CN115521385B - 一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用 - Google Patents
一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115521385B CN115521385B CN202211390863.5A CN202211390863A CN115521385B CN 115521385 B CN115521385 B CN 115521385B CN 202211390863 A CN202211390863 A CN 202211390863A CN 115521385 B CN115521385 B CN 115521385B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- armillariella
- polysaccharide
- mycelium
- mycelium polysaccharide
- tumor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 91
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 91
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 90
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 43
- 229930195277 Armillarisin Natural products 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 241000993291 Armillariella Species 0.000 claims abstract description 73
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 33
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims abstract description 28
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 26
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims abstract description 13
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims abstract description 13
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 claims abstract description 11
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims abstract description 3
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 claims abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 claims description 5
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 3
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 9
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 abstract description 2
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 abstract description 2
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 66
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 244000221226 Armillaria mellea Species 0.000 description 2
- 235000011569 Armillaria mellea Nutrition 0.000 description 2
- 238000011728 BALB/c nude (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 241000216674 Armillaria tabescens Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 229940105442 cisplatin injection Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- -1 polysaccharide monosaccharide Chemical class 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 230000010304 tumor cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用,其中亮菌菌丝体多糖的总糖含量为89%以上,单糖组成摩尔百分比为甘露糖:葡萄糖醛酸:半乳糖:岩藻糖=25.6:14.2:54.1:6.1。本发明亮菌菌丝体多糖能够作为抗肿瘤化疗药物的增效剂,与化疗药物卡铂、紫杉醇、5‑FU、吉西他滨等化疗药物联合使用可以增强这些化疗药物对癌症治疗的效果,如肺癌、宫颈癌、结肠癌及肝癌等。亮菌菌丝体多糖对化疗药物的增效效果呈剂量依赖性。
Description
技术领域
本发明涉及一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用,属于中药对肿瘤化疗药增效的技术领域。
背景技术
亮菌(Armillariella tabescens),又名假蜜环菌,是一种医食两用的真菌,广泛分布在江苏、浙江、安徽、福建等地区,目前较为所知的功效主要是治疗各种炎症之类的疾病,比如肝炎,胃炎,胆囊炎。
超滤是一种膜分离技术,具有不损害糖活性、无污染、分离效率高、能耗低和适合工业化生产等优点,选择不同孔径的超滤膜可以将不同大小的多糖分离。通过研究超滤膜分离亮菌多糖,希望为亮菌多糖的分离纯化提供新的思路。
据世界卫生组织发布的《2020世界癌症报告》数据显示,2020年全球新发癌症病例1929万例,仅中国新发癌症就有457万人,占全球23.7%,中国癌症新发人数远超世界其他国家,意味着全球每死亡100个癌症患者中,中国人占将近24个。平均每天都有6000多人死于癌症,每分钟就有将近5人死于癌症。
化疗是治疗癌症的主要手段,但是化疗也会对自身正常细胞造成损伤,所以减少化疗药物的剂量,降低化疗药物的毒副作用,对肿瘤患者而言是十分必要的。多糖是一种结构和分子量具有多样性的高分子化合物,具有非常广泛的药理作用,例如参与机体的代谢、免疫调节、降血糖、抗肿瘤等功能。当前亮菌菌丝体多糖具有抗肿瘤的功效已经有文献报道,但还没有文献报道过亮菌菌丝体多糖作为化疗药物增效剂增强化疗药。
由于亮菌菌丝体多糖具有无毒高效、易于制备、药源丰富的特点,能够提高肿瘤病人生活质量,抵抗大剂量放化疗药物的副作用,因此可作为抗肿瘤化疗药的理想增效剂,并将在临床抗肿瘤治疗中发挥重要作用。
发明内容
本发明提供了一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用。本发明亮菌菌丝体多糖可以作为化疗药物的增效剂以增强化疗药物抗肿瘤的效果,与化疗药物联合运用,可显著降低化疗药物的剂量与毒副作用。
本发明通过以下技术方案实现的:
本发明亮菌菌丝体多糖,其总糖含量≥89%,单糖组成按摩尔百分比计为甘露糖:葡萄糖醛酸:半乳糖:岩藻糖=25.6:14.2:54.1:6.1。
本发明亮菌菌丝体多糖的制备方法,包括如下步骤:
步骤1:亮菌进行液体发酵后,收集菌体进行烘干,研磨成粉末状;
步骤2:采用沸水提取法对亮菌胞内多糖进行多次提取,然后进行醇沉,除醇后冻干;
步骤3:使用Sevag法去除冻干粉末所含的蛋白,然后加入氯仿和正丁醇的混合溶液(体积比4:1),充分振摇后静置,离心,收集上清液,重复上述步骤,直到液体里面的蛋白含量肉眼可见较少时结束;
步骤4:将上清液装入透析袋中,在流动的自来水中透析,再用蒸馏水透析,将透析后的溶液进行醇沉、离心,收集沉淀,沉淀干燥;
步骤5:采用丙酮和乙醚溶液对沉淀进行连续多次洗涤,冻干碾磨后得到白色亮菌菌丝体多糖粉末;
步骤6:将得到的白色亮菌菌丝体多糖溶于蒸馏水中,选择合适的料液浓度以及压力依次通过1×105Da大小的超滤膜和5×104Da大小的超滤膜,得到大小在1×105Da-5×104Da的亮菌菌丝体多糖。
本发明亮菌菌丝体多糖的应用,是将所述亮菌菌丝体多糖作为增效剂,与抗肿瘤化疗药物复配使用,以提高抗肿瘤的治疗效果。
所述化疗药物包括卡铂、紫杉醇、5-FU、宾西他滨等药物中的至少一种。
所述亮菌菌丝体多糖与所述化疗药物的有效成分比为(100~200:1)。该比例是在细胞实验中采用的比例,具体应用于人肿瘤时以实际情况为主。
所述肿瘤包括人肺癌、人结肠癌、人肝癌、人宫颈癌等。
本发明提供的含有亮菌菌丝体多糖的抗肿瘤药物,包括亮菌菌丝体多糖、抗肿瘤活性成分以及药学上可接受的辅料。
本发明实验结果显示,亮菌菌丝体多糖可以增强化疗药物对不同来源的肿瘤细胞抑制它们增殖和活性效果,肿瘤细胞可以是肺癌、结肠癌、肝癌,宫颈癌等。
与现有技术相比,本发明的有益效果体现在:
本发明首次发现亮菌菌丝体多糖与化疗药物卡铂、紫杉醇、5-FU、宾西他滨等化疗药物联合使用可以增强这些化疗药物对癌症治疗的效果,如肺癌、结肠癌、肝癌、宫颈癌。亮菌菌丝体多糖对化疗药物的增效效果呈剂量依赖性。
附图说明
图1为亮菌菌丝体多糖联合5-FU化疗药物对结肠癌细胞SW620的作用结果图。
图2为亮菌菌丝体多糖联合卡铂化疗药物对肺癌细胞A549的作用结果图。
图3为亮菌菌丝体多糖联合紫杉醇化疗药物对宫颈癌细胞HeLa的作用结果图。
图4为亮菌菌丝体多糖联合吉西他滨化疗药物对肝癌细胞HepG2的作用结果图。
图5为单糖混合标准品高效液相色谱图(*表示溶剂峰,1-甘露糖,2-鼠李糖,3-葡萄糖,4-半乳糖醛酸,5-葡萄糖醛酸,6-半乳糖,7-阿拉伯糖,8-木糖,9-岩藻糖)。
图6为亮菌菌丝体多糖单糖组成高效液相色谱图(*表示溶剂峰,1-甘露糖:5-葡萄糖醛酸:6-半乳糖:9-岩藻糖)。
图7为亮菌菌丝体多糖联合5-FU化疗药物对荷瘤小鼠治疗21天后肿瘤实物图。第一行为对照组,第二行为5FU组,第三行为5-FU加亮菌菌丝体多糖低浓度组,第四行为5-FU加亮菌菌丝体多糖高浓度组。
具体实施方式
下面结合附图对本发明进一步说明。
实施例1:亮菌菌丝体多糖的制备
本发明实验所用的亮菌购自国家菌种资源库-中国农业微生物菌种保藏管理中心,编号ACCC 51415。
具体操作如下:
1、亮菌进行液体发酵后(葡萄糖-土豆液体培养基上方放入铝丝,经高压蒸汽灭菌后将黄豆大小的亮菌菌体置于400-450ml葡萄糖-土豆液体培养基铝丝上保证菌体浸润到培养基中,28℃培养18天得到亮菌菌丝体),收集菌体进行烘干,得到亮菌烘干体,将亮菌烘干体用粉碎机研磨成粉末状;
2、采用沸水提取法对亮菌胞内多糖进行3次提取,每次按固液比1:15加蒸馏水,提取2小时;6小时后取上清,旋蒸浓缩液体后进行醇沉,将得到的上清液按照1:4的比例加入乙醇,过夜,第二天4500转8分钟进行分离取沉淀,将沉淀加水溶解进行旋蒸,彻底旋出里面的乙醇,除去乙醇后进行冻干2到3天;
3、得到冻干粉末之后使用Sevag法去除里面的蛋白。将氯仿:正丁醇=4:1(V∶V)混合溶液加入冻干后的水溶液中,充分振摇后静置5分钟,4000r/min离心6分钟,收集上清液,重复上述步骤,直到液体里面的蛋白含量肉眼可见较少时结束。
4、将上清液装入透析袋中,在流动的自来水中透析48小时后,再用蒸馏水透析24小时。将透析后的溶液加入1/3体积的75%乙醇静置12小时后离心,收集沉淀,沉淀干燥;用丙酮和乙醚溶液对沉淀进行连续多次洗涤,将得到的亮菌菌丝体多糖沉淀于80℃干燥,碾磨后得到亮菌菌丝体多糖粉末。
5、将得到的白色亮菌菌丝体多糖溶于蒸馏水中,选择合适的料液浓度以及压力(200mg溶于1-1.5L的蒸馏水中,流速为1分钟俩毫升,根据流速调节压力)依次通过1×105Da大小的超滤膜和5×104Da大小的超滤膜,得到大小在1×105Da-5×104Da的亮菌菌丝体多糖。
实施例2:亮菌菌丝体多糖对三种肿瘤细胞的抑制增殖作用
实验材料:亮菌菌丝体多糖是从本实验室液体发酵得到的亮菌菌丝体通过水提醇沉的方法提取得到。人结肠癌细胞株SW620,人肺癌细胞株A549,人宫颈癌细胞株HeLa,人肝癌细胞株HepG2均购自中国科学院细胞库。实验方法:将纯化干燥的亮菌菌丝体多糖溶于ddH2O配置成10mg/ml浓度的溶液,过滤除菌存放与-20℃冰箱冻存。人结肠癌细胞SW620,人肺癌细胞A549,人宫颈癌细胞HeLa常规培养于新鲜的1640培养液中(含10%的胎牛血清(FBS)、1%的双抗(青霉素-链霉素混合液)、1%的谷氨酰胺(Gln)),人肝癌细胞HePG2常规培养与DMEM培养液中,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养,待细胞长到适量的时候进行传代,用胰消化酶消化3分钟,俩倍体积的完全培养液中和胰酶,然后将所得溶液1000转3分钟离心,吸取上清用新鲜的RPMI1640培养液或者DMEM培养液进行悬浮,将细胞浓度调整为5×104个/ml,接种于96孔板中,每个孔接种100μl,即每孔细胞数为5000个,设置3个平行复孔,同时设置不加细胞的空白对照用于校正。将上述96孔板置于37℃,5%CO2,饱和湿度的细胞培养箱中培养,24小时后加入不同浓度的亮菌菌丝体多糖进行处理(0,200,400μg/ml)。24小时后每个孔加入5mg/ml的MTT溶液10μl,然后用酶标仪测量其在490nm的吸光度,与只加培养液的细胞OD值相比较,测量亮菌菌丝体多糖对肿瘤细胞活力的作用。
计算公式:肿瘤细胞增殖抑制率=(1-(对照OD值-空白OD值)/(用药组OD-空白OD值))×100%
结果:当亮菌菌丝体多糖浓度为200μg/ml时,A549细胞的增长活性为81.32%,SW620细胞无明显变化,HeLa细胞无明显变化,HepG2细胞增长活性为85.21%。当亮菌浓度为400μg/ml,A549细胞的增长活性为48.97%,SW620细胞无明显变化,HeLa细胞增长活性为83.28%,HepG2细胞增长活性为74.37%。
由此可得,单独的亮菌菌丝体多糖对某癌症些具有一定的抗肿瘤作用,其对肺癌细胞A549作用效果最好,低浓度的亮菌菌丝体多糖对宫颈癌肝作用不明显,高浓度时具有一定的作用效果,对于结肠癌症细胞作用效果较低,没有明显的变化。
实施例3:亮菌菌丝体多糖对5-FU的体外抑瘤增效作用研究
实验材料:亮菌菌丝体多糖是从本实验室液体发酵得到的亮菌菌丝体通过水提醇沉的方法提取得到。人结肠癌细胞株SW620来源于中国科学院细胞库,常规培养于新鲜的1640培养液中(含10%的胎牛血清(FBS)、1%的双抗(青霉素-链霉素混合液)、1%的谷氨酰胺(Gln))。5-FU购自麦克林公司。
实验内容:将纯化干燥的亮菌菌丝体多糖溶于ddH2O配置成10mg/ml浓度的溶液,过滤除菌存放与-20℃冰箱冻存。人结肠癌细胞SW620,培养于新鲜的1640培养液中(含10%的胎牛血清(FBS)、1%的双抗(青霉素-链霉素混合液)、1%的谷氨酰胺(Gln)),置于37℃,5%CO2,饱和湿度的细胞培养箱中培养,待细胞长到适量的时候进行传代,将传代后生长情况良好的细胞进行悬浮,将细胞浓度调整为5×104个/ml,接种于96孔板中,每个孔接种100μl,即每孔细胞数为5000个,设置3个平行复孔,同时设置不加细胞的新鲜培养液100μl三个复孔,和空白对照,用于校正。
将上述处理过的96孔板置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养,培养24小时后吸去旧的培养液换成新鲜的培养液同时加入药物(5-FU以及5-FU加上亮菌菌丝体多糖)5-FU浓度为2μg/ml,亮菌菌丝体多糖为低高俩个浓度(200、400μg/ml),同时设置阴性对照。处理完成后继续培养48小时,每个孔加入5mg/ml的MTT溶液10μl,继续培养4个小时,之后吸去培养液每孔加入DMSO150μl,避光摇晃10分钟,用酶标仪测量其在490nm的吸光度,与不加阴性对照(5-FU和亮菌菌丝体多糖)的OD值相比较,测量亮菌菌丝体多糖对5-FU抑瘤的增效作用。
亮菌菌丝体多糖对5-FU的增效效果
结肠癌细胞抑制率(%)(X±S,n=6)
**表示与5-FU组相比较P<0.01,*表示与5-FU组相比较P<0.05
上述结果显示单独使用化疗药物5-FU时对于结肠癌细胞SW620具有一定的抑瘤效果,当5-FU与亮菌菌丝体多糖同时使用时,其对肿瘤细胞的作用效果远大于单独使用5-FU。
实施例4:亮菌菌丝体多糖对顺铂的体外抑瘤增效作用研究
实验材料:除了A549细胞代替SW620细胞,卡铂代替5-FU外,其余实验材料与实施例2的一样。
实验内容:除了A549细胞代替SW620细胞,卡铂代替5-FU外,其余实验内容与实施例2的一样。
实验结果:
肺癌细胞抑制率(%)(X±S,n=6)
**表示与卡铂组相比较P<0.01,*表示与卡铂组相比较P<0.05
上述结果显示单独使用化疗药物卡铂时对于肺癌细胞A549具有一定的抑瘤效果,当卡铂与亮菌菌丝体多糖同时使用时,其对肿瘤细胞的作用效果远大于单独使用卡铂。
实施例5:亮菌菌丝体多糖对紫杉醇的体外抑瘤增效作用研究
实验材料:除了HeLa细胞代替SW620细胞,紫杉醇代替5-FU外,其余实验材料与实施例2的一样。
实验内容:除了HeLa细胞代替SW620细胞,紫杉醇代替5-FU,其余实验内容与实施例2的一样。
实验结果:
宫颈癌细胞抑制率(%)(X±S,n=6)
**表示与紫杉醇组相比较P<0.01,*表示与紫杉醇组相比较P<0.05
上述结果显示单独使用化疗药物紫杉醇时对于宫颈癌细胞HeLa具有一定的抑瘤效果,抑制率为27.2%,当紫杉醇与亮菌菌丝体多糖同时使用时,其对肿瘤细胞的作用效果远大于单独使用紫杉醇。并且随着亮菌菌丝体多糖浓度的提高,作用效果越大,当多糖含量达到400μg/ml时对肿瘤细胞的抑制率达到47.16%,对肿瘤的抑制作用越强。
实施例6:亮菌菌丝体多糖对宾西他滨的体外抑瘤增效作用研究
实验材料:除了HepG2细胞代替SW620细胞,宾西他滨代替5-FU外,其余实验材料与实施例2的一样。
实验内容:除了HepG2细胞代替SW620细胞,宾西他滨实验结果:
肝癌细胞抑制率(%)(X±S,n=6)
**表示与宾西他滨组相比较P<0.01,*表示与宾西他滨组相比较P<0.05
实施例6:亮菌菌丝体多糖联合5-FU对结肠癌细胞SW620小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用
实验材料:5-FU注射液以及SW620细胞与实施例2相同,实验对象为BALB/c nude雄性小鼠,四到六周鼠龄。
实验方法:小鼠先系统性培养3到4天,提前培养所需数量的SW620细胞,待到细胞生长到70%~80%时将其消化下来,在无菌条件下制备成5×107/ml细胞悬液,以0.lml接种于BALB/c nude雄性小鼠右侧腋窝皮下。待到小鼠右下肢皮下长出黄豆大小肿瘤后动物随机分组。小鼠随机分为4组:①生理盐水组(阴性对照组);②5-FU 10mg/kg组(阳性对照组);③5-FU10mg/kg+亮菌菌丝体多糖100mg/kg组(小剂量组);③5-FU 10mg/kg+亮菌菌丝体多糖200mg/kg组(大剂量组)。给药方式如下,生理盐水组采用皮下注射0.2ml生理盐水,每三天注射一次,生理盐水灌胃0.2ml每天一次直到实验结束。5-FU 10mg/kg组采用皮下注射顺铂,注射体积为10mg/kg的浓度计算,每三天注射一次,生理盐水灌胃0.2ml每天一次直到实验结束。5-FU 10mg/kg+亮菌菌丝体多糖100mg/kg组采用皮下注射5-FU,注射体积为10mg/kg的浓度计算,每三天注射一次,每天灌胃0.2ml亮菌菌丝体多糖,使其体内的亮菌菌丝体多糖浓度为100mg/kg。5-FU 10mg/kg+亮菌菌丝体多糖200mg/kg组采用皮下注射5-FU,注射体积为10mg/kg的浓度计算,每三天注射一次,每天灌胃0.2ml亮菌菌丝体多糖,使其体内的亮菌菌丝体多糖浓度为200mg/kg,直到实验结束。
肿瘤体积每三天记录一次,肿瘤体积估算公式为:瘤体积(cm3)=Π/6×a×b2式中,a代表肿瘤的长径,b代表肿瘤的短径,单位cm)
抑瘤率计算公式:1-实验组体积(V实):阴性对照体积(V阴)
实验结果:如上表所示,5-FU 10mg/kg对肿瘤的抑制率为56.25%,低剂量组即5-FU10mg/kg+亮菌菌丝体多糖100mg/kg对肿瘤的抑制率为64.81%,高剂量组即5-FU10mg/kg+亮菌菌丝体多糖200mg/kg对肿瘤的抑制率为72.24%。由此结果可以得出亮菌菌丝体多糖联合化疗药物5-FU可以增强对肿瘤细胞的作用效果,并且随着多糖浓度的提高,作用效果更明显。
以上实验都验证了亮菌菌丝体多糖可以作为化疗药物的增效剂,增强化疗药物对于肿瘤细胞活性的抑制作用,并且随着亮菌菌丝体多糖浓度的增加,增效效果越好,大大提高了化疗药物的治疗效果。
Claims (3)
1.一种亮菌菌丝体多糖的应用,其特征在于:
将所述亮菌菌丝体多糖作为增效剂,与抗肿瘤化疗药物复配使用,以提高抗肿瘤的治疗效果;
所述亮菌菌丝体多糖通过如下步骤制备获得:
步骤1:亮菌进行液体发酵后,收集菌体进行烘干,研磨成粉末状;
步骤2:采用沸水提取法对亮菌胞内多糖进行多次提取,然后进行醇沉,除醇后冻干;
步骤3:使用Sevag 法去除冻干粉末所含的蛋白,然后加入氯仿和正丁醇的混合溶液,充分振摇后静置,离心,收集上清液,重复上述步骤,直到液体里面的蛋白含量肉眼可见较少时结束;
步骤4:将上清液装入透析袋中,在流动的自来水中透析,再用蒸馏水透析,将透析后的溶液进行醇沉、离心,收集沉淀,沉淀干燥;
步骤5:采用丙酮和乙醚溶液对沉淀进行连续多次洗涤,冻干碾磨后得到白色亮菌菌丝体多糖粉末;
步骤6:将得到的白色亮菌菌丝体多糖溶于蒸馏水中,依次通过1×105Da大小的超滤膜和5×104Da大小的超滤膜,得到大小在1×105Da-5×104Da的亮菌菌丝体多糖;
所述亮菌菌丝体多糖的总糖含量≥89%,单糖组成按摩尔百分比计为甘露糖:葡萄糖醛酸:半乳糖:岩藻糖=25.6:14.2:54.1:6.1;
所述化疗药物包括卡铂、紫杉醇、5-FU、宾西他滨中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:
所述亮菌菌丝体多糖与所述化疗药物的有效成分比为(100~200:1)。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:
所述肿瘤包括人肺癌、人结肠癌、人肝癌、人宫颈癌。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211390863.5A CN115521385B (zh) | 2022-11-07 | 2022-11-07 | 一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211390863.5A CN115521385B (zh) | 2022-11-07 | 2022-11-07 | 一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115521385A CN115521385A (zh) | 2022-12-27 |
CN115521385B true CN115521385B (zh) | 2023-11-03 |
Family
ID=84705000
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211390863.5A Active CN115521385B (zh) | 2022-11-07 | 2022-11-07 | 一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115521385B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN118203597A (zh) * | 2024-04-28 | 2024-06-18 | 安徽医科大学第一附属医院 | 亮菌多糖在制备治疗化疗性肠黏膜损伤的药物中的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111253496A (zh) * | 2020-01-21 | 2020-06-09 | 安徽大学 | 一种具有降血糖功效的亮菌菌丝体多糖 |
CN113831419A (zh) * | 2021-09-28 | 2021-12-24 | 安徽大学 | 一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和抑菌用途 |
CN115010822A (zh) * | 2022-06-09 | 2022-09-06 | 合肥诚志生物制药有限公司 | 一种亮菌菌丝体多糖及其用途 |
-
2022
- 2022-11-07 CN CN202211390863.5A patent/CN115521385B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111253496A (zh) * | 2020-01-21 | 2020-06-09 | 安徽大学 | 一种具有降血糖功效的亮菌菌丝体多糖 |
CN113831419A (zh) * | 2021-09-28 | 2021-12-24 | 安徽大学 | 一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和抑菌用途 |
CN115010822A (zh) * | 2022-06-09 | 2022-09-06 | 合肥诚志生物制药有限公司 | 一种亮菌菌丝体多糖及其用途 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
不同蜜环菌属真菌胞外多糖生物功能的研究;赵爽 等;河南农业大学学报;第53卷(第02期);第213-217页 * |
亮菌多糖对肿瘤免疫效应机制的研究;赵弋清;中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技;第1-64页 * |
亮菌多糖提取工艺优化及体外抗肿瘤活性研究;蔡凤 等;基因组学与应用生物学;第33卷(第05期);第1104-1109页 * |
亮菌多糖的分离纯化及体内抗肿瘤活性研究;蔡凤;解彦刚;黄纯;樊一桥;;基因组学与应用生物学;32(06);第767-770页 * |
亮菌多糖的单糖组成分析及含量测定方法;蔡晶晶;王雅洁;王蔷;宋小平;;长春师范大学学报;37(10);第73-77页 * |
亮菌多糖联合吉西他滨协同治疗胰腺癌效果及其作用机制的研究;陈军 等;第三十一届全国中西医结合消化系统疾病学术会议;第354页 * |
蔡凤 ; 解彦刚 ; 黄纯 ; 樊一桥 ; .亮菌多糖的分离纯化及体内抗肿瘤活性研究.基因组学与应用生物学.2013,32(06),第767-770页. * |
蔡晶晶 ; 王雅洁 ; 王蔷 ; 宋小平 ; .亮菌多糖的单糖组成分析及含量测定方法.长春师范大学学报.2018,37(10),第73-77页. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115521385A (zh) | 2022-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101020719B (zh) | 当归复合多糖、制备工艺及用途 | |
CN115521385B (zh) | 一种亮菌菌丝体多糖及其制备方法和在抗肿瘤中的应用 | |
CN115010822B (zh) | 一种亮菌菌丝体多糖及其用途 | |
CN110041441B (zh) | 一种红花多糖、其制备方法及在抗肿瘤药物中的应用 | |
CN1907277A (zh) | 短叶老鹳草素在肿瘤生长和增殖抑制剂中的应用 | |
CN112321737B (zh) | 平菇多糖硒苷-ⅱ及其制备和在制备特异性杀伤非小肺腺癌的药物中的应用 | |
CN1895337B (zh) | 党参黄芪组合物提高晚期肿瘤患者生存质量的制药用途 | |
CN104306401A (zh) | 一种升高白细胞作用的梅花鹿鹿脾提取物的制备及用途 | |
CN107397765A (zh) | 一种破壁灵芝孢子提取物及其提取方法和应用 | |
CN103330781A (zh) | 具有抗肿瘤作用的中药组合物及其注射液的制备方法 | |
CN113332327A (zh) | 西洋参黄芪制剂在制备提高免疫力的产品中的应用 | |
CN102423384B (zh) | 一种治疗肺癌的中药制剂及其制备方法 | |
CN105902561A (zh) | 龙须菜多糖作为抗肿瘤化疗药增效剂的应用及抗肿瘤药物 | |
TW201808316A (zh) | 牛樟段木栽培牛樟芝子實體及固態培養菌絲體水及乙醇萃取物之組合物應用於抗癌藥輔助劑 | |
CN113209149A (zh) | 米托蒽醌与人参总皂苷联合用药在制备治疗胃癌药物中的应用 | |
CN111840523B (zh) | 一种含活性蛋白和活性脂肪酸的抗癌症的药物组合物 | |
CN110772513B (zh) | 一种治疗白血病的药物 | |
CN101874868B (zh) | 一种治疗肺癌的药物及其制备方法 | |
CN110025643B (zh) | 一种抗癌活性复方物及其制备方法与应用 | |
CN116850202B (zh) | 一种抗癌药物复合物及其制备方法和应用 | |
CN103585485B (zh) | 一种抗癌药物及其制备方法与应用 | |
CN103191268B (zh) | 一种治疗肺癌的中药组合物 | |
CN102309493B (zh) | 一种抗癌药物组合物 | |
CN101015680B (zh) | F-苷肽在制备治疗肿瘤的药物中的应用 | |
CN106727733B (zh) | 一种鲜冬虫夏草抗肿瘤化疗的联合药物及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |