配制，很难注射到患者体内。目前，蛋白质血管新生抑制剂并没有发展成为治疗患者疾病的药物。因此，我们仍然需要一种可以安全地投入到患者体内并可以有效地抑制、干预、修改和/或控制血管内皮细胞病理性生长的治疗物质。我们目前的发明提供了适用于这一目的的组合物及方法。

发明内容

根据目前的发明，我们发现，枸杞提取物可以抑制癌细胞转移、内皮细胞的生长及增生以及血管生成的过程。目前的发明提供了一种抑制、修改和/或控制内皮细胞病理性增生的方法，包括将有效量的枸杞提取物送到内皮细胞中的方法。在本发明的范围内，我们提供的是一种抑制一个细胞组织内新血管形成的方法，包括将有效量的枸杞提取物送到内皮细胞中的方法。通过投入有效量的枸杞提取物到一个患者体内，我们可以实践抑制、修改和/或控制内皮细胞病理性增生的方法及抑制细胞组织内新血管形成的方法。其中每种方法可以进一步地包括一种针对患者的抗血管生成、抗新血管生成或抗肿瘤疗法的应用，在此，枸杞提取物可以增强抗血管生成、抗新血管生成或抗肿瘤疗法的治疗效果。抗血管生成、抗新血管生成或抗肿瘤疗法包括a)，投入一种除枸杞提取物外的抗血管生成剂或抗新血管生成剂(例如，放射疗法、抗癌新药Avastin、鲨鱼软骨的硫酸胺沉淀物、鲨鱼软骨提取物、Shimeji DEAEalpha、Shimeji Mono-Qalpha、3-氨基苯甲酰胺和顺铂-cisplatin)给患者；b)投入一种抗肿瘤化疗剂给患者；或c)为患者采用放射性疗法。

通过给患者投入有效量的枸杞提取物或其药物组合物，本发明还提供了治疗与内皮细胞病理性增生和/或新血管生成相关的疾病之方法。同时，这一方法还进一步包括为患者采用的一种抗肿瘤、抗血管生成或抗新血管生成的疗法，这一疗法可以包括化学疗法、放射性疗法或投入一种除枸杞提取物之外的抗血管生成或抗新血管生成剂等方法。而枸杞提取物可以提高抗肿瘤、抗血管生成或抗新血管生成疗法的效果。

本发明还提供了一种防止及抑制癌细胞转移的方法，包括为癌症患者投入有效量的枸杞提取物。

在本发明的范围内，我们还提供了包括有效量枸杞提取物以及在治疗中使用这种提取物的说明书的药盒。这些药盒对治疗那些患有与内皮细胞和/或新血管生成过度增生相关的疾病非常有用。

本发明进一步提供的是一种筛选识别新治疗药剂的方法以确认它们与枸杞提取物具有相同的、类似的或更好的治疗效果。这种筛选方法包括把这一药剂对内皮细胞增生的效果与枸杞提取物的抗增生效果进行比较。

附图说明

图1显示枸杞含水提取物在内皮细胞测定试验中对内皮细胞增生基于浓度的抑制效果。

本发明之详细描述

在本专利说明书及权利要求中，除非文中另行说明，否则所有单数形式如”a”、”an”和”the”等均包含复数含义。例如，“某个细胞”虽然为单数形式，但同样包含该细胞的复数含义以及单数和复数混合使用的含义。本发明还提供了包含本发明的枸杞提取物的产品，其发明的方法在操作时可以使用这一产品而不是提取物。在此，当过渡词“包含”指的是一种方法、物质或本发明的组合物时，则该方法、该物质或该组合物既包括了详细列举的各个要素，但也并没有将其他未详细列举的要素排除在外。

发明还提供了基本上由本发明的枸杞提取物组成的一种药物组合物产品，其发明的方法在操作时可以使用这一产品而不是提取物。这里的过渡短语“基本上由......组成”当用来定义本专利申请中本发明的一种组合物、物质或方法时，它表示既包含了详细列举的各个要素，也没有将实质上没有对本发明基本及新颖特性产生影响的那些未详细列举的要素排除在外。因此，一种基本上由枸杞提取物或医学上可以接受的载体组成的专利申请组合物不应将来自提取物或本质上不影响该组合物之病理性血管形成抑制性能的物质如磷酸缓冲液、防腐剂和氯化钠的制备步骤中如分离和提纯方法中产生的微量污染物排除在外。

术语“分离”在指称一种天然物质时，其含义指这一自然物质从组合物、细胞及其他与化合物天然结合的成分中单独分离。

“受试者”或“宿主”为脊椎动物，最好是哺乳动物或人类，人类患者最佳。哺乳动物包括(但不仅限于)鼠类、猿猴类、马、牛、猪、羊、畜类、竞技类动物、宠物及人类，如人类患者。

术语“肿瘤”及“赘生物”可交换使用，既可用作单数也可用作复数形式，它是指细胞的异常生长，通常产生一种细胞组织堆积块，既可能是良性的，也可能是恶性的。

术语“癌症”既可用作单数也可用作复数形式，它是指经历了恶性病变的一个细胞聚合体。在本发明中，一个癌症细胞的定义不仅包括原代癌细胞，而且指源自癌细胞原种的任何细胞。因此，术语“癌细胞”包括转移的癌细胞、体外培养及源自癌细胞的细胞株。

在本文中，“抑制”内皮细胞生长或一个细胞组织的血管形成指的是阻止、推迟或延缓内皮细胞的生长、增殖或细胞分裂、或细胞组织中血管的形成。监测抑制的方法包括(但不限于)内皮细胞增殖化验、通过测定血液含量测量血管床体积、以及定量测定血管结构的密度。当培养物质为细胞混合体时，监测新血管形成的过程需要通过定量测量能够体现内皮细胞特定指标的细胞加以完成，这些指标包括血管新生因子、蛋白水解酶、以及内皮细胞的特定细胞粘附分子等。

本发明还提供了一种“药物组合物”，目的是为了包括至少还含有其它物质的枸杞提取物的组合物质，如一种载体、稳定剂、防腐剂或另一种有效成分，如另一种治疗性药剂，从而使该组合物适合在体内、体外进行诊断性或治疗性用途。“另一种治疗性有效成分”的实施例包括类固醇，如强的松、脱氢皮质(甾)醇、甲基强的松龙、氢化可的松、皮质酮和地塞米松，以及非甾族抗炎药物，如硫代苹果酸钠、硫代葡萄金、右旋青霉胺、氯喹、羟化氯喹、硫氮磺吡啶、咪唑硫嘌呤，和抗肿瘤制剂，如α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、2号白介素、阿地白介素、惠而血添(重组人粒细胞集落刺激因子)、沙格司亭(重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)、左咪唑、BCG疫苗、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、阿糖胞苷、5-氮杂胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、pentastatin、阿氟酸、克拉屈宾、二氟胞嘧啶、二氯甲基二乙胺、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、左旋溶肉瘤素、洛莫司汀、亚硝(基)脲氮芥、司莫司汀、链佐星、氮烯咪胺、白消安、三胺硫磷、六甲蜜胺、异环磷酰胺、顺铂、碳铂、甲基苄肼、放线菌素D、普卡霉素、博来霉素、亚德里亚霉素、道诺霉素、去甲柔红霉素、米托蒽醌、丝裂霉素、长春新碱、长春碱、长春瑞宾、依托泊甙、替尼泊甙、太平洋紫杉醇、盐酸拓扑替康、天(门)冬酰胺酶、羟基脲、氯苯二氯乙烷、地塞米松、氨格鲁米特、雌二酮、乙烯雌酚、羟孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、睾丸激素、氟羚甲基睾丸素、它莫西芬、亮丙瑞林和氟他胺片。

在本文中，术语“药物学上可接受载体”的含义包含磷酸缓冲溶液、水(最好是消毒水)、乳化剂及各种湿润剂等任何标准的药物学载体。药物学载体、稳定剂和防腐剂的实例请参阅马丁·雷明顿1975年《药物学标准》第15版(麦克米伦出版公司，伊斯顿市，1975年)。

“有效量”是指能够对有利或预期效果产生影响的充足数量。例如，治疗数量指能够获得预期疗效的数量。预防性有效量是指能够防止疾病发作或疾病症状的必要数量。

通过把一定量的枸杞提取物生长抑制剂送入到细胞之中，本发明提供了一种对内皮细胞的病理性生长进行抑制的方法。本发明还提供了一种通过把一定量抗血管形成的枸杞提取物送到细胞组织内而对组织内的血管形成进行抑制的方法。这些方法既可以在体内操作，也可以在体外操作。当在体外操作时，内皮细胞或血管化组织在业内专业人士熟知的条件下进行培养，具体如下所述。这些细胞和/或组织既可以从现存的细胞株中进行培养，也可以从受试者即患者身上得到的活组织切片检查样本中进行培养。然后，这些细胞和/或组织被投入枸杞提取物中，例如，可以把枸杞提取物加入到细胞和/或组织的培养基中。

根据本发明，枸杞提取物的制备方法如下：将枸杞或其中部分如果实、叶子、茎干、分枝、躯干、皮或根(最好是筛选过的、压碎的或碾碎的)投入到一种有机溶剂中，最好是含水介质中，从而把得到的液体与至少一些、或全部、最好是全部枸杞的固体部分分离开来，以获得一种液体形式的提取物，这一液体提取物还可以通过溶剂蒸发或冻干法在除去有机溶剂或水之后将之还原成一种固体形态，从而获得固体形态的提取物。有机溶剂最好是一种极性有机溶剂，如某种醇类物质，如甲醇、乙醇、N-丙醇、异丙醇、N-丁醇、异丁醇和叔丁醇，最好是甲醇和乙醇。使用有机溶剂或水介质进行提取的温度应在0℃至200℃之间，0℃至150℃之间更佳，最好在4℃至100℃之间，例如4℃、室温、40℃、60℃、80℃或100℃。温度在提取过程中可以有所变化。例如提取开始时的温度可能与结束时的温度不一样。制备本发明枸杞提取物时，优选以枸杞的果实或部分果实作原料，如此，果实(鲜果或干果)或部分果实被放进含水介质或有机溶剂之中，然后采用离心过滤或过滤的方法将得到的液体物质与枸杞果实的固体部分分离开来，以获得提取物。更理想的是，在投放到含水介质或有机溶剂之前，将枸杞的全部或部分果实粉碎或磨碎。最好在粉碎或磨碎全部或部分果实的时候，尽量小心操作避免粉碎或磨碎果实内的种子。同时，本发明的枸杞提取物还可以通过将新鲜或干燥的枸杞或其中的任何部分(最好是经过筛选、粉碎或磨碎)投入到有机溶剂(最好是含水介质)之中进行制备，从而把所得液体物质与枸杞的固体部分分离开来，形成一种液体物质，可通过透析法、超滤法或层析法把分子量约为200-1000，优选约200-900，更优选约300-800，再优选约400-700，最优选约500-600的化合物从这一液体物质中除去，以获得液体形式的提取物。这一液体提取物还可以在除去有机溶剂或水之后将之还原为固体形态，从而获得固体形态的提取物。

本项发明涉及液态或固态枸杞提取物的具体形式包括(1)不含硫胺、核黄素、胡萝卜素、隐黄质和玉米黄质，(2)不含核黄素、胡萝卜素、隐黄质和玉米黄质，(3)不含胡萝卜素、隐黄质和玉米黄质，(4)不含胡萝卜素和隐黄质，(5)不含胡萝卜素和玉米黄质，(6)不含隐黄质和玉米黄质，或(7)不含硫胺、核黄素、胡萝卜素、隐黄质或玉米黄质等形式。

并不是每一个疗法对每一个体都有效，因此，采用试管化验的方法检测出每一个受试者(即患者)的施药功效是有益的。本发明提供了测定枸杞提取物是否能治疗某一受试者(即患者)与内皮细胞病理性增生相关的特定疾病的一种方法。例如从受试者体内分离出某一细胞活组织切片，然后与有效量的枸杞提取物或含有该提取物的药物组合物进行接触。使用传统程序(如以下要描述的CPAE化验)测定的内皮细胞病理性生长的抑制表明了枸杞提取物或含有该提取物的药物组合物是否能有效地治疗该受试者(即患者)的疾病。

通过向受试者(即患者)体内投入有效药量的枸杞提取物或含有该提取物的药物组合物，本发明还提供了一种治疗与患者病理性新血管形成相关的失调症之方法。在本文的上下文中，进行“治疗”意味着减缓与病理性新血管形成相关的症状或减轻新血管形成。这类失调症包括(但不限于)关节炎症状、基于新血管形成的皮肤病症状、糖尿病视网膜病变、再狭症、卡波西氏肉瘤、老年黄斑病变、毛细血管扩张、青光眼、瘢痕瘤、角膜移植排斥、创伤性肉芽、血管纤维瘤、遗传性出血性毛细血管扩张症、心肌血管新生、牛皮癣、硬皮病及一些炎症，如由病理性血管形成或新血管形成相关或造成的痔疮。典型的关节炎症状为风湿性关节炎和骨关节炎。

本发明还提供了一种预防或抑制(如阻止、减少、减缓或推迟)癌细胞转移的方法，包括将枸杞提取物投入到某个癌症患者体内的方法；投入枸杞提取物以治疗关节炎症状会减轻软骨(特别是关节)中的血管形成，从而增强这些区域的灵活性和适应性。就治疗牛皮癣而言，投入枸杞提取物会减少一些皮肤病的症状，如结疤、片状剥落和皮肤表体下的可见血管。就治疗糖尿病视网膜病变而言，投入枸杞提取物会减少视网膜中新异血管的形成，从而使视觉不受阻碍。就治疗卡波西氏肉瘤而言，投入枸杞提取物会抑制血管的生长或更进一步的形成，从而抑制住伤害的形成。

枸杞提取物投送的方式可以是口入式、口腔式、鼻入式、直肠式、静脉注射式、腹膜腔引流式、肌肉注射式、或局部性方法，如经过皮肤或眼部、阴道或吸入式。当枸杞提取物被投入到受试者(如人类，人类患者，或其它哺乳动物，如猫、狗、老鼠、家鼠、马、猪、羊和牛等)体内时，这些提取物可以与医学上可以接受的载体混合在一起，然后投入到患者体内。枸杞提取物的药剂量可以根据一个熟悉这一技艺的人士之经验加以确定，并随接受治疗的症状、关联的病理、瞄准的细胞类型以及接受治疗的患者而加以变化。枸杞提取物的药剂量可以在每天0.1毫克及每天1克之间变化，优选为每天1到500毫克、更优选10到100毫克。在整个治疗过程中，体内投入可以采取一个剂量、持续性或间歇性方式的进行。

药剂组合物可以采取片剂、锭剂、颗粒、胶囊、丸剂、针剂、栓剂或气雾剂的形式。它们还可以采用有效成分在水性或非水稀释剂中的悬浮液、溶液或乳液形式、糖浆、颗粒或粉末等形式。

虽然枸杞提取物可以采取单独投入的方式，但它还可以以药物制剂的形式出现，该制剂包含枸杞提取物连同一种或多种医学上可以接受的载体及视需要可选的其它治疗剂。每一载体必须是“可接受的”并与制剂中其它成分相容，且对受试者如人类患者无害。

药物制剂可方便地以单位剂量形式出现，也可以采用加入枸杞提取物液态载体或细分的固态载体或两者的方法进行制备，然后，如果必要，将之制备成型。

本发明适宜口服的制剂可以采用散剂的方式，如胶囊、扁胶剂或片剂，每一种都含有预定量的枸杞提取物；还可呈粉状或颗粒状；或呈一种含水或非水液态的溶液或悬浮液状；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。枸杞提取物也可以为大丸药、干药糖剂或浆状物。

片剂可以通过枸杞提取物的压缩和成型进行制作，可根据需要添加一种或多种附属成分。压缩的片剂可以通过适当的机器压缩松散形式的有机成分(如粉末或颗粒)而制备，如果需要，还可以与粘合剂(如聚乙烯吡咯酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(如羟基乙酸淀粉钠、交联聚乙烯吡咯酮、交联羧甲基纤维素钠)和表面活性剂或分散剂。模制片剂可以采用适当的机器将粉末状的化合物混合物用惰性液体稀释剂湿化后经模制加工而成。如果需要，片剂还可以包衣或形成刻痕，并且可以配制成使那些有效成分缓慢地、而加以控制地释放的形式，例如采用不同比例的羟丙基甲基纤维素，就可以达到所期望的释放形式。根据需要，片剂还可以提供肠溶包衣，使其部分在肠内释放而不是在胃部释放。

适用于口腔局部投药的制剂，包括风味化有效成分的锭剂，所述风味剂通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶；包括含惰性基质的枸杞提取物的芳香熏剂，所述惰性基质如凝胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯树胶；包括含适当液态载体的枸杞提取物的漱剂。

根据本发明，适用于局部投药的药剂组合物可以配制成一种药膏、乳霜、悬浮液、洗剂、粉末、溶液、软膏、凝胶、喷剂、气雾剂或油状物。此外，一种制剂可能包含一种贴片剂或敷料，如浸含枸杞提取物的绷带或粘合剂膏药，同时根据需要还可以含有一种或多种赋形剂或稀释剂。

有些药物制剂可以为一种局部涂敷用的含有枸杞提取物的药膏或乳霜。当配制成一种药膏时，提取物既可以与石蜡，也可以与水混溶式药膏基质一起使用。此外，药物成分可与水包油乳霜基质配制成一种乳霜。

如果需要，乳霜基质的水相可包括，例如，至少约30％w/w的多元醇，即具有两个或多个羟基的醇，如丙二醇、丁烷-1、3-二醇、甘露醇、山梨糖醇、丙三醇和聚乙二醇及以上之混合物。局部用制剂可根据需要包括可促进枸杞提取物经由皮肤或其它感染区域吸收或穿透之化合物。这类真皮穿透增强剂的实际实施例包括二甲亚砜和及相关的类似物。

本发明乳状液之油相可用现有技术的成分以任何现有技术的方式构成。而此油相可能仅仅包含一种乳化剂(即为熟知的利泄剂)，它还可以根据需要包括至少一种乳化剂与脂肪或油或脂肪与油之混合物。较理想的是，亲水的乳化剂还与用作稳定剂的亲脂乳化剂一起包括在内。优选既把油又把脂肪包括在内。总之，含有或未含有稳定剂的乳化剂组成了所谓的乳化蜡，蜡与油一起和/或脂肪组成了所谓的乳化药膏，从而形成了乳霜制剂的油性分散相。

适用于本发明之制剂的利泄剂和乳化稳定剂包括Tween 60、Span 80、十六醇和十八醇混合物、肉豆寇醇、单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。

由于该活性化合物在大多数用于医药学乳剂制剂的油中其溶解度都非常低，所以可根据所需求的化妆品特性选择适当的油类或脂肪进行制剂。因此，乳霜最好应是具有适当的坚硬度的非油脂的、非染色的以及可清洗的产物，以避免从试管或其它容器中漏出。可以使用直链的或支链、单或二烷基酯类，如二异己二酸酯、硬脂酸异十六烷基酯、椰子脂肪酸丙二醇二酯、异丙基肉豆蔻酸酯、油酸癸酯、异丙基棕榈酸酯、硬脂酸丁酯、2-乙基己基棕榈酸酯或名为Crodamol CAP的支链酯类掺合物，优选后三种酯类。这些可以单独使用，也可以根据所要求的特性结合使用。此外，可使用高熔点的脂质，如白色软石蜡和/或液体石蜡或其它矿物油。

适用于眼睛局部投药的制剂还包括眼药水，其中之有效成分可溶解于或悬浮于适当的载体内，特别是这种有效成分的水溶剂。直肠投药的制剂表现为具有适当基质的栓剂，包括，例如可可油和水杨酸盐。

适用于阴道投药的制剂可以是阴道栓剂、止血塞、乳霜、凝胶、软膏、泡沫胶或喷雾剂等，这些制剂都含有枸杞提取物及一种或多种适宜的载体。

适用于鼻腔投药的制剂(其载体为一种固态物质)包括颗粒大小从20微米到500微米左右的粗粉末，投药的方式为鼻吸入式，即通过鼻腔从靠近鼻孔的容器内快速吸入粉末。而适用于投药的液体载体制剂表现为鼻喷液、鼻腔滴液或采用喷雾器进行气雾剂投药，这些制剂包括枸杞提取物之水溶液或油溶液。

适用于肠胃外投药的制剂包括水溶性或非水溶性的等渗消毒注射溶液，它们可能含有抗氧化剂、缓冲溶液、细菌抑制剂和使制剂与预期受体的血液等张的溶质；它还包括含悬浮剂、增稠剂的含水或非水的消毒悬浮液，和用来将枸杞提取物指定导向血液成分，或者一个或多个器官的脂质体或其它微颗粒系统。这些制剂可存在于单位剂量或多剂量密封容器之中，如安瓿和玻璃瓶中，并可以存放在一个冷冻干燥(冻干的)条件下，在使用之前仅需加入消毒的液体载体，如注射用水。即用的注射溶液和悬浮液可以从前面描述的消毒粉末、颗粒和片剂来进行制备。

除了以上特别提到的成分外，本发明的制剂可能包括其它业内常规的、与讨论中制剂类型相关的药剂，例如，那些适用于口腔投药的制剂可能进一步包括诸如甜味剂、增稠剂和风味剂等之类的试剂。

枸杞提取物及包含一种或多种该提取物的组合物也可作为兽医制剂的形式使用，可以采用业内常规的方法进行制备。

本发明进一步提供了一种医疗药剂的筛选方法，以抑制新血管形成或内皮细胞的增长。其筛选要求如下：

(a)将一种试验药剂与适当的细胞或组织样本接触；

(b)将适当细胞或组织样本的分离样本与有效治疗量的枸杞提取物接触，然后，

(c)比较步骤a)样本中的内皮细胞增长和步骤b)样本中的内皮细胞增长，其中，步骤a)中用以抑制内皮细胞增长的任何试验药剂与步骤b)中的几乎一样，都可以用做抑制新血管形成或内皮细胞病理性增长的药剂。

实施例1

枸杞提取物的制备

将20克干枸杞子在250毫升的二次蒸馏水中漂洗两次，然后在20-25℃温度下使用200毫升的二次蒸馏水浸泡一晚。将浸泡后的枸杞子捣成糊状，操作时应小心谨慎，避免压碎或碾碎枸杞子里的种子。将糊状物放置过夜，采用预先用二次蒸馏水清洗过的Miracloth双层进行过滤。这种混浊的滤出液通过离心法以每分钟约7,000的转数净化30分钟。上清液从沉淀物中轻轻倒出，获得一种清澈的介乎橙色和红色之间的溶液，然后在4℃温度下使用截止分子量为1000MW的透析管进行透析过夜，用二次蒸馏水需更换三次。透析管内的这一液体经过冻干就获得了固态枸杞提取物。

内皮细胞化验

根据Connally等人的《模拟生物化学》(1986年)152：136-140及修改稿中介绍的程序进行(Liang和Wong(2000)，《血管新生：从分子到综合的药理学》，由Maragoudakis、Kluwer Academic/Plenum出版社编辑出版，纽约pp 209-223)，各种不同浓度的固态枸杞提取物经过水溶后用于内皮细胞化验之中。图1显示的是内皮细胞培养化验结果说明，将枸杞提取物加入内皮细胞培养液可显著抑制内皮细胞的生长，证明枸杞提取物是一种非常有效的内皮细胞生长抑制剂。枸杞提取物的冻干样本对于内皮细胞繁殖也具有类似的抑制效果，通过水进行的提取操作应在100℃以内的不同温度下进行，例如4℃、20到25℃、80℃和100℃左右。

实施例2

作为测定枸杞提取物药剂数量的一个动物模型实施例，我们选择了几组裸鼠(Balb/cNCRnu/nu雌性，加州吉尔罗伊实验室)，每组都采用皮下注射的方式嫁接约10⁵到10⁹高增生状态的细胞，其定义如本文所述。当嫁接完成后，通过在嫁接的周围采用皮下注射的方式投入提取物。测定嫁接尺寸减少的大小可以采用游标卡尺每周检查两次。

实施例3

在此，我们提供了测定本发明提取物在治疗关节炎症时药剂效果之动物模式实施例。受试者为美国缅因州杰克逊实验室的MRL/lpr老鼠(MRL/MpJ-Fas^lpr)，对试验或监测采用本发明的枸杞提取物治疗关节炎症的功效非常有用。老鼠在投入了提取物后，在X光线的监控下，动物的关节和后腿的肿胀明显减少，软骨退化也有所下降，这都充分表明了这一提取物对治疗关节炎症的积极效果。

实施例4

在此，我们还提供了采用动物模型测定本发明提取物在治疗关节炎症时的药剂效果的另外一个例子。受试者为几组Lewis老鼠(鼠龄：8周；重30-150g，来自美国缅因州杰克逊实验室)，采用二类(BII)牛骨胶原进行免疫处理诱发关节炎症状。BII在400ug/ml的条件下在0.1M的乙酸中溶解。每只老鼠都在尾巴的底部皮内注射了20ug(100ul)的乳剂，其中BII和ICFA(不完全Freund之佐剂)的量相等。当确定了关节炎症状时，将本发明中的枸杞提取物投入到老鼠体内，然后以四级评分制对多种诱导性鼠体疾病进行为期28天的观察评估，结果显示，这种提取物对治疗关节炎症有效。

Claims (16)

1、一种抑制内皮细胞生长和治疗关节炎症的药用组合物，包括枸杞提取物和医学上可接受的药用载体；所述枸杞提取物不含有分子量为200-1000的化合物；所述的枸杞提取物是按照下述方法制备得到的：

a)、把枸杞果实投入到溶剂之中，以形成液体部分及固态部分，所述果实在投入到溶剂之前进行筛选、再压碎或磨碎，且果实里的种子不应被压碎或磨碎，所述溶剂为水；然后

b)、把液体部分与至少一些固态部分分离开来，以获得作为本产品的液体物质；

c)、通过透析法、超滤法或层析法把分子量为200-1000的化合物除去。

2、按照权利要求1的药用组合物，进一步包括至少一种其它治疗活性药剂。

3、按照权利要求2的药用组合物，其中，至少一种其它治疗活性药剂选自至少一种类固醇、非类固醇抗炎药物、硫代苹果酸钠、金硫葡糖、D-青霉胺、氯喹、羟基氯喹、硫氮磺吡啶、咪唑硫嘌呤、或抗肿瘤药剂及其他抗血管增生或抗新血管形成制剂。

4、按照权利要求3的药用组合物，其中，至少一种其它治疗活性药剂选自至少一种下列药剂：α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、2号白介素、阿地白介素、重组人粒细胞集落刺激因子、重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、左咪唑、BCG疫苗、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、阿糖胞苷、5-氮杂胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁、阿氟酸、克拉屈宾、二氟胞嘧啶、二氯甲基二乙胺、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、左旋溶肉瘤素、洛莫司汀、亚硝(基)脲氮芥、司莫司汀、链佐星、氮烯咪胺、白消安、三胺硫磷、六甲蜜胺、异环磷酰胺、顺铂、碳铂、甲基苄肼、放线菌素D、普卡霉素、博来霉素、亚德里亚霉素、道诺霉素、去甲柔红霉素、米托蒽醌、丝裂霉素、长春新碱、长春碱、长春瑞宾、依托泊甙、替尼泊甙、太平洋紫杉醇、盐酸拓扑替康、天(门)冬酰胺酶、羟基脲、氯苯二氯乙烷、地塞米松、氨格鲁米特、雌二酮、乙烯雌酚、羟孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、睾丸激素、氟羚甲基睾丸素、它莫西芬、亮丙瑞林或氟他胺。

5、按照权利要求1的药用组合物，其特征在于：其中，步骤c)后，将溶剂除去，从而获得本产品的固态物质。

6、按照权利要求1的药用组合物，其特征在于：其中所述水是二次蒸馏水。

7、按照权利要求1的药用组合物，其特征在于：步骤b)是通过把液体部分与所有的固态部分分离开来，以获得本产品的液体物质而完成的。

8、按照权利要求1的药用组合物，其特征在于：其中，步骤a)是将干燥的枸杞子浸入水中以获得浸湿的枸杞果实，然后将其筛选、压碎或磨碎成糊状，但不压碎或磨碎枸杞子里面的种子，该糊状物质由液相和固相组成；然后，步骤b)是通过把液相与固相分离来完成的，以获得本产品的液体物质。

9、按照权利要求8的药用组合物，其特征在于：其中，液相与固相采用离心法分离，然后倾出所得上清液作为产品。

10、按照权利要求8的药用组合物，其特征在于：其中，在步骤b)中将液相与固相分离后，将分子重量为200-1000的化合物从液相中除去，得到本产品的液体物质。

11、按照权利要求10的药用组合物，其特征在于：其中，采用透析法，将分子重量为200-1000的化合物从液相中除去。

12、按照权利要求11的药用组合物，其特征在于：其中，将透析管内液体冻干获得固体枸杞提取物。

13、权利要求1所述的药物组合物在制备具有抑制内皮细胞病理性生长活性的药物中的用途。

14、按照权利要求13的用途，其中，内皮细胞是组织和器官内的内皮细胞，取得组织或器官中新血管形成的抑制效果。

15、按照权利要求13的用途，其中，该产品被投入到体外的内皮细胞之中。

16、权利要求1的药物组合物在体外筛选抑制新血管形成或内皮细胞生长的其它药剂中的应用，包括以下步骤：

a.将待筛选的试验药剂与分离的细胞或组织样本接触；

b.将分离的细胞或组织样本与治疗有效量的权利要求1的药物组合物接触；以及

c.比较步骤a)样本中的内皮细胞增长和步骤b)样本中的内皮细胞增长，其中，若步骤a)中用以抑制内皮细胞增长的任何试验药剂与步骤b)中的效果一样，则都用做抑制新血管形成或内皮细胞病理性增长的药剂。

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