CN107714805B - 衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用 - Google Patents
衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107714805B CN107714805B CN201710813853.0A CN201710813853A CN107714805B CN 107714805 B CN107714805 B CN 107714805B CN 201710813853 A CN201710813853 A CN 201710813853A CN 107714805 B CN107714805 B CN 107714805B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bitter orange
- thoroughfare
- extract
- thoroughfare bitter
- orange extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000019218 bitter orange extract Nutrition 0.000 title claims abstract description 71
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 title abstract description 8
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims abstract description 42
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims abstract description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 244000183685 Citrus aurantium Species 0.000 claims abstract description 22
- 235000007716 Citrus aurantium Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 22
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 20
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 claims description 13
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 claims description 13
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 13
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 11
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 10
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 10
- -1 IL-12P70 Proteins 0.000 claims description 5
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 abstract description 9
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 17
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 8
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000001606 7-[(2S,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chroman-4-one Substances 0.000 description 7
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- DFPMSGMNTNDNHN-ZPHOTFPESA-N naringin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC=2C=C3O[C@@H](CC(=O)C3=C(O)C=2)C=2C=CC(O)=CC=2)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O DFPMSGMNTNDNHN-ZPHOTFPESA-N 0.000 description 7
- 229930019673 naringin Natural products 0.000 description 7
- 229940052490 naringin Drugs 0.000 description 7
- ARGKVCXINMKCAZ-UZRWAPQLSA-N neohesperidin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@H]3[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 ARGKVCXINMKCAZ-UZRWAPQLSA-N 0.000 description 7
- ARGKVCXINMKCAZ-UHFFFAOYSA-N neohesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)OC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 ARGKVCXINMKCAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 7
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000003305 oral gavage Methods 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 206010068956 Respiratory tract inflammation Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 2
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 238000001256 steam distillation Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000219109 Citrullus Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 241000519995 Stachys sylvatica Species 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000007056 liver toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(7-hydroxy-3,7-dimethyloctylidene)amino]benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1N=CCC(C)CCCC(C)(C)O BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000022558 protein metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 208000037974 severe injury Diseases 0.000 description 1
- 208000026425 severe pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
- A61K36/752—Citrus, e.g. lime, orange or lemon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及一种衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用，所述中药制剂或功能性食品用于预防和治疗呼吸道炎症。所述衢枳壳提取物的制备方法如下：1)取衢枳壳粉碎颗粒，加去离子水浸泡，浸泡液蒸馏收集馏分备用；2)将药渣加热回流两次，两次均过滤，并将两次的滤液合并，减压浓缩，得到浓缩液；3)将浓缩液与馏分合并，即得衢枳壳提取物。该衢枳壳提取物中含有丰富的抗炎成分，具有呼吸道炎症的治疗功效，可用于制备中药制剂或功能性食品。
Description
技术领域
本发明涉及衢枳壳提取物的应用领域，具体涉及一种衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用。
背景技术
呼吸道是人体重要器官，具有独特的解剖特点和生理功能。呼吸道炎症可以由各种病原体和微生物感染引起，包括流感以及硝酸氧化应激和免疫系统受损。
当呼吸道发生炎症反应时，可以产生独特的临床表现以及功能改变。中度以及受控制的炎症是保护性的，可通过消除病原体来定位感染。而过度以及不受控制的炎症会导致局部组织甚至全身性的破坏和损伤。比如急性肺损伤(ALI)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是由多种病因引起，例如重症肺炎，重症脓毒症，损伤和烧伤等，从而引起肺部自我放大和不受控制的炎症反应。因此，呼吸道炎症一直以来受到了国内外学者的重视。
目前，西医治疗呼吸道炎症主要有甾体类和非甾体类抗炎药两类，同时以抗生素为辅药。甾体类抗炎药可引起胃肠道、心血管系统、神经系统的不良反应，长期使用可引起免疫功能低下，以及水盐代谢和糖、脂肪、蛋白质代谢的严重紊乱，非甾体类抗炎药对胃肠道有直接刺激作用，有肝毒性、肾毒性以及抗凝作用，这两类都需要在医师指导下使用。
由于环境因素引起的呼吸道炎症越来越多，且患病群体包括所有年龄段群体，目前临床上对有些呼吸道炎症的治疗是长期的且收效甚微的，迫切需要一些安全、高效的治疗药物和治疗方案。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用，该衢枳壳提取物中含有丰富的抗炎成分，具有呼吸道炎症的治疗功效，可用于制备中药制剂或功能性食品。
本发明所提供的技术方案为：
一种衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用，所述中药制剂或功能性食品用于预防和治疗呼吸道炎症。
优选的，所述中药制剂包括口服液或颗粒剂。
优选的，所述衢枳壳提取物为衢枳壳的水提取物。
优选的，所述衢枳壳提取物的制备方法如下：
1)取衢枳壳粉碎颗粒，加去离子水浸泡，浸泡液蒸馏收集馏分备用；
2)将药渣加热回流两次，两次均过滤，并将两次的滤液合并，减压浓缩，得到浓缩液；
3)将浓缩液与馏分合并，即得衢枳壳提取物。
优选的，所述步骤1)中加入4-12倍量去离子水，浸泡0.5-1.5小时。进一步优选，加入6倍量去离子水，浸泡1小时。
优选的，所述步骤1)中衢枳壳粉碎颗粒制备过程如下：将未成熟的衢枳壳切成2-4mm薄皮，晒干后粉碎，使用8-14目筛过筛得到。本发明中的衢枳壳主要产自衢州地区，进一步优选为2-3个月未成熟的衢枳壳。
优选的，所述步骤2)中第一次回流加入药渣的10-20倍量去离子水，回流提取1-2小时。进一步优选，第一次回流加入药渣的10倍量去离子水，回流提取1小时。
优选的，所述步骤2)中第二次回流加入药渣的5-10倍量去离子水，回流提取0.5-1小时。进一步优选，第二次回流加入药渣的5倍量去离子水，回流提取0.5小时。
同现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
(1)本发明中的衢枳壳相较于其它枳壳，具有高含量的黄酮类和生物碱类，大量的体内外实验数据证实本发明的衢枳壳提取物，可用于预防和治疗呼吸道炎症等疾病。
(2)本发明中制备衢枳壳提取物的方法可以充分提取衢枳壳中的药用成分。
附图说明
图1为衢枳壳提取物处理后斑马鱼炎症部位中性粒细胞典型图；其中白色虚线内区域为定量炎症部位，白色虚线区域内的白点为炎症部位中性粒细胞；
图2为衢枳壳提取物处理后斑马鱼炎症部位中性粒细胞数目图；其中与模型对照组比较，***p<0.001；
图3为衢枳壳提取物处理后斑马鱼炎症消退作用比较图；其中与模型对照组比较，***p<0.001；
图4为衢枳壳提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的保护作用比较图；其中与空白对照组比较，
与模型对照组比较，*p<0.05，**p<0.01；
图5为衢枳壳提取物对小鼠血清和肺泡管洗液(BALF)中炎性相关因子的影响比较图；其中与空白对照组比较，
与模型对照组比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；
图6为衢枳壳提取物对LPS诱导的呼吸道炎症的保护作用图；其中，A为肺泡灌洗液中细胞显微镜观察图(100×)，a.空白对照组，b.25g/kg衢枳壳提取物对照组，c.LPS诱导组，d.25g/kg衢枳壳提取物治疗组，e.7.5g/kg衢枳壳提取物治疗组，f.2.5g/kg衢枳壳提取物治疗组；B为肺泡灌洗液中中性粒细胞数目统计图；C为肺泡灌洗液中巨噬细胞数目统计图；D为肺脏湿重/干重比值；E为western blot检测肺泡灌洗液中MPO的表达；与模型对照组比较，*p<0.05；**p<0.01；与空白对照组比较，
图7为衢枳壳提取物对LPS诱导的ICR小鼠肺炎的病理保护作用(200×，标尺长度为100μm)；其中，a.空白对照组；b.25g/kg衢枳壳提取物对照组；c.LPS诱导组；d.25g/kg衢枳壳提取物治疗组；e.7.5g/kg衢枳壳提取物治疗组；f.2.5g/kg衢枳壳提取物治疗组；
图8为免疫组化检测衢枳壳提取物对肺组织中MPO表达的影响(400×，标尺长度为50μm)；其中，a.空白对照组；b.25g/kg衢枳壳提取物对照组；c.LPS诱导组；d.25g/kg衢枳壳提取物治疗组；e.7.5g/kg衢枳壳提取物治疗组；f.2.5g/kg衢枳壳提取物治疗组。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：制备衢枳壳提取物
1)将产自浙江衢州的果实期为约2.5个月的未成熟衢枳壳切成2-4mm薄皮，晒干后粉碎，使用12目筛过筛制备衢枳壳粉碎颗粒。2)取衢枳壳粉碎颗粒0.2kg，加6倍量水，浸泡1小时，然后用水蒸气蒸馏，收集100ml馏分备用。3)接着将药渣加热回流两次，第1次加入药材的10倍量水回流提取1小时，第2次加入药材的5倍量水回流提取0.5小时，两次均过滤，并将两次的滤液合并，减压浓缩至100ml，为浓缩液。4)最后将浓缩液与馏分合并，即得1g/ml的衢枳壳提取物。
实施例2：制备衢枳壳提取物
1)将产自浙江衢州的果实期为约2.5个月的未成熟衢枳壳切成2-4mm薄皮，晒干后粉碎，使用8目筛过筛制备衢枳壳粉碎颗粒。2)取衢枳壳粉碎颗粒0.2kg，加10倍量水，浸泡1.5小时，然后用水蒸气蒸馏，收集120ml馏分备用。3)接着将药渣加热回流两次，第1次加入药材的15倍量水回流提取1.5小时，第2次加入药材的10倍量水回流提取1小时，两次均过滤，并将两次的滤液合并，减压浓缩至80ml，为浓缩液。4)最后将浓缩液与馏分合并，即得1g/ml的衢枳壳提取物。
对比例1：衢枳壳和其它枳壳水提物中柚皮苷和新橙皮苷的含量比较
对果实期为2.5个月的未成熟衢枳壳和市售的川枳壳(四川)、湘枳壳(湖南)水提物中的柚皮苷和新橙皮苷的含量进行比较。
其中各种枳壳水提物的提取方法均完全按照实施例1。柚皮苷和新橙皮苷的含量使用高效液相色谱仪(Agilent Technologies)进行检测。色谱条件为Gemini 5u C18 110A色谱柱(250×4.60mm,5micro)(Phenomenex)；流动性为乙腈-0.5％乙酸溶液(pH2.90)(体积比为20∶80)，流速为1.0mL/min；紫外检测波长为283nm；柱温为30℃；进样量为20μL。
测得柚皮苷的保留时间为15.470分钟，新橙皮苷的保留时间为19.134分钟。柚皮苷和新橙皮苷在各枳壳水提物中的含量见表1。
结果表明衢枳壳水提物中柚皮苷和新橙皮苷的含量均明显高于川枳壳和湘枳壳水提物中的含量。
表1高效液相色谱检测各种枳壳中柚皮苷和新橙皮苷含量
应用例1：衢枳壳提取物对斑马鱼炎症模型的抗炎作用评价
随机选取180尾受精后3天(3dpf)转基因中性粒细胞荧光斑马鱼于六孔板中，每孔(6组实验组)均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予衢枳壳提取物(实施例1制备)222、667和2000μg/mL浓度，阳性对照药吲哚美辛25μg/mL浓度，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔(6组实验组)容量为3mL。
各浓度组分别处理1h后，除正常对照组外，其余实验组均同时水溶给予五水合硫酸铜诱发斑马鱼炎症模型，衢枳壳提取物和五水合硫酸铜共同处理2h后，每个实验(浓度)组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照并采集数据，分析统计斑马鱼炎症部位中性粒细胞个数，根据炎症部位中性粒细胞个数的统计学意义评价衢枳壳提取物的抗炎作用。
如图1～3和表2所示，结果显示：模型对照组斑马鱼炎症部位中性粒细胞数目(21.2个)与正常对照组(2.1个)比较p<0.001，表明模型建立成功；阳性对照药吲哚美辛25μg/mL浓度组斑马鱼炎症部位中性粒细胞数目为7.8个，与模型对照组比较p<0.001，其对斑马鱼炎症消退作用为70％，说明吲哚美辛对斑马鱼炎症有明显的抗炎作用；衢枳壳提取物222、667和2000μg/mL浓度组斑马鱼炎症部位中性粒细胞数目分别为20.8、9.9和4.4个，斑马鱼炎症消退作用分别为2％、59％和88％，与模型对照组比较，222μg/mL浓度组p>0.05，667和2000μg/mL浓度组p均<0.001，提示衢枳壳提取物在667和2000μg/mL浓度条件下对五水合硫酸铜诱发的斑马鱼炎症有明显的抗炎作用。
表2衢枳壳处理后抗炎作用定量评价结果(n＝10)
注：与模型对照组比较，***p<0.001
结论：在本实验浓度条件下，即667和2000μg/mL，衢枳壳提取物对五水合硫酸铜诱发的斑马鱼炎症有抗炎作用。
应用例2：衢枳壳提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型的保护作用
剂量组别:(1)5mg/ml衢枳壳提取物+1μg/ml LPS；(2)1mg/ml衢枳壳提取物+1μg/ml LPS；(3)200μg/ml衢枳壳提取物+1μg/ml LPS；(4)1μg/ml LPS；(5)5mg/ml衢枳壳提取物；(6)空白对照。
细胞培养与加药：取对数生长期的RAW264.7巨噬细胞经0.25％的胰酶消化后用DMEM完全培养基进行稀释，并加到6孔板中(每孔细胞1×105个)，后置于37℃、5％CO2培养箱中培养24小时(细胞融合度约为70％)，加入不同浓度的衢枳壳提取物，作用1小时后(1)、(2)、(3)、(4)组加入LPS进行刺激。每组做3个重复，同时设LPS模型对照、高剂量衢枳壳提取物对照和空白对照。在加入衢枳壳提取物后24小时取各孔上清200μl，1000rpm离心5min取上清并置-80℃冻存备用。
炎症因子(IL-6、MCP-1、IL-12p70、IFN-γ、TNF)和抗炎因子(IL-10)检测：利用小鼠炎症试剂盒(BDTM Cytometric Bead Array(CBA))通过流式细胞仪检测IL-6、MCP-1、IL-12p70、IFN-γ、TNF和IL-10炎症相关因子水平。
如图4所示，RAW264.7细胞经过LPS刺激后，上清液中炎症相关因子IL-6、MCP-1、IL-12p70和IL-10水平明显升高(与空白对照比较，P<0.001)，用衢枳壳提取物处理后，高剂量组上清液中IL-6、MCP-1、IL-12p70炎症因子明显降低，而抗炎因子IL-10明显升高(与LPS组比较，P<0.05或P<0.01)。
结论：结果说明衢枳壳提取物体外可有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。
应用例3：衢枳壳提取物对LPS诱导的ICR小鼠肺脏炎症的保护作用
动物分组和给药：90只雄性ICR小鼠(购自上海斯莱克实验动物有限责任公司)随机分成6组，每组15只。
组1：口服灌胃给予衢枳壳提取物25g/kg/d剂量，每天1次，连续给药2天，第3天经0.5％的戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后滴鼻给予50μl(20μg)LPS，4小时后继续口服灌胃给予衢枳壳提取物25g/kg；
组2：口服灌胃给予衢枳壳提取物7.5mg/kg/d剂量，每天1次，连续给药2天，第3天经0.5％的戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后滴鼻给予50μl(20μg)LPS，4小时后继续口服灌胃给予衢枳壳提取物7.5mg/kg；
组3：口服灌胃给予衢枳壳提取物2.5mg/kg/d剂量，每天1次，连续给药2天，第3天经0.5％的戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后滴鼻给予50μl(20μg)LPS，4小时后继续口服灌胃给予衢枳壳提取物2.5mg/kg；
组4：口服灌胃给予相同容量的蒸馏水，每天1次，连续给药2天，第3天经0.5％的戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后滴鼻给予50μl(20μg)LPS，4小时后继续口服灌胃给予相同容量的蒸馏水；
组5：口服灌胃给予衢枳壳提取物25mg/kg/d剂量，每天1次，连续给药2天，第3天经0.5％的戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后滴鼻给予50μl 0.9％NaCl注射液，4小时后继续口服灌胃给予衢枳壳提取物2.5mg/kg；
组6：口服灌胃给予相同容量的蒸馏水，每天1次，连续给药2天，第3天经0.5％的戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后滴鼻给予50μl 0.9％NaCl注射液，4小时后继续口服灌胃给予相同容量的蒸馏水。
实验方法1：
在LPS刺激后24小时，用0.5％的戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后经眼眶采血，其中EDTA抗凝血用于血液学检测，自然凝固的血清用于检测炎症相关因子(IL-6、MCP-1、IL-12p70、IFN-γ、TNF和IL-10)。
每组各取5只进行肺泡灌洗液的提取，肺泡灌洗液收集后进行1000rpm/min离心5分钟，上清液用于检测炎症相关因子。
如图5所示，实验结果：检测血清(Serum)和BALF中炎性相关因子的结果显示，LPS可诱导血清(Serum)和致炎因子TNF、IFN-γ、IL-6、MCP-1和BALF中IL-12p70的含量显著升高，(与对照组比较，P<0.001)。通过给予不同剂量的衢枳壳提取物后致炎因子水平都有不同程度的下降，特别是25g/kg/d剂量有非常明显的下降(与LPS组比较，P<0.001或P<0.01或P<0.05)。
血液学检测结果如表3所示，LPS可诱导小鼠血液中中性粒细胞明显增多(与对照组比较，P<0.001)，淋巴细胞明显减少(与对照组比较，P<0.05)。通过衢枳壳提取物预防和治疗后，25g/kg/d剂量使血液中中性粒细胞数量明显减少(与LPS组比较，P<0.01)，7.5g/kg/d剂量使血液中淋巴细胞数目明显增多(与LPS组比较，P<0.05)。
表3衢枳壳提取物对小鼠血液中炎症细胞的影响
注：与对照组比较，
与LPS组比较，*P<0.05，**P<0.01
实验方法2：
每组各取5只进行肺泡灌洗液的提取，肺泡灌洗液收集后进行1000rpm/min离心5分钟，部分细胞用于显微镜观察，部分细胞用于瑞氏-吉姆萨染色后进行细胞计数，部分细胞利用western blot分析肺泡灌洗液细胞中MPO的表达水平；
每组各取5只进行解剖，取肺脏并进行称重，后用烘箱将肺脏进行烘干、称重，计算肺脏的湿重和干重的比值；
如图6所示，实验结果：对BALF中各指标的检测结果显示，LPS可诱导小鼠BALF中细胞数目明显增多，且中性粒细胞和巨噬细胞增加最为明显(与对照组比较，P<0.001)。经过衢枳壳提取物预防和治疗后，BALF中细胞总数明显减少，中性粒细胞和巨噬细胞也明显减少(与LPS组比较，P<0.01或P<0.05)，western blot结果显示，衢枳壳提取物可以明显降低LPS诱导的BALF中细胞MPO的高表达。通过对肺脏的湿/干重比进行检测发现，模型组的湿/干重比明显升高(与对照组比较，P<0.01)，高剂量的衢枳壳提取物可以明显降低模型动物的湿/干重比(与LPS组比较，P<0.01)。
实验方法3：
每组取剩下5只动物进行解剖，取肺脏并置于10％的甲醛溶液中固定，经过取材、包埋、切片后部分切片用于HE染色进行显微镜观察炎症损伤和改善情况，部分切片经过脱腊、抗原修复后进行免疫组化检测肺脏组织中MPO的表达情况。
如图7～8所示，肺脏的组织病理显示，经LPS诱导后，小鼠肺脏出现严重的炎性细胞浸润、肺泡完整性受到破坏等病理损伤，利用衢枳壳提取物预防和治疗组病理出现了不同程度的减轻和改善，且存在明显的剂量相关性。特别是25g/kg/d剂量组，肺脏病理只出现轻微的炎性细胞浸润。免疫组化结果显示LPS诱导组的MPO得到高表达，而衢枳壳提取物各治疗组的MPO表达得到了明显下降，且同样存在剂量相关性。
实验结论：体内实验结果显示，衢枳壳提取物可以有效保护LPS诱导的肺脏炎症。
Claims (7)
1.一种衢枳壳提取物在制备‘降低肺炎模型中中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、炎症相关因子IL-6、MCP-1、IL-12P70、IFN-γ、TNF水平，提升抗炎因子IL-10水平’药物中的应用；其中，所述衢枳壳为2-3个月未成熟的衢枳壳，且，所述衢枳壳提取物为水提物。
2.根据权利要求1所述的衢枳壳提取物在制备‘降低肺炎模型中中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、炎症相关因子IL-6、MCP-1、IL-12P70、IFN-γ、TNF水平，提升抗炎因子IL-10水平’药物中的应用，其特征在于，将其制备成口服液或颗粒剂。
3.根据权利要求1所述的衢枳壳提取物在制备‘降低肺炎模型中中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、炎症相关因子IL-6、MCP-1、IL-12P70、IFN-γ、TNF水平，提升抗炎因子IL-10水平’药物中的应用，其特征在于，所述衢枳壳提取物的制备方法如下：
1)取衢枳壳粉碎颗粒，加去离子水浸泡，浸泡液蒸馏收集馏分备用；
2)将药渣加热回流两次，两次均过滤，并将两次的滤液合并，减压浓缩，得到浓缩液；
3)将浓缩液与馏分合并，即得衢枳壳提取物。
4.根据权利要求3所述的衢枳壳提取物在制备‘降低肺炎模型中中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、炎症相关因子IL-6、MCP-1、IL-12P70、IFN-γ、TNF水平，提升抗炎因子IL-10水平’药物中的应用，其特征在于，所述步骤1)中加入4-12倍量去离子水，浸泡0.5-1.5小时。
5.根据权利要求3所述的衢枳壳提取物在制备‘降低肺炎模型中中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、炎症相关因子IL-6、MCP-1、IL-12P70、IFN-γ、TNF水平，提升抗炎因子IL-10水平’药物中的应用，其特征在于，所述步骤1)中衢枳壳粉碎颗粒制备过程如下：将未成熟的衢枳壳切成2-4mm薄皮，晒干后粉碎，使用8-14目筛过筛得到。
6.根据权利要求3所述的衢枳壳提取物在制备‘降低肺炎模型中中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、炎症相关因子IL-6、MCP-1、IL-12P70、IFN-γ、TNF水平，提升抗炎因子IL-10水平’药物中的应用，其特征在于，所述步骤2)中第一次回流加入药渣的10-20倍量去离子水，回流提取1-2小时。
7.根据权利要求6所述的衢枳壳提取物在制备‘降低肺炎模型中中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、炎症相关因子IL-6、MCP-1、IL-12P70、IFN-γ、TNF水平，提升抗炎因子IL-10水平’药物中的应用，其特征在于，所述步骤2)中第二次回流加入药渣的5-10倍量去离子水，回流提取0.5-1小时。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710813853.0A CN107714805B (zh) | 2017-09-11 | 2017-09-11 | 衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710813853.0A CN107714805B (zh) | 2017-09-11 | 2017-09-11 | 衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107714805A CN107714805A (zh) | 2018-02-23 |
| CN107714805B true CN107714805B (zh) | 2021-06-25 |
Family
ID=61206052
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710813853.0A Active CN107714805B (zh) | 2017-09-11 | 2017-09-11 | 衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107714805B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108445124A (zh) * | 2018-03-20 | 2018-08-24 | 浙江省食品药品检验研究院 | 衢枳壳hplc指纹图谱的建立方法、标准指纹图谱及应用 |
| CN108403817B (zh) * | 2018-05-11 | 2021-05-25 | 衢州市人民医院 | 衢枳壳、衢枳壳提取物和含有他们的药物组合物在维护胰岛细胞功能中的应用 |
| CN109316487B (zh) * | 2018-11-20 | 2021-03-19 | 河南中医药大学 | 一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法及其应用 |
| CN111357895A (zh) * | 2020-04-09 | 2020-07-03 | 浙江忠诚生物科技有限公司 | 一种胡柚提取物在中药制剂或功能性食品中的应用方式 |
| CN113577088B (zh) * | 2021-08-02 | 2022-08-26 | 杭州医学院 | 一种治疗病毒性肺炎的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用 |
-
2017
- 2017-09-11 CN CN201710813853.0A patent/CN107714805B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107714805A (zh) | 2018-02-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107714805B (zh) | 衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用 | |
| Brush et al. | The effect of Echinacea purpurea, Astragalus membranaceus and Glycyrrhiza glabra on CD69 expression and immune cell activation in humans | |
| CN107648310A (zh) | 高纯度黄芩总黄酮及其制备方法及其药物用途 | |
| Hu et al. | Anti-inflammatory and antioxidant activity of astragalus polysaccharide in ulcerative colitis: A systematic review and meta-analysis of animal studies | |
| Wen et al. | Modified Dingchuan Decoction treats cough-variant asthma by suppressing lung inflammation and regulating the lung microbiota | |
| Wang et al. | Gleditsiae sinensis fructus Pills combined with Jujubae fructus attenuate chronic bronchitis via regulation of AGE-RAGE signaling pathway | |
| CN101028348A (zh) | 一种中药胶囊及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN106310017B (zh) | 一种治疗弥漫性肺间质纤维化肺肾气虚证的中药颗粒 | |
| CN105477361B (zh) | 一种治疗胃炎的中药组合物制备方法及制剂 | |
| Li et al. | Compatibility between cold-natured medicine CP and hot-natured medicine AZ synergistically mitigates colitis mice through attenuating inflammation and restoring gut barrier | |
| CN113577158A (zh) | 一种治疗急性肺损伤的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用 | |
| CN111407783B (zh) | 赶黄草在制备治疗高蛋白尿药物中的应用 | |
| CN113577088A (zh) | 一种治疗病毒性肺炎的衢枳壳有效成分组及其制备方法与应用 | |
| CN106074883A (zh) | 参芪抗过敏鼻炎颗粒及其制备方法 | |
| CN102988949B (zh) | 一种治疗鼻炎的药剂 | |
| CN105497167A (zh) | 猫爪草在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎药物方面的新用途 | |
| CN111467467A (zh) | 干姜挥发油得到的物质在急性肺部炎症疾病的应用 | |
| Xin et al. | Antidepressant effect of water extract of royal sun medicinal mushroom, Agaricus brasiliensis (agaricomycetes), in mice exposed to chronic unpredictable mild stress | |
| CN104547388A (zh) | 治疗阿尔茨海默病的中药组合物、其制备方法和用途 | |
| CN104042593B (zh) | 一种治疗肺部疾病的药物及其应用 | |
| CN102614226A (zh) | 蛹虫草子实体提取物在制备促进乳腺癌患者白细胞增生功能保健品或药品中的应用 | |
| CN114432362B (zh) | 一种镇痛抗炎消肿的中药组合物、制剂及应用 | |
| Udo et al. | Comparative effects of aqueous leaf extract of Viscum album (Mistletoe) and Aloe vera gel in the management of streptozotocin-induced diabetes mellitus | |
| CN109568474B (zh) | 治疗羊口疮的制剂及其制备方法 | |
| CN102539596B (zh) | 返魂草浸膏的质量检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |