CH645111A5

CH645111A5 - Carbapenem-verbindungen und verfahren zu deren herstellung.

Info

Publication number: CH645111A5
Application number: CH153581A
Authority: CH
Inventors: Mitsuko Asai; Susumu Shinagawa; Akira Imada
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1980-03-10
Filing date: 1981-03-06
Publication date: 1984-09-14
Also published as: CA1163270A; GB2071099B; GB2071099A; US4409147A; FR2477546B1; FR2477546A1; DE3108666A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neuartige Carbapenem-Verbindungen der Formel (I)

CH

3 H H

CH3-C

R-0 0

s-c-c'"

(I)

» COOH

sNHCOCH3

in der R für -SO3H oder Wasserstoff steht, oder deren physiologisch unbedenkliche Salze, die als antimikrobielle Wirkstoffe wertvoll sind.

Die betreffenden Verbindungen der Formel (I) oder deren physiologisch unbedenkliche Salze (im folgenden gelegentlich kurz als «Verbindung (I)» bezeichnet) können dadurch hergestellt werden, dass Verbindungen der Formel

(II)

ch3— c

R-0

,H

~~C=C

NNHCOCH

COOH

(II)

In Formel (II) wurde diejenige Verbindung, in der R für -SO3H steht, als Antiobiotikum C-19393Sî und diejenige Verbindung, in der R für Wasserstoff steht, als Antibiotikum C-19393H2 gekennzeichnet.

5 Als Beispiele für die vorerwähnte Reduktionsreaktion seien katalytische Reduktionen genannt. Für solche katalyti-schen Reduktionen können die konventionellen Verfahren angewandt werden, und als Beispiel für Katalysatoren seien erwähnt: Platin-Katalysatoren wie z.B. Platindraht, Platin-1« schwamm, Platinkohle, Platinoxid und kolloidales Platin; Palladium-Katalysatoren wie z.B. Palladium-Schwamm, Paladiumkohle, Palladiumoxid, Palladium-Bariumsulfat, Palladium-Bariumcarbonat, Palladium-Kohle, Palladium-Silicagel und kolloidales Palladium, sowie Nickel-Katalysa-15 toren wie z.B. reduziertes Nickel, Nickeloxid, Raney-Nickel und Urushibara-Nickel. Beispiele für verwendbare Lösungsmittel erstrecken sich auf Lösungsmittel mit hinreichender Lösefähigkeit für die Ausgangs-Verbindung (II), wie etwa Wasser und Gemische aus Waser und einem polaren organi-20 sehen Lösungsmittel, z.B. Dioxan, Tetrahydrofuran, Dime-thylformamid, Methanol, Ethanol, Propanol etc. Vorzugsweise wird die Reaktion unter 1 bis 2 bar Wasserstoff-Druck bei 0 bis 50°C durchgeführt. Nach Beendigung der Reaktion kann die Verbindung (I) gemäss der vorliegenden Erfindung 2s von unumgesetztem Ausgangsmaterial oder Reaktionsnebenprodukten leicht abgetrennt werden; dazu wird zunächst durch ein geeignetes Verfahren, z.B. durch Filtration, die Reaktionsmischung vom Katalysator befreit und anschliessend durch Säulenchromatographie getrennt. Dies geschieht 30 durch Adsorption an einem Polystyrol-Harz wie z.B. Amber-lite XAD-II Harz (Röhm & Haas Co., U.S.A.) als Adsorptionsmittel und Elution mit Wasser oder wässrigem Alkohol als Elutionsmittel. Die Identifizierung der einzelnen, von dem XAD-II Harz eluierten Fraktionen erfolgt, dargestellt 35 an einem typischen Ausführungsbeispiel, in der Weise, das eine Probe der zu untersuchenden Fraktion in ein HPLC-System (system of high performance liquid chromatography) injiziert wird, worin Mikrobondapalc Cis und ein 254 nm UV-Detektor verwendet werden (Waters Associates Inc., 40 U.S.A.).

Als Salze der Verbindung (I) und (II) kommen beispielsweise diejenigen mit Alkalimetallen wie Natrium, Kalium und Lithium, diejenigen mit Erdalkalimetallen wie Magnesium, Calcium und Barium sowie diejenigen mit organischen 45 Aminen wie Trimethylamin, Triethylamin und Pyridin in Betracht.

Die Ausgangs-Verbindung (II) gemäss der vorliegenden Erfindung wird beispielsweise hergestellt durch Kultivieren des bekannten Streptomyces sp.-Stammes C-19393 so (FERM-P No. 4774, IFO 13886, ATCC 31486) in einem Medium mit solchen Nährstoffen, die die Mikroorganismen verwerten können, und wird als Antibiotikum C-19393S2 bzw. C-19393H2 bezeichnet [Deutsche Offenlegungsschrift Nr. 30 03 624].

55 Das antimikrobielle Spektrum derjenigen Verbindung der Formel (I), in der R für -SO3H steht und wie sie gemäss Beispiel 1 erhalten wurde, ist in Tabelle 1 angegeben.

Das antimikrobielle Spektrum derjenigen Verbindung der Formel (I), in der R für Wasserstoff steht und wie sie gemäss so Beispiel 2 erhalten wurde, ist in Tabelle 2 angegeben.

Tabelle 1

Test-Organismus in der R die gleiche Bedeutung wie oben definiert hat, oder deren Salze (im folgenden gelegentlich kurz als «Verbindung (II)» bezeichnet) einer Reduktionsreaktion unterworfen werden.

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Minimale Hemm-Konzen-tration (jig/ml)

Escherichia coli NIHJ Salmonella typhimurium IFO 12529

6,25 6,25

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Tabelle 1 (Fortsetzung)

Test-Organismus

Minimale

Hemm-Kon/en-

tration (jig ml)

Klebsiella pneumoniae IFO 3318

6,25

Proteus vulgaris IFO 3988

25

Proteus mirabilis ATCC 21100

25

Serratia marcescens IFO 12648

12,5

Alcaligenes faecalis IFO 13111

>25

Pseudomonas aeruginosa IFO 3080

>25

Comamonas terrigena IFO 13299

6,25

Staphylococcus aureus 209P

12,5

Sarcina lutea IFO 3232

3,13

Bacillus subtilis PCI 219

6,25

Bacillus cereus FDA 5

>25

Anm.) Medium: Bouillon-Agar

Tabelle 2

Test-Organismus

Minimale

Hemm-Konzen-

tration (ng/ml)

Escherichia coli NIHJ

0,31

Salmonella typhimurium IFO 12529

0,31

Klebsiella pneumoniae IFO 3318

0,31

Proteus vulgaris IFO 3988

>10

Proteus mirabilis ATCC 21100

2,5

Serratia marcescens IFO 12648

1,25

Alcaligenes faecalis IFO 13111

10

Pseudomonas aerugionosa IFO 3080

> 10

Comamonas terrigena IFO 13299

0,31

Staphylococcus aureus 209P

2,5

Sarcina lutea IFO 3232

0,62

Bacillus subtilis PCI 219

0,31

Bacillus cereus FDA 5

>10

Anm.) Medium : Bouillon-Agar.

Die gemäss der vorliegenden Erfindung erhaltenen Verbindungen (I) zeigen, wie das vorstehende antimikrobielle Spektrum erkennen lässt, antimikrobielle Aktivität gegen gram-positive und gram-negative Bakterien. Aus diesem Grunde können die Verbindungen (I) zur Behandlung bakterieller Infektionen in Säugern (z.B. Maus, Ratte, Hund, Mensch) und anderen Haustieren (z.B. Hühnern, Enten etc.) eingesetzt werden.

Zur Anwendung einer Verbindung (I) als Mittel zur Behandlung von beispielsweise E.coli-Infektionen wird die Verbindung (I) in physiologischer Kochsalz-Lösung aufgelöst; dadurch erhält man eine injizierbare Lösung, die parenteral, z.B. subkutan oder intramuskulär, in einer Tagesdosis von 0,1 bis 200 mg/kg, vorzugsweise von 1 bis 50 mg/kg, verabreicht werden kann. Die Vebindung (I) kann auch oral verabreicht werden und wird zu diesem Zweck mit Lactose gemischt in Kapseln gefüllt; die Zubereitung in Kapselform kann in einer Tagesdosis von 1 mg/kg bis 500 mg/kg, vorzugsweise von 5 mg/kg bis 200 mg/kg, verabreicht werden.

Weiterhin können die gemäss der vorliegenden Erfindung erhaltenen Verbindungen (I) als Desinfektionsmittel benutzt werden. Eine flüssige Zubereitung kann beispielsweise durch Auflösen einer Verbindung (I) in destilliertem Wasser zu einer Konzentration von 0,01 bis 1,0 Gewichts-/Volumen-prozent (w/v-% [diese Bezeichnung wird im folgenden weiter verwendet]) hergestellt werden. Dies flüssige Präparat oder eine Salbe, die 0,5 bis 50 mg, vorzugsweise 2 bis 20 mg, einer Verbindung (I) pro 1 g Vaseline oder Lanolin als Grundstoff enthält, kann als Bakterizid oder Desinfektionsmittel für Hände, Beine und andere Extremitäten sowie Augen, Ohren etc. der vorerwähnten Warmblüter angewandt werden.

Die Verbindungen (I) entfalten eine beta-Lactamase-hem-mende Wirkung. Aus diesem Grunde erhöhen sie die Empfindlichkeit von Penicillin- oder Cephalosporin-resistenten Bakterien, deren Resistenz auf ihrer Fähigkeit zur Produktion von beta-Lactamase beruht, gegenüber Ampicillin oder Cefotiam in ausgeprägter Weise. Dementsprechend können die Verbindungen (I) zur Behandlung von Infektionen in Säugern (z.B. Maus, Ratte, Hund, Mensch) und Vogelarten (z.B. Haushuhn, Ente), insbesondere von solchen Infektionen, die durch gegenüber Antibiotika mit beta-Lactam-Struktur reistente Bakterien hervorgerufen werden, in Kombination mit Penicillin- oder Cephalosporin-Antibiotika eingesetzt werden.

Wenn eine Verbindung (I) in Kombination mit anderen Mitteln vom beta-Lactam-Typ zur Behandlung von Infektionen durch beispielsweise gegen beta-Lactam-Antibiotika resistentes E.coli angewandt wird, werden gleiche Mengen der Verbindung (I) und Ampicillin in physiologischer Kochsalzlösung aufgelöst; dadurch erhält man eine injizierbare Lösung, die parenteral, z.B. subkutan oder intramuskulär, in einer Tagesdosis von 0,1 bis 20 mg/kg, vorzugsweise 0,5 bis 5 mg/kg, verabreicht werden kann. Die Verbindung (I) kann auch oral in einer Tagesdosis von 1 bis 200 mg/kg, vorzugsweise 5 bis 100 mg/kg, in Kapseln verabreicht werden, von denen jede die Verbindung (I) und Cephalexin in gleichen Anteilen enthält.

Wenn eine Verbindung (I) als Desinfektionsmittel benutzt wird, kann dies in Form einer wässrigen Lösung, die die Verbindung (I) in einer Konzentration von 01, bis 10 w/v-% und Benzylpenicillin in einer Konzentration von 0,1 bis 1,0 w/v-% enthält, geschehen. Dies flüssige Präparat oder eine Salbe, die 5 bis 20 mg der Verbindung (I) und 5 bis 20 mg Benzylpenicillin pro 1 g Vaseline oder Lanolin als Grundstoff enthält, kann als Bakterizid oder Desinfektionsmittel für Hände, Beine oder andere Extremitäten sowie Augen, Ohren etc. der vorerwähnten Tiere angewandt werden.

Es wird erwartet, dass die Verbindungen (I) als Zwischenprodukt für Synthesen neuartiger Typen von Arzneimitteln sehr wertvoll sein werden. Die Verbindungen gemäss der vorliegenden Erfindung sind in wässriger Lösung im neutralen pH-Bereich stabil.

Die Erfindung wird durch die folgenden Bezugsbeispiele und Beispiele, die gewisse bevorzugte Ausführungsformen beschreiben, weiter erläutert. Die Angabe «%» in den Bezugsbeispielen bezeichnet Gewichts-/Volumenprozent (weight/ volume-%), falls nicht anders angegeben.

Bezugsbeispiel 1

Eine Kultur von Streptomyces sp. Stamm C-19393 (IFO 13886, ATCC 31486) wurde zur Gewinnung von Sporen in 200 ml eines Mediums aus 2% Hafermehl, 2% Tomatenpaste, 0,2% Bovril (Hergestellt von Bovril, England) und 2% Agar (pH 7,0) in einem 1-1-Erlenmeyerkolben angesetzt. Die erhaltenen Sporen wurden dann in sterilem Wasser zu einer Konzentration von 1,2 • 108 lebende Zellen/ml suspendiert. Die Sporensuspension wurde mit sterilem Wasser auf das lOfache des ursprünglichen Volumens verdünnt, und 1 ml der verdünnten Suspension wurde dazu benutzt, 40 ml eines Impfmediums in einem 200-ml-Erlenmeyerkolben zu inokulieren. Das inokulierte Impfmedium wurde dann 2 Tage in einem rotierenden Schüttler bei 28°C kultiviert. Die erhaltene Kultur wurde zur Impfung von 500 ml eines Impfkulturmediums in einem 2-1-Sakaguchi-SchüttelkoIben benutzt und s

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das inokulierte Impfmedium 2 Tage auf einem Reziprokschüttler bei 28°C kultiviert. Die so erhaltene Impfkultur wurde in einen 50-1-Fermentationstank aus nichtrostendem Stahl überführt, der 15 ml Actocol (Takeda Chemical Industries, Ltd., Japan) in 301 eines Impfmediums enthielt, und unter Rühren mit 280 Upm (4,67 Hz) und Belüftung mit 301/ Minute 3 Tage bei 28°C kultiviert. Die Kulturbrühe wurde in einen 2-m3-Fermentationstank überführt, der 1,2 m3 eines Hauptkulturmediums enthielt, und unter Rühren mit 180 Upm (3,0 Hz) und Belüftung mit 8401/Minute 5 Tage bei 30°C kultiviert. Das bei vorstehend beschriebenen Verfahren verwendete Impfmedium, das vor der Sterilisation auf pH 7,0 eingestellt worden war, enthielt pro 11 Medium 20 g Glucose, 30 g lösliche Stärke, 10 g rohes Sojabohnenmehl, 10 g Maisquellwasser, 5 g Polypepton (Daigo Nutritive Chemicals, Ltd., Japan), 3 g Natriumchlorid und 5 g gefälltes Calciumcarbonat. Das bei vorstehend beschriebenem Verfahren verwendete Hauptmedium, das vor der Sterilisation auf pH 7,0 eingestellt worden war, enthielt pro 11 Medium 30 g Glucose, 30 g lösliche Stärke, 15 g entfettetes Sojabohnenmehl, 15 g Baumwollsamenmehl, 0,25 g Kaliumdihydrogen-phosphat, 0,6 g Dikaliummonohydrogenphosphat, 0,002 g Cobaltchlorid und 0,5 g Actocol. Alle benutzten Medien wie vorerwähnt wurden 20 Minuten bei 120°C dampfsterilisiert.

Die auf diese Weise erhaltene Fermentationsbrühe lieferte nach Filtration mit Hyflo-Supercel (Johnes Man ville Co., USA) 12301 Filtrat, das anschliessend auf pH 6,3 eingestellt und durch eine mit 1001 Aktivkohle beschickte Kolonne geschickt wurde. Von der Kolonne wurden dann C-19393S2 mit 3001 Wasser und C-19393H2 mit 70017% wässrigem Isobutanol eluiert.

Das C-19393S2 enthaltende Eluat wurde durch eine Kolonne mit Dowex 1 x2 (Dow and Chemical Co., USA, Cl-Form, 21) beschickte Kolonne geschickt, und die Kolonne wurde mit 61 Wasser gewaschen und mit 321 einer 5%ig wässrigen Natriumchloridlösung eluiert. Das Eluat wurde auf pH 5 eingestellt und durch eine mit 41 Aktivkohle gefüllte Kolonne geschickt. Nach Waschen mit 121 Wasser wurde das gewünschte Antibiotikum mit 718%ig wässrigem Isobutanol und 121 eines Gemischs aus Isobutanol + N/20 wässrigem Ammoniak (8:92) eluiert und das Eluat unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 150 ml eingeengt. Zu dem Konzentrat wurden 1350 ml Methanol gefügt und der dabei entstandene Niederschlag durch Filtration entfernt. Das Filtrat wurde auf ein Volumen von 200 ml eingeengt und dann durch eine mit 300 ml DEAE-Sephadex A-25 (Pharmacia Co., Schweden, Cl~-Form) angefüllte Kolonne geschickt. Die Kolonne wurde nacheinander mit je 900 ml 0,1 M und 0,2 M wässriger Kochsalzlösung gewaschen, und danach wurde das gewünschte Antibiotikum mit 1500 ml 0,4 M wässriger Natriumchloridlösung eluiert. Das Eluat wurde auf pH 5 eingestellt und durch eine mit 500 ml Aktivkohle gefüllte Kolonne geschickt. Nach Waschen mit 1,51 Wasser wurde die Kolonne mit 2,51 eines Gemischs aus Isobutanol + N/20 wässrigem Ammoniak (8:92) eluiert; das Eluat wurde zur Trockne eingeengt, und nach Zusatz von Aceton zum Rückstand wurden 2,4 g eines blassgelben Pulvers erhalten. Das Pulver wurde in einer kleinen Menge Wasser gelöst und die Lösung durch eine Säule mit 1,21 Amberlite XAD-II (Korngrösse 0,075 bis 0,15 mm [100 bis 200 mesh]) geschickt. Anschliessend wurde mit Wasser fraktioniert eluiert. Die antibiotisch aktiven Fraktionen wurden vereinigt und konzentriert und das Konzentrat durch eine mit 200 ml QAE-Sephadex A-25 (Pharmacia Co., Schweden, Cl-Form) befüllte Kolonne geschickt. Nach Waschen mit 600 ml 0,1 M wässrigem Natriumchlorid wurde die Kolonne mit 1,210,2 M wässrigem Natriumchlorid eluiert. Das Eluat wurde auf pH 5 eingestellt und durch eine Säule mit 600 ml

Aktivkohle geschickt. Nach Waschen mit 1,81 Wasser wurde die Säule mit 31 eines Gemischs aus Isobutanol + N/20 wässrigem Ammoniak (8:92) eluiert; das Eluat wurde zur Trockne eingeengt, und nach Zusatz von Aceton zum Rückstand wurden 1,07 g eines pulverartigen Produkts erhalten. 620 mg dieses Pulvers wurden in einer kleinen Menge Wasser gelöst und die Lösung durch eine Kolonne mit 360 ml Amberlite XAD-II (Korngrösse 0,075 bis 0,15 mm [100 bis 200 mesh]) geschickt. Die Kolonne wurde dann mit Wasser eluiert und fraktioniert, und jede Fraktion mit antibiotischer Aktivität wurde einer LC-Analyse (analysis by liquid chromatography) wie weiter oben beschrieben unterworfen. Die Fraktionen, die nur einen einzigen Peak zeigten, wurden vereinigt und zur Trockne eingeengt; nach Zusatz von Aceton zum Konzentrat wurden 136mg Dinatriumsalz des Antibiotikums C-19393S2 als weisses pulverartiges Produkt erhalten.

Die spezifische Drehung des Produktes betrug [a]o -152 ±15° (C = 0,5; Wasser).

Bezugsbeispiel 2

Das in Bezugsbeispiel 1 erhaltene Eluat von C-19393H2 wurde durch eine Säule mit Dowex 1 x2 (Cl"-Form, 121) geschickt. Die Säule wurde mit 61 Wasser gewaschen und mit 1801 einer 5% wässrigen Natriumchloridlösung eluiert. Das Eluat wurde durch eine Kolonne mit 251 Aktivkohle geschickt. Nach Waschen mit 751 Wasser wurde das gewünschte Antibiotikum mit 1751 eines Gemischs aus Isobutanol + Wasser (7:93) eluiert und das Eluat unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 2 bis 31 eingeengt. Das Konzentrat wurde mit 151 Methanol versetzt und der dabei gebildete Niederschlag durch Filtration entfernt. Das Filtrat wurde auf ein Volumen von 21 eingeengt und durch eine Säule geschickt, die mit 51 eines hochporösen Harzes, Diaion High Porous Type Resin HP-20 (Mitsubishi Chemical Industries, Japan), im folgenden als «Diaion HP-20» bezeichnet, der Korngrösse 0,30 mm (50 mesh) gefüllt war. Die Säule wurde dann mit 51 Wasser und anschliessend mit 101 eines Gemischsaus Methanol + Wasser (1 ;9) eluiert undfraktio-niert. Die aktiven Fraktionen wurden vereinigt und eingeengt und das Konzentrat durch eine Säule mit 31 DEAE-Sephadex A-25 (Ck-Form) geschickt. Die Säule wurde mit 91 einer 0,02 M wässrigen Natriumchloridlösung gewaschen und das gewünschte Antibiotikum mit 121 einer 0,05 M wässrigen Natriumchloridlösung eluiert und fraktioniert. Die aktiven Fraktionen wurden durch eine Säule mit 21 Diaion HP-20 (Korngrösse 0,30 mm [50 mesh]) geschickt, die mit 41 wässrigem Natriumchlorid behandelt worden war; nach Waschen mit 1015% wässriger Natriumchloridlösung wurde das aktive Prinzip eluiert und fraktioniert mit je 101 zweier Gemische aus Methanol + 5% wässriger Natriumchloridlösung, zunächst im Mischungsverhälts 5:95, sodann im Mischungsverhältnis 1:9. Die aktiven Fraktionen wurden durch eine Säule mit 500 ml Aktivkohle geschickt und nach Waschen mit 1,51 Wasser mit 2,517% wässrigem Isobutanol eluiert. Das Eluat wurde eingeengt und das Konzentrat durch eine mit 11 Diaion HP-20 (Korngrösse 0,15 bis 0,30 mm [50 bis 100 mesh]) gefüllte Kolonne geschickt und mit Wasser eluiert und fraktioniert. Die Fraktionen mit antibiotischer Aktivität wurden vereinigt und eingeengt und das Konzentrat über eine Säule mit 200 ml QAE-Sephadex A-25 (Cl-Form) geschickt, die vorher mit 400 ml einer 0,02 M wässrigen Lösung von Natriumchlorid behandelt worden war. Die Säule wurde nacheinander mit jeweils 110,02 M, 0,03 M und 0,04 M wässriger Natriumchloridlösungen eluiert. Die aktiven Fraktionen wurden über eine Säule mit 200 ml Aktivkohle geschickt und nach Waschen mit 0,61 Wasser eluiert mit 117% wässrigem Isobutanol. Das Eluat wurde eingeengt und mit Propanol versetzt, so dass eine 90% wässrige Pro-

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panol-Lösung vorlag. Diese wurde über eine Avicel-Säule chromatographiert, die mit 90% wässrigem Propanol vorbehandelt worden war. Die Säule wurde mit 90% wässrigem Propanol eluiert. Die aktiven Fraktionen wurden konzentriert und das Konzentrat der Säulenchromatographie über 350 ml Amberlite XAD-II (Korngrösse 0,075 bis 0,15 mm [100 bis 200 mesh]) unterworfen. Die Säule wurde mit Wasser eluiert. Die aktiven Fraktionen wurden konzentriert und das Konzentrat einer präparativen HPLC (high performance liquid chromatography) unter Verwendung von RP-18 (E. Merck & Co., BR Deutschland) als Träger unterworfen. Eluiert wurde mit einer 10%igen Lösung von Methanol in 0,02 M Phosphatpuffer (pH 6,3). Die aktiven Fraktionen wurden über eine Kolonne mit 40 ml Diaion HP-20 (Korngrösse 0,075 bis 0,15 mm [100 bis 200 mesh]) geschickt und mit Wasser fraktioniert eluiert. Jede Fraktion mit nachgewiesener antibiotischer Aktivität wurde der LC-Analyse wie oben beschrieben unterzogen. Die Fraktionen, die nur einen einzigen Peak zeigten, wurden vereinigt und gefriergetrocknet. Danach wurden 12 mg des Natriumsalzes von C-19393 Hz als weisses pulverartiges Produkt erhalten. Die spezifische Drehung des Produkts betrug [a]f,6 -134° (C = 0,156; Wasser).

Beispiel 1

Das rohe Pulver des Antibiotikums C-19393S2-dinatrium-salz (Reinheit 30%; 60 mg) wurde in 10% wässrigem Methanol (20 ml) gelöst und diese Lösung hinzugefügt zu einer Mischung aus 10% wässrigem Methanol (10 ml) und 10% Palladium-Kohle (20 mg), in die vorher 30 Minuten lang Wasserstoff eingeleitet worden war. In das erhaltene Gemisch wurde dann 3 Stunden lang bei Raumtemperatur Wasserstoff unter einem Druck von 1 bar zur Durchführung der Reduktion eingeleitet. Der Katalysator wurde dann abfiltriert und das Filtrat unter Vakuum auf ein Volumen von 2 ml eingeengt. Die konzentrierte Lösung wurde durch eine Säule (50 ml) mit Amberlite XAD-II (Korngrösse 0,075 bis 0,15 mm [ 100 bis 200 mesh]) geschickt. Die gesuchte Verbindung wurde am Adsorbens adsorbiert und dann mit Wasser eluiert. Die Fraktionen von 45 ml bis 150 ml, die die gesuchte Verbindung enthielten, wurden gefriergetrocknet. Dabei wurden 7,3 mg [5R,6R]-3-[(E)-2-Acetamidoethenylthio]-6-[l-(hydroxysulfonyloxy)-l -methylethyl]-7-oxo-l -azabi-cyclo[3,2,0]-hepta-2-en-2-carbonsäuredinatriumsalz als Pulver erhalten.

UV: A,max(H20) 228 und 309 nm;

IR: vmax(KBr) 1760,1620,1240,1050 cm-'; Dünnschichtchromatographie [Cellulose f (Tokyo Kasei Co., Ltd.)]: Rf = 0,65 (Lösungsmittelsystem: Propanol :

Wasser = 4:1);

HPLC (Waters Associates Inc.): Rt = 4,4 min [Microbon-dapak Cis/14% Methanol-0,02 M Phosphatpuffer (pH 6,3), 2 ml/min/cm (13,8 bar)], wobei der Rt-Wert der Startverbin-5 dung unter den gleichen Bedingungen 2,2 min betrug; NMR; 8(100 MHz, D2O, TMS): 1,63 (3H,S,Cs-CH3) 1,70 (3H,S,Cs-CH3), 2,10 (3H,S,COCH3), 3,05(1 H,dd,J= 10,19,C-4-H), 3,82 (1 H,dd; 10,5; 19,Gi-H), 3,88 (1H, d,J=6,C6-H), 4,20 (lH,m,Cs-H), 6,10 (lH,d,J=14,S-CH=), 7,20 10 (lH,d,N-CH=).

Beispiel 2

Das rohe Pulver des Antibiotikums C-19393H2-natrium-salz (Reinheit 30%; 8 mg) wurde in 10% wässrigem Methanol 15 (10 ml) gelöst und diese Lösung zu einer Mischung aus 10% wässrigem Methanol (10 ml) und 10% Palladium-Kohle hinzugefügt, in die vorher 30 Minuten lang Wasserstoff eingeleitet worden war. Zur Durchführung der Reduktion wurde dann in das erhaltene Gemisch 3 Stunden lang bei Raumtem-20 peratur Wasserstoff unter einem Druck von 1 bar eingeleitet. Der Katalysator wurde dann abfiltriert und das Filtrat unter Vakuum auf ein Volumen von 2 ml eingeengt. Die konzentrierte Lösung wurde durch eine Säule ( 10 ml) mit Amberlite XAD-II der Korngrösse 0,075 bis 0,15 mm (100 bis 200 mesh) 25 geschickt, und die gesuchte Verbindung wurde am Adsorbens adsorbiert. Nach Waschen der Säule mit Wasser (50 ml) wurde die Elution mit einer 20% wässrigen Methanol-Lösung durchgeführt. Die die gesuchte Verbindung enthaltenden Fraktionen wurden gesammelt, und nach Abdestillieren des 30 Methanols von den aktiven Fraktionen wurde der Rückstand gefriergetrocknet. Dabei wurden 1,0 mg Natrium-[5R,6R]-3-[(E)-2-acetamidoethenylthio]-6-[l -hy droxy-1 -methylethy l]-7 -oxo-l-azabicyclo[3,2,0] hepto-2-en-2-carboxylat als Pulver erhalten.

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UV: A.max(H20) 229 und 310 nm;

IR: vmax(KBr) 1760,1620 cm"1;

Dünnschichtchromatographie [Cellulose f (Tokyo Kasei Co., Ltd.)]: Rf = 0,87; (Lösungsmittelsystem: Propanol:

4o Wasser = 4:1);

HPLC (Hersteller: Waters Associates Inc., USA):

Rt = 8,2 min [Microbondapak Cis/14% Methanol-0,02 M Phosphatpuffer (pH 6,3), 2 ml/min/cm (138 bar)], wobei der Rt-Wert der Startverbindung unter den gleichen Bedin-45 gungen 4,3 min betrug.

NMR; 5(100 MHz, D2O, TMS): 1,33 (3H,s,Cs-CH3), 1,44 (3H,s,Cs-CH3), 2,10 (3H,s,COCH3), 3,03 (lH,dd,J= 10,19, C4-H), 3,85 (1 H,dd;J = 10,5; 19,C4-H), 3,72 ( 1 II,d, J=6,Có-H), 4,28 (lH,m,Cs-H), 6,10 (IH,d,J=14,S-so CH=), 7,20 (lH,d,N-CH=).

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Claims

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PATENTANSPRÜCHE 1. Verbindungen der Formel

C=C

R-0 0

H COOH

N

NHCOCHi in der R für -SO3H oder Wasserstoff steht, oder deren physiologisch unbedenkliche Salze.
2. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel

„H

C=C

H^ ^NHCOCH-

COOH

in der R für -SO3H oder Wasserstoff steht, oder von deren physiologisch unbedenklichen Salzen, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen der Formel

CH3—c R-0

C=C

H

•NHCOCH3

COOH

in der R die gleiche Bedeutung wie oben bezeichnet hat, oder deren Salze einer Reduktionsreaktion unterworfen werden.