CN100384983C - 通过使用棒状菌突变株发酵生产5’—一磷酸黄苷的方法 - Google Patents

通过使用棒状菌突变株发酵生产5’—一磷酸黄苷的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN100384983C
CN100384983C CNB01130250XA CN01130250A CN100384983C CN 100384983 C CN100384983 C CN 100384983C CN B01130250X A CNB01130250X A CN B01130250XA CN 01130250 A CN01130250 A CN 01130250A CN 100384983 C CN100384983 C CN 100384983C
Authority
CN
China
Prior art keywords
xanthosine
phosphoric acid
corynebacterium
bacterium
bacterial strain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB01130250XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN1362524A (zh
Inventor
V·A·里希特斯
L·A·卡泽里诺瓦
S·V·格龙斯基
E·A·库图科瓦
N·P·扎卡塔瓦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ajinomoto Co Inc filed Critical Ajinomoto Co Inc
Publication of CN1362524A publication Critical patent/CN1362524A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100384983C publication Critical patent/CN100384983C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/32—Nucleotides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two N-atoms in the same ring, e.g. purine nucleotides, nicotineamide-adenine dinucleotide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/15—Corynebacterium

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

通过培养细菌以及从中回收5’——磷酸黄苷来生产5’—磷酸黄苷，其中所述的细菌对生长抑制作用具有抗性并且具有生产5’——磷酸黄苷的能力以便在培养物中生产和积累5’——磷酸黄苷，而所述的抑制作用是由选自细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂、磷酸化抑制剂、解偶联剂、RNA-聚合酶抑制剂和甲硫氨酸类似物组成的抑制剂导致的。

Description

通过使用棒状菌突变株发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法
技术领域
本发明涉及一种生产5’-一磷酸黄苷的发酵方法以及其中使用的微生物。
5’-一磷酸黄苷(XMP)是嘌呤核苷酸生物合成的一种中间体并且被用作生产已知作为风味剂[Kuninaka(1960)《日本农业化学协会杂志》(J.Agr.Chem.Soc.Japan)34，489]的5’-一磷酸鸟苷(GMP)的工业原料和用于合成药物的原料[美国专利5,736,530]。
相关现有技术的描述
已知通过直接发酵方法生产5’-一磷酸黄苷的方法包括使用棒状菌(coryneform bacteria)的各种菌株的方法。据发现谷氨酸棒杆菌(谷氨酸微球菌)和产氨短杆菌(现被重新命名为产氨棒杆菌)的需要鸟嘌呤或需要腺嘌呤-鸟嘌呤的突变株在合适的发酵条件下积累了大量的XMP[Misawa等人，1964，《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)28，690-693，Misawa等人，1964，《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)28，694-699，Demain等人，1965，《Aool.Vicrobiol.》13，757-765；Misawa等人，1969，《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)33，370-376]。通过这些菌株积累XMP似乎是由于从细胞中直接分泌出从头合成的核苷酸，这是因为XMP焦磷酸化酶(黄嘌呤phosphorybosyltransferase)非常少甚至是缺乏的，并且通过生长的细胞并不将外源提供的黄嘌呤转化为XMP[Misawa等人，1964，《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)28，694-699]。
此外，据报道通过具有弱的5’-核苷酸酶活性的枯草芽孢杆菌之需要腺嘌呤或需要腺嘌呤-鸟嘌呤的突变株积累了XMP以及IMP[Akiya等人，1972《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)36，227-234]。
之后描述了一种使用具有弱的核苷酸酶活性并且具有更高XMP产率的产氨棒杆菌之腺嘌呤渗漏且需要鸟嘌呤的突变株的方法[Fujio等人，1984，《发酵技术杂志》《J.Ferment.Technol.》62，131]。
此外，也已经进行了通过赋予产氨棒杆菌的5’-一磷酸黄苷产生菌株其它的特性来提高其产率的尝试。现已发现通过使需要腺嘌呤-鸟嘌呤的突变株对溶菌酶具有敏感性[韩国专利公开号86-248及89-540]或者对细胞壁抑制性抗生素具有抗性[日本专利延迟公开号60-156399A2]就可以极大地提高产氨棒杆菌的5’-一磷酸黄苷产生菌株的产率。
对溶菌酶的敏感性以及对抗生素的抗性显然与5’-一磷酸黄苷的胞质膜渗透性有关。
众所周知使微生物细胞处于应激(温度，辐射、饥饿、抑制剂和抗生素)之下的多种处理都会导致RNA和DNA的破坏，继而分泌出核酸衍生物[A.Demain(1968).“通过发酵生产嘌呤核苷酸”《工业微生物学进展》(Progress inIndustrial Microbiology)第18卷，编辑D.J.D.Hockenhull.J.&A.Churchill有限公司，伦敦]。目前通常接受的是代谢物垮过胞质膜的渗透一般是由或多或少的特异性流出的转运蛋白介导的[Pao等人，1998《微生物学分子生物学回顾》(Microbiol.Mol.Biol.Rev.)62，1-34；Paulsen等人，1998《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.)277，573-592；Saier等人，1999《分子微生物学生物技术杂志》(J.Mol.Microbiol.Biothechnol.)(1999)1，257-279]。反之，可以合理地推测出这些转运蛋白可以在应激条件下被诱导或激活。据表明在许多年前[Billen，D.(1957)《Arch.Bichem.Biophys.》67，333-340]，紫外线或X射线照射的大肠杆菌细胞分泌出游离的碱基、核苷、单核苷酸和ATP。由于没有发现DNA衍生物或肽，因此这种释放并非是细胞溶解的结果。对于释放最大时需要葡萄糖和无机磷酸盐并且砷酸盐或低温的抑制作用表明其涉及了酶促作用，其中可能包括转运蛋白的合成。
另外，在腺嘌呤渗漏的产氨棒杆菌营养缺陷型的培养中锰离子(Mn2+)的缺乏导致对5’-一磷酸肌苷“膜渗透屏障的改变”，从而造成核苷酸大量的积累[Furuya等人，1970《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)34，210-217]。之后确定了锰离子的缺乏影响了存在于棒状菌中依赖于锰的核糖核苷酸还原酶功能，并且诱导了不平衡的生长应激[Auling等人，1980《Arch.Microbiol.》127，105-114；Willing等人，1988《欧洲生物化学杂志》(Eur.J.Biochem.)170，603-611]。在这种情况下细胞呈现出丝状的生长，并且分泌蛋白和一些代谢物到培养基中。
据认为在过量锰离子存在下由一些产氨短杆菌突变株所致的5’-一磷酸肌苷产率的提高也是由IMP分泌的“渗透性改善”引起的。这些突变株表现出对多种抗生素、洗涤剂、染料和溶菌酶的敏感性有所增加[Teshiba，S.与A.Furuya，1983.《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)47，1035-1041]，而这显然与细菌膜的改变有关。
另一方面，在枯草芽孢杆菌中，通过引入赋予了对抑制浓度的甲硫氨酸和甲硫氨酸类似物DL-甲硫氨酸亚砜的抗性的突变显著地提高了鸟苷的生产[Matsui等人，1977《应用环境微生物学》(Appl.Environ.Microbiol)34，337-341；Matsui等人，1979《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)43，1317-1323]。甲硫氨酸亚砜的抗性主要导致5’-核苷酸酶特异性的降低并且通过GMP导致IMP脱氢酶的抑制作用和阻遏作用的部分丧失[Matsui等人，1977《应用环境微生物学》(Appl.Environ.Microbiol.)34，337-341]。而且，由GMP所致的PRPP酰胺转移酶的阻遏和抑制作用也会丧失[Matsui等人，1979《农业生物化学》(Agr.Biol.Chem.)43，1317-1323]。将IMP转化为XMP的IMP脱氢酶是对GMP合成具有特异性的途径中的第一种酶，并且通常由GMP调节[Nishikawa等人，1967《生物化学杂志》(J.Biochem.)62，92]。PRPP酰胺转移酶是嘌呤核苷酸生物合成途径中的第一种酶，并且由AMP和GMP调节[Nishikawa等人，1967《生物化学杂志》(J.Biochem.)62，92；Sato与Shiio，1970《生物化学杂志》(J.Biochem.)68，763]。但是，从来没有利用对甲硫氨酸类似物的抗性来改进棒状菌的XMP产生菌株。
发明的内容
本发明已经考虑了上述观点，本发明的一个目的在于提供一种针对工业目的以高产率生产5’-一磷酸黄苷的更高效的方法以及可以在所述方法中使用的微生物。
为此，本发明的发明人在对5’-一磷酸黄苷产生菌进行了大量研究之后，发现属于产氨棒杆菌(Corynebacterium ammoniagenes)的并且具有新近发现的突变的微生物在培养基中产生和积累了相当更多量的5’-一磷酸黄苷，其中所述的突变赋予了对细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂、磷酸化抑制剂、解偶联剂、RNA-聚合酶抑制剂和甲硫氨酸类似物的抗性。对一系列突变株的研究表明对上述化合物的抗性与5’-一磷酸黄苷的积累直接相关。
迄今，人们没有认识到5’-一磷酸黄苷的产率可以通过使产生5’-一磷酸黄苷的微生物具有上述特性来提高。
因此基于这一发现继续地工作以完成了本发明。
于是，本发明如下：
(1)棒状菌，所述的细菌对由抑制剂所致的生长抑制作用具有抗性并且具有生产5’-一磷酸黄苷的能力，所述的抑制剂选自细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂、磷酸化抑制剂、解偶联剂、RNA-聚合酶抑制剂和甲硫氨酸类似物。
(2)棒状菌，所述的棒状菌具有生产5’-一磷酸黄苷的能力并且对甘氨酸具有抗性。
(3)棒状菌，所述的棒状菌具有生产5’-一磷酸黄苷的能力并且对多粘菌素具有抗性。
(4)棒状菌，所述的棒状菌具有生产5’-一磷酸黄苷的能力并且对寡霉素具有抗性。
(5)棒状菌，所述的棒状菌具有生产5’-一磷酸黄苷的能力并且对羰基氰化间氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrasone)(CCCP)具有抗性。
(6)棒状菌，所述的棒状菌具有生产5’-一磷酸黄苷的能力并且对利福平具有抗性。
(7)棒状菌，所述的棒状菌具有生产5’-一磷酸黄苷的能力并且对甲硫氨酸类似物具有抗性，其中所述的甲硫氨酸类似物选自DL-甲硫氨酸亚砜。L-甲硫氨酸亚砜、DL-甲硫氨酸砜以及L-甲硫氨酸砜。
(8)根据上述(1)至(7)之任一的棒状菌，其中所述的细菌属于产氨棒杆菌。
(9)根据(2)的棒状菌，其中所述的细菌为产氨棒杆菌AGRI 10-52(VKPM B-8006)。
(10)根据(3)的棒状菌，其中所述的细菌为产氨棒杆菌AGRI 101-51(VKPM B-8010)。
(11)根据(4)的棒状菌，其中所述的细菌为产氨棒杆菌AGRI 67-52(VKPM B-8004)。
(12)根据(5)的棒状菌，其中所述的细菌为产氨棒杆菌AGRI 97-52(VKPM B-8008)。
(13)根据(6)的棒状菌，其中所述的细菌为产氨棒杆菌AGRI 93-38(VKPMB-8003)。
(14)根据(7)的棒状菌，其中所述的细菌为产氨棒杆菌AGRI 11-51(VKPM B-8005)。
(15)根据(7)的棒状菌，其中所述的细菌为产氨棒杆菌AGRI 47-51(VKPM B-8007)。
(16)一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养上述(1)至(15)之任一所说的细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收所述的5’-一磷酸黄苷。
下面将要详细地解释本发明。
通过发明人以上的发现，他们认为可以合理地推测出一些影响细胞膜功能、DNA复制、转录或翻译机理的突变可能是模拟了应激条件并且诱导了特异性转运蛋白活性的增强，从而增加了核酸衍生物、并且更具体地讲为5’-一磷酸黄苷的积累。此外，由转运蛋白介导的分泌可能取决于细菌细胞的能级的事实看来，增强ATP再生活性的突变对于5’-一磷酸黄苷产生菌株的改进可能也是有用的。
本发明的微生物可以通过赋予其特异性抗性而由本身就具有生产5’-一磷酸黄苷能力的微生物中获得。另一方面，本发明的微生物也可以通过使具有所述特异性抗性的微生物具有生产5’-一磷酸黄苷的能力来获得。
术语“对细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂具有抗性的细菌”是指这样一种来源于属于棒状菌的细菌菌株的微生物，其中由于亲本菌株在遗传特性上进行了修饰，从而它可以在含有细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂的培养基中生长。术语“细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂”是指抑制了胞质膜生物合成或者影响其正常功能的化合物(例如甘氨酸、多粘菌素、短杆菌肽)。因此，正如本文所使用的那样，术语“对由细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂所致的生长抑制作用的抗性”是指突变株能够在含有作为抑制剂的化合物的营养培养基中生长，而所述抑制剂的量可以抑制亲本菌株的生长。
例如，通过在琼脂平板上在32℃下培养，其中所述的琼脂平板含有40g/L或更多，优选50g/L或更多，的甘氨酸、40mg/L或更多，优选50mg/L或更多，的多粘菌素、5mg/L或更多，优选10mg/L或更多的，短杆菌肽，可以在3-5天内形成菌落的微生物对这些药物具有抗性。
术语“对磷酸化抑制剂具有抗性的细菌”是指这样一种来源于属于棒状菌的细菌菌株的微生物，其中由于亲本菌株在遗传特性上进行了修饰，从而它可以在含有磷酸化抑制剂的培养基中生长。术语“磷酸化抑制剂”是指抑制通过F0/F1ATP酶(ATP合酶)由ADP和Pi合成ATP的化合物(例如寡霉素)。因此，正如本文所使用的那样，术语“对由磷酸化抑制剂所致的生长抑制作用的抗性”是指突变株能够在含有作为抑制剂的化合物的营养培养基中生长，而所述抑制剂的量可以抑制亲本菌株的生长。
例如，通过在琼脂平板上在32℃下培养，其中所述的琼脂平板含有50mg/L或更多，优选100mg/L或更多，的寡霉素，可以在3天内形成菌落的微生物对寡霉素具有抗性。
术语“对解偶联剂具有抗性的细菌”是指这样一种来源于属于棒状菌的细菌菌株的微生物，其中由于亲本菌株在遗传特性上进行了修饰，从而它可以在含有解偶联剂的培养基中生长。术语“解偶联剂”是指废止了呼吸链和磷酸化系统之间的专性联系的化合物[例如二硝基苯酚、羰基氰化间氯苯腙(CCCP)、对三氟甲氧基羰基氰化苯腙(FCCP)]。因此，正如本文所使用的那样，术语“对解偶联剂的抗性”是指突变株能够在含有作为抑制剂的化合物的营养培养基中生长，而所述抑制剂的量可以抑制亲本菌株的生长。
例如，通过在琼脂平板上在32℃下培养，其中所述的琼脂平板含有2mg/L或更多，优选4mg/L或更多，的CCCP或FCCP，可以在3天内形成菌落的微生物对CCCP或FCCP具有抗性。
术语“对RNA-聚合酶抑制剂具有抗性的细菌”是指这样一种来源于属于棒状菌的细菌菌株的微生物，其中由于亲本菌株在遗传特性上进行了修饰，从而它可以在含有RNA一聚合酶抑制剂的培养基中生长。术语“RNA-聚合酶抑制剂”是指抑制了依赖于DNA的RNA聚合酶活性的化合物(例如利福平)。因此，正如本文所使用的那样，术语“对RNA一聚合酶抑制剂的抗性”是指突变株能够在含有作为抑制剂的化合物的营养培养基中生长，而所述抑制剂的量可以抑制亲本菌株的生长。
例如，通过在琼脂平板上在32℃下培养，其中所述的琼脂平板含有5mg/L或更多，优选15mg/L或更多，的利福平，可以在3天内形成菌落的微生物对利福平具有抗性。
术语“对甲硫氨酸类似物具有抗性的细菌”是指这样一种来源于属于棒状菌的细菌菌株的微生物，其中由于亲本菌株在遗传特性上进行了修饰，从而它可以在含有甲硫氨酸类似物的培养基中生长。术语“甲硫氨酸类似物”是指在结构上类似于甲硫氨酸的化合物(DL一甲硫氨酸亚砜、L-甲硫氨酸亚砜、DL-甲硫氨酸砜以及L-甲硫氨酸砜)。因此，正如本文所使用的那样，术语“对甲硫氨酸类似物的抗性”是指突变株能够在含有作为抑制剂的化合物的营养培养基中生长，而所述抑制剂的量可以抑制亲本菌株的生长。
例如，通过在琼脂平板上在32℃下培养，其中所述的琼脂平板含有5g/L或更多，优选10g/L或更多，的DL-甲硫氨酸亚砜或L-甲硫氨酸亚砜、或者5g/L或更多，优选10g/L或更多，的DL-甲硫氨酸砜或L-甲硫氨酸砜，可以在5天内形成菌落的微生物对这些药物具有抗性。
本发明中所称的“棒状菌”包括迄今为止已被分入短杆菌属、但目前又被并入棒杆菌属的细菌[Int.J.Syst.Bacteriol.，41，255(1981)]，以及包括属于与棒杆菌属关系密切的短杆菌属的细菌。所述棒状菌的例子包括以下内容：
产氨棒杆菌(产氨短杆菌)(Corynebacterium ammoniagenes
                      (Brevibacterium ammoniagenes))
嗜乙酰乙酸棒杆菌      (Corynebacterium acetoacidophilum)
醋谷棒杆菌            (Corynebacterium acetoglutamicum)
解碱棒杆菌            (Corynebacterium alkanolyticum)
美棒杆菌              (Corynebacterium callunae)
谷氨酸棒杆菌          (Corynebacterium glutamicum)
百合花棒杆菌          (Corynebacterium lilium
(谷氨酸棒杆菌)        (Corynebacterium glutamicum))
melassecola棒杆菌     (Corynebacterium melassecola)
热产氨棒杆菌          (Corynebacterium thermoaminogenes)
力士棒杆菌            (Corynebacterium herculis)
扩展短杆菌            (Brevibacterium divaricatum
(谷氨酸棒杆菌)        (Corynebacterium glutamicum))
黄色短杆菌            (Brevibacterium flavum
(谷氨酸棒杆菌)        (Corynebacterium glutamicum))
immariophilum短杆菌   (Brevibacterium immariophilum)
乳发酵短杆菌      (Brevibacterium lactofermentum
(谷氨酸棒杆菌)    (Corynebacterium glutamicum))
玫瑰色短杆菌      (Brevibacterium rosaum)
解糖短杆菌        (Brevibacterium saccharolyticum)
生硫短杆菌        (Brevibacterium thiogenitalis)
白色短杆菌        (Brevibacterium album)
蜡状短杆菌        (Brevibacterium cerinum)
嗜氨微杆菌        (Microbacterium ammoniaphilum)
更具体地讲，下面给出了这些细菌菌株的具体实例：
产氨棒杆菌(产氨短杆菌)ATCC6871，ATCC6872，VKPM B-6307嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC13870
醋谷棒杆菌ATCC15806
解碱棒杆菌ATCC21511
美棒杆菌ATCC15991
谷氨酸棒杆菌ATCC13020，ATCC13032，ATCC13060
百合花棒杆菌(谷氨酸棒杆菌)ATCC15990
melassecola棒杆菌ATCC17965
热产氨棒杆菌AJ12340(FERM BP-1539)
力士棒杆菌ATCC13868
扩展短杆菌(谷氨酸棒杆菌)ATCC14020
黄色短杆菌(谷氨酸棒杆菌)ATCC13826，ATCC14067
immariophilum短杆菌ATCC14068
乳发酵短杆菌(谷氨酸棒杆菌)ATCC13665，ATCC13869
玫瑰色短杆菌ATCC13825
解糖短杆菌ATCC14066
生硫短杆菌ATCC19240
白色短杆菌ATCC15111
蜡状短杆菌ATCC15112
嗜氨微杆菌ATCC15354
除了已经提到的特性之外，在不偏离本发明范围的情况下，它们也可以具有其它特异的特性，诸如不同的营养需求、抗药性、药物敏感性和药物依赖性。此外，本发明的微生物可以通过遗传重组技术进行修饰以提高参与5’-一磷酸黄苷生物合成的酶的活性。
在实现本发明中有用的突变微生物可以通过采用常规的诱变技术(诸如紫外线照射、X射线照射、放射性射线照射)以及用化学诱变剂处理随后通过影印方法进行选择的突变来获得。优选的诱变剂为N-硝基-N’-甲基-N-亚硝基胍(下文中称作NTG)。
因此，可能可以使属于棒状菌的本身就具有生产5’-一磷酸黄苷能力的任何已知菌株(比如产氨棒杆菌)经历上述突变过程之一以获得突变菌株，然后测试突变菌株以确定其是否满足本发明与对抑制剂所致的生长抑制作用的抗性有关的上述要求并从而适用于本发明，其中所述的抑制剂为细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂、磷酸化抑制剂、解偶联剂、RNA-聚合酶抑制剂或甲硫氨酸类似物。通过在营养培养基中培养并且选出具有比其亲本菌株更高产率地生产5’-一磷酸黄苷能力的菌株来筛选出如上所述突变的菌株，并且在本发明中使用得到的菌株。
满足本发明要求的菌株也可以通过本领域普通技术人员众所周知的遗传重组技术来得到。
通过顺序选择或遗传重组技术可以在一个菌株中结合以上提到的抗性特征。
在实践本发明的过程中使用的菌株的代表性实例为AGRI45-11(VKPM B-8009)、AGRI101-51(VKPM B-8010)、AGRI10-52(VKPM B-8006)、AGRI67-52(VKPMB-8004)、AGRI97-52(VKPM B-8008)、AGRI11-51(VKPM B-8005)、AGRI47-51(VKPM B-8007)和AGRI93-38(VKPMB-8003)。除了对生长抑制作用的抗性以及以更高的产率生产5’-一磷酸黄苷的能力之外，其中所述的抑制作用是由细胞膜生物合成和/或功能的抑制剂、磷酸化抑制剂、解偶联剂、RNA-聚合酶抑制剂或甲硫氨酸类似物所致的，在本发明生产5’-一磷酸黄苷中所用的棒状菌与其亲本菌株具有相同的细菌学特性。保藏号(VKPM B-8003-8010)已经在俄罗斯国家工业微生物保藏所(VKPM)中进行了保藏的微生物，该保藏所位于俄罗斯莫斯科的1-st DorozhnyProezd，b.1 VKPM B-8003至8010于2001年7月17日保藏于上述保藏机构，并于2001年10月15日按布达佩斯条约由原始保藏转为国际保藏。
这些菌株来源于作为亲本菌株的产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)，该菌株为5’-一磷酸黄苷产生菌产氨棒杆菌AJ13606的链霉素抗性衍生菌。依次地，通过将以下一系列突变(即鸟嘌呤渗漏的需要、对高温的敏感性以及对磺胺胍的抗性)依次引入到菌株AG98-79的基因组中，从5’-一磷酸肌苷产生菌产氨棒杆菌AG98-79得到了菌株产氨棒杆菌AJ13606，其中产氨棒杆菌AG98-79为已知菌株产氨棒杆菌225-5(VKPM B-1073)[俄罗斯专利515783]的衍生菌株。
以上述方法得到的产生5’-一磷酸黄苷的微生物可以以与常规的微生物培养相同的方式进行培养。因此，对培养基而言，可以使用液体培养基，其中含有一种或多种碳源、一种或多种氮源和金属离子，并且如果需要的话，还含有其它营养物，比如氨基酸、核酸和维生素。作为碳源，例如可以使用葡萄糖、果糖、核糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖、淀粉、淀粉水解物、糖蜜等。作为氮源，可以使用有机氮源(比如胨、玉米浆、大豆粉、酵母提取物以及脲)，此外还可以使用无机氮源(比如硫酸、硝酸、盐酸、碳酸和其它酸的铵盐，氨气和氨水)，它们可以单独或混合使用。作为其它营养物，适当地选出为细菌生长所必须的无机盐、氨基酸、维生素等并且这些物质可以单独或混合使用。
培养通常是在需氧的条件下进行的。培养基优选pH在5至9的范围内。培养温度通常在25℃至40℃之间进行选择，以便该温度适合于所用微生物的生长以及5’-一磷酸黄苷的积累。优选进行培养直至5’-一磷酸黄苷的积累基本上达到最大。一般说来，培养1到6天能够达到此目的。
对于从所得的培养液中分离和回收5’-一磷酸黄苷来说，可以采用本领域公知的常规纯化技术。
从工业化的观点来看，本发明生产5’-一磷酸黄苷的方法是很有利的，这是因为它导致更为大量地积累了5’-一磷酸黄苷，同时极少地生产出5’-一磷酸肌苷、黄苷或黄嘌呤这类副产物。
实施本发明的最佳方式
下面的实施例目的在于更为具体地解释本发明。
实施例1
对甘氨酸具有抗性的突变株的选择
浓度介于1至6％之间的甘氨酸通过抑制D-丙氨酰：D-丙氨酰连接酶和丙氨酸消旋酶来影响细胞壁的合成。在大肠杆菌中，对甘氨酸耐受性增加的突变株也表现出对青霉素G的敏感性有所增加(Wijsman与Pafort，1974《Mol.Gen.Genet.》128，349-357)。因此，通过选择甘氨酸抗性突变株，有可能获得在胞外被膜中功能有所扭曲的菌株。这种缺陷可能模拟了应激条件并且诱导了参与XMP分泌的转运蛋白。因此，选出了对由甘氨酸所致的生长抑制作用具有抗性的突变株。
用50μg/ml NTG处理产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)20分钟。然后将细胞平铺在PYM培养基上，所述培养基具有下列组成(g/L)：胨-10.0，酵母提取物-10.0，肉膏-5.0，NaCl-2.5，琼脂-20.0，并且含有40g/L、或50g/L或者60g/L的甘氨酸。将接种的平板在30℃下培养5天。从呈现出的菌落当中，选出了产率最高的菌株产氨棒杆菌AGRI10-52(VKPM B-8006)。
将该菌株以及亲本菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)分别在种子培养基中在通气情况下于32℃下培养20小时，所述的培养基具有下列组成(g/L)：葡萄糖-20.0，胨-10.0，酵母提取物-10.0，NaCl-2.5，pH 7.2，该培养基盛于20×200mm试管中。然后，将0.3ml所得的培养物接种到盛于20×200mm试管中的3ml具有下列组成(见下文)的发酵培养基中，并且在旋转摇床上在32℃下培养72小时。
在培养后，通过已知的方法测定培养基中XMP的积累量。
结果示于表1中。如表1所示，对甘氨酸具有抗性的AGRI10-52菌株比起亲本菌株积累了更多的XMP。
基本培养基的组成g/L
葡萄糖               90.0
脲                   7.2
谷氨酸一钠盐         20.0
Mamenou(T-N)         1.4
KH2PO4                13.0
K2HPO4                15.0
MgSO4·7H2O                      10.0
CaCl2·2H2O                      0.1
MnCl2·4H2O                      0.01
ZnSO4·7H2O                      0.001
FeSO4·7H2O                      0.01
生物素                           0.00003
泛酸钙                           0.01
盐酸硫胺素                       0.005
腺嘌呤                           0.025
鸟嘌呤                           0.025
pH(用氢氧化钾调节)               7.2
表1
  菌株   在6％甘氨酸存在下的生长情况   XMP·2Na·7H<sub>2</sub>Og/L
  AGRI45-11   -   23.5
  AGRI10-52   +   28.0
注释：+：生长；-：没有生长
实施例2
对多粘菌素B具有抗性的突变株的选择
多粘菌素B是一种有效地抵抗革兰氏阴性细菌的多肽抗生素。人们认为细菌的细胞膜是所述抗生素的目标。本发明的发明人发现高浓度(40-50μg/ml)的多粘菌素B抑制了革兰氏阳性细菌产氨棒杆菌的生长。赋予了对多粘菌素B的抗性的突变可以作用于胞质膜并且模拟了应激条件，其中包括XMP流出转运蛋白。从而选出对由所述药物所致的生长抑制作用具有抗性的突变株。
用NTG处理产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)，并且将细胞平铺在如实施例1所述的PYM培养基上，而所述培养基含有45μg/ml、或50μg/ml、或55μg/ml或者60μg/ml的多粘菌素。将接种的平板在30℃下培养5天。从呈现出的菌落中，选出了产率最高的菌株产氨棒杆菌AGRI101-51(VKPMB-8010)。
将该菌株以及亲本菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPMB-8009)分别在如实施例1的种子培养基中在通气情况下于32℃下培养20小时。然后，将0.3ml所得的培养物接种到盛于20×200mm试管中的3ml实施例1的发酵培养基中，并且在旋转摇床上在32℃下培养72小时。在培养后，通过已知的方法测定培养基中XMP的积累量。
结果示于表2中。如表2所示，对多粘菌素具有抗性的AGRI101-51菌株比起亲本菌株积累了更多的XMP。
表2
    菌株     在45μg/ml多粘菌素存在下的生长情况     XMP·2Na·7H<sub>2</sub>Og/L
  AGRI45-11     -     23.5
  AGRI101-51     +     27.6
参见表1的注释
实施例3
对利福平具有抗性的突变株的选择
利福平及其衍生物为通过结合到酶的β-亚单位并阻止转录开始来抑制依赖于DNA的RNA聚合酶活性的抗生素[Hartman等人，1967《Biochim.Biophys.Acta》145，843-844；Linn等人，1975《细菌学杂志》(J.Bacteriol.)122，1387-1390]。已经报道了针对利福平抗性的突变对不同细菌的复合代谢过程具有多效的影响[Kane等人，1979《细菌学杂志》(J.Bacteriol.)137，1028-1030；Jin与Gross，1989《细菌学杂志》(J.Bacteriol.)171，5229-5231；Livshits与Sukhodolets，1973《Genetika》9，102-111]，而这类似于对已经条件的响应。因此，选出了对由利福平所致的生长抑制作用具有抗性的突变株并且测试了它的XMP的产率。
将亲本菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPMB-8009)划线接种到实施例1的PYM培养基上，所述培养基含有5、15、30或50μg/ml的利福平(而非甘氨酸)，并且将接种的平板在34℃下培养3天。从自发呈现出的菌落中选出对利福平具有抗性的突变株。在这些突变株中，选出产率最高的菌株产氨棒杆菌AGRI93-38(VKPMB-8003)。
将该菌株以及亲本菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPMB-8009)分别在如实施例1的种子培养基中在通气情况下于32℃下培养20小时。然后，将0.3ml所得的培养物接种到盛于20×200mm试管中的3ml实施例1的发酵培养基中，并且在旋转摇床上在32℃下培养72小时。在培养后，通过已知的方法测定培养基中XMP的积累量。
结果示于表3中。如表3所示，对利福平具有抗性的AGRI93-38菌株比起亲本菌株积累了大约多出10％的MP。
表3
  菌株   在15μg/ml利福平存在下的生长情况   XMP·2Na·7H<sub>2</sub>Og/L
  AGRI45-11   -   23.5
AGRI93-38 + 26.0
参见表1的注释
实施例4
对寡霉素具有抗性的突变株的选择
寡霉素是一种众所周知的磷酸化抑制剂，它通过F0/F1ATP酶阻碍ATP的合成。克服了所述抗生素作用的突变可能已经提高了产生ATP的活性。反过来，产生ATP的激活可能对转运蛋白介导的嘌呤核苷酸的分泌具有积极的作用。
采用实施例1所述的步骤，从菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)中选出对50或100μg/ml寡霉素具有抗性的一系列突变株，只是其中使用了寡霉素而非甘氨酸。它们中的一些证实了要比亲本菌株的产率高。当如实施例1进行平行测定时，最佳突变株产氨棒杆菌AGRI67-52(VKPM B-8004)比起亲本菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)积累了大约多出22％的XMP。
表4
  菌株 在100μg/ml寡霉素存在下的生长情况   XMP·2Na·7H<sub>2</sub>Og/L
  AGRI45-11 -   23.5
  AGRI67-52 +   28.5
参见表1的注释
实施例5
对羰基氰化间氯苯腙具有抗性的突变株的选择
羰基氰化间氯苯腙(CCCP)是众所周知的解偶联剂，它废止了呼吸链和磷酸化系统之间的专性联系。克服了所述药物的这种作用的突变可以增强细胞的能量代谢并提高了产生ATP的活性。反过来，产生ATP的激活可能对转运蛋白介导的嘌呤核苷酸的分泌具有积极的作用。
用NTG处理产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)，并将细胞平铺到如实施例1的PYM培养基上，其中所述培养基含有2、4或6μg/ml的CCCP、而非甘氨酸。将接种的平板在30℃下培养5天。从呈现出的菌落当中，选出产率最高的菌株产氨棒杆菌AGRI97-52(VKPM B-8008)。将该菌株以及亲本菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)分别在如实施例1的种子培养基中在通气情况下于32℃下培养20小时。然后，将0.3ml所得的培养物接种到盛于20×200mm试管中的3ml实施例1的发酵培养基中，并且在旋转摇床上在32℃下培养72小时。在培养后，通过已知的方法测定培养基中XMP的积累量。
结果示于表5中。如表5所示，菌株AGRI97-52比起亲本菌株积累了大约多出15％的XMP。
表5
  菌株   在4μg/ml CCCP存在下的生长情况   XMP·2Na·7H<sub>2</sub>Og/L
  AGRI45-11   -   23.5
  AGRI97-52   +   26.6
参见表1的注释
实施例6
对甲硫氨酸亚砜具有抗性的突变株的选择
高浓度的DL-甲硫氨酸及其类似物、谷氨酰胺拮抗剂、DL-甲硫氨酸亚砜抑制了XMP产生菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)的生长。已知枯草芽孢杆菌的甲硫氨酸亚砜抗性突变株生产鸟苷的能力有所改善(Matsui等人，《应用环境微生物学》(Appl.Environ.Microbiol.)34，337-341，1977；Matsui等人，《农业生物化学》(Agric.Biol.Chem.)43(6)，1317-1323，1979；Matsui等人，《农业生物化学》(Agric.Biol.Chem.)46(9)，2347-2352，1982)。从而得到了对所述类似物具有抗性的突变株。
如实施例1那样用NTG处理产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)，将等分试样引入到20×200mm试管中，并于32℃下在旋转摇床上在具有下列组成(见下文)的基本培养基中振荡培养20小时。然后收集细胞并将其平铺在含有琼脂以及若干种抑制剂组合的基本培养基上：
1.DL-甲硫氨酸亚砜(5mg/ml)+DL-甲硫氨酸(7.5mg/ml)；
2.DL-甲硫氨酸亚砜(10mg/ml)+DL-甲硫氨酸(7.5mg/ml)；
3.DL-甲硫氨酸亚砜(5mg/ml)+DL-甲硫氨酸(20mg/ml)；
4.DL-甲硫氨酸亚砜(10mg/ml)+DL-甲硫氨酸(20mg/ml)；
基本培养基的组成g/L
葡萄糖                      20.0
脲                          2.0
KH2PO4                      1.0
K2HPO4                      3.0
MgSO4·7H2O                 0.3
CaCl2·2H2O                 0.1
MnCl2·4H2O                 0.0036
ZnSO4·7H2O                 0.001
FeSO4·7H2O                 0.01
生物素                      0.00003
泛酸钙                      0.01
盐酸硫胺素                  0.005
腺嘌呤                      0.025
鸟嘌呤                      0.025
pH(用氢氧化钾调节)          7.2
琼脂(在固体培养基中)        20.0
将培养了4至8天后出现的突变株挑出并且测试其XMP的产率。在这些菌株当中，选出菌株产氨棒杆菌AGRI11-51(VKPMB-8005)。将该菌株以及亲本菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)分别在如实施例1的种子培养基中在通气情况下于32℃下培养20小时。然后，将0.3ml所得的培养物接种到盛于20×200mm试管中的3ml实施例1的发酵培养基中，并且在旋转摇床上在32℃下培养72小时。在培养后，通过已知的方法测定培养基中XMP的积累量。结果示于表6中。如表6所示，菌株AGRI11-51比起亲本菌株积累了大约多出31％的XMP。
表6
  菌株   在10mg/ml DL-甲硫氨酸亚砜+20mg/ml DL-甲硫氨酸存在下的生长情况   XMP·2Na·7H<sub>2</sub>Og/L
  AGRI45-11   -   23.5
  AGRI11-51   +   31.1
参见表1的注释
实施例7
对甲硫氨酸砜具有抗性的突变株的选择
高浓度的另一种甲硫氨酸类似物、即DL-甲硫氨酸砜也抑制了XMP产生菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPM B-8009)的生长。采用实施例6所述的步骤得到了对所述类似物具有抗性的突变株，其中除了仅仅采用了下列抑制剂的组合：DL-甲硫氨酸砜(10mg/ml)+DL-甲硫氨酸(20mg/ml)。
在培养了4至8天后出现的突变株当中，选出菌株产氨棒杆菌AGRI47-51(VKPM B-8007)。将该菌株以及亲本菌株产氨棒杆菌AGRI45-11(VKPMB-8009)分别在如实施例1的种子培养基中在通气情况下于32℃下培养20小时。然后，将0.3ml所得的培养物接种到盛于20×200mm试管中的3ml实施例1的发酵培养基中，并且在旋转摇床上在32℃下培养72小时。结果示于表7中。
表7
  菌株   在10mg/mlDL-甲硫氨酸砜+20mg/mlDL-甲硫氨酸存在下的生长情况   XMP·2Na·7H<sub>2</sub>Og/L
  AGRI45-11   -   23.5
  AGRI47-51   +   32.2
参见表1的注释
如表7所示，AGRI47-51菌株比起亲本菌株积累了大约多出36％的XMP。

Claims (16)

1.一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收5’-一磷酸黄苷，其中所述细菌是棒状菌，所述的棒状菌进行了修饰以对由抑制剂所致的生长抑制作用具有抗性并且具有以比亲本菌株更高产率地生产5’-一磷酸黄苷的能力，所述的抑制剂选自抑制胞质膜生物合成或者影响其正常功能的化合物、抑制通过F0/F1ATP酶由ADP和Pi合成ATP的化合物、解偶联剂、抑制依赖于DNA的RNA聚合酶活性的化合物和甲硫氨酸类似物。
2.一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收5’-一磷酸黄苷，其中所述细菌是棒状菌，所述的棒状菌具有以比亲本菌株更高产率地生产5’-一磷酸黄苷的能力并且进行了修饰以对甘氨酸具有抗性。
3.一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收5’-一磷酸黄苷，其中所述细菌是棒状菌，所述的棒状菌具有以比亲本菌株更高产率地生产5’-一磷酸黄苷的能力并且进行了修饰以对多粘菌素具有抗性。
4.一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收5’-一磷酸黄苷，其中所述细菌是棒状菌，所述的棒状菌具有以比亲本菌株更高产率地生产5’-一磷酸黄苷的能力并且进行了修饰以对寡霉素具有抗性。
5.一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收5’-一磷酸黄苷，其中所述细菌是棒状菌，所述的棒状菌具有以比亲本菌株更高产率地生产5’-一磷酸黄苷的能力并且进行了修饰以对羰基氰化间氯苯腙(CCCP)具有抗性。
6.一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收5’-一磷酸黄苷，其中所述细菌是棒状菌，所述的棒状菌具有以比亲本菌株更高产率地生产5’-一磷酸黄苷的能力并且进行了修饰以对利福平具有抗性。
7.一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收5’-一磷酸黄苷，其中所述细菌是棒状菌，所述的棒状菌具有以比亲本菌株更高产率地生产5’-一磷酸黄苷的能力并且进行了修饰以对甲硫氨酸类似物具有抗性，其中所述的甲硫氨酸类似物选自DL-甲硫氨酸亚砜、L-甲确氨酸亚砜、DL-甲硫氨酸砜以及L-甲硫氨酸砜。
8.根据权利要求1至7之任一项的方法，其中所述的细菌属于产氨棒杆菌(Corynebacterium ammoniagenes)。
9.棒状菌的一种菌株，其中该菌株为产氨棒杆菌AGRI 10-52(VKPM B-8006)。
10.棒状菌的一种菌株，其中该菌株为产氨棒杆菌AGRI 101-51(VKPM B-8010)。
11.棒状菌的一种菌株，其中该菌株为产氨棒杆菌AGRI 67-52(VKPM B-8004)。
12.棒状菌的一种菌株，其中该菌株为产氨棒杆菌AGRI 97-52(VKPM B-8008)。
13.棒状菌的一种菌株，其中该菌株为产氨棒杆菌AGRI 93-38(VKPM B-8003)。
14.棒状菌的一种菌株，其中该菌株为产氨棒杆菌AGRI 11-51(VKPM B-8005)。
15.棒状菌的一种菌株，其中该菌株为产氨棒杆菌AGRI 47-51(VKPM B-8007)。
16.一种通过发酵生产5’-一磷酸黄苷的方法，该方法包括下列步骤：在培养基中培养权利要求9至15之任一项的细菌以便在培养物中生产和积累5’-一磷酸黄苷，以及从中回收5’-一磷酸黄苷。
CNB01130250XA 2000-11-22 2001-11-22 通过使用棒状菌突变株发酵生产5’—一磷酸黄苷的方法 Expired - Fee Related CN100384983C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000128988/13A RU2209249C2 (ru) 2000-11-22 2000-11-22 Способ получения ксантозин-5'-монофосфата, штамм corynebacterium ammoniagenes - продуцент ксантозин-5'-монофосфата (варианты)
RU2000128988 2000-11-22

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1362524A CN1362524A (zh) 2002-08-07
CN100384983C true CN100384983C (zh) 2008-04-30

Family

ID=20242351

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB01130250XA Expired - Fee Related CN100384983C (zh) 2000-11-22 2001-11-22 通过使用棒状菌突变株发酵生产5’—一磷酸黄苷的方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20020098552A1 (zh)
JP (1) JP2002165588A (zh)
KR (1) KR100862172B1 (zh)
CN (1) CN100384983C (zh)
RU (1) RU2209249C2 (zh)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100505925B1 (ko) * 2002-12-11 2005-08-03 씨제이 주식회사 5’-크산틸산을 생산하는 미생물
EP1648525A4 (en) * 2003-06-05 2008-02-27 Biomagic Inc PROCESSES FOR PRODUCING, MARKETING AND USING DEODORIZING COMPOSITIONS
BRPI0509056A (pt) * 2004-03-31 2007-08-21 Ajinomoto Kk bactéria pertencendo ao gênero bacillus ou ao gênero escherichia, e, métodos para produzir um nucleosìdeo de purina, para produzir um nucleotìdeo de purina e para produzir ácido 5'-guanìlico
KR101072708B1 (ko) * 2008-12-17 2011-10-11 씨제이제일제당 (주) ５＇－크산틸산 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용한 ５＇－크산틸산의 생산방법
JP5528013B2 (ja) * 2009-06-04 2014-06-25 花王株式会社 アルカリプロテアーゼ高生産菌
KR101210704B1 (ko) * 2010-03-19 2012-12-10 씨제이제일제당 (주) ５'－크산틸산 및 ５'－구아닐산 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용한 5'－크산틸산 또는 ５'－구아닐산의 생산방법
CN106005643B (zh) * 2016-06-06 2018-05-04 广东金弘达自动化科技股份有限公司 一种板件双面胶纸贴附装置
KR102013873B1 (ko) 2018-01-25 2019-08-23 씨제이제일제당 주식회사 퓨린 뉴클레오티드를 생산하는 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 퓨린 뉴클레오티드의 생산방법
KR101929158B1 (ko) * 2018-06-07 2018-12-13 씨제이제일제당 (주) 5'-크산틸산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 5'-크산틸산의 제조방법
KR102006976B1 (ko) * 2019-02-26 2019-08-06 씨제이제일제당 주식회사 신규 프로모터 및 이를 이용한 퓨린 뉴클레오티드 제조방법

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010089980A (ko) * 2000-04-08 2001-10-17 손 경 식 5'-크산틸산을 생산하는 미생물
KR20010089981A (ko) * 2000-04-08 2001-10-17 손 경 식 5'-크산틸산을 생산하는 미생물
KR20010089979A (ko) * 2000-04-08 2001-10-17 손 경 식 5'-크산틸산을 생산하는 미생물

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5978697A (ja) * 1982-10-25 1984-05-07 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ５′−グアニル酸の製造法
JPS60156399A (ja) * 1984-01-26 1985-08-16 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd ５’−キサンチル酸の製造法
JPS62100282A (ja) * 1985-10-25 1987-05-09 Rikagaku Kenkyusho 細菌の培養方法
JPH0716431B2 (ja) * 1986-06-02 1995-03-01 協和醗酵工業株式会社 ５′−グアニル酸の製造法
JP2618383B2 (ja) * 1987-01-28 1997-06-11 協和醗酵工業株式会社 微生物の育種方法
JP3016883B2 (ja) * 1991-02-19 2000-03-06 協和醗酵工業株式会社 発酵法による５’−キサンチル酸の製造法
JPH08168383A (ja) * 1995-09-11 1996-07-02 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 核酸関連物質の製造法
JP2000295996A (ja) * 1999-02-08 2000-10-24 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd プリンヌクレオチドの製造法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010089980A (ko) * 2000-04-08 2001-10-17 손 경 식 5'-크산틸산을 생산하는 미생물
KR20010089981A (ko) * 2000-04-08 2001-10-17 손 경 식 5'-크산틸산을 생산하는 미생물
KR20010089979A (ko) * 2000-04-08 2001-10-17 손 경 식 5'-크산틸산을 생산하는 미생물

Also Published As

Publication number Publication date
CN1362524A (zh) 2002-08-07
KR100862172B1 (ko) 2008-10-09
RU2209249C2 (ru) 2003-07-27
JP2002165588A (ja) 2002-06-11
KR20020040602A (ko) 2002-05-30
US20020098552A1 (en) 2002-07-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100674401B1 (ko) Ｌ-글루탐산-생성 세균 및 ｌ-글루탐산 제조 방법
ES2399578B1 (es) Microorganismo que presenta una mayor productividad de l-valina y proceso para la producción de l-valina utilizando el mismo
CN103224964B (zh) 同时生产l‑氨基酸及核黄素的微生物及使用其生产l‑氨基酸及核黄素的方法
CN100366731C (zh) 通过发酵生产l-精氨酸或l-赖氨酸的方法
US20100124777A1 (en) Bacterium producing L-glutamic acid and method for producing L-glutamic acid
CN100384983C (zh) 通过使用棒状菌突变株发酵生产5’—一磷酸黄苷的方法
CN103382492A (zh) L-氨基酸或核酸的生产方法
Zhang et al. Development of a defined medium fermentation process for physostigmine production by Streptomyces griseofuscus
CN101960005A (zh) 5＇-鸟苷酸的生产方法
CN101993904A (zh) 5’-鸟苷酸的生产方法
US6344344B1 (en) Method for producing uridine-5&#39;-monophosphate by fermentation using mutant strains of coryneform bacteria
JP2000270872A (ja) Ｌ−グルタミン酸の製造法
JPH057493A (ja) 発酵法によるｌ−バリンの製造法
KR100694427B1 (ko) 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5&#39;-이노신산의제조 방법
EP0336387B1 (en) Process for producing l-arginine
WO2007067005A1 (en) Fermentation process for preparing l-lysine
KR830001259B1 (ko) 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법
KR890000538B1 (ko) 미생물에 의한 5&#39;-이노신산의 제조방법
JPH0211236B2 (zh)
JP2003169674A (ja) Ｌ−リジンの製造法
Misawa et al. Production of Nucleic Acid-Related Substances by Fermentative Processes: Part XXXIV. Isolation of Nucleotide Accumulating Bacteria from Natural Sources
JPS58193695A (ja) Ｌ−ヒスチジンの製造法
JPS60221097A (ja) Ｌ−リジンの製造法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20080430

Termination date: 20191122