CN103554290B - 一种肿节风酸性多糖及其制备方法、应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，公开了肿节风酸性多糖精品SGP‑2，其特征在于其多糖含量在90％以上，数均分子量1000～2000KDa；单糖组成包括葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸；糖苷键键型有α(1→4)半乳糖醛酸、α(1→4)半乳糖醛酸甲酯、α(1→5)阿拉伯糖、α(1→4)甘露糖、β(1→6)葡萄糖、β(1→3)半乳糖、α(1→4)葡萄糖、β(1→4，6)葡萄糖、α(1→3，6)甘露糖和α(1→4，6)半乳糖。本发明提供了肿节风酸性多糖精品SGP‑2在抑制α‑葡萄糖苷酶活性方面的应用以及肿节风酸性多糖在制备治疗糖尿病药物中的应用。本发明还提供了肿节风酸性多糖精品SGP‑2在制备抗肿瘤药物中的应用。

Description

一种肿节风酸性多糖及其制备方法、应用

技术领域

本发明涉及植物药肿节风，确切地说是肿节风酸性多糖精品SGP-2，涉及肿节风酸性多糖精品SGP-2在抑制α-葡萄糖苷酶活性方面的应用以及在制备治疗糖尿病药物中的应用，本发明还提供了肿节风酸性多糖精品SGP-2在制备抗肿瘤药物方面的应用。

背景技术

糖尿病是一种非常普遍的内分泌代谢紊乱疾病，是胰岛素分泌和利用障碍引起的以高血糖为特征的慢性疾病。糖尿病发病率逐年增长，已成为全世界的突出问题。预防和治疗这类疾病的有效方法之一是限制或延缓食物中碳水化合物在消化道内分解。人体对淀粉、糊精、蔗糖等碳水化合物的利用吸收依赖于小肠刷状缘上α-葡萄糖苷酶的活性，α-葡萄糖苷酶通过水解α-1，4糖苷键从多糖的非还原端切下葡萄糖，从而增加机体的餐后血糖，因此α-葡萄糖苷酶是治疗糖尿病的有效靶点。α-葡萄糖苷酶抑制剂是一种新型的口服控制血糖的药物，目前广泛用于临床的有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。这类药物可有效控制糖尿病人餐后血糖的升高，从而控制病情的发展和减少糖尿病并发症的发生。

恶性肿瘤是当前危害人类健康的主要疾病之一。恶性肿瘤的特征为异常细胞的失控生长，并可由原位向周围组织浸润，或向远处器官转移，侵犯主要器官引起功能衰竭，最后导致死亡。骨肉瘤是骨科最常见的恶性肿痛，是由能产生骨样组织的间充质细胞所构成，好发于青少年，恶性程度高，近年来发病率持续上升。骨肉瘤恶性程度高、转移率高，骨骼增长期是其最为常见的发病阶段，并且起病时临床上没有特异性或者典型的临床症状，与外伤或生长时疼痛的临床表现相类似，容易造成误诊，约20％的患者初诊时就可以出现肿瘤的远处转移，骨肉瘤治疗失败和死亡的最主要原因是发生了远处转移，如肺转移。目前治疗骨肉瘤的常用手段为手术治疗、化疗、放疗及生物治疗等。

肿节风(Sarcandra glabra(Thunb)Nakai)为金粟兰科草珊瑚属的干燥全草，又名草珊瑚、九节茶、接骨木、骨消风、野靛青等，为多年生常绿草本，分布于江西、安徽、浙江、湖南、湖北、四川、广东、广西等地。肿节风入药历史悠久，味苦、辛、性平，归心、肝经，具有活血祛瘀、止痛、清热解毒等功效，用于血热紫斑、紫癜、风湿痹痛，跌打损伤的治疗。近代研究表明肿节风具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗血小板减少等作用，在医药领域应用广泛，近几部《中华人民共和国药典》均有收载。肿节风的资源蕴藏量较大，并目易于栽培，有广阔的开发前景，目前被广泛应用于药品、保健品、食品、化妆品和烟叶等领域中，肿节风制剂的销售总产值已超过100亿人民币。全国有多家药厂以肿节风为原料生产相关制剂，包括肿节风浸膏片、清热消炎宁胶囊、血康口服液、肿节风注射液及复方草珊瑚含片；已开发的保健产品有草珊瑚牙膏、草珊瑚口香糖、草珊瑚保健茶、九节茶香口胶等。目前对肿节风的研究大多集中在小分子化学成分如倍半萜、香豆素、黄酮、皂苷类化合物，但对大分子类物质如多糖类成分的相关研究较少。本申请人在前期获得了纯度较高的肿节风多糖精品SGP-1，研究了其抗炎和免疫调节活性，证明其可以应用于炎症和免疫相关疾病的治疗(申请公开号：CN102603907A)。在此基础上，本发明通过分离纯化获得了另一多糖组分肿节风酸性多糖精品SGP-2，并研究了肿节风酸性多糖精品SGP-2的抑制α-葡萄糖苷酶活性、降血糖活性和抗肿瘤活性，证明其可以应用于糖尿病和肿瘤相关疾病的治疗。

发明内容

本发明的目的是提供一种肿节风酸性多糖精品SGP-2，其特征在于其多糖含量在90％以上，数均分子量1000～2000KDa；单糖组成包括葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸；糖苷键键型有α(1→4)半乳糖醛酸、α(1→4)半乳糖醛酸甲酯、α(1→5)阿拉伯糖、α(1→4)甘露糖、β(1→6)葡萄糖、β(1→3)半乳糖、α(1→4)葡萄糖、β(1→4，6)葡萄糖、α(1→3，6)甘露糖和α(1→4，6)半乳糖。

所述的肿节风酸性多糖精品SGP-2的制备方法，其特征是由下列步骤组成：

步骤一：取肿节风全草，粉碎后过80-120目筛得原料，5-20倍乙醇回流脱脂，残渣加入10-30倍重量的水，70-90℃提取1-3小时，间歇搅拌，4000r.p.m离心去沉淀，得提取液，离心后残渣再加10-30倍肿节风原料重量的水，70-90℃再提取1-3小时，离心除去残渣，合并两次提取的上清液，浓缩后离心，向离心上清液加入1-6倍体积的乙醇，4℃放置24小时，离心去上清液，以乙醇洗涤沉淀三次，真空干燥；

步骤二：取干燥后的肿节风水提物溶于20-50倍重量的水，加入D301-G大孔树脂，室温下间歇搅拌1-3小时，浓缩后4000r.p.m离心去沉淀，向上清液中加入1-6倍体积的无水乙醇，4℃放置24小时，离心除去上清液，用无水乙醇洗涤沉淀三次，干燥后得本发明的肿节风多糖粗品SGP；

步骤三：所述的肿节风多糖粗品SGP溶解于水，上DEAE-52阴离子交换柱，去离子水洗脱后用1mol/L NaCl溶液洗脱，以硫酸苯酚法检测，收集NaCl溶液洗脱峰，减压浓缩，流水透析24-36小时，浓缩后经4倍乙醇沉淀，4℃放置，离心去上清，以无水乙醇洗涤三次，真空干燥；

步骤四：将真空干燥后的样品溶于去离子水，上已平衡好的Sephacryl S-400分子筛凝胶柱，用去离子水洗脱，分部收集，以硫酸苯酚法检测，收集洗脱峰，浓缩后经冻干制得本发明的肿节风酸性多糖精品SGP-2。

本发明还涉及所述的肿节风酸性多糖精品SGP-2在制备治疗糖尿病药物中的用途。

本发明还涉及所述的肿节风酸性多糖精品SGP-2在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的用途。

本发明还涉及所述的肿节风酸性多糖精品SGP-2在制备抗肿瘤药物中的用途。

本发明所述的肿节风酸性多糖精品SGP-2与本申请人原先公开的肿节风多糖精品SGP-1(申请公开号：CN102603907A)的区别见表1，它们是从肿节风中分离纯化得到的不同多糖组分，在分离方法、分子量、单糖组成、糖苷键键型以及药理活性上均有差异。

表1肿节风酸性多糖精品SGP-2与肿节风多糖精品SGP-1的比较

有益效果

本发明将肿节风全草粉碎后先用乙醇回流，可以除去大量色素和脂溶性杂质，而肿节风多糖几乎不被提出，再用热水提取，得到的多糖含量较高；在制备肿节风酸性多糖精品SGP-2过程中，采用离子交换树脂进行纯化的方法，去除蛋白更完全，然后再经分子筛凝胶柱进一步精制，所得的肿节风酸性多糖精品SGP-2杂质少，纯度高；通过对肿节风酸性多糖精品SGP-2的分子量、纯度、单糖组成、糖苷键链接方式等进行结构表征，获得了肿节风酸性多糖精品SGP-2的详细结构信息；并对肿节风酸性多糖精品SGP-2的α-葡萄糖苷酶抑制活性、降血糖活性以及抗肿瘤活性研究，增加了肿节风酸性多糖的新用途，为肿节风酸性多糖应用于制备降血糖药物以及抗肿瘤药物的临床研究提供科学依据。由于肿节风多糖具有可食性，用于制备药物安全无毒害，因此可以将肿节风酸性多糖精品SGP-2应用于制备保健品或是降血糖、抗肿瘤的药物，拥有广阔的应用前景，具有良好的社会效益和经济效益。

附图说明

图1是本发明所述肿节风酸性多糖精品SGP-2的高效分子排阻色谱。

图2是本发明所述肿节风酸性多糖精品SGP-2的红外光谱。

图3是本发明所述肿节风酸性多糖精品SGP-2的柱前衍生高效液相色谱，其中Man表示甘露糖，GalA表示半乳糖醛酸，Glc表示葡萄糖，Gal表示半乳糖，Ara表示阿拉伯糖。

图4是本发明所述肿节风酸性多糖精品SGP-2的核磁共振氢谱。

图5是本发明所述肿节风酸性多糖精品SGP-2的核磁共振碳谱。

具体实施方式

材料：

(1)实验动物：C57BL/6J雄性小鼠，清洁级，6-8周，扬州大学比较医学中心，合格证号：SCXK(苏)2012-0004

(2)原料：肿节风全草，产地江西，2010年秋季采割。经中国药科大学中药学院秦民坚教授鉴定为金粟兰科(Chloranthaceae)植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai的干燥全草。

(3)试剂：

Sephacryl S-400树脂 美国Pharmacia公司

DEAE 52树脂 美国Pharmacia公司

右旋糖酐标准品 中国生物制品检定所

D301G大孔树脂 天津南开大学化工厂

三氟乙酸 上海化学试剂厂

1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP) 美国sigma公司

4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG) 美国sigma公司

α-葡萄糖苷酶 美国sigma公司

阿卡波糖 德国拜耳药业

链脲佐菌素(STZ) 美国sigma公司

小鼠体内α-葡萄糖苷酶测试盒 武汉华美生物工程有限公司

葡萄糖测试试剂盒 南京建成生物工程研究所有限公司

四甲基偶氮唑盐(MTT) 美国sigma公司

渥漫青霉素(Wortmannin) 澳大利亚Fermentek公司

实施例1：

本发明所述肿节风酸性多糖精品SGP-2的具体制备方法如下：

(1)称取粉碎后过80目筛的肿节风全草药材100g于提取容器中，加入5倍体积乙醇，回流脱脂3小时，4层纱布除去上清，残渣补足去离子水至1000mL，70℃水浴提取1小时，间歇搅拌。收集提取液后，残渣再补足去离子水至1000mL，70℃水浴提取1小时，间歇搅拌。纱布滤去残渣，合并提取液浓缩至20mL，4000r.p.m/min离心去沉淀，加入1倍乙醇沉淀，4℃放置24小时，离心除去上清液，以无水乙醇洗涤3次，真空干燥得到肿节风多糖提取物；

(2)取肿节风水提物2g于容器中，充分溶解于100mL去离子水，加入D301-G大孔树脂脱色和除蛋白质，间或搅拌3小时，溶液过滤后浓缩至10mL，加入60mL无水乙醇沉淀，4℃放置24小时。离心除去上清。以无水乙醇洗涤3次，真空干燥得到肿节风多糖脱色产物；

(3)取肿节风多糖脱色产物200mg，充分溶解于去离子水，用平衡好的DEAE-52离子交换柱分离，规格为(2.6×30cm)，平衡液为去离子水，上样体积为10mL，先以300mL去离子水洗脱，再以1mol/L的NaCl溶液洗脱，分部收集，硫酸苯酚法跟踪检测，合并相同组分。

(4)离子交换柱分离所得NaCl溶液洗脱组分进行Sephacryl S-400分子筛柱层析，以去离子水洗脱。柱规格为(1.0×100cm)，分部收集，硫酸苯酚法跟踪检测，合并相同组分。冷冻干燥，得到肿节风酸性多糖精品SGP-2。

肿节风酸性多糖精品SGP-2的多糖含量为98.4％，其中酸性糖含量37.5％(间羟联苯法测定)，中性糖含量为60.9％(硫酸苯酚法测定)

肿节风酸性多糖精品SGP-2的纯度和分子量通过高效分子排阻色谱法测定：以Shodex SUGAR KS-805(8mmID×300mm)为高效液相色谱柱，采用示差折光检测器；色谱条件为：H₂O为流动相，流速1mL/min，样品浓度为Img/mL，每次进样20μL，检测时间20min。结果如图1所示，由图1可知，肿节风酸性多糖精品SGP-2呈单一对称峰，说明肿节风酸性多糖精品SGP-2的纯度高；在同样的分析条件下，绘制各种多糖标准品(21.4，41.1，84.4，133.8和2，000KDa)的分子量对数与保留时间的标准曲线，并获得标准曲线的回归方程，通过将肿节风酸性多糖精品SGP-2的保留时间(图1)代入标准曲线回归方程，计算得到肿节风酸性多糖精品SGP-2的平均分子量为1880KDa。

肿节风酸性多糖精品SGP-2的红外光谱如图2所示，波数3442cm^-1的强吸收峰是O-H的伸缩振动，2933cm^-1吸收峰是糖环C-H伸缩振动，1000-1200cm^-1间的一系列吸收峰是由糖环上C-O的伸缩振动，1743cm^-1，1425cm^-1和1257cm^-1的吸收峰分别是醛酸基团的C=O伸缩振动，C-O伸缩振动和O-H伸缩振动，855cm^-1和895cm^-1的吸收峰表明既有α构型又有β构型的糖单位。

肿节风酸性多糖精品SGP-2的单糖组成通过柱前衍生高效液相色谱法测定：以2mol/L三氟乙酸水解，甲醇洗涤后蒸干，以去离子水溶解，水解液经PMP衍生化后进行高效液相检测；色谱条件：色谱柱为waters synmetry C18(150mm×4.6mm)，流动相为乙酸铵(pH5.5)/乙腈(78/22)，检测波长为250nm。结果如图3所示，根据保留时间和峰面积进行计算，并与单糖标准品进行对照，可知肿节风酸性多糖精品SGP-2含有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸。

肿节风酸性多糖精品SGP-2的核磁共振波谱(NMR)如图4-5所示，在核磁共振氢谱(¹HNMR)中(图4)，化学位移4.2-5.35ppm表明肿节风酸性多糖精品SGP-2中存在α构型和β构型的糖苷键连接，在核磁共振碳谱(¹³C NMR)中(图5)，化学位移110.1和109.6ppm为α构型的L-阿拉伯糖的端基碳信号，化学位移98.5-107.0ppm同样表明肿节风酸性多糖精品SGP-2中存在α构型和β构型的糖苷键连接，化学位移67-70ppm表明存在(1→6)糖苷键连接，化学位移80-83ppm表明存在(1→3/4)糖苷键连接，具体分析结果如表2所示。

表2肿节风酸性多糖精品SGP-2的核磁共振氢谱(¹H NMR)和碳谱(¹³C NMR)的化学位移

本实施例通过一系列分离纯化手段获得了肿节风酸性多糖精品SGP-2，其糖含量为98.4％，分子量为1880KDa，单糖组成含有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸，糖苷键键型包括α(1→4)半乳糖醛酸、α(1→4)半乳糖醛酸甲酯、α(1→5)阿拉伯糖、α(1→4)甘露糖、β(1→6)葡萄糖、β(1→3)半乳糖、α(1→4)葡萄糖、β(1→4，6)葡萄糖、α(1→3，6)甘露糖和α(1→4，6)半乳糖。

实施例2

以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物，对实施例1中获得的肿节风酸性多糖精品SGP-2的α-葡萄糖苷酶抑制活性进行评价。取不同浓度的肿节风酸性多糖精品SGP-2160μL分别与α-葡萄糖苷酶溶液20μL(1U/mL)混合，于37℃温孵10min，再加入PNPG20μL(5μmol/L)，37℃保温30min。阿卡波糖(Acarbose)为阳性对照。计算肿节风酸性多糖精品SGP-2对α-葡萄糖苷酶的抑制率。如表3所示，肿节风酸性多糖精品SGP-2能有效抑制体外α-葡萄糖苷酶的活性，且抑制率随作用浓度升高而增大，并且当精品SGP-2浓度125μg/mL即相当于阿卡波糖500μg/mL抑制水平。

表3肿节风酸性多糖精品SGP-2体外对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

注：^*P＜0.05，^**P＜0.01，与空白组相比。

实施例3

在高脂联合STZ致糖尿病小鼠模型上检测实施例1中获得的肿节风酸性多糖精品SGP-2的降血糖作用。选取体重为18-22g的雄性C57/BJ小鼠，高脂饲料喂养3周后，按100mg/kg剂量一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)，继续高脂饲料喂养3周后监测小鼠血糖。选择餐后血糖值大于11.1mmol/L的小鼠，随机分为5组，每组8只，设模型组：灌胃给予生理盐水；阳性药组：灌胃给予10mg/kg阿卡波糖；肿节风酸性多糖精品SGP-2低剂量组：灌胃给予150mg/kg肿节风酸性多糖精品SGP-2；肿节风酸性多糖精品SGP-2中剂量组：灌胃给予300mg/kg肿节风酸性多糖精品SGP-2；肿节风酸性多糖精品SGP-2高剂量组：灌胃给予600mg/kg肿节风酸性多糖精品SGP-2。选取8只未造模的C57/BJ小鼠为空白组：灌胃给予生理盐水。检测给药0d，7d，14d，21d，各组小鼠血糖浓度。阳性药剂量是根据临床用药剂量推算得到的，而肿节风酸性多糖给药剂量的选择是参考已有文献(人工虫草多糖降血糖作用及其机制研究，黄志江等，中国药科大学学报，2002年第33卷第1期，第51-54页；Characterization andhypoglycemic effect of a polysaccharide extracted from the fruit of Lyciumbarbarum L.，Jing Zhu et a1.Carbohydrate Polymers98(2013)8-16)中多糖的给药剂量，一般为100-600mg/kg。实验结果如表4所示，给药后21d内，模型组血糖一直显著高于空白组。肿节风酸性多糖精品SGP-2作用组、阳性药组与模型组相比，血糖明显下降，其中肿节风酸性多糖精品SGP-2中剂量组与阳性对照药效果相当，并药效呈剂量依赖关系。肿节风酸性多糖精品SGP-2能有效降低糖尿病小鼠的血糖值，可用于治疗糖尿病。

表4肿节风酸性多糖精品SGP-2对高脂联合STZ致糖尿病小鼠血糖的影响(X±SD，n=8)

注：^*P＜0.05，^**P＜0.01，与模型组相比，^#P＜0.05与空白组相比。

实施例4

本实施例使用与实施例3相同的材料和动物模型，不同之处在于本实施例利用小鼠体内α-葡萄糖苷酶测试盒测定给药后肿节风酸性多糖精品SGP-2对糖尿病模型小鼠体内小肠α-葡萄糖苷酶活性的影响。临床研究表明，糖尿病患者小肠黏膜α-糖苷酶的高表达，从而导致餐后高血糖的发生。实施例2证实肿节风酸性多糖精品SGP-2能有效抑制体外α-糖苷酶的活性，因此本实施例应用糖尿病小鼠模型，检测的是药物对体内小肠α-葡萄糖苷酶的作用。如表5所示，模型组中葡萄糖苷酶活性显著高于空白组；与模型组相比，肿节风酸性多糖精品SGP-2能有效降低糖尿病小鼠小肠内α-葡萄糖苷酶的活性，其中肿节风酸性多糖精品SGP-2高剂量组与阳性对照药效果相当，并药效呈剂量依赖关系。根据实施例3中的结果，肿节风酸性多糖精品SGP-2中剂量组降血糖效果与阳性药效果相当，表明肿节风酸性多糖精品SGP-2除了通过抑制小肠内α-葡萄糖苷酶，还可能通过其他途径发挥降血糖作用。

表5肿节风酸性多糖精品SGP-2对体内α-葡萄糖苷酶的抑制作用(X±SD，n=8)

注：^*p＜0.05，^**p＜0.01，与模型组相比，^#p＜0.05与空白组相比。

实施例5：

利用MTT实验检测实施例1中获得的肿节风酸性多糖精品SGP-2对骨肉瘤细胞活力的影响。取对数生长期的细胞，消化后用完全培养液制成单细胞悬液，调整浓度为4×10⁴个/mL，每孔200μL接种于96孔板中，于培养箱内常规培养过夜。吸弃上清，每孔加入200μL含有不同浓度的肿节风酸性多糖精品SGP-2的培养基，空白对照组只加培养基，加药组和空白组均设3个复孔。多柔比星设为阳性对照组。加药48h后检测，按以下步骤进行：弃上清，每孔加入5mg/mL的MTT20μL，继续培养4h，弃上清；每孔加入150μL DMSO，均匀振荡10min后，于酶标仪上570nm/630nm双波长处读取OD值。计算肿瘤细胞抑制率：肿瘤细胞生长抑制率(％)=(1-加药组平均OD值/对照组平均OD值)×100％。如表6所示，肿节风酸性多糖精品SGP-2能有效抑制骨肉瘤细胞活力，且抑制率随浓度升高而增加。

表6肿节风酸性多糖精品SGP-2体外对骨肉瘤MG-63细胞活力的影响(X±SD，n=3)

注：^*P＜0.05，^**P＜0.01，与空白组相比。

实施例6：

利用细胞划痕实验检测实施例1中获得的肿节风酸性多糖精品SGP-2对骨肉瘤MG-63细胞迁移能力的影响。取对数生长期的细胞，消化后用完全培养液制成单细胞悬液，调整浓度为4×10⁴个/mL，每孔0.5mL接种于12孔板中，于培养箱内常规培养过夜。用200μL枪头垂直于孔板制造细胞划痕，吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。每孔加入1mL含有不同浓度的肿节风酸性多糖精品SGP-2的无血清培养基。空白对照组只加无血清培养基，阳性对照组加100nM的渥漫青霉素(Wortmannin)，加药组、空白组和阳性组均设3个复孔。加药后24小时拍照记录，统计划痕面积。细胞划痕实验是用于测定肿瘤细胞的运动特性的方法。其借鉴体外细胞致伤愈合实验模型，在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，未加入药物的细胞保持了原有的迁移能力，在一段时间后可通过迁移将划痕掩盖，而加入约物后可使细胞迁移受到抑制，划痕愈合受阻。本实验通过比较肿节风酸性多糖精品SGP-2作用组与空白组的划痕愈合情况，从而检测肿节风酸性多糖精品SGP-2对骨肉瘤细胞迁移的抑制作用。如表9所示，肿节风酸性多糖精品SGP-2作用组的划痕面积显著大于空白组，并且精品SGP-2浓度125nM即相当于渥漫青霉素100nM的抑制水平，说明肿节风酸性多糖精品SGP-2能有效抑制骨肉瘤细胞迁移。

表7肿节风酸性多糖精品SGP-2对骨肉瘤MG-63细胞迁移能力的影响(X±SD，n=3)

注：^*P＜0.05，^**P＜0.01，与空白组相比。

Claims (2)

1.肿节风酸性多糖，其特征在于其多糖含量在90％以上，数均分子量1000～2000KDa；单糖组成包括葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸；糖苷键键型有α(1→4)半乳糖醛酸、α(1→4)半乳糖醛酸甲酯、α(1→5)阿拉伯糖、α(1→4)甘露糖、β(1→6)葡萄糖、β(1→3)半乳糖、α(1→4)葡萄糖、β(1→4，6)葡萄糖、α(1→3，6)甘露糖和α(1→4，6)半乳糖；所述肿节风酸性多糖由以下制备方法制得：

步骤一：取肿节风全草，粉碎后过80-120目筛得原料，5-20倍乙醇回流脱脂，残渣加入10-30倍重量的水，70℃-90℃提取1-3小时，间歇搅拌，4000r.p.m离心去沉淀，得提取液，离心后残渣再加10-30倍肿节风原料重量的水，70℃-90℃再提取1-3小时，离心除去残渣，合并两次提取的上清液，浓缩后离心，向离心上清液加入1-6倍体积的乙醇，4℃放置24小时，离心去上清液，以乙醇洗涤沉淀三次，真空干燥；

步骤二：取干燥后的肿节风水提物溶于20-50倍重量的水，加入D301-G大孔树脂，室温下间歇搅拌1-3小时，浓缩后4000r.p.m离心去沉淀，向上清液中加入1-6倍体积的无水乙醇，4℃放置24小时，离心除去上清液，用无水乙醇洗涤沉淀三次，干燥后得肿节风多糖粗品SGP；

步骤三：所述的肿节风多糖粗品SGP溶解于水，上DEAE-52阴离子交换柱，去离子水洗脱后用1mol/L NaCl溶液洗脱，以硫酸苯酚法检测，收集NaCl溶液洗脱峰，减压浓缩，流水透析24-36小时，浓缩后经4倍乙醇沉淀，4℃放置，离心去上清，以无水乙醇洗涤三次，真空干燥；

步骤四：将真空干燥后的样品溶于去离子水，上已平衡好的Sephacryl S-400分子筛凝胶柱，用去离子水洗脱，分部收集，以硫酸苯酚法检测，收集洗脱峰，浓缩后经冻干制得肿节风酸性多糖。

2.权利要求1所述的肿节风酸性多糖在制备治疗糖尿病药物中的用途，其特征在于所述的治疗糖尿病药物为α-葡萄糖苷酶抑制剂。