CN102614226A - 蛹虫草子实体提取物在制备促进乳腺癌患者白细胞增生功能保健品或药品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了蛹虫草子实体提取物在制备促进乳腺癌患者白细胞增生功能保健品或药品中的应用。蛹虫草子实体提取物的提取方法为采用水或乙醇溶液对蛹虫草子实体进行提取。经乳腺癌化疗患者的临床试验证明，本提取物具有较好的促进化疗病人白细胞增生作用，可用于制备辅助治疗肿瘤的保健食品和药品。本发明揭示了蛹虫草子实体在升高乳腺癌患者化疗后白细胞的临床新用途，对促进蛹虫草的综合利用开发具有积极作用。

Description

蛹虫草子实体提取物在制备促进乳腺癌患者白细胞增生功能保健品或药品中的应用

技术领域

本发明涉及蛹虫草子实体提取物的新用途。

背景技术

肿瘤已逐渐取代心脑血管疾病成为全球头号杀手，近二十年以来全球肿瘤的发病率和死亡率节节攀升。由于恶性肿瘤有转移播散趋势，肿瘤的化疗越来越被人们重视，同时化疗的毒副作用越来越引起医务人员和患者的关注。

乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤，占女性恶性肿瘤的32%。其发病原因是乳腺导管上皮细胞在各种内外致瘤因素的作用下，细胞失去正常特性出现异常增生，以致超过自我修复的限度而发生的恶性肿瘤。乳腺癌的临床表现以出现乳腺肿块为主，具有发病率高、侵袭性大、病程长为特点。其发病率在美国、新西兰、北欧、加拿大等国居首位，且有全球上升趋势。在20世纪的最后10年里，我国京、津、沪等大城市的乳腺癌发病率已居女性恶性肿瘤第2位，尤其晚期乳腺癌的治疗尤为困难。

化学治疗是乳腺癌重要的治疗方法之一。但目前常用化疗方案一般都为以蒽环类及含紫杉类药物为主，对骨髓造血细胞的影响均较大。骨髓造血细胞的损害往往是造成患者不能按时足量完成化疗的重要原因。治疗上现代医学多采用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-SF)，虽然近期疗效确切，但维持时间短，对红细胞及血小板疗效不理想，还可能会加重骨髓细胞损害，且会引起骨痛、发热等副反应，及刺激某些恶性细胞生长。其中造成白细胞严重减少，病人出现炎症、病情反复、持续低烧不退等症状。因此如何提升乳腺癌患者的白细胞数量，是癌症病人是否能够继续治疗以及能否抑制癌细胞发展、扩散的重要措施。

白细胞下降是化疗最常见的毒副作用之一，多表现为外周血粒细胞减少。严重者往往使化疗无法如期进行，甚至导致感染等并发症，降低了患者的生活质量。目前，乳腺癌患者的化疗辅助药物中，升白细胞药物占到10.62%（王伟兰，癌症患者化疗辅助用药临床应用情况分析，中国药物应用与监测，2010.4（7）：95-96）。其中中药制剂升白汤、地榆升白片、升白冲剂等在临床应用中都得到良好的效果。梅学伟等通过临床观察证明，中药冬虫夏草对于肿瘤放、化疗所致的白细胞减少有明显的提升作用，一般1~2即可见效，而且药效持久，无不良反应（梅学伟，中药冬虫夏草对白细胞减少症的疗效分析，中国实用医药，2009.4（9）：159-160）。而作为冬虫夏草理想替代品的蛹虫草一直没见到相关的研究和报道。

蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草，隶属真菌门、子囊菌亚门、麦角菌目、麦角菌科、虫草属，与冬虫夏草同属虫草属。天然野生蛹虫草始载于《新华本草纲要》，记载其味甘、性平，有“益肺肾、补精髓、止血化痰”的功效；现代中医学巨著《中华药海》记载“蛹草，别名北冬虫夏草，性味甘、平，入肺、肾二经”。

蛹虫草含有虫草多糖、虫草素、核苷类物质、麦角甾醇、虫草酸等多种有效成分。现代药理学研究表明，蛹虫草具有良好的有抗肿瘤活性。吴洪臻等发现虫草素对小鼠S180瘤的抑制率，蛹虫草子实体同样具有显著地抗肿瘤作用（吴洪臻，虫草素对小鼠S180瘤抑制作用研究，时珍国医国药，2000.11(10)：873），刘洁等发现蛹虫草子实体对S180和Lewis肺癌的抑制率为61%和65%，对荷肝癌（H22）小鼠也有抑制作用（刘洁，蚕蛹虫草抗肿瘤作用的研究，白求恩医科大学学报，1992.18（5）：423~425）。这些利用体外实验和体内动物实验获得了蛹虫草具有抗癌活性的依据，但这些研究缺乏临床试验结果的支持，尤其是免疫低下人群的临床试验结果。另外，也未见到关于蛹虫草提取物对促进白细胞增生功能的相关文献集专利报道。

在已有的与蛹虫草相关的保健品和药品中，多以调节免疫功能、增强免疫力为主，其功效和作用比较笼统。中国专利200910028488.8中，将蛹虫草添加到一种复方，以增强免疫功能和改善消化功能。专利200510007734.3中，提取了蛹虫草中核苷类活性物质，用于抑制肿瘤细胞。其应用的活性成分单一，而蛹虫草中具有虫草素、虫草酸、多糖、麦角甾醇等未得到充分协调利用。在相关的文献记载中未发现有关蛹虫草提取物促进肿瘤患者白细胞增生功能的应用和产品。

发明内容

本发明的目的是提供蛹虫草子实体提取物在制备促进乳腺癌患者白细胞增生功能保健品或药品中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种蛹虫草子实体提取物的提取方法，采用水或乙醇溶液对蛹虫草子实体进行提取。

在上述提取方法中，所述水的用量为蛹虫草子实体重量的8~30倍体积。

在上述提取方法中，所述乙醇溶液为40%~95%乙醇溶液（V/V,体积百分比）。

上述提取方法具体包括如下步骤：

（1）    筛选菌种，经过子实体培养生产出蛹虫草子实体；

（2）    将蛹虫草子实体粉碎，过20~60目筛；

（3）    水或乙醇溶液提取1-6小时；

（4）    提取液离心，过滤，得到澄清提取液，澄清提取液经减压真空浓缩，回收乙醇，浓缩过程控制药液温度不超过60℃，得提取物浸膏；

（5）    将提取物浸膏经减压真空干燥或喷雾干燥，即得蛹虫草子实体提取物。

在上述提取方法中，所述筛选菌种为从野生蛹虫草经筛选、选育和复壮得到抗杂菌污染好、生长能力强、生长周期短、遗传稳定性好的菌种。

本发明发现上述提取方法得到的蛹虫草子实体提取物具有促进乳腺癌患者白细胞增生功能，能用于制备促进乳腺癌患者白细胞增生的药物组合物。

上述所得蛹虫草子实体提取物经粉碎，按常规方法制成片剂、胶囊剂、咀嚼片或口服液。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明所制备的蛹虫草子实体提取物充分保留了蛹虫草中的活性成分，并通过人群临床试验验证，具有显著地促进癌症患者白细胞增生功能。具有如下优势：

（1）能治疗和预防白细胞减少症，且能使中性粒细胞和淋巴细胞数有效提高；

（2）能使血细胞缓慢持续上升，维持时间长，且不易反弹；

（3）与粒细胞集落刺激因子合用，避免了粒细胞增殖过快而致骨髓空虚，长期应用效果更好；

（4）无发热、过敏等副反应；

（5）制成冲剂、胶囊等常规剂型，服用方便，价格低廉。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

实施例1

从吉林长白山的野生蛹虫草经严格筛选、选育和复壮得到抗杂菌污染好、生长能力强、生长周期短、遗传稳定性好的菌种，经固体培养基的配制以及60天的子实体培养，经采收、干燥得到蛹虫草子实体。所得蛹虫草子实体虫草素含量大于3.80mg/g、虫草酸含量大于45.00 mg/g、虫草多糖含量大于5.50%、腺苷含量大于1.60 mg/g、麦角甾醇含量大于3.10 mg/g以及总氨基酸大于9.00%，多批蛹虫草子实体指纹图谱相似值大于0.950。

将干燥的蛹虫草子实体300kg粉碎，过60目筛，用25倍纯水提取4小时。提取液离心，过滤，得澄清提取液，提取液减压真空浓缩，浓缩控制药液温度不超过60℃，将浓缩浸膏减压真空干燥，粉碎得99kg蛹虫草水提物。

按常规的胶囊充填方法，制备成蛹虫草子实体原粉胶囊或提取物胶囊，每粒200mg。

上述所得蛹虫草子实体提取物有效成分含量见表1：

表1  蛹虫草子实体提取物有效成分含量

有效成分	含量(%)
		虫草素	20.36
虫草酸	30.42
		多  糖	15.37
腺  苷	2.63
		尿  苷	0.10
麦角甾醇	8.16

实施例2  蛹虫草菌种的选育和子实体栽培过程同实施例1。将干燥的蛹虫草子实体200kg粉碎，过20目筛，用15倍（V/W）85%(V/V)乙醇溶液提取2小时，再用10倍（V/W）85%(V/V)乙醇溶液提取2小时。提取液离心，过滤，得澄清提取液，提取液减压真空浓缩，回收乙醇后，控制浓缩温度不超过60℃，将浓缩浸膏减压真空干燥，粉碎得44kg蛹虫草醇提物。

按常规的胶囊充填方法，制备成蛹虫草子实体原粉胶囊或提取物胶囊，每粒200mg。

实施例3  蛹虫草子实体水提取物功能实验

利用人群临床试验考察了蛹虫草子实体提取物对肿瘤化疗病人的升高白细胞数作用。

实验采用2×2交叉设计。运用随机数字表，入选的71例乳腺癌病人按1:1比例随机分入两组：YN（实施例1的蛹虫草子实体提取物）组和NY（不服食蛹虫草子实体提取物）组。所有病人在确诊乳腺癌后均进行两次化疗。YN组在第一次化疗的同时服食蛹虫草子实体提取物胶囊，第二次化疗时不服食，NY组在第二次化疗的同时服食蛹虫草子实体提取物胶囊，第一次化疗时不服食。服食蛹虫草子实体提取物胶囊的剂量为每日早、中、晚各一次，每次400mg。两组病人均在第一次化疗前、第一次化疗结束第二次化疗前、第二次化疗结束三个时间点采血，分析血液学指标。

71例入选的病人中，34例随机进入YN组，37例随机进入NY组。两组治疗前的平均年龄和血液学指标均有良好的可比性。在服食蛹虫草子实体胶囊过程中，密切观察临床不良反应，如不适或敏感者停用。实验结果见表2。

表2 治疗各阶段两组白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数（                                                ±s）×10⁹/L

用SPSS 13.0统计软件包对YN和NY两组第一次化疗前采血前的指标即基线指标进行T检验，对第二次和第三次采血的指标进行两阶段交叉设计的方差设计。

第一次化疗结束时的血液学指标显示，YN组的白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数与NY组比较，值均升高。第二次化疗结束时的血液学指标显示，NY组的白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数与YN组比较，值均升高。两次化疗后血液学指标两阶段交叉设计的方差分析显示。

两种处理（服食或不服食蛹虫草提取物）的白细胞总数差异有统计学意义（F=44.125，p<0.01），两个阶段（第一次化疗、第二次化疗）的白细胞总数差异有统计学意义（F=13.091，p<0.01），个体间白细胞总数差异有统计意义（F=3.635，p<0.01）。两种处理对中性粒细胞数进行分析，差异有统计学意义（F=38.560，p<0.01），两个阶段（第一次化疗、第二次化疗）的白细胞总数差异有统计学意义（F=13.559，p<0.01），个体间白细胞总数差异有统计学意义（F=4.411，p<0.01）。对淋巴细胞数进行分析，两种处理（服食或不服食蛹虫草子实体胶囊）的白细胞总数差异有统计学意义（F=19.859，p<0.01），两阶段（第一次化疗、第二次化疗）的白细胞总数差异无统计学意义（F=2.363，p>0.05），个体间白细胞总数差异有统计学意义（F=1.723，p<0.05）。

结果显示，在第一次化疗结束时，服用了蛹虫草子实体提取物胶囊的YN组病人，白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞数与没服食的NY组病人相比较，有明显的升高，差异具有统计学意义。在第二次化疗结束时，服食蛹虫草子实体提取物胶囊的NY组病人的白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞数与没服食的YN组病人相比较，有明显的升高，差异具有统计学意义。在二次化疗中，显示服食蛹虫草子实体提取物胶囊的患者白细胞数指标升高。同一患者在第二次化疗中，一次服食一次不服食，交叉进行，均在服食的那一次患者的白细胞升高，同时患者的总体状况较好，未发现明显的不良反应。另外，本次试验采用交叉设计，与一般的平行组设计相比，能节省样本量，增加检验效能。作为一种自身比较的方法，将个体差异从处理比较中分离出来，消除个体差异和试验时期差异对结果的影响，用较少的实验个体达到较高的精度。

综上所述，蛹虫草子实体提取物胶囊对肿瘤化疗病人有明显的升白作用，以化疗患者白细胞的变化为指标可考察免疫低下者改善的情况。

实施例4  蛹虫草子实体乙醇溶液提取物功能实验

将YN（实施例1的蛹虫草子实体提取物）组变为YN（实施例2的蛹虫草子实体提取物）组，其他与实施例3相同。结果显示蛹虫草子实体提取物胶囊对肿瘤化疗病人有明显的升白作用，以化疗患者白细胞的变化为指标可考察免疫低下者改善的情况。

Claims (7)

1.一种蛹虫草子实体提取物的提取方法，其特征在于采用水或乙醇溶液对蛹虫草子实体进行提取。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述水的用量为蛹虫草子实体8~25倍体积。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在所述乙醇溶液为40%~95%乙醇溶液（体积百分比）。

4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）筛选菌种，经过子实体培养生产出蛹虫草子实体；

（2）将蛹虫草子实体粉碎，过20~60目筛；

（3）水或乙醇溶液回流提取1－6小时；

（4）提取液离心，过滤，得到澄清提取液，澄清提取液经减压真空浓缩，回收乙醇，浓缩过程控制温度，药液温度不超过60℃，得提取物浸膏；

（5）将提取物浸膏经减压真空干燥或喷雾干燥，即得蛹虫草子实体提取物。

5.如权利要求4所述的提取方法，其特征在于所述筛选菌种为从野生蛹虫草经筛选、选育和复壮得到抗杂菌污染好、生长能力强、生长周期短、遗传稳定性好的菌种。

6.权利要求1所述提取方法得到的蛹虫草子实体提取物在制备促进乳腺癌患者白细胞增生功能保健品或药品中的应用。

7.一种用于促进乳腺癌患者白细胞增生的药物组合物，其特征在于含有权利要求1所述提取方法得到的蛹虫草子实体提取物。