CN113577158A - 一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用 - Google Patents

一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113577158A
CN113577158A CN202110880626.6A CN202110880626A CN113577158A CN 113577158 A CN113577158 A CN 113577158A CN 202110880626 A CN202110880626 A CN 202110880626A CN 113577158 A CN113577158 A CN 113577158A
Authority
CN
China
Prior art keywords
thoroughfare
bitter orange
lung injury
effective component
acute lung
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110880626.6A
Other languages
English (en)
Inventor
张升
由振强
吴友苹
李元圆
张立将
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Medical College
Original Assignee
Hangzhou Medical College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Medical College filed Critical Hangzhou Medical College
Priority to CN202110880626.6A priority Critical patent/CN113577158A/zh
Publication of CN113577158A publication Critical patent/CN113577158A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
    • A61K36/752—Citrus, e.g. lime, orange or lemon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/35—Extraction with lipophilic solvents, e.g. Hexane or petrol ether
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组，包括：芸香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素7‑O‑葡萄糖苷、橙皮苷和新橙皮苷；制备方法：(1)将衢枳壳粉碎，乙醇浸泡提取；(2)加水，以乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩；(3)分离，洗脱，根据化学成分类型合并洗脱流分；(4)将化学成分组Fr.1‑4合并，即得。本发明衢枳壳有效成分组化学组成基本明确，抗炎活性成分含量高，临床上可以开发成口服制剂或吸入制剂，药理毒理基本明确，具有更好的成药性。

Description

一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与 应用
技术领域
本发明涉及药物提取技术领域，更具体的说是涉及一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用。
背景技术
急性肺损伤(ALI)是临床常见的急危重症，是由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭，临床表现为顽固难治的低氧血症、肺泡及肺实质内高度水肿和逐渐加重的呼吸窘迫，如不及时控制病情，很可能进一步发展为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，进而发展至多脏器衰竭，是临床常见的危重症，病死率高达30％-50％。
ALI发病原因多样，可将其病因归类为两类，包括肺内因素和肺外因素，肺内因素包括：(1)化学性因素，如吸入烟尘、纳米颗粒及氧中毒等；(2) 物理性因素，如肺挫伤及放射性损伤等；(3)生物性因素，如重症肺炎。肺外因素包括严重休克、感染中毒症、严重非胸部创伤、重度烧伤、大量输血、急性胰腺炎及药物中毒等。ALI早期阶段表现为肺泡损伤，大量炎性细胞浸润尤其是中性粒细胞聚集、肺间质水肿等。ALI的发病机制尚未明确，大多数学者认为ALI本质是在大量炎症细胞和炎症因子的作用下肺内过度失控的瀑布式炎性级联反应。
病毒和细菌感染也是引起ALI的主要原因。新冠病毒感染后的炎症因子风暴是重症患者死于ALI/ARDS的主要原因，临床上清除炎症是治疗感染性ALI/ARDS的主要方法，药物主要以激素类为主。虽然激素可以抑制肺部炎症，但同时也抑制了免疫反应和人体免疫系统对于病毒的清除作用。因此开发治疗ALI/ARDS炎症的药物迫在眉睫。
申请人的前期研究表明，衢枳壳水提物可以有效地治疗急性肺炎(中国专利201710813853.0)，但衢枳壳水提液中的成分较为复杂，不利于新药的开发。
因此，如何提供一种能有效治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用，以解决现有技术中的不足。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组，其特征在于，包括：芸香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素7-O-葡萄糖苷、橙皮苷和新橙皮苷；
优选为：芸香柚皮苷0.109份、柚皮苷0.402份、柚皮素7-O-葡萄糖苷0.044 份、橙皮苷0.057份和新橙皮苷0.357份。
本发明的有益效果在于：
申请人对衢枳壳以50％-100％的乙醇进行提取，总提取物分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和衢枳壳水部位。申请人将衢枳壳乙酸乙酯部位以ODS-C18中压制备色谱进行分离，以甲醇-水不同比例梯度洗脱，收集30％的甲醇洗脱流分1、2、3、4、 5、6、7，合并1-4部分洗脱流分，得到衢枳壳有效成分组。该衢枳壳有效成分组的组成基本明确，包含5个活性成分，即芸香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素 7-O-葡萄糖苷、橙皮苷和新橙皮苷。体内外实验结果显示，该有效成分组对急性肺损伤具有很好的治疗作用，各成分基本明确，便于进行药理研究和药物开发。
进一步，上述衢枳壳有效成分组是以中药饮片衢枳壳为原料，经提取、化学成分组分离、活性鉴定和活性成分组合并而得到的。
一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)将衢枳壳粉碎为颗粒，然后以乙醇进行浸泡，回流提取，得衢枳壳总提取物；
(2)将衢枳壳总提取物加水混悬得到混悬液，然后将混悬液以乙酸乙酯进行萃取得到萃取液，最后将萃取液进行减压浓缩，得到衢枳壳乙酸乙酯部位；
(3)将衢枳壳乙酸乙酯部位以ODS-C18中压制备色谱进行分离，以甲醇-水不同比例梯度洗脱，在HPLC-QTOF-MS追踪下，根据化学成分类型合并洗脱流分，得到13个化学成分组；
(4)将化学成分组Fr.1-4合并，即得治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组。
进一步，上述步骤(1)中，乙醇的体积浓度为50％-100％；浸泡的时间为12h；回流提取的次数为3次，每次1h。
进一步，上述步骤(2)中，衢枳壳总提取物与水的体积比为1:10；混悬液与乙酸乙酯的体积比为1:1；萃取的次数为3次。
本发明还请求保护一种上述衢枳壳有效成分组在制备药物中的应用。
进一步，上述药物为治疗急性肺损伤的药物；药物的给药途径为口服或吸入。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、申请人的前期研究(中国专利201710813853.0)中的衢枳壳水提物化学成分比较复杂，抗炎活性成分含量较低，临床上只能开发为口服制剂，药理毒理比较复杂；而本发明中的衢枳壳有效成分组化学组成基本明确，抗炎活性成分含量高，临床上可以开发成口服制剂或吸入制剂，药理毒理基本明确，具有更好的成药性。
2、大量的实验数据证实，本发明中的衢枳壳有效成分组的抗炎活性明显高于衢枳壳水提液和总的乙酸乙酯萃取部位。
3、本发明中的衢枳壳有效成分组组成比较明确，主要有5种有效成分组成，治疗急性肺损伤时，可以开发成吸入制剂，治疗效果会更好。
附图说明
图1为实施例1衢枳壳有效成分组的色谱图；
图2为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IL-6的影响图；
图3为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β的影响图；
图4为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子TNF-α的影响图；
图5为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IFN-γ的影响图；
图6为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺脏湿干重比的影响图；
图7为空白对照组对急性肺损伤小鼠肺脏病理损伤的影响图；
图8为LPS对急性肺损伤小鼠肺脏病理损伤的影响图；
图9为LPS+100mg/kg实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺脏病理损伤的影响图；
图10为LPS+20mg/kg实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺脏病理损伤的影响图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)将100g衢枳壳粉碎为颗粒，然后以体积浓度为60％的乙醇浸泡12h 后，回流提取3次，每次1h，合并提取液，减压浓缩，得到衢枳壳总提取物；
(2)将衢枳壳总提取物以10倍体积的水混悬得到混悬液，然后将混悬液以乙酸乙酯1:1的体积比萃取3次得到萃取液，最后将萃取液进行减压浓缩，得到衢枳壳乙酸乙酯部位；
(3)将衢枳壳乙酸乙酯部位以ODS-C18中压制备色谱进行分离，以甲醇-水不同比例梯度洗脱，在HPLC-QTOF-MS追踪下，根据化学成分类型合并洗脱流分，得到7个化学成分组；
(4)将化学成分组Fr.1、2、3、4合并，即得治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组，得率为1.124％(以药材质量计)。
实施例2
治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)将100g衢枳壳粉碎为颗粒，然后以体积浓度为50％的乙醇浸泡12h 后，回流提取3次，每次1h，合并提取液，减压浓缩，得到衢枳壳总提取物；
(2)将衢枳壳总提取物以10倍体积的水混悬得到混悬液，然后将混悬液以乙酸乙酯1:1的体积比萃取3次得到萃取液，最后将萃取液进行减压浓缩，得到衢枳壳乙酸乙酯部位；
(3)将衢枳壳乙酸乙酯部位以ODS-C18中压制备色谱进行分离，以甲醇-水不同比例梯度洗脱，在HPLC-QTOF-MS追踪下，根据化学成分类型合并洗脱流分，得到7个化学成分组；
(4)将化学成分组Fr.1-4合并，即得治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组。
实施例3
治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)将100g衢枳壳粉碎为颗粒，然后以体积浓度为90％的乙醇浸泡12h 后，回流提取3次，每次1h，合并提取液，减压浓缩，得到衢枳壳总提取物；
(2)将衢枳壳总提取物以10倍体积的水混悬得到混悬液，然后将混悬液以乙酸乙酯1:1的体积比萃取3次得到萃取液，最后将萃取液进行减压浓缩，得到衢枳壳乙酸乙酯部位；
(3)将衢枳壳乙酸乙酯部位以ODS-C18中压制备色谱进行分离，以甲醇-水不同比例梯度洗脱，在HPLC-QTOF-MS追踪下，根据化学成分类型合并洗脱流分，得到7个化学成分组；
(4)将化学成分组Fr.1-4合并，即得治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组。
性能测试
1、衢枳壳有效成分组的鉴定
将实施例1制得的衢枳壳有效成分组以HPLC-QTOF-MS分析，利用高分辨质谱的精确分子量、分子式以及二级质谱碎片数据，结合标准品及文献裂解碎片比对，鉴定了主要化合物的结构。结果如图1所示。
图1为实施例1衢枳壳有效成分组的色谱图。由图1可知，本发明实施例1衢枳壳有效成分组的组成基本明确，包含5个活性成分，具体的，1g衢枳壳有效成分组中含有芸香柚皮苷0.109g、柚皮苷0.402g、柚皮素7-O-葡萄糖苷0.044g、橙皮苷0.057g、新橙皮苷0.357g。
2、衢枳壳有效成分组与衢枳壳水提液的抗炎活性比较
取对数生长期的RAW264.7细胞经0.25％的胰酶消化后，接种到24孔板中(每孔细胞2×104个)，后置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h(细胞融合度约为70％)，加入1μg/mL的LPS诱导2h后，加入实施例1衢枳壳有效成分组(25mg/mL，以生药材计)和衢枳壳水提液(25mg/mL，以生药材计，具体制备方法参见中国专利201710813853.0)，同时设模型对照组和空白对照组，LPS诱导24h后收集细胞上清液。利用ELISA检测细胞上清液中IL-6、 IL-1β水平，比较实施例1衢枳壳有效成分组与衢枳壳水提液的抗炎活性。
结果如表1所示。
表1衢枳壳有效成分组与衢枳壳水提液的抗炎活性比较
组别 IL-6(pg/mL) IL-1β(pg/mL)
空白对照组 21.54±3.02 8.25±1.38
LPS 4826.55±345.32## 4012.32±363.56##
LPS+衢枳壳有效成分组 284.64±87.55** 183.54±79.55**
LPS+衢枳壳水提液 2343.76±128.88** 2464.97±214.76**
注：与空白对照组比较，##p<0.01；与LPS模型对照组比较，**p<0.01。
由表1可知，经LPS诱导后细胞上清液中IL-6、IL-1β炎症因子水平明显升高(与空白对照组比较，p<0.01)。加入实施例1衢枳壳有效成分组和衢枳壳水提液后IL-6、IL-1β水平明显降低(与模型对照组比较，p<0.01)，而实施例1衢枳壳有效成分组的抗炎活性明显高于衢枳壳水提液的抗炎活性。
结论：本发明衢枳壳有效成分组的抗炎活性明显高于申请人之前申请的专利(201710813853.0)公开的衢枳壳水提液的抗炎活性，且在相同生药剂量下，本发明衢枳壳有效成分组的抗炎活性是衢枳壳水提液的8倍以上。
3、衢枳壳有效成分组与衢枳壳乙酸乙酯极性部位抗炎活性比较
取对数生长期的RAW264.7细胞经0.25％的胰酶消化后，接种到24孔板中(每孔细胞2×104个)，后置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h(细胞融合度约为70％)，加入1μg/mL的LPS诱导2h后，加入实施例1衢枳壳有效成分组(25mg/mL，以生药材计)和实施例1衢枳壳乙酸乙酯极性部位 (25mg/mL，以生药材计)，同时设模型对照组和空白对照组，LPS诱导24h后收集细胞上清液。利用ELISA检测细胞上清液中IL-6、IL-1β水平，比较实施例1衢枳壳有效成分组与实施例1衢枳壳乙酸乙酯极性部位的抗炎活性。
结果如表2所示。
表2衢枳壳有效成分组与衢枳壳乙酸乙酯极性部位抗炎活性比较
组别 IL-6(pg/mL) IL-1β(pg/mL)
空白对照组 22.62±3.14 10.34±2.65
LPS 4385.68±286.74## 3812.49±321.50##
LPS+衢枳壳有效成分组 286.46±78.58** 234.60±125.43**
LPS+衢枳壳乙酸乙酯极性部位 924.75±148.91** 832.02±218.21**
注：与空白对照组比较，##p<0.01；与LPS模型对照组比较，**p<0.01。
由表2可知，经LPS诱导后细胞上清液中IL-6、IL-1β炎症因子水平明显升高(与空白对照组比较，p<0.01)。加入实施例1衢枳壳有效成分组和实施例1衢枳壳乙酸乙酯极性部位后IL-6、IL-1β水平明显降低(与模型对照组比较，p<0.01)，且实施例1衢枳壳有效成分组的抗炎活性优于实施例1衢枳壳乙酸乙酯极性部位的抗炎活性。
结论：本发明衢枳壳有效成分组与衢枳壳乙酸乙酯极性部位均具有较好的抗炎活性，且衢枳壳有效成分组的抗炎活性明显比衢枳壳乙酸乙酯极性部位强；另外，衢枳壳有效成分组的成分已经明确，而衢枳壳乙酸乙酯极性部位成分比较复杂，在相同生药剂量下毒性会比衢枳壳有效成分组复杂很多。因此，衢枳壳有效成分组成药性更强，更易开发成抗炎药物。
4、衢枳壳有效成分组与芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷抗炎活性比较
药物浓度选择：①实施例1衢枳壳有效成分组组10μg/mL(其中芸香柚皮苷1.09μg/mL、柚皮苷4.02μg/mL、橙皮苷0.57μg/mL、新橙皮苷3.57μg/mL)；②芸香柚皮苷10μg/mL；③柚皮苷10μg/mL；④橙皮苷10μg/mL；⑤新橙皮苷 10μg/mL。
取对数生长期的RAW264.7细胞经0.25％的胰酶消化后，接种到24孔板中(每孔细胞2×104个)，后置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h(细胞融合度约为70％)，加入1μg/mL的LPS诱导2h后，加入实施例1衢枳壳有效成分组、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷，同时设模型对照组和空白对照组，LPS诱导24h后收集细胞上清液。利用ELISA检测细胞上清液中 IL-6、IL-1β水平，比较衢枳壳有效成分组与芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷单一成分的抗炎活性。结果如表3所示。
表3衢枳壳有效成分组与芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷抗炎活性比较
组别 IL-6(pg/mL) IL-1β(pg/mL)
空白对照组 36.52±4.98 22.70±3.71
LPS 3817.34±317.92## 3153.65±291.57##
LPS+衢枳壳有效成分组(10μg/mL) 238.36±49.02** 198.55±64.98**
LPS+芸香柚皮苷(10μg/mL) 1364.81±139.61** 1634.21±210.03**
LPS+柚皮苷(10μg/mL) 2829.34±318.99* 2352.44±274.34*
LPS+橙皮苷(10μg/mL) 2463.03±148.88** 1855.88±316.43*
LPS+新橙皮苷(10μg/mL) 1861.75±392.59** 1773.65±148.93**
注：与空白对照组比较，##p<0.01；与LPS模型对照组比较，*p<0.05， **p<0.01。
由表3可知，经LPS诱导后细胞上清液中IL-6、IL-1β炎症因子水平明显升高(与空白对照组比较，p<0.01)。加入实施例1衢枳壳有效成分组和芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷后IL-6、IL-1β水平明显降低(与模型对照组比较，p<0.05和p<0.01)，且实施例1衢枳壳有效成分组的抗炎活性明显高于芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷单一成分的抗炎活性。
结论：本发明衢枳壳有效成分组与芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷单一成分均具有抗炎活性，且衢枳壳有效成分组的抗炎活性明显比芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷单一成分的抗炎活性强，且抗炎活性是各单一成分的5倍以上。
5、衢枳壳有效成分组治疗小鼠急性肺损伤的作用
(1)实验动物：SPF级BALB/c雄性小鼠饲养于SPF级的屏障系统内，自由进食和饮水，温度为20-25℃，湿度为50-60％，12h昼/12h夜日常规律。饲养管理符合国际AAALAC认证的要求。实验设计经浙江省医学科学院伦理委员会批准。所有实验均按照相关指导原则和规定进行。
(2)衢枳壳有效成分组吸入制剂的制备：吸入制剂按以下比例进行配制： 8mg的实施例1衢枳壳有效成分组加入到2mL的ddH2O中，加入0.4mg吐温 80助溶，充分混悬后调PH值为4.5，并用氯化钠调节渗透压，使用时用0.2‰的吐温80进行稀释。
(3)动物实验：将60只小鼠随机分成4组，a.100mg/kg实施例1衢枳壳有效成分组+LPS；b.20mg/kg实施例1衢枳壳有效成分组+LPS；c.LPS(模型对照组)；d.空白对照组。每组15只。在第1天，组别a、b、c的小鼠用 0.5％的戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后，滴鼻给予50μL(20μg)LPS，诱导产生ALI，2h后a、b组通过雾化方式给予实施例1衢枳壳有效成分组，c、d 组通过雾化方式给予0.2‰的吐温80，第2天重复给药一次。
(4)ALI小鼠肺泡灌洗液(BALF)的收集与处理：每组各取5只小鼠进行BALF的提取。将小鼠放血致死后，暴露气管后用一次性静脉留置针进行气管插管，丝线结扎固定，然后取生理盐水用1mL注射器进行支气管肺泡灌洗。灌洗时，每次取1mL生理盐水，经静脉留置针冲洗双侧支气管肺泡，反复注入回吸3次后回收灌洗液，回收率大于90％，以保证充分灌洗。BALF 收集后在冷冻离心机中4℃条件下1000rpm离心5min，用ELISA试剂盒检测上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ炎症相关因子水平。
(5)ALI小鼠肺组织湿/干重比值(W/D)的检测：每组各取5只小鼠进行解剖。取肺组织约50g，放入冰生理盐水中洗去残留血液，用滤纸吸干表面水分后称重，得到湿重(W)。随后放入60℃烘箱内烘48h，再次称重，得到干重(D)。通过计算W与D的比值来评价肺组织的水肿程度。
(6)ALI小鼠肺组织病理检查：每组取剩余的5只小鼠进行解剖，取肺组织置于10％的甲醛溶液中固定，经过取材、包埋、切片后，部分切片用于 HE染色进行显微镜观察炎症损伤和改善情况。
试验结果如图3-5所示。
图2为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IL-6的影响图；图3为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β的影响图；图4为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子TNF-α的影响图；图5为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IFN-γ的影响图；与空白对照组比较
Figure BDA0003192147120000111
与模型对照组比较***p<0.001，**p<0.01。由图3-5可知，LPS诱导急性肺损伤后，肺泡管洗液中炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平明显升高(与对照组比较，p<0.001)，通过实施例1衢枳壳有效成分组吸入治疗2天后，上述炎症因子水平明显降低(与模型对照组比较，p<0.01)。
图6为实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺脏湿干重比的影响图；与空白对照组比较
Figure BDA0003192147120000112
与模型对照组比较*p<0.05，**p<0.01。由图6可知，LPS诱导急性肺损伤后，小鼠肺脏的湿干重比明显升高(与对照组比较，p<0.01)，实施例1衢枳壳有效成分组吸入治疗2天后，湿干重比明显降低(与模型对照组比较，p<0.05)，而且高剂量基本达到了对照组水平。
图7为空白对照组对急性肺损伤小鼠肺脏病理损伤的影响图；图8为LPS 对急性肺损伤小鼠肺脏病理损伤的影响图；图9为LPS+100mg/kg实施例1 衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺脏病理损伤的影响图；图10为 LPS+20mg/kg实施例1衢枳壳有效成分组治疗后对急性肺损伤小鼠肺脏病理损伤的影响图。由图7-10可知，LPS诱导急性肺损伤后，空白对照组小鼠肺部组织结构完整，肺泡正常，未见大量炎性细胞浸润。模型对照组小鼠肺组织中肺泡大量破裂，肺泡结构损伤严重，肺出血严重，大量炎症细胞浸润，肺间质增厚变宽。实施例1衢枳壳有效成分组吸入治疗2天后，肺组织损伤相较于模型对照组明显得到改善，表现为肺泡破裂减少，肺出血减轻，炎症细胞浸润改善，表明衢枳壳有效成分组可以有效缓解LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺组织的损伤。
结论：衢枳壳有效成分组可以通过吸入给药的方式治疗急性肺损伤。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组，其特征在于，包括：芸香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素7-O-葡萄糖苷、橙皮苷和新橙皮苷。
2.根据权利要求1所述的一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组，其特征在于，包括：芸香柚皮苷0.109份、柚皮苷0.402份、柚皮素7-O-葡萄糖苷0.044份、橙皮苷0.057份和新橙皮苷0.357份。
3.根据权利要求1或2所述的一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组，其特征在于，所述衢枳壳有效成分组是以中药饮片衢枳壳为原料，经提取、化学成分组分离、活性鉴定和活性成分组合并而得到的。
4.一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)将衢枳壳粉碎为颗粒，然后以乙醇进行浸泡，回流提取，得衢枳壳总提取物；
(2)将衢枳壳总提取物加水混悬得到混悬液，然后将混悬液以乙酸乙酯进行萃取得到萃取液，最后将萃取液进行减压浓缩，得到衢枳壳乙酸乙酯部位；
(3)将衢枳壳乙酸乙酯部位以ODS-C18中压制备色谱进行分离，以甲醇-水不同比例梯度洗脱，在HPLC-QTOF-MS追踪下，根据化学成分类型合并洗脱流分，得到13个化学成分组；
(4)将化学成分组Fr.1-4合并，即得所述治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组。
5.根据权利要求4所述的一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇的体积浓度为50％-90％。
6.根据权利要求4所述的一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述浸泡的时间为12h；所述回流提取的次数为3次，每次1h。
7.根据权利要求4所述的一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述衢枳壳总提取物与水的体积比为1:10；所述混悬液与乙酸乙酯的体积比为1:1；所述萃取的次数为3次。
8.一种如权利要求1所述的治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组在制备药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的一种应用，其特征在于，所述药物为治疗急性肺损伤的药物。
10.根据权利要求8所述的一种应用，其特征在于，所述药物的给药途径为口服或吸入。
CN202110880626.6A 2021-08-02 2021-08-02 一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用 Pending CN113577158A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110880626.6A CN113577158A (zh) 2021-08-02 2021-08-02 一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110880626.6A CN113577158A (zh) 2021-08-02 2021-08-02 一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113577158A true CN113577158A (zh) 2021-11-02

Family

ID=78253783

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110880626.6A Pending CN113577158A (zh) 2021-08-02 2021-08-02 一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113577158A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116870066A (zh) * 2023-08-08 2023-10-13 浙大城市学院 一种高效率制备衢枳壳总黄酮的方法及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107595867A (zh) * 2017-08-24 2018-01-19 吉林大学 一种制备柚皮素、橙皮素及其单葡萄糖苷混合物的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107595867A (zh) * 2017-08-24 2018-01-19 吉林大学 一种制备柚皮素、橙皮素及其单葡萄糖苷混合物的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李丽丽: "衢枳壳提取液在呼吸道炎症中的保护作用与抗炎机制研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士） 医药卫生科技辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116870066A (zh) * 2023-08-08 2023-10-13 浙大城市学院 一种高效率制备衢枳壳总黄酮的方法及其应用
CN116870066B (zh) * 2023-08-08 2024-04-30 浙大城市学院 一种高效率制备衢枳壳总黄酮的方法及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100548323C (zh) 一种由绞股蓝、西洋参和黄芪制成的药物组合物
AU2003260985B2 (en) Extraction and purification method of active constituents from stem of Lonicera japonica Thunb., its usage for anti-inflammatory and analgesic drug
WO2013139111A1 (zh) 黄蜀葵花总黄酮提取物及其制备方法
CN107714805B (zh) 衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用
CN113577158A (zh) 一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用
CN113577088B (zh) 一种治疗病毒性肺炎的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用
CN111329950A (zh) 中药组合物及其制剂在制备治疗急性肺损伤的药物中的用途
CN101543574B (zh) 一种治疗肺间质纤维化的中药组合物
CN109419787A (zh) 一种松香烷型二萜类化合物的用途
CN111588742A (zh) 没药倍半萜提取物在制备慢性阻塞性肺病药物中的应用
CN112826887B (zh) 一种中药组合物在制备咳嗽防治药物中的用途
CN110721193B (zh) 锁阳总多糖在制备治疗哮喘药物中的应用
CN106924274B (zh) 葫芦烷型四环三萜类化合物抗肺纤维化应用
CN111450143A (zh) 小叶榕提取物在制备预防和/或治疗肝脏病变的药物中的用途
CN104998034A (zh) 一种治疗畜禽呼吸道病的中草药组合药物及其制备方法
CN101095708B (zh) 柴胡总多糖在制备防治系统性红斑狼疮药物中的用途
CN104435068B (zh) 一种具有减肥作用的杜仲组合物及其制剂
CN117398422A (zh) 一种矮地茶提取物及其制备方法和用途
CN115433254A (zh) 一种贝母生物碱成分的提取方法及其抗支气管炎的用途
CN115536725A (zh) 一种贝母成分的提取方法及抗支气管炎与copd的用途
WO2023134472A1 (zh) 人参皂苷Rd的抗炎应用
CN104771430B (zh) 用于治疗肠易激综合症的药物
WO2019227886A1 (zh) 一种云牛膝茎和/或叶和/或根的提取物、提取方法和应用
CN115317525A (zh) 祁连圆柏在制备治疗慢性阻塞性肺疾病药物中的应用
CN114601807A (zh) 一种贝草清肺浓缩丸及制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination