CN112321737B - 平菇多糖硒苷-ⅱ及其制备和在制备特异性杀伤非小肺腺癌的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于肺癌药物开发技术领域，具体公开了一种平菇多糖硒苷‑Ⅱ；本发明还公开了所述的平菇多糖硒苷‑Ⅱ的获得方法以及在制备肺癌药物中的应用。本发明研究发现所述的平菇多糖硒苷‑Ⅱ可以作为抗癌药物能够特异性地抑制非小肺腺癌细胞的生长，而不损害正常细胞：能够在保证药效的同时降低毒副作用。

Description

平菇多糖硒苷-Ⅱ及其制备和在制备特异性杀伤非小肺腺癌 的药物中的应用

技术领域

本发明涉及肺癌治疗药物领域，具体涉及一种平菇多糖硒苷-Ⅱ抗肺癌活性成分。

技术背景

肺癌是发病率高和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一。肺癌的病因至今尚不完全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系，此外，大气污染、职业和环境接触、电离辐射、既往肺部慢性感染、遗传等因素也是导致肺癌的主要因素。

目前，肺癌的治疗方法在不断发展，总的来说，肺癌的治疗主要分成化疗、放疗、手术、中药治疗或者联合治疗。手术可以快速切除病灶，控制病情。但是大多数肺癌患者起病隐匿，病情发展较快，多数患者在发现的时候都是晚期。在肺癌晚期，癌细胞往往已经出现了扩散和转移，手术切除难度大；放疗、化疗是重要的保留治疗手段，但放、化疗对正常细胞、组织损伤很大，具有严重的毒副作用，治疗效果收效甚微。

目前临床上常用的化疗药物大多为喜树碱、阿霉素，紫杉醇等药物，在治疗癌症的同时也大大损害了人体免疫系统，可谓“伤敌一万，自损八千”。开发对肿瘤部位药效好，对正常组织或细胞毒副作用小的抗癌药物成为当务之急。

发明内容

本发明的目的是提供一种高抗癌药效、低毒副作用的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分(本发明还称为多糖硒苷-Ⅱ)。

本发明第二目的在于，提供一种所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分的制备方法。

本发明第三目的在于，提供一种所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分在制备抗肺癌药物中的应用。

本发明第四目的在于，提供一种包含所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分的抗肺癌的药物。

现有技术披露了一些平菇多糖硒苷的提取方式以及在抗氧化方面的作用，但现有技术中很少涉及平菇多糖硒苷在抗肺癌方面的作用。事实上，本发明研究发现，从平菇中提取的平菇粗多糖(多种活性成分的混合物)基本不具备抗癌活性。然而，在获知平菇粗多糖不具备抗癌活性的研究背景下，行业内没有动机从其中筛查出抗癌成分，然而，本发明人仍通过深入研究，意外地发现，从所述的平菇粗多糖分离得到的平菇多糖硒苷-Ⅱ出人意料地具有良好的抗肺癌活性，还对正常细胞无明显毒副作用，故提供以下技术方案：

一种平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分，为修饰有有机硒的杂多糖，所述的杂多糖为包含半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、葡萄糖、岩藻糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、氨基半乳糖、半乳糖醛酸、木糖和核糖在内的单糖单元通过糖苷键连接得到。

本发明发现，所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ可以特异性地抑制非小肺腺癌细胞的生长；而对正常细胞无明显杀伤作用此发现对平菇多糖硒苷-Ⅱ对抗肿瘤领域的研究具有重要意义。

对于抗癌药物而言，其在抑杀癌细胞的同时，免不了对正常细胞造成伤害。然而，本发明人进一步对平菇多糖硒苷-Ⅱ深入研究发现，发现其不仅具有良好的抗癌活性，还能够解决现有抗癌活性成分对正常细胞的伤害现象，不会对正常细胞带来伤害。

经过单糖组分分析显示，所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ水解后的杂多糖中，半乳糖含量超过40％，甘露糖含量超过25％，阿拉伯糖超过8％，葡萄糖超过3％，岩藻糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、氨基半乳糖、半乳糖醛酸、木糖和核糖含量不足1％。该单糖组成与现有的平菇来源的多糖或多糖衍生物均有明显差别，表明所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ是新获取的物质。

所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ水解后的杂多糖中，半乳糖含量42～43％，甘露糖含量29～30％，阿拉伯糖9～11％，葡萄糖3.5～4.5％，岩藻糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、氨基半乳糖、半乳糖醛酸、木糖和核糖含量不足1％。

所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ分子量13000～17000。

所述的有机硒通过Se＝O和Se-C-O键修饰在所述的杂多糖链上。

所述的多糖硒苷-Ⅱ经过ICP测定，其含硒量为3～6μg/mL。

本发明还提供了一种所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分的制备方法，将富硒平菇粉经醇水溶液脱脂、水提、醇沉、脱蛋白得粗多糖；

将粗多糖经纤维素交换柱进行分离处理，分离过程包括依次进行的蒸馏水洗脱、0.05～0.15mol/L的氯化钠溶液洗脱、0.25～0.35mol/L的氯化钠溶液洗脱和0.45～0.55mol/L的氯化钠溶液洗脱过程；

收集0.05～0.15mol/L的氯化钠溶液的洗脱液为目标洗脱液，并进行脱盐、浓缩处理，葡聚糖凝胶柱纯化即得多糖硒苷-Ⅱ。

本发明所述的制备方法，通过所述的特殊的洗脱机制，可以出人意料地获得具有优异抗癌活性，且利于正常细胞新陈代谢增殖的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分。

所述的醇水溶液脱脂过程的条件为：醇-水溶液为乙醇水溶液，且乙醇的体积含量为75～85％；回流脱脂；

醇水溶液脱脂后进行固液分离，将沉淀在水中分散提取；所述的水提的温度为80～90℃；

水提获得提取液，经浓缩后再加入乙醇，进行醇沉，固液分离得到醇沉物；

将醇沉物进行脱蛋白处理，即得粗多糖。

作为优选，所述的纤维素交换柱为DEAE-52纤维素离子交换柱。

优选地，采用透析手段对目标洗脱液进行脱盐处理。

作为优选，目标洗脱液脱盐后，再选用G-100葡聚糖进一步纯化。

本发明还提供了一种所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分在用于制备治疗肺癌的药物中的应用。

优选的应用，将其用于制备特异性杀伤非小肺腺癌细胞的治疗肺癌的药物。

所述的所述的人源非小肺腺癌细胞为人源非小肺腺癌细胞-A549细胞株。

进一步优选的应用，将其用于制备不影响正常细胞或利于正常细胞增殖的治疗肺癌的药物。

所述的正常细胞选用人源正常细胞-16HBE细胞株。本发明制备的平菇多糖硒苷-Ⅱ对A549细胞具有显著的抑制作用，但对正常细胞无明显抑制作用。

本发明还提供了一种应用所述的治疗肺癌的药物，其包含所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分。

优选的治疗肺癌的药物，所述的药物中含有不低于药学有效量的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分。

作为优选，所述的治疗肺癌的药物，还包含药学上可接受的辅料。

作为优选，所述的治疗肺癌的药物，为药学上可接受的任意剂型。

本发明制备的抗癌药物有如下几个优点：

1、本发明获得了一种全新的平菇多糖硒苷-Ⅱ，且意外地发现，其不仅具有良好的抗癌活性，还能够解决现有抗癌活性成分对正常细胞的损伤现象，不会对正常细胞带来损伤。

本发明所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ具有优良的抗癌作用，在给药浓度为600μg/mL时，肿瘤抑制率可以达到40％以上，对肺癌细胞的治疗提供了一种可替代的药物。

2、该多糖硒苷-Ⅱ药物的制备工艺对设备要求较低，无污染，易实现，在抗癌药物方面有很大的应用前景，容易实验工业生产。

附图说明

图1为平菇多糖硒苷-Ⅱ的红外光谱图(756cm^-1处的峰为Se＝O特征峰，654cm^-1的峰为Se-C-O键)

图2为平菇粗硒多糖的纤维柱洗脱曲线(三个组分分别由浓度为0，0.1，0.3mol/L的氯化钠水溶液洗脱下来，分别命名多糖硒苷-Ⅰ，多糖硒苷-Ⅱ，多糖硒苷-Ⅲ)

图3为多糖硒苷-Ⅱ的凝胶渗透色谱(GPC)图

图4为多糖硒苷-Ⅱ硒含量(ICP)

图5为多糖硒苷-Ⅱ水解物及参照单糖的洗脱曲线(HPLC)

图6多糖硒苷-Ⅱ的透射电镜图(TEM)

图7为多糖硒苷-Ⅱ孵育后A549的存活率

图8为多糖硒苷-Ⅱ孵育后，经AO/EB染色后的肺癌细胞(A549)的荧光图片。(图片经高内涵拍摄，40×)

图9为多糖硒苷-Ⅱ孵育后，经过膜联蛋白V-FITC/PI凋亡检测试剂盒染色之后A549的细胞流式图

图10为多糖硒苷-Ⅱ孵育后，A549细胞的划痕实验

图11为平菇粗多糖孵育后A549的存活率

图12为多糖硒苷-Ⅱ孵育后正常细胞16HBE的存活率

图13为多糖硒苷-Ⅱ孵育后，经AO/EB染色后的正常细胞(16HBE)的荧光图片。(图片经高内涵拍摄，40×)

图14为多糖硒苷-Ⅱ孵育后，经过膜联蛋白V-FITC/PI凋亡检测试剂盒染色之后16HBE的细胞流式图

图15为多糖硒苷-Ⅱ孵育后，16HBE细胞的划痕实验

图16平菇粗多糖孵育后正常细胞(16HBE)的存活率

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

(一)优选菌菇

将不同种类的菌菇置于含硒培养基中培养，优选长势好，抗逆性强的菌菇。本发明选用平菇，获得富硒平菇(来源于湖南万臻生物科技有限公司)。

(二)粗硒多糖的制备

脱脂：将获得的富硒平菇干燥，粉碎，过100目筛。取富硒平菇粉15g于圆底烧瓶中，加入80％的乙醇-水溶液120mL，65℃下搅拌回流3h，抽滤，得滤饼，干燥。

水提：取滤饼10g于烧瓶中，添加300mL超纯水，85℃下搅拌3h，离心，取上清液浓缩，得到粘稠液体。

醇沉：向粘稠液体中滴加4倍量无水乙醇，置于4℃下24h，离心，得沉淀物。

脱蛋白：将沉淀物溶于100mL的水中，加入四分之一体积的sevage试剂，离心取上清液，用透析袋透析，冻干得到粗多糖。

(三)精制多糖硒苷

(3.1)离子交换柱纯化过程：选用DEAE-52纤维素离子交换柱纯化多糖，将300mg的样品溶于10mL水中，湿法上样。之后依次用蒸馏水、0.1、0.3、0.5mol/L的氯化钠溶液梯度洗脱。用硫酸苯酚法，在490nm下检测多糖含量(移液枪吸取0.1mL样品，补水0.1mL，加入0.2mL苯酚，再加入2.5mL浓硫酸)，绘制洗脱曲线图，收集主要组分。共分离出三个组分，本发明取自0.1mol/L的氯化钠水溶液洗脱下来的组分，即多糖硒苷-Ⅱ。

(3.2)透析：将样品-水溶液用旋转蒸发仪浓缩至10-15mL，之后用盐酸溶液调节pH至7，用去离子水透析36h，之后浓缩至5mL。

(3.3)葡聚糖柱纯化过程：选用G-100葡聚糖纯化组分2(3.2透析产物)，将5mL的样品湿法上样，之后用去离子水洗脱，用苯酚-硫酸法隔管检测，浓缩，冻干，得到多糖硒苷-Ⅱ。

平菇多糖硒苷的水解及单糖组分分析：精密称取样品至5mL安培瓶中，加入2.0mL(2mol/L)三氟乙酸于5mL安瓿中，封管，110℃酸解8h。取出挥干三氟乙酸，加2.0mL水复溶，完成水解。后精确吸取250μL水解后溶液到5mL EP管中，加入250μL(0.6mol/L)氢氧化钠，500μL(0.4mol/L)1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液，在70℃反应1h。冷水中冷却10min；加入500μL 0.3mol/L盐酸中和，再加入1mL氯仿漩涡1min，3000r/min离心10min,小心取上清，萃取3次。取上清液，完成衍生化。参照试样为含50μg/mL各对比糖的糖混合溶液，以同样条件进行衍生化。最后样品和参照品经过Xtimate C18高效液相设备洗脱，记录洗脱曲线，通过样品与参照品的峰面积比即可计算得单糖组分(洗脱液为：0.05M pH6.7磷酸二氢钾溶液-乙腈＝83-17)。其单糖组分分析结果见表1和图5。

表1平菇多糖硒苷-Ⅱ组成单糖含量

采用实施例1获得的平菇多糖硒苷-Ⅱ进行以下抗癌和正常细胞毒性的研究，具体为：

实施例2

平菇多糖硒苷-Ⅱ(实施例1获得)对肺癌细胞的药效实验：

当A549细胞密度达到80-90％的时候，用胰酶消化至细胞变圆，之后加入细胞培养液终止消化。将细胞悬浮液适当稀释，并且以血球计数板计数，以每孔8000细胞的密度种板(96孔板)，将96孔板置于细胞培养箱中孵育24h。

之后将96孔板中的培养液用无血清的细胞培养液替换，在细胞培养箱中孵育24h。

用含有不同浓度的多糖硒苷-Ⅱ药物的细胞培养液(0μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL，400μg/mL，600μg/mL)替代之前的无血清培基，孵育24h。并且以无细胞，单纯的细胞培养液为阴性对照组。

每孔中加入10μL的cck-8试剂，并且在共同孵育2小时后，以酶标仪在450nm处测定吸光度OD，计算细胞存活率。

细胞存活率＝(OD_实验组-OD_{阴性对照组})/(OD_空白组-OD_{阴性对照组})。

以每孔5000个细胞的密度种板，贴壁24h之后，以不同浓度的多糖硒苷-Ⅱ药物的细胞培养液(0μg/mL，300μg/mL，600μg/mL)替换旧的培养液，培养24h。AO/EB染色观察。

之后通过流式细胞术来量化细胞凋亡的情况，以每孔5x10⁵的密度种板(6孔板)，孵育24h。用含有不同浓度多糖硒苷-Ⅱ药物的细胞培养液(0μg/mL，300μg/mL，600μg/mL)更新培基，孵育24h。之后以膜联蛋白V-FITC/PI凋亡检测试剂盒染色，消化收集细胞，并且在流式细胞仪上进行检测。

划痕实验用来验证药物对细胞迁移能力的影响，以每孔1x10⁶的细胞密度接种细胞，培育24h以贴壁，之后用200μL的枪头划痕，之后以含药物的无血清培养基培养0，12h，24h，48h后，在荧光倒置显微镜下观察。

在用多糖硒苷-Ⅱ孵育A549细胞24h后，给药浓度为600μg/mL时，细胞存活率不足60％，即抑瘤率可以达到40％以上(如图7所示)。如图8所示，从AO/EB染色结果来看，未加入药物孵育的A549细胞未见明显凋亡信号，随着给药浓度增加，凋亡细胞明显增多，这更直观地表现了多糖硒苷-Ⅱ可以有效诱导肺癌细胞凋亡。如图9所示，从流式细胞术结果来看，当给药浓度为600μg/mL时，活细胞(第三象限)约占65％。如图10所示，随着给药浓度增大，划痕恢复的能力逐渐减弱，结果证明多糖硒苷-Ⅱ在一定程度上可以抑制肿瘤细胞的迁移能力。

对比例1：

平菇粗多糖(未进行过柱纯化，实施例1步骤(一)产物)对人源肺癌细胞的药效实验

当A549细胞密度达到80-90％的时候，用胰酶消化至细胞变圆，之后加入细胞培养液终止消化。将细胞悬浮液适当稀释，并且以血球计数板计数，以每孔8000细胞的密度种板(96孔板)，将96孔板置于细胞培养箱中孵育24h。

之后将96孔板中的培养液用无血清的细胞培养液替换，在细胞培养箱中孵育24h。

用含有不同浓度的平菇粗多糖的细胞培养液(0μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL，400μg/mL，600μg/mL)替代之前的无血清培基，孵育24h。并且以无细胞，单纯的细胞培养液为阴性对照组。

每孔中加入10μL的cck-8试剂，并且在共同孵育2小时后，以酶标仪在450nm处测定吸光度OD，计算细胞存活率。

细胞存活率＝(OD_实验组-OD_{阴性对照组})/(OD_空白组-OD_{阴性对照组})。

如图11所示，在用平菇粗多糖孵育A549细胞24h后，随着给药浓度的增大，细胞存活率有少许的增加，这在一定程度上证明该平菇粗多糖对肺癌细胞无明显抑制作用。

实施例3

平菇多糖硒苷-Ⅱ(实施例1获得)对正常细胞的药效实验

当正常细胞密度达到80-90％的时候，用胰酶消化至细胞变圆，之后加入细胞培养液终止消化。将细胞悬浮液适当稀释，并且以血球计数板计数，以每孔8000细胞的密度种板(96孔板)，将96孔板置于细胞培养箱中孵育24h。

之后将96孔板中的培养液用无血清的细胞培养液替换，在细胞培养箱中孵育24h。

用含有不同浓度的多糖硒苷-Ⅱ药物的细胞培养液(0μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL，400μg/mL，600μg/mL)替代之前的无血清培基，孵育24h。并且以无细胞，单纯的细胞培养液为阴性对照组。

每孔中加入10μL的cck-8试剂，并且在共同孵育2小时后，以酶标仪在450nm处测定吸光度OD，计算细胞存活率。

细胞存活率＝(OD_实验组-OD_{阴性对照组})/(OD_空白组-OD_{阴性对照组})。

以每孔5000个细胞的密度种板，贴壁24h之后，以不同浓度的多糖硒苷-Ⅱ药物的细胞培养液(0μg/mL，300μg/mL，600μg/mL)替换旧的培养液，培养24h。AO/EB染色观察。

之后通过流式细胞术来量化细胞凋亡的情况，以每孔5x10⁵的密度种板(6孔板)，孵育24h。用含有不同浓度多糖硒苷-Ⅱ药物的细胞培养液(0μg/mL，300μg/mL，600μg/mL)更新培基，孵育24h。之后以膜联蛋白V-FITC/PI凋亡检测试剂盒染色，消化收集细胞，并且在流式细胞仪上进行检测。

划痕实验用来验证药物对细胞迁移能力的影响，以每孔1x10⁶的细胞密度接种细胞，培育24h以贴壁，之后用200μL的枪头划痕，之后以含药物的无血清培养基培养0，12h，24h，48h后，在荧光倒置显微镜下观察。

如图12所示，当用多糖硒苷-Ⅱ孵育16HBE正常细胞时，细胞的存活率始终在90％以上。这在一定程度上说明多糖硒苷-Ⅱ对正常细胞无明显的毒副作用。如图13所示，从AO/EB染色结果来看，EB通道荧光无明显变化，证明该组分对正常洗白无明显毒副作用；如图14所示，流式细胞术结果表明，经过多糖硒苷-Ⅱ孵育的正常细胞并未有凋亡细胞出现，证明该组分对正常细胞没有明显毒性。如图15所示，经过多糖硒苷-Ⅱ孵育的正常细胞迁移能力并未有明显改变，故该组分对正常细胞的迁移能力并未有明显影响。

对比例2：

平菇粗多糖(未进行过柱纯化)对正常细胞的药效实验

当人源正常肺细胞密度达到80-90％的时候，用胰酶消化至细胞变圆，之后加入细胞培养液终止消化。将细胞悬浮液适当稀释，并且以血球计数板计数，以每孔8000细胞的密度种板(96孔板)，将96孔板置于细胞培养箱中孵育24h。

之后将96孔板中的培养液用无血清的细胞培养液替换，在细胞培养箱中孵育24h。

用含有不同浓度的平菇粗多糖的细胞培养液(0μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL，400μg/mL，600μg/mL)替代之前的无血清培基，孵育24h。并且以无细胞，单纯的细胞培养液为阴性对照组。

每孔中加入10μL的cck-8试剂，并且在共同孵育2小时后，以酶标仪在450nm处测定吸光度OD，计算细胞存活率。

细胞存活率＝(OD_实验组-OD_{阴性对照组})/(OD_空白组-OD_{阴性对照组})。

如图16所示，在用平菇粗多糖孵育正常细胞24h后，给药共同孵育后，细胞存活率无明显变化，这在一定程度上证明该平菇粗多糖对正常细胞既无抑制作用也无促进增殖的作用。

Claims (8)

1.一种平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分在用于制备特异性杀伤非小肺腺癌细胞、且不影响正常细胞或利于正常细胞增殖的治疗肺癌的药物中的应用，其特征在于，所述的非小肺腺癌细胞为人源非小肺腺癌细胞-A549细胞株；正常细胞选用人源正常细胞-16HBE细胞株；

所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分为修饰有有机硒的杂多糖，所述的杂多糖为包含半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、葡萄糖、岩藻糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、氨基半乳糖、半乳糖醛酸、木糖和核糖在内的单糖单元通过糖苷键连接得到；

所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分水解后的杂多糖中，半乳糖含量42~43%，甘露糖含量29~30%，阿拉伯糖9~11%，葡萄糖3.5~4.5%，岩藻糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、氨基半乳糖、半乳糖醛酸、木糖和核糖含量不足1%；

所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ的分子量为13000~17000；所述的有机硒通过Se=O，Se-C-O键修饰在所述的杂多糖链上；硒含量为3~6 μg/g；

所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分的制备步骤为：将富硒平菇粉经醇水溶液脱脂、水提、醇沉、脱蛋白得粗多糖；

将粗多糖经纤维素交换柱进行分离处理，分离过程包括依次进行的蒸馏水洗脱、0.1mol/L的氯化钠溶液洗脱、0.3mol/L的氯化钠溶液洗脱和0.5 mol/L的氯化钠溶液洗脱过程；

收集0.1mol/L的氯化钠溶液的洗脱液为目标洗脱液，并进行脱盐、浓缩处理，葡聚糖凝胶柱纯化处理即得平菇多糖硒苷-Ⅱ。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，醇水溶液脱脂过程的条件为：醇-水溶液为乙醇水溶液，且乙醇的体积分数为75~85%；回流脱脂；

醇水溶液脱脂后进行固液分离，将沉淀在水中分散提取；所述的水提的温度为80~90℃；

水提获得提取液，经浓缩后再加入乙醇，进行醇沉，固液分离得到醇沉物；

将醇沉物进行脱蛋白处理，即得粗多糖。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的纤维素交换柱为DEAE-52纤维素离子交换柱。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，采用透析手段对目标洗脱液进行脱盐处理。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，进一步采用葡聚糖凝胶柱进行纯化。

6.一种治疗肺癌的药物，其特征在于，所述的药物中含有不低于药学有效量的权利要求1~5任一项所述的应用中所述的平菇多糖硒苷-Ⅱ抗癌活性成分。

7.如权利要求6所述的治疗肺癌的药物，其特征在于，还包含药学上可接受的辅料。

8.如权利要求6或7所述的治疗肺癌的药物，其特征在于，为药学上可接受的任意剂型。