CN101757176A - 一种新型的α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取及活性测定 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种新型的α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取及活性测定。用微波法从蔷薇科植物地榆中提取得到的有效成分,通过对酵母α-葡萄糖苷酶活性抑制测定,该有效成分能显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性,抑制率达100%。地榆提取物将作为一种新型的a-葡萄糖苷酶抑制剂用于糖尿病的治疗,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明是关于一种新型的α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取及活性测定,属于中药或天然药物领域。
背景技术
糖尿病是一种严重危害人们健康的常见慢性疾病,其死亡率仅次于心脑血管疾病和肿瘤而居第三位。随着人们饮食习惯和环境因素的改变,我国糖尿病患者逐年上升且呈低龄化趋势。如何有效防治糖尿病已成为当前食品界和医药界的重点攻关课题。
糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是由胰岛素分泌的绝对和相对不足以及细胞对胰岛素敏感性下降,引起的以糖代谢紊乱为主的临床综合症,以高血糖为主要标志,且尿中有糖。空腹血糖和餐后血糖是糖尿病诊断的主要指标。餐后血糖由饮食中碳水化合物消化得到寡糖,再经α-葡萄糖苷酶的水解作用而产生。
α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)存在于人体小肠刷状缘上,参与人体糖的代谢。对维持人体正常生理功能起着重要作用。α-葡萄糖苷酶通过水解α-1,4糖苷键从淀粉和多糖的非还原端切下葡萄糖,人体对淀粉、糊精、蔗糖等碳水化合物的利用吸收依赖于小肠刷状缘上该酶的活性,通过调节该酶的活性可改善糖尿病患者餐后血糖的水平。
α-葡萄糖苷酶抑制剂是临床上治疗糖尿病的一种药物,它可竞争性地占据酶与碳水化合物结合的络合位点,从而推迟底物水解产生单糖的时间,达到降低餐后血糖、平抑血糖浓度的目的。大量的医学研究表明,α-葡萄糖苷酶抑制剂对治疗和预防糖尿病等具有重要作用。目前主要来源于微生物代谢产物,如阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇等。临床证明阿卡波糖、伏格列波糖等治疗II型糖尿病有明显的降低餐后高血糖效果,是较好的治疗糖尿病药物。α-葡萄糖苷酶抑制剂可逆性竞争抑制小肠壁刷状缘上α-葡萄糖苷酶的活性,从而明显延缓和阻碍碳水化合物的降解和在消化道的吸收速度,延迟来自双糖、低聚糖及多糖的葡萄糖吸收。有效推迟并减轻糖尿病人餐后血糖升高的时间及进程,有助于控制糖尿病的发展尤其是并发症的发生。
但是,微生物来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂含量少,提取分离困难。我国具有广阔的中药资源,经研究发现,α-葡萄糖苷酶抑制剂不仅存在于微生物中,而且在天然植物中也广泛存在。我国科学工作者以中药疗效为基础,对某些中草药的提取物能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性进行了研究,并取得一定成果。如:高小平等从126种中药经水煮醇沉提取,进行α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选,其中24种中药提取物能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,而大黄、山茱萸、赤芍、五倍子这四种提取物对α-葡萄糖苷酶和蔗糖转化酶抑制活性明显强于阿卡波糖。李宪璀等.对青岛沿海2O种常见大型海藻的脂溶性提取物的酶抑制活性进行初步筛选。结果发现所有的海藻脂溶性提取物对α-葡萄糖苷酶都有一定的抑制活性从活性测定结果看,证明海藻提取物中有一种葡萄糖苷酶抑制剂存在。
本发明是用微波法从蔷薇科植物地榆中提取得到的有效成分,通过对酵母α-葡萄糖苷酶活性抑制测定,该有效成分能显著的抑制α-葡萄糖苷酶的活性,抑制率达100%。
发明内容
本发明的目的之一是提供了一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取及活性测定方法。
本发明的目的之二是以地榆提取物为活性有效成分作为糖尿病治疗的一种新型原料。
本发明的技术解决方案如下:
取地榆块根,切成薄片,按照1∶15-20的比例加入水,用微波加热,温度为86℃-90℃,提取时间0.5-1h,重复提取三次,减压浓缩得到地榆粗提物。加入10倍体积的氯仿-正丁醇(v∶v=4∶1)脱蛋白,而后以3000r/min离心20min,除去沉淀,取上清液在紫外下(260nm-280nm)测定无蛋白吸收峰为止。上清液再用蒸馏水透析48h,除去溶剂,浓缩透析液,真空干燥,即得到本发明所说的地榆提取物。
建立以4-硝基酚-2-D-吡喃葡萄糖苷为标准底物的测定地榆提取物对酵母α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。
标准体系建立:以4-硝基酚-2-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物,67mmol/1磷酸钾缓冲液(pH6.8)1.7ml,1mg/ml谷胱甘肽50μl,2mg/ml α-葡萄糖苷酶10μl,37℃保温10min后,每1ml加入116mmol/L PNPG 300μl,37℃保温10min后,加入0.1mol/L碳酸钠10ml终止反应,紫外分光光度计测定400nm处的吸收值。
地榆水提物200μl加入标准反应体系中,先与2mg/ml a-葡萄糖苷酶10μl,37℃保温10min,再加入116mmol/L PNPG 300μl,37℃保温10min后,加入0.1mol/L碳酸钠终止反应,紫外分光光度计测定400nm处的吸收值。
结论:地榆提取液对a-葡萄糖苷酶活性抑制很强,达到100%。
本发明制备的地榆提取物,是一种新型的a-葡萄糖苷酶抑制剂,用水为溶剂,微波法提取,工艺操作简单,提取时间短,有效成分的得率高。将得到的粗提物脱蛋白、除去溶剂,即得到本发明所说的提取物。建立以4-硝基酚-2-D-吡喃葡萄糖苷为标准底物的测定地榆提取物对酵母α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。结果表明,地榆提取物对a-葡萄糖苷酶活性抑制很强,达到100%。那么地榆提取物将作为一种新型的a-葡萄糖苷酶抑制剂用于糖尿病的治疗,具有广阔的应用前景。
Claims (4)
1.一种新型的α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取方法,其特征在于包括以下步骤:
取地榆块根,切成薄片,按照比例加入水,用微波加热提取,重复提取几次,减压浓缩得到地榆粗提物。加入氯仿-正丁醇(v∶v=4∶1)脱蛋白,而后离心,除去沉淀,取上清液在紫外下测定无蛋白吸收峰为止。上清液再用蒸馏水透析48h,除去溶剂,浓缩透析液,真空干燥,即得到本发明所说的地榆提取物。
2.根据权利要求1所说的提取物的制备方法,其特征在于:原料按照1∶15-20的比例加水,反应温度为86℃-90℃,提取时间0.5-1h,提取次数为3次。
3.根据权利要求1所说的提取物的制备方法,其特征在于:得到的粗提物,加入10倍体积的氯仿-正丁醇脱蛋白,3000r/min离心20min,在260nm-280nm测定有无吸收峰;蒸馏水透析时间为48h。
4.根据权利要求1所说的地榆提取物,是一种新型的α-匍萄糖苷酶抑制剂,对糖尿病的治疗有显著的作用。
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CN101948762A (zh) * | 2010-09-14 | 2011-01-19 | 江苏大学 | 利用微波真空干燥制备活性干酵母的方法 |
CN109938742A (zh) * | 2019-03-22 | 2019-06-28 | 陈德香 | 基于动态血糖值主动治疗的糖尿病治疗表 |
CN110845632A (zh) * | 2019-11-03 | 2020-02-28 | 福建农林大学 | 一种野鸦椿果皮多糖的制备新方法及其产品应用 |
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C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
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