CN100337636C

CN100337636C - 一种人参总次苷药物组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN100337636C
Application number: CNB2005100838556A
Authority: CN
Inventors: 孙从新; 罗何生; 赵咏丽
Original assignee: China Medicament Research & Development Center Co Ltd
Current assignee: Shanghai Hong Fu Tang biological medicine technology Co., Ltd.
Priority date: 2005-07-14
Filing date: 2005-07-14
Publication date: 2007-09-19
Anticipated expiration: 2025-07-14
Also published as: CN1723912A

Abstract

本发明涉及一种人参总次苷药物组合物及其制备方法和应用。人参总次苷药物组合物主要有效成分是20-(S)-Rg3，20-(R)-Rg3，20-(S)-Rg2，20-(R)-Rg2，20-(S)-Rh1和20-(R)-Rh1，人参总次苷药物组合物制备方法是人参属植物提取物经酸水解后，通过大孔树脂分离纯化浓缩所得的提取物。人参总次苷药物组合物可用于制备治疗心阳不振，心气虚弱，气滞血瘀导致的胸痹心痛；心肌缺血；失血性休克的药物组合物。

Description

一种人参总次苷药物组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种含有人参有效部位的药物组合物及其制备方法和应用，特别是涉及一种人参总次苷药物组合物及其制备方法和应用。

背景技术

人参是中医补气之要药。性味与归经：甘、微苦，平。功能与主治：大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神。用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚赢，惊悸失眠，阳痿宫冷；心力衰竭，心原性休克。

中医和中西医结合临床已证实，人参及其制剂有增强心肌收缩力、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、减少心肌耗氧量、保护心肌再灌注损伤、抑制血小板聚集、抗凝血酶等药理活性，临床应用于胸痹心痛(冠心病)、动脉硬化等疾病的治疗。

胸痹心痛的病因主要是“胸中阳微不运，久则阴乘阳位而为痹结”(《类证治裁●胸痹篇》)，“或因身受寒邪，口食冷物，内有郁热，素有顽痰死血，或因恼怒气滞而成胸痛”(见《古今医鉴●心痛门》)。

人到中年之后，体质下降，五脏渐衰，脏腑功能失调，素体阳气不足，复受寒暑等邪气侵袭，或饮食不节，嗜食肥甘，或思虑劳倦，或情志失调而致胸痹心痛。其病位在心，涉及肺、脾、肝、肾诸脏。病理变化为脏腑气血阴阳失调，心血不足，心阳不振，导致气滞、寒凝、痰浊、瘀血等阻滞心脉，致心脉痹阻，气滞血瘀而发病。病机为本虚标实，本虚即心气、心血、心阴亏虚或心肾阳虚；标实即气滞、寒凝、痰浊、瘀血阻痹心脉等，发病过程中本虚与标实往往互为因果而使病情加重，呈现虚实夹杂、标本同现的复杂证候。治则以调和阴阳、温补阳气、疏通气血为大法。气为血之帅，气行血则行。补气振阳，活血化瘀是治疗胸痹心痛的重要法则。

现代科研结果表明：人参的主要生物活性成分是人参皂苷。红参和生晒人参虽然都含有皂苷，但其皂苷单体有所不同，红参中含有生晒参中没有的皂苷——人参皂苷Rg2、Rg3、Rh1、Rh2等。这些新的皂苷是在人参加工过程中，经过蒸制、干燥时，人参皂苷水解产生的次生皂苷。

这些次生皂苷具有许多新的活性，例如：人参皂苷Rh1、Rh2、Rg3有明显的抗癌活性，对癌细胞有诱导再分化作用，可诱导癌细胞重新分化为健康细胞，其它皂苷单体却没有这种作用，或者作用强度较弱。人参皂苷Rg3对胶原或ADP诱导的血小板聚集有较强的抑制作用。人参皂苷Rh1对凝血酶诱导的纤维蛋白原转化为纤维蛋白有明显的抑制作用。

另外，近年运用血清药理学理念研究人参皂苷的体内代谢的结果表明，原人参皂苷在人体内吸收率很低(人参皂苷Rb1口服仅吸收1％)，真正被人体吸收的活性成份是经肠菌代谢产生的次生皂苷。王本祥教授在研究人参皂苷体内代谢过程时发现，口服人参皂苷Rg1后，吸收入血的生物活性成份主要是经肠菌代谢产生的次生皂苷Rh1。

严永清教授在研究生脉饮的活性成份过程中，发现生脉饮复方共同煎煮的比单味药分煎的疗效好，复方共同煎煮后，汤液中的人参皂苷主要是人参次生皂苷Rg2、Rg3、Rh1，原人参皂苷已消失。这一研究结果表明复方生脉饮的主要生物活性成份是人参皂苷Rg2、Rg3、Rh1。

但是，这些皂苷天然含量极低，例如：Rg3在白参中的含量仅为0.0003％，在红参中的含量约为0.03％，而Rh2和C-K在天然人参中并不存在，仅在红参中含有Rh2约0.001％。而C-K为人参皂苷的肠道菌代谢产物。这些人参次生皂苷化合物由于获取困难，要进行药物开发必需的公斤级量几乎是不可能的。因此，采用新的方法制备上述化合物具有重要意义。

发明内容

本发明的目的之一是克服原人参皂苷在人体内吸收利用率很低、生物活性较弱的缺点，提供一种人参总次苷药物组合物。人参次生皂苷是人参中活性较强的有效成分，天然人参中活性成分人参次生皂苷的含量极低。

本发明之一是人参总次苷药物组合物，是通过如下途径实现的。

本发明是一种人参总次苷药物组合物，其特征在于：

所述的人参总次苷药物组合物包含组分：①以人参原二醇为苷元的人参皂苷：包括人参皂苷Rg3，人参皂苷Rh2；和②以人参原三醇为苷元的人参皂苷：包括人参皂苷Rg2，人参皂苷Rh1，人参皂苷Rh3，人参皂苷Rf，三七皂苷R2；

按重量百分比计，以人参原二醇、人参原三醇为苷元的人参皂苷的和在20％以上。

其中：人参皂苷Rg3是人参皂苷20-(S)-Rg3和/或人参皂苷20-(R)-Rg3；人参皂苷Rg2是人参皂苷20-(S)-Rg2和/或人参皂苷20-(R)-Rg2；人参皂苷Rh1是人参皂苷Rh120-(S)-Rh1和/或人参皂苷20-(R)-Rh1；

按重量百分比计：

Rg3为10-30％，优选12-20％；

Rg2为1-20％，优选4-16％；

Rh1为1-10％，优选3-5％。

按重量百分比计，以人参原二醇、人参原三醇为苷元的人参皂苷的和在50％以上。

所述的用于提取人参总次苷药物组合物的植物为五加科人参属植物；他们为各种人参、西洋参、三七、竹节参，其中优选的的植物为人参须。

所述的人参总次苷药物组合物的提取制备方法包括水解步骤；所述的水解步骤用无机酸或者有机酸作为水解催化剂，优选醋酸作为水解催化剂。

在具体实施中，所述的药物组合物可以含有治疗有效量的人参总次苷提取物、三七总次苷提取物、添加剂、赋形剂及医学上可接受的载体。

本发明的人参总次苷药物组合物是人参提取物经弱酸水解，提取制备的总次生皂苷。其主要成分生源关系为：人参皂苷Rb类(原生苷)水解产生的人参皂苷Rg3(次生苷)，人参皂苷Re类(原生苷)水解产生的人参皂苷Rg2(次生苷)，以及人参皂苷Rg1类(原生苷)水解产生的人参皂苷Rh1(次生苷)。经过系统的探索，我们已经筛选出良好的高压液相梯度洗脱条件，本发明的20-(S)-Rg3，20-(R)-Rg3，20-(S)-Rg2，20-(R)-Rg2，20-(S)-Rh1，20-(R)-Rh1能达到良好的分离效果。

本发明的目的之二是提供一种人参总次苷药物组合物的制备方法。

本发明之二的人参总次苷药物组合物的制备方法是这样实现的。

本发明的人参总次苷药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)人参总皂苷提取液制备：将人参属植物，用水或者有机溶剂提取，再将提取液浓缩；

(2)水解液制备：用无机酸或者有机酸为催化剂水解上述的浓缩提取液，

(3)树脂吸附：水解液通过大孔树脂吸进行附柱，

(4)脱除杂质：吸收了水解液的吸附柱再经过水洗脱、碱水洗脱、浓度在35％以下的乙醇洗脱除去杂质；

(5)洗脱、浓缩、干燥：脱除杂质后用浓度在35％以上的乙醇洗脱吸附柱，收集35％以上的乙醇洗脱液，浓缩成流浸膏，真空干燥，得人参总次苷药物组合物。

所述的步骤(2)中的催化剂选自冰醋酸、丙酸、盐酸、硫酸。所述水解反应在80-100℃条件下进行，所述的水解时间为3-8小时；优选冰醋酸水解反应在99℃条件下进行，水解时间为5小时。

所述的步骤③中的大孔树脂为苯乙烯类大孔树脂，包括苯乙烯类大孔树脂、乙基苯乙烯类大孔树脂、甲基苯乙烯类大孔树脂。

所述的步骤④中的碱水是由选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾所配成的水溶液，浓度为0.1％-5.0％。优选氢氧化钠为0.3-0.7％，氢氧化钾0.4-0.8％，碳酸钠或碳酸钾0.6-1.5％。洗脱除去杂质用的乙醇浓度在35％以下，优选15-25％。

在所述步骤⑤中，洗脱吸附柱的乙醇浓度在35％以上，优选60-80％。

本发明的目的之三是提供一种人参总次苷药物组合物在制备下列药物中的应用：

在制备治疗心阳不振，心气虚弱，气滞血瘀导致的胸痹心痛的药物中的应用；

在制备治疗心肌缺血的药物中的应用；

在制备治疗失血性休克的药物中的应用；

在制备治疗心力衰竭的药物中的应用。

人参总次苷药物组合物急性毒性试验，人参总次苷药物组合物小鼠灌胃给药最大给药量为7-15g/kg。

人参总次苷药物组合物给小鼠腹腔注射，经Bliss法计算LD₅₀及95％平均可信限范围为0.19-0.25mg/kg。

2、SD大鼠重复给药13周恢复4周毒性试验结果

将人参总次苷分别以1500、750、250mg/kg给SD大鼠连续灌服13w，检测给药13w后以及停药4w后动物体重、食量等一般状况、血液生化、血象、心电、尿常规、各脏器组织病理等指标的变化，结果如下：

人参总次苷药物组合物对啮齿类大鼠长期连续多次给药，在相当于临床拟用量300倍时，可能会对雄性动物的体重增长有一定的抑制作用，可能会对免疫系统、雄性性器官以及血液RBC有一定的刺激作用，并使血液BUN显著升高、GLU显著性下降，对肾代谢功能产生一定的毒性反应，但未见明显损害性病理改变，没有产生脏器的器质性损害，停药后即可恢复，无蓄积作用。因此可认为，在相当于临床拟用量150倍以下给药，对啮齿类大鼠是安全剂量。

本发明的人参总次苷药物组合物在制备主治心阳不振，心气虚弱，气滞血瘀导致的胸痹心痛的新药中的应用；和/或在制备主治心肌缺血的新药中的应用；和/或在制备主治失血性休克的新药中的应用时，人参总次苷药物组合物的给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药，以以人参原二醇为苷元和人参原三醇为苷元的各种人参次生皂苷之和在50％以上的提取物计算0.02mg-200mg/kg.日，优选0.2mg-20mg/kg.日，口服情况下以人参原二醇为苷元和人参原三醇为苷元的各种人参次生皂苷之和在50％以上的提取物计算0.1-4g/kg.日，优选1-50mg/kg.日。

本药品是根据人参的功能主治，结合现代中医临床应用人参治疗冠心病的实际疗效，参考国内外有关人参药理学研究的最新进展，从人参中提取制备人参的有效部位-人参总次苷提取物，研制的主治心阳不振，心气虚弱，气滞血瘀导致的胸痹心痛的新药。

本发明的药效学实验研究表明，

1.人参总次苷提取物具有显著改善犬急性心肌缺血的作用，明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST)；

2.减小经N-BT染色所显示的梗塞区面积；可明显增加心肌缺血时的冠脉血流量，促进侧支循环开放和建立，增加心肌的供氧；

3.可明显升高心肌缺血时血浆6-酮-前列腺素F_1a(6-Keto-PGF_1a)的水平和6-Keto-PGF_1a/TXB₂的比值；

4.可显著抑制垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血；

5.能够显著性防治大鼠冠脉结扎引起的心肌缺血，其作用显著优于人参总皂苷(P＜0.01)；

6.有非常显著的抗心原性休克作用，对缺血所致麻醉犬休克模型，在剂量相同的情况下，人参总次苷在给药后约20min开始发挥作用，而人参总皂苷在给药后约40min开始发挥作用，作用效果较弱；一般情况下，人参总次苷提取物在20、30、40min时间点，与人参总皂苷相比，作用效果有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，在作用速度和作用效果方面优于人参总皂苷；

7.对BaCl₂引起大鼠心律失常的动物模型，人参总次苷提取物200mg/kg能显著延缓VP、VT出现的时间(P＜0.05、P＜0.05)，显著缩短心律失常持续时间(P＜0.05)，100、50mg/kg可显著缩短心律失常持续时间(P＜0.05、P＜0.05)；

8.人参总次苷提取物200mg/kg预先给药7d，对试验大鼠颈动静脉旁路血栓的形成有抑制作用；

9.人参总次苷提取物对ADP诱发的血小板聚集有抑制作用，尤其是高剂量组，对体外的血小板聚集有显著的抑制作用；

10.对离体大鼠心脏缺血再灌注，可以提高冠脉流量，在一定时间内提高心跳力量，并对缺血心肌有一定的保护能力。

基于以上传统的中医理论和中医临床经验及药效学实验科研成果，研制了以人参次生皂苷为主要有效成分的主治心阳不振，心气虚弱，气滞血瘀导致的胸痹心痛的人参总次苷提取物新药。为了方便患者服用研制成口服片剂和各种其它剂型。

从人参须中提取制备人参的有效部位-人参总次苷提取物，用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为9.0％，20-(R)-Rg3为9.0％，20-(S)-Rg2为2.1％，20-(R)-Rg2为2.1％，20-(S)-Rh1为1.8％，20-(R)-Rh1为1.8％。

药理学实验的具体结果如下：

1、人参总次苷提取物对犬对犬心肌缺血的影响

(1)、人参总次苷提取物对实验性犬急性心肌梗塞的作用实验采用结扎犬冠状动脉前降支(LAD)造成急性心肌梗塞模型。用心外膜电图(EECG)标测心肌缺血程度(∑-ST)和心肌缺血范围(N-ST)；以定量组织学法(N-BT染色法)测定心肌梗塞范围(MIS)；股静脉取血测心肌三酶：谷草转氨酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CPK)和乳酸脱氢酶(LDH)。实验结果表明，人参总次苷提取物具有显著改善犬急性心肌缺血的作用，明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度(∑-ST)；减小经N-BT染色所显示的梗塞区。阳性对照药地奥心血康、人参根皂苷和人参茎叶皂苷也显示相同的减小心肌梗塞面积的作用。

(2)、人参总次苷提取物对大鼠心肌缺血的作用采用垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血，观察药物对标准心电图II中ST段的变化和T波升高的影响。结果显示：与空白对照组比较，人参总次苷提取物100-200mg/kg可显著对抗ST的变化、T波的升高(P＜0.05或P＜0.01)，其效应与剂量相关，表明人参总次苷提取物可显著抑制垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血；在同等实验条件下，人参总皂苷100mg/kg只表现使T波抬高程度减轻，合心爽50mg/kg可显著性抑制ST波、T波的变化(P＜0.05或P＜0.01)。

(3)、人参总次苷提取物对冠脉结扎引起大鼠心肌缺血的影响对大鼠冠脉结扎模型，预先连续给药7d，施行冠脉结扎手术，在各观察时间点记录心电ECGII、心率、收缩压、舒张压等生理指标。结果显示，人参总次苷提取物100-200mg/kg均能非常显著抑制J点的变化(P＜0.01)，且有明显的量效关系，对缺血心脏心率和血压未见有显著性影响(P＞0.05)，表明能够显著性防治冠脉结扎引起的心肌缺血，其作用显著优于人参总皂苷(P＜0.01)。在同等实验条件下，合心爽50mg/kg也能够显著性防治冠脉结扎引起的心肌缺血作用，所选人参总皂苷100mg/kg剂量、地奥心血康100mg/kg剂量在本模型上作用不十分显著。

2、人参总次苷提取物对动物血流动力学及心肌耗氧量的影响

采用麻醉开胸犬观察给药后血流动力学各项指标及心肌耗氧量的变化。结果表明，结扎麻醉犬冠状动脉形成心肌缺血后，冠脉血流量有短时间代偿性增加，增加幅度10％左右。人参总次苷提取物药后可见明显增加冠脉流量，可明显增加心肌缺血时的冠脉血流量，促进侧支循环开放和建立，增加心肌的供氧。三个剂量组药后15~180min冠脉血流量均有明显升高，60min~120min增加冠脉血流量的作用最为显著，与药前及生理盐水组比较，均有明显差异(P＜0.01和P＜0.001)。阳性对照药合心爽药后有显著增加缺血心脏冠脉血流量的作用；地奥心血康对缺血心脏冠脉流量也有增加作用，增加幅度约为10％；人参根皂苷和人参茎叶皂苷也同时增加冠脉流量。人参总次苷可明显升高心肌缺血时血浆6-酮-前列腺素F_1a(6-Keto-PGF_1a)的水平和6-Keto-PGF_1a/TXB₂的比值。

3、人参总次苷提取物对犬心原性休克的影响

采用麻醉犬失血性休克模型，在给药后各时间点，观察动脉收缩压(SBP)舒张压(DBP)，左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室内压最大变化速率(±dP/dt_max)、心率等生理指标。选用参脉注射液作对照药，并与人参总皂苷比较。结果表明，人参总次苷提取物100-200mg/kg使失血性休克引起的动脉收缩压和舒张压下降显著升高(P＜0.05)、左心室收缩压和舒张压的显著升高(P＜0.05、P＜0.01)、±dP/dt_max均显著性升高(P＜0.05、P＜0.01)，对于左心室的作用较为明显，低剂量50mg/kg也表现出显著作用，并且明显优于人参总皂苷200mg/kg。表明人参总次苷有非常显著的抗心原性休克作用。对缺血所致麻醉犬休克模型，在剂量相同的情况下，人参总次苷提取物在给药后约20min开始发挥作用，而人参总皂苷在给药后约40min开始发挥作用，作用效果较弱；一般情况下，人参总次苷在20、30、40min时间点，与人参总皂苷相比，作用效果有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，其后时间点，作用效果无显著性差异，这也说明，人参总次苷在作用速度和作用效果优于人参总皂苷。

4、人参总次苷对BaCl₂引起大鼠心律失常的影响

采用大鼠舌下静脉注射BaCl₂引起心律失常。预先连续给药7d，施行造模，在各观察时间点记录心电ECGII、心率等生理指标，观察和计算室性早搏(VP)出现的时间、室性心动过速(VT)出现的时间及室颤(VF)发生率、心律失常持续时间。结果显示，人参总次苷200mg/kg能显著延缓VP、VT出现的时间(P＜0.05、P＜0.05)，显著缩短心律失常持续时间(P＜0.05)，100、50mg/kg可显著缩短律失常持续时间(P＜0.05、P＜0.05)；阳性对照药合心爽不仅显著延缓VP、VT出现时间(P＜0.01、P＜0.01)，缩短心律失常持续时间(P＜0.01)，还有效抑制了VF发生率(P＜0.05)；所选人参总皂苷100mg/kg剂量、地奥心血康100mg/kg剂量在本模型上作用不显著。

5、人参总次苷对体内血栓形成的影响

人参总次苷200mg/kg预先给药7d对试验大鼠颈动静脉旁路血栓的形成有抑制作用，可见阳性药和受试物各组血栓重量都低于对照组，阳性药地尔硫卓和对照组比较有显著差异(P＜0.05)，受试物高剂量照组比较有显著差异(P＜0.05)，随着药物剂量的增加，其血栓形成抑制率也增高.

6、人参总次苷提取物对血小板集聚的影响

人参总次苷提取物对ADP诱发的血小板聚集有抑制作用，尤其是人参总次皂苷高剂量组，对体外的血小板聚集有显著的抑制作用，抑制率甚至高于阿斯匹林阳性对照组。说明人参总次皂苷能兴奋血小板膜上的腺苷酸环化酶，并抑制磷酸二酯酶的活性，使血小板内的cAMP水平显著提高，从而能够很好的抑制血小板的聚集。

以人参总皂苷作对照比较，在人参总次苷的剂量与人参总皂苷的剂量相同或低于它的时候，人参总次苷对血小板聚集的抑制作用要明显强于人参总皂苷的作用效果，说明人参总次苷即使是在较小剂量的情况下，对血小板的聚集也有抑制作用。

7、人参总次苷提取物对离体心脏缺血再灌注的影响

以人参总次苷提取物500mg/kg、人参总皂苷1000mg/kg、合心爽100mg/kg以及地奥心血康500mg/k剂量给大鼠连续口服给药7d，采血分离血清，人参总次苷提取物血清稀释为一系列浓度组，对离体大鼠心脏进行灌流，结果显示：人参总次苷提取物高浓度组使复灌20min内心跳幅度增加、复灌20-30min内冠脉流量增加、使心肌MDA含量显著降低，表明人参总次苷在血清中的活性成分可以提高冠脉流量，在一定时间内提高心跳力量，并对缺血心肌有一定的保护能力。人参总皂苷、合心爽、地奥心血康高浓度时均有同样的作用。人参总次苷提取物500mg/kg血清与人参总皂苷1000mg/kg血清的作用间无显著差异。

8、一般药理研究

为考察人参总次苷对动物精神神经系统、机体平衡运动、与精神神经系统药物的协同作用以及对心血管系统、呼吸系统等的影响，开展了以下研究工作：

1、人参总次苷提取物对精神神经系统的作用：对小鼠一般行为活动的影响；对小鼠自主活动的影响；对小鼠机体平衡运动的影响。

2、人参总次苷提取物与精神神经系统药物的协同作用：与睡眠阈剂量戊巴比妥钠的协同作用观察；与睡眠阈下戊巴比妥钠的协同作用观察。

3、人参总次苷提取物对心血管系统的影响：对Beagle犬的血压、心律、心电(ECGII)各波的影响。

4、人参总次苷提取物对呼吸系统的影响：对Beagle犬的呼吸频率、深度等的影响。

实验结果表明：小鼠口服70、140、280mg/kg人参总次苷提取物时，对小鼠一般行为、自主活动、平衡运动未见有显著性影响，口服70、140、280mg/kg人参总次苷，未见与睡眠阈剂量(40mg/kg)和阈下戊巴比妥钠(30mg/kg)产生协同作用。给Beagle犬分别口服人参总次苷提取物50、100、200mg/kg对呼吸频率及深度、对动脉收缩压及舒张压、对心电和心率均无显著性影响。

因此可以判定，口服药效学剂量的人参总次苷对动物的呼吸系统、心血管系统和精神神经系统无明显影响，与戊巴比妥钠类药物无协同作用。

9、安全性评价研究

开展了小鼠急性毒性研究、SD大鼠重复给药13周恢复4周毒性试验、Beagle犬重复给药13周恢复4周毒性试验。

1、急性毒性试验结果

人参总次苷提取物小鼠灌胃给药最大给药量为8g/kg。

人参总次苷提取物给小鼠腹腔注射，经Bliss法计算LD₅₀及95％平均可信限范围为0.246±0.023mg/kg。

2、SD大鼠重复给药13周恢复4周毒性试验结果

将人参总次苷提取物分别以1500、750、250mg/kg给SD大鼠连续灌服13w，检测给药13w后以及停药4w后动物体重、食量等一般状况、血液生化、血象、心电、尿常规、各脏器组织病理等指标的变化，结果如下：

人参总次苷提取物对啮齿类大鼠长期连续多次给药，在相当于临床拟用量300倍时，可能会对雄性动物的体重增长有一定的抑制作用，可能会对免疫系统、雄性性器官以及血液RBC有一定的刺激作用，并使血液BUN显著升高、GLU显著性下降，对肾代谢功能产生一定的毒性反应，但未见明显损害性病理改变，没有产生脏器的器质性损害，停药后即可恢复，无蓄积作用。因此可认为，在相当于临床拟用量150倍以下给药，对啮齿类大鼠是安全剂量。

3、Beagle犬重复给药13周恢复4周毒性试验结果

将人参总次苷提取物分别以900、450、210mg/kg(以60kg人每日300mg计，分别相当于人临床拟用剂量的180、90、42倍)，给Beagle犬连续灌服13w，检测给药13w后以及停药4w后动物体重、食量等一般状况、血液生化、血象、心电、尿常规、各脏器组织病理等指标的变化，结果如下：

人参总次苷提取物对非啮齿类Beagle犬长期连续多次给药，在相当于临床拟用量180倍时，可能会对动物的体重增长有一定的促进作用，使血液WBC有一定的升高，从第6w开始，血清中BUN、ALP出现显著性的升高，至13w后，血清中Crea、BUN、ALT、ALP、T-P均出现显著性升高，并且肝、肾脏器系数有显著性升高，脾脏重有升高的趋势，胸腺重有下降的趋势，但组间均未见显著性的差异，病理学检查，有两例肝脏轻度水肿，其中一例可见胸腺萎缩，一例肾脏肾小管灶状钙化。试验结果表明，临床拟用量180倍时，对肝、肾、可能产生一定的毒性损害。停药4w后即可恢复，无蓄积毒性。

依据试验结果评价，人参总次苷在相当于临床拟用量90倍以下给药，对非啮齿类Beagle犬是安全剂量。

本发明的人参总次苷药物组合物，如人参总次苷口腔崩解片的服用方法：

口腔含服，一次1～2片。一日3次；

注意事项：

1.在医生指导下，按用法用量服用。

2.不宜与藜芦同服。

3.感冒发烧时不宜服用。

具体实施方式

[实施例1]

取人参须根段10kg，用70％乙醇回流提取3次，每次用5倍量的溶剂，每次3小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等体积的99％的冰醋酸，在97-99℃条件下水解5小时。水解液加等体积的水，通过D101型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用0.5％氢氧化钠洗脱，用水洗脱至中性用20％乙醇洗脱，最后用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.56kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为9.0％，20-(R)-Rg3为9.0％，20-(S)-Rg2为2.1％，20-(R)-Rg2为2.1％，20-(S)-Rh1为1.8％，20-(R)-Rh1为1.8％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为62％。

[实施例2]

取人参饮片10kg，用70％乙醇回流提取3次，每次用6倍量的溶剂，每次3小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等体积的0.1％的盐酸，在55-57℃条件下水解5小时。水解液加等体积的水，通过D2型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用1.5％氢氧化钠洗脱，用水洗脱至中性用25％乙醇洗脱，最后用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.35kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为8.8％，20-(R)-Rg3为8.8％，20-(S)-Rg2为2.2％，20-(R)-Rg2为2.2％，20-(S)-Rh1为1.8％，20-(R)-Rh1为1.8％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为58％。

[实施例3]

取三七饮片10kg，用70％乙醇回流提取3次，每次用5倍量的溶剂，每次3小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等体积的99％的冰醋酸，在97-99℃条件下水解5小时。水解液加等体积的水，通过DM2型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用3.5％氢氧化钠洗脱，用水洗脱至中性用20％乙醇洗脱，最后用75％乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.38kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为5.7％，20-(R)-Rg3为5.7％，20-(S)-Rg2为7.3％，20-(R)-Rg2为7.3％，20-(S)-Rh1为2.2％，20-(R)-Rh1为2.2％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为65％。

[实施例4]

取人参茎叶10kg，用70％乙醇回流提取3次，每次用5倍量的溶剂，每次3小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等体积的冰醋酸，在90-93℃条件下水解7小时。水解液加等体积的水，通过D101型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用1.2％碳酸钠洗脱，用水洗脱至中性用30％乙醇洗脱，最后用60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.25kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为9.5％，20-(R)-Rg3为9.5％，20-(S)-Rg2为1.7％，20-(R)-Rg2为1.7％，20-(S)-Rh1为1.5％，20-(R)-Rh1为1.5％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为54％。

[实施例5]

取西洋参饮片10kg，用50％乙醇回流提取3次，每次用7倍量的溶剂，每次2.5小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等体积的冰醋酸，在97-99℃条件下水解5小时。水解液加等体积的水，通过DS2型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用0.8％氢氧化钾洗脱，用水洗脱至中性用20％乙醇洗脱，最后用80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.35kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为11.0％，20-(R)-Rg3为11.0％，20-(S)-Rg2为0.9％，20-(R)-Rg2为0.9％，20-(S)-Rh1为1.2％，20-(R)-Rh1为1.2％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为57％。

[实施例6]

取三七茎叶10kg，用60％乙醇回流提取3次，每次用5倍量的溶剂，每次4小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等重量的0.5％的硫酸，在50-53℃条件下水解1小时。水解液加等体积的水，通过XAD-1型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用0.5％氢氧化钾洗脱，用水洗脱至中性用15％乙醇洗脱，最后用65％乙醇洗脱，收集65％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.45kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为13.5％，20-(R)-Rg3为13.5％，20-(S)-Rg2为0.5％，20-(R)-Rg2为0.5％，20-(S)-Rh1为0.8％，20-(R)-Rh1为0.8％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为63％。

[实施例7]

取西洋参茎叶10kg，用70％乙醇回流提取3次，每次用5倍量的溶剂，每次3小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等量的丙酸，在108-110℃条件下水解7小时。水解液加等体积的水，通过HP-30型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用5％碳酸钾洗脱，用水洗脱至中性用35％乙醇洗脱，最后用95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.23kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为10.5％，20-(R)-Rg3为10.5％，20-(S)-Rg2为1.1％，20-(R)-Rg2为1.1％，20-(S)-Rh1为1.0％，20-(R)-Rh1为1.0％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为52％。

[实施例8]

取生晒参饮片10kg，用70％乙醇回流提取3次，每次用5倍量的溶剂，每次3小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等量的丙酸，在97-99℃条件下水解9小时。水解液加等体积的水，通过XAD-5型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用0.1％氢氧化钠洗脱，用水洗脱至中性用35％乙醇洗脱，最后用50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.18kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为8.5％，20-(R)-Rg3为8.5％，20-(S)-Rg2为2.0％，20-(R)-Rg2为2.0％，20-(S)-Rh1为1.6％，20-(R)-Rh1为1.6％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为58％。

[实施例9]

取红参饮片10kg，用70％乙醇回流提取3次，每次用5倍量的溶剂，每次3小时。合并提取液，减压浓缩。浓缩液加等量的冰醋酸，在97-99℃条件下水解5小时。水解液加等体积的水，通过HP-10型大孔树脂柱。上样完全后用水洗脱至近无色，续用0.3％氢氧化钠洗脱，用水洗脱至中性用20％乙醇洗脱，最后用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩至流浸膏，在70℃真空干燥，得人参总次苷提取物0.25kg。用高压液相色谱法测定各有效成分的含量：20-(S)-Rg3为8.8％，20-(R)-Rg3为8.8％，20-(S)-Rg2为2.2％，20-(R)-Rg2为2.2％，20-(S)-Rh1为1.9％，20-(R)-Rh1为1.9％。以人参皂苷20-(R)-Rg3为对照品，测定人参皂苷总苷的含量为55％。

Claims

1.一种人参总次苷药物组合物，其特征在于所述的人参总次苷药物组合物包含以下组分：

①以人参原二醇为苷元的人参皂苷，包括人参皂苷Rg3，所述的人参皂苷Rg3是人参皂苷20-(S)-Rg3和/或人参皂苷20-(R)-Rg3；

②以人参原三醇为苷元的人参皂苷，包括人参皂苷Rg2和人参皂苷Rh1，其中人参皂苷Rg2是人参皂苷20-(S)-Rg2和/或人参皂苷20-(R)-Rg2，人参皂苷Rh1是人参皂苷Rh120-(S)-Rh1和/或人参皂苷20-(R)-Rh1；

按重量百分比计，以人参原二醇、人参原三醇为苷元的人参皂苷的和为50～65％；其中Rg3为10-30％，Rg2为1-16％，Rh1为1-5％；

所述的用于制备人参总次苷药物组合物的植物是人参属植物；

所述的人参总次苷药物组合物的提取制备方法包括水解步骤，所述的水解步骤用冰醋酸作为水解催化剂。

2.如权利要求1所述的人参总次苷药物组合物，其特征在于：

按重量百分比计：所述人参总次苷药物组合物中，Rg3为12-20％，Rg2为4-16％，Rh1为3-5％。

3.如权利要求1所述的人参总次苷药物组合物，其特征在于：

所述的用于提取人参总次苷药物组合物的植物为人参须。

4.如权利要求1所述的人参总次苷药物组合物，其特征在于：

所述的人参属植物是人参、西洋参、三七或竹节参。

5.如权利要求1～4之一所述的人参总次苷药物组合物，其特征在于：

所述的药物组合物包括治疗有效量的人参总次苷提取物、添加剂、赋形剂及医学上可接受的载体。

6.如权利要求1～5之一的人参总次苷药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

(2)水解液制备：用冰醋酸为催化剂水解上述的浓缩提取液；

(3)树脂吸附：水解液通过大孔树脂柱吸附；

(4)脱除杂质：通过了水解液的吸附柱再经过水洗脱、碱水洗脱、浓度在35％以下的乙醇洗脱除去杂质；

(5)洗脱、浓缩、干燥：脱除杂质后用浓度在35％以上的乙醇洗脱吸附柱，收集此次的乙醇洗脱液，浓缩成流浸膏，真空干燥，得人参总次苷药物组合物。

7.如权利要求6的人参总次苷药物组合物的制备方法，其特征在于：

所述的步骤(2)中的水解反应在80-100℃条件下进行，水解时间为3-8小时。

8.如权利要求6的人参总次苷药物组合物的制备方法，其特征在于：

所述的步骤(2)中的水解反应在99℃条件下进行，水解时间为5小时。

9.如权利要求6的人参总次苷药物组合物的制备方法，其特征在于：

所述的步骤(3)中的大孔树脂为苯乙烯类大孔树脂。

10.如权利要求6的人参总次苷药物组合物的制备方法，其特征在于：

所述的步骤(4)中的碱水选自下列物质：氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾所配成的水溶液，浓度为0.1％-5.0％；洗脱除去杂质用的乙醇浓度为15-25％；

所述的步骤(5)中，洗脱吸附柱的乙醇浓度为60-80％。

11.如权利要求1～5之一的人参总次苷药物组合物在制备下列药物中的应用：

在制备治疗心肌缺血的药物中的应用；

在制备治疗失血性休克的药物中的应用；

在制备治疗心力衰竭的药物中的应用。