CN114437244B - 一种具有抗肺癌a549细胞增殖功能的枸杞多糖提取物 - Google Patents

一种具有抗肺癌a549细胞增殖功能的枸杞多糖提取物 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种具有抗肺癌A549细胞增殖功能的枸杞多糖提取物，所述的枸杞多糖提取物是将枸杞加水煎煮过滤，过滤液添加乙醇至终浓度为60％，静置沉淀离心后获得的。本发明所提供的枸杞多糖提取物和水洗的多糖组分用于抑制肺癌A549细胞的增殖。本发明通过水提醇沉法获得的枸杞多糖，具有易得、易纯化、活性强的特点，细胞实验发现，枸杞多糖对肺癌A549细胞具有很好的抑制作用。

Description

一种具有抗肺癌A549细胞增殖功能的枸杞多糖提取物
技术领域
本发明属于功能性大分子筛选应用技术领域，具体涉及种具有抗肺癌A549细胞增殖功能的枸杞多糖提取物。
背景技术
肺癌(lung cancer)原发于支气管黏膜和肺泡上皮细胞，是当今全球常见恶性肿瘤之一，近年来已居恶性肿瘤之首。特别是随着人口老龄化，城市人口比例逐年升高，城镇工业生产迅速发展，环境污染进一步恶化，吸烟等原因，其发病率在我国呈上升趋势。据世界卫生组织(WHO)预测，我国每年新增肺癌发生率60万人以上，2025年患病人数将达到100万人，患病人数将居世界之首。
治疗包括肺癌在内的肿瘤一直是临床医学研究和新药开发的热点，但是传统的放化疗由于缺乏特异性，取得疗效的同时往往给患者带来较大的毒副反应，而包括单味药和中药复方的中药已在这方面崭露头角，并迅速发挥重要作用，具有广阔的开发前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗肺癌A549细胞增殖功能的枸杞多糖提取物，所提供的多糖提取物具有制备抗肺癌药品或食品的应用潜力。
本发明首先提供一种枸杞多糖提取物，所述的枸杞多糖提取物是将枸杞加水煎煮过滤，过滤液添加乙醇至终浓度为60％，静置沉淀离心后获得的；
所述煎煮，作为实施例的一种具体记载，是在80℃条件下煎煮。
更进一步的，将上述的枸杞多糖提取物用去离子水进行洗脱，洗脱液冻干后得到多糖组分。
所获得的枸杞多糖提取物和水洗的多糖组分用于抑制肺癌A549细胞的增殖；
本发明所提供的枸杞多糖提取物在制备用于抑制肺癌A549细胞的制品中的应用；
本发明再一个方面还提供一种抑制肺癌A549细胞的制品，所述的制品包含有药理有效浓度的枸杞多糖提取物。
本发明通过水提醇沉法获得的枸杞多糖，具有易得、易纯化、活性强的特点，细胞实验发现，枸杞多糖对肺癌A549细胞具有很好的抑制作用。
附图说明
图1：不同多糖粗提取物多糖组分对各癌细胞增殖的影响图；
图2：多糖组分对A549细胞增殖的影响图；
图3：P-1多糖组分的分子量分布图；
图4：P-1多糖组分的单糖组成谱图；
图5：P-1多糖组分作用A549细胞24h和48h后对细胞增殖的影响图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明进行详细的描述。
实施例1：制备枸杞多糖粗提取物
l、制备提取液I：
取枸杞50g，加15倍量水在80℃条件下煎煮4小时，过滤收集提取液，浓缩得提取液I。
2、多糖粗提取物制备：
在提取液I中添加乙醇，至终浓度分别为40％、50％、60％、70％，静置后在10000rpm离心10min，获得的沉淀分别命名为40％p、50％p、60％p、70％p；将上述四种多糖粗提取物配置成浓度为100μg/mL的溶液。
取处于对数生长期的不同肺癌细胞，消化、重悬，调节细胞浓度为6x103个/mL,接种至96孔培养板，每孔0.2mL。继续培养24小时后，每6孔为一个实验组，吸弃细胞培养液后，分别将四种多糖粗提取物溶液添加到培养孔中，每孔0.2mL,另有6孔对照组，每孔加入0.2mL细胞培养液作为对照。各个实验组和对照组分别培养24小时后，吸弃培养液，每孔添加新细胞培养液0.2mL,并加入20μL 5mg/mL的MTT(用PBS配制)，继续培养4小时后，吸弃培养液，每孔加入0.15mL DMSO,振摇10min,充分溶解细胞内生成的紫色结晶，于490nm下测定每孔吸光度(OD值)，确定对肺癌的抑制效果。
结果如图l所示，显示添加终浓度为60％的醇沉多糖60％p可显著抑制肺癌A549细胞的增殖。
实施例2：枸杞多糖粗提取物进行纯化后的组分对A549细胞的增殖抑制作用
将60％的醇沉多糖60％p(本实施例中命名为粗多糖p)使用去离子水、浓度分别为0.2％和0.5％的NaCl溶液洗脱，分别获得洗脱液，分别冻干后得三个不同多糖组分，分别为水洗多糖P-1、0.2％NaCl洗脱液P-2、0.5％NaCl洗脱液P-3。
按照实施例1的步骤进行人肺癌A549细胞(所使用的人肺癌A549细胞由甘肃肿瘤医院转化医学中心惠赠)的抑制效果实验分析，结果表明水洗多糖(组分P-1)对肺癌A549细胞的增殖有显著的抑制作用。
具体方法及实验结果如下：
如图2所示：60％的醇沉多糖P和P-1能够显著性抑制A549细胞的增殖。由此说明，60％醇沉多糖组分中P-1组分主要发挥抑制细胞增殖的作用。
对P-1多糖组分进行分子量检测，如图3的HPGPC色谱图所示，P-1的色谱图基本呈对称峰，分布稍宽，说明P-1有一定的分散性。P-1的Mw和Mn分别计算为307.8kDa和35.8kDa，而Mw/Mn(多分散指数)为8.598。
通过离子色谱(ICS)法分析P-1的单糖组成。如图4所示，LBP-1主要由阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)组成，摩尔比分别为42.8:34.9:22.2，Ara为主要单糖。
如图5所示，随着多糖P-1溶液浓度的增加及时间的延长，其对A549的抑制率逐渐升高。以多糖P-1组分处理48h的IC50值显示，当多糖P-1浓度分别高于700μg/mL和42.5μg/mL时，多糖P-1组分对A549的抑制率均高于50％，说明该浓度下P-1对人肺癌细胞A549抑制效果最佳。

Claims (4)

1.一种枸杞多糖提取物，其特征在于，所述的枸杞多糖提取物是将枸杞加15倍量水在80℃条件下煎煮4小时，将煎煮液进行过滤，过滤液浓缩后添加乙醇至终浓度为60%，静置沉淀离心后获得的。
2.一种枸杞多糖提取物的纯化产物，其特征在于，所述枸杞多糖提取物的纯化产物是将权利要求1所述的枸杞多糖提取物用去离子水进行洗脱，洗脱液冻干后得到的。
3.权利要求1所述的枸杞多糖提取物或权利要求2所述的枸杞多糖提取物的纯化产物在制备用于抑制肺癌A549细胞增殖的制品中的应用。
4.一种抑制肺癌A549细胞的制品，其特征在于，所述的制品包含有药理有效浓度的权利要求1所述的枸杞多糖提取物和/或权利要求2所述的枸杞多糖提取物的纯化产物。
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"枸杞多糖对人肺癌A549细胞影响的研究";肖琳等;《数理医药学杂志》;20061231;第19卷(第2期);第130-132页 *

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