CN100389659C - 消毒方法,消毒/洗涤剂,以及洗涤方法 - Google Patents

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Abstract

一种消毒方法，其特征在于包括用一种水溶液处理附着有细菌细胞的材料，该溶液含有能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶的浓度能够提供2.5U/mL或更高的溶菌活性，钙离子浓度(指CaO)为10ppm或更低，并且pH值高于8，但不超过12。一种消毒方法，其特征在于包括用一种水溶液处理附着有细菌细胞的材料，该溶液含有能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶的浓度能够提供15U/mL或更高的溶菌活性，并且pH值高于8，但不超过12。

Description

消毒方法，消毒/洗涤剂，以及洗涤方法
技术领域
本发明涉及消毒方法，消毒去垢组合物，和洗涤方法，它们都被设计成能够通过用溶菌酶处理对细菌污染的材料进行有效消毒。
背景技术
对细菌污染的材料进行消毒的常规方法，包括依赖于杀细菌剂或漂白剂的方法(日本专利特开：昭63-131124，2000-26894，昭63-286158和平11-29797等)。
业已提出了用于隐形眼镜的采用酶促反应的消毒剂。它包括作用于微生物细胞壁的酶，作用于细胞膜的酶，抗细菌蛋白和抗真菌药物(日本专利特开：平9-10288)。
不幸的是，上述常规方法具有需要强刺激性杀细菌剂或特殊化合物的缺陷。因此，存在对用弱刺激性成分进行有效消毒的新方法和化合物的需要。另外，上述常规方法被设计成应用于活的细菌。不过，由于死亡细菌通常导致了厨房和浴室的气味和发粘以及纺织品的异味这一事实，存在对能够有效分解和除去死亡细菌的方法和化合物的需要
发明内容
本发明的目的是提供消毒方法，消毒去垢组合物，和洗涤方法，它们都被设计成能够通过低刺激成分对细菌进行分解和去除。
本发明人发现，如果用一种含有特定浓度的溶菌酶的水溶液处理受到细菌污染的材料，能够有效分解和除去死亡的细菌，所述酶能够耐受螯合剂，所述酶的浓度足以使它的溶菌活性具有特定水平，还含有特定含量的钙离子，并且pH值高于8，但不超过12。这一发现导致了本发明。
本发明涉及消毒方法，消毒洗涤组合物，和用于洗涤纺织品的方法，下面将对其作更详细的说明。
(1)一种消毒方法，包括
用一种水溶液处理受到细菌污染的材料，该溶液含有能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶的浓度足以使它的溶菌活性水平不低于2.5U/mL，并且还含有浓度不超过10ppm的CaO形式的钙离子，pH值高于8，但不超过12。
(2)一种消毒方法，包括
用一种水溶液处理受到细菌污染的材料，该溶液含有能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶的浓度足以使它的溶菌活性水平不低于15U/mL，并且pH值高于8，但不超过12。
(3)一种不含磷酸盐的消毒洗涤组合物，在它的普通形式或它的水溶液形式下，含有能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶的浓度足以使它的溶菌活性水平不低于2.5U/mL，并且还含有浓度不超过10ppm的CaO形式的钙离子，pH值高于8，但不超过12。
(4)一种不含磷酸盐的消毒洗涤组合物，在它的普通形式或它的水溶液形式下，含有能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶的浓度足以使它的溶菌活性水平不低于15U/mL，并且pH值高于8，但不超过12。
(5)一种用不含磷酸盐的含有能耐受螯合剂的溶菌酶的消毒洗涤组合物洗涤纺织品的方法，所述方法包括用一种水溶液洗涤纺织品，以便消毒，所述溶液是用所述消毒洗涤组合物制备的，以便
(a)它含有能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶足以使它的溶菌活性水平不低于2.5U/mL，并且还含有浓度不超过10ppm的CaO形式的钙离子，并且pH值高于8，但不超过12，或：
(b)它含有能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶足以使它的溶菌活性水平不低于15U/mL，并且pH值高于8，但不超过12，
从而避免在室内干燥期间或在干燥之后储藏期间，纺织品发出异味。
实施本发明的最佳方式
在本发明中，术语“能耐受螯合剂的溶菌酶”是能够在存在螯合剂的情况下保持其溶菌活性的任何溶菌酶。具体地讲，它是保持其溶菌活性不低于50％，优选不低于80％的酶，所述活性被定义为(U/U’)×100，其中，U表示在存在螯合剂(EDTA-4Na)的情况下测定的活性单位，而U’表示在没有螯合剂(EDTA-4Na)的情况下测定的活性单位，测定是通过在下面提到的“测定单位(U)的方法”进行的。优选溶菌酶是具有溶菌活性的蛋白酶。溶菌活性的单位定义如下。
<测定单位(U)的方法>
通过在121℃的温度下加热蒸馏水20分钟，制备消过毒的水。将EDTA-4Na(111ppm)，碳酸氢钠(278ppm)，和所述酶溶解在该消过毒的水中。用氢氧化钠将该溶液调整到PH 8.5，从该溶液中取出9mL的量，并且在25℃的水浴中保温5分钟。向该样品溶液中添加1mL含有加热失活的大肠杆菌ATCC8739的液体，大肠杆菌的含量使溶液的浊度为大约3.3，浊度是用分光光度计在660nm的波长下测定的。在搅拌后30秒之内，该溶液的浊度为0.3±0.03，该浊度是用分光光度计在660nm的波长下测定的。所得到的溶液被称为“U测试溶液”。该U测试溶液在25℃的水浴中保温10分钟。搅拌之后，在660nm的波长下测定该溶液的浊度。将能在10分钟内使U测试溶液的浊度降低0.05所需要的蛋白酶的量限定为10个单位。顺便说一下，溶菌率是通过下面的方法测定的。
<用于测定溶菌率的方法>
(测试细菌溶液的制备)
将规定量的(37g/L)心脑浸提介质(购自Difco)溶解在纯化的水中。在500mL的Skaguchi烧瓶中对所得到的溶液(50ml)进行消毒。用一个大肠杆菌ATCC8739的白金环接种所述消过毒的溶液。将接种过的培养基在37℃下摇晃培养18小时。通过以3000rpm的速度(大约1800G)离心分离5分钟来收集细菌细胞。将收集到的细菌细胞悬浮在消过毒的水中，并且对悬浮液进行再次离心。将收集到的细菌细胞悬浮在消过毒的水中。在90℃下加热20分钟，然后通过离心收集加热过的细胞。将收集到的细菌细胞悬浮在消过毒的水中，使得悬浮液的浊度为3.3，该浊度是在660nm的波长下测定的。
(测定溶菌率)
将进行溶菌率测定的样品溶液(9ml)放入试管中。在25℃的水浴中保温5分钟之后，将所述样品溶液与按照上述方法获得的1ml细菌细胞悬浮液混合。从而获得了用于测定溶菌率的溶液(10ml)。在反应开始后30秒之内，在660nm波长下测定该溶液的浊度。在25℃的水浴中将该溶液保温10分钟。搅拌之后，在660nm的波长下测定该溶液的浊度。用1ml消过毒的水取代所述细菌细胞悬浮液进行空白测定。顺便说一下，所述“用于测定溶菌率的溶液(10ml)”是这样制备的：使它具有与用于测定的所述水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)相同的浓度。
溶菌率是通过下面的公式获得的。
Figure C0380749700071
根据本发明，上面的(1)中所定义的水溶液，上面的(3)中所定义的消毒洗涤组合物(原始形式或用水稀释过的)，以及上面的(5)的(a)中所定义的消毒洗涤组合物(它被简称为2.5U/mL和以上的溶液)，应当含有足以使其溶菌活性水平不低于2.5U/ml的浓度的溶菌酶，优选3-400000U/mL，更优选15-400000U/mL。另外，上面的(2)中所定义的水溶液，上面的(4)中所定义的消毒洗涤组合物(原始形式或用水稀释过的)，以及上面的(5)中的(b)所定义的消毒洗涤组合物(它被简称为15U/mL和以上的溶液)，应当含有足以使其溶菌活性水平不低于15U/ml的浓度的溶菌酶，优选不低于16U/mL，更优选20-400000U/mL。换句话说，应当按照上面的规定，对所述溶液中溶菌酶的浓度进行适当调整。在用水对消毒洗涤组合物进行稀释之后用于洗涤的场合下，所述溶菌酶的浓度上限应当优选是这样的：对于2.5U/mL的溶液来说，溶菌活性为3000U/mL，对于15U/mL和以上的溶液来说，溶菌活性为1000U/mL。顺便说一下，本发明溶液的溶菌活性(U/mL)是通过根据所述酶的溶菌活性(U/单位重量)，由该溶液中每一种酶的浓度换算得到的。顺便说一下，2.5U/mL和以上的溶液以及15U/mL和以上的溶液，统一地、并且简单地表示溶液形式的水溶液或消毒洗涤组合物。
溶菌酶的典型例子包括以下酶。洒维奈斯12T，洒维奈斯16L，Esperase 4T，Everlase 8T，Kannase 24TK，Alcalase 2T(均购自Novozymes公司)。分别由芽孢杆菌P，芽孢杆菌K，芽孢杆菌X，和芽孢杆菌Y生产的P-酶，K-酶，X-酶和Y-酶，所述细菌保存在发酵研究所，保藏号分别为8090，8091，8092和8088。上述例子中，优选的是洒维奈斯12T，洒维奈斯16L，Esperase 4T，Everlase 8T，Kannase24TK，Alcalase 2T，Deozyme，和Y酶。所述溶菌酶在与诸如脂酶的任何其他酶组合之后能产生增强的溶菌效果，由此产生良好的去污力。
脂酶的活性是变化的，其活性通常是经由测定它通过分解作用从底物中释放出来的脂肪酸的量确定的。可以在本发明的洗涤组合物中掺入具有酶活性的脂酶，以便在底物被分解时，从三油精中释放的脂肪酸的量，不低于从n-十六烷基棕榈酸酯中释放的脂肪酸的量(以摩尔数计算)的2倍。所述脂酶的活性是通过按照以下方法测定底物的分解确定的。
制备去离子水的基础溶液，它含有200ppm的α-磺基脂肪酸甲酯的钠盐(α-SF-Na)，200ppm的碳酸钠，和30ppm的(以CaO计)氯化钙，以便将德国硬度调整到3°DH。α-SF-Na是由比例为2∶8(重量比)的C14和C16脂肪酸组成。将温度保持在22.5±0.5℃的所述基础溶液(100±0.2mL)放入有磁力搅棒(直径8mm，长度30mm)的烧杯(内径63mm，高度80mm)中。在所述基础溶液中提供0.2g三油精(购自Fulka的制剂)或n-十六烷基棕榈酸酯(购自Tokyo Kasei Kogyo的制剂)作底物。在搅拌15-20分钟之后，该溶液的pH变得稳定(大约10-10.5)。该pH值被称为起始pH值。搅拌是通过使用滴定装置(TS-980，购自Hiranum Sangyo)，以200rpm的速度实现的。pH值是通过连接在所述滴定装置上的pH电极测定的。
通过在室温下连续搅拌，向该溶液中滴加0.1N的KOH溶液，以便将起始PH保持在大约10-10.5。在开始滴加1分钟之后，添加脂酶样品，以便脂酶在所述基础溶液中的浓度保持在0.1-0.01ppm(指蛋白质)范围内。测定业已滴加了61分钟的0.1N KOH溶液的量。对于三油精和n-十六烷基棕榈酸酯来说，脂酶的浓度应当相同。
在添加脂酶之后滴加的KOH溶液的量被视为从底物(它是三油精或n-十六烷基棕榈酸酯)中释放出来的脂肪酸的量。重复以上过程10次，并且将平均值用于计算所述酶活性(它是从三油精中释放出来的脂肪酸的量，和从n-十六烷基棕榈酸酯中释放出来的脂肪酸的量的摩尔比)。
具有上述酶活性的脂酶的例子是源于柔毛腐质霉的酶(披露于专利号：平11-510699的PCT日文翻译件中)。这种酶能够以“Lipex”为商标，从Novozymes公司购买。
脂酶的含量优选为所述水溶液总重量或所述消毒洗涤组合物(溶液形式)的0.01-5wt％，特别是0.1-2wt％(脂酶制剂)。
所述脂酶可以用淀粉水解酶代替，如在日本专利特开：平2-49584中披露的最佳pH偏碱性的酶；在日本PCT申请号：2001-521739中披露的最佳温度不超过60℃的酶；在日本PCT申请号：平11-50300中披露的对钙有耐受性的酶；如在日本专利特开：平3-87176，平3-87177，平3-108482和平6-14775中披露的能裂解淀粉的α-1，6连键的酶。
另外一种优选的淀粉酶是源于已通过突变修饰过的芽孢杆菌属的野生型淀粉酶。
淀粉酶的例子包括Duramyl 60T(购自Novozymes)和支链淀粉酶(购自Sigma)。它们可以单独使用或彼此组合使用。
淀粉酶的含量优选为所述水溶液总重量或所述消毒洗涤组合物(溶液形式)的0.01-5wt％，特别是0.1-2wt％(指酶制剂)。
本发明的消毒洗涤组合物基本上不含磷酸盐。不过它可以含有源于酶制剂的少量磷酸盐(不超过0.5wt％)。
具有2.5U/mL和以上的溶液，应当含有浓度不超过10ppm，优选0.01-9ppm，更优选0.01-5ppm的钙离子(指CaO)。具有15U/mL和以上的溶液，应当含有浓度不超过10ppm，优选0.01-20ppm，更优选0.01-15ppm，特别优选0.01-10ppm的钙离子(指CaO)。上述浓度范围内的钙离子的存在改善了所述溶菌酶的效果。
顺便说一下，所述钙离子(指CaO)的浓度是按照披露于日本专利特开：平9-318615的实施例中的方法(采用滂铬色紫色的吸光测定法)测定的。
上述浓度范围内的钙离子浓度是通过将所述水溶液或消毒洗涤组合物与一种或一种以上的特殊螯合剂(对于钙离子特别有效)和通用螯合剂组合在一起获得的。
所述特殊螯合剂的例子包括氨基羧酸的衍生物，聚羧酸，以及它的盐的形式的螯合剂。
氨基羧酸的衍生物形式的螯合剂的例子包括氨基甲基甘氨酸二乙酸酯，β-丙氨酸二乙酸酯，亚氨基丁二酸酯，羟基亚氨基丁二酸酯(HIDS)，丝氨酸二乙酸酯，异丝氨酸二乙酸酯，天冬氨酸二乙酸酯(ASDS)，乙二胺四乙酸(EDTA)，次氮基三乙酸酯(NTA)，羟基乙二胺三乙酸酯(HEDTA)，和亚乙三胺五乙酸(DTPA)。其他例子包括EGTA(乙二醇二[2-氨基乙醚]四乙酸酯)。所述螯合剂应当优选为钠盐或钾盐形式的。
如果将所述水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)用于纺织品的话，所述螯合剂应当优选是下面螯合剂的任意一种：氨基甲基甘氨酸二乙酸酯，β-丙氨酸二乙酸酯，亚氨基丁二酸酯，羟基亚氨基丁二酸酯(HIDS)，丝氨酸二乙酸酯，异丝氨酸二乙酸酯，和天冬氨酸二乙酸酯(ASDS)。
聚羧酸，以及它的盐的形式的例子包括聚合物电解质，如聚丙烯酸，马来酸-丙烯酸共聚物，和多糖的聚羧酸盐。所述聚丙烯酸或马来酸-丙烯酸共聚物的平均分子量为1000-1000000，优选1000-100000。聚羧酸的盐应当优选是钠盐或钾盐形式。
作为聚羧酸，或其盐的一种例子的多糖的聚羧酸盐，是通过多糖与氧化剂(如次氯酸盐，高碘酸盐，和亚氯酸盐)起反应获得的产物，所述反应能导致裂解，以释放出羧酸基团。多糖的例子包括淀粉，糊精，纤维素，半纤维素，直链淀粉和支链淀粉。它们应当优选含有氧化的无水葡萄糖单位，其含量为50-100mol％，优选70-95mol％。在这些例子中，氧化的淀粉(通过氧化裂解由淀粉获得)是最优选的。
通用螯合剂的例子包括结晶硅铝酸盐(沸石A，P，和X)，非晶硅铝酸盐，结晶碱金属硅酸盐(具有层状结构)，低分子量羟基羧酸形式的螯合剂(柠檬酸及其盐，葡糖酸及其盐，乙醇酸及其盐，和马来酸及其盐)，膦酸形式的螯合剂(如1-羟基乙烷-1，1-二膦酸(HEDP)，和氨基三亚甲基膦酸(ATMP))，和无机磷酸盐(如三聚磷酸盐和焦磷酸盐)。
在上面所列举的螯合剂中，无磷螯合剂是特别优选的。
所述水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)的PH值，对于具有2.5U/mL和以上的溶液来说，应当高于8，但是不超过12，优选8.1-11，具有15U/mL和以上的溶液来说，PH值应当高于8，但是不超过12，优选8.1-11，特别优选9-11。这种PH范围是溶菌酶充分发挥它的溶菌效果所必须的。PH值越高，溶菌效果越好。
本发明的消毒洗涤组合物可以用作纺织品洗涤剂，洗手和洗碗洗涤剂，浴室洗涤剂，洗衣机洗涤剂，以及卫生间和排水管洗涤剂。
在所述消毒洗涤组合物被用作衣物洗涤剂的场合下，所述组合物中的溶菌酶含量应当优选为1000-400000U/g，特别是4500-60000U/g，更优选30000-60000U/g。所述水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)的PH值应当优选为8.1-11，特别优选8.5-11。
在所述消毒洗涤组合物被用作洗碗洗涤剂的场合下，所述组合物中的溶菌酶含量应当优选为100-400000U/g，特别优选300-20000U/g。水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)的pH值应当为8.1-10，优选8.1-9。
在所述消毒洗涤组合物被用作浴室洗涤剂的场合下，所述组合物中的溶菌酶含量应当优选为1000-400000U/g，特别优选2000-40000U/g。所述水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)的PH值应当为8.1-10，特别优选8.1-9。
在所述消毒洗涤组合物被用作洗衣机洗涤剂的场合下，所述组合物中的溶菌酶含量应当优选为1000-100000U/g，特别优选2000-20000U/g。所述水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)的PH值应当优选为8.1-12，特别优选8.5-9。
在所述消毒洗涤组合物被用作卫生间和排水管洗涤剂的场合下，所述组合物中的溶菌酶含量应当优选为1000-100000U/g，特别优选2000-20000U/g。所述水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)的PH值应当优选为9-12，特别优选9-11。
本发明的消毒洗涤组合物应当优选与表面活性制剂(表面活性剂)组合，它能够导致所述螯合剂有效渗透到污渍中，从而促进溶菌作用。
表面活性剂的例子包括阴离子表面活性剂，非离子表面活性剂，阳离子表面活性剂，两性表面活性剂。它们可以单独使用，或彼此组合使用。
所述表面活性剂的含量应当优选占所述消毒洗涤组合物总量的3-50wt％，更优选5-40wt％。阴离子表面活性剂或非离子表面活性剂应当优选被用作主要表面活性剂，它占所使用的表面活性剂总量的最大部分。
阴离子表面活性剂的例子包括直链(C10-14)烷基苯磺酸盐，α-磺基脂肪酸的低级(C1-3)烷基酯盐，(C10-20)烷基硫酸酯的酯盐，烯烃磺酸盐，烷烃磺酸盐，聚氧乙烯烷基(或烯基)硫酸酯的酯盐，以及饱和的或不饱和的(C12-22)脂肪酸。所述盐可以是碱金属盐(钠盐和钾盐)，胺盐，或铵盐形式的。
所述阴离子表面活性剂的含量应当优选占所述消毒洗涤组合物总量的5-45wt％，更优选10-35wt％。
非离子表面活性剂的优选例子如下。
(1)加入EO的非离子表面活性剂(烷基醚乙氧基化物)，它由1摩尔的醇(碳的平均数量为10-20)和添加到里面的5-30摩尔(平均数)的环氧乙烷(EO)组成。
(2)加入EO-PO的非离子表面活性剂，它由1摩尔的醇(碳的平均数量为10-20)和添加到里面的5-30摩尔(平均数)的环氧乙烷(EO)和环氧丙烷(PO)组成。
(3)由下面的结构式(1)表示的脂肪酸酯类型的非离子表面活性剂。
R1-CO(OR2)nOR3(1)
(其中，R1是C5-21(优选C9-17)烷基或烯基基团；OR2是所添加的C2-4烯化氧的单位，n是所添加的OR2的平均摩尔数(它是5-30，优选5-20)，而R3是C1-4(优选C1-2)烷基基团。所述烯化氧烃应当优选为EO本身或EO和PO的组合)。
非离子表面活性剂应当优选占所述消毒洗涤组合物总量的1-40wt％，更优选1-30wt％。
两性离子表面活性剂的优选例子包括甜菜碱(如月桂酸氨基丙基甜菜碱和硬脂酸氨基乙基甜菜碱)，以及咪唑啉衍生物(如N-椰子油脂肪酸酰基-N-羧乙基-N-羟乙基乙二胺钠)。
在所述消毒洗涤组合物被用作衣物，洗手和洗碗，浴室，和洗衣机洗涤剂时，应当优选含有表面活性剂(特别是阴离子表面活性剂)。
在所述消毒洗涤组合物被用作衣物洗涤剂时，所述阴离子表面活性剂应当优选是直链烷基苯磺酸盐，α-磺基脂肪酸的烷基酯盐，烯烃磺酸盐，烷烃磺酸盐，烷基硫酸盐，和脂肪酸盐。在所述表面活性剂中，优选α-磺基脂肪酸的烷基酯盐，因为它在少量使用时就具有良好的去污力。
在所述消毒洗涤组合物被用作洗手和洗碗洗涤剂时，所述阴离子表面活性剂应当优选是聚氧乙烯烷基或烯基硫酸酯的酯盐，直链烷基苯磺酸盐，α-磺基脂肪酸的烷基酯盐，烯烃磺酸盐，烷烃磺酸盐，烷基硫酸盐，和脂肪酸盐。
顺便说一下，所述表面活性剂在所述溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)中的浓度应当优选为：在用作洗碗和水槽洗涤剂时，1-20wt％，在用作卫生间、排水管和浴室(浴用管子)洗涤剂时，0.5-1.5wt％，在用作洗衣机洗涤剂时，0.05-0.5wt％，以及在用作纺织品洗涤剂时，100-1200ppm。
本发明的消毒洗涤组合物可以直接使用，或者以稀释的水溶液形式使用。在后一种情况下，所述洗涤组合物的浓度应当优选为0.04-10wt％，更优选0.04-8wt％，特别优选0.05-1wt％。可以根据洗涤组合物的用途确定合适的浓度。
所述消毒洗涤组合物在其水溶液中的浓度如下。1-50wt％用于在水槽或洗碗盆中洗碗，5-50wt％用于用海绵洗碗。1000-100000ppm用于浴室洗涤。1000-10000ppm用于洗衣机，3-100wt％，特别是5-50wt％用于卫生间和排水管洗涤。
本发明的消毒洗涤组合物可以与各种成分组合，其用量不会破坏本发明的目的，所述成分通常被添加到用于洗碗，浴室，水槽，排水管，卫生间，和洗衣的洗涤剂中。
本发明的消毒洗涤组合物能够以各种形式制备，如液体，凝胶，喷雾剂，粉末，片剂，团块，片材和条。
本发明的消毒洗涤组合物并不特别局限于所述制备方法；它可以通过常用于制备普通洗涤剂的常见方法制备。
本发明的消毒洗涤组合物特别适合用作衣物洗涤剂。它能够消毒并且清洗纺织品，并且能够防止纺织品在室内干燥期间，干燥之后，或储藏期间发出异味。它特别适用于对要在室内干燥的纺织品进行洗涤和消毒。另外，它能够对死亡的细菌进行分解和消毒。
顺便说一下，所述洗涤组合物可以在它的包装或小册子上记载上述功能和效果，以便借助于符号或图表进行宣传。
本发明的消毒洗涤组合物能够有效分解和除掉死亡的细菌。本发明的洗涤方法能够防止衣物在室内干燥期间，干燥之后，或储藏期间发出异味。
上面所提到的有关消毒洗涤组合物的特征同样适用于被用于本发明的消毒方法和洗涤方法的每一种成分和水溶液。
在本发明中，术语“细菌污染过的材料”指的是厨房水槽的硬表面，垃圾桶，洗脸盆，排水管，浴用管子，浴室，和坐便器，以及纺织品，包括衣物，床上用品，窗帘，地毯，小地毯，和清扫刷子等。
所述消毒方法没有特殊限制，用于细菌污染过的材料的优选方法如下文所述。
当所述细菌污染过的材料是具有硬表面的固定设备和装置时，消毒应当优选是通过将它们浸泡在所述水溶液中或用所述水溶液喷淋或冲洗而实现的。
当所述细菌污染过的材料是衣物和其他纺织品时，消毒应当优选是通过在洗衣机中洗涤(在浸泡之后)而实现的。
通过适当调整所述水溶液的用量和温度，以及处理时间，可以增强上述溶菌效果。
对于具有2.5U/mL和以上的溶液来说，所述温度应当优选为10-90℃，特别是10-60℃，而处理时间应当优选为5秒-10小时，特别是10-60分钟。
对于具有15U/ml和以上的溶液来说，温度优选为10-90℃，特别优选为10-60℃，处理时间优选为5秒-60分钟，特别优选为5秒-30分钟。
当所述细菌污染过的材料是具有硬表面的固定设备和装置时，所述水溶液的用量应当优选为0.01-0.5mL/cm2(表面积)，特别是0.1-0.3mL/cm2。对于细菌污染过的纺织品来说，所述水溶液的用量应当优选为1-30mL/g纤维。
本发明提供了消毒处理方法，消毒洗涤组合物，洗涤方法，它们被设计成能够通过弱刺激性成分分解并且除掉细菌细胞。
实施例
下面将结合以下实施例对本发明做更详细地说明，这些实施例不是要限定本发明的范围。在以下实施例中，％表示wt％。
实施例1-17和比较实施例1-5
用城市用水制备表1还中所示出的组合物的水溶液，所述城市用水已用二水合氯化钙将其调整到3.3°DH(CaO为33mg/L)。按照以下方法测定所得水溶液的溶菌率。结果如表1和2所示。顺便说一下，所使用的酶的溶菌活性是通过以下方法测定的。在表1和2中，每一种酶的浓度是以通过所述酶样品的溶菌活性值(U/单位重量)的换算的U/mL形式表示的。
顺便说一下，嗜热菌蛋白酶(它是不抗螯合剂的酶)是以稀释溶液(10mg/L)的形式使用的，在表2中用星号(*)表示。
<用于测定单位(U)的方法>
将EDTA-4Na(111ppm)，碳酸氢钠(278ppm)，和酶溶解在蒸馏水中来制备水溶液，蒸馏水是通过在121℃的温度下加热20分钟而灭菌的。用氢氧化钠将该溶液调整到PH 8.5，然后，将9mL的该溶液在25℃的水浴中保温5分钟。向该溶液中添加1mL含有加热的大肠杆菌ATCC8739的悬浮液，使该悬浮液的浊度为大约3.3，浊度是用分光光度计在660nm的波长下测定的(更多的细节参见以下段落)。在搅拌后30秒之内，该溶液的浊度为0.3±0.03，该浊度是在660nm的波长下测定的。这样得到“U测试溶液”。该U测试溶液在25℃的水浴中保温10分钟。在添加所述加热过的细菌10分钟之后，搅拌所述U测试溶液，并且在660nm的波长下测定该溶液的浊度。将能在10分钟内使浊度(在660nm的波长下)降低0.05所需要的蛋白酶的量限定为10个单位(或10U)。
溶菌率是通过下面的方法测定的。
<用于测定溶菌率的方法>
(测试细菌溶液的制备)
将规定量的(37g/L)心脑浸提介质(购自Difco)溶解在纯化的水中。在500mL的Sakaguchi烧瓶中对所得到的溶液(50ml)进行消毒。用一个大肠杆菌ATCC8739白金环接种所述消过毒的溶液。将接种过的培养基在37℃下摇晃培养18小时。通过以3000rpm的速度(大约1800G)离心分离5分钟，收集细菌细胞。将收集到的细菌细胞悬浮在消过毒的水中，并且再次以3000rpm的速度(大约1800G)对悬浮液进行离心。将收集到的细菌细胞悬浮在消过毒的水中。在90℃下加热20分钟，然后通过以3000rpm的速度(大约1800G)离心，收集加热过的细胞。将收集到的细胞悬浮在消过毒的水中，得到浊度为3.3的悬浮液，该浊度是在660nm的波长下测定的。
(测定溶菌率)
将进行溶菌率测定的样品溶液(9ml)放入试管中。在25℃的水浴中保温5分钟之后，将所述样品溶液与按照上述方法获得的细菌细胞悬浮液混合。从而获得了用于测定溶菌率的溶液(10mL)。在反应开始后30秒之内，在660nm波长下测定该溶液的浊度。在25℃的水浴中将该溶液保温10分钟。搅拌之后，在660nm的波长下测定该溶液的浊度。用1mL消过毒的水取代所述细菌细胞悬浮液进行空白测定。顺便说一下，如果用于测定溶菌率的样品在添加所述细菌细胞悬浮液之前的浊度在660nm的波长下超过了0.7，应事先用微孔滤膜(0.45μm)进行过滤，并且向所得到的滤液(9mL)中添加所述细菌细胞悬浮液(1mL)。顺便说一下，所述“用于测定溶菌率的溶液(10mL)”是这样制备的，使它具有与用于测定的所述水溶液或消毒洗涤组合物(溶液形式)相同的浓度。
溶菌率是通过下面的公式获得的。
Figure C0380749700171
<测定钙浓度>
在上面的“测定溶菌率”的段落中提到的“用于测定溶菌率的溶液”被测试溶液(10mL)取代，其中，添加了1mL消过毒的水，以取代“所述细菌细胞悬浮液”。按照披露于日本专利特开：平9-318615的实施例部分的方法(采用滂铬色紫色的吸光测定法)测定该测试溶液的钙离子浓度。如果存在沉淀物(如沸石)的话，通过用微孔滤膜(0.45μm)过滤，将其从该溶液中滤掉。
实施例18-35
按照表3-7的配方制备各种消毒洗涤组合物。用城市用水制备它们的水溶液，所述城市用水已用二水合氯化钙将其调整到3.3°DH(CaO为33mg/L)。按照以上相同的方法测定它们的溶菌率。结果如表3-7所示。在表3-7中示出的洗涤组合物分别用于以下目的。
顺便说一下，在这些表中示出的溶菌活性(U/mL)，是以通过所述酶的溶菌活性(U/单位重量)，由所述表中示出的“工作浓度”换算出来的浓度。在这些表中示出的钙离子浓度和溶菌率是对“所述测试溶液和用于测定溶菌率的溶液”进行测定的结果，所述溶液是按照“用于测定钙离子浓度的方法和用于测定溶菌率的方法”制备的，以便它们具有在下表中所示出的工作浓度。对下面的表进行相同的处理。
表3：用于洗碗的洗涤剂
表4：用于洗衣机的洗涤剂
表3：用于浴用管子的洗涤剂
表3：用于排水管的洗涤剂
表3：用于卫生间的洗涤剂
实施例36-38和比较实施例6
按照表8所示配方制备用于衣物的洗涤组合物。在洗涤和干燥之后，按照在下面提到的评估方法-1检查残留在衣物上的气味。另外，用城市用水(3°DH)将每一种样品稀释到表8所示出的工作浓度。测定所述水溶液的溶菌活性。结果参见表8。
评估方法-1
向双桶类型的洗衣机(CW-C 30A1-H，购自Mitsubishi Electric)中加入5升温度为25℃的城市用水(3°DH)。将所述洗涤组合物的每一种样品溶解在水中，以便建立表8所示出的工作浓度。将总重量为1kg的衣物浸泡在所述洗涤溶液中，所述衣物是直接接触皮肤穿了一天的五件球衣，和在厨房中用了一天的五条全新的纯棉毛巾。在浸泡10分钟之后，用25升城市用水进行洗涤10分钟。洗涤之后，接着进行1分钟的旋转脱水干燥，批量漂洗2次，每次用30升城市用水漂洗3分钟，并且旋转干燥2次，一次在第一次批量漂洗和第二次批量漂洗之间，进行1分钟，一次在第二次漂洗之后，进行1分钟。最后，用商业衣物干燥机(DE-N5S3，购自日立公司)，通过标准方法干燥所述球衣和毛巾。
干燥之后，将所述球衣和毛巾在30℃和80％相对湿度的恒温房间中放置5天。最后，由有经验的检测人员检查它们的气味。按照以下标准对发臭的程度进行评级(平均值)。
评级标准
5：相当臭
4：明显发臭
3：有些臭
2：微臭
1：不臭或几乎不臭
实施例40-47和比较实施例7
按照表9和10所示配方制备衣物洗涤组合物。在洗涤和干燥之后，按照在下面提到的评估方法-2检查残留在衣物上的气味。另外，用城市用水(3°DH)将每一种样品稀释到表9和10所示出的工作浓度。测定所述水溶液的溶菌活性。结果参见表9和10。
评估方法-2
用全自动洗衣机(NA-F70A，购自Matsushita Electric)洗涤总重量为1kg的衣物，所述衣物是直接接触皮肤穿了一天的五件球衣，和在厨房中用了一天的五条全新的纯棉毛巾。洗涤是用温度大约为25℃的城市用水(3°DH)按照标准方法进行的。添加所述洗涤组合物的每一种样品，以便建立表9和10所示出的工作浓度。在旋转干燥之后，将所述球衣和毛巾在30℃和80％相对湿度的房间中干燥12小时。最后，由有经验的检测人员检查它们的气味。按照以下标准对发臭的程度进行评级(平均值)。
评级标准
5：相当臭
4：明显发臭
3：有些臭
2：微臭
1：不臭或几乎不臭
实施例48-51和比较实施例8
按照表11所示配方制备衣物洗涤组合物。在洗涤和干燥之后，按照在下面提到的评估方法-3检查残留在衣物上的气味。按照上面提到的相同方法测定它们的溶菌活性。结果参见表11。
评估方法-3
用滚筒洗衣机(ES-E61，购自Sharp公司)洗涤10条全新的纯棉毛巾(在日常生活中用了1天)。洗涤是用温度大约为40℃的城市用水(用二水合氯化钙调节到20°DH)按照标准洗涤循环进行的。所述洗涤组合物的每种样品的用量足以达到5000ppm的浓度。在旋转干燥之后，将洗涤过的毛巾在30℃和80％相对湿度的房间中干燥12小时。最后，由有经验的检测人员检查它们的气味。按照以下标准对发臭的程度进行评级(平均值)。
评级标准
5：相当臭
4：明显发臭
3：有些臭
2：微臭
1：不臭或几乎不臭
对表1-11中的成分的说明如下。每一种成分的量是以净重量形式表示的(过碳酸钠和漂白激活剂除外)。
月桂酸硫酸钠：净重95％，购自Lion公司；“Sunnol LM-1100NT”α-SF-Na：α-磺基脂肪酸甲酯的钠盐，具有C14-16烷基基团；购自Lion公司；净重70％；固体72-73％。
LAS-K：直链C10-14烷基苯磺酸钾(在生产有关洗涤组合物时，通过用48％的氢氧化钾水溶液中和购自Lion公司的Lipon LH-200(LAS-H净重96％)制备的)。
LAS-Na：直链C10-14烷基苯磺酸钠(通过用48％的氢氧化钠水溶液中和购自Lion公司的Lipon LH-200(LAS-H净重96％)制备的)。
AOS-Na：-烯烃磺酸钠，具有C14-18烷基基团；购自Lion公司；净重55％的含水糊剂。
AES-Na：聚氧乙烯(EO3mol)月桂基醚硫酸钠，净重70％，购自Lion公司。
PTS：p-甲苯磺酸盐。
异丙基苯磺酸；购自Albright&Wilson公司。
皂：具有C12-18烷基基团的脂肪酸钠盐(购自Lion公司)；C12：0.9％，C18：80.2％，不饱和脂肪酸：80.2％，分子量：289，净重67-68％，效价：47.0℃。
N-月桂基二甲基乙酸甜菜碱：购自Sanyo化学工业公司。
烷基氨基丙基乙酸甜菜碱：购自Ipposha Oil工业公司。
BRE15：C12直链伯醇乙氧基化物(具有15摩尔(平均)添加的环氧乙烷)，购自Lion公司。
AEt1：Diadol 13(购自Mitsubishi化学公司)与15摩尔(平均)环氧乙烷(购自Lion化学公司)的加成物。
AEt2：C12-14直链醇与8摩尔(平均)环氧乙烷的加成物(购自Lion化学公司)。
AEs：C12-18脂肪酸甲酯与15摩尔(平均)环氧乙烷的加成物(购自Lion化学公司)。
AEP：Diadol 13(购自Mitsubishi化学公司)与15摩尔(平均)环氧乙烷和3摩尔(平均)环氧丙烷的加成物(购自Lion化学公司)。
APG：烷基聚葡糖苷(购自Cognis Japan)。
LDE：月桂基二乙醇酰胺(购自Kawaken Fine Chemical)。
双氰胺：购自Nippon Carbide Industries。
CDE：椰子脂肪酸二乙醇胺(购自Kawaken Fine Chemical)
AX：月桂基二甲基氧化胺(购自Lion公司)。
<酶(蛋白酶)>
洒维奈斯12T，Esperase 4T，Everlase 8T，Kannase 24TK，Alcalase2T，洒维奈斯16L，和Deozyme：用于洗涤剂的酶制剂(购自Novozymes公司)。
P-酶：由芽孢杆菌P生产，由发酵研究所保藏，保藏号8090；是通过披露于日本专利特开：平8-165493中的方法培养和纯化的。
K-酶：由芽孢杆菌K生产，由发酵研究所保藏，保藏号8091；是通过披露于日本专利特开：平8-165493中的方法培养和纯化的。
X-酶：由芽孢杆菌X生产，由发酵研究所保藏，保藏号8092；是通过披露于日本专利特开：平8-165493中的方法培养和纯化的。
Y-酶：由芽孢杆菌Y生产，由发酵研究所保藏，保藏号8088；是通过披露于日本专利特开：平8-165494中的方法培养和纯化的。
嗜热菌蛋白酶：购自Sigma公司。
<酶(其他酶)>
淀粉酶：Duramyl 60T(购自Novozymes公司)和支链淀粉酶(购自Sigma公司)的10∶1(重量)的混合物。
纤维素酶：纤维素酶0.7T(购自Novozymes公司)。
脂酶：Lipex50T(购自Novozymes公司)。
<螯合剂>
ASDA：天冬氨酸二乙酸钠(购自Nippon Shokubai)。
HIDS：羟基亚氨基丁二酸钠(购自Nippon Shokubai)。
EDTA-Na：乙二胺四乙酸钠。
菲咯啉：1，10-菲咯啉(购自Nippon Kayaku)。
三聚磷酸钠：购自Nippon Chemical
柠檬酸及其钠盐(购自Fuso Chemical)。
沸石：沸A(Silton B，购自Mizusawa Kagaku)。
AA/MA：共聚物盐：丙烯酸-马来酸共聚物的钠盐(Sokalan CP7，购自BASF)。
聚丙烯酸钠：聚丙烯酸钠(Aronbis S，购自Nihon Junyaku)。
苹果酸：购自Fuso Chemical。
<其他成分>
碳酸钠：碳酸钠(颗粒形式，购自Asahi Glass)。
碳酸钾：碳酸钾(购自Asahi Glass)。
硅酸钠：硅酸钠(JIS-1)(购自Nippon Chemical)。
硫酸钠：中性无水Glauber’s盐(购自Nippon Chemical)。
氯化钠：氯化钠(制剂)。
亚硫酸钠：亚硫酸钠酸酐(购自Mitsui Chemical)。
乙醇：纯度99.5％(购自日本Ethanol)。
二乙二醇一丁酯(购自Nippon Nyukazai)。
荧光增白剂CBS：Cinopearl CBS-X(购自Ciba-SpecialtyChemicals)。
荧光增白剂AMS：Cinopearl AMS-GX(购自Ciba-SpecialtyChemicals)。
过碳酸钠：包衣的过碳酸钠(SPC-D，购自Mitsubishi GasChemical)。
漂白激活剂OBC：通过以下方法获得的颗粒，平均颗粒直径为700μm。用4-癸酰氧基苯甲酸(作为漂白激活剂)，聚乙二醇(PEG)#6000(购自Lion公司)，和粉末形式的C14α-烯烃磺酸钠(Lipolan PB-80，购自Lion公司)，通过在Extrud-O-mix(Model EM-6，购自HosokawaMicron)中混合，制备70/25/5(wt)的混合物。然后将所述混合物挤压成直径为0.8mm的条。通过使用Fitzmill，Model DKA-3(购自Hosokawa Micron)将所述条与5wt％的沸石A(粉末形式)一起粉碎。
香料组合物
表3-5和7-11中的香料：披露于日本专利特开：2002-146399中的表11-18里的组合物。
脂肪酸酰胺丙基甜菜碱：购自Lion公司。
酰胺基丙基乙酸甜菜碱：购自Lion公司。
烷基苯氧基苯基二磺酸钠：购自Nikko Chemicals。
硬脂酰三甲基氯化铵：购自Lion Akzo。
二癸酰甲基氯化铵：购自Lion Akzo。
合成的聚合物：异丁烯酸共聚物：购自Ipposha Oil工业公司。
对甲苯磺酸：购自Kyowa Hakko Kogyo。
三乙醇胺：购自Nippon Shokubai。
硅石：硅酮接枝聚合物购自Ipposha Oil工业公司。
0.1N氢氧化钠：制剂。
NRE2：购自Lion公司。
NRE 5：购自Lion公司。
NRE7：购自Lion公司。
NRE15：购自Lion公司。
聚乙二醇：购自NOF公司。
二乙醇胺：购自Nippon Shokubai。
三乙醇胺：购自Nippon Shokubai。
从表1和2中可以看出，如果所述水溶液含有的溶菌酶(抗螯合剂)的浓度使得溶菌活性不低于2.5U/mL，并且钙离子浓度(指CaO)不超过10ppm，并且pH值高于8，但不超过12的话，所述水溶液就具有出色的溶菌活性。还可以看出，如果所述水溶液含有的溶菌酶(抗螯合剂)的浓度使得溶菌活性不低于15U/mL，并且钙离子浓度(指CaO)不超过10ppm，并且pH值高于12的话，所述水溶液就具有出色的溶菌活性。
从表3-7中可以看出，实施例中的洗涤组合物具有出色的溶菌效果。所述效果是通过表3所示出的洗涤组合物证实的，将该组合物用于使用6个月之后，发臭并且感觉粘腻的洗碗海绵。在将所述海绵用于用所述洗涤组合物洗碗(用于四口之家)一周之后，臭味和粘腻感消失。如果将表2所示出的水溶液喷洒在厨房水槽，垃圾容器，和排水金属网，并且在10分钟之后漂洗，可以大大减弱粘腻感。
表8-11的结果表明，实施例中的洗涤组合物能够产生良好的抑制臭味的效果。
表1
Figure C0380749700261
表2
Figure C0380749700271
表3
表4
Figure C0380749700291
表5
Figure C0380749700301
表6
Figure C0380749700311
表7
Figure C0380749700321
表8
Figure C0380749700331
表9
Figure C0380749700341
表10
表11
Figure C0380749700361

Claims (5)

1.一种消毒方法，包括
用一种水溶液处理受到细菌污染的材料，该溶液含有
能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶的浓度足以使它的溶菌活性水平不低于15U/mL，所述溶菌酶选自：洒维奈斯12T，洒维奈斯16L，Esperase 4T，Everlase 8T，Kannase 24TK，Alcalase 2T、Deozyme、P-酶、K-酶、X-酶和Y-酶；
浓度为0.01～15ppm的CaO形式的钙离子；
表面活性剂；和
淀粉酶，其源于通过突变进行过修饰的芽孢杆菌属的野生型淀粉酶，或为能裂解α-1，6连键的淀粉水解酶；
所述水溶液不含有磷酸盐并且pH值为8.1-11。
2.一种不含磷酸盐的消毒洗涤组合物，在它的水溶液形式下，含有：
能够耐受螯合剂的溶菌酶，所述酶的浓度足以使它的溶菌活性水平不低于15U/mL，所述溶菌酶选自：洒维奈斯12T，洒维奈斯16L，Esperase 4T，Everlase 8T，Kannase 24TK，Alcalase 2T、Deozyme、P-酶、K-酶、X-酶和Y-酶；
浓度为0.01～15ppm的CaO形式的钙离子；
表面活性剂；和
淀粉酶，其源于通过突变进行过修饰的芽孢杆菌属的野生型淀粉酶，或为能裂解α-1，6连键的淀粉水解酶；
所述水溶液不含有磷酸盐并且pH值为8.1-11。
3.如权利要求2的消毒洗涤组合物，还包括脂酶，其酶活性是这样的：以摩尔数计算，在测试底物分解之后从三油精中释放的脂肪酸的量，不低于在测试底物分解之后从n-十六烷基棕榈酸酯中释放的脂肪酸的重的2倍。
4.用于分解和消除死亡细菌细胞的方法，包括使用如权利要求2的消毒洗涤组合物。
5.用于在消毒和洗涤纺织品时避免洗涤过的纺织品在室内干燥期间或在干燥之后的储藏期间发出异味的方法，包括使用普通形式或它的稀释水溶液形式的如权利要求2的消毒洗涤组合物来消毒和洗涤纺织品。
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