CN100475843C

CN100475843C - 有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽

Info

Publication number: CN100475843C
Application number: CNB028164903A
Authority: CN
Inventors: P·A·艾弗白克
Original assignee: Nymox Corp Canada
Current assignee: Nymox Corp Canada
Priority date: 2001-07-19
Filing date: 2002-07-19
Publication date: 2009-04-08
Anticipated expiration: 2022-07-19
Also published as: IL159903A0; ES2281528T3; US7192929B2; ATE353914T1; KR20040026686A; US20030109437A1; NO20040222L; US7241738B2; DE60217507T2; EP1417228A2; US20030096756A1; ZA200401320B; NO333999B1; BRPI0211200B8; KR20040018481A; AU2002319050B2; PL368912A1; ES2281529T3; CA2453967C; DE60218179T2

Abstract

本发明涉及用含有肽或基于肽的化合物治疗疾病的方法，所述肽含有一部分神经丝状蛋白的氨基酸序列，这种疾病需要除去或破坏患者的有害细胞或不需要的细胞，如良性或恶性肿瘤。

Description

有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽

本申请要求2001年7月19日提交的题为“有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的蛋白质和肽”的临时申请序列号60/306,161的优先权，2001年7月19日提交的题为“有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽”的临时专利申请序列号60/306,150的优先权，以及2001年11月16日提交的题为“有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽”的临时专利申请序列号60/331,477的优先权，在此将它们全文并入以供参考。

发明领域

本发明涉及用基于包含对应于、相似或同源于神经丝状蛋白部分氨基酸序列的氨基酸序列的肽的化合物治疗疾病的方法，这种疾病需要除去或破坏细胞因子，如良性或恶性肿瘤。方法包括但不限于肌肉内、经口、静脉内、鞘内、肿瘤内、鼻内、局部、透皮等施用化合物，或单独或结合一种载体。

发明背景

许多医学治疗和过程包括除去或破坏有害或不需要的组织。这种重要治疗的例子包括手术除去癌性的生长物、通过化疗破坏转移性肿瘤和减少腺(如前列腺)增生。其它例子包括除去不需要的面部毛发、疣皮下组织、淋巴组织或脂肪组织。

需要有效试剂能破坏从而便于除去或抑制有害或不需要细胞和组织的进一步生长，但有主要的局部效应和最小或没有全身毒性。神经丝状蛋白和它们相关分子是描述于2002年3月8日提交的题为“用神经丝状蛋白治疗肿瘤和相关疾病的方法”的待审批美国专利申请序列号10/092,934的一类试剂，公布内容全部纳入本文供参考。含有与神经丝状蛋白的氨基酸序列部分对应的氨基酸序列的肽，AD7c-NTP也是这类试剂。这些肽描述在2002年5月24日提交的题为“有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽”的待审批美国专利申请序列号10/153,334中，公布内容全部纳入本文供参考。

这里所揭示的是神经丝状蛋白的某些其它片段，这些片段可有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病。

癌是细胞内部调节机制中的异常，导致不受控制的细胞生长和繁殖。正常细胞构成组织，当这些细胞失去作为特定、受控制和协同单位的能力时，(去分化)缺陷导致细胞群中的混乱。当它发生时，形成肿瘤。

组织的良性过度生长是异常情况，其中需要从生物体除去细胞。良性肿瘤是不在全身转移但确实引起疾病症状的细胞增殖。如果这种肿瘤位于器官如脑中难以到达的区域，它们可以是致命的。良性肿瘤存在于许多器官中，包括肺、脑皮肤、垂体、甲状腺、肾上腺皮质和肾上腺髓质、卵巢、子宫、睾丸、结缔组织、肌肉、肠、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、肝脏、胆囊、胰、前列腺、心和其它器官。

在癌症治疗中手术通常是第一步。手术的目的不同。有时它用于除去尽可能多的明显肿瘤，或至少使它“除块”(除去主要的肿瘤块从而不太需要其它方法治疗)。取决于癌种类和位置，手术也可为病人提供一些症状缓解。例如，如果手术可除去大部分扩散的脑肿瘤，颅内的压力会减少，使病人的症状改善。

不是所有的肿瘤都可以进行手术。一些位于使它们不能完全除去的身体部分。这些例子可以是脑干中的肿瘤(控制呼吸的脑部分)或生长在主要血管中和周围的肿瘤。在这些情况中，由于与肿瘤去除相联的高风险，手术的作用受限制。

在一些情况中，由于不必要，手术不用于除肿瘤块。一个例子是何杰金淋巴瘤，这是一种很好响应化疗和放射治疗结合的淋巴结癌。在何杰金淋巴瘤中，很少需要手术来获得治愈，但手术几乎主要用于确定诊断。

化疗是癌治疗的普遍形式。它包括使用遍及全身特异攻击迅速分裂的细胞(如那些发现于肿瘤中的细胞)的药物(通常通过口或注射给予)。这使化疗有助子治疗已转移的癌以及有很高机会扩散到血液和淋巴系统但未明显超过原发性肿瘤的肿瘤。化疗也可用于提高局部肿瘤对手术和放射的反应。例如对于一些头部和颈部的癌。

不幸的是，人体中正常迅速分裂的其它细胞(如胃和毛发的衬层(lining))也受到化疗影响。由于这个原因，许多化疗剂导致不良副作用的恶心、呕吐、贫血、脱发或其它症状。这些副作用是暂时性的，医生可提供药物帮助减轻许多这些副作用。随着我们的知识持续增长，研究者设计了更新的化疗剂，不仅更好地杀死癌细胞且对病人副作用更少。

化疗以多种方式施用给病人。一些是药丸，一些是静脉内或其它注射施用。就可注射的化疗而言，病人到医生办公室或医院接受治疗。其它化疗剂需要一天24小时连续灌输到血流中。对于这些类型的化疗，进行较小的手术过程以移植病人受损的小泵。泵然后缓慢施用药物。在许多情况中，永久口置于病人静脉以去除反复针刺的需要。

放射是另一种抗癌的常用武器。放射通过破坏肿瘤细胞内的DNA来杀死癌。放射以两种不同方式传送。最普通的方法包括以高度精确方式使放射线束指向病人，集中于肿瘤。为此，病人躺在桌上且光束在他/她周围移动。这仅需要几分钟，但每天进行连续数周(取决于肿瘤类型)以获得具体的总处方剂量。

有时使用称为近程治疗的另外放射方法，包括采用放射性小丸(“籽壳”)或电线并将它们移植到身体中的肿瘤区域。移植可以是暂时或永久性。就永久移植而言，籽壳中的放射在几天或几周中“衰变”从而病人不具放射性。就暂时移植而言，总放射剂量通常在天中传递且病人在此时间中必须留在医院。对于两种近程治疗，放射一般传递给高度靶向区域以获得对癌的局部控制(与治疗整体相反，如化疗剂量)。

一些高度选择的病人可使用骨髓移植。通常进行此过程是因为病人患具显著攻击性的癌或因为他们患常规疗法治疗后复发的癌。骨髓移植是一种复杂的过程。有许多种类且它们引起副作用和治愈的潜力不同。大多数移植在特殊中心进行，在许多情况中它们的使用被认为是研究性的。

有一些其它治疗，尽管大部分仍在临床试验中探索且尚未成为标准治疗。例子包括使用免疫治疗、单克隆抗体、抗血管生成因子和基因治疗。

免疫治疗：设计了多种技术以促进病人自身免疫系统抗癌，这与放射治疗或化疗完全不同。通常为达到目的，研究者用特别获得的疫苗注射病人。

单克隆抗体：这些是设计附着于癌性细胞(且不是正常细胞)的抗体，附着利用癌性和非癌性细胞间在抗原或/或其它特征中的差异。抗体可单独施用给病人，或与各种细胞毒性化合物结合或以放射性形式，这样抗体优先靶向癌性细胞，从而传递毒性试剂给所需细胞。

抗血管生成因子：随着癌细胞迅速分裂和肿瘤生长，它们可长得很快不再要血液供应。为补偿这点，一些肿瘤分泌有助于诱导血管在它们周围生长的物质，因此向癌细胞提供血管来源的营养物。已设计实验性治疗以阻止肿瘤在血管中生长。

基因治疗：癌是一系列突变的产物，最终导致癌细胞产生和其过量的增生。治疗癌可通过将控制或终止癌增生的基因引入癌细胞、开启细胞的程序性细胞机制以破坏细胞、提高细胞的免疫识别、或表达转变成毒性代谢物或抑制肿瘤生长的细胞因子的前体药物。

良性肿瘤和畸形也可通过多种方法治疗，包括手术、放射治疗、药物治疗、热和电消融、冷冻疗法和其它。尽管良性肿瘤不转移，它们可长得大且可复发。手术根除良性肿瘤有一般手术的所有困难和副作用，通常对于一些良性肿瘤必须反复进行，如垂体腺瘤、脑膜瘤、前列腺增生和其它。

尚有包括不需要细胞因子的其它疾患，其中需要选择性细胞去除。例如心脏病和中风一般由动脉粥样硬化、纤维脂肪和修饰平滑肌成分的增殖损伤引起，增殖损伤使血管壁扭曲、腔缩小、血流收缩、倾向于病灶性血块并最终导致阻塞和梗塞。治疗动脉粥样硬化包括旁路移植；人工移植；用再通、刮除术、放射、激光或其它去除的血管成形术；通过脂质减少抑制动脉粥样硬化的药物疗法；抗凝固治疗；和饮食、锻炼及生活方式的总体评估。需要一种方法用于除去动脉粥样硬化性损伤而无手术过程的风险和副作用。

其它需要选择性细胞去除的不需要细胞因子例子包括病毒诱导的生长如疣。另一个例子是炎症情况中发现的肥大炎性群和肥大疤痕或瘢痕疙瘩。另外的例子发现于化妆品中例如除去不需要的毛发如面部毛发，或皱缩不需要的组织区域用于化妆目的如在面部皮肤和结缔组织中或在四肢皮肤和结缔组织中。

其它例子对于此领域的一般技术人员是显然的。在所有或大部分这些例子中，需要可除去或破坏不需要细胞因子的治疗，无常规治疗的风险和副作用，或需要更精确除去不需要的细胞因子。

神经丝状蛋白(NTP)是最近才鉴定的一个脑蛋白质家族。此家族成员之一AD7c-NTP是41kD功能与神经芽生有关的膜结合磷蛋白(de la Monte等，J.Clin.Invest.，100：3093-3104(1997)；de la Monte等，Alz.Rep.，2：327-332(1999)；de la Monte SM和Wands JR，Journal of Alzheimer’s Disease，3：345-353(2001))。编码AD7c-NTP的基因和AD7c-NTP的预测蛋白质序列已鉴定和描述(de la Monte等，J.Clin.Invest.，100：3093-3104(1997))。除了41kD种类外，其它种类的神经丝状蛋白(约26kD、约21kD、约17kD和约15kD)也已鉴定并与神经外胚层瘤、星形细胞瘤和成胶质细胞瘤以及缺氧、局部缺血或脑梗塞引起的损伤相关联(Xu等，Cancer Research，53：3823-3829(1993)；de la Monte等，J.Neuropathol.Exp.Neurol.，55(10)：1038-50(1996)，de la Monte等，J.Neurol.Sci.，138(1-2)：26-35(1996)；de la Monte等，J.Neurol.Sci.，135(2)：118-25(1996)；de la Monte等，J.Clin.Invest.，100：3093-3104(1997)；de la Monte等，Alz.Rep.，2：327-332(1999))。

对神经丝状蛋白的种类已有描述和权利要求，见美国专利号5,948,634；5,948,888和5,830,670中所有关于“阿尔茨海默氏病的神经丝状蛋白基因表达和检测”和美国专利号6,071,705关于“检测神经疾病或功能不良的方法”。这些专利的披露内容特别地全部纳入本文供参考。如其中所述，NTP在细胞死亡期间上调和产生。因此，死亡和垂死的神经细胞描述为过度产生NTP，因而它的存在表明神经细胞死亡和阿尔茨海默氏病(AD)发作。

已将其它种类的神经丝状蛋白鉴定为AD7c-NTP基因的其它产物(如描述于NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#XP_032307PID g15928971的一种112个氨基酸的蛋白质)或类似于神经丝状蛋白(如描述于NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#AAH14951 PID g15928971的一种106个氨基酸的蛋白质，描述于NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#XP_039102PID g18599339的另一种106个氨基酸的蛋白质和描述于NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#AAH02534PID g12803421的一种61个氨基酸的蛋白质)。

与AD和NTP相连的神经丝状蛋白在AD的细胞死亡中上调。与对照相比AD7c-NTP mRNA在AD大脑中上调；AD中大脑和CSF中的AD7c-NTP蛋白水平高于对照；AD7c-NTP的免疫反应性发现于AD和唐氏综合症大脑中的老年斑、神经纤维缠结(NFT)、变性神经元、神经毡丝(neuropil thread)和营养不良性神经芽生中(Ozturk等，Proe.Natl.Acad.Sci.USA，86：419-423(1989)；de la Monte等，J.Clin.Invest.，86(3)：1004-13(1990)；de la Monte等，J.Neurol.Sci.，113(2)：152-64(1992)；de la Monte等，Ann.Neurol.，32(6)：733-42(1992)；de la Monte等，J.Neuropathol.Exp.Neurol.，55(10)：1038-50(1996)，de la Monte等，J.Neurol.Sei.，138(1-2)：26-35(1996)；de la Monte等，J.Neurol.Sci.，135(2)：118-25(1996)；de la Monte等，J.Clin.Invest.，100：3093-3104(1997)；de la Monte等，Alz.Rep.，2：327-332(1999))。NTP定位于细胞内、神经毡内的精细加工中，或AD和唐氏综合症大脑中的细胞外。de la Monte等，Ann.Neurol.，32(6)：733-42(1992)。

在AD病人的CSF和尿中都发现AD7e-NTP蛋白水平升高(de la Monte和Wands，Front Biosci 7：989-96(2002)；de la Monte和Wands，Journal of Alzheimer’sDisease，3：345-353(2001)；Munzar等，Alzheimer’s Reports 4：61-65(2001)；Kahle等，Neurology 54：1498-1504(2000)；Munzar等，Alzheimer’s Reports 3：155-159(2000)；de la Monte等，Alzheimer’s Reports 2：327-332(1999)；和de la Monte等，J Clin Invest 100：3093-3104(1997)。

过度表达NTP也与阿尔茨海默氏病中的细胞死亡过程相联系(de la Monte和Wands，J.Neuropathol Exp.Neurol.，60：195-207(2001)；de la Monte和Wands，CellMol Life Sci 58：844-49(2001)。也在唐氏综合症大脑组织中鉴定了AD7c-NTP(Wands等，国际专利出版号WO 90/06993；de la Monte等，J Neurol Sci 135：118-25(1996)；de la Monte等，Alz.Rep.，2：327-332(1999))。有一些证据表明过度表达NTP也可能与正常张力青光眼相关联(Golubnitschaja-Labudova等，Curr Eye Res21：867-76(2000))。

证明NTP是在体外神经胶质瘤和成神经细胞瘤培养物以及体内正常啮齿动物肌肉组织、皮下结缔组织和真皮以及多种不同人和非人来源的肿瘤(包括乳腺癌、皮肤癌和乳头状瘤、结肠癌、脑胶质瘤和啮齿动物模型中的其它肿瘤)中造成细胞死亡的一种有效试剂。参见2002年3月8日提交的待审批美国专利申请序列号10/092,934；题为“用神经丝状蛋白治疗肿瘤和相关疾病的方法”。

AD7c-NTP的某些肽序列(“AD7c-NTP肽”)也被证明是在体外胶质瘤和成神经细胞瘤细胞培养物中和/或在体内正常的啮齿动物肌肉组织、皮下结缔组织、真皮和其它组织中造成细胞死亡的有效试剂。参见2002年3月24日提交的题为“有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽”的美国专利申请序列号10/153,334。

此描述中包括上述相关领域的描述、任何和所有本文所述公开的文献，包含任何和所有全部纳入本文供参考的美国专利。上述相关领域的描述在任何方面不承认包括待审批美国专利申请的任何本文所述文献是本发明的现有技术。

此领域仍需要新的、毒性较弱的治疗不需要的细胞因子的方法。本发明可满足这些需求。

发明概述

本发明涉及治疗不需要细胞增殖的肽组合物和方法，如良性或恶性肿瘤、腺(如前列腺)增生、不需要的面部毛发、疣和不需要的脂肪组织。这种方法包括施用治疗有效量的NTP肽给需要的哺乳动物，已知这种肽是造成细胞死亡的有效试剂。NTP肽的定义如下。

本发明的肽具有至少一段与神经丝状蛋白的氨基酸序列部分对应的氨基酸序列。本发明的组合物包括这种肽和药学上可接受的载体，或与载体等结合的肽，或被包囊在聚合的基体等中的肽。

本发明一部分包括发现AD7c-NTP中所含的肽序列，发明者发现它是破坏或除去有害细胞或不需要的细胞的有效试剂，及其变体或同系物，它还在包括人类和其它哺乳动物在内的其它生物的其它蛋白质中被发现。一旦发现了肽序列，此领域的一般技术人员就可通过使用广泛存在的公众或商业蛋白质数据库如国家生物技术信息蛋白质中心数据库(National Center Biotechnology Information′s Proteindatabase)和检索程序如BLAST

(局部序列比对基本检索工具)找到这些蛋白质。参见Altschul，Stephen F.，Thomas L.Madden，Alejandro A.

，Jinghui Zhang，ZhengZhang，Webb Miller和David J.Lipman(1997)，“缺口BLAST和PSI-BLAST：新一代蛋白质数据库检索程序(Gapped BLAST and PSI-BLAST：a new generation of proteindatabase search programs)”，Nucleic Acids Res.25：3389-3402。

此领域的一般技术人员然后可以用这里描述的测定方法来筛选这些蛋白质，以确定它们作为破坏或除去不需要或有害细胞的试剂的效力。发现一种或多种这类有效试剂后，此领域的一般技术人员然后可以确定那些试剂中包含与这里所述或2002年5月24日提交的题为“有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽”的待审批美国专利申请序列号10/153,334所述的AD7c-NTP肽序列同源或类似的序列，所述试剂是用精通此领域的技术人员已知的方法合成的，并测试合成的试剂作为破坏或除去不需要或有害细胞的试剂的效力。此外，此领域的一般技术人员还可使用被发现的任何此类蛋白质的氨基酸序列来确定与这里所述以及2002年5月24日提交的题为“有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽”的美国专利申请序列号10/153,334所述的AD7c-NTP肽序列不类似或不同源和周源或类似的其它肽序列。然后可测试这些新合成的序列作为破坏或除去不需要或有害细胞的试剂的效力。

本发明的肽或蛋白质(“细胞死亡肽”)可单独或者结合载体或抗体施用。施用细胞死亡肽可肌肉内、经口、静脉内、腹膜内、大脑内(实质内)、脑室内、肿瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、透皮、通过气雾剂、灌输、推注、移植装置、缓释系统等，或单独或结合载体。另外，细胞死亡肽可由于遗传改变或其它来体内表达，这是通过施用表达肽的基因、通过施用诱导这类生成的疫苗或通过引入体内表达肽的细胞、细菌或病毒。

此外，细胞死亡肽可结合其它疗法使用来治疗良性或恶性肿瘤和其它不需要或有害的细胞生长。上述一般描述和下列详细描述是示范性和说明性的，提供进一步权利要求的发明的说明。从下列发明的详细描述中，其它目标、优点和新特征对于本领域技术人员是显然的。

附图简述

图1：显示AD7c-NTP基因的完整氨基酸序列和核酸序列以及该基因的AD7c-NTP蛋白产物(来自美国专利号5,830,670、5,948,888的序列120和121；de la Monte等，J.Clin.Invest.，100：3093-3104(1997)；NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#AAC08737；PID g3002527)[SEQ ID NO.1]。

图2：显示122个氨基酸的神经丝状蛋白的完整氨基酸序列(来自美国专利号5,830,670、5,948,634和5,948,888的序列40；NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#AAE25447PID g10048540)[SEQ ID NO.2]。

图3：显示122个氨基酸的神经丝状蛋白的完整氨基酸序列(NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#XP_032307PID g15928971)[SEQ ID NO.3]。

图4：显示106个氨基酸的神经丝状蛋白样蛋白质的完整氨基酸序列(NCBIEntrez-蛋白质数据库登录号#AAH14951 PID g15928971)[SEQ ID NO.4]。

图5：显示106个氨基酸的神经丝状蛋白样蛋白质的完整氨基酸序列(NCBIEntrez-蛋白质数据库登录号#XP_039102 PID g18599339)[SEQ ID NO.5]。

图6：显示98个氨基酸的神经丝状蛋白的完整氨基酸序列(来自美国专利号5,830,670、5,948,634和5,948,888的序列30；NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#AAE25445，PID g10048538)[SEQ ID NO.6]。

图7：显示75个氨基酸的神经丝状蛋白的完整氨基酸序列(来自美国专利号5,830,670、5,948,634和5,948,888的序列48；NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#AAE25448，PID g10048541)[SEQ ID NO.7]。

图8：显示68个氨基酸的神经丝状蛋白的完整氨基酸序列(来自美国专利号5,830,670、5,948,634和5,948,888的序列36；NCBI Entrez-蛋白质数据库登录号#AAE25446，PID g10048539)[SEQ ID NO.8]。

图9：显示61个氨基酸的神经丝状蛋白样蛋白质的完整氨基酸序列(NCBIEntrez-蛋白质数据库登录号#AAH02534，PID g12803421)[SEQ ID NO.9]。

优选实施方案的详细说明

除非另有说明，这里使用的术语和词组按如下定义。

术语“AD7c-NTP”是指约41kD蛋白质和基因以及编码它的核酸序列，描述在de la Monte等，J.Clin.Invest.，100：3093-104(1997)，美国专利号5,948,634；5,948,888和5,830,670的序列120和121以及GenBank#AF010144中，其核酸和氨基酸序列示于图1。术语“AD7c-NTP”也包括AD7c-NTP的生物活性片段、变体、衍生物、同源物和模拟物。

术语“NTP”或“神经丝状蛋白”指神经丝状蛋白和相关分子(包括胰丝状蛋白)和编码这些蛋白质的核酸序列，且包括(但不限于)下列蛋白质和编码这些蛋白质的氨基酸序列的核酸序列：

(a)AD7c-NTP；

(b)～42、～26、～21、～17、～14和～8kD种类的神经丝状蛋白，描述见于美国专利号5,948,634；5,948,888；5,830,670和6,071,705和de laMonte等，J.Neuropathol.Exp.Neurol.，55(10)：1038-50(1996)，de la Monte等，J.Neurol.Sci.，138(1-2)：26-35(1996)；de la Monte等，J.Neurol.Sci.，135(2)：118-25(1996)；de la Monte等，J.Clin.Invest.，100：3093-3104(1997)；de la Monte等，Alz.Rep.，2：327-332(1999)；

(c)由单克隆抗体#2特异性识别的蛋白质保存于美国模式培养物保藏所，Manassas，Va.，登录号HB-12546，或由单克隆抗体#5特异识别的蛋白质保存于美国模式培养物保藏所，Manassas，Va.，登录号HB-12545；

(d)由AD7c-NTP基因编码的蛋白质；

(e)122个氨基酸神经丝状蛋白，描述见来自美国专利号5,830,670、5,948,634和5,948,888的序列40，并在NCBI Entrez-蛋白质登录号#AAE25447，PIDg10048540中列出，氨基酸序列示于图2；

(f)NCBI Entrez-蛋白质登录号#XP_032307，PID g14725132中列出的122个氨基酸神经丝状蛋白，氨基酸序列示于图3；

(g)NCBI Entrez-蛋白质登录号#AAH14951 PID g15928971中列出的106个氨基酸神经丝状蛋白，氨基酸序列示于图4；

(h)NCBI Entrez-蛋白质登录号#XP_039102 PID g18599399中列出的106个氨基酸神经丝状蛋白，氨基酸序列示于图5；

(i)98个氨基酸神经丝状蛋白，描述见来自美国专利号5,830,670、5,948,634和5,948,88的序列30，并在NCBI Entrez-蛋白质登录号#AAE25445，PIDg10048538中列出，氨基酸序列示于图6；

(j)75个氨基酸神经丝状蛋白，描述见来自美国专利号5,830,670、5,948,634和5,948,888的序列48，并在NCBI Entrez-蛋白质登录号#AAE25448，PIDg10048541中列出，氨基酸序列示于图7；

(k)68个氨基酸神经丝状蛋白，描述见来自美国专利号5,830,670、5,948,634和5,948,888的序列36，并在NCBI Entrez-蛋白质登录号#AAE25446，PIDg10048539中列出，氨基酸序列示于图8；

(1)在NCBI Entrez-蛋白质登录号#AAH02534，PID g12803421中列出的61个氨基酸蛋白样蛋白质，氨基酸序列示于图9；

(m)胰丝状蛋白；

(n)在美国专利号6,071,705中描述的神经胰丝状蛋白(nPTP)；

(o)由杂交瘤产生的抗体特异性识别的蛋白质，杂交瘤为保存于美国模式培养物保藏所的HB 9934、HB 9935和HB 9936。

术语“NTP肽”所指的肽包括对应于NTP的至少部分氨基酸序列或NTP片段的氨基酸序列，除非另有说明，还包括这些肽的同源物、衍生物、变体、融合蛋白和肽模拟物。术语“NTP肽”还包括(但不限于)美国专利申请序列号10/092,934个10/153334中特别列出的肽。术语“NTP肽”优选包括(但不限于)NTP的以下氨基酸序列：

a)NTP肽#1[SEQ ID NO.10]，与AD7c-NTP p227-245类似，在p228之后插入了额外的苯丙氨酸残基

PGFFKLFSCPSLLSSWDYRR

Pro-Gly-Phe-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-

Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

相应的核酸序列[SEQ ID NO：10A]

CCCGGGTTCTTCAAGTTATTCTCCTGCCCCAGCCTCCTGAGTAGCTG

GGACTACAGGCGC

b)NTP肽#2[SEQ ID NO.11]，AD7c-NTP p114-132

PELKQSTCLSLPKCWDYRR

Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-

Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

相应的核酸序列[SEQ ID NO：11A]

CCTGAGCTCAAGCAGTCCACCTGCCTCAGCCTCCCAAAGTGCTGGG

ATTACAGGCGT

c)NTP肽#3[SEQ ID NO.12]，AD7c-NTP p326-344

PPGLKRFSCLSLPSSWDYG

Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-

Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly

相应的核酸序列[SEQ ID NO：12A]

CCTCCCGGGCTCAAGCGATTCTCCTGTCTCAGCCTCCCAAGCAGCTG

GGATTACGGG

d)NTP肽#4[SEQ ID NO.13]，AD7c-NTP p332-345

FSCLSLPSSWDYGH

Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His

相应的核酸序列[SEQ ID NO：13A]

TTCTCCTGTCTCAGCCTCCCAAGCAGCTGGGATTACGGGCAC

e)NTP肽#5[SEQ ID NO.14]，AD7c-NTP p119-132

STCLSLPKCWDYRR

Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

相应的核酸序列[SEQ ID NO：14A]

TCCACCTGCCTCAGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCGT

f)NTP肽#6[SEQ ID NO.15]，AD7c-NTP p232-245

FSCPSLLSSWDYRR

Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

相应的核酸序列[SEQ ID NO：15A]

TTCTCCTGCCCCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGACTACAGGCGC

g)NTP肽#7[SEQ ID NO.16]，AD7c-NTP p335-343

LSLPSSWDY

Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly

相应的核酸序列[SEQ ID NO：16A]

CTCAGCCTCCCAAGCAGCTGGGATTAC

h)NTP肽#8[SEQ ID NO.17]，AD7c-NTP p122-132

LSLPKCWDYRR

Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

相应的核酸序列[SEQ ID NO：17A]

CTCAGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCGT

i)NTP肽#9[SEQ ID NO.18]，AD7c-NTP p236-245

SLLSSWDYRR

Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

相应的核酸序列[SEQ ID NO：18A]

AGCCTCCTGAGTAGCTGGGACTACAGGCGC

j)NTP肽#10[SEQ ID NO.19]，AD7c-NTP p239-245在N末端具有额外的亮氨酸和脯氨酸残基。

LPSSWDYRR

Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

相应的核酸序列[SEQ ID NO：19A]

CTCCCAGAGTAGCTGGGACTACAGGCGC

k)NTP肽#11[SEQ ID NO.20]，AD7c-NTP p239-245

SSWDYRR

Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

相应的核酸序列[SEQ ID NO：20A]

GAGTAGCTGGGACTACAGGCGC

l)NTP肽#12[SEQ ID NO.21]，AD7c-NTP p239-243，p339-343

SSWDY

Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

相应的核酸序列[SEQ ID NO：21A]

AGCAGCTGGGATTAC

m)NTP肽#13[SEQ ID NO.22]，AD7c-NTP p239-245+AD7c-NTP p139-144

SSWDYRRFILFFL

Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu

相应的核酸序列[SEQ ID NO：22A]

GAGTAGCTGGGACTACAGGCGCTTTATTTTATTTTTTTTA

n)NTP肽#14[SEQ ID NO.23]，AD7c-NTP p241-245+AD7c-NTP p197-202

WDYRRFIFNFL

Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu

相应的核酸序列[SEQ ID NO：23A]

TGGGACTACAGGCGCTTTATTTTTAATTTTTTG

o)NTP肽#15[SEQ ID NO.24]，AD7c-NTP p297-302

FNFCLF

Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe

相应的核酸序列[SEQ ID NO：24A]

TTTAATTTTTGTTTGTTT

p)NTP肽#16[SEQ ID NO.25]，AD7c-NTP p197-202

FIFNFL

Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu

相应的核酸序列[SEQ ID NO：25A]

TTTATTTTTAATTTTTTG

q)NTP肽#17[SEQ ID NO.26]，AD7c-NTP p31-43

PASASPVAGITGM

Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met

相应的核酸序列[SEQ ID NO：26A]

CCTGCCTCAGCCTCCCCAGTAGCTGGGATTACAGGCATG

r)NTP肽#18[SEQ ID NO.27]，AD7c-NTP p175-187

PASASQVAGTKDM

Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met

相应的核酸序列[SEQ ID NO：27A]

CCTGCCTCAGCCTCCCAAGTAGCTGGGACCAAAGACATG

s)NTP肽#19[SEQ ID NO.28]，AD7c-NTP p277-289

PASASQSAGITGV

Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val

相应的核酸序列[SEQ ID NO：28A]

CCTGCCTCGGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCGTG

并包括这些特别列出的NTP肽的同源物、衍生物、变体、片段、融合蛋白和肽模拟物以及它们相应的核酸序列。

术语“片段”是指由NTP蛋白或NTP肽的氨基酸序列的连续亚序列构成的蛋白质或多肽，包括天然产生的片段，如剪接变体和在体内由分解蛋白活性天然产生的片段。这种片段可在氨基末端、羧基末端和/或中间(如自然剪接)截短。这种片段可以用或不用氨基末端甲硫氨酸制备。术语“片段”包括来自相同NTP蛋白或NTP肽的片段，可以相同或不同，共有或没有毗连的氨基酸序列，直接或通过接头连在一起。

术语“变体”指一种蛋白质或多肽，其中与NTP蛋白或NTP肽的氨基酸序列相比存在一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入，包括天然产生的NTP蛋白或NTP肽的等位基因变体或者另路剪接变体。术语“变体”包括在肽序列中的一个或多个氨基酸用类似或同源氨基酸或不相似氨基酸的置换。氨基酸可在许多等级上分为类似或同源氨基酸(Gunnar von Heijne，《分子生物学的序列分析》(SequenceAnalysis in Molecular Biology)，123-39页Academic Press，纽约，NY 1987.)优选的变体包括一个或多个氨基酸位置的丙氨酸取代。其它优选的取代包括对蛋白质的整体净电荷、极性或疏水性影响小或没有影响的保守性取代。保守性取代列于下表2中。

表2

保守性氨基酸取代

碱性：精氨酸

赖氨酸

组氨酸

酸性：谷氨酸

天冬氨酸

无电荷极性：谷氨酰胺

天冬酰胺

丝氨酸

苏氨酸

酪氨酸

非极性：苯丙氨酸

色氨酸

半胱氨酸

甘氨酸

丙氨酸

缬氨酸

脯氨酸

甲硫氨酸

亮氨酸

异亮氨酸

表3列出氨基酸取代的另一种方案：

表3

原始残基取代

丙氨酸甘氨酸；丝氨酸

精氨酸赖氨酸

天冬酰胺谷氨酰胺；组氨酸

天冬氨酸谷氨酸

半胱氨酸丝氨酸

谷氨酰胺天冬酰胺

谷氨酸天冬氨酸

甘氨酸丙氨酸；脯氨酸

组氨酸天冬酰胺；谷氨酰胺

异亮氨酸亮氨酸；缬氨酸

亮氨酸异亮氨酸；缬氨酸

赖氨酸精氨酸；谷氨酰胺；谷氨酸

甲硫氨酸亮氨酸；酪氨酸；异亮氨酸

苯丙氨酸甲硫氨酸；亮氨酸；酪氨酸

丝氨酸苏氨酸

苏氨酸丝氨酸

色氨酸酪氨酸

酪氨酸色氨酸；苯丙氨酸

缬氨酸异亮氨酸；亮氨酸

其它变体可由保守性较小的氨基酸取代组成，如选择的残基更显著不同在于它们对维持(a)取代区域中多肽主链的结构的作用，例如片层或螺旋构型.(b)靶位点分子的电荷或疏水性，(c)侧链大小。预期通常对功能有更显著作用的取代是(a)甘氨酸和/或脯氨酸被另一种氨基酸取代或缺失或插入；(b)亲水性残基如丝氨酰或苏氨酰取代(或被)疏水性残基，如亮氨酰、异亮氨酰、苯丙氨酰、缬氨酰或丙氨酰；(c)半胱氨酸残基取代(或被)任何其它残基；(d)具有正电性侧链的残基如赖氨酰、精氨酰或组氨酰取代(或被)具有负电荷的残基如谷氨酰或天冬氨酰；或(e)具有大侧链的残基如苯丙氨酸取代(或被)没有这种侧链的残基如甘氨酸。其它变体包括设计为产生新的糖基化和/或磷酸化位点的，或设计为缺失现有糖基化和/或磷酸化位点的残基。变体包括糖基化位点、蛋白酶裂解位点和/或半胱氨酸残基上的至少一个氨基酸取代。变体还包括在接头肽上NTP或NTP肽氨基酸序列之前或之后具有其它氨基酸残基的NTP蛋白或NTP肽。例如，可将半胱氨酸残基加在NTP肽的氨基和羧基末端以形成二硫键使NTP肽环化。术语“变体”还包括具有NTP肽的氨基酸序列的多肽，它在NTP肽的3′或5′末端侧翼上有至少1个和多达25个或更多额外的氨基酸。

术语“衍生物”指化学修饰的蛋白质或多肽，它们通过天然过程如加工和其它翻译后修饰而被化学修饰，也可通过化学修饰技术如加入一个或多个聚乙二醇分子、糖、磷酸盐和/或其它这种分子，其中这类分子不是天然结合于野生型NTP蛋白或肽的分子。衍生物包括盐。这种化学修饰描述可见基础教材和更详细的专论以及大量研究文献中，它们是本领域技术人员所熟知的。将会理解的是，相同类型的修饰可能以相同或不同程度存在于给定蛋白质或多肽的一些位点上。同样，给定蛋白质或多肽可包含许多种类的修饰。修饰可发生在蛋白质或多肽的任何地方，包括肽主链、氨基酸侧链和氨基或羧基末端。修饰包括例如乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价结合、血红素部分的共价结合、核苷酸或核苷酸衍生物的共价结合、脂质或脂质衍生物的共价结合、磷脂酰肌醇的共价结合、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、形成共价交联、形成半胱氨酸、形成焦谷氨酸、甲酰化、γ-羧基化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白酶解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、糖基化、脂质结合、硫酸化、谷氨酸残基的γ-羧基化、羟基化和ADP-核糖基化、硒基化(selenoylation)、转运RNA介导的氨基酸加入蛋白质，如精氨酰化和泛素化。参见例如《蛋白质-结构和分子性质》(Proteins-Structure And Molecular Properties)，第二版，T.E.Creighton，W.H.Freeman和Company，纽约(1993)和Wold，F.，“翻译后蛋白质修饰：观点和前景”(Posttranslational Protein Modifcation：Perspective andProspects)，《蛋白质的翻译后共价修饰》(Posttranslational Convalent Modification ofProteins)，1-12页，B.C.Johnson编，Academic Press，纽约(1983)；Seifter等，Meth.Enzymol.182：626-646(1990)和Rattan等，“蛋白质合成：翻译后修饰和衰老”(Posttranslational Modifcation and Aging)，Ann.N.Y.Acad.Sci.663：48-62(1992)。术语“衍生物”包括化学修饰导致蛋白质或多肽变成分支状或者有或没有分支的环状。环状、分支状和分支环状蛋白质或多肽可能由翻译后的天然加工产生并也可完全由合成方法产生。

术语“同源物”指蛋白质，其NTP蛋白、或NTP肽的氨基酸序列，根据常用于比较两种多肽的氨基酸位置相似性的标准方法测定至少有60％相同。两种蛋白质之间的相似性或同一性程度可用已知方法计算，包括但不限于以下所描述的那些方法：《计算分子生物学》(Computational Molecular Biology)，Lesk，A.M.编，牛津大学出版社，纽约，1988；《生物计算：信息学和基因组计划》(Biocomputing：Informatics and Genome Projiects)，Smith，D.W.编，Academic Press，纽约，1993；《序列数据的计算机分析》(Computer Analysis of Sequence Data)，第I部分，Griffin，A.M.和Griffin，H.G.编，Humana Press，新泽西州，1994)；《分子生物学序列分析》(Sequence analysis in Molecular Biology)，von Heinje，G.，AcademicPress，纽约，1987)；《序列分析引物》(Sequence analysis Primery)，Gribskov，M.和Devereux，J.编，M Stockton Press，纽约，1991；Carillo H.和Lipman，D.，SIAM，J.Applied Math.，48：1073(1988)。设计了确定同一性的优选方法来给出测试序列之间的最大匹配。在公众可得到的计算机程序中纂确定同一性和相似性的方法。

用于确定两种序列之间同一性和相似性的优选计算机程序方法，包括但不限于GCG程序包(Devereux，J.等，Nucleic Acids Research，12(1)：387(1984))，BLASTP，BLASTN和FASTA，Atschul，S.F.等，J.Molec.Biol.，215：403-410(1990)。BLASTX程序公众可从NCBI和其它来源获得(BLAST手册，Altschul，S.等，NCBI NLM NIHBethesda，Md.20894；Altschul，S.等，J.Mol.Biol.，215：403-410(1990)。例如采用计算机算法如GAP(遗传学计算机组，University of Wisconsin，Madison，Wis.)，排列对比两种待测定的蛋白质或多肽的序列同一性百分比用于最佳匹配它们各自的氨基酸(“匹配范围”通过算法确定)。

间隙开放罚分(gap opening penalty)(计算为3x倍平均对角线；“平均对角线”是所用比较矩阵的对角线平均值；“对角线”是通过具体比较矩阵赋予各优选氨基酸的评分或数值)和间隙延伸罚分(gap extension penalty)(通常是间隙开放罚分的1/10倍)以及比较矩阵例如PAM250或BLOSUM 62可与此算法结合使用。算法也可使用标准的比较矩阵(PAM250比较矩阵参见Dayhoff等，《蛋白质序列和结构图谱集》(Atlas of Protein Sequence and Structure)，第5卷，增补本3[1978]；BLOSUM62比较矩阵参见Henikoff等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：10915-10919[1992])。然后用该算法计算同一性百分比。同源物与NTP或NTP肽相比，通常具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。

术语“肽模拟物”或“模拟物”指能模拟肽或蛋白质的生物活性但在化学性质上不再是肽的生物活性化合物，即它们不再含任何肽键(即氨基酸间的酰胺键)。这里术语肽模拟物用于更广泛含义，包括性质上不再完全是肽的分子如假肽、半肽和拟肽(peptoid)。此广泛含义上的肽模拟物的例子(其中肽的一部分被缺乏肽键的结构取代)在下面描述。无论完全是或部分是非肽，本发明的肽模拟物提供了反应性化学组成成分的空间排列，肽模拟物所依据的这些组成成分非常类似于NTP蛋白或肽中活性基团的三维排列。由于这种相似的活性位点的几何结构，肽模拟物对生物系统的作用类似于NTP肽的生物活性。

本发明的肽模拟物优选在三维形状和生物活性上基本上类似于本文所述的NTP肽。结构上修饰本领域已知的肽以产生肽模拟物的方法的例子包括倒置主链手性中心产生D-氨基酸残基结构，具体是在N-末端，使对蛋白酶降解的稳定性提高而没有不利地影响活性。在论文“含氚D-丙氨酸¹-肽T结合”，Smith C.S.等，Drug Development Res.，15，371-379页(1988)中描述了一个例子。第二种方法是改变稳定性所需的环状结构，如N到C链间的二酰亚胺和内酰胺(Ede等，Smith和Rivier编，《肽：化学和生物学》(Peptides：Chemistry and Biology)，Escom，Leiden，1991，268-270页)。例子见构型限制的胸腺五肽样化合物，如美国专利号4,457,489(1985)，Goldstein，G.等所公开的那样，其内容全部纳入本文供参考。第三种方法是用对蛋白水解有抗性的假肽键替换NTP肽中的肽键。

所述的一些假肽键一般不影响肽的结构和生物活性。此方法的一个例子是取代逆转化假肽键(“胸腺五肽的生物活性逆转化同源物”)(Biologically activeretroinverso analogue of thymopentin)，Sisto A等，Rivier，J.E.和Marshall，G.R.编，“肽、化学、结构和生物学”(Peptides，Chemistry，Structure and Biology)，Escom，Leiden，1990，722-773页)和Dalpozzo等(1993)，Int.J.Peptide Protein Res.，41：561-566，纳入本文供参考)。根据此修饰，肽的氨基酸序列可能与上述NTP肽的序列相同，除了一个或多个肽键被逆转化假肽键所取代。优选大部分N-末端肽键被取代，由于这种取代是通过外肽酶作用于N-末端而赋予对蛋白水解的抗性。也可用其它类似结构的化学基团替代氨基酸的化学基团进行修饰。另一种已知可提高对酶裂解的稳定性而生物活性没有或很少损失的合适假肽键是还原型电子等排物(isostere)假肽键(Couder等(1993)，Int.J.Peptide Protein Res.，41：181-184，全部纳入本文供参考)。

因此，这些肽的氨基酸序列可能与NTP肽的序列相同，除了一个或多个肽键被电子等排物假肽键替代外。本文所用术语“氨基酸序列”优选指至少2种氨基酸的序列，优选至少4种，更优选至少5种。优选大部分N-末端肽键被取代，由于这种取代是通过外肽酶作用于N-末端而赋予对蛋白水解的抗性。合成具有一个或多个还原型电子等排的假肽键的肽是本领域已知的(Couder等，上面所引用)。另一个例子包括导入酮亚甲基键或甲硫化物键来替代肽键。

NTP肽的拟肽衍生物代表了另一类肽模拟物，拟肽保留了生物活性的重要结构决定簇，但去除肽键，从而赋予对蛋白水解的抗性(Simon等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：9367-9371，全部纳入本文供参考)。拟肽是N-取代的甘氨酸的寡聚物。已报道了一些N-烷基基团，各对应于天然氨基酸的侧链(Simon等，1992，上面所引用)。NTP肽的一些或所有氨基酸用对应于替代氨基酸的N-取代甘氨酸所替代。

术语“肽模拟物”或“模拟物”还包括反-D肽和下面定义的对映异构体。术语“反-D肽”指与NTP肽的L-氨基酸序列相比，由反向顺序排列的D-氨基酸组成的生物活性蛋白质或肽。因此，L-氨基酸NTP肽的羧基末端残基成为D-氨基酸肽的氨基末端。例如，NTP肽、SSWDY变成T_dD_dW_dS_dS_d，其中D_d、S_d、W_d和Y_d是分别对应于L-氨基酸D、S、W和Y的D-氨基酸。

当用在这里时，“对映异构体”指一种生物活性蛋白质或肽，其中NTP肽的氨基酸序列中一个或多个L-氨基酸残基被相应的D-氨基酸残基替代。

这里所描述的氨基酸和氨基酸残基可参考下表提供的被接受的一个字母或三个字母的编码。

表1

氨基酸一个字母符号三个字母符号

丙氨酸 A Ala

精氨酸 R Arg

天冬酰胺 N Asn

天冬氨酸 D Asp

半胱氨酸 C Cys

谷氨酰胺 Q Gln

谷氨酸 E Glu

甘氨酸 G Gly

组氨酸 H His

异亮氨酸 I Ile

亮氨酸 L Leu

赖氨酸 K Lys

甲硫氨酸 M Met

苯丙氨酸 F Phe

脯氨酸 P Pro

丝氨酸 S Ser

苏氨酸 T Thr

色氨酸 W Trp

酪氨酸 Y Tyr

缬氨酸 V Val

本发明涉及含有如本发明以上定义的NTP肽的组合物。优选的NTP肽与衍生自AD7c-NTP的NTP肽类似或同源。然而，使用基于其它种类NTP蛋白的部分或片段的NTP肽也包括在本发明范围之内。例如，在许多人类和非人蛋白质(“相关蛋白质”)中也发现了AD7c-NTP肽序列和类似的变体和同源物。特别是，AD7c-NTP基因含有Alu-型序列，它与那些还在人类和其它灵长类基因组的其它基因中发现的序列非常类似。

因此，可以理解，一些(如果不是全部)相关蛋白质也证明是造成细胞死亡的有效试剂，因为它们含有肽序列同源物或与AD7c-NTP肽非常类似的肽(“相关肽”)。同样，此领域的一般技术人员可以基于任何相关蛋白质的氨基酸序列来合成特定的相关肽，这些蛋白质是造成细胞死亡的有效试剂，并测试它们作为造成细胞死亡试剂的效力。

衍生自相关蛋白质(它们被发现是造成细胞死亡的有效试剂)的其它肽序列也是造成细胞死亡的有效试剂。此领域的一般技术人员无需过度实验就可合成跨越所述蛋白质的整个氨基酸序列的有效相关蛋白质的片段，以便鉴定其它有效的肽序列。

本发明优选的NTP肽包括已知含有与NTP肽序列相同、非常类似或同源的氨基酸序列的蛋白质和肽。

本发明的NTP肽及其片段、变体、衍生物、同源物和模拟物可用此领域的一般技术人员已知的方法制备，如重组DNA技术、蛋白质合成和分离天然产生的NTP肽和其片段、变体、衍生物和同源物。

NTP肽可用熟知的重组DNA技术方法制备，如列于Sambrook等，(《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.[1989])和/或Ausubel等，编，《新编分子生物学实验指南》(Current Protocols in Molecular Biology)，Green Publishers Inc.及Wiley和Sons，N.Y.[1994]的方法。

可获得编码NTP肽的基因或cDNA，例如通过筛选基因组或cDNA文库或通过PCR扩增。用于筛选文库的探针或引物可在其它已知基因或基因片段序列信息的基础上产生，基因或基因片段来自相同或相关基因家族，如在其它NTP肽或NTP蛋白中发现的保守基序。此外，从一个种类中鉴定了编码NTP蛋白或NTP肽的基因，所有或部分基因可用作探针以从其它种类中鉴定同源基因。探针或引物可用于从认为表达NTP肽或NTP蛋白基因的多种组织来源中筛选cDNA文库。通常，可使用高严紧性条件来最小化筛选获得的假阳性数量。

另一种制备编码NTP蛋白或NTP肽的基因的方法采用化学合成，使用技术人员熟知的方法，如Engels等(Angew.Chem.Intl.Ed.，28：716-734[1989])描述的方法。这些方法尤其包括磷酸三酯、亚磷酰胺、H-膦酸酯方法用于核酸合成。这种化学合成的优选方法是使用标准亚磷酰胺化学的聚合物-支持的合成。一般，编码NTP蛋白或NTP肽的DNA长度为几百个核苷酸。可用这些方法将大于约100个核苷酸的核酸合成为几个片段。然后片段可连接在一起形成全长NTP蛋白或NTP肽。通常，编码蛋白质的氨基末端的DNA片段具有编码甲硫氨酸的ATG。此甲硫氨酸可以或可不存在于NTP蛋白或NTP肽的成熟形式，这取决于宿主细胞中产生的蛋白质是否设计成从该细胞中分泌。

编码NTP蛋白或NTP肽的基因、cDNA或其片段可用标准连接技术插入合适表达或扩增载体中。通常选择在所用具体宿主细胞中有功能的载体(即载体与宿主细胞机制相容，从而可产生基因扩增和/或基因表达)。编码NTP蛋白或NTP肽的基因、cDNA或其片段可在原核、酵母、昆虫(杆状病毒系统)和/或真核宿主细胞中扩增/表达。宿主细胞的选择部分取决于NTP蛋白或肽是否糖基化和/或磷酸化。如果这样，优选酵母、昆虫或哺乳动物宿主细胞。

通常，任何宿主细胞中所用的载体包含5’侧翼序列(也称为“启动子”)和其它调节元件以及增强子、复制元件的起点、转录终止元件、含供体和受体剪接位点的完整内含子序列、信号肽序列、核糖体结合位点元件、多腺苷酸化序列、多接头区域用于插入编码待表达多肽的核酸、可选择的标记元件。各个这些元件在下面讨论。任选的是，载体可包含标志序列，即位于NTP蛋白或NTP肽编码序列的5’或3’末端的寡核苷酸分子；寡核苷酸分子编码PolyHis(如Hexa His)或其它标志如FLAG、HA(血凝素流感病毒)或存在可商业购买抗体的myc。此标志常在表达多肽时融合到多肽，可作为从宿主细胞亲和纯化NTP蛋白或NTP肽的方法。例如可通过柱层析完成亲和纯化，柱层析使用抗体抗作为亲和基质的标志。任选地，随后通过多种方法如一些肽酶从纯化的NTP蛋白或NTP肽中去除标志。

人免疫球蛋白铰链和Fc区可由本领域技术人员在NTP蛋白或NTP肽的N-或C-末端融合。随后Fc融合蛋白可用A蛋白亲和柱纯化。已知Fc体内表现出长的药物动力学半衰期且发现融合Fc的蛋白质体内表现出的半衰期显著大于未融合蛋白质。同样，融合Fc区使对一些分子的生物活性有用的分子二聚化/多聚化。

5’侧翼序列可以是同源(即来自与宿主细胞相同的种类和/或菌株)、异源(即来自与宿主细胞不同的种类或菌株)、杂合(即来自超过一个来源的5’侧翼序列组合)、合成，或可以是天然NTP蛋白或NTP肽基因5’侧翼序列。同样，5’侧翼序列的来源可以是单细胞原核或真核生物、任何脊椎动物或无脊椎动物、或任何植物，只要5’侧翼序列有功能且可被宿主细胞机制活化。

本发明载体中有用的5’侧翼序列可通过任何本领域中熟知的一些方法来获得。通常，本文除了NTP蛋白或NTP肽基因侧翼序列外的有用5’侧翼序列在前面通过作图和/或限制性内切酶消化来鉴定，因此可用合适的限制性内切酶从适当组织来源中分离。在一些情况中，5′侧翼序列的全核苷酸序列可以是已知的。这里可用上述核酸合成或克隆的方法合成5’侧翼序列。

当所有或仅部分5’侧翼序列已知时，它可用PCR和/或筛选基因组文库来获得，筛选用合适的寡核苷酸和/或来自相同或另外种类的5’侧翼序列片段。

当不知道5’侧翼序列时，含5’侧翼序列的DNA片段可从DNA的较大片断中分离，DNA可包含例如编码序列或甚至另外的基因。分离可通过限制性内切酶消化完成，用一种或多种仔细选择的酶分离适当DNA片段。消化后，所需片段可通过琼脂糖凝胶纯化、Qiagen

柱或其它技术人员已知的方法来分离。选择适当酶以达到此目的对此领域的一般技术人员是显然的。

复制元件的起点通常是商业购买的原核表达载体的一部分，协助宿主细胞中的载体扩增。在一些情况中，载体扩增到一定拷贝数对最佳表达NTP蛋白或NTP肽是重要的。如果所选载体不包含复制位点的起点，可在已知序列基础上化学合成起点并连接入载体。转录终止元件一般位于NTP蛋白或NTP/肽编码序列的3’末端且用于终止NTP蛋白或NTP肽的转录。通常，原核细胞中的转录终止元件是后面有多T序列的G-C丰富片段。元件可从文库克隆或商业购买作为载体部分，它也可用上述核酸合成方法容易地合成。

可选择的标记基因元件编码宿主细胞在选择性培养基中存活和生长所必需的蛋白质。典型的选择标记基因元件编码蛋白质(a)赋予原核宿主细胞对抗生素或其它毒素的抗性，如氨卡青霉素、四环素或卡那霉素，(b)细胞的互补营养缺陷型缺乏；或(c)提供复合培养基没有的关键营养物。优选的可选择标记是卡那霉素抗性基因、氨卡青霉素抗性基因和四环素抗性基因。

一般称为SD序列(原核生物)或Kozak序列(真核核生物)的核糖体结合元件对mRNA翻译起始通常是必需的。元件通常位于启动子3’端和待合成NTP蛋白或NTP肽编码序列的5’端。SD序列不同但一般是多嘌呤(即有高A-G含量)。鉴定了许多SD序列，可用上述方法合成各序列并用于原核载体。

在需要NTP蛋白或NTP肽从宿主细胞分泌的情况中，可使用信号序列指导NTP蛋白或肽到宿主细胞外，NTP蛋白或肽在细胞外合成，且可缺失蛋白质的羧基末端部分以防止膜锚定。通常，信号序列位于NTP蛋白/NTP肽基因或cDNA的编码区域，或直接在NTP蛋白/NTP肽基因编码区的5’末端。鉴定了许多信号序列，任何在所选宿主细胞中有功能的序列可与NTP蛋白/NTP肽基因或cDNA结合使用。因此信号序列可与NTP蛋白/NTP肽基因或cDNA同源或异源，且可与NTP蛋白/NTP肽基因或cDNA同源或异源。另外，信号序列可用上述方法化学合成。在大部分情况中，通过信号肽的存在从宿主细胞分泌多肽会导致氨基末端甲硫氨酸从多肽中去除。

在许多情况中，NTP蛋白/NTP肽基因或cDNA的转录可通过载体中存在一个或多个内含子来增加；当NTP蛋白或NTP肽在真核宿主细胞中产生时尤其如此，具体是哺乳动物宿主细胞。所用内含子可以是NTP蛋白/NTP肽基因中天然产生的，具体是当所用基因是全长基因组序列或其片段时。当内含子不在基因中天然产生时(对于大部分cDNAs)，内含子可获得自另外来源。由于内含子必须转录有效，内含子相对侧翼序列和NTP蛋白/NTP肽基因的位置一般是重要的。同样，当插入表达载体中的NTP蛋白/NTP肽基因是cDNA分子时，内含子的优选位置是转录起始位点3’端和多A转录终止序列5’端。对于NTP蛋白/NTP肽cDNA优选的是，一个或几个内含子位于cDNA一侧或另一侧(即5’或3’)从而它不中断此编码序列。如果内含子与其插入的宿主细胞相容，来自任何来源的任何内含子可用于实践本发明，来源包括任何病毒、原核和真核(植物或动物)生物。同样包括在本文中的是合成内含子。任选地，在载体中可使用超过一个的内含子。

当上述一个或多个元件不存在于待使用的载体中时，它们可单独获得并连接入载体。用于获得各元件的方法是技术人员熟知的，且可与上述方法相比较(即合成DNA、文库筛选等)。

用于实践本发明的最终载体可从起始载体构建，如商业购买的载体。这种载体可以或可不包含一些包括在完整载体中的元件。如果没有所需元件存在于起始载体中，各元件可单独连接入载体，这是通过用合适的限制性内切酶切割载体使元件的连接末端和载体末端对于连接是相容的。在一些情况中，必须使连接一起的末端成为“平端”以获得满意的连接。通过首先用Klenow DNA聚合酶或T4DNA聚合酶在所有四种核苷酸存在时填补“粘端”来获得平端。此过程在本领域熟知且被描述，例如Sambrook等，同上。另外，待插入载体的两个或多个元件可首先连接一起(如果它们的位置彼此相邻)且随后连接入载体。

另一种构建载体的方法在一种反应混合物中同时进行多种元件的所有连接。这里，由于不适当的连接或插入元件产生许多无义和无功能载体。然而可通过限制性内切酶消化来鉴定和选择功能性载体。

实践本发明的优选载体与细菌、昆虫和哺乳动物宿主细胞相容。这种载体包括pCRII、pCR3和pcDNA3.1(Invitrogen Company，San Diego，Calif.)、pBSII(Stratagene Company，La Jolla，Calif.)、pET15b(Novagen，Madison，Wis.)、PGEX(Pharmacia Biotech，Piscataway，N.J.)、pEGFP-N2(Clontech，Palo Alto，Calif.)、pETL(BlueBacII；Invitrogen)和pFastBacDual(Gibco/BRL，Grand Island，N.Y.)。

在载体构建和编码全长或截短NTP蛋白或NTP肽的核酸分子插入载体的适当位点后，完整载体可插入合适的宿主细胞用于扩增和/或多肽表达。宿主细胞可以是原核宿主细胞(如大肠杆菌)或真核宿主细胞(如酵母细胞、昆虫细胞或脊椎动物细胞)。当宿主细胞在合适条件下培养时，可合成NTP蛋白或NTP肽，NTP蛋白或NTP肽随之从培养基收集(如果宿主细胞分泌它到培养基中)或直接来自生成它的宿主细胞(如果它不被分泌)。

收集后，NTP蛋白或NTP肽可用分子筛层析、亲和层析等方法纯化。选择产生NTP蛋白或NTP肽的宿主细胞部分取决于NTP蛋白或NTP肽是否糖基化或磷酸化(其中真核宿主细胞优选)、宿主细胞能折叠蛋白质成其天然三级结构(如二硫桥的适当方向等)的方式从而通过具生物活性的NTP蛋白或NTP肽制备生物活性蛋白质。合成后可用下面讨论的合适化学条件折叠NTP蛋白或NTP肽。合适的细胞或细胞系包括哺乳动物细胞，如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人胚胎肾(HEK)293或293T细胞或3T3细胞。选择合适的哺乳动物宿主细胞和转化、培养、扩增、筛选和产物生成及纯化的方法在本领域已知。其它合适的哺乳动物细胞系包括猴COS-1和COS-7细胞系及CV-1细胞系。更多示范性哺乳动物宿主细胞包括灵长类细胞系和啮齿动物细胞系，含转化的细胞系。正常二倍体细胞、获得自初级组织体外培养的细胞株以及初级移植体也是合适的。候选细胞可以是选择基因中的遗传型缺陷或可包含显性开放选择基因。其它合适的哺乳动物细胞系包括但不限于小鼠成神经细胞瘤N2A细胞、海拉细胞、小鼠L-929细胞、来自Swiss、Balb-c或NIH小鼠的3T3系、BHK或HaK仓鼠细胞系。

与适合于本发明的宿主细胞同样有用的是细菌细胞。例如，多种大肠杆菌菌株(如HB101、DH5α、DH10和MC1061)是生物技术领域中熟知的宿主细胞。枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、其它芽孢杆菌属(Bacillusspp.)、链霉菌属(Streptomyces spp.)等的多种菌株可用于此方法。本领域技术人员已知的许多酵母细胞菌株也可作为表达本发明多肽的宿主细胞。

另外，需要时昆虫细胞系统可用于本发明的方法。这种系统已被描述，例如Kitts等(Biotechniques，14：810-817[1993])、Lucklow(Curr.Opin.Biotechno1.，4：564-572[1993])和Lucklow等(J.Virol.，67：4566-4579[1993])。优选的昆虫细胞是Sf-9和Hi5(Invitrogen，Carlsbad，Calif.)。

插入(也称为转化或转染)载体到所选宿主细胞中可用方法如氯化钙、电穿孔、显微注射、脂转染或DEAE-葡聚糖方法来完成。选择的方法部分是待使用宿主细胞类型的功能。这些方法和其它合适方法是技术人员熟知的并被列出，例如Sambrook等，同上。

含载体(即转化的或转染的)的宿主细胞可用技术人员熟知的标准培养基培养。培养基通常包含所有细胞生长和存活必需的营养物。培养大肠杆菌细胞的合适培养基是例如Luria Broth(LB)和/或Terrific Broth(TB)。培养真核细胞的合适培养基是RPMI1640、MEM、DMEM，它们都添加有血清和/或培养特定细胞系所需的生长因子。培养昆虫的合适培养基是Grace培养基，添加有必需的yeastolate、乳白蛋白水解产物和/或胎牛血清。通常，抗生素或其它仅用于选择性生长转化细胞的化合物作为添加物加入培养基。待使用化合物由转化宿主细胞的质粒上存在的可选择标记元件决定。例如，当可选择标记元件是卡那霉素抗性时，加入培养基的化合物是卡那霉素。

宿主细胞中产生的NTP蛋白或NTP肽的量可用本领域已知的标准方法评估。这种方法包括但不限于蛋白质印迹分析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、非变性凝胶电泳、HPLC分离、质谱、免疫沉淀和/或活性试验如DNA结合凝胶移位试验。

如果NTP蛋白或NTP肽设计为从宿主细胞中分泌，大部分NTP蛋白或NTP肽可发现于细胞培养基中。以此方法制备的蛋白质通常不具有氨基末端甲硫氨酸，因为它从细胞中分泌时被去除。然而如果NTP蛋白或NTP肽不从宿主细胞中分泌，它会存在于细胞质和/或核中(真核宿主细胞)或在细胞溶质中(革兰氏阴性菌宿主细胞)，且可具有氨基末端甲硫氨酸。

就位于宿主细胞细胞质和/或核中的NTP蛋白或NTP肽而言，通常首先机械破碎宿主细胞或用去垢剂释放胞内成分到缓冲溶液中。然后NTP蛋白或NTP肽可从此溶液中分离。

从溶液中纯化NTP蛋白或NTP肽可用多种技术完成。如果合成的蛋白质含标志如hexa Histidine NTP蛋白/hexa His)或其它小肽如FLAG(Sigma-Aldritch，St.Louis，MI)或在其羧基或氨基末端的钙调蛋白-结合肽(Stratagene，LaJolla，CA)，它可以一步过程通过使溶液穿过亲和柱来纯化，其中柱基质对标志或直接对蛋白质有高亲和性(即特异识别NTP肽的单克隆抗体)。例如，多组氨酸以高亲和性和对镍、锌及钴的特异性结合；因而使用以镍为基础的亲和树脂(如用于Qiagene的QIAexpress system或Invitrogen的Xpress System)或以钴为基础的亲和树脂(如用于BD Biosciences-CLONTECH的Talon system)的固定金属离子亲和层析可用于纯化NTP蛋白/pols His。(参见例如，Ausubel等，编，《新编分子生物学实验指南》，10.11.8章节，John Wiley&Sons，纽约[1993])。

当制备NTP蛋白或NTP肽而没有附着标志且没有抗体时，可使用其它熟知的纯化过程。这种过程包括但不限于离子交换层析、羟磷灰石层析、疏水作用层析、分子筛层析、HPLC、结合凝胶洗提的天然凝胶电泳以及制备型等电聚焦(Isoprime机器/技术，Hoefer Scientific)。

如果预期NTP蛋白或NTP肽主要发现于胞内，胞内物质(包括革兰氏阴性菌的包含体)可用技术人员已知的任何标准技术从宿主细胞中提取。例如可裂解宿主细胞以释放周质/细胞质的内含物，这是通过弗氏压碎器、匀浆化和/或超声处理，接着离心。如果NTP蛋白或NTP肽形成细胞溶质中的包含体，包含体通常可结合内和/或外细胞膜，因此离心后主要在沉淀物质中发现。然后沉淀物质可在pH极端或用离液剂如去垢剂、胍、胍衍生物、尿素或尿素衍生物处理以释放、断裂和溶解包含体，处理是在还原剂存在时如处于碱性pH的二硫苏糖醇或处于酸性pH的三羧乙基膦。然后处于目前可溶形式的NTP蛋白或NTP肽可用凝胶电泳、免疫沉淀等分析。如果需要分离NTP蛋白或NTP肽，可用标准方法完成分离，如下面和Marston等(Meth.Enz.，182：264-275[1990])列出的方法。

在一些情况中，NTP蛋白或NTP肽分离时可以没有生物活性。再折叠或转变多肽成其三级结构并产生二硫键的多种方法可用于恢复生物活性。这种方法包括使溶解的多肽暴露于通常高于7的pH且存在具体浓度的离液剂。离液剂的选择非常类似于用于包含体溶解的选择，但通常浓度较低且未必是溶解所用的相同离液剂。在大部分情况中，再折叠/氧化溶液也包含还原剂或具体比例的还原剂加其氧化形式，以产生成具体氧化还原电势使二硫化物改组形成蛋白质的半胱氨酸桥。一些常用的氧化还原包括半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽(GSH)/二硫双GSH(dithiobisGSH)、氯化铜、二硫苏糖醇(DTT)/二噻烷DTT、2-巯基乙醇(bME)/二硫-b(ME)。在许多情况中，需要共溶剂提高再折叠和更多用于此目的普通试剂的效率，试剂包括甘油、不同分子量的聚乙二醇和精氨酸。

如果宿主细胞中不形成显著程度的NTP蛋白或NTP肽包含体，细胞匀浆离心后NTP蛋白或NTP肽主要发现于上清液中，NTP蛋白或NTP肽可用如下列的方法从上清液中分离。

在优选部分或完全分离NTP蛋白或NTP肽的情况中，可用技术人员熟知的标准方法完成纯化。这种方法包括但不限于电泳分离，接着电洗脱、多种层析(免疫亲和、分子筛和/或离子交换)、和/或高压液相层析。在一些情况中，优选使用超过一种的这些方法来完全纯化。

除了用重组DNA技术制备和纯化NTP蛋白或NTP肽，NTP蛋白或NTP肽和它们的片段、变体、同源物和衍生物可用化学合成方法制备(如固相肽合成)，使用本领域已知技术如描述于Merrifield等，(J.Am.Chem.Soc.，85：2149[1963])、Houghten等(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85：5132[1985])、Stewart和Young(《固相肽合成》(Solid Phase Peptide Synthesis)，Pierce Chemical Co.，Rockford，III.[1984])。这种多肽可在氨基末端有或没有甲硫氨酸合成。化学合成的NTP蛋白或NTP肽可用参考文献所列方法氧化以形成二硫桥。预期NTP蛋白和NTP肽具有可与重组产生或纯化自天然来源的NTP蛋白或NTP肽相比较的生物活性，因此可与重组或天然NTP蛋白质或NTP肽交换使用。

化学修饰的NTP蛋白和NTP肽组合物包括在本发明范围内，其中NTP蛋白或NTP肽连接于聚合物。所选聚合物通常可溶于水从而它附着的蛋白质不在水环境中沉淀，如生理环境。所选聚合物通常被修饰以具有单个反应基团如用于酰化的活性酯或用于烷化的醛，从而可如本方法所提供的控制聚合程度。聚合物可以是任何分子量，可以是分支或未分支。包括在NTP蛋白/NTP肽聚合物范围中的是聚合物的混合物。

在一些情况中，需要制备天然产生NTP蛋白或NTP肽的核酸和/或氨基酸变体。核酸变体可用定点诱变、PCR扩增或其它合适方法产生，其中引物有所需点突变(诱变技术的描述参见Sambrook等，同上，Ausubel等，同上)。使用Engels等，同上，所述的化学合成方法也可用于制备这种变体。其它技术人员已知的方法也可使用。

优选的核酸变体包含产生宿主细胞中密码子优先的核苷酸取代，宿主细胞待用于产生NTP蛋白或NTP肽。这种“密码子最优化”可通过计算机算法确定，算法结合密码子频率表如“Ecohigh.Cod”作为高度表达细菌基因的密码子优先，由University of Wisconsin包版本9.0，遗传学计算机组，Madison，Wis提供。其它有用的密码子频率表包括“Celegans_high.cod”、“Celegans_low.cod”、“Drosophila_high.cod”、“Human_high.cod”、“Maize_high.cod”和“Yeast_high.cod”。其它优选变体是编码上述与野生型相比保守性氨基酸变化(如其中天然产生氨基酸侧链的电荷或极性不被用不同氨基酸的取代所显著改变)的变体、和/或设计为产生新的糖基化和/或磷酸化位点的变体、或设计为缺失现存糖基化和/或磷酸化位点的变体。

NTP蛋白、NTP肽、片断、同源物、变体、衍生物和它的盐类可用此领域的一般技术人员已知的常规肽合成技术产生。这些技术包括化学偶联方法(比较Wunch，E：“有机化学方法”，第15卷，带1+2，Synthese yon Peptiden，thime Verlag，Stuttgart(1974)和Barrany，G.；Marrifield，R.B.：“肽”(The Peptides)，E.Gross，J.Meienhofer编，第2卷，第1章，1-284页，Academic Press(1980))、酶偶联方法(比较Widmer，F.Johansen，J.T.，Carlsverg Res.Commun.，第44卷，37-46页(1979)和Kullmann，W.：“酶肽合成”(Enzymatic Peptide Synthesis)，CRC Press Inc.BocaRaton，Fla.(1987)和Widmer，F.，Johansen，J.T.，“生物和医学中的合成肽”(SyntheticPeptides in Biology and Medicines)，Alitalo，K.，Partanen，P.，Vatieri，A.编，79-86页，Elsevier，Amsterdam(1985))、或化学和酶方法的组合，如果这对于加工设计和经济有优势。使用本文提供的指南和教授，本领域技术人员能改变NTP肽的肽序列以产生具有与原始或天然NTP蛋白或NTP肽相同或类似生物活性的同源物。

使用给定NTP蛋白或NTP肽的模拟物而不是蛋白质本身具有优点。通常，与蛋白质和肽相比，肽模拟物的生物利用度更高，有较长的作用时间且生产成本低。

因此，上述NTP蛋白和NTP肽可用于开发具类似生物活性从而具类似治疗作用的小化学化合物。可使用组合化学技术和本领域已知的其它技术开发NTP蛋白和NTP肽的肽模拟物(参见例如《第20届欧洲肽专题讨论会记录》(Proceedingsof the 20th European Peptide Symposium)，G.Jung，E.Bayer编，289-336页，和其中的参考文献)。

结构上修饰本领域已知的肽以产生肽模拟物的方法的例子包括倒置主链手性中心产生D-氨基酸残基结构，具体是在N-末端，导致对蛋白酶降解的稳定性提高而没有不利地影响活性。在论文“含氚D-丙氨酸¹-肽T结合”，Smith C.S.等，DrugDevelopment Res.，15，371-379页(1988)中给出了一个例子。

第二种方法是改变稳定性所需的环状结构，如N到C链间的二酰亚胺和内酰胺(Ede等，Smith和Rivier编，《肽：化学和生物学》，Escom，Leiden，1991，268-270页)。例子见构型限制的胸腺五肽样化合物，如美国专利号4,457,489(1985)，Goldstein，G.等所公开的那样，其内容全部纳入本文供参考。

第三种方法是用对蛋白水解有抗性的假肽键替换NTP蛋白或NTP肽中的肽键。所述的一些假肽键一般不影响肽的结构和生物活性。此方法的一个例子是取代逆转化假肽键(“胸腺五肽的生物活性逆转化同源物”，Sisto A等，Rivier，J.E.和Marshall，G.R.编，“肽、化学、结构和生物学”，Escom，Leiden，1990，722-773页)和Dalpozzo等(1993)，Int.J.Peptide Protein Res.，41：561-566，纳入本文供参考)。根据此修饰，肽的氨基酸序列可能与上述NTP蛋白和NTP肽的序列相同，除了一个或多个肽键被逆转化假肽键所取代。优选大部分N-末端肽键被取代，由于这种取代是通过外肽酶作用于N-末端而赋予对蛋白水解的抗性。

合成具一个或多个还原型逆转化假肽键的肽在本领域已知(Sisto(1990)和Dalpozzo等，(1993)，上面所引用)。因此肽键可用非肽键替代使肽模拟物获得与原始肽相似的结构，从而生物活性相似。也可用其它类似结构的化学基团替代氨基酸的化学基团作进一步修饰。另一种已知可提高对酶裂解的稳定性而生物活性没有或很少损失的合适假肽键是还原型电子等排物假肽键(Couder等(1993)，Int.J.Peptide Protein Res.，41：181-184，全部纳入本文供参考)。因此，这些肽的氨基酸序列可能与NTP蛋白或NTP肽序列相同，除了一个或多个肽键被电子等排物假肽键替代外。优选大部分N-末端肽键被取代，由于这种取代是通过外肽酶作用于N-末端而赋予对蛋白水解的抗性。合成具有一个或多个还原型电子等排假肽键的肽是本领域已知的(Couder等，上面所引用)。另一个例子包括导入酮亚甲基键或甲硫化物键来替代肽键。

NTP蛋白或NTP肽的拟肽衍生物代表了另一类肽模拟物，拟肽保留了生物活性的重要结构决定簇，但去除肽键，从而赋予对蛋白水解的抗性(Simon等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：9367-9371，全部纳入本文供参考)。拟肽是N-取代的甘氨酸的寡聚物。已报道了一些N-烷基基团，各对应于天然氨基酸的侧链(Simon等，1992，上面所引用)。NTP蛋白或NTP肽的一些或所有氨基酸用对应于替代氨基酸的N-取代甘氨酸所替代。

可通过NMR谱、结晶学和/或计算机-辅助的制作分子模型确定原始NTP蛋白或NTP肽的三级结构来协助开发肽模拟物。这些技术帮助开发具有比原始肽更高效力和/或更高生物利用率和/或更高稳定性的新组合物(Dean(1994)，BioEssays，16：683-687；Cohen和Shatzmiller(1993)，J.Mol.Graph.，11：166-173；Wiley和Rich(1993)，Med.Res.Rev.，13：327-384；Moore(1994)，TrendsPharmacol.Sci.，15：124-129；Hruby(1993)，Biopolymers.，33：1073-1082；Bugg等(1993)Sci.Am.，269：92-98，全部纳入本文供参考)。

一旦一种潜在的肽模拟物化合物被鉴定，它可以用下面例子中概括的方法合成和分析以评估其活性。用上述方法获得的肽模拟化合物在本发明范围内，化合物具有NTP蛋白或NTP肽的生物活性和类似的三维结构。对于本领域技术人员显而易见的是，肽模拟物可从任何携带上述一种或多种修饰的NTP蛋白或NTP肽中产生。更显然的是，本发明的肽模拟物除了作为治疗化合物的效用，可进一步用于开发更有效的非肽化合物。

今天许多机构都能够合成这里描述的相关蛋白质、相关肽和NTP肽。例如，有了一种NTP肽的序列，这些机构就能合成肽并为合成的肽提供相应的文件并证明肽的同一性。

本发明还包括使用NTP肽和它们相应的核酸分子用于分析，以定性或定量测试哺乳动物组织或体液样品中NTP肽、NTP肽DNA或相应RNA的存在。NTP肽和它们相应的核酸分子可用于这些试验的准备，无论NTP肽、或者编码的NTP肽是否显示生物活性。NTP肽核酸序列可作为有用的杂交探针源以定性或定量测试哺乳动物组织或体液样品中NTP肽DNA或相应RNA的存在。

本身不具生物活性的NTP肽可用于制备识别和/或结合NTP肽的抗体。这种抗体可用标准方法制备。因此，与NTP肽反应的抗体以及短链抗体片段和其它这种抗体的反应片段也在本发明范围内。抗体可以是多克隆、单克隆、重组、嵌合、单链和/或双特异性。通常，抗体或其片段是人来源或“人源化”，即制备以防止或将施用给病人时对抗体的免疫反应减少到最低程度。优选的抗体是人抗体，多克隆或单克隆。抗体片段可以是与本发明NTP肽反应的任何片断，如F_ab、F_ab′等。本发明也提供了杂交瘤，它是通过呈递任何NTP肽产生的作为所选哺乳动物的抗原，接着用已知技术融合哺乳动物的细胞(如脾细胞)和一些癌细胞以产生无限增殖化细胞系。产生这种细胞系和抗所有或部分NTP肽的抗体的方法也在本发明范围内。

抗体可进一步用于体内和体外诊断或研究目的，如以标记形式来检测体液或细胞样品中NTP肽的存在。

本发明也包括使用一种或多种NTP肽作为分析中的校准标准，以定性或定量测试哺乳动物组织或体液样品中NTP肽、NTP肽DNA或相应RNA的存在。

本发明涉及治疗需要除去细胞的疾病的新方法，如良性或恶性肿瘤、腺(如前列腺)增生、不需要的面部毛发、疣和不需要的脂肪组织。这种方法包括施用治疗有效量的NTP肽给需要的哺乳动物。

疾病可以是例如肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、大脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、副甲状腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴结和淋巴系统(如淋巴组织)及其它器官的肿瘤。

如本文所用，术语“恶性肿瘤”包括人类癌、肉瘤和黑素瘤的所有形式，它们以低度分化、适度分化、高度分化的形式出现。

本发明满足本领域治疗的需要，可以除去良性肿瘤而风险较小且不良的手术副作用较少。具体需要在手术危险区如体内深位(例如脑、心脏、肺和其它)除去良性肿瘤的方法。

治疗必须除去细胞的疾病的方法可与治疗这些疾病的常规方法结合使用，如手术切除、化疗和放射治疗。NTP肽可在这些常规治疗之前、期间或之后施用。

待治疗的疾病也可以是组织增生、肥大或过度生长，组织选自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、大脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、副甲状腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴结和淋巴系统。

另一种可用本发明方法治疗的疾病包括但不限于病毒、细菌或寄生虫改变的组织，组织选自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、大脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、副甲状腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴结和淋巴系统。

待治疗的疾病也可以是组织畸形或异常，组织选自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、大脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、副甲状腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴结和淋巴系统。

具体是，待治疗的疾病可以是扁桃体肥大、前列腺增生银屑病、湿疹、皮肤病或痔。待治疗的疾病可以是血管病如动脉粥样硬化或动脉硬化，或者是血管病如静脉曲张。待治疗的疾病也可以是组织的整容修饰，如皮肤、眼、耳、鼻、喉、口、肌肉、结缔组织、毛发或乳房组织。

NTP肽的治疗组合物在本发明范围内。这种组合物可包括治疗有效量的NTP肽与药学上可接受载体混合。载体物质可以是用于注射的水，优选添加溶液中常用的其它物质以施用给哺乳动物。通常，用于治疗的NTP肽以组合物形式使用，组合物包括纯化的NTP肽结合一个或多个生理上可接受载体、赋形剂或稀释剂。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是适当载体的范例。优选地，产物用合适赋形剂(如蔗糖)制成冻干物。如果需要可包括其它标准载体、稀释剂和赋形剂。组合物包括此领域的一般技术人员已知的有合适pH值范围的缓冲液，包含约pH7.0-8.5的Tris缓冲液、或约pH4.0-5.5的乙酸缓冲液，缓冲液可进一步包括山梨醇或其合适的替代物。

用于靶向不需要的细胞因子的NTP肽共轭或连接或结合于抗体、抗体片段、抗体样分子或对特异性肿瘤标记有高亲和性的分子如细胞受体、信号肽或过度表达的酶，NTP肽的使用也在发明范围内。抗体、抗体片段、抗体样分子或对特异性肿瘤标记有高亲和性的分子用于靶向NTP肽共轭物到特定细胞或组织靶。例如，有特殊表面抗原或表达抗原的肿瘤可由抗体、抗体片段、抗体样结合分子靶向且肿瘤细胞可被NTP肽杀死。这种使用抗体靶的方法的优点是降低剂量、增加结合和被靶细胞吸收的可能性、提高靶向和治疗转移性肿瘤和显微大小的肿瘤的效率。

本发明也包括使用共轭或连接或结合于蛋白质或其它分子的NTP肽以形成组合物，通过肿瘤-特异性或位点-特异性酶或蛋白酶或者通过靶向肿瘤或其它不需要的细胞的抗体共轭物在肿瘤或其它不需要的细胞位置或者附近裂解时，在肿瘤或其它不需要的细胞的位置或附近释放NTP肽。

本发明也包括使用共轭或连接或结合于蛋白质或其它分子的NTP肽以形成组合物，在待治疗组织暴露于光(如激光疗法或其它光动力学或光活化疗法)、其它形式电磁辐射时，组合物释放NTP肽或NTP肽的一些生物活性片段，电磁辐射的其它形式如红外线辐射、紫外线辐射、x射线或γ射线辐射、局部加热、α或β辐射、超声波发射或其它局部能量源。

NTP肽可单独、一起或结合其它药物组合物使用，如对于治疗情况合适的细胞因子、生长因子、抗生素、细胞凋亡诱导剂、抗炎症和/或化疗剂。

本发明也包括NTP肽的组合物，组合物使用树状聚体、富勒烯和其它合成分子、聚合物及大分子，其中NTP肽和/或其相应DNA分子本身或结合其它种类分子如肿瘤特异性标记来共轭、附着或纳入分子、聚合物或大分子中。例如，美国专利号5,714,166《生物活性和/或靶树状聚体共轭物》(Bioactive and/or TargetedDendrimer Conjugates)提供了制备和使用靶树状聚合物共轭物的方法，共轭物包括至少一个树状聚体和靶指示物以及至少一种与之结合的生物活性剂。

本发明也包括NTP肽和/或基因及药物传递载体的治疗组合物，载体如脂质乳剂、胶束聚合物、聚合物微球、电活化聚合物、水凝胶和脂质体。

使用转移到不需要细胞的NTP肽或相关基因或基因同等物也在发明范围内。肿瘤内过度表达NTP肽可用于诱导肿瘤中的细胞死亡并因而减少肿瘤细胞群。基因或基因同等物转移NTP肽以治疗不需要的细胞因子，其优点是所需剂量更少、被传递到靶细胞因子的细胞后代上从而使治疗频率更低、以及总体治疗更少。本发明也包括将编码含NTP肽的融合蛋白的基因转移到不需要的细胞或其邻近细胞，表达基因及产生和/或分泌融合蛋白后，融合蛋白由天然酶或蛋白酶或者前体药物分解以释放NTP肽到不需要的细胞或附近。

使用克隆的重组NTP肽-抗体共轭物；克隆的重组NTP肽-抗体片段共轭物；克隆的重组NTP肽-抗体样蛋白共轭物也包括在发明范围内。克隆的NTP肽结合靶共轭物(如抗体、抗体片段、抗体样分子或者对癌特异性受体或其它肿瘤标记有高亲和性的分子)，除了制造和标准化生产克隆的结合分子的优点，此NTP肽的优点是这种分子结合上述的靶向优点。

口服施用的固体剂量形式包括但不限于胶囊、片剂、药丸、粉末和颗粒。在这种固体剂量形式中，优选活性化合物与至少一种下列物质混合：(a)一种或多种惰性赋形剂(或载体)，如柠檬酸钠或磷酸二钙；(b)填充剂或膨胀剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(c)粘合剂，如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；(d)保湿剂，如甘油；(e)分裂剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、一些复合硅酸盐和碳酸钠；(f)溶液缓聚剂，如石蜡；(g)吸收加速剂，如季铵化合物；(h)润湿剂，如乙酰醇和甘油单硬脂酸盐；(i)吸收剂，如瓷土和斑脱土；(j)滑润剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂酰硫酸钠和它们的混合物。就胶囊、片剂、药丸而言，剂量形式也可包括缓冲剂。

口服施用的液体剂量形式包括药学上可接受乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物，液体剂量形式可包括本领域常用的惰性稀释剂如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂。乳化剂范例是乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺，油如棉子油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油，甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯或这些物质的混合物等。

除了这种惰性稀释剂，组合物也可包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和香味剂。

发明组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变以获得治疗有效量的NTP肽，NTP肽对获得具体组合物和施用方法的理想治疗反应有效。因此选择剂量水平取决于所需治疗效果、施用途径、所需治疗的持续时间以及其它因素。

哺乳动物包括人的有效量可在体表面积基础上施用。用于不同大小、种类的动物和人的剂量间的相互关系(以体表的mg/M²为基础)描述于E.J.Freireich等，Cancer Chemother.Rep.，50(4)：219(1966)。体表面积可从个体高度和重量大约确定(参见例如《科学表》(Scientific Tables)，Geigy Pharmaceuticals，Ardsley，N.Y.537-538页(1970))。

施用给宿主的NTP肽的每天总剂量可以是单个或分开的剂量。剂量单位组合物包含几分之一的量可用于构成每天剂量。然而要理解的是，任何具体病人的特定剂量水平取决于多种因素，包括体重、整体健康、性别、饮食、施用时间和途径、施用药物的效力、吸收和排泄的比例、结合其它药物以及治疗的具体疾病的严重性。

根据发明施用NTP肽组合物的方法包括但不限于肌肉内、经口、静脉内、腹膜内、大脑内(实质内)、脑心室内、肿瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、透皮、通过气雾剂、输注、推射、移植装置、缓释系统等施用化合物。

另一种施用发明NTP肽组合物的方法是经皮或透皮途径。这种实施方案的一个例子是使用膜片。具体是，膜片可用NTP肽的精细悬浮液制备，例如二甲亚砜(DMSO)或DMSO与棉子油的混合物并接触携带肿瘤的哺乳动物皮肤，远离皮肤囊(pouch)内肿瘤定位部位。有另外溶剂和固体支持物的其它介质或其混合物也可同样起作用。膜片可包含溶液或悬浮液形式的NTP肽化合物。然后膜片可应用于病人皮肤，例如将它插入病人的皮肤囊，皮肤囊通过用缝针、夹子或其它夹持装置将皮肤折叠和夹持一起来形成。应确保囊与皮肤连续接触而不受哺乳动物干扰。除了使用皮肤囊，可使用任何保证牢固放置与皮肤接触的膜片的装置。例如，粘附绷带可用来夹持膜片在皮肤上。

NTP肽可在缓释制剂或制备中施用。缓释制剂的合适例子包括以成形物质形式的半透性聚合物基质，如薄膜或微胶囊。缓释基质包括聚酯、水凝胶、聚交酯(美国3,773,919、EP58,481)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酰胺的共聚物(Sidman等，Biopolymers，22：547-556[1983])、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸盐)(Langer等，J.Biomed.Mater.Res.，15：167-277[1981]和Langer等，Chem.Tech.，12：98-105[1982])、乙烯乙酸乙烯(Langer等，同上)或聚-D(-)-3-羟基丁酸(EP133,988)。缓释组合物也包括脂质体，可由任何本领域已知的一些方法来制备(如Eppstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：3688-3692[1985]；EP 36,676；EP 88,046；EP 143,949)。

另一种施用本发明NTP肽的方法是使NTP肽直接或间接灌注到待治疗的肿瘤或其它组织。这种实施方案的一个例子是直接注射NTP肽到待治疗的肿瘤或其它组织。治疗可由单次注射、一段时间多次注射或几小时、几天或几个月的一系列注射组成，待治疗肿瘤或其它组织的消退或破坏通过活组织检查、成像或其它监控组织生长的方法来监控。可通过插入孔的装置如鼻、口、耳、阴道、直肠或尿道注射到待治疗的肿瘤或其它组织或穿过切口以到达体内的肿瘤或组织，且注射可结合成像或光学系统如超声波或纤维光镜进行以确定注射的合适位置。这种实施方案的另一个例子是使用可使NTP肽恒定灌注到组织的装置。

又一种施用发明NTP肽的方法是结合手术或类似用于物理切除、消融或者杀死或破坏肿瘤或其它组织或细胞因子的过程，它们需要或希望被除去或破坏，其中本发明的NTP肽施用给肿瘤或组织的周围接近区域，除去肿瘤或其它组织以破坏或阻止任何未被过程除去或破坏的肿瘤细胞或其它细胞因子的生长。

另一种施用本发明NTP肽的方法是将装置移植到待治疗的肿瘤或其它组织中。这种实施方案的一个例子是将含NTP肽的薄片移植到待治疗的肿瘤或其它组织中。经过一段时间，薄片释放治疗剂量的NTP肽到组织中。另外或此外，组合物可局部施用，通过移植到膜、海绵或其它合适物质的受影响区域，NTP肽被吸收到其中。使用移植装置时，装置可移植到任何合适的组织或器官，传递NTP肽可直接通过装置，经推注或经连续施用或经使用连续灌输的导管。

另外一种施用方法是将一个或多个拷贝的NTP肽-编码基因导入靶向的细胞，如果必要，诱导基因的拷贝开始胞内产生NTP肽。一种可应用基因治疗的方式是使用NTP肽-编码基因(基因组DNA、cDNA和/或编码NTP肽或片断、变体、同源物或衍生物的合成DNA)，它可操作连接于组成型或可诱导启动子以形成“基因治疗DNA构建物”。如果启动子在构建物插入的细胞或组织类型中具有活性，它可与内源性NTP肽-编码基因同源或异源。如果需要，基因治疗DNA构建物的其它成分可任选地包括设计用于位点特异性整合的DNA分子(如用于同源重组的内源性侧翼序列)，组织特异性启动子、增强子或沉默子，能提供选择性优于亲代细胞的DNA分子、用于标记以鉴定转化细胞的DNA分子、阴性选择系统、细胞特异结合剂(例如用于细胞靶向)细胞特异性内在化因子、提高载体表达的转录因子以及能使载体生产的因子。

体内或活体外传递基因到细胞或组织的方法包括(但不限于)直接注射裸露DNA、弹道方法、脂质体介导的转移、受体介导的转移(配体-DNA复合体)、电穿孔和磷酸钙沉淀，参见美国专利号4,970,154、WO 96/40958、美国专利号5,679,559、美国专利号5,676,954和美国专利号5,593,875，公开的内容全部纳入本文供参考。

NTP肽-编码基因可通过移植一些细胞到病人来传递，细胞使用本文所述方法在活体外被遗传工程改造以表达和分泌NTP肽或片段、变体、同源物或它的衍生物。这种细胞可以是动物或人细胞，可获得自病人自身组织或来自另外人或非人的来源。任选地细胞可以是无限增殖化或干可以是细胞。然而为减少免疫应答的机会，优选的是细胞被包囊以防止周围组织渗透。包囊物质一般是生物相容的半透性聚合封闭物或膜，使蛋白产物释放但防止病人免疫系统或来自周围组织的其它有害因素破坏细胞。用于膜包囊细胞的方法是技术人员所熟悉的，可制备包囊的细胞并移植到病人中而不需要过度的实验。参见例如美国专利号4,892,538；5,001,472和5,106,627，它们公布的内容全部纳入本文供参考。包囊活细胞的系统描述于PCT WO 91/10425。制成多种其它持续或受控制传递方式的技术是本领域技术人员已知的，如脂质体载体、生物可侵蚀的颗粒或珠，技术描述于例如美国专利号5,653,975，公开的内容全部纳入本文供参考。有或没有包囊的细胞可移植到病人的适当身体组织或器官。

提供以下例子以阐明本发明。然而应理解的是发明不限于这些例子中所述的具体条件和细节。在说明书中，任何和所有公众可得到的文献纳入供参考，包括美国专利。

特别地，本发明特意包括待审批美国专利申请序列号10/092,934：用神经丝状蛋白治疗肿瘤和相关疾病的方法中列出的实施例以供参考，它显示完整的AD7c-NTP蛋白是在体外胶质瘤和成神经细胞瘤以及体内正常啮齿动物肌肉组织、皮下结缔组织和真皮以及多种不同人和非人来源的肿瘤(包括乳腺癌、皮肤癌和乳头状瘤、结肠癌、脑胶质瘤和啮齿动物模型中的其它肿瘤)中造成细胞死亡的一种有效试剂。本发明还特意包括待审批美国专利申请序列号10/153,334：有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽中列出的实施例以供参考，它显示NTP肽是在正常啮齿动物肌肉组织、皮下结缔组织、真皮和其它组织体内造成细胞死亡的有效试剂。

实施例1

此例子的目的是确定NTP肽#7对注射部位组织的效果。

4只正常大鼠在皮肤和皮下注射，各有四个不同的病灶，在四肢骨骼肌注射，各有两个不同的病灶，在100到400mL量盐水中的NTP肽#7以0.1-1mg/mL浓度通过不锈钢26量针从塑料注射器传递。

观察动物24小时且在24小时无痛杀死动物。切除单独的渗透病灶，固定在10％福尔马林中，石蜡包埋，染色并用标准组织病理学方法检测。

对照仅接受盐水。

结果：注射NTP肽#7在注射部位产生组织坏死。坏死在NTP肽#7注射部位的肌肉组织、皮下结缔组织和真皮中明显。坏死与注射区域相关且似乎不扩散到离注射部分很远。

远离炎症的轻度区域，对照没有显示出坏死或细胞损失。对照显示出最小或没有肌肉变化。对照注射在注射部位有轻度到最小的急性炎症及来自针的病灶微出血。

实施例2

此例子的目的是确定NTP肽#7对注射部位组织的效果。

用乙醚麻醉4只大鼠，并通过前列腺内灌注给予NTP肽#7。注射液包括300μlNTP肽#7，其浓度为1mg/mL，溶于PBS pH7.4(1.0mg/kg)。对照仅注射PBS或不注射。72小时后无痛杀死动物。切除前列腺，用10％缓冲的福尔马林固定24小时，石蜡包埋，切片，并用H&E染色。对于每个动物，将整个前列腺包埋并切片。用组织学技术检测所有染色的切片。

结果：用NTP肽#7处理的大鼠前列腺在注射部位出现组织坏死，并伴有腺上皮损失、变扁和萎缩。仅注射PBS的对照和未注射的对照之间没有可辨别的差异。

实施例3

此例子的目的是确定NTP肽#14对注射部位组织的效果。

如上述实施例1在皮肤和皮下注射大鼠，但它们注射的是NTP肽#14。

观察动物24小时且在24小时时无痛杀死动物。切除组织，用10％福尔马林固定，石蜡包埋，染色并用标准组织病理学方法检测。

对照与实施例1相同。

结果：注射NTP肽#14在注射部位产生细胞死亡和组织坏死。与上述实施例1类似，细胞死亡存在于NTP肽#14注射部位的肌肉组织、皮下结缔组织和真皮中。

远离炎症的轻度区域，对照显示最低的坏死或细胞损失。对照注射在注射部位有轻度到最小的急性炎症及偶尔来自针的病灶微出血。

实施例4

此例子的目的是确定NTP肽#17对注射部位组织的效果。

如上述实施例2在前列腺注射正常大鼠，但它们注射的是NTP肽#17。72小时后无痛杀死动物并如实施例2处理它们的前列腺。

结果：如上述实施例2，72小时时，注射NTP肽#17在前列腺中产生明显的细胞损失和萎缩。对照显示最小变化或没有变化，包括来自针头的轻度局灶性炎。

已经参考特别优选的实施方案和例子描述了本发明。然而，精通此领域的技术人员应理解，可对本发明作出多种改变而不背离发明的精神或范围。

序列表

<110>尼莫克斯股份有限公司(NYMOX CORPORATION)

<120>有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽

<130>10107-45

<140>PCT/CA02/01105

<141>2002-07-19

<150>US 60/306,161

<151>2001-07-19

<150>US 60/306,150

<151>2001-07-19

<150>US 60/331,477

<151>2001-11-16

<160>48

<170>PatentIn Ver.2.1

<210>1

<211>375

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>1

Met Glu Phe Ser Leu Leu Leu Pro Arg Leu Glu Cys Asn Gly Ala Ile

1 5 10 15

Ser Ala His Arg Asn Leu Arg Leu Pro Gly Ser Ser Asp Ser Pro Ala

20 25 30

Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly Ile Thr Gly Met Cys Thr His Ala Arg

35 40 45

Leu Ile Leu Tyr Phe Phe Leu Val Glu Met Glu Phe Leu His Val Gly

50 55 60

Gln Ala Gly Leu Glu Leu Pro Thr Ser Asp Asp Pro Ser Val Ser Ala

65 70 75 80

Ser Gln Ser Ala Arg Tyr Arg Thr Gly His His Ala Arg Leu Cys Leu

85 90 95

Ala Asn Phe Cys Gly Arg Asn Arg Val Ser Leu Met Cys Pro Ser Trp

100 105 110

Ser Pro Glu Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp

115 120 125

Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu Phe Ile Leu Phe Phe Leu

130 135 140

Arg His Arg Cys Pro Thr Leu Thr Gln Asp Glu Val Gln Trp Cys Asp

145 150 155 160

His Ser Ser Leu Gln Pro Ser Thr Pro Glu Ile Lys His Pro Pro Ala

165 170 175

Ser Ala Ser Gln Val Ala Gly Thr Lys Asp Met His His Tyr Thr Trp

180 185 190

Leu Ile Phe Ile Phe Ile Phe Asn Phe Leu Arg Gln Ser Leu Asn Ser

195 200 205

Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp Arg Ash Leu Gly Ser Leu Gln Pro

210 215 220

Leu Pro Pro Gly Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser

225 230 235 240

Trp Asp Tyr Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Phe Phe Val Phe Leu

245 250 255

Val Glu Met Gly Phe Thr Met Phe Ala Arg Leu Ile Leu Ile Ser Gly

260 265 270

Pro Cys Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly

275 280 285

Val Ser His His Ala Arg Leu Ile Phe Asn Phe Cys Leu Phe Glu Met

290 295 300

Glu Ser His Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp Pro Asn Leu Gly

305 310 315 320

Ser Leu Gln Pro Leu Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser

325 330 335

Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His Leu Pro Pro His Pro Ala Asn

340 345 350

Phe Cys Ile Phe Ile Arg Gly Gly Val Ser Pro Tyr Leu Ser Gly Trp

355 360 365

Ser Gln Thr Pro Asp Leu Arg

370 375

<210>2

<211>122

<212>PRT

<213>未知生物

<220>

<223>对未知生物的描述：未知NTP肽

<400>2

Met Met Val Cys Trp Asn Arg Phe Gly Lys Trp Val Tyr Phe Ile Ser

1 5 10 15

Ala Ile Phe Ash Phe Gly Pro Arg Tyr Leu Tyr His Gly Val Pro Phe

20 25 30

Tyr Phe Leu Ile Leu Val Arg Ile Ile Ser Phe Leu Ile Gly Asp Met

35 40 45

Glu Asp Val Leu Leu Asn Cys Thr Leu Leu Lys Arg Ser Ser Arg Phe

50 55 60

Arg Phe Trp Gly Ala Leu Val Cys Ser Met Asp Ser Cys Arg Phe Ser

65 70 75 80

Arg Val Ala Val Thr Tyr Arg Phe Ile Thr Leu Leu Asn Ile Pro Ser

85 90 95

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100 105 110

Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys Leu

115 120

<210>3

<211>112

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>3

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1 5 10 15

Ile Leu Leu Ser Gln Pro Pro Lys Gln Leu Gly Leu Arg Ala Pro Ala

20 25 30

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Ile Cys Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Thr Ser Gly Asp Pro Pro Ala

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Pro Ala Asn Leu Asp Lys Lys Ile Cys Ser Asn Gly Gly Ser Cys Tyr

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Val Ala Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Ala Ser Cys Asn Pro Ser Lys

100 105 110

<210>4

<211>106

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>4

Met Trp Thr Leu Lys Ser Ser Leu Val Leu Leu Leu Cys Leu Thr Cys

1 5 10 15

Ser Tyr Ala Phe Met Phe Ser Ser Leu Arg Gln Lys Thr Ser Glu Pro

20 25 30

Gln Gly Lys Val Pro Cys Gly Glu His Phe Arg Ile Arg Gln Asn Leu

35 40 45

Pro Glu His Thr Gln Gly Trp Leu Gly Ser Lys Trp Leu Trp Leu Leu

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65 70 75 80

Lys Asn Lys Val Arg Met Ala Pro Phe Phe Leu His His Ile Asp Ser

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Ile Ser Gly Val Ser Gly Lys Arg Met Phe

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<210>5

<211>106

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>5

Met Phe Phe Val Leu Tyr Arg Phe Cys Phe Cys Phe Phe Glu Thr Glu

1 5 10 15

Ser His Ser Leu Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp Cys Glu Leu Gly Ser

20 25 30

Pro Gln Pro Leu Pro Ser Gly Phe Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser Leu

35 40 45

Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Ser His Glu Pro Pro His Pro Val Ile Cys

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Ser Phe Leu Met Glu Lys Cys Leu Ile Leu Tyr Lys Pro Asn Gly Asp

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Thr Ile Gly Pro Ile Leu Val Gln Gln Gly Lys Arg Gln Lys Leu Tyr

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Ile Ser Ala Asp Leu Val His Leu Ile Ala

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<210>6

<211>98

<212>PRT

<213>未知生物

<220>

<223>对未知生物的描述：未知NTP肽

<400>6

Glu Ala Tyr Tyr Thr Met Leu His Leu Pro Thr Thr Asn Arg Pro Lys

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Ile Ala His Cys Ile Leu Phe Asn Gln Pro His Ser Pro Arg Ser Asn

20 25 30

Ser His Ser His Pro Asn Pro Leu Lys Leu His Arg Arg Ser His Ser

35 40 45

His Asn Arg Pro Arg Ala Tyr Ile Leu Ile Thr Ile Leu Pro Ser Lys

50 55 60

Leu Lys Leu Arg Thr His Ser Gln Ser His His Asn Pro Leu Ser Arg

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Thr Ser Asn Ser Thr Pro Thr Asn Ser Phe Leu Met Thr Ser Ser Lys

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Pro Arg

<210>7

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<212>PRT

<213>未知生物

<220>

<223>对未知生物的描述：未知NTP肽

<400>7

Ser Ser Ser Leu Gly Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg His Glu Leu

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Leu Ser Leu Ala Leu Met Ile Asn Phe Arg Val Met Ala Cys Thr Phe

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Lys Gln His Ile Glu Leu Arg Gln Lys Ile Ser Ile Val Pro Arg Lys

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Leu Cys Cys Met Gly Pro Val Cys Pro Val Lys Ile Ala Leu Leu Thr

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Ile Asn Gly His Cys Thr Trp Leu Pro Ala Ser

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<210>8

<211>68

<212>PRT

<213>未知生物

<220>

<223>对未知生物的描述：未知NTP肽

<400>8

Met Phe Val Phe Cys Leu Ile Leu Asn Arg Glu Lys Ile Lys Gly Gly

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Asn Ser Ser Phe Phe Leu Leu Ser Phe Phe Phe Ser Phe Gln Asn Cys

20 25 30

Cys Gln Cys Phe Gln Cys Arg Thr Thr Glu Gly Tyr Ala Val Glu Cys

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<210>9

<211>61

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>9

Met Glu Pro His Thr Val Ala Gln Ala Gly Val Pro Gln His Asp Leu

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Gly Ser Leu Gln Ser Leu Leu Pro Arg Phe Lys Arg Phe Ser Cys Leu

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Ile Leu Pro Lys Ile Trp Asp Tyr Arg Asn Met Asn Thr Ala Leu Ile

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Lys Arg Asn Arg Tyr Thr Pro Glu Thr Gly Arg Lys Ser

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<210>10

<211>20

<2l2>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>10

Pro Gly Phe Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp

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Asp Tyr Arg Arg

20

<210>11

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>11

Pro Glu Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp

1 5 10 15

Tyr Arg Arg

<210>12

<211>19

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>12

Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp

1 5 10 15

Asp Tyr Gly

<210>13

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>13

Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His

1 5 10

<210>14

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>14

Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg

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<210>15

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>15

Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg

1 5 10

<210>16

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>16

Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr

1 5

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<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>17

Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg

1 5 10

<210>18

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>18

Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg

1 5 10

<210>19

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>19

Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg

1 5

<210>20

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>20

Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg

1 5

<210>21

<211>5

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>21

Ser Ser Trp Asp Tyr

1 5

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<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>22

Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg Phe Ile Leu Phe Phe Leu

1 5 10

<210>23

<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>23

Trp Asp Tyr Arg Arg Phe Ile Phe Asn Phe Leu

1 5 10

<210>24

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>24

Phe Asn Phe Cys Leu Phe

1 5

<210>25

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>25

Phe Ile Phe Asn Phe Leu

1 5

<210>26

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>26

Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly Ile Thr Gly Met

1 5 10

<210>27

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>27

Pro Ala Ser Ala Ser Gln Val Ala Gly Thr Lys Asp Met

1 5 10

<210>28

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的肽

<400>28

Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val

1 5 10

<210>29

<211>60

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>29

cccgggttct tcaagttatt ctcctgcccc agcctcctga gtagctggga ctacaggcgc 60

<210>30

<211>57

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>30

cctgagctca agcagtccac ctgcctcagc ctcccaaagt gctgggatta caggcgt 57

<210>31

<211>57

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>31

cctcccgggc tcaagcgatt ctcctgtctc agcctcccaa gcagctggga ttacggg 57

<210>32

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>32

ttctcctgtc tcagcctccc aagcagctgg gattacgggc ac 42

<210>33

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>33

tccacctgcc tcagcctccc aaagtgctgg gattacaggc gt 42

<210>34

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>34

ttctcctgcc ccagcctcct gagtagctgg gactacaggc gc 42

<210>35

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>35

ctcagcctcc caagcagctg ggattac 27

<210>36

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>36

ctcagcctcc caaagtgctg ggattacagg cgt 33

<210>37

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>37

agcctcctga gtagctggga ctacaggcgc 30

<210>38

<211>28

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>38

ctcccagagt agctgggact acaggcgc 28

<210>39

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>39

gagtagctgg gactacaggc gc 22

<210>40

<211>15

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>40

agcagctggg attac 15

<210>41

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>41

gagtagctgg gactacaggc gctttatttt atttttttta 40

<210>42

<211>33

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>42

tgggactaca ggcgctttat ttttaatttt ttg 33

<210>43

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>43

tttaattttt gtttgttt 18

<210>44

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>44

tttattttta attttttg 18

<210>45

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>45

cctgcctcag cctccccagt agctgggatt acaggcatg 39

<210>46

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>46

cctgcctcag cctcccaagt agctgggacc aaagacatg 39

<210>47

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>对人工序列的描述：合成的寡核苷酸

<400>47

cctgcctcgg cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtg 39

<210>48

<211>1442

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>CDS

<222>(15)..(1139)

<400>48

tttttttttt tgag atg gag ttt tcg ctc ttg ttg ccc agg ctg gag tgc 50

Met Glu Phe Ser Leu Leu Leu Pro Arg Leu Glu Cys

1 5 10

aat ggc gca atc tca gct cac cgc aac ctc cgc ctc ccg ggt tca agc 98

Asn Gly Ala Ile Ser Ala His Arg Asn Leu Arg Leu Pro Gly Ser Ser

15 20 25

gat tct cct gcc tca gcc tcc cca gta gct ggg att aca ggc atg tgc 146

Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly Ile Thr Gly Met Cys

30 35 40

acc cac gct cgg cta att ttg tat ttt ttt tta gta gag atg gag ttt 194

Thr His Ala Arg Leu Ile Leu Tyr Phe Phe Leu Val Glu Met Glu Phe

45 50 55 60

ctc cat gtt ggt cag gct ggt ctc gaa ctc ccg acc tca gat gat ccc 242

Leu His Val Gly Gln Ala Gly Leu Glu Leu Pro Thr Ser Asp Asp Pro

65 70 75

tcc gtc tcg gcc tcc caa agt gct aga tac agg act ggc cac cat gcc 290

Ser Val Ser Ala Ser Gln Ser Ala Arg Tyr Arg Thr Gly His His Ala

80 85 90

cgg ctc tgc ctg gct aat ttt tgt ggt aga aac agg gtt tca ctg atg 338

Arg Leu Cys Leu Ala Asn Phe Cys Gly Arg Asn Arg Val Ser Leu Met

95 100 105

tgc cca agc tgg tct cct gag ctc aag cag tcc acc tgc ctc agc ctc 386

Cys Pro Ser Trp Ser Pro Glu Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu

110 115 120

cca aag tgc tgg gat tac agg cgt gca gcc gtg cct ggc ctt ttt att 434

Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu Phe Ile

125 130 135 140

tta ttt ttt tta aga cac agg tgt ccc act ctt acc cag gat gaa gtg 482

Leu Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro Thr Leu Thr Gln Asp Glu Val

145 150 155

cag tgg tgt gat cac agc tca ctg cag cct tca act cct gag atc aag 530

Gln Trp Cys Asp His Ser Ser Leu Gln Pro Ser Thr Pro Glu Ile Lys

160 165 170

cat cct cct gcc tca gcc tcc caa gta gct ggg acc aaa gac atg cac 578

His Pro Pro Ala Ser Ala Ser Gln Val Ala Gly Thr Lys Asp Met His

175 180 185

cac tac acc tgg cta att ttt att ttt att ttt aat ttt ttg aga cag 626

His Tyr Thr Trp Leu Ile Phe Ile Phe Ile Phe Asn Phe Leu Arg Gln

190 195 200

agt ctc aac tct gtc acc cag gct gga gtg cag tgg cgc aat ctt ggc 674

Ser Leu Asn Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp Arg Asn Leu Gly

205 210 215 220

tca ctg caa cct ctg cct ccc ggg ttc aag tta ttc tcc tgc ccc agc 722

Ser Leu Gln Pro Leu Pro Pro Gly Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser

225 230 235

ctc ctg agt agc tgg gac tac agg cgc cca cca cgc cta gct aat ttt 770

Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Phe

240 245 250

ttt gta ttt tta gta gag atg ggg ttc acc atg ttc gcc agg ttg atc 818

Phe Val Phe Leu Val Glu Met Gly Phe Thr Met Phe Ala Arg Leu Ile

255 260 265

ttg atc tct gga cct tgt gat ctg cct gcc tcg gcc tcc caa agt gct 866

Leu Ile Ser Gly Pro Cys Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala

270 275 280

ggg att aca ggc gtg agc cac cac gcc cgg ctt att ttt aat ttt tgt 914

Gly Ile Thr Gly Val Ser His His Ala Arg Leu Ile Phe Asn Phe Cys

285 290 295 300

ttg ttt gaa atg gaa tct cac tct gtt acc cag gct gga gtg caa tgg 962

Leu Phe Glu Met Glu Ser His Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp

305 310 315

cca aat ctc ggc tca ctg caa cct ctg cct ccc ggg ctc aag cga ttc 1010

Pro Asn Leu Gly Ser Leu Gln Pro Leu Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe

320 325 330

tcc tgt ctc agc ctc cca agc agc tgg gat tac ggg cac ctg cca cca 1058

Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His Leu Pro Pro

335 340 345

cac ccc gct aat ttt tgt att ttc att aga ggc ggg gtt tca cca tat 1106

His Pro Ala Asn Phe Cys Ile Phe Ile Arg Gly Gly Val Ser Pro Tyr

350 355 360

ttg tca ggc tgg tct caa act cct gac ctc agg tgacccacct gcctcagcct 1159

Leu Ser Gly Trp Ser Gln Thr Pro Asp Leu Arg

365 370 375

tccaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc acctcaccca gccggctaat ttagataaaa 1219

aaatatgtag caatgggggg tcttgctatg ttgcccaggc tggtctcaaa cttctggctt 1279

catgcaatcc ttccaaatga gccacaacac ccagccagtc acatttttta aacagttaca 1339

tctttatttt agtatactag aaagtaatac aataaacatg tcaaacctgc aaattcagta 1399

gtaacagagt tcttttataa cttttaaaca aagctttaga gca 1442

Claims

1.一种肽，选自：

以SEQ ID NO：10中的氨基酸序列表述的肽(Pro-Gly-Phe-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg)；

以SEQ ID NO：12中的氨基酸序列表述的肽(Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly)；

以SEQ ID NO：13中的氨基酸序列表述的肽(Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His)；

以SEQ ID NO：15中的氨基酸序列表述的肽(Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg)；

以SEQ ID NO：16中的氨基酸序列表述的肽(Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly)；

以SEQ ID NO：18中的氨基酸序列表述的肽(Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg)；

以SEQ ID NO：19中的氨基酸序列表述的肽(Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg)；

以SEQ ID NO：20中的氨基酸序列表述的肽(Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg)；

以SEQ ID NO：21中的氨基酸序列表述的肽(Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr)；

以SEQ ID NO：22中的氨基酸序列表述的肽(Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu)。

2.一种组合物，其特征在于，所述组合物含有一种或多种权利要求1所述肽和载体。

3.一种肽，其特征在于，所述肽包括权利要求1所述的肽，所述肽3′或5′末端侧翼由1到25个额外的氨基酸修饰。

4.一种肽，其特征在于，所述肽包括与抗体、抗体片段或抗体样分子融合的如权利要求1所述的肽。

5.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码与权利要求1所述的肽相应的氨基酸序列。

6.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括一种或多种如权利要求5所述的核酸以及其药学上可接受的载体。

7.权利要求1所述的肽用于制造治疗需要除去或破坏细胞的疾病的药物的用途。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是组织的良性或恶性肿瘤，所述组织选自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、心、脾、唾液腺、血液、大脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、副甲状腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴结和淋巴系统。

9.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是组织增生、肥大或过度生长，所述组织选自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、心、脾、唾液腺、血液、大脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、副甲状腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴结和淋巴系统。

10.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是病毒、细菌或寄生虫改变的组织，所述组织选自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、心、脾、唾液腺、血液、大脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、副甲状腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴结和淋巴系统。

11.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是组织畸形，所述组织选自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、心、脾、唾液腺、血液、大脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、副甲状腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴结和淋巴系统。

12.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述组织是淋巴组织。

13.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是扁桃体肥大。

14.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是前列腺增生。

15.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是银屑病。

16.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是湿疹。

17.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是皮肤病。

18.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是对组织的整容修饰。

19.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述组织选自皮肤、眼、耳、鼻、喉、口、肌肉、结缔组织、毛发和乳房。

20.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是血管病。

21.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是痔。

22.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病是静脉曲张。

23.如权利要求20所述的用途，其特征在于，所述血管病是动脉粥样硬化或动脉硬化。

24.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述疾病选自炎性疾病、自身免疫疾病、代谢疾病、遗传疾病、创伤性疾病或身体损伤、营养缺乏性疾病、传染病、淀粉样疾病、纤维变性病、贮积病、先天性畸形、酶缺乏性疾病、中毒、致醉、环境病、辐射病、内分泌疾病、变性疾病和机械性疾病中的一种。

25.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述肽衍生自胰丝状蛋白的氨基酸序列。