发明内容
本发明的目的在于提供一种大枣降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位在制备降血脂及抗氧化活性药物方面的应用。
同时,本发明的目的还在于提供一种由大枣水溶性部位和山楂的醇溶性部位组成的降血脂的药物。
为了实现上述目的,本发明的技术方案采用了一种大枣降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位在制备降血脂及抗氧化活性药物方面的应用。
进一步,本发明的技术方案还采用了一种降血脂的药物,由大枣降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位联合制备而成。
所述大枣降血脂有效部位的提取方法为大枣先经乙醇脱脂后,再用水提,再脱去蛋白即得;
所述大枣降血脂有效部位的提取方法具体包括以下步骤:将大枣去核,用90%食用乙醇按体积与大枣质量比5∶1,重复冷浸3次,每次7天,过滤,将滤渣风干,将滤渣用水煮三次,每次15min,将提取液合并浓缩,烘干得大枣粗多糖;然后将大枣粗多糖以30%的三氯乙酸脱蛋白,静置,离心,上清液以碱液调PH=7,减压浓缩,浓缩液对水透析,透析后的浓缩液加入无水乙醇使其含醇量为70%,静置,离心,收集沉淀物,即得大枣降血脂有效部位即大枣多糖DW。
所述的山楂降血脂有效部位的提取方法为山楂的乙醇提取物过大孔树脂柱的40%乙醇冲洗部分。
所述山楂降血脂有效部位的提取方法具体为;取山楂的成熟果实,用乙醇按1∶5(m∶v,山楂与乙醇的比值)的比例浸泡6-8天,每天搅拌1次,取其滤液,浓缩,滤渣按按食用乙醇体积与去核山楂质量比为1∶5的比例浸泡3天,每天搅拌1次,连续提取2次,取其滤液、浓缩,合并浓缩物即得浸膏; 将山楂乙醇浸膏用20%的乙醇稀释上AB-8大孔树脂柱,先用20%乙醇冲洗杂质,然后用40%的乙醇冲洗,将冲洗液合并蒸干即得山楂降血脂有效部位SC。所述的乙醇为食用级别。
本发明中大枣降血脂有效部位即大枣多糖具有较好的抗氧化活性,体内实验也表明大枣多糖能降低高脂血症小鼠的血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇,且可通过氧化途径(升高超氧化物岐化酶SOD、降低脂质过氧化产物-丙二醛MDA)来降低血脂水平。对大枣多糖有效部位进行进一步开发,发挥其多靶点协同预防和治疗高血脂等疾病的作用。另外,经过实验证明,大枣降血脂部位DW和山楂降血脂部位SC在调节高脂血症方面两者配伍的协同增效作用明显,在抗脂质过氧化方面两者配伍的协同增效作用也较为明显。由体内外实验可知,DW、SC以及DW+SC在体外具有一定的抗氧化活性,同时在体内可以提升高脂血症小鼠血清中SOD水平,降低MDA水平,可以说体内外是一致的;同时两者在体外抗氧化具有正协同作用,在体内的抗脂质过氧化和调血脂均有正协同作用,体内外也是一致的。所以说SC和DW具有协同调血脂和抗氧化作用。
具体实施方式
实施例1
本实施例为大枣降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位在制备降血脂及抗氧化活性药物方面的应用。
体外抗氧化试验:
材料与试剂:
大枣多糖(DW)、SC均由实验室制备提供。二苯代苦味肼基自由基DPPH(日本东京化成工业株式会社);Trolox(Aldrich);ABTS[2,2′-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐](Fluka);BHT(Acros organics);甲醇,醋酸钠,FeCl3·6H2O,冰醋酸,过二硫酸钾均为分析纯。
主要仪器:
UV-2000型紫外可见分光光度计(尤尼可上海仪器有限公司),电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司),旋转蒸发仪(东京理化),电热套(北京中兴伟业仪器有限公司),超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
试验方法:
1)本实验采用清除二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)和清除ABTS自由基二种方法,并以BHT作为阳性对照,来研究DW和SC的抗氧化活性。结果见表1
2)本实验采用清除ABTS自由基方法来研究DW和SC两者之间的协同抗氧化活性。
数据处理:采用响应曲面法(RSM)对协同数据进行分析。结果如下:
(1)单独样品的抗氧化活性:ABTS测定结果表示:样品抗氧化能力的顺序为SC>BHT>DW;DPPH测定结果:SC>BHT>DW。
(2)DW和SC的协同抗氧化活性:采用RSM对表4中试验结果进行分析,得到响应方程及等高线见图1
P=-0.82+592.57X1+502.65X2+1280.42X1*X2-7916.66X1 2-150.19X2 2 (r2=0.9613)
响应方程中,β1、β2>0,表明SC+DW浓度的增大皆有助于复合抗氧化活性的提高;β12>0,表明SC+DW具有正协同作用;由于β12>β1>β2,所以各因素对SC+DW组合的抗氧化活性的影响程度:SC+DW的协同作用>SC>DW。
表1样品的抗氧化活性
注:IC50为半数抑制率,指清除率为50%时所需抗氧化剂的浓度(ug/ml)。
a:为阳性对照品;
b:浓度为2mg/ml的百分抑制率,因为样品浓度达到最大时,而抑制率小于50%,所以无法计算其IC50。
表2DW与SC对ABTS自由基的清除作用
体内降血脂试验
动物:昆明小鼠,空腹体重为23±2g,全部雄性。由河南省医学动物实验中心提供。
材料与试剂:大枣多糖、SC由河南大学天然药物研究所制备提供。决明子降脂片,吉林吉春制药有限公司批号:070501。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒,南京建成生物工程研究所提供。总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒,北京中生生物工程高技术公司提供。
试验方法:
高脂乳剂的配制:猪油20%、胆固醇10%、丙硫氧嘧啶1%、2%胆盐(配成10%溶液)、丙二醇2%和吐温801%。
动物分组与处理:取60只小鼠,平均体重23±2g,按实验要求分为正常对照组,高脂模型组,给药组(包括大枣多糖组、SC组、大枣多糖+SC配伍合用组),阳性对照组。正常对照组动物上午ig(灌胃)给于蒸馏水,下午ig 0.5%CMC-Na,高脂模型组均于每天上午ig给于高脂乳剂(0.2ml/10g·d),下午ig 0.5%CMC-Na,给药组分别于每天上午ig给于高脂乳剂(0.2ml/10g·d),下午ig给药,给药量见表3。10天后,各组小鼠均禁食12h,眼底静脉丛取血,离心分离血清用于血脂及SOD、MDA的测定。
表2动物分组与处理
指标测定方法:TC,TG,LDL-C,HDL-C,MDA,SOD的测定按试剂盒说明方法进行
数据处理:实验数据x±s表示,实验统计采用spss10.0统计软件进行单因素方差分析,协同作用采用Burgi公式法。结果如下:
(1)DW、SC以及DW+SC对高脂血症小鼠血脂的影响,结果见表3。DW、SC以及DW+SC均可明显的降低高脂血症小鼠血清中TC、TG和LDL-C水平,并且可明显升高HDL-C水平。并且DW和SC在这两个剂量时,两者效应基本一样,同时在实验中各取两者剂量的一半进行配伍作用,配伍的效果均好于单独用药的效果,Q>1,所以说DW和SC在调节高脂血症方面两者配伍的协同增效作用明显。
(2)DW、SC以及DW+SC对高脂血症小鼠抗氧化能力的测定,结果见表3.DW、SC以及DW+SC均可明显的提升高脂血症小鼠血清中SOD的水平,并且DW+SC还可降低小鼠血清中MDA的水平,但对于肝重比,则没有太大影响。并且DW和SC在这两个剂量时,两者效应基本一样,同时在实验中各取两者剂量的一半进行配伍作用,配伍的结果均好于单独用药的结果,Q>1,所以说DW和SC在抗脂质过氧化方面两者配伍的协同增效作用明显。
表3DW、SC以及DW+SC对营养性高脂血症小鼠血脂及抗氧化能力的影响(x±s)
注:与正常对照组比较:Δ代表显著性差异,ΔΔ代表非常显著性差异,ΔΔΔ代表极显著性 差异;与高脂模型组比较:*代表显著性差异,**代表非常显著性差异,***代表极显著性差异。
由体内外实验可知,DW、SC以及DW+SC在体外具有一定的抗氧化活性,同时在体内可以提升高脂血症小鼠血清中SOD水平,降低MDA水平,可以说体内外是一致的;同时两者在体外抗氧化具有正协同作用,在体内的抗脂质过氧化和调血脂均有正协同作用,体内外也是一致的。所以说SC和DW具有协同调血脂和抗氧化作用。
实施例2
本实施例的降血脂药物,由大枣降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位联合制备而成。其中,大枣降血脂有效部位的提取方法为:将大枣去核,用90%食用乙醇按体积比与大枣质量5∶1重复冷浸3次,每次7天,过滤,将滤渣风干,将滤渣用水煮三次,每次15min,将提取液合并浓缩,烘干得大枣粗多糖;然后将大枣粗多糖以30%的三氯乙酸脱蛋白,静置,离心,上清液以碱液调PH=7,减压浓缩,浓缩液对水透析,透析后的浓缩液加入无水乙醇使其含醇量为70%,静置,离心,收集沉淀物,即得大枣降血脂有效部位即大枣多糖DW。
山楂降血脂有效部位的提取方法具体为;取山楂的成熟果实,用食用级乙醇按1∶5(m∶v,山楂与乙醇的比值)的比例浸泡7天,每天搅拌1次,取其滤液,浓缩,滤渣按食用乙醇体积与去核山楂质量1∶5的比例浸泡3天,每天搅拌1次,连续提取2次,取其滤液、浓缩,合并浓缩物即得浸膏;将山楂乙醇浸膏用20%的乙醇稀释上AB-8大孔树脂柱,先用20%乙醇冲洗杂质,然后用40%的乙醇冲洗,将冲洗液合并蒸干即得山楂降血脂有效部位SC。
最后所应说明的是:以上实施例仅用以说明,而非限制本发明的技术方案,尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解:依然可以对本发明进行修改或者等同替换,而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。