CN112401239A - 一种降低血糖的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种新的降低血糖的组合物及其制备方法和应用，以青钱柳、桑叶、白芸豆、桦褐孔菌、燕麦β‑葡聚糖、覆盆子等药食同源类原料为主，通过超临界CO2萃取、超声辅助破壁提取等先进技术充分分离、纯化各种原料中的活性成分（例如多糖类、黄酮类、皂苷类等物质），同时基于现有技术描述的中医药的降糖机制，利用各种物质的相互协同作用通过多途径、多靶点降低血糖，并能有效缓解糖尿病慢性并发症；同时没有副作用，具有良好的安全性，能够长期用作辅助降血糖的食品、保健品或药品的原料。

Description

一种降低血糖的组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于食品深加工技术领域，特别涉及一种降低血糖的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
糖尿病（diabetesmellitus，DM）是以高血糖为主要标志，由遗传和环境因素相互作用引起的临床综合征，病人由于胰岛素分泌绝对不足或相对不足以及靶组织细胞对胰岛素敏感性降低导致糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列物质的代谢紊乱。其中，中国是全球糖尿病患者最多的国家，以II型糖尿病（T2DM）为主，占糖尿病患者的90%以上。
目前，多数糖尿病患者需要长期口服降糖药物或注射胰岛素来控制血糖水平，然而，由于糖尿病的发病机理复杂，症状多元化，现有西药如胰岛素、磺脲素、双胍素等功能单一，不能改善机体的其它机能，且会带来不同程度的副作用，如腹泻、腹胀等，以及长期用药会出现治疗无效的情况。
传统中医药在糖尿病理论及临床实践中有丰富的经验，在糖尿病治疗和并发症防治方面有明显的优势，中药可以通过多途径、多靶点降低血糖，并能有效缓解糖尿病慢性并发症。不同于西药的单一降糖药效，中药方剂中各药物间的相互配合、作用更为复杂多样，所谓“药有个性之专长，方有合群之妙用”。然而，中药方剂的配伍中药种类多、作用复杂，缺乏明确的降血糖机制及配伍依据，导致原料配伍重复率高、保健功能不明显，对糖尿病的控制效果有很大的局限性。
近年来，通过消费天然降糖食品来部分代替糖尿病药物的趋势不断增强，天然降糖食品的特点是副作用小、来源广泛、价格低廉、用法简便，容易被普通人接受，是日常保健和辅助治疗的最佳手段。例如：
青钱柳是我国特有的单种属植物，广泛分布于江西、浙江、安徽、湖南、广东等长江以南地区。民间将其叶作为茶饮，该茶味甜，具有生津止渴、清热解暑、降血糖、降血压和延年益寿的功效。2013年底，经国家卫计委批准青钱柳叶成为新食品原料，现代药理实验证实青钱柳叶具有治疗糖尿病、高脂血症、高血压及肥胖的作用，目前研究表明青钱柳叶中的三萜类、黄酮类、多糖类物质都能显著降低糖尿病小鼠血糖水平。
桑叶是桑科植物桑的干燥叶，始载于《神农本草经》为药食两用资源，其味苦、甘，性寒，归肺、肝经，具有疏散风热、清肺润燥、平肝明目的功能。现代药理研究证实桑叶具有降糖作用，可防治糖尿病，桑叶水提液、总黄酮、总多糖均具有显著地降低空腹血糖，改善糖耐量，同时还能降低血脂，保护胰岛细胞的效果。
然而，现有技术大多简单采用按照传统煎煮的方法，或者简单粉碎的方法制成各种剂型，剂量大，活性成分不明确，作用机制也不明确。如发明专利CN2019104875804公开一种具有降血糖、降脂作用的中药组合物及其制备方法和用途，制备方法是将各种原料进行煎煮、浓缩、喷雾干燥、制粒工艺，直接将各种原料进行简单混合，无法准确确定活性成分以及相应的作用机制和配伍依据；又如发明专利CN2017108816558公开一种调节高血糖的功能性食品及其制备方法，将青钱柳、桑叶、葛根、苦瓜等原料传统水煎煮、浓缩、醇沉、干燥制备而成。
因此，寻找具有降血糖作用的天然食品资源，改进新食品资源的利用方法以及合理配伍，开发既具有显著降血糖效果、又没有副作用的降血糖保健食品已经成为当前全球关注和研究的热点。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种新的降低血糖的组合物，及其制备方法和应用，以青钱柳、桑叶、白芸豆、桦褐孔菌、燕麦β-葡聚糖、覆盆子等药食同源类原料为主，通过超临界CO2萃取、超声辅助破壁提取等先进技术充分分离、纯化各种原料中的活性成分（多糖类、黄酮类、皂苷类等物质），利用各种物质的相互协同作用起到良好的降血糖效果，同时没有副作用，具有良好的安全性，能够长期用作辅助降血糖的食品、保健品或药品的原料。
为了实现上述目的，本发明提供如下的技术方法，一种降低血糖的组合物，包括以下重量份数的原料：
青钱柳叶提取物 5-20份，桑叶提取物 5-20份，桦褐孔菌提取物 10-25份，食用菌粉60-100份，覆盆子提取物 1-4份，蛹虫草粉 10-15份，燕麦β-葡聚糖 3-6份，白芸豆粉 60-100份。
优选地，所述食用菌粉由猴头菌粉，黑木耳粉和金针菇粉组成，重量比为猴头菌粉：黑木耳粉：金针菇粉=（1-3）：（1-2）：（1-3）。
优选地，所述一种降低血糖的组合物，包括以下重量份数的原料：
青钱柳叶提取物 8-18份，桑叶提取物10-15份，桦褐孔菌提取物15-20份，食用菌粉80-100份，覆盆子提取物 2-3份，蛹虫草粉 12-15份，燕麦β-葡聚糖 4-6份，白芸豆粉 80-100份。
优选地，所述青钱柳叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将青钱柳叶清洗烘干并粉碎，加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为40-45MPa，萃取温度为45-55℃，CO2流量为20-25L/h，萃取时间60-120min，得到萃取物和萃余物；
（2）将步骤（1）得到的萃余物烘干，加入超声波装置中进行超声波处理，温度为40-55℃，时间3-6min；向超声处理后的萃余物中加入6-10倍体积量的水，回流提取2-3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得沉淀物；
（3）将步骤（1）获得的萃取物和步骤（2）获得的沉淀物混合均匀即制备得到青钱柳叶提取物。
优选地，所述桑叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将桑叶清洗烘干并粉碎，加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为40-45MPa，萃取温度为45-55℃，CO2流量为20-25L/h，萃取时间60-120min，得到萃取物和萃余物；
（2）将步骤（1）得到的萃余物烘干，加入超声波装置中进行超声波处理，温度为40-55℃，时间3-6min；向超声处理后的萃余物中加入6-10倍体积量的水，回流提取2-3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得沉淀物；
（3）将步骤（1）获得的萃取物和步骤（2）获得的沉淀物混合均匀即制备得到桑叶提取物。
优选地，所述桦褐孔菌提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将桦褐孔菌在转速110-140r/min、温度26-31℃条件下发酵11-14天；离心收集菌丝体和发酵液；
（2）将菌丝体烘干至含水量不高于12%时，经过气流粉碎机破碎至不低于200目的粉末，加入5-8倍重量的水制备得到混合液；
（3）将步骤（2）制备得到的混合液与步骤（1）得到的发酵液混合均匀，于-4℃-0℃下超声处理5-10min；然后回流提取2-3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得桦褐孔菌提取物。
优选地，所述食用菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）分别选择猴头菌，黑木耳和金针菇，脱水干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机干法粉碎，过100目筛得到猴头菌，黑木耳和金针菇粗粉；
（2）将步骤（1）制备的猴头菌，黑木耳和金针菇粗粉置于-15℃-0℃环境中真空干燥处理10-12h；取出后在-15℃-0℃的低温环境下，用气流破壁机处理20-30min，气流粉碎的压力为1.5-2.0Mpa，即可制备得到猴头菌粉，黑木耳粉和金针菇粉；
（3）将步骤（2）制备得到的猴头菌粉，黑木耳粉和金针菇粉按照重量比猴头菌粉：黑木耳粉：金针菇粉=（1-3）：（1-2）：（1-3）混合均匀后，加热熟化即制备得到食用菌粉。
优选地，所述覆盆子提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将覆盆子烘干至含水量不高于12%时，粉碎至不低于200目的粉末备用；
（2）将步骤（1）制备的覆盆子粉末加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为25-45Mpa、温度为30-55℃、CO2流量为20-40L/h、萃取时间为60-120min；得到萃取物
（3）将步骤（2）得到的萃取物与重量为萃取物60-80%的β-环糊精和重量为萃取物60-80%的麦芽糊精混合均匀；经过减压浓缩，冷冻干燥后制备得到覆盆子提取物。
优选地，所述蛹虫草粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）称取蛹虫草洗净后干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机粉碎至不低于50目，制备得到粗粉；
（2）将步骤（2）制备得到的粗粉置于-15℃-0℃环境中真空干燥处理10-12h；取出后在-15℃-0℃的低温环境下，用气流破壁机处理20-30min，气流粉碎的压力为1.5-2.0Mpa，即可制备得到蛹虫草粉。
优选地，所述白芸豆粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）称取白芸豆洗净后蒸熟，然后干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机粉碎至不低于50目，制备得到粗粉备用；
（2）将步骤（1）得到的粗粉置于-15℃-0℃环境中真空干燥处理10-12h；取出后在-15℃-0℃的低温环境下，用气流破壁机处理20-30min，气流粉碎的压力为2.5-3.0Mpa，即得到白芸豆粉。
优选地，所述燕麦β-葡聚糖的分子量为50-100x105mol/g。
本发明的另一个目的在于提供一种上述降低血糖的组合物的制备方法，包括以下步骤：
1.备料
根据上述方法分别制备青钱柳叶提取物、桑叶提取物、桦褐孔菌提取物、食用菌粉、覆盆子提取物、蛹虫草粉、燕麦β-葡聚糖和白芸豆粉；
2.混合
按照配方量将上述青钱柳叶提取物、桑叶提取物、桦褐孔菌提取物、食用菌粉、覆盆子提取物、蛹虫草粉、燕麦β-葡聚糖和白芸豆粉置于混料机中混合均匀得到混合粉末；
3.灭菌
将混合粉末置于微波干燥灭菌装置中进行灭菌操作，得到降低血糖的组合物。
本发明的另一个目的在于提供上述降低血糖的组合物的用途，所述组合物在制备预防或辅助治疗糖尿病的食品、保健品或药物中的应用。
优选地，所述食品、保健品或药物的剂型为散剂、胶囊、颗粒剂、片剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
近年来中医药在防治糖尿病特别是II型糖尿病中取得了较好的疗效，中医辨证糖尿病属于“消渴”病范畴，究其病机主要在于阴津亏损，燥热偏甚，而以阴虚为本，燥热为标，燥热内生，津干液枯，气血涩滞，久而为瘀。其中，研究发现，中医药的降糖靶点几乎分布在胰岛素信号通路的各个环节，例如：（1）抑制α－葡萄糖苷酶；（2）抑制糖异生，促进糖原合成；（3）促进胰岛素分泌，增加血清胰岛素含量；（4）改善胰岛β细胞功能，抑制β细胞凋亡；（5）增加胰岛素受体数目及敏感性，改善胰岛素抵抗；（6）作用于胰岛素胞内信号传导通路，纠正信号传导异常；（7）胰岛素样作用；（8）增强 GLUT-4活性、促进葡萄糖利用。
本发明基于现有技术描述的中医药的降糖机制，筛选并复配多种具有降低血糖作用的药食同源物质，通过优化合适的制备工艺充分提取、活化原料中的降低血糖的活性成分，利用各种物质的相互协同作用通过多途径、多靶点降低血糖，并能有效缓解糖尿病慢性并发症；同时没有副作用，具有良好的安全性，能够长期作为辅助降血糖的保健品。
现有技术研究指出：青钱柳提取物能够改善胰岛β细胞功能，抑制β细胞凋亡，以及促进胰岛素分泌，增加血清胰岛素含量；桦褐孔菌提取物能够抑制α－葡萄糖苷酶的活性，延缓葡萄糖的吸收；猴头菌具有良好的抗炎、抗氧化作用，能够降低血糖，提高葡萄糖耐受量；黑木耳能够抑制α－葡萄糖苷酶、α－淀粉酶的活性以及抑制高聚糖的分解；覆盆子具有抗氧化性能，能够改善胰岛β细胞功能；蛹虫草粉具有清除自由基，提高抗氧化性的作用，能够修复胰岛β细胞并改善糖耐受量，有效调节糖尿病基体的能量代谢；桑叶提取物改善糖耐量，同时还能降低血脂，保护胰岛β细胞； 燕麦β-葡聚糖是可溶性膳食纤维，可以降低食品的血糖生成指数，食用后可以通过降低α－淀粉酶的活性来延缓淀粉的消化吸收 从而达到降血糖效果；白芸豆粉含有较高活性的α－淀粉酶抑制物质，是一种复合糖蛋白，国外称之为“starch-blocker”，意思是“淀粉吸收阻断剂”，有研究表明，α－淀粉酶抑制物质能抑制肠胃道内唾液、胰淀粉酶的活性，阻碍或延缓人体对食物中主要的碳水化合物的水解和消化，降低食物中淀粉糖类物质的分解吸收，从而起到降低血糖、血脂的作用，抑制血糖浓度的升高；金针菇粉能够增强外围细胞的敏感度，减轻胰岛素抵抗。
另外，本发明根据原料种类、活性成分的不同，选择合适的提取方法或超微粉碎方法，使得活性成分能够充分、快速、绿色的制备得到，工艺简单，绿色环保，安全无毒，适合糖尿病人长期服用。
本发明从不同原料中提取具有降血糖功能的成分，并将各成分进行配伍、组合，达到协同增效的作用，可作为降血糖的辅助药物、营养增补剂、营养添加剂和作为功能因子应用于食品、保健品或药品，可以解决单一组分降血糖功能性弱的问题。
附图说明
图1是本发明提供的降低血糖的组合物对正常小鼠血糖的影响。
图2是本发明提供的降低血糖的组合物对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠血糖的影响。
图3是本发明提供的降低血糖的组合物对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠糖耐量的影响。
图4是本发明提供的不同组合的降低血糖的组合物对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠血糖的影响。
图5是本发明提供的不同组合的降低血糖的组合物对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠糖耐量的影响。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
降低血糖组合物的制备
本发明以下实施例提供一种降低血糖的组合物及其制备方法和应用，首先制备青钱柳叶提取物，桑叶提取物，桦褐孔菌提取物，食用菌粉，覆盆子提取物，蛹虫草粉，燕麦β-葡聚糖，白芸豆粉。
其中，1.所述青钱柳叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）将青钱柳叶清洗烘干并粉碎，加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为40MPa，萃取温度为50℃，CO2流量为20L/h，萃取时间100min，得到萃取物和萃余物；
（2）将步骤（1）得到的萃余物烘干，加入超声波装置中进行超声波处理，温度为50℃，时间6min；向超声处理后的萃余物中加入8倍体积量的水，回流提取3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得沉淀物；
（3）将步骤（1）获得的萃取物和步骤（2）获得的沉淀物混合均匀即制备得到青钱柳叶提取物。
2.所述桑叶提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）将桑叶清洗烘干并粉碎，加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为40MPa，萃取温度为50℃，CO2流量为20L/h，萃取时间100min，得到萃取物和萃余物；
（2）将步骤（1）得到的萃余物烘干，加入超声波装置中进行超声波处理，温度为50℃，时间6min；向超声处理后的萃余物中加入8倍体积量的水，回流提取3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得沉淀物；
（3）将步骤（1）获得的萃取物和步骤（2）获得的沉淀物混合均匀即制备得到桑叶提取物。
3.所述桦褐孔菌提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）将桦褐孔菌在转速130r/min、温度30℃条件下发酵14天；离心收集菌丝体和发酵液；
（2）将菌丝体烘干至含水量不高于12%时，经过气流粉碎机破碎至不低于200目的粉末，加入8倍重量的水制备得到混合液；
（3）将步骤（2）制备得到的混合液与步骤（1）得到的发酵液混合均匀，于0℃下超声处理10min；然后回流提取3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得桦褐孔菌提取物。
4.所述食用菌粉的制备方法，包括以下步骤：（1）分别选择猴头菌，黑木耳和金针菇，脱水干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机干法粉碎，过100目筛得到猴头菌，黑木耳和金针菇粗粉；
（2）将步骤（1）制备的猴头菌，黑木耳和金针菇粗粉置于0℃环境中真空干燥处理12h；取出后在-15℃的低温环境下，用气流破壁机处理30min，气流粉碎的压力为2.0Mpa，即可制备得到猴头菌粉，黑木耳粉和金针菇粉；
（3）将步骤（2）制备得到的猴头菌粉，黑木耳粉和金针菇粉按照重量比猴头菌粉：黑木耳粉：金针菇粉=1： 1：3混合均匀后，加热熟化即制备得到食用菌粉。
5.所述覆盆子提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）将覆盆子烘干至含水量不高于12%时，粉碎至不低于200目的粉末备用；
（2）将步骤（1）制备的覆盆子粉末加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为45Mpa、温度为45℃、CO2流量为30L/h、 萃取时间为120min；得到萃取物
（3）将步骤（2）得到的萃取物与重量为萃取物80%的β-环糊精和重量为萃取物60%的麦芽糊精混合均匀；经过减压浓缩，冷冻干燥后制备得到覆盆子提取物。
6.所述蛹虫草粉的制备方法，包括以下步骤：（1）称取蛹虫草洗净后干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机粉碎至不低于50目，制备得到粗粉；
（2）将步骤（2）制备得到的粗粉置于0℃环境中真空干燥处理12h；取出后在-15℃的低温环境下，用气流破壁机处理30min，气流粉碎的压力为2.0Mpa，即可制备得到蛹虫草粉。
7.所述白芸豆粉的制备方法，包括以下步骤：（1）称取白芸豆洗净后蒸熟，然后干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机粉碎至不低于50目，制备得到粗粉备用；
（2）将步骤（1）得到的粗粉置于0℃环境中真空干燥处理12h；取出后在0℃的低温环境下，用气流破壁机处理30min，气流粉碎的压力为3.0Mpa，即得到白芸豆粉。
本发明实施例同时提供一种上述降低血糖的组合物的制备方法，包括以下步骤：
1.备料
称取上述方法制备的青钱柳叶提取物、桑叶提取物、桦褐孔菌提取物、食用菌粉、覆盆子提取物、蛹虫草粉、燕麦β-葡聚糖和白芸豆粉；
2.混合
按照表1的配方量将上述青钱柳叶提取物、桑叶提取物、桦褐孔菌提取物、食用菌粉、覆盆子提取物、蛹虫草粉、燕麦β-葡聚糖和白芸豆粉置于混料机中混合均匀得到混合粉末；
3.灭菌
将混合粉末置于微波干燥灭菌装置中进行灭菌操作，得到降低血糖的组合物。
表1
Figure 679028DEST_PATH_IMAGE002
降低血糖组合物效果测试
1.毒理学安全性评价
1.1急性毒性试验：采用Wistar大鼠及ICR种小鼠，做对上述实施例1-10制备得到的降低血糖的组合物，急性毒性试验，LD50值(半数致死量)均大于20g/kgBW(每千克体重用药量)，动物活动正常，未发现任何症状，属实际无毒物质。
1.2三项致突试验：用上述实施例1-10制备得到的降低血糖的组合物完成Ames试验、小鼠骨髓PCE微核试验和小鼠精子畸变试验，结果均为阴性。
1.3三十天喂养试验：用上述实施例1-10制备得到的降低血糖的组合物，完成30天喂养试验，受试物于6.0、4.5、3.0g/kgBW剂量(相当于人群推荐量0.06g/kgBW的100、75和50倍)时，对生长发育、血液系统，肝、肾功能，蛋白、脂肪、糖的代谢，以及主要脏器的组织学改变，均无明显影响。
辅助降血糖效果测试
1.1对正常小鼠血糖的影响
小鼠禁食4小时，自由饮水，从内眦静脉丛取血测空腹血糖值，按血糖水平分为三组：空白对照组、受试物组(采用实施例1-10所得产品试验)和阳性对照组（喂食二甲双胍）。采取灌胃法，受试物组灌胃高剂量(1.5g/kgBW)的受试物，空白对照组灌胃相应含量的生理盐水，阳性对照组灌胃剂量为0.15g/kgBW。连续喂养四周后，测定空腹血糖值。观察受试物对正常小鼠血糖的影响，具体结果见图1。
由图1可见，给予正常小鼠受试物四周后，受试物组的血糖值与空白对照组比较无显著差异(P＞0.05)，阳性对照组的血糖值下降明显，证明实施例1-10所得产品均对正常小鼠血糖无影响。
1.2对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠血糖的影响
小鼠禁食24小时后，尾静脉注射四氧嘧啶生理盐水溶液（40mg/kgBW），于注射后的第7天，禁食4小时，自由饮水，测定空腹血糖值，选血糖值在15-25mmol/L者为高血糖模型成功动物，并按血糖水平随机分组：高血糖模型对照组、实施例1-10、阳性对照组（喂食二甲双胍）。实施例1-10组灌胃1.5g/kgBW剂量的受试物。高血糖模型对照组灌胃相应含量的生理盐水，对照组（喂食二甲双胍）灌胃为0.15g/kgBW。连续喂养四周后，测定各组动物的空腹血糖值。观察受试物对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠血糖有无拮抗作用。
由图2可见，给受试物前，实施例1-10、阳性对照组与高血糖模型对照组比较均无显著差异(P＞0.05)。给予相应受试物四周后，实施例1-10组的血糖值明显低于高血糖模型对照组，证实实施例1-10的产品具有明显的辅助降血糖作用。
1.3对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠糖耐量的影响
高血糖模型动物禁食4小时，实施例1-10灌胃1.5g/kgBW剂量的受试物，高血糖模型照组灌胃相应含量的生理盐水，阳性对照组（喂食二甲双胍）灌胃为0.15g/kgBW。20分钟后经口给予葡萄糖2.0g/kgBW，测定给葡萄糖后0小时、0.5小时和2小时的血糖值。
由图3可见，灌胃葡萄糖后0.5小时，实施例1-10组的血糖值与高血糖模型组比较具有明显降低，灌胃葡萄糖后2小时，实施例1-10组的血糖值与高血糖模型对照组比较也有降低。
不同青钱柳叶提取方法对降低血糖组合物效果的影响
（1）制备青钱柳叶提取物B1，其仅用超临界CO2提取，包括以下方法：将青钱柳叶清洗烘干并粉碎，加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为40MPa，萃取温度为50℃，CO2流量为20L/h，萃取时间100min，得到萃取物，即为青钱柳叶提取物B1；
（2）制备青钱柳叶提取物B2，其仅用水提取，包括以下方法：将青钱柳叶清洗烘干并粉碎，加入超声波装置中进行超声波处理，温度为50℃，时间6min；向超声处理后的萃余物中加入8倍体积量的水，回流提取3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得沉淀物；即为青钱柳叶提取物B2
（3）制备青钱柳叶和桑叶的混合提取物B3，所述方法包括以下步骤：1.按重量比2:1称取青钱柳叶和桑叶，清洗烘干并粉碎，加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为40MPa，萃取温度为50℃，CO2流量为20L/h，萃取时间100min，得到萃取物和萃余物；
2.将步骤（1）得到的萃余物烘干，加入超声波装置中进行超声波处理，温度为50℃，时间6min；向超声处理后的萃余物中加入8倍体积量的水，回流提取3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得沉淀物；
3.将步骤（1）获得的萃取物和步骤（2）获得的沉淀物混合均匀即制备得到青钱柳叶/桑叶混合提取物。
按照实施例4的配比，将青钱柳叶提取物B1、青钱柳叶提取物B2替换实施例4中的青钱柳叶提取物，以及将青钱柳叶提取物B3替换实施例4中的青钱柳叶和桑叶提取物，其余组分含量不变，测试对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠血糖以及耐量的影响，实验设计与1.2和1.3一致，结果见表2和表3：
表2
Figure 533851DEST_PATH_IMAGE004
表3
Figure 500539DEST_PATH_IMAGE006
从表2-3可知，本发明通过将超临界CO2提取和水提取进行组合能够充分获取青钱柳叶中的有效成分，并对血糖的降低作用更加明显；同时，将桑叶和青钱柳叶共同提取也能明显提升降低血糖的作用。
不同覆盆子提取方法对降低血糖组合物效果的影响
（1）制备覆盆子提取物C1，包括以下步骤：将覆盆子烘干至含水量不高于12%时，粉碎至不低于200目的粉末备用；将上述步骤制备的覆盆子粉末加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为45Mpa、温度为45℃、CO2流量为30L/h、 萃取时间为120min；得到萃取物，即为覆盆子提取物C1。
按照实施例3的配比，用覆盆子提取物C1替换覆盆子提取物，其余组分含量不变，测试对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠血糖以及耐量的影响，实验设计与1.2和1.3一致，结果见表4和表5：
表4
Figure 630169DEST_PATH_IMAGE008
表5
Figure 382225DEST_PATH_IMAGE010
从表4和5可知，通过对覆盆子提取物进行修饰，提高其水溶性能够提高组合物急性降低血糖的效果（0.5h时，血糖降低明显）。
不同物质组合对降低血糖组合物效果的影响
将青钱柳叶提取物、桑叶提取物和蛹虫草粉的含量变化制备不同降低血糖的组合物，包括以下步骤：
1.备料
称取上述方法制备的青钱柳叶提取物、桑叶提取物、桦褐孔菌提取物、食用菌粉、覆盆子提取物、蛹虫草粉、燕麦β-葡聚糖和白芸豆粉；
2.混合
按照表6的配方量将上述青钱柳叶提取物、桑叶提取物、桦褐孔菌提取物、食用菌粉、覆盆子提取物、蛹虫草粉、燕麦β-葡聚糖和白芸豆粉置于混料机中混合均匀得到混合粉末；
3.灭菌
将混合粉末置于微波干燥灭菌装置中进行灭菌操作，得到降低血糖的组合物。
表6
Figure 860479DEST_PATH_IMAGE012
测试对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠血糖以及耐量的影响，实验设计与1.2和1.3一致，结果见图4和图5。从图4和图5的结果可知，蛹虫草粉的加入能够降低青钱柳叶提取物和桑叶提取物的用量，且起到相同或类似的降低血糖的效果。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种降低血糖的组合物，其特征在于：包括以下重量份数的原料：
青钱柳叶提取物 5-20份，桑叶提取物 5-20份，桦褐孔菌提取物 10-25份，食用菌粉60-100份，覆盆子提取物 1-4份，蛹虫草粉 10-15份，燕麦β-葡聚糖 3-6份，白芸豆粉 60-100份，所述食用菌粉由猴头菌粉，黑木耳粉和金针菇粉组成，重量比为猴头菌粉：黑木耳粉：金针菇粉=（1-3）：（1-2）：（1-3）。
2.根据权利要求1所述的一种降低血糖的组合物，其特征在于：所述青钱柳叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将青钱柳叶清洗烘干并粉碎，加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为40-45MPa，萃取温度为45-55℃，CO2流量为20-25L/h，萃取时间60-120min，得到萃取物和萃余物；
（2）将步骤（1）得到的萃余物烘干，加入超声波装置中进行超声波处理，温度为40-55℃，时间3-6min；向超声处理后的萃余物中加入6-10倍体积量的水，回流提取2-3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得沉淀物；
（3）将步骤（1）获得的萃取物和步骤（2）获得的沉淀物混合均匀即制备得到青钱柳叶提取物。
3.根据权利要求1所述的一种降低血糖的组合物，其特征在于：所述桑叶提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将桑叶清洗烘干并粉碎，加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为40-45MPa，萃取温度为45-55℃，CO2流量为20-25L/h，萃取时间60-120min，得到萃取物和萃余物；
（2）将步骤（1）得到的萃余物烘干，加入超声波装置中进行超声波处理，温度为40-55℃，时间3-6min；向超声处理后的萃余物中加入6-10倍体积量的水，回流提取2-3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得沉淀物；
（3）将步骤（1）获得的萃取物和步骤（2）获得的沉淀物混合均匀即制备得到桑叶提取物。
4.根据权利要求1所述的一种降低血糖的组合物，其特征在于：所述桦褐孔菌提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将桦褐孔菌在转速110-140r/min、温度26-31℃条件下发酵11-14天；离心收集菌丝体和发酵液；
（2）将菌丝体烘干至含水量不高于12%时，经过气流粉碎机破碎至不低于200目的粉末，加入5-8倍重量的水制备得到混合液；
（3）将步骤（2）制备得到的混合液与步骤（1）得到的发酵液混合均匀，于-4℃-0℃下超声处理5-10min；然后回流提取2-3次，合并水提取液，浓缩后加入5倍体积的质量百分比95%乙醇水溶液，静置过夜，离心收集沉淀，真空干燥沉淀获得桦褐孔菌提取物。
5.根据权利要求1所述的一种降低血糖的组合物，其特征在于:所述食用菌粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）分别选择猴头菌，黑木耳和金针菇，脱水干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机干法粉碎，过100目筛得到猴头菌，黑木耳和金针菇粗粉；
（2）将步骤（1）制备的猴头菌，黑木耳和金针菇粗粉置于-15℃-0℃环境中真空干燥处理10-12h；取出后在-15℃-0℃的低温环境下，用气流破壁机处理20-30min，气流粉碎的压力为1.5-2.0Mpa，即可制备得到猴头菌粉，黑木耳粉和金针菇粉；
（3）将步骤（2）制备得到的猴头菌粉，黑木耳粉和金针菇粉按照重量比猴头菌粉：黑木耳粉：金针菇粉=（1-3）：（1-2）：（1-3）混合均匀后，加热熟化即制备得到食用菌粉。
6.根据权利要求1所述的一种降低血糖的组合物，其特征在于:所述覆盆子提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将覆盆子烘干至含水量不高于12%时，粉碎至不低于200目的粉末备用；
（2）将步骤（1）制备的覆盆子粉末加入萃取釜中进行超临界CO2萃取，以超临界CO2流体为萃取溶剂，乙醇为夹带剂，萃取压力为25-45Mpa、温度为30-55℃、CO2流量为20-40L/h、萃取时间为60-120min；得到萃取物
（3）将步骤（2）得到的萃取物与重量为萃取物60-80%的β-环糊精和重量为萃取物60-80%的麦芽糊精混合均匀；经过减压浓缩，冷冻干燥后制备得到覆盆子提取物。
7.根据权利要求1所述的一种降低血糖的组合物，其特征在于:所述蛹虫草粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）称取蛹虫草洗净后干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机粉碎至不低于50目，制备得到粗粉；
（2）将步骤（2）制备得到的粗粉置于-15℃-0℃环境中真空干燥处理10-12h；取出后在-15℃-0℃的低温环境下，用气流破壁机处理20-30min，气流粉碎的压力为1.5-2.0Mpa，即可制备得到蛹虫草粉。
8.根据权利要求1所述的一种降低血糖的组合物，其特征在于:所述白芸豆粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）称取白芸豆洗净后蒸熟，然后干燥至含水量不高于12%时，用万能粉碎机粉碎至不低于50目，制备得到粗粉备用；
（2）将步骤（1）得到的粗粉置于-15℃-0℃环境中真空干燥处理10-12h；取出后在-15℃-0℃的低温环境下，用气流破壁机处理20-30min，气流粉碎的压力为2.5-3.0Mpa，即得到白芸豆粉。
9.根据权利要求1-8所述的一种降低血糖的组合物的制备方法，其特征在于:包括以下步骤：
1.备料
根据权利要求2-8的方法分别制备青钱柳叶提取物、桑叶提取物、桦褐孔菌提取物、食用菌粉、覆盆子提取物、蛹虫草粉、和白芸豆粉；
2.混合
按照权利要求1所述的配方量将青钱柳叶提取物、桑叶提取物、桦褐孔菌提取物、食用菌粉、覆盆子提取物、蛹虫草粉、燕麦β-葡聚糖和白芸豆粉置于混料机中混合均匀得到混合粉末；
3.灭菌
将混合粉末置于微波干燥灭菌装置中进行灭菌操作，得到降低血糖的组合物。
10.根据权利要求9所述制备方法制备得到的降低血糖的组合物的用途，其特征在于：所述组合物在制备预防或辅助治疗糖尿病的食品、保健品或药物中的应用。
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