CN100435663C - 增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品及其制备方法，由下列重量份的原料：沙棘籽油50-95份，蜂胶5-20份，并将蜂胶经醇提干燥粉碎制成蜂胶提取物干粉，与沙棘籽油混合均匀后，按常规方法制成软胶囊、硬胶囊、颗粒剂、片剂、口服液等。本发明的保健食品经功效实验、毒理实验及稳定性实验表明，其作用显著、无毒、稳定性好，并经多数人服用证实，确是一种集增强免疫力、对胃粘膜损伤有辅助保护功能于一身，增强免疫力，改善胃粘膜损伤，并可长期服用的保健食品。具有组方独特合理、制备方法完备成熟、生物利用度高、易被人体吸收、功能显著、服用剂量小等特点。

Description

增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种保健食品，具体说是一种增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品及其制备方法。

背景技术

随着科学技术进步和社会生产力的快速发展，高速的生活节奏及人们面对的各种压力，造成一部分人群的免疫力低下；再加上人们饮食结构的急剧变化，特别是由于无规律的饮食或服用药物不当等因素，使得相当一部分人群的胃粘膜受到损伤，很多人长期饱受胃部不适的折磨，苦不堪言。有的还因防治不及时，造成胃炎、胃溃疡等严重疾患。

胃部疾患的病因，长期以来大都认为是与遗传、胃酸过多、胆汁返流、吸烟等多种因素有关，尤其认为胃酸是发病的主要因素。近80年来，胃酸一直被认为是胃溃疡形成的主要原因，因此有“无酸即无溃疡”的传统说法。

胃炎、胃溃疡等胃部疾病的传统治疗方法是中和胃酸或抑制胃酸分泌。过去沿用碱性药物，目前常用Hz受体抑制剂或其他胃酸分泌抑制剂。应用这些抗酸抑酸药物，有利于溃疡的愈合，但是这些药物有一个共同的缺点是，一旦停药，不久溃疡便又复发。因此，有些病人要间断性服药，有的则需长期服用维持剂量，还有不少病人溃疡病却屡愈屡发。

通过对胃液的研究分析发现，十二指肠溃疡病人，胃酸分泌过高；但胃溃疡病人中胃酸分泌增加者仅占16％，许多病人胃酸分泌正常，有的甚至低于正常。由此可见胃酸分泌的多少，并非是胃溃疡发病的重要因素。研究分析还发现胃粘膜防御能力降低、免疫能力下降，从而使胃酸等攻击作用相对增加，是形成胃溃疡的主要原因。所以，增强胃粘膜的保护能力，提高免疫力才是防治胃部疾患的首选措施。

目前分别用于增强免疫力或改善胃粘膜损伤的药物或食品不少，各有特点，功能单一。但是，尚未见集增强免疫力和改善胃粘膜损伤于一身的保健食品。

发明内容

本发明的目的是针对上述不足，提供一种集增强免疫力、对胃粘膜损伤有辅助保护功能于一身的保健食品。

本发明的保健食品由下列重量份的原料制成：

沙棘籽油    50-95份，

蜂胶        5-20份。

本发明的另一目的是提供这种保健食品的制备方法。

将上述各原料制成本发明保健食品的制备方法是：

(1)将所述重量份的蜂胶粉碎后，加入6-10倍重量的70％乙醇，在60-80℃下，浸提1-3次，每次1-2小时，合并提取液后过滤，得滤液；

(2)将滤液减压真空浓缩至相对密度为1.30-1.33的稠膏，将稠膏干燥、粉碎成120目细粉，得蜂胶提取物干粉；

(3)将蜂胶提取物干粉与所述重量份的沙棘籽油混合均匀，即得。

本发明的保健食品可以加入制备不同剂型时所需的常规辅料，采用中药制剂的常规方法制备成任何一种常规口服制剂，如软胶囊、硬胶囊、颗粒剂、片剂、口服液等。

本发明的保健食品以沙棘籽油、蜂胶为主要原料，参考现代药理研究成果经科学组方精制而成。

沙棘籽油是从胡颓子科沙棘属植物沙棘的种子中提取的植物油。沙棘油含有脂肪酸、烃类、萜类、维生素E、甾类、黄酮类等有效组分和药用成分。

实验研究表明，在增强免疫力方面，沙棘籽油可明显增强E花环形成率、血清抗SRBC抗体效价、α醋酸萘酯酶活性，并且对辐射损伤后小鼠体液免疫和细胞免疫功能恢复均有明显增进作用。

实验研究表明，在保护胃粘膜方面，沙棘籽油可明显降低胃液量和游离酸量以及胃蛋白酶活性，具有明显的抑制胃溃疡的作用。实验研究还表明，沙棘籽油对大白鼠应激性胃溃疡、利血平型胃溃疡及慢性醋酸型、幽门结扎型胃溃疡等皆有明显的保护治疗作用，其表现是溃疡发生率低，溃疡发生指数减少，胃液分泌下降。此外，经研究还发现，沙棘籽油能够抑制胃总酸排出量及增加胃粘液，并能抑制小鼠胃排空，抑制胃平滑肌的运动及具有一定的镇痛作用，有利于对胃粘膜损伤的治疗产生的影响。

蜂胶是蜜蜂采集植物的树胶，并混入其上腭腺分泌物和蜂蜡经蜜蜂咀嚼调制而成的一种胶状物质。蜂胶含有丰富的黄酮类化合物、萜类、芳香酸等药理活性成分。

在增强免疫力方面，用MTT法、耳肿胀法、Jerne改良玻片法、血凝法、半体内法、乳酸脱氢酶测定法，分别观察小鼠脾淋巴细胞转化、迟发型变态反应、抗体生成细胞、血清溶血素、腹腔巨噬鸡红细胞、NK细胞活性状况。结果表明，蜂胶提取物具有增强小鼠细胞免疫功能和体液免疫功能的作用。还具有增强小鼠巨噬细胞吞噬功能和小鼠NK细胞活性的作用。

此外，采用氢化可的松免疫功能低下小鼠模型(HC小鼠模型)，全面观察蜂胶乙醇提取液对HC小鼠的免疫功能的影响，表明蜂胶乙醇提取液能够改善免疫功能低下小鼠的体液免疫功能，增强抗体形成细胞功能，提高血清溶血素含量，说明蜂胶具有改善小鼠体液免疫功能状态的作用。

在保护胃粘膜方面，经实验观察蜂胶对利血平溃疡模型和冰醋酸烧灼型溃疡模型的作用，结果表明，蜂胶可显著抑制利血平溃疡的形成，对醋酸烧灼型溃疡的愈合有明显的促进作用。

此外，用5种大鼠溃疡模型观察蜂胶乙醇提取液的溃疡作用，并探讨其机理，实验结果显示：乙醇提取液能对抗幽门结扎型溃疡的形成，降低胃中的总酸度和胃蛋白酶活性，还能对抗应激型溃疡的形成，并能促进醋酸型溃疡的愈合。

蜂胶在保护胃粘膜损伤方面有着极好的临床效果，是因为蜂胶具有良好的成膜性，能够在粘膜上形成一层不能渗透的薄膜，抵御胃酸的侵蚀，并有止血、促进溃疡面愈合等作用；另外，还具有杀菌和消炎的作用，能保护和促进受损组织的更新。

本发明的保健食品经功效实验、毒理实验及稳定性实验表明，其作用显著、无毒、稳定性好，并经多数人服用证实，确是一种集增强免疫力、对胃粘膜损伤有辅助保护功能于一身，增强免疫力，改善胃粘膜损伤，并可长期服用的保健食品。具有组方独特合理、制备方法完备成熟、生物利用度高、易被人体吸收、功能显著、服用剂量小等特点。

具体实施方式

下面结合本发明的实施例对本发明作进一步描述，但本发明并不限于实施例，本领域普通技术人员以本发明技术方案作某些修改，仍在本发明保护范围内。

实施例1-5：本发明保健食品软胶囊的制备

制备本发明保健食品软胶囊，各实施例中各原料的重量配比见表1。

制备本发明的保健食品软胶囊所用辅料由下列重量份的原料制成：

蜂蜡               0.05-4份。

制备本发明的保健食品软胶囊所用囊材的原料重量配比为：

明胶∶甘油∶聚乙二醇∶水＝1∶(0.2-0.6)∶(0.6-1)∶(0.2-0.5)。

表1

实施例号	沙棘油(kg)	蜂胶(kg)	蜂蜡(kg)
				1	95	20	1
2	90	18	0.8
				3	88	12	4
4	65	11	0.1
				5	50	5	0.05

实施例中主要原料的来源及质量标准如下：

1、沙棘籽油天津尖峰天然产物有限公司生产，符合中华人民共和国行业标准HB/QS002-94“沙棘籽油”规定技术要求。

2、蜂胶湖南金农生物资源股份有限公司生产，符合中华人民共和国商业部标准SB/T10096-92“蜂胶”规定技术要求。

制备方法如下：(以实施例3为例说明，其它实施例除原料用量不同外与实施例3基本相同)：

(1)选取原料

选取符合技术要求的88kg沙棘籽油和12kg蜂胶。

(2)提取蜂胶

将12kg蜂胶用中药碰碎机碰碎后放入多功能提取罐中，加入96kg的70％乙醇，在70℃温度下浸提2次，每次时间1小时，将提取液合并后过滤，得滤液和滤渣，滤渣弃去；将滤液减压真空(60℃、0.07Mpa)浓缩至相对密度为1.301.33(50℃测)的稠膏；将稠膏放入真空干燥箱中，在70℃、0.7Mpa条件下干燥后，粉碎成120目细粉，得蜂胶提取物干粉。

(3)制备软胶囊内容物

将88kg沙棘籽油、4kg蜂蜡置于配料罐中，恒温35℃混合搅拌后，将(2)所得蜂胶提取物干粉加入其中，继续搅拌20-30分钟，使物料混合均匀，100目过滤。过滤后的物料打入脱气罐中，在恒温35℃、压力为60-70mmHg真空下，慢速搅拌30-45分钟，脱气后的物料打入保温桶中，得软胶囊内容物，保温于35℃条件下以利压丸。

(4)制丸

按常规工艺制备软胶囊包材，将软胶囊内容物送入压丸机制丸，得本发明保健食品软胶囊。

本发明保健食品软胶囊：净含量0.5g/粒，每粒含总黄酮不少于800mg。

使用方法：口服，每日2次，每次2粒。

试验例1：本发明保健食品的增强免疫力功能检验

为考查本发明保健食品的增强免疫力功能，将实施例3所得0.5/g粒×12粒×434板本发明保健食品软胶囊(以下简称：软胶囊)送吉林省卫生监测检验中心，依据《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》(2003年版)，第二部分功能学评价检验方法一、增强免疫力功能检验方法，检验其增强免疫力功能。检验报告如下：

1、材料与方法

1.1样品：软胶囊，内容物为黑色油状混合物。

1.2实验动物：吉林大学基础医学院动物实验中心提供的清洁级ICR雄性小鼠，生产许可证号：SCXK-(吉)2003-0001。饲料由长春市绿园区益生实验动物饲料厂提供，生产许可证号：SCXK-(吉)2003-0004。本动物室使用许可证号：医动字第10-7201号。选健康雄性小鼠48只，体重18-22g，分为4组，每组12只，作为免疫一组，进行脏器/体重比值测定、半数溶血值(HC₅₀)的测定和抗体生成细胞检测；选健康雄性小鼠48只，体重18-22g，分为4组，每组12只，作为免疫二组，进行碳廓清实验；选健康雄性小鼠48只，体重18-22g，分为4组，每组12只，作为免疫三组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定；选健康雄性小鼠48只，体重18-22g，分为4组，每组12只，作为免疫四组，进行迟发型变态反应实验；选健康雄性小鼠48只，体重18-22g，分为4组，每组12只，作为免疫五组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。

1.3剂量选择：软胶囊推荐量4粒/日、0.5g/粒，即2.0g/60kg BW，相当于0.033g/kg BW，以日推荐成人摄入量的1、10和30倍设置灌胃剂量，即0.03、0.33、1.0g/kg BW，各剂量组以大豆油稀释。以大豆油为阴性对照组，各组小鼠灌胃量均为0.2mL/10kg BW，连续灌胃30天后测各项免疫指标。

1.4仪器与试剂：

电子天平(0.1g)、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722分光光度计、恒温水浴、酶标仪、显微镜等。

无菌手术器械、游标卡尺(精密度0.02mm)、微量注射器(25μL)、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。

绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank’s液(pH 7.2-7.4)、RPMI1640培养液、小牛血清、青链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、1％冰醋酸、1mol/L的HCl溶液、酸性异丙醇(96ml异丙醇加4ml盐酸)、MTT、PBS缓冲液(pH 7.2-7.4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂(碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钾0.2g，氯化钾0.05g，加蒸馏水至1000ml)、YAC-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶1、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH 8.2)、1％NP40、印度墨汁、Na₂Co₃、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。

1.5实验方法

1.5.1脏器/体重比值测定

小鼠称重后脱臼处死，取脾脏和胸腺，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称重，计算脾脏/体重比值和胸腺/体重比值。

1.5.2迟发型变态反应(足跖增厚法DTH)

取羊血，生理盐水洗涤3次，小鼠用2％(V/V)SRBC腹腔免疫，每只鼠注射0.2ml(约1×10⁸个SRBC)。在免疫4天，测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射20％(V/V)SRBC，每只鼠20μL(约1×10⁸个SRBC)，注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。

1.5.3ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)

无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液，用4块纱布将脾磨碎，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1ml的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度为3×10⁶个/ml。再将每一份细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μL ConA液(相当于7.5μg/ml)，另一孔作对照，置5％CO₂37℃CO₂培养箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸上去清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后将溶解液直接移入2ml比色杯中，722分光光度上在波570nm测OD值。

1.5.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

绵羊颈静脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，放入4℃冰箱保存备用，可保存2周。

将压积SRBC用生理盐水配成2％(V/V)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml，将于用SRBC免疫4-5天后的小鼠颈锥脱臼处死，取脾，放入盛有Hank’s液的小平皿，轻轻将脾磨碎，制成细胞悬液，然后经4块纱布过滤，用Hank’s液冼2次，每次离心(1000r/min)10min，最后将脾细胞悬液浮在5mlRPMI1640培养液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×10⁶个/ml。

将琼脂糖加热溶解后，放45-50℃水浴保温，与等量pH 7.2-7.42倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加10％(V/V，用SA液配制)压积SRBC50μL、脾细胞悬液20μL，迅速混合后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1∶8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空班数。

1.5.5半数溶血值(HC₅₀)的测定

取羊血，生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min，每只鼠经腹腔注射2％(V/V，用生理盐水配制)压积SRBC 0.2ml进行免疫。4天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释(400倍)。将稀释后的血清1ml置试管内，依次加入10％(V/V)SRBC 0.5ml，补体1ml(用SA缓冲液按1∶8稀释)，另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温15-30min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清1ml，加都氏试剂3ml，同时取10％(V/V)SRBC 0.25ml，加都氏试剂至4ml，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，按下式计算。

HC₅₀＝样品光密度值/SRBC半数浴血时的光密度值×稀释倍数

1.5.6小鼠碳廓清实验

小鼠尾静脉注射1∶4倍稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并立刻将其加到2ml 0.1％Na₂CO₃溶液中，用722分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na₂CO₃溶液作阴性对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重，按下式计算吞噬指数a：

k＝(lgOD₁-lgOD₂)/(t₂-t₁)

1.5.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

小鼠腹腔注射20％(V/V用生理盐水配制)压积鸡红细胞(2000r/min，10min)悬液1ml，间隔30min，颈椎脱臼处死，取腹腔巨噬细胞洗液1ml，滴于载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育20min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇固定，4％(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数，每片计数100个巨噬细胞。

按下式计算吞噬率和吞噬指数：

吞噬率％＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100

吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

1.5.8NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)

实验前24小时将靶细胞YAC-1进行传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10⁵个/ml。受试小鼠拉颈处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗3次，1500r/min离心10min，再用2ml含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用台酚兰染色计数(活细胞数应在95％以上)，调整细胞浓度为2×10⁷个/ml，使效靶比为50∶1。取靶细胞和效应细胞各100μL，加入U形96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，37℃，5％CO₂培养箱中培养4h，将96孔板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置酶标板中，加入LDH基质液100μL，反应10min，然后每孔加入1mol的HCl液30μL终止反应，在酶标仪490nm处测OD值，NK活性按下式计算：

NK细胞活性％＝(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100％

LDH基质液的配制：乳酸钠5×10^-2mol/L；硝酸氯化四氮唑6.6×10^-4mol/L；吩嗪二甲酯硫酸盐2.8×10^-4mol/L；氧化型辅酶I  1.3×10^-3mol/L。

将上述试剂溶于0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液中(pH8.2)。

1.6实验数据用SPSS10.0软件进行方差分析。

2结果

2.1软胶囊对小鼠体重的影响，结果见试1表1-试1表4。

试1表1软胶囊对免疫一组小鼠体重的影响

组别	动物数(只)	始重(g)	终重(g)	增重(g)	p
						阴性对照	12	19.0±0.6	37.5±1.0	18.5±1.1	---
低剂量组	12	19.1±0.9	38.3±1.5	19.1±1.4	0.284
						中剂量组	12	19.3±0.5	37.2±1.0	17.9±1.3	0.384
高剂量组	12	19.1±0.7	37.9±1.8	18.8±2.0	0.576

p值：各实验组与阴性对照组比较

由试1表1可见，经统计学处理，小鼠的初始体重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即小鼠的初始体重在各组间较为均衡，经给予软胶囊30天，各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即软胶囊对小鼠体重增重无影响。

试1表2软胶囊对免疫二组小鼠体重的影响

组别	动物数(只)	始重(g)	终重(g)	增重(g)	p
						阴性对照	12	18.7±0.5	37.1±1.2	18.4±1.2	---
低剂量组	12	18.9±0.7	37.4±1.4	18.5±1.5	0.931
						中剂量组	12	18.4±0.4	37.4±1.8	19.0±1.9	0.418
高剂量组	12	18.6±0.8	37.8±1.5	19.1±1.9	0.304

p值：各实验组与阴性对照组比较

由试1表2可见，经统计学处理，小鼠的初始体重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即小鼠的初始体重在各组间较为均衡，经给予软胶囊30天，各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即软胶囊对小鼠体重增重无影响。

试1表3软胶囊对免疫三组小鼠体重的影响

组别	动物数(只)	始重(g)	终重(g)	增重(g)	p
						阴性对照	12	19.0±0.7	36.6±0.8	17.6±1.2	---
低剂量组	12	19.1±0.5	36.9±1.7	17.8±1.7	0.681
						中剂量组	12	18.9±0.6	37.1±1.4	18.2±1.6	0.280
高剂量组	12	19.1±0.9	37.0±1.2	17.9±1.6	0.543

p值：各实验组与阴性对照组比较

由试1表4可见，经统计学处理，小鼠的初始体重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即小鼠的初始体重在各组间较为均衡，经给予软胶囊30天，各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即软胶囊对小鼠体重增重无影响。

2.2软胶囊对小鼠脏器/体重比值的影响

试1表4软胶囊对小鼠脏器/体重比值的影响

组别	动物数(只)	脾脏/体重比值(mg/g)	p<sub>1</sub>	胸腺/体重比值(mg/g)	p<sub>2</sub>
						阴性对照	12	5.02±0.24	---	2.96±0.60	---
低剂量组	12	5.05±0.21	0.813	2.85±0.17	0.395
						中剂量组	12	5.09±0.25	0.533	2.89±0.08	0.568
高剂量组	12	5.14±0.31	0.280	2.94±0.17	0.844

脾脏/体重比值p₁值：各实验组与阴性对照组比较

胸腺/体重比值p₂值：各实验组与阴性对照组比较

由试1表4可见，经给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，经统计学处理，其脾脏/体重比值和胸腺/体重比值在低、中、高剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即软胶囊对小鼠的脏器比重无影响。

2.3软胶囊对小鼠细胞免疫功能的影响

2.3.1软胶囊对小鼠体重和迟发型变态反应(DTH)的影响，结果见试1表5。

试1表5软胶囊对小鼠体重和迟发型变态反应(DTH)的影响

组别	动物数(只)	始重(g)	终重(g)	增重(g)	p<sub>1</sub>	足跖肿胀度	p<sub>2</sub>
								阴性对照	12	19.2±0.8	37.1±0.9	17.9±1.3	---	±	---
低剂量组	12	19.8±0.9	37.8±1.1	18.0±1.0	0.911	±	0.695
								中剂量组	12	20.3±0.8	38.2±1.7	18.2±1.9	0.672	±	0.033
高剂量组	12	20.2±1.0	38.3±1.6	18.1±2.0	0.794	±	0.007

p₁值：各实验组与阴性对照组比较

p₂值：各实验组与阴性对照组比较^＊p＜0.05  ^＊＊p＜0.01

由试1表5可见，给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，经统计学处理，各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)；其足跖肿胀度在低剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)；在中剂量组与阴性对照组间比较有显著性差异(p＜0.05)；在高剂量组与阴性对照组间比较有高度显著性差异(p＜0.01)，即中、高剂量的软胶囊能增强小鼠的迟发型变态反应。

2.3.2软胶囊对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响，结果见试1表6。

试1表6软胶囊对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响

组别	动物数(只)	淋巴细胞增殖能力(OD差值)	p
				阴性对照	12	0.152±0.032	---
低剂量组	12	0.159±0.036	0.647
				中剂量组	12	0.156±0.040	0.810
高剂量组	12	0.165±0.041	0.414

p值：各实验组与阴性对照组比较

由试1表6可见，给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，经统计学处理，其淋巴细胞的增殖能力在低、中、高剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即软胶囊对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力无影响。

2.4软胶囊对体液免疫的影响

2.4.1软胶囊对抗体生成细胞数的影响，结果见试1表7。

试1表7软胶囊对小鼠抗体生成细胞数的影响

组别	动物数(只)	溶血空斑数(×10<sup>3</sup>/全脾)	p
				阴性对照	12	169.5±10.1	---
低剂量组	12	177.0±11.2	0.136
				中剂量组	12	177.8±14.0	0.098
高剂量组	12	180.3±12.7<sup>＊</sup>	0.035

p值：各实验组与阴性对照组比较  ^＊p＜0.05

由试1表7可见，给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，经统计学处理，其抗体生成细胞数在低、中剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)；高剂量组与阴性对照组间比较有显著性差异(p＜0.05)，即高剂量的软胶囊对小鼠的抗体生成细胞数有明显的影响。

2.4.2软胶囊对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响，结果见试1表8。

试1表8软胶囊对小鼠半数溶血值HC₅₀的影响

组别	动物数(只)	样品HC<sub>50</sub>	p
				阴性对照	12	156±11	---
低剂量组	12	159±8	0.467
				中剂量组	12	161±12	0.238
高剂量组	12	166±12<sup>＊</sup>	0.024

p值：各实验组与阴性对照组比较^＊p＜0.05

由试1表8可见，给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，经统计学处理，其半数溶血值在低、中剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，在高剂量组与阴性对照组间比较有明显性差异(p＜0.05)，即高剂量的软胶囊能提高小鼠半数溶血值。

2.5软胶囊对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

2.5.1软胶囊对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能的影响，结果见试1表9。

试1表9软胶囊对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能的影响

组别	动物数(只)	吞噬指数(a)	p
				阴性对照	12	5.64±0.33	---
低剂量组	12	5.86±0.59	0.341
				中剂量组	12	5.98±0.69	0.137
高剂量组	12	6.07±0.52	0.065

p值：各实验组与阴性对照组比较

由试1表9可见，给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，经统计学处理，其碳廓清功能在低、中、高剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即软胶囊对小鼠单核-巨噬细胞的碳廓清能力无影响。

2.5.2软胶囊对小鼠体重和巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力的影响，结果见试1表10。

试1表10软胶囊对小鼠体重和巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力的影响

组别	动物数(只)	始重(g)	终重(g)	增重(g)	p<sub>1</sub>	吞噬率(％)	p<sub>2</sub>	吞噬指数	p<sub>3</sub>
										阴性对照	12	19.1±0.9	37.0±1.4	17.9±1.5	---	33±7	---	0.42±0.08	---
低剂量组	12	19.3±0.7	37.6±1.4	18.3±1.6	0.575	35±5	0.322	0.45±0.06	0.363
										中剂量组	12	19.4±1.1	37.7±1.6	18.2±1.9	0.617	36±5	0.247	0.46±0.07	0.162
高剂量组	12	19.7±0.9	38.0±1.7	18.3±1.7	0.527	38±7	0.064	0.47±0.06	0.092

p₁值：各实验组与阴性对照组比较

吞噬率(％)p₂值：各实验组与阴性对照组比较

吞噬指数p₃值：各实验组与阴性对照组比较

由试1表10可见，给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，经统计学处理，各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，其吞噬率在低、中、高剂量组与阴性对照组间比较均无显著性差异(p＞0.05)，即软胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的能力无影响。

2.6软胶囊对小鼠NK细胞活性的影响，结果见试1表11。

试1表11软胶囊对小鼠NK细胞活性的影响

组别	动物数(只)	NK细胞活性(％)	p
				阴性对照	12	6.7±2.1	---
低剂量组	12	6.9±2.0	0.826
				中剂量组	12	7.0±2.2	0.680
高剂量组	12	7.6±2.3	0.283

p值：各实验组与阴性对照组比较

由试1表11可见，给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，经统计学处理，其NK细胞活性在低、中、高剂量组与阴性对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即软胶囊对小鼠的NK细胞活性无影响。

3小结

经给予小鼠不同剂量的软胶囊30天，能提高小鼠的半数溶血值，小鼠抗体生成细胞数，能增强小鼠的迟发型变态反应；对小鼠体重的增长、脏器/体重比值、小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的能力、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬红细胞的能力、NK细胞活性无影响。由此判定，软胶囊具有增强免疫力功能作用。

试验例2：本发明保健食品对胃损伤有辅助保护功能的检验

为考查本发明保健食品对胃损伤有辅助保护功能，将实施例3所得2kg(0.5g/粒)本发明保健食品软胶囊(以下简称：软胶囊)送山东省疾病预防控制中心，依据卫法监发(2003)42号《保健食品检验与评价技术规范》功能学评价及检验方法对胃损伤有辅助保护功能，检验其对胃损伤有辅助保护功能。检验报告如下：

1材料和方法

1.1样品：本发明保健食品，内容物为黑色油状混合物。

1.2实验动物：选用北京维通利华实验动物技术有限公司繁殖的SPF级健康SD雄性大鼠40只(许可证号为SCXK-(京)-2002-0003)，体重160-180g。

1.3剂量选择：软胶囊的人体推荐用量为每日2g/60kg体重，实验设三个剂量组：即0.17g/kg体重组(低)、0.33g/kg体重组(中)和0.99g/kg体重组(高)，低、中、高三个组的剂量分别为人体推荐量的5倍、10倍、30倍，用1％羧甲基纤维素钠将样品配制至所需浓度，即取0.68g、1.32g、3.96g样品用1％羧甲基纤维素钠配至40ml，同时设立1％羧甲基纤维素钠对照组，按1ml/100g体重灌胃30天。

1.4仪器与试剂：电子数显卡尺，无水乙醇，甲醛。

1.5实验方法：取大鼠40只，随机分为4组，剂量组灌胃软胶囊，对照组灌胃1％羧甲基纤维素钠，连续30天，解剖前动物禁食不禁水24h。实验结束当天灌胃受试物1h后再灌胃无水乙醇1ml/只。1h后处死动物，取胃于10％甲醛溶液中固定20min后沿胃大弯剪开，洗净内容物，用游标卡尺测量其充血和弥漫性出血条带的长和宽(精确到0.01m)，计算每鼠的充血和弥漫性出血条带的总面积。

1.6试验数据用Excel软件建立数据库，用SPSS软件进行方差分析，再用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较法(Dunnett检验法)进行统计分析

2结果

2.1软胶囊对大鼠体重的影响，结果见试2表1。

试2表1各组大鼠的初始体重、中期体重和末期体重

组别(g/kg体重)	动物数(只)	初始体重(g)	中期体重(g)	末期体重(g)	p值
						0.00	10	168±5	232±9	326±21
0.17	10	173±4	233±14	325±20	＞0.05
						0.33	10	166±4	228±20	314±14	＞0.05
0.99	10	168±4	228±14	306±18	＞0.05

由试2表1可见，给予软胶囊30天后，各组动物的体重无显著性差异(p＞0.05)

2.2软胶囊对无水乙醇引起的大鼠胃粘膜损伤的影响，结果见试1表2。

试2表2软胶囊对无水乙醇引起的大鼠胃粘膜损伤的影响

组别(g/kg体重)	动物数(只)	胃粘膜出血带面积(mm<sup>2</sup>)	p值
				0.00	10	134.87±71.15
0.17	10	86.81±33.73	＞0.05
				0.33	10	55.98±40.12	＜0.01
0.99	10	66.81±47.84	＜0.01

由试2表2可见，给予软胶囊30天后，软胶囊中、高剂量组的胃粘膜损伤面积显著小于对照组(p＜0.01、p＜0.05)，说明软胶囊对无水乙醇引起的大鼠胃粘膜损伤有一定的保护作用。

3结论

实验结果证明，以0.17、0.33、0.99g/kg体重的软胶囊给予大鼠灌胃30天，中、高剂量组的胃粘膜损伤面积显著小于对照组(p＜0.01、p＜0.05)。显示本发明软胶囊对无水乙醇引起的大鼠胃粘膜损伤有一定的辅助保护作用。

试验例3：本发明保健食品对胃损伤有辅助保护功能人体试食试验

为考查本发明保健食品对胃损伤有辅助保护功能，将实施例3所得1000粒、0.5g/粒本发明保健食品软胶囊(以下简称：软胶囊)送山东省千佛山医院，依据《保健食品检验与评价技术规范》进行对胃损伤有辅助保护功能人体试食试验，检验报告如下：

1材料与方法

1.1样品：软胶囊，0.5g/粒。

1.2受试者选择

1.2.1纳入标准：符合慢性浅表性胃炎诊断标准，且部分经过胃镜筛选确诊为慢性浅表性胃炎的自愿受试者。

1.2.2慢性浅表性胃炎的诊断标准：病程迁延，有不同程序的消化不良、上腹痛、烧心、嗳气、反酸、腹胀等临床症状，可有上腹部轻度压痛。符合慢性浅表性胃炎纤维胃镜诊断标准及活体组织检查诊断标准，排除胃溃疡患者。

1.2.3排除受试者标准：年龄在18岁以下或65岁以上，妊娠或哺乳期妇女，过敏体质及对本样品过敏者；继发性慢性胃炎者；合并有心血管、脑血管、肝、肾和造血系统严重全身性疾病者；症状、体征分级为重症者；经常用药、嗜酒、大量吸烟者；有消化系统溃疡的病人；正在服用其他治疗药物或接受其他治疗者；短期内服用与受试功能有关的物品，影响对结果的判断者；未按规定服用样品，无法判断功效，或资料不全等影响功效或安全性判定者。参加体检人数为136人，合格人数为104人，实际统计人数为104人。

1.3试食方法：

104例受试者，随机分为两组，每组52人。对照组不服用本品相似的药物或影响本品结果判定的药物，为空白对照。受试组服用软胶囊，每日午餐及晚餐前各食用一次，每次2粒，在试验期间停用其他用于慢性胃病的物品。两组均观察30天，必要时延长至45天。试验期间不改变原来的饮食习惯。各组采用自身对照设计，两组间为组间对照设计。

1.4仪器与试剂：

F-820型血球记数仪，MIDIRON尿十项分析仪(德国产)，Olympus全自动生化分析仪型号AU600(日本产)，生化试剂盒全部由中生公司提供。

1.5统计学方法：

实验数据为计量资料，采用t检验。自身对照采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者进行方差齐性检验。

2观察指标

2.1安全性指标

一般情况：包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等；血、尿、便常规检查；肝肾功能检查；胸透、心电图、腹部B超检查(在试验开始前检查1次)。

2.2功效指标

2.2.1症状观察：胃痛、嗳气、反酸、腹胀、少食等临床症状。按症状轻重统计积分(重度3分，中度2分，轻度1分)。

2.2.2体征观察：剑突下压痛程度检查，根据疼痛程序分为轻(1分)、中(2分)、重(3分)。

2.2.3胃镜观察：按胃镜下胃粘膜病变种类及程度计分，包括糜烂、出血、充血、水肿等，重度3分、中度2分、轻度1分。在试食组和对照组随机各选15例进行胃镜复查。

3结果判定：

试食前后试食组自身比较及试食后试食组与对照组间比较，临床症状、体征积分明显减少，可判定该受试样品对胃粘膜损伤有辅助保护作用。

4结果

4.1一般资料：

试食组52例，男27例，女26例，平均年龄44.37±8.64岁，平均病程5.29年；对照组52例，男29例，女23例，平均年龄45.12±8.35岁，平均病程5.35年。

4.2观察前一般情况比较，见试3表1、试3表2。

试3表1观察前一般情况比较

试3表2 试食前服用药物情况

分组	例数	胃肠动力药	粘膜保护剂	抑酸剂	未用药
						试食组	52	12	19	29	7
对照组	52	15	22	26	5

由试3表1、试3表2可见，试食前试食组与对照组各项指标无明显差异，具有可比性。

4.3功效观察

4.3.1试食后两组症状改善情况，见试3表3。

试3表3试食后两组症状的改善

在改善症状方面，两组有明显差异。

4.3.2两组试食前后症状积分的对比，见试3表4。

试3表4两组试食前后症状积分的对比(分，X±SD)

自身对照^＊p＜0.01，#组间对照p＜0.01，观察30天后，试食组症状积分明显降低，与对照组差异显著。

4.3.3试食前后试食组各症状积分的比较，见试3表5。

试3表5试食前后试食组各症状积分的比较(分，X±SD)

分组	例数	腹痛	嗳气	反酸	腹胀	少食
							试食组	52	1.75±0.24	1.55±0.36	1.66±0.46	1.84±0.50	1.68±0.32
对照组	52	1.13±0.30<sup>＊</sup>	1.38±0.29	1.05±0.17<sup>＊</sup>	1.19±0.26<sup>＊</sup>	1.51±0.24

自身对照^＊p＜0.01，试食组试食后胃痛、反酸、腹胀的症状较试食前有明显改善，嗳气、少食症状有所改善，但与试食前比较，无显著性差异。

4.3.4试食后两组各症状的比较，见试3表6。

试3表6试食后两组各症状的比较(分，X±SD)

分组	例数	腹痛	嗳气	反酸	腹胀	少食
							试食组	52	1.69±0.26	1.54±0.18	1.58±0.33	1.69±0.20	1.70±0.18
对照组	52	1.13±0.30<sup>＊</sup>	1.38±0.29	1.05±0.17<sup>＊</sup>	1.19±0.26<sup>＊</sup>	1.51±0.24

组间对照^＊p＜0.01，观察30天后，试食组各症状积分比对照组有明显下降。

4.3.5试食前后两组体征改善情况，见试3表7。

试3表7试食前后两组体征改善情况

分组	例数	显效	有效	无效	改善率(％)
						试食组	52	15	23	15	73.08
对照组	52	4	15	34	36.54

观察30天后，试食组剑突下压痛有明显好转。

4.3.6试食前后两组体征积分的对比，见试3表8。

试3表8试食前后两组体征积分的对比(分，X±SD)

自身对照^＊p＜0.01，^＊＊组间对照^＊p＜0.01，试食后试食组体征积分明显下降，与对照组相比有显著性差异

4.3.7试食前后两组胃镜检查情况比较，见试3表9。

试3表9试食前后两组胃镜检查情况

试食后试食组胃粘膜炎症积分有所下降，但与对照组相比无显著差异。

4.4安全指标的观察

4.4.1试食前后两组血液学等指标检测情况，见试3表10。

试3表10试食前后两组血液学等指标检测情况

两组试食前后，血液及尿、便常规检测各项指标均在正常范围内。

4.4.2胸透、心电图、B超检查：两组受试者均在正常范围。

5.总结

5.1软胶囊可明显改善慢性浅表性胃炎患者的临床症状，尤其是胃痛、反酸、腹胀等症状。

5.2软胶囊能较好地缓解患者剑突下压痛的体征。

5.3胃镜检查发现，软胶囊对慢性浅表性胃炎患者胃粘膜炎症有一定的改善作用。

5.4服用软胶囊后，血红蛋白、红细胞、白细胞、血清总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌肝、尿素及尿、便常规等各项检查指标均在正常范围，说明本品对试食者身体健康无不良影响。

6.3软胶囊在试食过程中未观察到过敏及其它不良反应。

结论：

统计结果表明：软胶囊对胃粘膜有明显的保护作用，试食组临床状积分较试食组前明显下降，剑突下压痛明显减轻，改善率达73.08％，而对照组为36.54％，两组有显著性差异(p＜0.01)。试食后试食组胃镜下观察病变较试食前有所改善，试食软胶囊前后血红蛋白、红细胞、白细胞、血清总蛋白、白蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐及尿常规、便常规等各项临床指标均在正常范围，表明软胶囊对试食者的身体健康无不良影响。

Claims (5)

1、一种增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品，其特征在于它是由下列重量份的活性原料，沙棘籽油50-95份，蜂胶5-20份，并按下述方法制成，

(1)将所述重量份的蜂胶粉碎后，加入6-10倍重量的70％乙醇，在60-80℃下，浸提1-3次，每次1-2小时，合并提取液后过滤，得滤液；

(2)将滤液减压真空浓缩至相对密度为1.30-1.33的稠膏，将稠膏干燥、粉碎成120目细粉，得蜂胶提取物干粉；

(3)将蜂胶提取物干粉与所述重量份的沙棘籽油混合均匀，即得。

2、根据权利要求1所述的增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品，其特征在于所说的保健食品制成软胶囊、硬胶囊、颗粒剂、片剂、口服液。

3、根据权利要求1或2所述的增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品，其特征在于制备软胶囊所用的辅料包括下列重量份的原料：

蜂蜡0.05-4份。

4、根据权利要求3所述的增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品，其特征在于制备软胶囊所用囊材的原料重量配比为：

明胶∶甘油∶聚乙二醇∶水＝1∶(0.2-0.6)∶(0.6-1)∶(0.2-0.5)。

5、一种增强免疫力、对胃粘膜损伤有保护功能的保健食品的制备方法，其特征在于它是由下列重量份的活性原料，沙棘籽油50-95份，蜂胶5-20份，并按下述方法制成：

(1)将所述重量份的蜂胶粉碎后，加入6-10倍重量的70％乙醇，在60-80℃下，浸提1-3次，每次1-2小时，合并提取液后过滤，得滤液；

(2)将滤液减压真空浓缩至相对密度为1.30-1.33的稠膏，将稠膏干燥、粉碎成120目细粉，得蜂胶提取物干粉；

(3)将蜂胶提取物干粉与所述重量份的沙棘籽油混合均匀，即得。