CN101671384B - 人参皂苷Rh1的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种人参皂苷Rh1的制备方法。虽然已有应用酸水解法从人参皂苷制备总次苷及其制剂的方法，但酸水解后需经过较复杂的程序脱酸，而且尚无专门制备高纯度Rh1的报道。本发明提供了一种人参皂苷Rh1的制备方法。其特征在于将原人参三醇组人参皂苷，加入冰醋酸水解，以大孔吸附树脂柱层析脱酸，得到富集人参皂苷Rh1的次苷部位，用反相中压柱层析进行纯化，得纯度大于90％的人参皂苷Rh1。该方法采用大孔吸附树脂柱层析脱酸，保证总次苷的高转移率，水解条件温和，反应周期短，有效节约成本及能源，易于工业化生产，从而保证Rh1的高收率，并提高纯度。

Description

人参皂苷Rh1的制备方法
技术领域
本发明属于天然药物制备技术领域，具体涉及人参皂苷Rh1的制备方法。
背景技术
从天然产物中发现新药或生理活性先导化合物是当今药物研究与开发的重要方向。五加科人参属药用植物中存在的达玛烷型四环三萜类配糖体具有多方面的生理作用，一直是关注的热点之一。人参皂苷按其苷元的化学结构可分为原人参二醇型和原人参三醇型两类，二醇型以Rb1为代表，三醇型以Rg1为代表。人参皂苷Rh1属于原人参三醇型皂苷，具有启动和增强免疫应答，促进肝细胞增殖、促进DNA合成、杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤细胞增殖、诱导癌细胞分化，以及抗皮肤老化等生理作用，可用于调节机体免疫功能，治疗和预防肝炎、肝硬化、癌症等，是开发新药、功能保健食品、特殊用途化妆品等健康相关产品的原料。人参皂苷Rh1仅以十分微量天然存在于植物中，难以直接从植物原料中提取分离。人参皂苷Rh1与Rg1化学结构相似，Rg1的C-20位糖基降解即为Rh1。Rh1亦为Rg1在体内代谢的中间产物之一。显然，Rh1可通过Rg1的化学降解或生物转化获得。本发明运用此原理制备人参皂苷Rh1。
人参皂苷Rg1为三七和人参根中的主要皂苷成分之一，Rg1的C-20位糖基不稳定，在弱酸中易选择性降解得到次级皂苷。
Figure GSB00000634326800011
目前，已有应用该原理从人参或三七根的总皂苷制备总次苷及其制剂的报道。例如：申请号为200510083855.6的中国专利公开了一种人参总次苷药物组合物及其制备方法和应用。人参总次苷药物组合物的主要成分是20-(S)-Rg3，20-(R)-Rg3，20-(S)-Rg2，20-(R)-Rg2，20-(S)-Rh1和20-(R)-Rh1。人参总次苷药物组合物制备方法是人参属植物提取物在80-100℃条件下，酸水解3-8小时，浓缩所得的提取物，通过大孔吸附树脂柱层析分离纯化，经过水洗脱、碱水洗脱、浓度在35％以下的乙醇洗脱除去杂质。该申请不仅反应温度较高，除杂质过程中引入碱，增加了后续的处理程序，而且成本高，制备得到总次苷，没有进一步分离纯化人参皂苷Rh1。迄今，尚无有关制备高纯度人参皂苷Rh1的报道。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明旨在提供一种人参皂苷Rh1的制备方法，该方法设计科学合理，生产周期短，易于工业化生产，收率高，制得的人参皂苷Rh1纯度高。
为实现上述目的，本发明通过以下步骤进行：
A、酸水解：将纯度大于80％的三醇组人参皂苷，加7～9倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸浓度达15-25％，优选冰醋酸浓度达18-22％。将上述混合液置于水浴锅中，50-70℃加热水解5-7小时，优选58-65℃加热水解6小时。
B、脱酸：水解液冷却至室温，以大孔吸附树脂柱层析脱酸，用水洗脱，洗脱液流速为8-12ml/min，至流出液为中性。用浓度为85％以上的乙醇冲洗，至薄层色谱检测无紫色斑点。
C、富集：脱酸后的水解液，减压浓缩，干燥，用68～72％的甲醇溶解，优选70％的甲醇；以2倍量硅胶拌样，挥去甲醇，干法装柱，硅胶柱层析分离。以氯仿∶甲醇∶水＝8∶2∶0.2为流动相，展开，洗脱。薄层层析跟踪检测，富集人参皂苷Rh1部位。
D、纯化：上述富集得到的人参皂苷Rh1部位，以中压柱层析分离纯化，柱层析材料为反相键合硅胶，用浓度为50-65％的甲醇等度洗脱，优选55-60％的甲醇，薄层层析跟踪检测，合并人参皂苷Rh1部位，减压浓缩，干燥，用高效液相色谱法检测人参皂苷Rh1的纯度，大于90％。
有益效果
上述制备人参皂苷Rh1的方法具有以下有益效果：
采用本工艺制备人参皂苷Rh1，水解温度较低，水解条件温和，反应周期短，所用试剂单一，用量少，水解副产物相对较少，简化后续分离程序，有效节约成本及能源，易于工业化生产，保证人参皂苷Rh1的收率，并提高纯度。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明：
实施例1
A、酸水解：将纯度大于80％的三醇组人参皂苷，加8倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸浓度达15％，将上述混合液置于水浴锅中，50℃水解7小时。
B、脱酸：水解液冷却至室温，以DM130大孔吸附树脂柱层析脱酸。用水洗脱，流速8ml/min，至流出液为中性，用浓度为85％的乙醇洗脱，至薄层色谱检测无紫色斑点。
C、富集：脱酸后的水解液浓缩，干燥，用68％的甲醇溶解，加入2倍量的硅胶拌样，挥去甲醇，干法装柱，硅胶柱层析分离，以氯仿∶甲醇∶水＝8∶2∶0.2为流动相，展开，洗脱。薄层层析跟踪检测，富集人参皂苷Rh1部位。
D、纯化：上述富集得到的人参皂苷Rh1用中压柱层析进行分离纯化，层析材料为反相键合硅胶，用浓度为50％的甲醇等度洗脱，薄层层析跟踪检测，合并人参皂苷Rh1部位，减压浓缩，干燥，用高效液相色谱法检测人参皂苷Rh1的纯度，大于90％。
实施例2
A、酸水解：将纯度大于80％的三醇组人参皂苷，加7倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸浓度达25％，将上述混合液置于水浴锅中，70℃水解5小时。
B、脱酸：水解液冷却至室温，以D101大孔吸附树脂柱层析脱酸，水洗脱，流速10ml/min，至流出液为中性，用浓度为88％的乙醇洗脱，至薄层色谱检测无紫色斑点。
C、富集：脱酸后的水解液浓缩，干燥，用70％的甲醇溶解，加入2倍量的硅胶拌样，挥去甲醇，干法装柱，硅胶柱层析分离，以氯仿∶甲醇∶水＝8∶2∶0.2为流动相，展开，洗脱，T薄层层析跟踪检测，富集人参皂苷Rh1部位。
D、纯化：上述富集得到的人参皂苷Rh1用中压柱层析进行分离纯化，层析材料为反相键合硅胶，用浓度为55％的甲醇等度洗脱，薄层层析跟踪检测，合并人参皂苷Rh1部位，减压浓缩，干燥，用高效液相色谱法检测人参皂苷Rh1的纯度，大于90％。
实施例3
A、酸水解：将纯度大于80％的三醇组人参皂苷，加9倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸浓度达18％，将上述混合液置于水浴锅中，58℃水解6小时。
B、脱酸：水解液冷却至室温，以DM130大孔树脂柱层析脱酸，用水洗脱，流速11ml/min，至流出液为中性，用浓度为90％的乙醇冲洗，至薄层色谱检测无紫色斑点。
C、富集：脱酸后的水解液浓缩，干燥，用71％的甲醇溶解，加入2倍量的硅胶拌样，挥去甲醇，干法装柱，硅胶柱层析分离，以氯仿∶甲醇∶水＝8∶2∶0.2为流动相，展开，洗脱，薄层层析跟踪检测，富集人参皂苷Rh1部位。
D、纯化：上述富集得到的人参皂苷Rh1用中压柱层析纯化，层析材料为反相键合硅胶，用浓度为60％的甲醇等度洗脱；薄层层析跟踪检测，合并人参皂苷Rh1部位，减压浓缩，干燥，用高效液相色谱法检测人参皂苷Rh1的纯度，大于90％。
实施例4
A、酸水解：将纯度大于80％的三醇组人参皂苷，加8倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸浓度达22％，将上述混合液置于水浴锅中，65℃水解6小时。
B、脱酸：水解液取出后冷却至室温，以D101大孔吸附树脂柱层析脱酸，用水洗脱，流速12ml/min，至流出液为中性，用浓度为90％的乙醇洗脱，至薄层色谱检测无紫色斑点。
C、富集：脱酸后的水解液浓缩，干燥，用72％的甲醇溶解，加入2倍量的硅胶拌样，挥去甲醇，干法装柱，硅胶柱层析分离，以氯仿∶甲醇∶水＝8∶2∶0.2为流动相，展开，洗脱，薄层层析跟踪检测，富集人参皂苷Rh1部位。
D、纯化：上述富集得到的人参皂苷Rh1用中压柱层析进行纯化，层析材料为反相键合硅胶，用浓度为65％的甲醇等度洗脱；薄层层析跟踪检测，合并人参皂苷Rh1部位，减压浓缩，干燥，用高效液相色谱法检测人参皂苷Rh1的纯度，大于90％。

Claims (2)

1.一种人参皂苷Rh1的制备方法，其特征在于，具体通过以下生产步骤实现：
A、酸水解：将纯度大于80％的三醇组人参皂苷，加7～9倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸浓度达15-25％，将上述混合液置于水浴锅中，50～70℃水解5-7小时；
B、脱酸：水解液冷却至室温，以大孔吸附树脂柱层析脱酸，用水洗脱，流速8-12ml/min，至流出液为中性，用浓度为85％以上的乙醇洗脱，至薄层色谱检测无紫色斑点；
C、富集：脱酸后的水解液浓缩，干燥，用68～72％的甲醇溶解，加入2倍量的硅胶拌样，挥去甲醇，干法装柱，硅胶柱层析，以氯仿∶甲醇∶水＝8∶2∶0.2为流动相，展开，洗脱，薄层层析跟踪检测，富集人参皂苷Rh1部位；
D、纯化：上述富集得到的人参皂苷Rh1用中压柱层析进行纯化，层析材料为反相键合硅胶，用浓度为50-65％的甲醇等度洗脱，薄层层析跟踪检测，合并人参皂苷Rh1部位，减压浓缩，干燥，用高效液相色谱法检测人参皂苷Rh1的纯度，大于90％。
2.根据权利要求1所述的人参皂苷Rh1的制备方法，其特征在于，步骤A中优选加8倍量的水溶解，加入冰醋酸，使冰醋酸浓度达18-22％，将上述混合液置于水浴锅中，58-65℃加热水解6小时；步骤C中优选用70％的甲醇溶解；步骤D中优选55-60％的甲醇。
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