BRPI1015424B1

BRPI1015424B1 - Composição compreendendo um elemento cendr e uma co-composição e composição para uso no reforço da internalização, penetração, ou ambas, de uma co-composição

Info

Publication number: BRPI1015424B1
Application number: BRPI1015424-8A
Authority: BR
Inventors: Tambet Teesalu; Erkki Ruoslahti; Kazuki Sugahara
Original assignee: Burnham Institute For Medical Research
Priority date: 2009-06-22
Filing date: 2010-06-22
Publication date: 2022-01-18
Also published as: US20200156935A1; CA2766634A1; EP2445536A1; EP2445536B1; WO2011005540A8; US20220175941A1; KR20120048563A; CN102869384B; JP2015044865A; BRPI1015424A2; US10370245B2; CN102869384A; US11059718B2; JP2012530787A; JP5906184B2; US20100322862A1; WO2011005540A1

Abstract

composição compreendendo um elemento cendr e uma co-composição e composição para uso no reforço da internalização, penetração, ou ambas, de uma co-composição. são revelados composições e métodos úteis para alvejamento e internalização de moléculas em células de interesse e para penetração por moléculas de tecidos de interesse. as composições e métodos são baseados nas sequências de peptídeo que são seletivamente internalizadas por uma célula,penetram o tecido ou ambas. a internalização revelada e penetração de tecido é útil para entrega terapêutica e agentes detectáveis para células e tecidos de interesse.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório dos Estados Unidos No. 61/219.086, depositado em 22 de junho de 2009, e do Pedido Provisório dos Estados Unidos No. 61/249.140, depositado em 06 de outubro de 2009. Pedido n.° 61/219.086, depositado em 22 de junho de 2009 e Pedido No. 61/249.140, depositado em 06 de outubro de 2009, estão incorporados aqui por referência em suas totalidades.

DECLARAÇÃO EM RELAÇÃO À PESQUISA PATROCINADA PELO GOVERNO FEDERAL

Esta invenção foi feita com o apoio do governo sob subsídios CA104898, CA 119414, CA 119335, CA124427, Cal 15410 e 30199 do National Cancer Institute (instituto nacional do câncer) (NCI) do National Institutes of Health (Instituto Nacionais de Saúde) (NIH) e subsídio BC 076050 do Department of Defense (Departamento de Defesa) (DoD). O governo tem certos direitos na invenção.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se geralmente aos campos da medicina molecular, mais especificamente, aos peptídeos que penetram células e tecidos.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Peptídeos que são internalizados em células são comumente referidos como peptídeos que penetram a célula. Existem duas classes principais de tais peptídeos: hidrofóbica e catiônica (Zorko e Langel, 2005). Os peptídeos catiônicos, que são comumente usados para introduzir ácidos nucléicos, proteínas nas células, incluem os peptídeos que penetram na célula prototípicos (CPP), Tat, e de penetratina (Derossi et al, 1998;. Meade e Dowdy, 2007). A proteína do vírus herpes, VP22, é capaz de tanto entrar quanto sair das células e transportar uma carga com ela (Elliott e O'Hare, 1997;. Brewis et al, 2003). Uma limitação principal desses peptídeos como veículos de entrega é que eles não são seletivos, eles entram em todas as células. Um sistema de entrega ativável pode ser usado o qual é mais específico para um tipo de célula ou tecido.

Penetração nos tecidos é uma séria limitação na entrega das composições para as células. Comparação da distribuição de peptídeos marcados por fluoresceína para aquela das partículas de óxido de ferro revestidas com o mesmo peptídeo mostra que as partículas permanecem próximas aos vasos sanguíneos do tumor, enquanto que o peptídeo fluorescente chega a todas as áreas do tumor. A frequentemente citada ”leakiness (‘vazabilidade’)" de vasos tumorais não parece atenuar substancialmente este problema. Além disso, tratamentos anti-angiogênicos que causam ”normalização" da vasculatura tumoral (Jain, 2005), criando uma necessidade de tumores alvo cuja vasculatura não é vazante. Assim, é importante encontrar novas formas de melhorar a passagem de composições diversas para o espaço extravascular. Uma série de proteínas são conhecidas por translocarem através do endotélio dos vasos sanguíneos, incluindo a barreira hematoencefálica. Um bom exemplo é transferrina, que é transportada através da barreira hematoencefálica pelo receptor de transferrina. Este sistema tem sido utilizado para trazer outras cargas para o cérebro (Li et al, 2002;. Fenart e Cecchelli, 2003). Sinais de peptídeo para transcitose endotelial, que pode mediar a translocação de composições da circulação para os tecidos é útil.

Assim, há uma necessidade de novas estratégias terapêuticas para alvejar seletivamente os vários tipos de células, e para internalizar proteínas e peptídeos para essas células e penetração de tecido por proteínas e peptídeos. Há também uma necessidade de aumentar a entrega de compostos e composições para e dentro das células e tecidos. A presente invenção satisfaz essas necessidades, provendo peptídeos que podem ser seletivamente alvejados, e, seletivamente internalizados, por vários tipos de células e/ou podem penetrar o tecido. Vantagens relacionadas também são providas.

BREVE RESUMO DA INVENÇÃO

São revelados métodos de reforço de internalização, penetração, ou ambos de um co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido, ou ambos, a um elemento CendR e à co- composição, reforçando assim a internalização, penetração, ou ambos, da co- composição na ou através da célula, tecido, ou ambos, em que, antes de expor a célula, tecido, ou ambos, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente associados um ao outro.

Também são revelados métodos para reforçar a internalização de uma co- composição em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a um elemento CendR e à co-composição, reforçando assim a internalização da co- composição na célula, em que, antes de expor a célula, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de penetração de uma co-composição no e através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a um elemento CendR e à co-composição, reforçando assim a penetração da co- composição no e através do tecido, em que, antes de expor o tecido, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma co-composição, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições que compreendem uma proteína ou peptídeo e uma co-composição, em que a proteína ou peptídeo compreendem um elemento CendR e um peptídeo acessório, em que o elemento CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma co-composição, em que a proteína ou peptídeo compreendem uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR e um peptídeo acessório, em que o elemento CendR e a co-composição nâo são acoplados covalentemente ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR, uma molécula acessória, e uma co- composição, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR e a molécula acessória são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Nessas composições, o peptídeo acessório pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR.

Exemplos de moléculas acessórias úteis incluem moléculas de homing (endereçamento linfocitário), moléculas alvo, ligantes de afinidade, moléculas que penetram as células, moléculas de escape endossômico, moléculas de alvejamento subcelular, moléculas de alvejamento nuclear. Moléculas acessórias diferentes podem ter funções similares ou diferentes entre si. Moléculas acessórias com funções similares, funções diferentes, ou ambas, podem ser associadas a um elemento CendR, composição de CendR, conjugado de CendR, molécula de CendR, composto de CendR, proteína de CendR e/ou peptídeo CendR.

Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma co-composição, em que a proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR e um peptídeo de homing (endereçamento linfocitário), em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalenteentre si. Também são reveladas composições compreendeendo uma proteína ou peptídeo e uma co-composição, em que a proteína ou peptídeo compreende uma sequência de aminoácido, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR e um peptídeo de homing, em que o elemento CendR e a co-composição são não covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR, uma molécula de homing e uma co-composição, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalenteentre si, em que o elemento CendR e a molécula são homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Nessas composições, o peptídeo de homing pode sobrepor-se com o elemento CendR ou ser separado do elemento CendR.

Também são revelados os métodos de reforço de internalização, penetração, ou ambos, de uma composição de cargas em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido, ou ambos a um elemento CendR e à composição de carga, reforçando assim a internalização, penetração, ou ambas, da composição de carga na ou através da célula, tecido, ou ambos, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados métodos de reforço de internalização de uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a um elemento CendR e a composição de carga, reforçando assim a internalização da composição de carga na célula, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de penetração de uma composição de carga em e através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a um elemento CendR e à composição de carga, reforçando assim a penetração da composição de carga no e através do tecido, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma composição de carga, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma composição de carga, em que a proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR e um peptídeo acessório, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma composição de carga, em que a proteína ou peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR e um peptídeo acessório, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR, uma molécula acessória, e uma composição de carga, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR e a molécula acessória são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Nessas composições, o peptídeo acessório pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR.

Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma composição de carga, em que a proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR e um peptídeo de homing, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma composição de carga, em que a proteína ou peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR e um peptídeo de homing, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR, uma molécula de homing, e uma composição de carga, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR e a molécula de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Nessas composições, o peptídeo de homing pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR.

Em algumas formas, o elemento CendR é um tipo 1 de elemento CendR. Em algumas formas, o elemento CendR é um tipo 2 de elemento CendR. Em algumas formas, o elemento CendR não é um tipo 1 de elemento CendR. Em algumas formas, o elemento CendR não é um tipo 2 de elemento CendR. Em algumas formas, o elemento CendR é um tipo 1 de elemento CendR e não um tipo 2 de elemento CendR. Em algumas formas, o elemento CendR é um tipo 2 de elemento CendR e não um tipo 1 de elemento CendR. Em algumas formas, o elemento CendR é um tipo 1 de elemento CendR ou um tipo 2 de elemento CendR.

O elemento CendR pode permeabilizar a célula, tecido, ou ambos. A célula, tecido, ou ambos podem estar em um sujeito. A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos ao elemento CendR e à co-composição pela administração do elemento CendR e da co-composição ao sujeito. O elemento CendR e a co- composição podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o elemento CendR e a co-composição. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em tempos diferentes. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O elemento CendR e a co- composição podem ser administrados ao sujeito por rotas separadas. Em algumas formas, o elemento CendR e a co-composição não estão ligados entre si. A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos ao elemento CendR e à composição de carga pela administração do elemento CendR e a composição de carga ao sujeito. O elemento CendR e a composição de carga podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O elemento CendR e a composição de carga pode ser administrada ao sujeito em uma única composição compreendendo o elemento CendR e a composição de carga.

Vários elementos CendR diferentes, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação podem ser usados juntos. Similarmente, várias co-composições diferentes, várias composições de carga diferentes ou uma combinação podem ser usadas juntas. Onde tais múltiplos CendR elementos diferentes, peptídeos

CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação são usados juntos, eles podem ser usados com um único tipo de co-composição, um único tipo de composição de carga, várias co- composições diferentes, várias composições de carga diferentes, ou uma combinação. Similarmente, quando várias co-composições diferentes, várias composições de carga diferentes, ou uma combinação podem ser usadas juntas, elas podem ser usadas com um único tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, composto CendR, conjugado CendR, ou composição CendR, ou com vários elementos CendR diferentes, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação.

Por exemplo, um iRGD (que combina um elemento CendR e um elemento RGD em um único peptídeo) pode ser usado juntamente com um ou vários elementos CendR diferentes, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação , uma ou várias co-composições diferentes, várias composições de carga diferentes, ou uma combinação, ou qualquer combinação destes. Em tais combinações, o próprio iRGD pode ser combinado no mesmo conjugado ou composição com uma ou mais composições de carga, uma ou mais moléculas acessórias, uma ou mais moléculas de homing, etc.

A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos às combinações dos componentes CendR diferentes e combinações de diferentes co-composições administrando os componentes CendR e as co-composições ao sujeito. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais dos co-composições podem ser administradas ao sujeito simultaneamente. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das co-composições podem ser administradas para o sujeito em uma ou mais composições únicas compreendendo o componente(s) CendR e a co-composição(s). Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das co- composições podem ser administradas ao sujeito em uma ou mais composições separadas. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das co- composições podem ser administrados ao sujeito em tempos diferentes. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma ou mais composições separadas. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das co-composições podem ser administrados ao sujeito por uma ou mais rotas distintas. Em algumas formas, o elemento CendR e a co-composição não estão ligados entre si.

A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos às combinações de componentes CendR diferentes e combinações de composições de carga diferentes administrando os componentes CendR e as composições de carga ao sujeito. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados ao sujeito em uma ou mais composições únicas compreendendo o componente(s) CendR e a composição(s) de carga. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados ao sujeito em uma ou mais composições separadas. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados ao sujeito em tempos diferentes. O elemento CendR e a composição de carga podem ser administrados ao sujeito em uma ou mais composições separadas. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados ao sujeito por uma ou mais rotas distintas.

A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos a um iRGD e à co- composição pela administração do iRGD e a co-composição ao sujeito. O iRGD e a co-composição podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O iRGD e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o iRGD e a co-composição. O iRGD e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O iRGD e a co- composição podem ser administrados ao sujeito em tempos diferentes. O iRGD e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O iRGD e a co-composição podem ser administrados ao sujeito por rotas separadas. Em algumas formas, o iRGD e a co-composição não estão ligados entre si. A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos ao iRGD e à composição de carga administrando o iRGD e a composição de carga ao sujeito. O iRGD e a composição de carga podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O iRGD e a composição de carga podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o iRGD e a composição de carga.

O elemento CendR pode ser compreendido em uma sequência de aminoácidos em uma proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo podem ser internalizados em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, proteína ou peptídeo podem penetrar o tecido quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo podem ser internalizadas em uma célula e penetrar o tecido quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser internalizada em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, sem ser associada com a co-composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode penetrar o tecido sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser internalizada em uma célula e penetrar o tecido sem ser associada com a co-composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos é o único elemento internalização funcional na proteína ou peptídeo.

Em algumas formas, a internalização, a penetração, ou ambas, da co- composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos é exposta ao elemento CendR mas não quando a célula, tecido, ou ambos, não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a penetração da co-composição no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto ao elemento CendR mas não quando o tecido não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da co- composição na ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostos ao elemento CendR mas não quando a célula e tecido não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a internalização, a penetração, ou ambas da co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou de ambos é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a penetração da co-composição no ou através do tecido é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo.

Em algumas formas, a internalização, a penetração, ou ambas da composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos é exposta ao elemento CendR mas não quando a célula, tecido ou ambos não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a penetração da composição de carga no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto ao elemento CendR mas não quando o tecido não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da composição de carga em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostas ao elemento CendR mas não quando a célula e tecido não é exposta ao elemento CendR. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambas da composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a penetração da composição de carga no ou através do tecido é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização e penetração da composição de carga em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo.

O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável. O elemento CendR ativável pode ser um elemento CendR ativável por protease. A proteína ou peptídeo pode ser circular. A proteína ou peptídeo pode ser linear. O elemento CendR pode ser na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo. A co- composição e/ou composição de carga pode compreender um agente terapêutico. A co-composição e/ou composição de carga pode compreender um agente de detecção. A co-composição e/ou composição de carga pode compreender um transportador, veículo ou ambos. A co-composição e/ou composição de carga pode compreender uma proteína terapêutica, um composto terapêutico, uma composição terapêutica, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, um agente quimioterápico canceroso, uma toxina, um agente citotóxico, um agente antiinflamatório, um agente anti-artrítico, um fator de crescimento, uma citocina, uma quimiocina, um composto que modula uma ou mais vias de sinalização, um anticorpo, um ácido nucléico, um análogo de ácido nucléico, uma célula, um vírus, um fago, uma partícula viral, uma partícula de fago, um capsídeo

viral, um capsídeo do fago, uma partícula tipo vírus, um lipossoma, uma micela, uma conta, uma nanopartícula, uma micropartícula, um agente quimioterapêutico, um agente de contraste, um agente de imagem, um rótulo, um agente de rotulagem, ou uma combinação.

O elemento CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser uma parte de uma sequência de aminoácidos, uma proteína, ou um peptídeo que compreende o elemento CendR. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não covalente ao elemento CendR ou uma sequência de aminoácidos, uma proteína, ou um peptídeo que compreende o elemento CendR. A molécula acessória pode ser separada do ou sobreposta ao elemento CendR. Por exemplo, algumas moléculas acessórias são sequências de aminoácidos. Isso pode permitir a sequência de aminoácidos consistindo do elemento CendR sobrepor-se à sequência de aminoácidos que consiste na sequência de aminoácido acessória. Por exemplo, iRGD, LyP-I, iNGR e peptídeos RGR cada um contém tanto a sequência acessória quanto a sequência CendR sobrepondo-se entre si no peptídeo. Alternativamente, o peptídeo acessório pode ser uma entidade separada que não se sobrepõe com o elemento CendR. Por exemplo, um peptídeo de ligação de HER2, peptídeo CREKA, peptídeo NGR, ou um peptídeo RGD que não é um elemento CendR pode consistir de sequência de aminoácidos que não se sobrepõe com um elemento CendR. Em algumas formas, a molécula acessória pode compreender uma sequência, por exemplo, em um peptídeo CendR que se liga a um receptor específico distinto do receptor para o elemento CendR.

A sequência de aminoácidos pode compreender um ou mais peptídeos acessórios. Por exemplo, as sequências de aminoácidos podem incluir um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação de HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou um combinação. A proteína ou peptídeo pode compreender um ou mais peptídeos acessórios. Por exemplo, as sequências de aminoácidos podem compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou uma combinação.

Em algumas formas, a co-composição não compreende uma molécula acessória. A co-composição pode compreender uma ou mais moléculas acessórias. Em algumas formas, a co-composição não compreende um peptídeo acessório. A co-composição pode compreender um ou mais peptídeos acessórios. A co-composição pode endereçar seletivamente a um tumor. Em algumas formas, a co-composição não endereça seletivamente à vasculatura do tumor. A co-composição pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor. Em algumas formas, a composição de carga não compreende uma molécula acessória. A composição de carga pode compreender uma ou mais moléculas acessórias. Em algumas formas, a composição de carga não compreende um peptídeo acessório. A composição de carga pode compreender um ou mais peptídeos acessórios. A composição de carga pode endereçar seletivamente a um tumor. Em algumas formas, a composição de carga não endereça seletivamente à vasculatura do tumor. A composição de carga pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor.

O elemento CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de uma sequência de aminoácidos, uma proteína ou peptídeo que compreende o elemento CendR. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não covalente ao elemento CendR ou uma sequência de aminoácidos, uma proteína, ou peptídeo que compreende o elemento CendR. A molécula de homing pode ser separada do ou sobreposta ao elemento CendR. Por exemplo, algumas moléculas de homing são sequências de aminoácidos. Isso pode permitir que a sequência de aminoácidos consistindo do elemento CendR para sobrepor-se a sequência de aminoácidos que consiste na sequência de aminoácido de homing (endereçamento linfocitário. Por exemplo, iRGD, LyP-I, iNGR, e peptídeos RGR cada um contêm tanto uma sequência de homing quanto sequência de CendR sobrepostas entre si no peptídeo. Alternativamente, o peptídeo de homing pode ser uma entidade separada que não se sobrepõe com o elemento CendR. Por exemplo, um peptídeo de ligação de HER2, peptídeo CREKA, peptídeo NGR, ou um peptídeo RGD que não é um elemento CendR pode consistir da sequência de aminoácidos que não se sobrepõe com um elemento CendR. Em algumas formas, a molécula de homing pode compreender uma sequência, por exemplo, num peptídeo CendR que se liga a um receptor específico distinto do receptor para o elemento CendR.

Muitas moléculas de homing e peptídeos de homing endereçam para a vasculatura do tecido alvo. No entanto, por uma questão de conveniência homing é referido em alguns lugares aqui como homing ao tecido associado com a

vasculatura à qual a molécula de homing ou peptídeo de homing pode realmente endereçar. Assim, por exemplo, um peptídeo de homing que enderça a uma vasculatura pode ser referido aqui como homing para o tecido do tumor ou para células tumorais. Pela inclusão ou associação de uma molécula de homing ou peptídeo de homing a, por exemplo, uma proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co-composição, composição de carga, ou elemento CendR à proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co-composição, composição de carga ou elemento CendR pode ser alvejado ou pode endereçar para o alvo da molécula de homing ou peptídeo de homing. Desta forma, a proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co-composição, composição de carga, ou elemento CendR pode ser referido para endereçao ao alvo da molécula de homing ou peptídeo de homing. Por conveniência e salvo indicação em contrário, a referência ao homing de uma proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co- composição, composição de carga, elemento CendR, etc é destinada apenas para indicar que a proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co-composição, composição de carga, elemento CendR, etc inlcui ou está associado com uma molécula de homing adequada ou peptídeo de homing.

A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente a um tumor. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente a uma vasculatura do tumor. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente a um ou mais tipos particulares de tumor. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente à vasculatura de um ou mais tipos particulares de tumor. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente a um ou mais estágios particulares de um tumor ou câncer. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente à vasculatura de um ou mais estágios particulares de um tumor ou câncer. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente a um ou mais estágios particulares de um ou mais tipos particulares de tumor. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente à vasculatura de um ou mais estágios diferentes de um ou mais tipos particulares de tumor.

A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente ao tecido pulmonar. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente à vasculatura pulmonar. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente ao tecido cardíaco. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamentepara à vasculatura do coração. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente às células do cérebro, as células-tronco do cérebro, tecido cerebral e/ou vasculatura cerebral, células renais, células-tronco de rim, tecido renal e/ou vasculatura renal, células da pele, células-tronco da pele, tecido da pele e/ou vasculatura de pele, células do pulmão, tecido pulmonar e/ou vasculatura pulmonar, células do pâncreas, tecido pancreático e/ou vasculatura pancreática, células intestinais, tecido intestinal e/ou vasculatura intestinal, células da glândula adrenal, tecido adrenal e/ou vasculatura adrenal, células retinais, tecido retinal e/ou vasculatura retinal, células do fígado, tecido hepático e/ou vasculatura do fígado, células da próstata, tecido da próstata e/ou vasculatura de próstata, células da endometriose, tecido da endometriose e/ou vasculatura de endometriose, células de ovário, tecido de ovário e/ou vasculatura do ovário, células tumorais, tumores, vasos sanguíneos do tumor e/ou vasculatura do tumor, células ósseas, tecido ósseo e/ou vasculatura óssea, células da medula óssea, tecido da medula óssea e/ou vasculatura da medula óssea, células de cartilagem, tecido cartilaginoso e/ou vasculatura de cartilagem, células-tronco, células-tronco embrionárias, células-tronco pluripotentes, células- tronco pluripotentes induzidas, células-tronco adultas, células-tronco hematopoiéticas, células-tronco neurais, células-tronco mesenquimais, células- tronco mamárias, células-tronco endoteliais, células-tronco adultas olfativas, células-tronco da crista neural, células-tronco do câncer, células sanguíneas, eritrócitos, plaquetas, leucócitos, granulócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, células linfóides, linfócitos, monócitos, vasculatura da ferida, vasculatura do tecido lesado, vasculatura do tecido inflamado, placas ateroscleróticas ou uma combinação.

A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a internalização em uma célula. A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a penetração nos tecidos. A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a internalização em uma célula e penetração nos tecidos. A sequência de aminoácidos pode compreender um ou mais peptídeos de homing. Por exemplo, as sequências de aminoácidos podem compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR ou uma combinação. A sequência de aminoácidos pode compreender um peptídeo CREKA.

A proteína ou peptídeo pode compreender um ou mais peptídeos de homing. Por exemplo, as sequências de aminoácidos podem compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou uma combinação. A proteína ou peptídeo pode compreender iRGD. A proteína ou peptídeo pode compreender um peptídeo LyP- 1. A proteína ou peptídeo pode compreender iNGR. A proteína ou peptídeo pode compreender peptídeo RGR. A proteína ou peptídeo pode compreender um peptídeo CREKA.

Em algumas formas, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, a co-composição não compreende um elemento de internalização funcional. A co-composição pode compreender um elemento de internalização funcional. Em algumas formas, a co-composição não compreende uma molécula de homing. A co-composição pode compreender uma ou mais moléculas de homing. Em algumas formas, a co-composição não compreende um peptídeo de homing. A co-composição pode compreender um ou mais peptídeos de homing. A co-composição pode endereçar seletivamente a um tumor. Em algumas formas, a co-composição não endereça seletivamente à vasculatura do tumor. A co-composição pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor.

Em algumas formas, o elemento CendR e a composição de carga não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, a composição de carga não compreende um elemento de internalização funcional. A composição de carga pode compreender um elemento de internalização funcional. Em algumas formas, a composição de carga não compreende uma molécula de homing. A composição de carga pode compreender uma ou mais moléculas de homing. Em algumas formas, a composição de carga não compreende um peptídeo de homing. A composição de carga pode compreender um ou mais peptídeos de homing. A composição de carga pode endereçar seletivamente a um tumor. Em algumas formas, a composição de carga não endereça seletivamente à vasculatura do tumor. A composição de carga pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor.

A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente a um tumor. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente a um ou mais tipos particulares de tumor. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente à vasculatura de um ou mais tipos particulares de tumor. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente a um ou mais estágios particulares de um tumor ou câncer. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente à vasculatura de um ou mais estágios particulares de um tumor ou câncer. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente a um ou mais estágios particulares de um ou mais tipos particulares de tumor. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente para a vasculatura de um ou mais estágios diferentes de um ou mais tipos particulares de tumor.

A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente ao tecido pulmonar. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente para a vasculatura pulmonar. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente ao tecido cardíaco. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamente à vasculatura coração. A sequência de aminoácidos pode endereçar seletivamentepara às células do cérebro, células-tronco do cérebro, tecido cerebral e/ou vasculatura cerebral, células renais, células-tronco de rim, tecido renal e/ou vasculatura renal, células da pele, células-tronco da pele, tecido da pele e/ou vasculatura de pele, células do pulmão, tecido pulmonar e/ou vasculatura pulmonar, células pancreáticas, tecido pancreático e/ou vasculatura pancreática, células intestinais, tecido intestinal e/ou vasculatura intestinal, células da glândula adrenal, tecido adrenal e/ou vasculatura adrenal, células da retina, tecido retinal e/ou vasculatura retinal, células do fígado, tecido hepático e/ou vasculatura do fígado, células da próstata, tecido da próstata e/ou vasculatura de próstata, células da endometriose, tecido da endometriose e/ou vasculatura de endometriose, células de ovário, tecido de ovário e/ou vasculatura do ovário, células tumorais, tumores, vasos sanguíneos do tumor e/ou vasculatura do tumor, células ósseas, tecido ósseo e/ou vasculatura óssea, células da medula óssea, tecido da medula óssea e/ou vasculatura da medula óssea, células de cartilagem, tecido cartilaginoso e/ou vasculatura de cartilagem, células-tronco, células-tronco embrionárias, células-tronco pluripotentes, células-tronco pluripotentes induzidas, células-tronco adultas, células-tronco hematopoiéticas, células-tronco neurais, células-tronco mesenquimais, células-tronco mamárias, células-tronco endoteliais, células-tronco adultas olfativas, células-tronco da crista neural, células-tronco do câncer, células sanguíneas, eritrócitos, plaquetas, leucócitos, granulócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, células linfóides, linfócitos, monócitos, vasculatura da ferida, vasculatura do tecido lesado, vasculatura do tecido inflamado, placas ateroscleróticas ou uma combinação.

O elemento CendR pode endereçar seletivamente a um tumor quando é acoplado ou associado a uma molécula de homing. Tal elemento CendR pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente a um ou mais tipos particulares de tumor. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente à vasculatura de um ou mais tipos particluares de tumor. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente a um ou mais estágios particulares de um tumor ou câncer. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente à vasculatura de um ou mais estágios particulares de um tumor ou câncer. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente a um ou mais estágios particulares de um ou mais tipos particulares de tumor. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente à vasculatura de um ou mais estágios diferentes de um ou mais tipos particulares de tumor.

Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente ao tecido pulmonar. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente à vasculatura pulmonar. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente ao tecido cardíaco. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente à vasculatura do coração. Um elemento CendR acoplado ou associado a uma molécula de homing pode endereçar seletivamente às células do cérebro, células-tronco do cérebro, tecido cerebral e/ou vasculatura cerebral, células renais, células-tronco de rim, tecido renal e/ou vasculatura renal, células da pele, células-tronco da pele, tecido da pele e/ou vasculatura de pele, células do pulmão, tecido pulmonar e/ou vasculatura pulmonar, células pancreáticas, tecido pancreático e/ou vasculatura pancreática, células intestinais, tecido intestinal e/ou vasculatura intestinal, células da glândula adrenal, tecido adrenal e/ou vasculatura adrenal, células da retina, tecido retinal e/ou vasculatura retinal, células do fígado, tecido hepático e/ou vasculatura do fígado, células da próstata, tecido da próstata e/ou vasculatura de próstata, células da endometriose, tecido da endometriose e/ou vasculatura de endometriose, células de ovário, tecido de ovário e/ou vasculatura do ovário, células tumorais, tumores, vasos sanguíneos do tumor e/ou vasculatura do tumor, células ósseas, tecido ósseo e/ou vasculatura óssea, células da medula óssea, tecido da medula óssea e/ou vasculatura da medula óssea, células de cartilagem, tecido cartilaginoso e/ou vasculatura de cartilagem, células-tronco, células-tronco embrionárias, células- tronco pluripotentes, células-tronco pluripotentes induzidas, células-tronco adultas, células-tronco hematopoiéticas, células-tronco neurais, células-tronco mesenquimais, células-tronco mamárias, células-tronco endoteliais, células-tronco adultas olfativas, células-tronco da crista neural, células-tronco do câncer, células sanguíneas, eritrócitos, plaquetas, leucócitos, granulócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, células linfóides, linfócitos, monócitos, vasculatura da ferida, vasculatura do tecido lesado, vasculatura do tecido inflamado, placas ateroscleróticas ou uma combinação.

O elemento CendR pode ser o único elemento de internalização funcional na composição, conjugado, molécula, proteína, peptídeo etc de CendR, o elemento CendR pode ser o único elemento de penetração de tecido funcional na composição, conjugado, molécula, proteína, peptídeo etc de CendR, ou ambos. A sequência de aminoácido selecionada pode ser o único elemento de internalização funcional na composição, conjugado, molécula, proteína, peptídeo etc de CendR, a sequência de aminoácido selecionada pode ser o único elemento de penetração de tecido funcional na composição, conjugado, molécula, proteína, peptídeo etc, de CendR ou ambos.

O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável. O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável por protease. A proteína ou peptídeo pode ser circular (cíclico) ou pode conter um ciclo. O elemento CendR pode estar na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo. O elemento CendR pode compreender um grupo carboxila terminal. Um grupo de bloqueio pode estar acoplado ao grupo carboxila terminal. A ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal pode ser selecionada para ser clivável por uma protease, enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade à célula de interesse. O grupo de bloqueio pode ser acoplado ao aminoácido de terminação C do elemento CendR. O grupo de bloqueio pode estar acoplado a um aminoácido do elemento CendR que não o aminoácido de terminação C do elemento CendR.

Também são revelados métodos de produção de um elemento CendR ativável que pode ser ativado na proximidade de uma célula de interesse, o método compreendendo formar um elemento CendR ativável em que um grupo de bloqueio é acoplado a um elemento CendR por meio de uma ligação clivável,em que a ligação é clivável clivável por uma enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse. A célula pode estar em um sujeito. A enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem que estão presentes em proximidade com a célula de interesse podem ser identificados. A enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes na proximidade com a célula de interesse podem ser identificadas antes de formar o elemento CendR ativável. A ligação clivável pode ser selecionada com base na enzima que está presente na proximidade com a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada com base no agente de clivagem presente no local onde o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou acumula, tal como a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada com base nas condições de clivagem presentes no local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou acumula, tal como a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada antes de formar o elemento CendR ativável. O elemento CendR pode compreender um grupo carboxila terminal, em que o grupo de bloqueio é acoplado ao grupo carboxila terminal. Também são revelados métodos de produção de um elemento CendR ativável, o método compreendendo formar um elemento CendR ativável em que um grupo de bloqueio é acoplado a um elemento CendR por meio de um vínculo clivável. A ligação clivável pode ser clivada em qualquer forma adequada. Por exemplo, a ligação clivável pode ser clivada enzimaticamente ou não-enzimaticamente. Para a clivagem enzimática, a enzima de clivagem pode ser fornecida ou pode estar presente em um local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou acumula. Por exemplo, a enzima pode estar presente em proximidade de uma célula para a qual o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou acumula. Para clivagem não-enzimática, o elemento CendR pode ser posto em contato com um agente de clivagem, pode ser colocado em condições de clivagem, ou ambos. Um agente de clivagem é qualquer substância que possa mediar ou estimular clivagem da ligação clivável. As condições de clivagem podem ser qualquer solução ou condições ambientais que podem mediar ou estimular a clivagem da ligação clivável.

Também são revelados métodos de formação de um elemento CendR ativável, o método compreendendo fazer um grupo de bloqueio ser covalentemente acoplado a um elemento CendR, em que uma ligação acoplando ao grupo de bloqueio e o elemento CendR é clivável. Também são revelados os métodos de formação de um elemento CendR ativável, o método compreendendo fazer um grupo de bloqueio ser covalentemente acoplado a uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR o elemento CendR, em que uma ligação acoplando ao grupo de bloqueio e o elemento CendR é clivável. Também são revelados métodos de formação de um elemento CendR ativável, o método compreendendo (a) selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido,em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR, e (b), fazer um grupo de bloqueio ser covalentemente acoplado ao elemento CendR, em que uma ligação acoplando o grupo bloqueio e o elemento CendR é clivável. O grupo de bloqueio covalentemente acoplado ao elemento CendR reduz ou impede a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido. O grupo bloqueio covalentemente acoplado ao elemento CendR pode reduzir ou prevenir a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido comparado com o mesmo elemento CendR com nenhum grupo de bloqueio. O elemento CendR ativável pode compreender a sequência de aminoácido selecionada e o grupo de bloqueio. A célula pode estar em um sujeito. A enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse podem ser identificados. A enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse podem ser identificados antes de formar o elemento CendR ativável. A ligação clivável pode ser selecionada com base na enzima que está presente em proximidade com a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada com base no agente de clivagem presente no local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou acumula, tal como a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada com base nas condições de clivagem presentes no local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou acumula, tal como a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada antes de formar o elemento CendR ativável. O elemento CendR pode compreender um grupo carboxila terminal, em que o grupo de bloqueio é acoplado ao grupo carboxila terminal.

Aqui é revelado um método de formação de uma composição CendR de homing, o método compreendendo selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento de terminação C, e fazer uma molécula de homing ser covalentemente acoplada a ou não covalentemente associada com a sequência de aminoácido selecionada, em que a composição CendR compreende a sequência de aminoácido selecionada e a molécula de homing acoplada ou associada.

É revelado um método de fazer uma composição CendR de homing compreendendo: (a) selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento de terminação C, (b) fazer uma molécula de homing ser covalentemente acoplada a ou não-covalentemente associada à sequência de amino ácido selecionada, em que a composição CendR compreende a sequência de aminoácido selecionada e a molécula de homing associada ou acoplada.

Também é revelado um método de entrega de uma co-composição em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a uma composição CendR e a co-composição, em que a composição CendR pode então entrar na célula, entregando assim a co-composição para a célula.

Também é revelado um método de fazer uma co-composição para penetrar o tecido, o método compreendendo: expor o tecido a uma composição CendR e a co-composição, em que a composição CendR pode então entrar e sair de células no tecido, fazendo, assim, com que a co-composição penetre no tecido.

É revelado adicionalmente um método de entrega de uma co-composição em uma célula, o método compreendendo: expor a célula à co-composição e uma composição CendR compreendendo um elemento CendR ativável, quando então um agente de clivagem ativa o elemento CendR ativável da composição CendR, em que a composição CendR pode então entrar na célula, entregando assim a co-composição para dentro da célula.

É revelado adicionalmente um método de fazer uma co-composição penetrar o tecido, o método compreendendo: expor o tecido à co-composição e uma composição CendR compreendendo um elemento CendR ativável, quando então um agente de clivagem ativa o elemento CendR ativável da composição CendR, em que a composição CendR pode então entrar e passar as células no tecido, fazendo assim a co-composição penetrar no tecido.

Também é revelado um método de entrega a uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a uma composição CendR e a composição de carga, em que a composição CendR pode então entrar na célula, proporcionando assim a composição de carga na célula.

Também é revelado um método de fazer uma composição de carga para penetrar o tecido, o método compreendendo: expor o tecido a uma composição CendR e a composição de carga, em que a composição CendR pode então entrar e sair de células no tecido, fazendo assim a composição de carga penetrar no tecido.

É revelado adicionalmente um método de entrega de uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula à composição de carga e uma composição CendR compreendendo um elemento CendR ativável, quando então um agente de clivagem ativa o elemento CendR ativável da

composição CendR, em que a composição CendR pode então entrar na célula, entregando assim a composição de carga para dentro da célula.

É revelado adicionalmente um método de fazer uma composição de carga penetrar o tecido, o método compreendendo: expor o tecido à composição de carga e uma composição CendR compreendendo um elemento CendR ativável, quando então um agente de clivagem ativa o elemento CendR ativável da composição CendR, em que a composição CendR pode então entrar e passar as células no tecido, fazendo assim a composição de carga penetrar no tecido.

Também é revelado um método de entrega de uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a uma composição CendR e a composição de carga, em que a composição CendR compreende a composição de carga, em que a composição CendR pode então entrar na célula, entregando assim a composição de carga para dentro da célula.

Também é revelado um método de fazer uma composição de carga penetrar o tecido, o método compreendendo: expor o tecido a uma composição CendR e a composição de carga, em que a composição CendR compreende a composição de carga, em que a composição CendR pode então entrar e sair de células no tecido, fazendo assim a composição de carga penetrar no tecido.

É revelado ainda um método de entrega de uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula à composição de carga e uma composição CendR compreendendo um elemento CendR ativável, quando então um agente de clivagem ativa o elemento CendR ativável da composição CendR, em que a composição CendR pode então entrar na célula, entregando assim a composição de carga para dentro da célula, em que a composição CendR compreende a composição de carga.

É revelado adicionalmente um método de fazer uma composição de carga penetrar o tecido, o método compreendendo: expor o tecido à composição de carga e uma composição CendR compreendendo um elemento CendR ativável, quando então um agente de clivagem ativa o elemento CendR ativável da composição CendR, em que a composição CendR pode então entrar e passar as células no tecido, fazendo assim a composição de carga penetrar no tecido, em que a composição CendR compreende a composição de carga.

Células que podem internalizar um elemento CendR podem ser identificadas pela (a) exposição de uma célula a um elemento CendR, e (b) determinação se o elemento CendR foi internalizado. A célula pode estar em um ensaio, por exemplo. O elemento CendR pode estar acoplado a uma molécula de homing, formando uma composição CendR. Células que podem internalizar um elemento CendR ativável podem ser identificadas pela (a) exposição de uma célula a um elemento CendR ativável, (b) determinação se o elemento CendR ativável foi internalizado. O elemento CendR ativável pode ser desbloqueado antes da exposição à célula, mas não precisa ser. Isto pode ser usado para testar a capacidade de bloqueio do bloqueador, por exemplo. O elemento CendR ativável também pode ser um elemento CendR ativado por protease.

Células cancerosas, ou sujeitos que abrigam células cancerosas, pode ser identificados como candidatos para terapia baseada em CendR pela (a) exposição da célula cancerosa a um elemento CendR, e (b) determinação se o elemento CendR foi internalizado pela célula de câncer, em que um elemento CendR internalizado identifica a célula de câncer ou o sujeito como sendo um candidato para terapia baseada em CendR. A célula pode estar em um ensaio, ou pode estar em um sujeito, por exemplo. O elemento CendR pode estar acoplado a uma molécula de homing formando, assim, uma composição CendR.

Tumores, ou sujeitos que abrigam um tumor, pode ser identificado como um candidato para terapia baseada em CendR pela (a) exposição de tecido do tumor a um elemento CendR, e (b) determinação se o elemento CendR passou pelo tecido ou foi internalizado pelas células no tecido, em que um elemento CendR repassado ou internalizado identifica o tumor ou o sujeito como sendo um candidato para terapia baseada em CendR.

Um elemento CendR ativável que pode ser ativado na proximidade de uma célula de interesse pode ser feito através da formação de um elemento CendR ativável em que um grupo de bloqueio é acoplado a um elemento CendR através de uma ligação clivável, em que a ligação clivável é clivável por uma enzima presente na proximidade com a célula de interesse. Isto pode compreender adicionalmente, antes de formar o elemento CendR ativável, identificar a enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes na proximidade com a célula de interesse. Isto pode compreender adicionalmente, antes de formar o elemento CendR ativável, selecionar a ligação clivável baseada na enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes na proximidade com a célula de interesse.

Um elemento CendR ativável pode ser formado pela (a) seleção de uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento de terminação C, em que o elemento de terminação C compreende um grupo carboxila terminal, e (b) fazendo um grupo de bloqueio ser covalentemente acoplado ao grupo carboxila terminal da sequência de aminoácido selecionada, em que a ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal é clivável, em que o elemento CendR ativável compreende a sequência de aminoácido selecionada e o grupo de bloqueio. Isso pode compreender adicionalmente, antes da estapa (b), selecionar a ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal a ser clivável por uma protease, enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse.

O elemento CendR ativável pode ser feito pelo método compreendendo (a) selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento de terminação C, em que o elemento de terminação C compreende um grupo carboxila terminal, e (b) fazer com que um grupo de bloqueio seja covalentemente acoplado ao grupo carboxila terminal da sequência de amino ácido selecionada, em que a ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal é clivável, em que o elemento CendR ativável compreende a sequência de amino ácido selecionada e o grupo de bloqueio. O método pode compreender adicionalmente, antes da etapa (b), selecionar a ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal a ser clivável por uma protease, enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse.

Vantagens adicionais do método revelado e composições serão definidas em parte, na descrição que se segue, e em parte será entendido a partir da descrição, ou pode ser aprendido através da prática do método revelado e composições. As vantagens do método divulgado e composições serão realizadas e alcançadas por meio dos elementos e combinações particularmente apontadas nas reivindicações anexadas. É preciso entender que tanto a descrição geral precedente quanto a descrição detalhada seguinte são apenas explicativas e exemplares e não são restritivas da invenção como reivindicada.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Os desenhos de acompanhamento, que estão incorporados e constituem uma parte desta especificação, ilustram várias modalidades do método revelado e composições e, juntamente com a descrição, servem para explicar os princípios do método revelado e composições.

Figura 1 mostra uma representação esquemática do sistema CendR de alvejamento de tecido/penetração de tecido.

Figura 2 mostra um gráfico do título do fago em vários tecidos após a injeção do peptídeo RPARPAR (SEQ ID NO: 2). O sistema oligomérico RPARPAR aumenta a permeabilidade dos vasos sanguíneos para circular fago marcador não alvejado. Camundongos foram injetados por via intravenosa com 150 μL de PBS contendo 1010 de pfu de um fago de controle e 8 μM de peptídeo RPARPAR (ou controle) oligomerizado usando estrutura (scaffold) de neutravidina. Após 30 min de circulação, os camundongos foram perfundidos, e o número de fagos retidos nos tecidos foi determinado. Os valores no eixo y representam RPARPAR/razão de controle. Análise estatística foi desempenhada pelo Student’s t-test, n = 4; barras de erro indicam s.e.m.; asterisco duplo, p <0,01, asterisco triplo, p <0,001. Barras de escala: 20 μm (B, C) e 50 μm (F).

Figura 3 mostra um diagrama de um exemplo de um mecanismo de multi-etapas e de penetração de iRGD. São as sequências SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 37.

Figuras 4A-4C mostra homing de tumor in vivo de peptídeo, iRGD. a., iRGD rotulado Fluoresceína (FAM) ou peptídeo de controle (200 μg em PBS) foi injetado por via intravenosa em LSL-Kras, p53-fl/+, p48-Cre camundongos portadores de adenocarcinoma ductal de pâncreas de novo (PDAC). Os peptídeos foram autorizados a circular durante 2 horas. e os órgãos foram coletados e visualizados sob a luz UV. Setas apontam para os tumores. As linhas pontilhadas mostram onde os órgãos foram colocados, b., imagens Confocais de xenoenxertos de câncer de próstata humano de 22Rv-1 ortotópico de ratos injetados com os peptídeos indicados, fago e micelas. iRGD foi comparado com um peptídeo de ligação de integrina mas não penetrante similar, CRDGC (SEQ ID NO: 36). O tempo de circulação foi de 2 horas. para os peptídeos livres, 15 min. para o fago exibindo peptídeo e 3 hrs. para as micelas acopladas ao peptídeo. Setas apontam para o peptídeo FAM-CRGDC ou fago CRGDC ou apenas para fora das paredes do vaso, ilustrando seu homing para a vasculatura do tumor. Campos representantes de várias seções de cada um desses três tumores são mostrados. Barra de escala = 50 μm. c, Quantificação da área de homing de tumor de peptídeos iRGD e CRGDC. Seções de Cryo de tumores ortotópicos 22Rv-1 de camundongos injetados com peptídeo FAM-iRGD ou FAM-CRGDC foram coradas imunohistoquímicamente com um anticorpo anti-FITC. As amostras foram sujeitas à análise de imagens com scanner Scanscope CM-1 para a quantificação das áreas positivas de FAM. Análise estatística foi realizada com Student’s t -test. n = 3; barras de erro, s.e.m.; asterisco triplo, p <0,001.

Figuras 5A e 5B mostram entrada específica de tumor de Evans Blue (albumina) no tecido do tumor extravascular em camundongos injetados de iRGD. iRGD é SEQ ID NO: 3. iRGDD é SEQ ID NO: 4. Camundongos portadores de câncer de mama ou pancreático transplantado ortotopicamente ou xenoenxerto foram injetados com 1 μg de Evans Blue, seguida 5 min depois por 100 μg de peptídeo iRGD em PBS, PBS sozinho ou um peptídeo de controle. Tumores e tecidos foram coletados 30 min. mais tarde e examinados para conteúdo de corante. Figura 5A mostra que os tumores de camundongos injetados de iRGD contém mais cor azul do que os tumores de controle. Figura 5B mostra a quantificação dos resultados a partir dos camundongos com os tumores pancreáticos e tecidos de não tumor dos mesmos camundongos. Cerca de 4 vezes mais tinta acumulada nos tumores tratados com iRGD do que em tumores de controle. Os peptídeos de controle icluiram peptídeos RGD de não CendR.

Figuras 6A e 6B mostram ensaio de penetração de tumor ex vivo. Xenoenxertos subcutâneos de câncer da próstata humano PPC1 foram retirados e mantidos em cultura de curto prazo contendo 1010 de partículas/ml de fago, iRGD na Figura 6A e fago de controle com uma inserção de CG7C na Figura 6B. Após 90 min. a 37°C, os tumores foram lavados, fixados e seccionados. Fago foi detectado com anticorpos contra a proteína do revestimento do fago. Note-se que o fago de iRGD penetrou profundamente no tumor. Barra de escala 200 μM.

Figura 7 é um gráfico do volume tumoral (em mm3) versus tempo (em dias) após a injeção de diferentes composições e mostra efeito anti-tumoral reforçado em camundongos tratados com uma combinação de Herceptina e peptídeo iRGD. Camundongos portadores de xenoenxertos ortotópicos de câncer de mama humano com expressão HER2 elevada (BT474) foram tratados com injeções semanais de Herceptina de 3 mg/kg (primeira injeção no dia 21 após a inoculação das células tumorais = dia 0 no gráfico) ou 1,5 mg/kg (injeções posteriores) em combinação com injeções diárias de 4 mg/kg de iRGD ou PBS, conforme indicado na figura.

Figura 8 mostra um diagrama de aumento de CendR de alvejamento, internalização e penetração de tecidos de co-composições não acopladas. Três exemplos de peptídeos de homing estão listados, mas elementos de CendR podem ser usados sem alvejamento ou homing e podem ser usados com qualquer outro alvejamento ou moléculas de homing, agentes, peptídeos ou sequências.

Figuras 9A-9E mostram uma entrada específica de tumor de Evans Blue em um tecido de tumor extravascular nos camundongos injetados de iRGD. iRGD é SEQ ID NO: 3. iRGDD é SEQ ID NO: 4. Camundongos portadores de xenoenxertos de carcinoma pancreático humano de MIA Paca-2 ortotópico foram injetados por via intravenosa com 1 μg de corante Evans Blue de ligação à albumina, seguido 5 min mais tarde por 100 nmol de peptídeo iRGD ou peptídeos de controle em PBS ou PBS sozinho. Tecidos foram coletados 30 min mais tarde. (A) Acúmulo de Evans Blue em tecidos de camundongos injetados com iRGD (painel principal) e no tumor de um camundongo de controle injetado de PBS (inseto). Note-se que a cor azul escuro no tumor primário e um tumor que invadiu o rim esquerdo (setas) do camundongo injetado de iRGD. T, tumor; P pâncreas; S, baço. (B a D) Quantificação de Evans Blue nos tumores de pancreáticos e tecidos. Em (B), diferentes quantidades de iRGD foram injetadas. Em (C), o efeito da iRGD foi comparado com aquele de peptídeos RGD que falta da sequência RXXK/R CendR (SEQ ID NO: 6). Em (D), 50 μg de um anticorpo de bloqueio antineuropilin-1 ou um IgG de controle foi injetado antes de iRGD. Análises estatísticas foram feitas com ANOVA em (B) e (D), e Student’s t-test em (C). n = 3; barras de erro, s.e.m.; asterisco duplo, p <0,01; asterisco triplo, p <0,001.

Figuras 10A-10C mostra a entrada específica de tumor de Evans Blue no tecido de tumor extravascular em vários modelos de tumores. As sequências são SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 e SEQ ID NO: 40. Camundongos com tumor foram injetados com 1 μg de corante Evans Blue de ligação de albumina, seguido 5 min mais tarde por 100 nmol de peptídeo iRGD ou peptídeos de controle em PBS ou PBS sozinho. Tecidos foram coletados 30 min mais tarde. (A) Aparência macroscópica dos tecidos e os tumores seguintes são mostrados; xenoenxertos ortotópicos de cancêr de mama humano BT474 e de próstata humano 22RvI e adenocarcinoma ductal pancreático do camundongo geneticamente modificados de novo (PDAC). (B) Aparência macroscópica dos tumores disseminados GFP- PC-3 gerados por injeção intracardíaca das células tumorais e tecidos normais são mostrados. Note-se que a cor azul nos tumores dos camundongos que receberam tanto corante quanto iRGD, incluindo muitos dos pequenos nódulos no modelo de tumor disseminado GFP PC-3 (painel superior esquerdo, setas). Os sinais fluorescentes verdes (coloração branca) nos painéis direitos dos tumores disseminados de GFP-PC-3 mostram a localização dos nódulos tumorais. (C) Quantificação de Evans Blue em tumores do maxilar do modelo de tumor disseminado GFP PC-3. Note-se o acúmulo específico de tumor do corante quando iRGD foi co-injetado com o corante, mas não quando a co-injeção foi com peptídeos RGD de controle que falta o RXXK/R CendR motif (SEQ ID NO: 6) ou apenas PBS. Análise estatística foi realizada com Student’s t-test; barras de erro, s.e.m.; asterisco duplo, p<0,01, n = 3.

Figura 11 mostra o elemento CendR de iRGD (CRGDK; SEQ ID NO: 34) induz a permeabilização vascular local na pele. Ensaio de Miles modificado foi realizado (Miles e Miles, 1952, Murohara et al. 1998, Teesalu et al., 2009). Camundongos foram injetados por via intravenosa, com 150 μL de PBS contendo uma mistura de 0,5% de Evans Blue, 13 μg de luciferase recombinante

Quantilum, e 109 de pfu de partículas de fago não alvejadas. Dez minutos depois, os camundongos receberam injeções intradérmicas de 30 μL de PBS contendo VEGF-165, peptídeo RPARPAR (SEQ ID NO: 2), peptídeo RPAR, peptídeo CRGDK (SEQ ID NO: 34) ou apenas PBS nas concentrações indicadas. Após 30 min, as amostras de pele foram coletadas com um perfurador de 4 mm. Atividade de luciferase e título do fago foram medidos para quantificar a retenção dos agentes no tecido extravascular da pele. Os valores foram normalizados para as amostras de pele injetadas com PBS. As análises estatísticas foram feitas com ANOVA, n = 3; barras de erro, s.e.m.; único asterisco, p<0,05; asterisco duplo, p <0,01; asterisco triplo, p <0,001. RPAR é SEQ ID NO: 5.

Figura 12 mostra o sistema de entrega de combo de iRGD. As sequências são SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 37. O peptídeo iRGD injetado por via intravenosa penetra no tecido tumoral em um processo de 3 etapas (painel da direita, ver Sugahara et al, 2009 para mais detalhes.); (1) iRGD reconhece as integrinas αv nas células endoteliais dos vasos sanguíneos do tumor com o RGD motif., (2) é então proteolizado para expor o elemento CendR críptico, RGDK/R (SEQ ID NO: 31), na terminação C (seta pequena, magra no painel da direita), e as quebras de ligação de dissulfeto (linha estreita no painel à direita), (3) o elemento CendR media a ligação à neuropilin-1, para induzir o efeito de transendotélio e tecido induzido por CendR (CendR-Induced Transendothelium & tissue effect) (CendIT) com penetração resultante de células e tecidos. Em métodos de entrega conjugados convencionais, cargas (por exemplo, medicamentos, diagnósticos) são quimicamente anexadas à cisteína de terminação N ("C" abaixo da linha estreita que representa a quebra de dissulfeto, painel direito). Com o método de entrega de combinação, as cargas são co- administradas com o peptídeo separadamente. O efeito CendIT que iRGD induz permite a penetração das cargas co-administradas no tecido tumoral extravascular.

Figuras 13A-13C mostram o acúmulo de moléculas e nanopartículas dentro do tecido de tumor extravascular nos camundongos injetados de iRGD. Camundongos portadores de tumores de próstata humano 22RvI ortotópico foram injetados com 200 nmol de peptídeo CRGDC rotulado por fluoresceína (FAM- CRGDC, SEQ ID NO: 36), 0,2 mg de 3-kDa rotulado vermelho Texas ou 10 kDa- dextran, 5 mg de ferro/kg de nanoworms (nano-verme) de óxido de ferro rotulado fluoresceína, ou 109 de unidades formadoras de placas (pfu) do fago não alvejado, seguidos 5 min mais tarde por 100 nmol de peptídeo iRGD em PBS ou PBS sozinho. Tecidos foram coletados 30 min mais tarde para o dextranos e fago, e 2 horas mais tarde para o FAM-CRGDC e nanoworms. (A) Imunofluorescência dos tumores. Para FAM-CRGDC, as imagens tiradas sob luz UV também são mostradas (painéis mais à esquerda). As linhas pontilhadas mostram onde os tecidos foram colocados. Fagos foram detectados com um anticorpo de fago T7. As cores são descritas nos painéis. As especificações de cor clara representam coloração positiva de FAM-CRGDC; as áreas cinza claro representam coloração positiva de Dextran, as especificações de cor clara representam nanoworms de óxido de ferro ou coloração de fago. Barras de escala = 100 μm. (B) Quantificação das áreas positivas para o FAM-CRGDC e dextranos nas seções de tumor. Crioseções foram coradas imunohistoquímicamente com um anticorpo anti-FITC (FAM-CRGDC) ou um anticorpo anti-dextran (dextranos), e escaneado com Scanscope para análise. (C) Quantificação de fago acumulado nos tecidos com base em titulação de fago.

Figuras 14A-14D mostram efeito anti-tumoral reforçado de doxorrubicina (DOX) lipossomas co-injetados com iRGD. (A e B) Camundongos Nude portando tumores de próstata humanos 22RvI ortotópico foram injetados por via intravenosa com DOX-lipossomas (3 mg DOX/kg), seguido 5 min mais tarde por 100 nmol de iRGD ou PBS. Tumores e tecidos foram coletados 3 horas mais tarde. Em (A), os tumores foram seccionados e corados com um anticorpo anti- CD31. A doxorrubicina é representada pelo aspecto de luz que se parecem com quatro halos no painel esquerdo. Barras de escala = 200 μm, n = 3. Em (B), DOX nos tecidos foi quantificado. (C) Camundongos Nude portando tumores 22RvI ortotópicos de 2 semanas de idade receberam diariamente injeções intravenosas de DOX-lipossomas (1 ou 3 mg DOX/kg) ou PBS, combinado com 2 μmol/kg de iRGD, ciclo(-RGDfK) (SEQ ID NO: 40) ou PBS. Os tumores foram colhidos e pesados depois de 17 dias de tratamento. O número de camundongos em cada grupo foi de 5. Um dos três experimentos que deu resultado semelhante é apresentado. (D) coloração de TUNEL foi realizada imuno-histoquímicamente em seções de tecido do tumor e amostras de coração a partir do estudo de tratamento e quantificada para positividade. Análises estatísticas foram realizadas com o Student’s t-test em (B), e ANOVA em (C) e (D); barras de erro, s.e.m.; ns, não significativo; único asterisco, p <0,05; asterisco duplo, p <0,01; asterisco triplo, p <0,001.

Figura 15 mostra o efeito anti-tumor reforçado de uma combinação de iRGD e DOX-lipossomas de 3 mg de DOX/kg. Camundongos nude portando tumores 22RvI ortotópicos de 2 semanas de idade receberam diariamente injeções intravenosas de DOX-lipossomas (3 mg DOX/kg) ou PBS, combinado com 2 μmol/kg de iRGD ou PBS. Os tumores foram colhidos e pesados depois de 17 dias de tratamento. O número de animais em cada grupo foi 13. Análise estatística foi realizada com o Student’s t-test; barras de erro, s.e.m.; único asterisco, p<0,05; asterisco duplo, p<0,01.

Figura 16 mostra a coloração TUNEL realizada em seções de tecido do coração após o tratamento com a combinação de iRGD e DOX-lipossomas. As amostras coletadas do coração após o estudo do tratamento mostrado na fig. 14C foram seccionadas, coloridas de modo imunofluorescente com um kit de ensaio de TUNEL e DAPI (azul), e vistas com um microscópio confocal. Os pontos vermelhos que aparecem difusos (setas apontam para exemplos) representam os sinais de TUNEL. Barras de escala = 200 μm.

Figura 17 mostra a mudança de peso corporal dos camundongos com tumor tratados com a combinação de iRGD e DOX-lipossomas. Os camundongos no estudo de tratamento mostrado na fig. 14C foram pesados a cada 4 dias durante o estudo do tratamento. O percentual de mudança de peso corporal é mostrado. Análise estatística foi realizada com ANOVA; barras de erro, s.e.m.; ns, não significativo; asterisco triplo, p <0,001.

Figuras 18A-18C mostram os efeitos anti-tumor reforçados de Herceptina co-injetada com iRGD. (A e B) Camundongos portadores de tumores de mama humanos BT474 ortotópico foram injetados por via intravenosa com Herceptina (3 mg/kg), seguido 5 min mais tarde por 100 nmol de iRGD ou PBS. Tecidos foram coletados 3 horas mais tarde. Em (A), seções de tumor foram coloridas de modo imunohistoquímico para Herceptina com um anticorpo IgG anti-humano, e as áreas positivas (sombras mais escuras) foram quantificadas, n = 3. Em (B),

Herceptina nos tecidos foi quantificada com um ELISA competitivo. n = 3. (C) Estudo do tratamento do tumor com a co-administração de Herceptina e iRGD. Camundongos de tumor BT474 foram injetados por via intravenosa a cada 4 dias por 24 dias com Herceptina em 3 ou 9 mg/kg no primeiro dia de tratamento (dia 0 no gráfico) e 1,5 ou 4,5 mg/kg nas injeções subsequentes, ou PBS. O tratamento foi combinado com injeções diárias de 4 μmol/kg de iRGD ou PBS nos dias de injeção de Herceptina, e 2 μmol/kg de iRGD ou PBS nos outros dias. O número de camundongos em cada grupo foi 10. Um dos 4 experimentos que deram resultados similares é apresentado. Análises estatísticas foram realizadas com o Student’s t-test no (A) e (B), e ANOVA no (C); barras de erro, s.e.m; ns, não significativo; único asterisco, p <0,05; asterisco duplo, p <0,01 ; asterisco triplo, p <0,001.

Figura 19 mostra a penetração do tumor ex vivo do fago T7 expressando iRGD. Tumores subcutâneos de câncer de próstata humanos PPC1 foram excisados e mantidos em cultura de curto prazo contendo as seguintes combinações de 109 pfu/ml de fago e inibidores; (esquerda superior), fago expressando peptídeos iRGD (fago de iRGD) sem inibidores; (direita superior), fago não alvejado expressando peptídeos G7 de controle (fago de CG7C) sem inibidores; (esquerda do meio), fago iRGD com 10 mM de azida de sódio; (direita do meio), fago iRGD sem inibidores, mas incubado a 4°C; (esquerda inferior), fago iRGD com uma função de bloqueio de anticorpo anti-neuropilin-1; (direita inferior), fago iRGD com um IgG de cabra de controle. Os tumores foram primeiro incubados com os inibidores por 20 min a 4°C. Os fagos indicados foram, então, adicionados à solução e os tumores foram adicionalmente incubados por 90 min a 37°C (4°C no painel D). Após a incubação, os tumores foram lavados, fixados e seccionados. As seções foram coradas com um anticorpo anti-fago T7 (coloração de cor clara), um anticorpo anti-CD31 (coloração de sombra média não-visível no A, muito pouco presente em B) e DAPI (coloração cinza), e visto com um microscópio confocal. Note-se que o fago iRGD penetrou profundamente no tumor, e que o processo foi inibido pela azida de sódio, baixa temperatura ou um anticorpo anti-neuropilin-1. Barra de escala = 200 μm.

Figura 20 mostra a propagação de DOX-lipossomas dentro do tecido do tumor após o tratamento com o esquema iRGD-combo. Tumores coletados após os estudos de tratamento na fig. 14C foram fixados e seccionados. (A) As seções dos tumores da fig. 14C foram coradas de modo imunofluorescente com um anticorpo anti-CD31. As especificações cinza vistas em todo no painel da esquerda representam coloração Dox. Nota-se a propagação ampla de DOX após 2-3 semanas de tratamento com o esquema iRGD-combo. Imagens representativas de cada um dos 5 tumores são mostradas. Barras de escala = 200 μm.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

O método revelado e composições podem ser mais facilmente entendidas por referência à seguinte descrição detalhada das modalidades particulares e dos Exemplos incluídos nelas e às Figuras e sua descrição anterior e seguinte.

Antes dos compostos presentes, composições, artigos, dispositivos e/ou métodos serem revelados e descritos, é preciso entender que eles não estão limitados aos métodos sintéticos específicos ou métodos específicos de biotecnologia recombinante salvo indicação em contrário, ou aos reagentes específicos salvo indicação em contrário, como tal, pode, é claro, variar. Também é preciso entender que a terminologia utilizada aqui é com o propósito de descrever modalidades particulares apenas e não se destina a ser um fator limitante.

A. Definições

Conforme utilizado na especificação e nas reivindicações anexadas, as formas singulares”uma", “um" e”a" incluem referentes plurais, a menos que o contexto dite claramente de outra maneira. Assim, por exemplo, a referência a”um transportador farmacêutico" inclui as misturas de dois ou mais desses transportadores, e assim por diante.

Intervalos podem ser expressos aqui de”cerca de" um valor particular e/ou para”cerca de" um outro valor particular. Quando tal intervalo é expresso, outra modalidade inclui desde a um valor particular e/ou até outro valor particular. Da mesma forma, quando os valores são expressos como aproximações, pelo uso do antecedente ”cerca de", será entendido que o valor particular forma uma outra modalidade. Será adicionalmente entendido que os pontos finais de cada um dos intervalos são significativos tanto em relação ao outro ponto final, quanto independentemente do outro ponto final. Também é entendido que há um número de valores revelados aqui, e que cada valor também é revelado aqui como”cerca de" aquele valor particular, além do próprio valor. Por exemplo, se o valor”10" é revelado, então, “cerca de 10" também é revelado. Também é entendido que quando um valor é revelado”menor ou igual a" o valor, “maior ou igual ao valor" e intervalos possíveis entre os valores são também revelados, como adequadamente entendido pelo versado na técnica. Por exemplo, se o valor”10" é revelado o”menor ou igual a 10", bem como”maior ou igual a 10" também é revelado. Também é entendido que a todo o pedido, são providos dados em vários formatos diferentes, e que esses dados, representam pontos finais e pontos de partida, e varia para qualquer combinação de pontos de dados. Por exemplo, se um ponto de dado particular ”10" e um ponto de dado 15 são revelados, entende-se que maior que, maior ou igual a, menor que, menor ou igual a, e igual a 10 e 15 são considerados revelados, bem como entre 10 e 15. Também é entendido que cada unidade entre duas unidades particulares também são reveladas. Por exemplo, se 10 e 15 são revelados, então 11, 12, 13 e 14 também são revelados.

Nesta especificação e nas reivindicações que se seguem, será feita referência a uma série de termos que serão definidos para ter os seguintes significados:

"Opcional" ou”opcionalmente" significa que o evento ou circunstância descrito posteriormente pode ou não ocorrer, e que a descrição inclui casos em que tal evento ou circunstância ocorre e casos em que isso não acontece.

Ao longo deste pedido, várias publicações são referenciadas. As revelações destas publicações em suas totalidades são incorporadas por referência a este pedido, a fim de mais plenamente descrever o estado da técnica a que este pertence. As referências também são reveladas individualmente e especificamente incorporadas por referência neste documento para o material contido nelas, que é discutida na sentença em que a referência é invocada.

É preciso entender que o método revelado e as composições não são limitados aos métodos sintéticos específicos, técnicas analíticas específicas, ou aos reagentes particulares salvo indicação em contrário, e, como tal, podem variar. Também é preciso entender que a terminologia utilizada aqui é com o propósito de descrever modalidades particulares apenas e não se destina a ser um fator limitante.

B. Geral

Aqui é revelada uma nova plataforma tecnológica que permite a entrega intracelular, saída e penetração nos tecidos das composições. A entrega pode ser geral e podem ser alvejada para células ou tecidos de interesse, tais como tumores. Internalização das composições (incluindo nanopartículas, drogas, marcadores detectáveis e outros compostos) e sua carga em células-alvo e penetração no tecido alvo pode aumentar a eficiência do alvejamento. Internalização específica do tipo de célula e penetração específica do tipo de tecido de cargas sem acoplamento covalente ou associação não covalente da carga com célula ou peptídeos de prenetração específica de tecido não tem sido possível antecipadamente.

Veículos de entrega de penetração de células são importantes em uma série de maneiras. Em primeiro lugar, elementos de alvejamento que penetram célula podem levar cargas para o citoplasma, que é crítico, por exemplo, na entrega de terapêuticos baseados em ácido nucléico. Em segundo lugar, a internalização pode melhorar o alvejamento porque a internalização do peptídeo e sua carga dentro das células faz o homing mais eficaz (Christian et al, 2003;. Jiang et al, 2004;. Laakkonen et al, 2004; Weissleder at al, 2005). Em terceiro lugar, como descrito aqui, propriedades que penetram células, combinadas com propriedades de penetração de tecido reforçam o extravasamento e espalhamento do tecido. Tat, penetratina e outros peptídeos de penetração de célula protótipa não foram propriedades de penetração de tecido atribuídas.

Os peptídeos CendR revelados são diferentes dos peptídeos de penetração em célula protótipa (CPPs), em que as propriedades de penetração na célula dos peptídeos CendR dependem da ligação específica estéreo a um receptor de superfície celular específico, enquanto os dois CPPs de L-aminoácido e D-aminoácido são ativos (Langel, 2007; Meade e Dowdy, 2007). Além disso, os peptídeos CendR podem ser específicos para uma lesão patológica particular (tais como tumores) ou um tecido individual.

A habilidade de composições em penetrar no espaço extravascular é um fator importante que limita a eficácia do alvejamento das composições in vivo. Um motif. de peptídeo simples, com um elemento de terminação C como uma característica definidora, tem sido identificado que sinaliza internalização altamente eficiente de fagos e peptídeos livres nas células. Este fenômeno de internalização foi nomeado a”regra da extremidade C" ou”CendR". Proteólise que revela um elemento de terminação C pode servir como um comutador que aciona o sinal de internalização. Várias composições podem ser internalizadas através deste mecanismo. Por exemplo, acúmulo mediado por peptídeo de homing pode ocorrer em um local-alvo com proteólise específica de tipo de célula ou geral que expõe um elemento de terminação C que permite sistemas de homing altamente específicos com internalização acionada por alvo. A via CendR também pode ser usada para saída de composições de interesse da vasculatura e sua propagação no tecido. O elemento de terminação C pode causar propagação de composições a partir da vasculatura (e, portanto, pode ser espalhada no tecido tumoral a partir de uma injecção intravenosa, por exemplo). Elementos CendR também podem ser usados para mediar a passagem de composições de interesse através de outras membranas capazes de CendR, tal como as membranas de mucosas e a barreira hematoencefálica. Como usado aqui, “penetração no tecido" e”penetração do tecido" referem-se à passagem para dentro ou através de um tecido para além ou através do exterior ou uma primeira camada de células ou através de uma membrana de tecido. Tal passagem ou penetração através do tecido (que também pode ser referida como extravasamento e penetração nos tecidos) pode ser uma função da, por exemplo, internalização celular e passagem entre as células no tecido. Ao longo deste pedido, quando o termo”penetração no tecido" é usado, entende-se que essa penetração também pode se estender para outras barreiras e membranas capazes de CendR encontradas em todo o corpo, como a barreira hematoencefálica.

Ao contrário dos peptídeos ode penetração de célula conhecidos, o elemento de internalização revelado é dependente da posição - ele é inativo quando presente em outras posições que não a terminação C do peptídeo. Outra característica diferencial é que o elemento CendR é estéreo-específico; isto é, elementos CendR compostos inteiramente de D-aminoácidos são inativos. Um peptídeo CendR latente pode ser ativado por clivagem, por exemplo, pela enzima proteolítica adequada para expor, por exemplo, a arginina de terminação C, lisina, ou lisina-glicina. Ao longo do pedido, quando o termo ”elemento CendR" ou”elemento de terminação C" é usado, ele é usado para descrever uma arginina de terminação C, uma lisina de terminação C, ou um par de lisina-glicina de terminação C, em que glicina está na posição de teminação C mais distante. Em outras palavras, no caso em que uma lisina está na extremidade de terminação C, o elemento CendR pode permanecer funcional, com uma glicina no lado da terminação C da lisina. No entanto, não é necessário ter glicina na extremidade para que o resíduo de lisina seja funcional como um elemento de terminação C, de modo que a lisina pode estar presente sem glicina e ainda ser funcional. O inverso não é verdadeiro, porém, em que a glicina não pode funcionar como um elemento de terminação C, sem a presença de lisina adjacente a ele. Arginina não necessita de nenhum lisina ou glicina para funcionar como um elemento de terminação C, desde que ela permaneça na posição de terminação C mais distante. Tais elementos CendR podem ser referidos como elementos CendR tipo 1.

O termo ”elemento CendR" ou”elemento de terminação C" também pode ser usado para descrever uma histidina de terminação C e sequências de aminoácidos tendo a sequência X1X2X3X4, onde Xi pode ser R, K ou H, onde X4 pode ser R, K, H, ou KG, e em que X2 e X3 podem, cada um, ser, independentemente, qualquer aminoácido. Tais elementos CendR podem ser referidos como sendo elementos CendR do tipo 2. Os aminoácidos X2 e X3 podem ser selecionados para fins específicos. Por exemplo, X2, X3, ou ambos podem ser escolhidos para formar a totalidade ou uma porção de uma sequência de reconhecimento de protease. Isso seria útil, por exemplo, para especificar ou permitir a clivagem de um peptídeo tendo o elemento CendR como um elemento CendR latente ou críptico que é ativado por clivagem após o aminoácido X4. Exemplos de tais escolhas de aminoácidos são mostrados nas Tabelas 1 e 2. Os aminoácidos X1, X2 e X3 também podem ser selecionados, por exemplo, para recrutar proteínas adicionais para moléculas NRP-1 na superfície da célula. Isto pode ser aplicado, por exemplo, para modular a seletividade e a internalização e/ou potência de penetração de tecido de elementos CendR (e as composições, conjugados, proteínas e peptídeos contendo elementos CendR). Os aminoácidos X2 e X3 também podem ser selecionados para evitar a clivagem de protease dentro do motif. X1-X4. Por exemplo, X2 e/ou X3 pode ser prolina, o que reduz ou elimina a clivagem de protease, tal como por carboxipeptidase, entre a prolina e o próximo aminoácido a jusante. Como outro exemplo, uma ou mais das ligações entre X1, X2, X3 e/ou X4 podem ser modificadas para reduzir ou eliminar a clivagem de protease nessas ligações. Opcionalmente, certos aminoácidos também podem ser excluídos do uso para X2, X3, ou ambos. Por exemplo, se desejado, G e D podem ser excluídos do uso simultâneo como X2 e X3, respectivamente. Alguns elementos CendR tipo 2 também podem ser descritos como R/K/HXXR/K/H (SEQ ID NO: 20), R/KXXR/K (SEQ ID NO: 23), e R/K/HXXKG (SEQ ID NO : 21).

Exemplos de elementos CendR incluem XXR/K/H, XXR/K, XXR/H, XXK/H, XXR, XXK, XXH, XXKG, RXXR/K/H, RXXR/K, RXXR/H, RXXK/H (SEQ ID NO:243), RXXR , RXXK, RXXH, RXXKG, KXXR/K/H, KXXR/K, KXXR/H (SEQ ID NO:244), KXXK/H, KXXR, KXXK, KXXH, KXXKG, HXXR/K/H (SEQ ID NO:245), HXXR/K, HXXR/H, HXXK/H , HXXR, HXXK, HXXH, HXXKG, R/K/HXXR, R/KXXR, R/HXXR, K/HXXR (SEQ ID NO:246), RXXR, KXXR, HXXR, R/K/HXXK, R/KXXK, R/HXXK (SEQ ID NO:247), K/HXXK, RXXK, KXXK, HXXK, R/K/HXXH (SEQ ID NO:248), R/KXXH, R/HXXH, K/HXXH, RXXH, KXXH, HXXH, R/K/HXXKG, R/KXXKG, R/HXXKG, K/HXXKG, RXXKG, KXXKG e HXXKG.

Por uma questão de conveniência, motifs. de aminoácidos que constituiriam um elemento CendR se uma arginina, lisina, par de lisina-glicina ou histidina estavam na terminação C e onde a exposição no futuro da arginina, lisina, par de lisina-glicina ou histidina na terminação C é planejada ou pretendida, podem ser referidos como elementos CendR ou elementos CendR latente.

Este sistema de internalização controlável por protease pode ser útil em composições de engenharia com funções tais como a de carga específica de tipo de célula e/ou específica do tipo tecido e a capacidade de espalhar as composições nos tecidos. Além disso, esta regra pode ser relevante para uma infinidade de processos biológicos, incluindo infecção viral e fagocitose. Como os vírus podem, naturalmente, usar a via de CendR para infectar as células, as composições CendR, conjugados, moléculas, proteínas e/ou elementos podem ser úteis para interferir com o processo de infecção viral.

O sistema de penetração de tecido/célula revelado torna possível derivar peptídeos que não só endereçam a um tecido-alvo específico, mas também penetram nesse tecido. Esses peptídeos contém dois motifs. de sequência ativa, um local de ligação para um receptor específico, assim como um motif. de sequência que se liga a um receptor de penetração de tecido. Os dois motifs. de sequência podem sobrepor-se um ao outro. Peptídeos CendR ativam um sistema de transporte que leva consigo materiais apresentados com um peptídeo CendR. Uma variedade de peptídeos CendR de homing pode ser usada para alvejar drogas e outros compostos e composições para diferentes células e tecidos alvos. Por exemplo, o receptor para um tipo de peptídeo CendR é preferencialmente expresso em áreas hipóxicas de tumores, assim tendo um painel desses peptídeos pode-se permitir uma cobertura mais completa do tecido tumoral do que pode ser realizado com um único peptídeo. Co-composições e cargas de vários tamanhos podem ser usados com os peptídeos CendR. Incluindo um peptídeo CendR de penetração de tumor (ou uma combinação dos dois) com uma droga pode resultar em uma concentração maior da droga no tumor sem afetar sua concentração em tecidos não-tumorais. Os métodos revelados e composições também podem resultar em uma distribuição mais ampla da droga dentro do tumor. Como resultado, a atividade anti-tumoral pode ser reforçada. Elementos CendR podem ser combinados com vários outros elementos, tais como moléculas acessórias e motifs. de homing, bem como componentes a serem entregues e internalizados, tais como co-composições e composições de carga.

Penetração em tecido tumoral é um problema com todas as drogas anti- câncer por causa da alta pressão do fluido intra-tumor que força fluido de tecido fluir para fora do tumor, que trabalha contra a difusão da droga no tecido tumoral extravascular (Jain et al. 2007). As razões presumidas são que os vasos sanguíneos tendem a ser furados e os vasos linfáticos são pouco funcionais nos tumores. Se uma droga foi completamente específica de tumor e inócua em tecidos normais (e se os custos não foram um problema), seria possível administrar tanto dessa droga que iria sobrecarregar as barreiras para a entrega de doses suficientes para todas as partes do tumor. Isto obviamente não é o caso de agentes anti-câncer, limites de toxicidade de droga da dosagem, e a penetração do tumor é um grande obstáculo. Os métodos e composições revelados podem ter maior impacto sobre as drogas que, ou têm problemas de penetração, ou que são eficazes, mas altamente tóxicas mesmo em doses terapêuticas padrão. Essencialmente, todas as drogas anti-câncer têm um ou ambos os problemas.

Foi descoberto que certos motifs. de peptídeo especificamente aumentam a penetração de drogas em tumores e em outras células e tecidos. São revelados peptídeos de homing de tumor que especificamente aumentam a penetração das drogas nos tumores. Esses peptídeos contêm tanto uma sequência de homing específico de tumor, como um motif. de penetração e internalização de tecido chamado CendR. O elemento CendR é críptico nestes peptídeos e é ativado por uma clivagem proteolítica no tumor alvo. Droga, fluoróforo e cargas de nanopartículas anexadas a esses peptídeos acumulam em tumores e penetram profundamente no tecido tumoral extravascular. No entanto, também foi descoberto que a carga não precisa ser ou acoplada ou associada com o peptídeo CendR. O peptídeo CendR livre induz especificamente a permeabilidade dos tecidos (denominado efeito CendIT - efeito de Transendotélio & tecido induzido por CendR) no tumor, permitindo uma droga co-injetada ou nanopartículas para extravasar e penetrar no tecido tumoral. Este mesmo efeito pode ser alcançado com quaisquer células e tecidos com receptores CendR. O aumento na concentração de tumor de um composto co-injetado demonstrado é de cerca de 4 vezes.

Peptídeos CendR de penetração do tumor podem ser usados, por exemplo, para aumentar a imagem do tumor e tratamento do tumor com drogas anti-câncer.

Agentes de imagem aprovados por FDA, tais como agente de contraste MRI de nanopartículas de óxido de ferro, podem ser injetados em camundongos portadores de tumor com um peptídeo CendR de homing de tumor, ou com uma combinação de peptídeos, seguida por imagem. Qualquer droga conhecida ou futura pode ser usada com peptídeos CendR para afetar e inibir o crescimento tumoral. Por exemplo, a co-composição pode ser quaisquer drogas anti-câncer clinicamente utilizadas. Acúmulo e distribuição de drogas no tecido tumoral, bem como eficácia anti-tumor pode ser determinado usando técnicas conhecidas (exemplos de tais são descritos a seguir).

O reforço revelado de internalização e penetração nos tecidos tem ampla aplicação. Usando os elementos CendR revelados e peptídeos, o alvejamento eficaz, entrega e penetração de qualquer droga, composto ou composição pode ser aumentado e reforçado. O efeito de peptídeos CendR alvejados e de homing tem várias implicações importantes. Primeiro, drogas e outros compostos e composições podem ser entregues para as células e tecidos de interesse em concentrações mais elevadas do que é possível na terapia padrão. Este é um resultado da internalização maior e penetração nos tecidos mediada pelo peptídeo CendR. Isto é particularmente significativo porque a quantidade de droga que pode ser administrada é geralmente limitada por efeitos colaterais. O aumento da concentração da droga no alvo, sem aumentar a quantidade de droga administrada pode, assim, prolongar e reforçar a eficácia de qualquer droga conhecida ou futura e terapêutica. Ao usar os peptídeos CendR de alvejamento ou de homing, o aumento da concentração da droga só ocorre em células- alvejadas e tecidos e não em tecidos não-alvejados. Nesses casos, a eficácia do tratamento é maior, enquanto os efeitos colaterais permanecem os mesmos. Segundo, a dose ou quantidade de droga ou outros compostos ou composição pode ser reduzida sem comprometer a eficácia do tratamento. O peptídeo CendR resultaria na mesma concentração da droga na célula-alvo ou tecido, embora a quantidade de droga administrada seja menos. Terceiro, porque o peptídeo CendR adjuvante e a droga, agente de imagem, ou outros compostos ou composição não precisa ser acoplado um aos outro, um peptídeo CendR validado e aprovado pode ser usado para aumentar qualquer droga, agente da imagem, ou outro composto ou composição.

Os métodos revelados e composições endereçam um problema importante na terapia e diagnóstico in vivo em geral, e na terapia de câncer e diagnóstico in vivo, em particular: a pouca penetração de drogas e outros compostos e composições no tecido. Peptídeos de homing de tumor que penetram efetivamente e especificamente no tecido do tumor foi descoberto que pode transportar uma carga anexada, tal como um fluoróforo, droga ou agente de contraste de nanopartículas fundo em tecido tumoral extravascular. Foi agora descoberto que não é necessário para a carga ser acoplada ou ligada ao peptídeo de penetração de tumor, o peptídeo induz especificamente a permeabilidade do tecido no tumor, permitindo que um composto co-injetado extravase e penetre no tecido tumoral.

O conceito de peptídeo de penetração de tumor tem tremenda utilidade: (1) Ele oferece mais drogas (ou sonda de diagnóstico ou de outro composto ou composição) no tumor do que alcançaria o tumor de um regime padrão. Isso significa uma melhor eficácia e efeitos colaterais reduzidos. (2) O procedimento pode ajudar a resolver o problema de penetração do tumor. Drogas geralmente não penetram mais longe do que 3-5 diâmetros de células a partir dos vasos sanguíneos, o que deixa localizado de modo mais distante células tumorais sem qualquer droga, ou as expõe às concentrações de drogas baixas que são susceptíveis de facilitar o desenvolvimento de resistência (Hambley e Hait, 2009). Os métodos revelados e composições tornam possível obter uma distribuição mais uniforme de droga dentro de tumores. (3) O fato de que a droga não tem que ser acoplada ao peptídeo significa que uma vez que um peptídeo de penetração de tumor foi clinicamente validado, ele pode ser usado para aumentar a eficácia de qualquer agente de imagem ou de drogas anti-câncer.

Em outro exemplo, os peptídeos CendR podem ser usados em nanomedicina. Um dos principais objetivos da nanomedicina é projetar dispositivos que superam drogas simples através da realização de múltiplas funções no diagnóstico, acompanhamento e tratamento da doença. Novas tecnologias podem ser aplicadas para resolver alguns dos principais problemas no uso médico de nanopartículas multifuncionais, tais como a pouca penetração no tecido extravascular.

São reveladas composições CendR, conjugados CendR, moléculas CendR, compostos CendR, proteínas CendR, peptídeos CendR e elementos CendR. Elementos CendR e compostos CendR são a característica básica de composições CendR, conjugados CendR, moléculas CendR, proteínas CendR, peptídeos CendR, e assim por diante. Composições CendR são quaisquer composição, conglomeração, conjugado, molécula, proteína, peptídeo, etc, que compreende um elemento CendR ou um composto CendR. Conjugados CendR são associações, sejam covalentes ou não covalentes, de um elemento CendR ou composto CendR e um ou mais elementos, peptídeos, proteínas, compostos, moléculas, agentes, compostos, etc. Por exemplo, um conjugado CendR pode compreender um peptídeo CendR, proteína CendR, composto CendR, molécula CendR, etc. Moléculas CendR são moléculas que compreendem um elemento CendR ou um composto CendR. Por exemplo, uma molécula CendR pode compreender um composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR, etc. Em geral, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, moléculas CendR, e conjugados CendR são todas as formas de composições CendR. Compostos CendR, peptídeos CendR e proteínas CendR podem ser formas de moléculas CendR. A menos que o contexto indique o contrário, a referência a uma composição CendR pretende referir-se às composições CendR, moléculas CendR, compostos CendR, proteínas CendR, peptídeos CendR, elementos CendR, e assim por diante. Um componente CendR é qualquer molécula, peptídeo, proteína, composto, conjugado, composição, etc, que compreende um elemento CendR. Exemplos de componentes CendR incluem, por exemplo, composições CendR, moléculas CendR, compostos CendR, proteínas CendR, peptídeos CendR e elementos CendR. Componentes CendR podem compreender um ou mais elementos CendR. Onde um elemento CendR compreende dois ou mais elementos CendR, é útil para o componente CendR ser projetado para permitir que alguns ou todos os elementos CendR ser exposto ou passível de exposição na terminação C de uma proteína ou peptídeo. Isso pode ser feito de várias maneiras, por exemplo, conjugados e composições. Isso também pode ser realizado em, por exemplo, peptídeos de ramificação e proteínas.

São revelados os métodos de reforço de internalização, penetração, ou ambos de uma co-composição para dentro ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido ou ambos a um elemento CendR e à co-composição, assim, reforçando a internalização, penetração, ou ambos da co-composição para dentro ou através da célula, tecido ou ambos, em que, antes de expor a célula, tecido ou ambos, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados métodos de reforço de internalização de uma co- composição em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a um elemento CendR e à co-composição, reforçando assim a internalização da co- composição para dentro da célula, em que, antes de expor a célula, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de penetração de reforço de uma co-composição para dentro e através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a um elemento CendR e à co-composição, reforçando assim a penetração da co- composição para dentro e através do tecido, em que, antes de expor o tecido, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de internalização, penetração, ou ambos de uma co-composição para dentro ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido, ou ambos em um peptídeo CendR e à co-composição, reforçando assim a internalização, penetração ou ambas da co-composição para dentro ou através da célula, tecido ou ambos, em que, antes de expor a célula, tecido, ou ambos, o elemento CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou não covalentemente associados uns com os outros.

Também são revelados os métodos de reforço de internalização de uma co-composição em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a um peptídeo CendR e à co-composição, reforçando assim a internalização da co- composição para dentro da célula, em que, antes de expor a célula, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. São revelados métodos de reforço de penetração de uma co-composição para dentro ou através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a um peptídeo CendR e à co-composição, reforçando assim a penetração da co-composição para dentro e através do tecido, em que antes de expor o tecido, o elemento CendR e a co-composição não estão covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados os métodos de reforço da internalização, penetração ou ambas de uma composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido ou ambos à uma composição de CendR e à co-composição, reforçando assim a internalização, penetração ou ambas, da co-composição em ou através da célula, tecido ou ambos, em que, antes de expor a célula, tecido ou tanto o elemento CendR quanto a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados métodos de reforço da internalização de uma co- composição em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a uma composição CendR e à co-composição, reforçando assim a internalização da co- composição para dentro da célula, em que, antes de expor a célula, o elemento CendR e a co-composição não são acoplados covalentemente ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de penetração de uma co-composição em um ou através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a uma composição CendR e à co-composição, reforçando assim a penetração da co- composição no ou através do tecido, em que, antes de expor o tecido, o elemento CendR e a co-composição não são acoplados covalentemente ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço da internalização, penetração, ou ambas, de uma co-composição em uma ou através de uma célula, tecido ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido ou ambos a um conjugado CendR e à co-composição, reforçando assim a internalização, penetração ou ambas da co-composição em uma ou através da célula, tecido ou ambos, em que, antes de expor a célula, tecido ou ambos, o elemento CendR e a co-composição não são acoplados covalentemente ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados aqui, métodos de reforço da internalização de uma co-composição em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a um conjugado CendR e à co-composição, reforçando assim a internalização da co- composição em uma célula, em que antes de expor a célula, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de penetração de uma co-composição em um ou através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a um conjugado CendR e à co-composição, reforçando assim a penetração da co- composição em um ou através do tecido, em que, antes de expor o tecido, o elemento CendR e a co-composição não são acoplados covalentemente ou associados de modo não covalente entre si.

Em qualquer um dos métodos revelados, tais como, por exemplo, os métodos revelados utilizando co-composições, o elemento CendR(s) ou outro componente CendR(s) usado no método pode ser um elemento CendR compreendendo uma composição de carga. Similarmente, em qualquer um dos métodos revelados, tais como, por exemplo, os métodos revelados usando composições de carga, uma ou mais composições também podem ser usadas no método, onde o elemento CendR(s) e a co-composição(s) não são acoplados covalentemente ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de internalização, penetração ou ambas, de uma composição de carga em uma ou através de uma célula, tecido ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido ou ambos, a um elemento CendR e a composição de carga, reforçando assim a internalização, penetração ou ambas da composição de carga para dentro ou através da célula, tecido ou ambos, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados métodos de reforço de internalização de uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a um elemento CendR e à composição de carga, reforçando assim a internalização da composição de carga para dentro da célula, em que o elemento CendR e a composição de carga são acoplados covalentemente ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de penetração de uma composição de carga em um ou através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a um elemento CendR e a composição de carga, reforçando assim, a penetração da composição de carga no e através do tecido, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de internalização, penetração ou ambas, de uma composição de carga em uma ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido, ou ambos, a um peptídeo CendR e à composição de carga, reforçando assim a internalização, penetração, ou ambas, da composição de carga na ou através da célula, tecido,, ou ambos, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados métodos de reforço de internalização de uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a um peptídeo CendR e à composição de carga, reforçando assim a internalização da composição de carga na célula, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. São revelados métodos de reforço de penetração de uma composição de carga em um e através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a um peptídeo CendR e à composição de carga, reforçando assim a penetração da composição de carga em um e através de um tecido, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço da internalização, penetração, ou ambas, de uma composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido, ou ambos, a uma composição CendR e a composição de carga, reforçando assim a internalização, penetração, ou ambas, da composição de carga em uma ou através de uma célula, tecido, ou ambos, em que o elemento CendR e a composição de carga são acoplados covalentemente ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados métodos de reforço da internalização de uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a uma composição CendR e à composição de carga, reforçando assim, a internalização da composição de carga para dentro da célula, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de penetração de uma composição de carga em e através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a uma composição CendR e à composição de carga, reforçando assim a penetração da composição de carga em e através do tecido, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço da internalização, penetração, ou ambas, de uma composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo: expor a célula, tecido, ou ambos, a um conjugado CendR e à composição de carga, reforçando assim a internalização,. penetração, ou ambas da composição de carga na ou através da célula, tecido, ou ambos, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados métodos de reforço da internalização de uma composição de carga em uma célula, o método compreendendo: expor a célula a um conjugado CendR e à composição de carga, reforçando assim a internalização da composição de carga na célula, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

São revelados métodos de reforço de penetração de uma composição de carga em e através de um tecido, o método compreendendo: expor o tecido a um conjugado CendR e à composição de carga, reforçando assim a penetração da composição de carga no e através do tecido, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

O elemento CendR pode permeabilizar a célula, tecido, ou ambos. A célula, tecido, ou ambos, podem estar em um sujeito. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos ao elemento CendR e à co-composição por meio da administração do elemento CendR e da co-composição ao sujeito. O elemento CendR e a co- composição podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o elemento CendR e a co-composição. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em momentos diferentes. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito por vias separadas. Em algumas formas, o elemento CendR e a co-composição não estão ligados entre si. A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos ao elemento CendR e à composição de carga por meio da administração do elemento CendR e da composição de carga ao sujeito. O elemento CendR e a composição de carga podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O elemento CendR e a composição de carga podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o elemento CendR e a composição de carga. Tal composição pode ser administrada isoladamente ou em combinação com qualquer outro componente, tal como aqueles revelados aqui. Por exemplo, a composição CendR/de carga pode ser administrada ou utilizada em conjunto com um ou mais de outros componentes CendR, uma ou mais de outras composições de carga, uma ou mais co-composições, ou qualquer combinação destes. O elemento CendR pode estar em uma composição compreendendo o elemento CendR e qualquer outro componente, tal como os revelados aqui. Por exemplo, a composição CendR pode adicionalmente compreender um ou mais de outros componentes CendR, uma ou mais composições de carga, ou qualquer combinação destes.

Múltiplos elementos CendR diferentes, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação podem ser usados juntos. Similarmente, múltiplas co-composições diferentes, múltiplas composições de carga diferentes, ou uma combinação podem ser usados juntos. Onde tais múltiplos elementos CendR diferentes, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação são usados juntos, eles podem ser usados com um único tipo de co-composição, um único tipo de composição de carga, múltiplas co-composições diferentes, múltiplas composições de carga diferentes, ou uma combinação. Similarmente, quando múltiplas co-composições diferentes, múltiplas composições de carga diferentes, ou uma combinação podem ser usadas juntas, elas podem ser usadas com um único tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, composto CendR, conjugado CendR, ou composição CendR, ou com múltiplos elementos CendR diferentes, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação. Por usados juntos entende-se usados juntos na mesma composição, ao mesmo tempo, no mesmo tratamento, no mesmo regime de tratamento, no mesmo curso de tratamento, etc.

Por exemplo, um elemento CendR pode ser usado em conjunto com um ou múltiplos elementos CendR diferentes, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação, uma ou múltiplas co-composições diferentes, múltiplas composições de carga diferentes, ou uma combinação, ou qualquer combinação destas. Em tais combinações, o próprio elemento CendR pode ser combinado no mesmo conjugado ou composição com uma ou mais composições de carga, uma ou mais moléculas acessórias, uma ou mais moléculas de homing, etc.

Como outro exemplo, um iRGD (que combina um elemento CendR e um elemento RGD em um único peptídeo) pode ser usado juntamente com um ou múltiplos elementos CendR diferentes, peptídeos CendR, proteínas CendR, compostos CendR, conjugados CendR, composições CendR, ou uma combinação, uma ou múltiplas co-composições diferentes, múltiplas composições de carga diferentes, ou uma combinação, ou qualquer combinação destas. Em tais combinações, o próprio iRGD pode ser combinado no mesmo conjugado ou

composição com uma ou mais composições de carga, uma ou mais moléculas acessórias, uma ou mais moléculas de homing, etc.

A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos às combinações de componentes CendR diferentes e combinações de co-composições diferentes por meio da administração dos componentes CendR e das co-composições ao sujeito. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais dos co-composições podem ser administradas ao sujeito simultaneamente. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais dos co-composições podem ser administradas ao sujeito em uma ou mais composições únicas compreendendo o componente CendR(s) e a co-composição(s). Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das co-composições podem ser administradas ao sujeito em uma ou mais composições separadas. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das co-composições podem ser administrados ao sujeito em momentos diferentes. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma ou mais composições separadas. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das co-composições podem ser administrados ao sujeito por uma ou mais vias distintas. Em algumas formas, o elemento CendR e a co-composição não estão ligados entre si.

A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos às combinações de componentes CendR diferentes e combinações de composições de carga diferentes por meio da administração dos componentes CendR e das composições de carga ao sujeito. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administradas simultaneamente ao sujeito. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados ao sujeito em uma ou mais composições únicas, compreendendo um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados ao sujeito em uma ou mais composições separadas. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados ao sujeito em momentos diferentes. O elemento CendR e a composição de carga podem ser administrados ao sujeito em uma ou mais composições separadas. Um ou mais dos componentes CendR e uma ou mais das composições de carga podem ser administrados ao sujeito por uma ou mais vias distintas. Vários componentes CendR em qualquer uma das várias formas reveladas neste documento e, opcionalmente, qualquer uma das várias co-composições, podem ser administrados em conjunto ou separadamente em vários momentos, modos, formas, regimes, dosagens, etc.

A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos a um iRGD e à co- composição por meio da administração do iRGD e da co-composição ao sujeito. O iRGD e a co-composição podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O iRGD e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o iRGD e a co-composição. O iRGD e a co- composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O iRGD e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em momentos diferentes. O iRGD e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O iRGD e a co-composição podem ser administrados ao sujeito por rotas separadas. Em algumas formas, o iRGD e a co-composição não estão ligados entre si. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos ao iRGD e à composição de carga por meio da administração do iRGD e da composição de carga ao sujeito. O iRGD e a composição de carga podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O iRGD e a composição de carga podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o iRGD e a composição de carga. Tal composição pode ser administrada isoladamente ou em combinação com qualquer outro componente, como os revelados aqui. Por exemplo, a composição de iRGD/de carga pode ser administrada ou utilizada em conjunto com um ou mais de outros componentes CendR, uma ou mais de outras composições de carga, uma ou mais co-composições, ou qualquer combinação destes. O iRGD pode estar em uma composição compreendendo o iRGD e qualquer outro componente, tais como os revelados aqui. Por exemplo, a composição iRGD pode compreender adicionalmente um ou mais componentes CendR, uma ou mais composições de carga, ou qualquer combinação destes.

O peptídeo CendR pode permeabilizar a célula, tecido, ou ambos. A célula, tecido, ou ambos podem estar em um sujeito. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos ao peptídeo CendR e à co-composição por meio da administração do peptídeo CendR e da co-composição ao sujeito. O peptídeo CendR e a co- composição podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O peptídeo CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma única composição que compreende o peptídeo CendR e a co-composição. O peptídeo CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O peptídeo CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em momentos diferentes. O peptídeo CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O peptídeo CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito por vias separadas. Em algumas formas, o peptídeo CendR e a co-composição não estão ligados entre si. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos ao peptídeo CendR e à composição de carga por meio da administração do peptídeo CendR e da composição de carga ao sujeito. O peptídeo CendR e a composição de carga podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O peptídeo CendR e a composição de carga podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o peptídeo CendR e a composição de carga.

A composição CendR pode permeabilizar a célula, tecido ou ambos. A célula, tecido, ou ambos, podem estar em um sujeito. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos à composição CendR e à co-composição por meio da administração da composição CendR e da co-composição ao sujeito. A composição CendR e a co-composição pode ser administrada ao sujeito simultaneamente. A composição CendR e a co-composição pode ser administrada ao sujeito em uma única composição compreendendo a composição CendR e a co-composição. A composição CendR e a co-composição podem ser administradas ao sujeito nas composições separadas. A composição CendR e a co-composição podem ser administradas ao sujeito em momentos diferentes. A composição CendR e a co-composição podem ser administradas ao sujeito em composições separadas. A composição CendR e a co-composição podem ser administradas ao sujeito por vias separadas. Em algumas formas, a composição CendR e a co-composição não estão ligadas entre si. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos à composição CendR e à composição de carga por meio da administração da composição CendR e a composição de carga ao sujeito. A composição CendR e a composição de carga podem ser administradas simultaneamente ao sujeito. A composição CendR e a composição de carga podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo a composição CendR e a composição de carga. Mais geralmente, componentes CendR podem compreender tanto um elemento CendR quanto uma composição de carga. Por exemplo, peptídeos CendR, proteínas CendR, conjugados CendR e composições CendR podem compreender tanto um elemento CendR quanto uma composição de carga.

O conjugado CendR pode permeabilizar a célula, tecido, ou ambos. A célula, tecido, ou ambos, podem estar em um sujeito. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos ao conjugado CendR e à co-composição por meio da administração do conjugado CendR e da co-composição ao sujeito. O conjugado CendR e a co-composição podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O conjugado CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o conjugado CendR e a co-composição. O conjugado CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O conjugado CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em momentos diferentes. O conjugado CendR e a co- composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O conjugado CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito por vias separadas. Em algumas formas, o conjugado CendR e a co-composição não estão ligados entre si. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos ao conjugado CendR e à composição de carga por meio da administração do conjugado CendR e da composição de carga ao sujeito. O conjugado CendR e a composição de carga pode ser administrada simultaneamente ao sujeito. O conjugado CendR e a composição de carga podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o conjugado CendR e a composição de carga.

O elemento CendR pode ser tudo ou parte de uma sequência de aminoácidos. A sequência de aminoácidos pode ser a tudo ou parte de uma proteína ou peptídeo. O peptídeo CendR pode ser toda ou parte de uma proteína ou peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos. O conjugado CendR pode compreender uma proteína ou peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos. A composição CendR pode compreender uma proteína ou peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos. A sequência de aminoácidos pode compreender um elemento CendR. A sequência de aminoácidos pode compreender adicionalmente uma ou mais moléculas acessórias. A sequência de aminoácidos pode compreender adicionalmente uma ou mais moléculas de homing. A proteína ou peptídeo pode compreender adicionalmente uma ou mais moléculas acessórias. A proteína ou peptídeo pode compreender adicionalmente uma ou mais moléculas de homing. O conjugado CendR pode compreender uma ou mais composições de carga. A composição CendR pode compreender uma ou mais composições de carga.

Em algumas formas, a proteína ou peptídeo pode ser internalizado em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo podem penetrar o tecido quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser internalizada em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, sem ser associada com a co-composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode penetrar o tecido sem ser associada com a co-composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser internalizada em uma célula e penetrar o tecido sem ser associada com a co-composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos é o único elemento de internalização funcional na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização, a penetração, ou ambas, da co- composição em uma ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a penetração do co-composição em um ou através do tecido é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização, a penetração, ou ambas, da composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a penetração da composição de carga no ou através do tecido é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização e penetração da composição de carga em uma ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo.

Em algumas formas, a proteína ou peptídeo pode ser internalizado em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, quando o elemento CendR está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando o elemento CendR não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo pode penetrar o tecido quando o elemento CendR está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando o elemento CendR não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido quando o elemento CendR está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando o elemento CendR não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, o elemento CendR pode ser internalizado em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, o elemento CendR pode penetrar o tecido sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, o elemento CendR pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido sem ser associado com a co- composição. Em algumas formas, o elemento CendR é o único elemento de internalização funcional na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização, a penetração, ou ambas, da co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou de ambos, é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos, é exposta ao elemento CendR mas não quando a célula, tecido, ou ambos, não é exposta ao elemento CendR. Em algumas formas, a penetração da co- composição no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto ao elemento CendR mas não quando o tecido não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostas ao elemento CendR mas não quando a célula e tecido não é exposta ao elemento CendR. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambas, da composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos é reforçada quando a célula, tecido, ou de ambos, é exposta ao elemento CendR, mas não quando a célula, tecido, ou ambos, não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a penetração da composição de carga no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto ao elemento CendR mas não quando o tecido não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da composição de carga em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostas ao elemento CendR mas não quando a célula e tecido não é exposto ao elemento CendR.

Em algumas formas, o peptídeo CendR pode ser internalizado em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, quando o elemento CendR está presente no peptídeo CendR mas não quando o elemento CendR não está presente no peptídeo CendR. Em algumas formas, o peptídeo CendR pode penetrar o tecido quando o elemento CendR está presente no peptídeo CendR, mas não quando o elemento CendR não está presente no peptídeo CendR. Em algumas formas, o peptídeo CendR pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido quando o elemento CendR está presente no peptídeo CendR mas não quando o elemento CendR não está presente no peptídeo CendR. Em algumas formas, o peptídeo CendR pode ser internalizado em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, o peptídeo CendR pode penetrar o tecido sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, o peptídeo CendR pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, o elemento CendR é o único elemento de internalização funcional no peptídeo CendR. Em algumas formas, a internalização, penetração ou ambas, da co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos, é exposta ao peptídeo CendR mas não quando a célula, tecido, ou ambos, não é exposta ao peptídeo CendR. Em algumas formas, a penetração da co-composição no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto ao peptídeo CendR, mas não quando o tecido não é exposto ao peptídeo CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostos ao peptídeo CendR, mas não quando a célula e tecido não é exposto ao peptídeo CendR. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambos, da composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos, é exposta ao peptídeo CendR, mas não quando a célula, tecido ou ambos não é exposta ao peptídeo CendR. Em algumas formas, a penetração da composição de carga no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto ao peptídeo CendR, mas não quando o tecido não é exposto ao peptídeo CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da composição de carga em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostos ao peptídeo CendR, mas não quando a célula e tecido não é exposto ao peptídeo CendR.

Em algumas formas, o conjugado CendR pode ser internalizado em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, quando o elemento CendR está presente no conjugado CendR, mas não quando o elemento CendR não está presente no conjugado CendR. Em algumas formas, o conjugado CendR pode penetrar o tecido quando o elemento CendR está presente no conjugado CendR, mas não quando o elemento CendR não está presente no conjugado CendR. Em algumas formas, o conjugado CendR pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido quando o elemento CendR está presente no conjugado CendR, mas não quando o elemento CendR não está presente no conjugado CendR. Em algumas formas, o conjugado CendR pode ser internalizado em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, o conjugado CendR pode penetrar o tecido sem ser associado com a co- composição. Em algumas formas, o conjugado CendR pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, o elemento CendR é o único elemento de internalização funcional no conjugado CendR. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambas, da co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos, é exposta ao conjugado CendR, mas não quando a célula, tecido, ou ambos, não é exposta ao conjugado CendR. Em algumas formas, a penetração do co-composição no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto ao conjugado CendR, mas não quando o tecido não é exposto ao conjugado CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostos ao conjugado CendR, mas não quando a célula e tecido não é exposta ao conjugado CendR. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambos, da composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos, é exposta ao conjugado CendR, mas não quando a célula, tecido ou ambos, não é exposta ao conjugado CendR. Em algumas formas, a penetração da composição de carga no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto ao conjugado CendR, mas não quando o tecido não é exposto ao conjugado CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da composição de carga em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostos ao conjugado CendR, mas não quando a célula e tecido não são expostos ao conjugado CendR.

Em algumas formas, a composição CendR pode ser internalizada em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, quando o elemento CendR está presente na composição CendR, mas não quando o elemento CendR não está presente na composição CendR. Em algumas formas, a composição CendR pode penetrar o tecido quando o elemento CendR está presente na composição CendR, mas não quando o elemento CendR não está presente na composição CendR. Em algumas formas, a composição CendR pode ser internalizada em uma célula e penetrar o tecido quando o elemento CendR está presente na composição CendR, mas não quando o elemento CendR não está presente na composição CendR. Em algumas formas, a composição CendR pode ser internalizada em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, sem ser associada com a co- composição. Em algumas formas, a composição CendR pode penetrar o tecido sem ser associado com a co-composição. Em algumas formas, a composição CendR pode ser internalizada em uma célula e penetrar o tecido sem ser associada com a co-composição. Em algumas formas, o elemento CendR é o único elemento de internalização funcional na composição CendR. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambas, da co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou de ambos é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos, é exposta à composição CendR mas não quando a célula, tecido, ou ambos, não é exposto à composição CendR. Em algumas formas, a penetração da co-composição no ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto à composição CendR mas não quando o tecido não é exposto à composição CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostos à composição CendR, mas não quando a célula e tecido não é exposto à composição CendR. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambas, da composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a célula, tecido, ou ambos, é exposto à composição CendR mas não quando a célula, tecido ou ambos, não é exposto à composição CendR. Em algumas formas, a penetração da composição de carga em ou através do tecido é reforçada quando o tecido é exposto à composição CendR, mas não quando o tecido não é exposto à composição CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da composição de carga em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostos à composição CendR, mas não quando a célula e tecido não são expostos à composição CendR.

O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável. O elemento CendR ativável pode ser uma elemento CendR ativável por protease. O peptídeo CendR pode ser um peptídeo CendR ativável. O peptídeo CendR ativável pode ser um peptídeo CendR ativável por protease. O peptídeo CendR pode estar na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo. O conjugado CendR pode ser um conjugado CendR ativável. O conjugado CendR ativável pode ser um conjugado CendR ativável por protease. O conjugado CendR pode estar na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo. A composição CendR pode ser uma composição CendR ativável. A composição CendR ativável pode ser uma composição CendR ativável por protease. A composição CendR pode estar na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo.

A proteína ou peptídeo pode ser circular. A proteína ou peptídeo pode ser linear. O elemento CendR pode estar na extremidade da terminação C da proteína ou peptídeo. A co-composição pode compreender um agente terapêutico. A co-composição pode compreender um agente de detecção. A co- composição pode compreender um transportador, veículo, ou ambos. A co- composição pode compreender, por exemplo, uma proteína terapêutica, um composto terapêutico, uma composição terapêutica, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, um agente quimioterápico de câncer, uma toxina, um agente citotóxico, um agente antiinflamatório, um agente anti-artrítico, um fator de crescimento, uma citocina, uma quimiocina, um composto que modula uma ou mais vias de sinalização, um anticorpo, um ácido nucléico, um análogo de ácido nucléico, uma célula, um vírus, um fago, uma partícula viral, uma partícula de fago, um capsídeo viral, um capsídeo do fago, uma partícula tipo vírus, um lipossoma, uma micela, uma conta, uma nanopartícula, uma micropartícula, um agente quimioterapêutico, um agente de contraste, um agente de imagem, um rótulo, um agente de rotulagem, ou uma combinação.

A composição de carga pode compreender um agente terapêutico. A composição de carga pode compreender um agente de detecção. A composição de carga pode compreender um transportador, veículo, ou ambos. A composição de carga pode compreender, por exemplo, uma proteína terapêutica, um composto terapêutico, uma composição terapêutica, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, um agente quimioterápico de câncer, uma toxina, um agente citotóxico, um agente antiinflamatório, um agente anti-artrítico, um fator de crescimento, uma citocina, uma quimiocina, um composto que modula uma ou mais vias de sinalização, um anticorpo, um ácido nucléico, um análogo de ácido nucléico, uma célula, um vírus, um fago, uma partícula viral, uma partícula de fago, um capsídeo viral, um capsídeo do fago, uma partícula tipo vírus, um lipossoma, uma micela, uma conta, uma nanopartícula, uma micropartícula, um agente quimioterapêutico, um agente de contraste, um agente de imagem, um rótulo, um agente de rotulagem, ou uma combinação.

Em algumas formas, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, o peptídeo CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, o conjugado CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, a composição CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, o peptídeo CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, o conjugado CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Em algumas formas, a composição CendR e a composição de carga são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si.

São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma co-composição. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR e uma co-composição. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR e uma co-composição. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR e uma co- composição. São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma co-composição, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR e uma co-composição, em que o peptídeo CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR e uma co-composição, em que o conjugado CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR e uma co-composição, em que a composição CendR e a co-composição não são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si.

São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma ou mais co-composições. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR e uma ou mais co-composições. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR e uma ou mais co- composições. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR e uma ou mais co-composições. São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma ou mais co-composições, em que o elemento CendR e pelo menos uma das co-composições não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR e uma ou mais co- composições, em que o peptídeo CendR e pelo menos uma das co-composições não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR e uma ou mais co-composições, em que o conjugado CendR e pelo menos uma das co-composições não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR e uma ou mais co-composições, em que a composição CendR e pelo menos uma das co-composições não são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si.

São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma composição de carga. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR e uma composição de carga. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR e uma composição de carga. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR e uma composição de carga. São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma composição de carga, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR e uma composição de carga, em que o peptídeo CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR e uma composição de carga, em que o conjugado CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR e uma composição de carga, em que a composição CendR e a composição de carga são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si.

São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma ou mais composições de carga. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR e uma ou mais composições de carga. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR e uma ou mais composições de carga. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR e uma ou mais composições de carga. São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma ou mais composições de carga, em que o elemento CendR e pelo menos uma das composições de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR e uma ou mais composições de carga, em que o peptídeo CendR e pelo menos uma das composições de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR e uma ou mais composições de carga, em que o conjugado CendR e pelo menos uma das composições de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR e uma ou mais composições de carga, em que a composição CendR e pelo menos uma das composições de carga são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR, uma molécula acessória e uma co-composição, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR e a molécula acessória são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR, uma molécula acessória e uma co-composição, em que o peptídeo CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o peptídeo CendR e a molécula acessória são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR, uma molécula acessória, e uma co-composição, em que o conjugado CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o conjugado CendR e a molécula acessória são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR, uma molécula acessória, e uma co-composição, em que a composição CendR e a co-composição não são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si, em que a composição CendR e a molécula acessória são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR, uma molécula acessória e uma co-composição, em que o peptídeo CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o peptídeo CendR compreende a molécula acessória. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR, uma molécula acessória e uma co-composição, em que o conjugado CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o conjugado CendR compreende a molécula acessória. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR, uma molécula acessória e uma co-composição, em que a composição CendR e a co-composição não são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si, em que a composição CendR compreende a molécula acessória. Nessas composições, a molécula acessória pode ser ou pode compreender um peptídeo acessório. O peptídeo acessório pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR. Nessas composições, a composição pode compreender uma ou mais co- composições e/ou uma ou mais moléculas acessórias, em que o elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR ou composição CendR e pelo menos uma das co-composições não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR ou composição CendR e pelo menos uma das moléculas acessórias são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR, uma molécula de homing, e uma co-composição, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR e a molécula de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR, uma molécula de homing, e uma co-composição, em que o peptídeo CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o peptídeo CendR e a molécula são homing covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR, uma molécula de homing, e uma co-composição, em que o conjugado CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o conjugado CendR e a molécula de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR, uma molécula de homing, e uma co-composição, em que a composição CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que a composição CendR e a molécula são homing são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR, uma molécula de homing, e uma co-composição, em que o peptídeo CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o peptídeo CendR compreende a molécula de homing. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR, uma molécula de homing, e uma co-composição, em que o conjugado CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o conjugado CendR compreende a molécula de homing. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR, uma molécula de homing, e uma co-composição, em que a composição CendR e a co-composição não são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si, em que a composição CendR compreende a molécula de homing. Nessas composições, a molécula de homing pode ser ou pode compreender um peptídeo de homing. O peptídeo de homing pode sobrepor-se com o elemento CendR ou ser separado do elemento CendR. Nessas composições, a composição pode compreender uma ou mais co- composições e/ou uma ou mais moléculas de homing, em que o elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR ou composição CendR e pelo menos uma das co-composições não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR ou composição CendR e pelo menos uma das moléculas de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR, uma molécula acessória e uma composição de carga, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR e a molécula acessória são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR, uma molécula acessória e uma composição de carga, em que o peptídeo CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o peptídeo CendR e a molécula acessória são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR, uma molécula acessória e uma composição de carga, em que o conjugado CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o conjugado CendR e a molécula acessória são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR, uma molécula acessória e uma composição de carga, em que a composição CendR e a composição de carga são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si, em que a composição CendR e a molécula acessória são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR, uma molécula acessória e uma composição de carga, em que o peptídeo CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o peptídeo CendR compreende a molécula acessória. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR, uma molécula acessória e uma composição de carga, em que o conjugado CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o conjugado CendR compreende a molécula acessória. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR, uma molécula acessória e uma composição de carga, em que a composição CendR e a composição de carga são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si, em que a composição CendR compreende a molécula acessória. Nessas composições, a molécula acessória pode ser ou pode compreender um peptídeo acessório. O peptídeo acessório pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR. Nessas composições, a composição pode compreender uma ou mais composições de carga e/ou uma ou mais moléculas acessórias, em que o elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR ou composição CendR e pelo menos uma das composições de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR ou composição CendR e pelo menos uma das moléculas acessórias são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR, uma molécula de homing e uma composição de carga, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR e a molécula de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR, uma molécula de homing e uma composição de carga, em que o peptídeo CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o peptídeo CendR e a molécula de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR, uma molécula de homing e uma composição de carga, em que o conjugado CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o conjugado CendR e a molécula de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR, uma molécula de homing e uma composição de carga, em que a composição CendR e a composição de carga são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si, em que a composição CendR e a molécula de homing são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um peptídeo CendR, uma molécula de homing e uma composição de carga, em que o peptídeo CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o peptídeo CendR compreende a molécula de homing. Também são reveladas composições compreendendo um conjugado CendR, uma molécula de homing e uma composição de carga, em que o conjugado CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o conjugado CendR compreende a molécula de homing. Também são reveladas composições compreendendo uma composição CendR, uma molécula de homing e uma composição de carga, em que a composição CendR e a composição de carga são covalentemente acopladas ou associadas de modo não covalente entre si, em que a composição CendR compreende a molécula de homing. Nessas composições, a molécula de homing pode ser ou pode compreender um peptídeo de homing. O peptídeo de homing pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR. Nessas composições, a composição pode compreender uma ou mais composições de carga e/ou uma ou mais moléculas de homing, em que o elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR ou composição CendR e pelo menos uma das composições de carga não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR ou composição CendR e pelo menos uma das moléculas de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma co-composição, em que a proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR e um peptídeo acessório, em que o elemento CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma co-composição, em que a proteína ou peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR e um peptídeo de acessório, em que o elemento CendR e a co-composição são não covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Nessas composições, o peptídeo acessório pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR. Nessas composições, a composição pode compreender uma ou mais co- composições e/ou um ou mais peptídeos acessórios, em que a proteína ou peptídeo e pelo menos uma das co-composições não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que a proteína ou peptídeo e pelo menos um dos peptídeos acessórios são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma co-composição, em que a proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR e um peptídeo de homing, em que o elemento CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma co-composição, em que a proteína ou peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR e um peptídeo de homing, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Nessas composições, o peptídeo de homing pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR. Nessas composições, a composição pode compreender uma ou mais co- composições e/ou um ou mais peptídeos de homing, em que a proteína ou peptídeo e pelo menos uma das co-composições não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que a proteína ou peptídeo e pelo menos um dos peptídeos de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma composição de carga, em que a proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR e um peptídeo acessório, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma composição de carga, em que a proteína ou peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR e um peptídeo acessório, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Nessas composições, o peptídeo acessório pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR. Nessas composições, a composição pode compreender uma ou mais composições de carga e/ou um ou mais peptídeos acessórios, em que a proteína ou peptídeo e pelo menos uma das composições de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que a proteína ou peptídeo e pelo menos um dos peptídeos acessórios são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma composição de carga, em que a proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR e um peptídeo de homing, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo uma proteína ou peptídeo e uma composição de carga, em que a proteína ou peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR e um peptídeo de homing, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Nessas composições, o peptídeo de homing pode sobrepor-se ao elemento CendR ou ser separado do elemento CendR. Nessas composições, a composição pode compreender uma ou mais composições de carga e/ou um ou mais peptídeos de homing, em que a proteína ou peptídeo e pelo menos uma das composições de carga não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que a proteína ou peptídeo e pelo menos um dos peptídeos de homing são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Como usado aqui, referência aos componentes (tais como um elemento CendR e uma co-composição) como sendo”não covalentemente acoplados" significa que os componentes não são conectados através de ligações covalentes (por exemplo, que o elemento CendR e a co-composição não são conectados por meio de ligações covalentes). Ou seja, não há nenhuma cadeia contínua de ligações covalentes entre, por exemplo, o elemento CendR e a co-composição. Por outro lado, a referência aos componentes (tais como um elemento CendR e uma composição de carga) como sendo”covalentemente acoplados" significa que os componentes são conectados por meio de ligações covalentes (por exemplo, que o elemento CendR e a composição de carga estão conectados por meio de ligações covalentes). Ou seja, há uma cadeia contínua de ligações covalentes entre, por exemplo, o elemento CendR e a composição de carga. Componentes podem ser covalentemente acoplados ou direta ou indiretamente. Acoplamento covalente direto refere-se à presença de uma ligação covalente entre os átomos de cada um dos componentes. O acoplamento covalente indireto refere-se à ausência de uma ligação covalente entre os átomos de cada um dos componentes. Isto é, algum outro átomo ou átomos que não pertencem a qualquer um dos componentes acoplados intervém entre os átomos dos componentes. Tanto acoplamento covalente direto quanto indireto envolve uma cadeia contínua de ligações covalentes.

Associação não covalente refere-se à associação dos componentes por meio de ligações não covalentes e interações. Uma associação não-covalente pode ser ou direta ou indireta. Uma associação não-covalente direta refere-se a uma ligação não-covalente envolvendo átomos que são, cada um, respectivamente, conectado por meio de uma cadeia de ligações covalentes aos componentes. Assim, em uma associação não-covalente direta, não há outra molécula intermediária entre os componentes associados. Uma associação não- covalente indireta se refere a qualquer cadeia de moléculas e ligações que ligam os componentes onde os componentes não são covalentemente acoplados (isto é, existe pelo menos um molécula separada ao invés dos componentes intervindo entre os componentes por meio de ligações não covalentes).

Referência aos componentes (tais como um elemento CendR e uma co- composição) como não sendo” associados de modo não-covalente" significa que não há associação não-covalente direta ou indireta entre os componentes. Isto é, por exemplo, nenhum átomo covalentemente acoplado a um elemento CendR está envolvido em uma ligação não-covalente com um átomo covalentemente acoplado a uma co-composição. Dentro deste significado, um elemento CendR e uma co-composição poden estar juntos em uma composição em que eles estão indiretamente associados por meio de múltiplas ligações não-covalentes de intervenção, embora não sendo associados de modo não covalente como o termo é definido aqui. Por exemplo, um elemento CendR e uma co-composição podem ser misturados juntos em um transportador, em que eles não estão diretamente associados de modo não covalente. Um elemento CendR e uma co-composição que são referidos como não associados de modo não-covalente indiretamente não podem ser misturados em uma composição contínua. Referência aos componentes (tais como um elemento CendR e uma co-composição) como não sendo”associados de modo não covalente diretamente" significa que não existe uma associação não-covalente direta entre os componentes (uma associação não-covalente indireta pode estar presente). Referência aos componentes (tais como um elemento CendR e uma co-composição) como não sendo”associados de modo não-covalente indiretamente" significa que não há associação direta ou indireta não-covalente entre os componentes.

Entende-se que os componentes podem ser associados de modo não- covalente por meio de cadeias e vias múltiplas incluindo tanto associações não covalentes diretas quanto indiretas. Para fins destas definições, a presença de uma única associação não-covalente direta faz a associação de uma associação não-covalente direta, mesmo que haja também associações não covalentes indiretas presentes. Similarmente, a presença de uma conexão covalente entre os componentes significa que os componentes são covalentemente acoplados mesmo se não houver também associações não covalentes presentes. Também é entendido que componentes acoplados covalentemente que aconteceram para falta de qualquer associação não covalente entre si não são considerados como abrangidos pela definição de componentes que não são associados de modo não covalente.

Em algumas formas, a co-composição não compreende um elemento de internalização funcional. A co-composição pode compreender um elemento de internalização funcional. Em algumas formas, a co-composição não compreende uma molécula de homing. A co-composição pode compreender uma molécula de homing. Em algumas formas, a co-composição não compreende um peptídeo de homing. A co-composição pode compreender um peptídeo de homing. A co- composição pode endereçar seletivamente a um tumor. Em algumas formas, a co-composição não pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor. A co- composição pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor. Em algumas formas, a co-composição não compreende uma molécula acessória. A co- composição pode compreender uma molécula acessória. Em algumas formas, a co-composição não compreende um peptídeo acessório. A co-composição pode compreender um peptídeo acessório. A co-composição pode endereçar seletivamente a um tumor.

O elemento CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser uma parte de uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o elemento CendR. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente ao elemento CendR ou uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o elemento CendR. Moléculas acessórias podem ser qualquer molécula, composto, componente, etc, que tenha uma função útil e que possa ser usado em combinação com um elemento CendR, composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR e/ou peptídeo CendR. Exemplos de moléculas acessórias úteis incluem moléculas de homing, moléculas de alvejamento, ligantes de afinidade, moléculas que penetram células, moléculas de escape endossômico, moléculas de alvejamento subcelular, moléculas de alvejamento nuclear. Moléculas acessórias diferentes podem ter funções similares ou funções diferentes entre si. Moléculas acessórias com funções similares, funções diferentes, ou ambas, podem estar associadas a um elemento CendR, composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR e/ou peptídeo CendR.

A molécula acessória pode ser separada do ou sobreposta ao elemento CendR. Por exemplo, algumas moléculas acessórias são sequências de aminoácidos. Isso pode permitir que a sequência de aminoácidos que consiste do elemento CendR sobrepor-se à sequência de aminoácidos que consiste na sequência de aminoácidos acessória. Por exemplo, iRGD, LyP-1, iNGR e peptídeos RGR cada um contém tanto a sequência acessória quanto a sequência CendR sobrepondo-se entre si no peptídeo. Alternativamente a molécula acessória pode ser uma entidade separada que não se sobrepõe ao elemento CendR. Por exemplo, um peptídeo de ligação HER2, peptídeo CREKA, peptídeo NGR, iNGR, ou um peptídeo RGD que não é um elemento CendR pode consistir da sequência de aminoácidos que não se sobrepõe a um elemento CendR. Em algumas formas, a molécula acessória pode compreender uma sequência, por exemplo, em um peptídeo CendR que se liga a um receptor específico distinto do receptor para o elemento CendR.

O peptídeo CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser uma parte de uma sequência de aminoácido, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o peptídeo CendR. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente ao peptídeo CendR ou a uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o peptídeo CendR. O conjugado CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser uma parte de um conjugado ou composição que compreende o conjugado CendR. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente ao conjugado CendR ou um conjugado ou composição que compreende o conjugado CendR. A composição CendR pode ser associada com uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser parte de uma composição que compreende a composição CendR. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente com a composição CendR ou uma composição que compreende a composição CendR.

A sequência de aminoácidos pode ser associada com uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser uma parte de uma sequência de aminoácido, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende a sequência de aminoácidos. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não- covalente à sequência de aminoácidos ou uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende a sequência de aminoácidos. Por exemplo, as sequências de aminoácido podem compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR ou uma combinação. A sequência de aminoácidos pode compreender um peptídeo CREKA. A proteína ou peptídeo pode ser associado com uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser uma parte de uma proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o peptídeo. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não- covalente ao peptídeo ou a uma proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o peptídeo. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser uma parte de uma proteína, conjugado ou composição que compreende a proteína. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente com a proteína ou uma proteína, conjugado ou composição que compreende a proteína. Por exemplo, a proteína ou peptídeo podem compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR ou uma combinação. O conjugado pode ser associado a uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser uma parte de um conjugado ou composição que compreende o conjugado. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não- covalente com o conjugado ou um conjugado ou composição que compreende o conjugado. Por exemplo, o conjugado pode compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou uma combinação. A composição pode ser associada com uma ou mais moléculas acessórias. Por exemplo, uma molécula acessória pode ser parte de uma composição que compreende a composição. Como outro exemplo, a molécula acessória pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente à composição ou à uma composição que compreende a composição. Por exemplo, a composição pode compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou uma combinação.

O elemento CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o elemento CendR. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser acoplada covalentemente associada de modo não-covalente com o elemento CendR ou uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o elemento CendR. A molécula de homing pode ser separada ou sobrepor-se ao elemento CendR. Por exemplo, algumas moléculas de homing são sequências de aminoácidos. Isso pode permitir que a sequência de aminoácidos consistindo do elemento CendR sobrepor-se à sequência de aminoácidos que consiste na sequência de aminoácido de homing. Por exemplo, iRGD, LyP-1, iNGR e peptídeos RGR cada um contêm tanto uma sequência de homing e sequência CendR sobrepondo-se entre si no peptídeo. Alternativamente a molécula de homing pode ser uma entidade separada que não se sobrepõe com o elemento CendR. Por exemplo, um peptídeo de ligação HER2, peptídeo CREKA, peptídeo NGR, iNGR ou um peptídeo RGD que não é um elemento CendR pode consistir da sequência de aminoácidos que não se sobrepõe com um elemento CendR. Em algumas formas, a molécula de homing pode compreender uma sequência em, por exemplo, um peptídeo CendR que se liga a um receptor específico distinto do receptor para o elemento CendR.

O peptídeo CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de uma sequência de aminoácido, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o peptídeo CendR. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser acoplada covalentemente ou associada de modo não-covalente ao peptídeo CendR ou uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o peptídeo CendR. O conjugado CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de um conjugado ou composição que compreende o conjugado CendR. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente com o conjugado CendR ou um conjugado ou composição que compreende o conjugado CendR. A composição CendR pode ser associada com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de uma composição que compreende a composição CendR. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente com a composição CendR ou uma composição que compreende a composição CendR.

A sequência de aminoácidos pode ser associada com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende a sequência de aminoácidos. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não- covalente à sequência de aminoácidos ou uma sequência de aminoácidos, proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende a sequência de aminoácidos. Por exemplo, as sequências de aminoácidos podem compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou uma combinação. A sequência de aminoácidos pode compreender um peptídeo CREKA. A proteína ou peptídeo pode ser associado com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de uma proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o peptídeo. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente ao peptídeo ou uma proteína, peptídeo, conjugado ou composição que compreende o peptídeo. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de uma proteína, conjugado ou composição que compreende a proteína. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente com a proteína ou uma proteína, conjugado ou composição que compreende a proteína. Por exemplo, a proteína ou peptídeo pode compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou uma combinação. A proteína ou peptídeo pode compreender iRGD. A proteína ou peptídeo pode compreender um peptídeo LyP-1. A proteína ou peptídeo pode compreender iNGR. A proteína ou peptídeo pode compreender peptídeo RGR. A proteína ou peptídeo pode compreender um peptídeo CREKA. O conjugado pode ser associado com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de um conjugado ou composição que compreende o conjugado. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente com o conjugado ou um conjugado ou composição que compreende o conjugado. Por exemplo, o conjugado pode compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou uma combinação. O conjugado pode compreender iRGD. O conjugado pode compreender um peptídeo LyP-1. O conjugado pode compreender iNGR. O conjugado pode compreender peptídeo RGR. O conjugado pode compreender um peptídeo CREKA. A composição pode ser associada com uma ou mais moléculas de homing. Por exemplo, uma molécula de homing pode ser uma parte de uma composição que compreende a composição. Como outro exemplo, a molécula de homing pode ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente à composição ou uma composição que compreende a composição. Por exemplo, a composição pode compreender um peptídeo iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, um peptídeo CREKA, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGD que não é um elemento CendR, ou uma combinação. A composição pode compreender iRGD. A composição pode compreender um peptídeo LyP-1. A composição pode compreender iNGR. A composição pode compreender peptídeo RGR. A composição pode compreender um peptídeo CREKA.

A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a internalização em uma célula. A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a penetração nos tecidos. A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a internalização em uma célula e penetração nos tecidos. A proteína ou peptídeo pode ser selecionada para a internalização em uma célula. A proteína ou peptídeo pode ser selecionada para a penetração no tecido. A proteína ou peptídeo pode ser selecionado para a internalização em uma célula e penetração no tecido. O conjugado pode ser selecionado para a internalização em uma célula. O conjugado pode ser selecionado para a penetração no tecido. O conjugado pode ser selecionado para a internalização em uma célula e penetração no tecido. A composição pode ser selecionada para a internalização em uma célula. A composição pode ser selecionada para a penetração no tecido. A composição pode ser selecionada para a internalização em uma célula e penetração no tecido.

O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga ou uma combinação pode casa endereçar seletivamente a um tumor. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga ou uma combinação pode endereçar seletivamente a um ou mais tipos de tumor particulares. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamentepara à vasculatura de um ou mais tipos de tumor particulares. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamente a um ou mais estágios particulares de um tumor ou câncer. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga ou uma combinação pode endereçar seletivamentepara à vasculatura de um ou mais estágios particulares de um tumor ou câncer. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamente a um ou mais estágios particulares de um ou mais tipos particulares de tumor. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga ou uma combinação pode endereçar seletivamente para a vasculatura de um ou mais estágios diferentes de um ou mais tipos particulares de tumor.

O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamente ao tecido pulmonar. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamentepara à vasculatura pulmonar. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamente ao tecido cardíaco. O elemento CendR, peptídeo

CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamente à vasculatura do coração. O elemento CendR, peptídeo CendR, conjugado CendR, composição CendR, sequência de aminoácidos, proteína ou peptídeo, conjugado, composição, co-composição, composição de carga, ou uma combinação pode endereçar seletivamente para as células do cérebro, células-tronco do cérebro, tecido cerebral e/ou vasculatura do cérebro, células renais, células-tronco renais, tecido renal e/ou vasculatura renal, células da pele, células-tronco da pele, tecido da pele e/ou vasculatura da pele, células do pulmão, tecido pulmonar e/ou vasculatura pulmonar, células pancreáticas, tecido pancreático e/ou vasculatura pancreática, células intestinais, tecido intestinal e/ou vasculatura intestinal, células da glândula adrenal, tecido adrenal e/ou vasculatura adrenal, células retinais, tecido retinal e/ou vasculatura retinal, células do fígado, tecido hepático e/ou vasculatura do fígado, células da próstata, tecido da próstata e/ou vasculatura da próstata, células de endometriose, tecido de endometriose e/ou vasculatura de endometriose, células de ovário, tecido de ovário e/ou vasculatura de ovário, células tumorais, tumores, vasos sanguíneos tumorais e/ou vasculatura do tumor, células ósseas, tecido ósseo e/ou vasculatura óssea, células da medula óssea, tecido da medula óssea e/ou vasculatura da medula óssea, células de cartilagem, tecido cartilaginoso e/ou vasculatura de cartilagem, células-tronco, células-tronco embrionárias, células-tronco pluripotentes, células-tronco pluripotentes induzidas, células-tronco adultas, células-tronco hematopoiéticas, células-tronco neurais, células-tronco mesenquimais, células-tronco mamárias, células-tronco endoteliais, células-tronco adultas olfativas, células-tronco da crista neural, células-tronco cancerosas, células vermelhas, eritrócitos, plaquetas, leucócitos, granulócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, células linfóides, linfócitos, monócitos, vasculatura de ferida, vasculatura do tecido lesado, vasculatura do tecido inflamado, placas ateroscleróticas, ou uma combinação.

Composições CendR, conjugados CendR, moléculas CendR, compostos CendR, proteínas CendR, peptídeos CendR e elementos CendR podem ser projetados e produzidos de qualquer forma adequada. Por exemplo, o elemento CendR nas composições CendR reveladas, conjugados CendR, moléculas CendR, compostos CendR, proteínas CendR e peptídeos CendR podem ser projetados ou produzidos pela seleção de uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento de terminação C, em que uma proteína ou peptídeo compreende a sequência de amino ácido selecionada, em que a sequência de amino ácido selecionada está na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo.

São reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma co-composição, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. Também são reveladas composições compreendendo um elemento CendR e uma composição de carga, em que o elemento CendR e a composição de carga são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si, em que o elemento CendR é um elemento CendR tipo 2.

Também são revelados métodos de reforço de internalização, penetração, ou ambas, de um co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo a exposição da célula, tecido, ou ambos, a um elemento CendR e à co-composição, reforçando assim, a internalização, penetração, ou ambas da co-composição em ou através da célula, tecido, ou ambos. Em algumas formas, antes de expor a célula, tecido, ou ambos, o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si.

Também são revelados os métodos de reforço de internalização, penetração, ou ambas, de uma composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, o método compreendendo expor a célula, tecido, ou ambos a um elemento CendR e à composição de carga, reforçando assim a internalização, penetração, ou ambos da composição de carga em ou através da célula, tecido, ou ambos. O elemento CendR e a composição de carga podem ser covalentemente acoplados ou associados de modo não covalente entre si. O elemento CendR pode ser um elemento CendR tipo 2. Os métodos podem compreender adicionalmente, antes de expor a célula, tecido, ou ambos, ao elemento CendR, o acoplamento do elemento CendR à composição de carga.

O elemento CendR pode permeabilizar a célula, tecido, ou ambos. A célula, tecido, ou ambos, podem estar em um sujeito. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos ao elemento CendR e à co-composição pela administração do elemento CendR e à co-composição ao sujeito. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos ao elemento CendR e à composição de carga pela administrar do elemento CendR e da composição de carga ao sujeito.

O elemento CendR pode ser associado com uma ou mais moléculas acessórias. O elemento CendR pode ser associado a uma pluralidade de moléculas acessórias. Em algumas formas, pelo menos uma das moléculas acessórias sobrepõe-se ao elemento CendR. Em algumas formas, pelo menos uma das moléculas acessórias não se sobrepõe ao elemento CendR. Em algumas formas, pelo menos uma das moléculas acessórias pode compreender um peptídeo RGD, iRGD, um peptídeo LyP-1, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, ou uma combinação. Uma ou mais das moléculas acessórias podem ser independentemente uma molécula de homing, uma moléculas de alvejamento, um ligante de afinidade, um peptídeo que penetra célula, uma molécula de escape endossômico, uma molécula de alvejamento subcelular, uma molécula de alvejamento nuclear, ou uma combinação. Uma ou mais das moléculas acessórias podem ser moléculas de homing. Uma ou mais das moléculas acessórias podem ser peptídeos acessórios. Uma ou mais das moléculas acessórias podem compreender iRGD. Uma ou mais das moléculas acessórias podem compreender um peptídeo Lyp -1. Uma ou mais das moléculas acessórias podem compreender iNGR. Uma ou mais das moléculas acessórias podem compreender peptídeo RGR.

O elemento CendR pode endereçar seletivamente para as células do cérebro, tecido, ou ambos, células renais, tecido, ou ambos, células de pele e de tendão, tecido, ou ambos, as células do pulmão, tecido, ou ambos, as células pancreáticas, tecido, ou ambos, células intestinais, tecido, ou ambos, células da glândula adrenal, tecido, ou ambos, células retinais, o tecido, ou ambos, células do fígado, tecido, ou ambas, células da próstata, tecido, ou ambos, células da endometriose, tecido, ou ambos, células do ovário, tecido, ou ambos, células do coração, tecido, ou ambas, células tumorais, tumores, vasos sanguíneos tumorais, ou uma combinação. O elemento CendR pode endereçar seletivamente a um tumor. O elemento CendR pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor. O elemento CendR pode endereçar seletivamente ao tecido pulmonar. O elemento CendR pode endereçar seletivamente ao tecido cardíaco.

O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável. O elemento CendR ativável pode ser um elemento CendR ativável por protease. O elemento CendR ativável por protease pode ser ativável por uma protease serina, plasmina, um ativador de plasminogênio, uroquinase, uma convertase proproteina, uma furina, uma carboxipeptidase, carboxipeptidase A, uma carboxipeptidase específica de glutamato, uma carboxipeptidase específica de prolina, PSMA, ou uma combinação.

O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados simultaneamente ao sujeito. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em uma única composição compreendendo o elemento CendR e a co-composição.

O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em momentos diferentes. O elemento CendR e a co- composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito por vias separadas.

Em algumas formas, o elemento CendR e a co-composição não estão ligados entre si. A co-composição ou composição de carga podem compreender um agente terapêutico. A co-composição ou composição de carga podem compreender um agente de detecção. A co-composição ou composição de carga pode compreender um transportador, veículo, ou ambos. A co-composição ou composição de carga pode compreender uma proteína terapêutica, um composto terapêutico, uma composição terapêutica, um agente quimioterápico de câncer, uma toxina, um agente citotóxico, um agente antiinflamatório, um agente anti- artrítico, um fator de crescimento, uma citocina, uma quimiocina, um composto que modula uma ou mais vias de sinalização, um anticorpo, um ácido nucléico, um análogo de ácido nucléico, uma célula, um vírus, um fago, uma partícula viral, uma partícula de fago, um capsídeo viral, um capsídeo de fago, uma partícula tipo vírus, um lipossoma, uma micela, uma conta, uma nanopartícula, uma micropartícula, um agente quimioterapêutico, um agente de contraste, um agente de imagem, um rótulo, um agente de rotulagem, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, ou uma combinação.

O elemento CendR pode ser compreendido de uma sequência de aminoácidos. A sequência de aminoácidos pode ser compreendida em uma proteína ou peptídeo. O elemento CendR pode ser compreendido em uma proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo pode ser internalizada em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo pode penetrar o tecido quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a proteína ou peptídeo pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo.

Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser internalizada em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, sem ser associado com a co- composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser internalizada em uma célula, penetrar o tecido, ou ambos, sem ser associada com a composição de carga. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode penetrar o tecido sem ser associada com a co-composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode penetrar o tecido sem estar associada com a composição de carga. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser internalizada em uma célula e penetrar o tecido sem ser associado com a co- composição. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser internalizada em uma célula e penetrar o tecido sem estar associada com a composição de carga. Em algumas formas, a sequência de aminoácidos pode ser o único elemento de internalização funcional na proteína ou peptídeo.

A proteína ou peptídeo pode ser circular. O elemento CendR pode estar na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambos da co-composição ou composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou de ambos, pode ser reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácido não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a penetração da co-composição ou da composição de carga no ou através do tecido pode ser reforçada quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição ou composição de carga em ou através de uma célula e tecido podem ser reforçadas quando a sequência de aminoácidos está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambas da co-composição ou composição de carga em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, pode ser reforçada quando o elemento CendR está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a penetração da co-composição ou composição de carga no ou através do tecido pode ser reforçada quando o elemento CendR está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição ou composição de carga em ou através de uma célula e tecido podem ser reforçadas quando o elemento CendR está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácidos não está presente na proteína ou peptídeo.

A sequência de aminoácidos pode ser associada com uma ou mais moléculas acessórias. A proteína ou peptídeo pode ser associado com uma ou mais moléculas acessórias. Uma ou mais das moléculas acessórias pode ser independente uma molécula de homing, uma molécula de alvejamento, um ligante de afinidade, um peptídeo que penetra célula, uma molécula de escape endossômico, uma molécula de alvejamento subcelular, uma molécula de alvejamento nuclear, ou uma combinação. Uma ou mais das moléculas acessórias podem ser moléculas de homing. Uma ou mais das moléculas de homing podem ser independentemente um peptídeo RGD, iRGD, peptídeo Lyp-1, peptídeo NGR, iNGR, peptídeo RGR, peptídeo de ligação HER2, ou uma combinação.

A proteína ou peptídeo pode compreender um ou mais peptídeos acessórios. A sequência de aminoácidos pode compreender um ou mais peptídeos acessórios. Um ou mais dos peptídeos acessórios pode ser independentemente um peptídeo de homing, uma molécula de alvejamento, um ligante de afinidade, um peptídeo que penetra célula, um peptídeo de escape endossômico, um peptídeo de alvejamento subcelular, um peptídeo de alvejamento nuclear, ou uma combinação. Um ou mais dos peptídeos de homing podem ser independentemente um peptídeo RGD, iRGD, peptídeo Lyp-1, peptídeo NGR, iNGR, peptídeo RGR, peptídeo de ligação HER2, ou uma combinação. A proteína ou peptídeo pode compreender iRGD. A proteína ou peptídeo pode compreender um peptídeo Lyp-1. A proteína ou peptídeo pode compreender iNGR. A proteína ou peptídeo pode compreender peptídeo RGR.

A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente para as células do cérebro, tecido, ou ambos, células renais, tecido, ou ambos, células de pele e de tendão, tecido, ou ambos, células do pulmão, tecido, ou ambos, células pancreáticas, tecido, ou ambos, células intestinais, tecido, ou ambos, células da glândula adrenal, tecido, ou ambos, células retinais, tecido, ou ambas, células do fígado, tecido, ou ambas, células de próstata, tecido, ou ambos, células da endometriose, tecido, ou ambos, células do ovário, tecido, ou ambos, células do coração, tecido, ou ambas, células tumorais, tumores, vasos sanguíneos tumorais, ou uma combinação. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente a um tumor. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente à vasculatura do tumor. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente ao tecido pulmonar. A proteína ou peptídeo pode endereçar seletivamente ao tecido cardíaco.

A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a internalização em uma célula. A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a penetração nos tecidos. A sequência de aminoácidos pode ser selecionada para a internalização em uma célula e penetração no tecido.

Em algumas formas, a internalização, penetração, ou ambas da co- composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, pode ser reforçada quando a célula, tecido, ou ambos, é exposta ao elemento CendR mas não quando a célula, tecido, ou ambos, não está exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a penetração da co-composição no ou através do tecido pode ser reforçada quando o tecido é exposto ao elemento CendR mas não quando o tecido não é exposto ao elemento CendR. Em algumas formas, a internalização e penetração da co-composição em ou através de uma célula e tecido podem ser reforçadas quando a célula e tecido são expostos ao elemento CendR mas não quando a célula e tecido não é exposto ao elemento CendR.

O elemento CendR pode ser compreendido em uma composição CendR. A composição CendR pode compreender uma ou mais moléculas acessórias. A composição CendR pode compreender uma ou mais composições de carga. A composição CendR pode compreender uma ou mais moléculas de homing. O elemento CendR pode ser compreendido em um conjugado CendR. O conjugado CendR pode compreender uma ou mais moléculas acessórias. O conjugado CendR pode compreender uma ou mais composições de carga. O conjugado CendR pode compreender uma ou mais moléculas de homing.

A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos a uma pluralidade de moléculas acessórias. A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos a uma pluralidade de moléculas de homing. A célula, tecido, ou ambos, podem ser expostos a uma pluralidade de composições de carga. A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos a uma pluralidade de elementos CendR. A célula, tecido, ou ambos podem ser expostos a uma pluralidade de co-composições.

Como definido aqui, um elemento de terminação C (elemento CendR) ou é uma arginina, uma lisina, ou uma lisina-glicina (para um elemento CendR tipo 1), ou uma histidina ou uma sequência de aminoácidos tendo a sequência X1X2X3X4, em que Xi pode ser R, K ou H, em que X4 pode ser R, K, H ou KG, e em que X2 e X3 pode cada um ser, independentemente, qualquer aminoácido (para um elemento CendR tipo 2).

Como usado aqui, “selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula" refere-se à selecionar, identificar projetando ou categorizar uma sequência de aminoácidos com a intenção específica de obter entrada em uma célula de uma proteína ou peptídeo que é compreendida pela sequência de aminoácidos. Assim, por exemplo, selecionar uma sequência de aminoácidos para algum propósito ou capacidade que não seja a obtenção de entrada em uma célula de uma proteína ou peptídeo que é compreendida da sequência de aminoácidos e na ausência de uma intenção de obtenção de entrada em uma célula de uma proteína ou peptídeo que é compreendida da sequência de aminoácidos não constitui”selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula”. Selecionar uma sequência de aminoácidos para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em uma célula de uma proteína ou peptídeo que é compreendida da sequência de aminoácidos constitui ”selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera aquela seleção de uma sequência de aminoácidos, pelo menos, com a intenção específica de obter entrada em uma célula de uma proteína ou peptídeo que é compreendida da sequência de aminoácidos constitua”selecionar uma sequência de aminoácido para a internalização em uma célula”.

Como usado aqui, “selecionar uma sequência de aminoácidos para a penetração do tecido" refere-se a selecionar identificar projetando ou categorizar uma sequência de aminoácidos com a intenção específica de obter entrada em tecido (isto é, penetração no tecido) de uma proteína ou peptídeo que é composta da sequência de aminoácidos. Assim, por exemplo, selecionar uma sequência de aminoácidos para algum propósito ou capacidade que não seja a obtenção de entrada em tecido de uma proteína ou peptídeo que é compreendida da sequência de aminoácidos e na ausência de uma intenção de obter entrada em tecido de uma proteína ou peptídeo que é compreendido da sequência de aminoácidos não constitui ”selecionar uma sequência de aminoácidos para a penetração de tecido”. Selecionar uma sequência de aminoácidos para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em tecido de uma proteína ou peptídeo que é compreendido da sequência de aminoácidos constitui ”selecionar uma sequência de aminoácidos para a penetração do tecido”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera que a seleção de uma sequência de aminoácidos, pelo menos com a intenção específica de obter entrada em tecido de uma proteína ou peptídeo que é compreendido da sequência de aminoácidos constitui”selecionar uma sequência de aminoácidos para a penetração de tecido”.

Como usado aqui, “selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido" refere-se a selecionar, identificar projetando ou categorizar uma sequência de aminoácidos com a intenção específica de obter entrada de uma ou tanto de uma célula quanto de tecido de uma proteína ou peptídeo que é compreendido da sequência de aminoácidos. Assim, por exemplo, selecionar uma sequência de aminoácidos para algum propósito ou capacidade que não a obtenção de entrada em uma célula, tecido, ou ambos, de uma proteína ou peptídeo que é compreendido da sequência de aminoácidos e na ausência de uma intenção de obter entrada em uma célula, tecido, ou ambos de uma proteína ou peptídeo que é compreendido da sequência de aminoácidos não constitui ”selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”. Selecionar uma sequência de aminoácidos para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em um ou tanto uma célula quanto tecido de uma proteína ou peptídeo que é compreendido da sequência de aminoácidos que constituem”selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera aquela seleção de uma sequência de aminoácidos, pelo menos, com a intenção específica de obter entrada em uma célula, tecido, ou ambos, de uma proteína ou peptídeo que é compreendido da sequência de aminoácidos constitui ”selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”.

Como usado aqui, a menos que o contexto indique o contrário, “selecionar uma co-composição para a internalização em uma célula" refere-se a selecionar, identificar projetando ou categorizar uma co-composição e uma composição

CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR com a intenção específica de obter entrada em uma célula tanto da co-composição quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR. Assim, por exemplo, selecionar uma co-composição para algum propósito ou capacidade que não seja obter entrada em uma célula em combinação com entrada de uma composição CendR selecionada, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e na ausência de uma intenção de obter entrada em uma célula tanto de co-composição quanto de composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR não constitui”selecionar co-composição para a internalização em uma célula”. Selecionar uma co-composição para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em uma célula da co-composição não constitui”selecionar co-composição para a internalização em uma célula”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera que a seleção de uma co-composição, pelo menos com a intenção específica de obter entrada em uma célula de uma co-composição, constitua ”selecionar uma co-composição para a internalização em uma célula”.

Como usado aqui, a menos que o contexto indique o contrário, “selecionar uma co-composição para a penetração do tecido" refere-se à selecionar, identificar projetando ou categorizar uma co-composição e uma composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR com a intenção específica de obter entrada no tecido (isto é, a penetração nos tecidos) tanto da co-composição quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR. Assim, por exemplo, selecionar uma co-composição para algum propósito ou capacidade que não seja a obtenção de entrada no tecido em combinação com a entrada de uma composição CendR selecionada, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e na ausência de uma intenção de obter entrada em tecidos tanto da co-composição quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR não constitui”selecionar co- composição para a penetração de tecido”. Selecionar uma co-composição para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em tecido da co-composição não constitui ”selecionar co-composição para a penetração de tecido”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera a seleção de uma co-composição, pelo menos, com a intenção específica de obter entrada em tecido de uma co-composição constitui ”selecionar uma co- composição para a penetração de tecido”.

Como usado aqui, a menos que o contexto indique o contrário, “selecionar uma co-composição para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido" refere-se à selecionar, identificar projetando ou categorizar uma co- composição e uma composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR com a intenção específica de obter a entrada em um ou tanto em uma célula quanto tecido tanto da co-composição quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR. Assim, por exemplo, selecionar uma co-composição para algum propósito ou capacidade que não seja a obtenção de entrada em uma ou tanto em uma célula quanto tecido em combinação com a entrada de uma composição CendR selecionada, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e na ausência de uma intenção de obtenção de entrada em um ou tanto de uma célula quanto tecido tanto da co-composição quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR não constitui”selecionar co-composição para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”. Selecionar uma co-composição para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em um ou tanto em uma célula quanto em tecido da co-composição não constitui ”selecionar co-composição para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera que a seleção de uma co-composição, pelo menos com a intenção específica de obter entrada em uma ou tanto em uma célula quanto tecido de uma co-composição constitui”selecionar uma co-composição para internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”.

Como usado aqui, a menos que o contexto indique o contrário, “selecionar uma composição de carga para a internalização em uma” refere-se à selecionar, identificar projetando ou categorizar uma composição de carga e uma composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR com a intenção específica de obtenção de entrada em uma célula tanto da composição de carga quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR. Assim, por exemplo, selecionar uma composição de carga para algum propósito ou capacidade que não seja a obtenção de entrada em uma célula em combinação com a entrada de uma composição CendR selecionada, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e na ausência de uma intenção de obter entrada em uma célula tanto de composição de carga quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR não constitui”selecionar composição de carga para a internalização em uma célula”. Selecionar uma composição de carga para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em uma célula da composição de carga não constitui ”selecionar composição de carga para a internalização em uma célula”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera que a seleção de uma composição de carga, pelo menos com a intenção específica de obter entrada em uma célula de uma composição de carga constitui “selecionar uma composição de carga para a internalização em uma célula”.

Como usado aqui, a menos que o contexto indique o contrário, “selecionar uma composição de carga para a penetração do tecido" refere-se a selecionar, identificar projetando ou categorizar uma composição de carga e uma composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR com a intenção específica de obter entrada em tecido (isto é, a penetração nos tecidos) tanto da composição de carga quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR, ou elemento CendR. Assim, por exemplo, selecionar uma composição de carga para algum propósito ou capacidade que não seja a obtenção de entrada em tecido em combinação com a entrada de uma composição CendR selecionada, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e na ausência de uma intenção de obter entrada em tecido tanto da composição de cargas quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR não constitui”selecionar composição de carga para a penetração de tecido”. Selecionar uma composição de carga para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em tecido da composição de carga não constitui ”selecionar composição de carga para a penetração de tecido”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera que a seleção de uma composição de carga, pelo menos com a intenção específica de obter entrada em tecido de uma composição de carga constitua ”selecionar uma composição de carga para a penetração de tecido”.

Como usado aqui, a menos que o contexto indique o contrário, “selecionar uma composição de carga para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido" refere-se à selecionar, identificar projetando ou categorizar uma composição de carga e uma composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR com a intenção específica de obtenção de entrada em uma ou tanto em células quanto tecidos tanto da composição de carga quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR. Assim, por exemplo, selecionar uma composição de carga para algum propósito ou capacidade que não seja a obtenção de entrada em uma tanto em uma célula quanto tecido em combinação com a entrada de uma composição CendR selecionada, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e na ausência de uma intenção de obtenção de entrada em uma ou tanto em uma célula quanto tecido tanto da composição de carga quanto da composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR não constitui”selecionar a composição de carga para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”. Selecionar uma composição de carga para algum propósito ou capacidade, bem como para a obtenção de entrada em uma ou tanto em uma célula quanto tecido da composição de carga não constitui ”selecionar composição de carga para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”. Assim, a presença de objetivos adicionais ou propósitos não altera que a seleção de uma composição de carga, pelo menos com a intenção específica de obter entrada em uma ou tanto em uma célula quanto tecido de uma composição de carga constitua ”selecionar uma composição de carga para a internalização em uma célula e/ou penetração de tecido”.

Como usado aqui, “fazer com que um composto ou composição seja covalentemente acoplado ou associado de modo não-covalente" com outra coisa se refere à qualquer ação que resulta em um composto ou composição que não é covalentemente acoplado ou associado de modo não-covalente ao tornar-se algo mais ou que chegam ao estado de ser covalentemente acoplados ou associados de modo não-covalente à outra coisa. Como exemplo, acoplar covalentemente uma molécula de homing a um elemento CendR constitui ”fazer com que uma molécula de homing seja covalentemente acoplada ou associada de modo não- covalente" com o elemento CendR. Como outro exemplo, um peptídeo CendR que começa como um conceito inexistente e, em seguida, é sintetizado como parte de uma composição que inlcui a coisa à qual o peptídeo CendR é para ser acoplado ou associado constitui” fazer com que um peptídeo CendR seja covalentemente acoplado ou associado de modo não covalente" com a coisa. Por exemplo, a síntese de um peptídeo que inclui tanto uma sequência de aminoácidos de interesse quanto uma sequência de aminoácidos compreendendo um elemento de terminação C constitui fazer com que a sequência de aminoácidos de interesse seja covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente à sequência de aminoácidos compreendeendo um elemento de terminação C. No entanto, e em geral, a síntese de uma proteína ou peptídeo que inclui naturalmente tanto a sequência de aminoácidos de interesse quanto uma sequência de aminoácidos compreendendo um elemento de terminação C pode ser excluída como um processo de” fazer com que a sequência de aminoácidos de interesse seja covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente" com a sequência de aminoácidos compreendendo um elemento de terminação C.

Como usado aqui, “fazer com que uma co-composição seja covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente" com outra coisa se refere a qualquer ação que resulta em uma co-composição que não é outra coisa tornar-se ou entrar em estado de ser e a outra coisa. Mais claramente, “fazer com que uma co-composição seja covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente" com outra coisa se refere a qualquer ação que resulta em uma co-composição tornar-se algo mais ou entrar em estado de ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente. Como exemplo, acoplar covalentemente uma co-composição à outra co-composição constitui ”fazer com que uma co-composição seja covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente "com outra co-composição. Como outro exemplo, uma co- composição que se inicia como um conceito inexistente e, em seguida, é sintetizada como parte de uma composição que inclui a coisa a qual a co- composição é para ser acoplada ou associada constitui ”fazer com que uma co- composição seja acoplada covalentemente ou associada de modo não-covalente" com a coisa.

Como usado aqui, “fazer com que uma composição de carga seja covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente" com outra coisa se refere a qualquer ação que resulta em uma composição de carga que não é outra coisa tornar-se ou entrar em estado de ser e o algo mais. Mais claramente, “fazer com que uma composição de carga seja covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente" com outra coisa se refere à qualquer ação que resulta em uma composição de carga tornar-se algo mais ou entrar em estado de ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente. Como exemplo, acoplar covalentemente uma composição de carga à outra composição de carga constitui ”fazer uma composição de carga ser covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente" com a composição de outras cargas. Como outro exemplo, uma composição de carga que começa como um conceito inexistente e, em seguida, é sintetizada como parte de uma composição que compreende a coisa à qual a composição de carga é para ser acoplada ou associada constitui ”fazer uma composição de carga ser covalentemente acoplada ou associada de modo não covalente" com a coisa.

Como usado aqui, o ”elemento CendR" refere-se a uma sequência de aminoácidos tendo uma arginina de terminação C, lisina ou sequência de lisina- glicina (para um elemento CendR tipo 1), ou uma histidina de terminação C ou uma sequência de aminoácido de terminação C com a sequência de X 1X2X3X4, em que Xi pode ser R, K ou H, em que X4 pode ser R, K, H ou KG, e em que X2 e X3 pode ser, cada um, independentemente, qualquer aminoácido (para um elemento CendR tipo 2). Alguns elementos CendR tipo 2 também podem ser descritos como R/K/HXXR/K/H (SEQ ID NO: 20), R/KXXR/K (SEQ ID NO: 23) e R/K/HXXKG (SEQ ID NO: 21). Os aminoácidos X1, X2 e X3 também podem ser selecionados para recrutar proteínas adicionais para moléculas NRP-1 na superfície da célula, tal como pela inclusão de um peptídeo acessório de sobreposição ou peptídeo de homing. Isto pode ser aplicado, por exemplo, para modular a seletividade e a internalização e/ou potência de penetração de tecido dos elementos CendR (e as composições, conjugados, proteínas e peptídeos contendo elementos CendR). Um elemento CendR pode, por exemplo, compreender uma proteína ou peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos tendo um elemento de terminação C, compreende uma proteína ou peptídeo consistindo de uma sequência de aminoácidos tendo um elemento de terminação C, ou constituir de uma sequência de aminoácidos tendo um elemento de terminação C. Opcionalmente, certos aminoácidos também podem ser excluídos do uso para X2, X3, ou ambos em elementos CendR da forma X1X2X3X4. Por exemplo, se desejado, G e D podem ser excluídos do uso simultâneo como X2 e X3, respectivamente.

Exemplos de elementos CendR incluem XXR/K/H, XXR/K, XXR/H, XXK/H, XXR, XXK, XXH, XXKG, RXXR/K/H, RXXR/K, RXXR/H, RXXK/H (SEQ ID NO:243), RXXR, RXXK, RXXH, RXXKG, KXXR/K/H, KXXR/K, KXXR/H (SEQ ID NO:244), KXXK/H, KXXR, KXXK, KXXH, KXXKG, HXXR/K/H (SEQ ID NO:245), HXXR/K, HXXR/H, HXXK/H, HXXR, HXXK, HXXH, HXXKG, R/K/HXXR, R/KXXR, R/HXXR, K/HXXR (SEQ ID NO:246), RXXR, KXXR, HXXR, R/K/HXXK, R/KXXK, R/HXXK (SEQ ID NO:247), K/HXXK, RXXK, KXXK, HXXK, R/K/HXXH (SEQ ID NO:248), R/KXXH, R/HXXH, K/HXXH, RXXH, KXXH, HXXH, R/K/HXXKG, R/KXXKG, R/HXXKG, K/HXXKG, RXXKG, KXXKG e HXXKG.

Por uma questão de conveniência, motifs de aminoácidos que constituem um elemento CendR se uma arginina, lisina, par de lisina-glicina ou histidina estavam na terminação C e em que a exposição no futuro da arginina, lisina, par de lisina-glicina ou histidina na terminação C está prevista ou pretendida, podem ser referidos como elementos CendR ou elementos CendR latentes.

Elementos CendR podem ser compostos de, por exemplo, aminoácidos, análogos de aminoácidos, peptídeos análogos, miméticos de aminoácidos, peptídeos miméticos e etc. Embora estruturas, desenhos e etc de elementos CendR e peptídeos CendR sejam descritos aqui em termos de aminoácidos e peptídeos composto de aminoácidos por conveniência, entende-se que análogos análogos, miméticos, formas modificadas e etc de aminoácidos e peptídeos também podem ser usados como elementos CendR e peptídeos CendR e projetados usando princípios similares.

Conforme revelado aqui, certos componentes podem sobrepor-se com elementos CendR. Geralmente, um componente que se sobrepõe a um elemento CendR será um componente que compreende uma sequência de aminoácidos e toda ou de parte da sequência de aminoácidos do componente irá sobrepor com aminoácido(s) do elemento CendR. Geralmente, tal sobreposição é caracterizada por aminoácidos que fazem parte, dentro, ou especificando o componente são compartilhados com ou estão na faixa de aminoácidos que constituem o elemento CendR. Para os elementos CendR do tipo 1, um componente sobrepõe com o elemento CendR se a arginina de terminação C, lisina ou sequência de lisina- glicina é um aminoácido que faz parte do, dentro, ou especifica o componente. Por exemplo, o peptídeo de homing NGRAHA (SEQ ID NO: 24) pode ser sobreposto com um elemento CendR compreendendo arginina. Neste exemplo, o resíduo de arginina no peptídeo de homing é o elemento CendR.

Para elementos CendR do tipo 2, um componente sobrepõe com o elemento CendR se um ou mais dos aminoácidos X1, X2, X3 e/ou X4 ou se a histidina de terminação C é um aminoácido que faz parte, dentro, ou especifica o componente. Por exemplo, o peptídeo de homing CREKA (SEQ ID NO: 7) pode ser sobreposto com um elemento CendR compreendendo RGCR (SEQ ID NO: 19) para formar RGCREKA (SEQ ID NO: 18) (com o elemento CendR sublinhado). Neste exemplo, os dois últimos aminoácidos do elemento CendR (CR) também servem como os dois primeiros aminoácidos do peptídeo de homing. Como outro exemplo, o peptídeo de homing NGRAHA (SEQ ID NO: 24) pode ser sobreposto com um elemento CendR do tipo 2, adicionando uma arginina (ou lisina ou histidina) e usando a arginina interna resultando no peptídeo de homing sobreposto e elemento CendR RNGRAHA (SEQ ID NO: 25) (com o elemento CendR sublinhado). Como outro exemplo, o peptídeo de homing CREKA (SEQ ID NO: 7) pode ser sobreposto com um elemento CendR compreendendo RREK (SEQ ID NO: 26) para formar RREKA (SEQ ID NO: 27) (com o elemento CendR sublinhado). A cisteína no peptídeo CREKA não é crítica para a sua função de homing. Como outro exemplo, o peptídeo de homing NGR pode ser sobreposto ao elemento CendR, um motif clivável, GPDC (SEQ ID NO: 28), pode ser adicionado para torná-lo ativável, e o peptídeo pode ser circularizado usando cisteínas terminais para formar CRNGRGPDC (SEQ ID NO: 41) (com o elemento CendR sublinhado). Como outro exemplo, um peptídeo CendR ativável por uroquinase com afinidade para os vasos sanguíneos angiogênicos (para alvejamento de tumor) pode ser feito pela combinação de um elemento CendR (sublinhado), uma sequência clivável de uroquinase (negrito), e uma sequência que endereça às integrinas angiogênicas (sublinhado duplo): RPARSGRAGGSVACRGDC (SEQ ID NO: 43). Como outro exemplo, um peptídeo CendR ativável por furina com afinidade para os vasos sanguíneos angiogênico (para alvejamento de tumor) pode ser feito pela combinação de um elemento CendR (sublinhado), uma sequência clivável de furina e uma sequência de homing de CD13 (sublinhado duplo):

RPARVKRNGRAHA (SEQ ID NO: 42). Como outro exemplo, um peptídeo CendR ativável por furina com afinidade aos vasos sanguíneos cerebrais (por alvejamento de CNS) pode ser feita pela combinação de um elemento CendR (sublinhado), uma sequência clivável de furina e uma sequência de homing de microvasculatura cerebral (sublinhado duplo): RPARVKRGGSCAGALCY (SEQ ID NO: 44).

Componentes que têm certas sequências de aminoácidos especificadas e, por exemplo, um espaçador especificado que não tem uma sequência de aminoácido especificada ainda pode ser referida à sobrepor-se com um elemento CendR se todo ou parte do espaçador do componente compartilhado com ou estão em uma faixa de aminoácidos que constituem o elemento CendR. Por exemplo, se um componente é definido por uma sequência de aminoácidos TGLTAXXXXW (SEQ ID NO: 45), o componente sobrepõe-se com um elemento CendR é o elemento CendR está dentro da região XXXX do componente. Componentes que se sobrepõem com elementos CendR podem, e normalmente se estenderão além do elemento CendR em uma ou ambas as extremidades (isto é, além da terminação N do elemento CendR, além da extremidade de terminação C do elemento CendR, ou ambos.

Usando esses princípios, a especificação estrutural dos elementos CendR como revelada aqui e a especificação estrutural de um componente pode ser sobreposta com o elemento CendR, numerosos elementos CendR sobrepondo-se podem ser desenhados e usados. Onde a especificação estrutural do elemento CendR e dos componentes são compatíveis, múltiplos componentes diferentes podem ser sobrepostos com um elemento CendR único. Por exemplo, tanto um peptídeo de homing quanto um local de clivagem de protease pode ser sobreposto com o mesmo elemento CendR.

Os componentes também podem ser adjacentes a um elemento CendR. Como usado aqui, componentes que são adjacentes a um elemento CendR não sobrepõe a um elemento CendR. Componentes que são adjacentes a um elemento CendR podem ser adjacentes à cada extremidade do elemento CendR. Um componente é adjacente à um elemento CendR se um aminoácido (ou outra molécula) do componente é acoplada covalentemente a um aminoácido terminal de um elemento CendR. Um componente que nem sobrepõe ou é adjacente a um elemento CendR, mas que é covalentemente acoplado ao elemento CendR pode estar a montante (de cada terminação N), a jusante (de cada terminação C), ou ambos (em moléculas circulares) do elemento CendR.

Qualquer componente, tal como os componentes revelados aqui podem sobrepor, ser adjacente à e/ou ser a montante, jusante, ou ambos, de um elemento CendR. Exemplos de tais componentes incluem moléculas acessórias, moléculas de homing, locais de clivagem de protease e etc. É útil ter alguns componentes acoplados a ou associados a um elemento CendR para estar a jusante (terminação C) do elemento CendR. Por exemplo, elementos CendR ativáveis tendo uma proteína acessória de um peptídeo de homing a jusante do elemento CendR (e consequentemente a jusante do local de clivagem para ativação) será separado do elemento CendR quanto este é ativado. Como outro exemplo, elementos CendR ativáveis com uma molécula acessória ou uma molécula de homing a jusante do elemento CendR (e, consequentemente a jusante do local de clivagem para ativação) será separado do elemento CendR quando estiver ativado. Isso pode ter algumas vantagens tais como fazer a função de elemento CendR mais eficiente e reduzir a chance para efeitos alheios do componente eliminado.

Qualquer elemento CendR revelado aqui em qualquer contexto, combinação ou uso pode ser um elemento CendR em geral, um elemento CendR tipo 1, um elemento CendR tipo 2, um elemento CendR específico ou uma combinação. Em algumas formas, o elemento CendR é um elemento CendR tipo 1. Em algumas formas, o elemento CendR é um elemento CendR tipo 2. Em algumas formas, o elemento CendR não é um elemento CendR tipo 1. Um exemplo de um elemento CendR que não um elemento CendR tipo 1 é um elemento CendR tendo uma histidina de terminação C. Em algumas formas, o elemento CendR não é um elemento CendR do tipo 2. Um exemplo de um elemento CendR que não é um elemento CendR do tipo 2 é um elemento CendR tendo uma arginina de terminação C, lisina ou par de lisina-glicina em que os aminoácidos de 3 aminoácidos à montando da arginina ou lisina não é arginina, lisina ou histidina. Em algumas formas, o elemento CendR é um elemento CendR tipo 1 e não um elemento CendR do tipo 2. Um exemplo de um elemento CendR que é um elemento CendR do tipo 1 e não um elemento CendR do tipo 2 é um elemento CendR tendo uma arginina de terminação C, lisina ou par de lisina- glicina em que os aminoácidos de três aminoácidos a montante da arginina ou lisina não é arginina, lisina ou histidina. Em algumas formas, o elemento CendR é um elemento CendR do tipo 2 e não um elemento CendR do tipo 1. Um exemplo de um elemento CendR que é um elemento CendR do tipo 2 e não um elemento CendR do tipo 1 é um elemento CendR tendo uma histidina de terminação C. Outro exemplo de um elemento CendR que é um elemento CendR do tipo 2 e não um elemento CendR do tipo 1 é um elemento CendR tendo uma arginina de terminação C, lisina, histidina ou par de lisina-glicina em que os aminoácidos de três aminoácidos a montante da arginina, lisina ou histidina é uma arginina, lisina ou histidina. Em algumas formas, o elemento CendR é um elemento CendR do tipo 1 ou um elemento CendR do tipo 2. Qualquer tipo de elemento CendR, conjunto de elementos CendR e/ou elementos CendR específicos podem estar especificamente incluídos ou excluídos de qualquer contexto, combinação ou uso. Por exemplo, qualquer elemento CendR descrito no pedido de patente publicação No. 2009026372 pode ser especificamente incluso ou excluído. O pedido de patente publicação US No. 20090226372 está incorporado aqui por referência em sua integridade, e especificamente para sua descrição dos elementos CendR.

Um elemento CendR que pode ser internalizado em uma célula pode ser referido como um elemento CendR de internalização. Um elemento CendR que pode penetrar no tecido pode ser referido como um elemento CendR de penetração. Um elemento CendR que pode ser internalização em uma célula e que pode penetrar no tecido pode ser referido como um elemento CendR de internalização e de penetração. A menos que o contexto indique claramente o contrário, referência ao ”elemento CendR” refere-se a qualquer um desses, seja individualmente, coletivamente ou em qualquer combinação.

Como usado aqui, “composição CendR” refere-se à uma composição que compreende um elemento CendR. O elemento CendR pode ser, por exemplo, ativo, ativável ou bloqueado. Por exemplo, a composição CendR pode compreender uma proteína ou peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido que compreende um elemento CendR em que a sequência de aminoácido está na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo.

Como usado aqui, “elemento CendR ativável” refere-se a um elemento CendR tendo uma molécula, fração, nanopartícula, composto ou outra composição covalentemente acoplada ao elemento CendR, tal como ao grupo carboxila terminal do elemento de terminação C, onde a molécula, fração, nanopartícula, composto ou outra composição pode bloquear a internalização e/ou penetração de tecido da composição CendR, conjugado, molécula, proteína, peptídeo e etc e onde a molécula, fração, nanopartícula, composto ou outra composição pode ser removida (para expor o grupo carbóxi terminal, por exemplo). Por exemplo, o elemento CendR ativável pode estar na extremidade de terminação C do peptídeo e pode evitar o elemento CendR de ser internalizado e/ou penetrar o tecido. A molécula, nanopartícula, fração, composto ou outra composição covalentemente acoplada ao elemento CendR pode ser referida como um”grupo de bloqueio”. Por exemplo, o grupo de bloqueio pode ser acoplado ao grupo carboxila terminal da arginina de terminação C ou lisina ou outro aminoácido de terminação C do elemento CendR, ao aminoácido de terminação C do elemento CendR ou a um aminoácido do elemento CendR ao invés do aminoácido de terminação C. O grupo de bloqueio também pode ser acoplado, ou associado com uma parte de uma composição CendR, conjugado, molécula, proteína, peptídeo e etc, ao invés do elemento CendR desde que este evite o elemento CendR de ser internalizado e/ou de penetrar o tecido. Uma composição CendR compreendendo um elemento CendR ativável pode ser referida como uma composição de CendR ativável. Uma molécula CendR compreendendo um elemento CendR ativável pode ser referida como uma molécula de CendR ativável. Um conjugado CendR compreendendo um elemento CendR ativável pode ser referido como um conjugado de CendR ativável. Uma proteína CendR compreendendo um elemento CendR ativável pode ser referida como uma proteína CendR ativável. Um peptídeo CendR compreendendo um elemento CendR ativável pode ser referido como um peptídeo CendR ativável.

Um elemento CendR ativável pode ser bloqueado da internalização em uma célula, da penetração em tecido, ou ambas. Geralmente, um elemento CendR ativável será bloqueado tanto da internalização em uma célula quanto da penetração em tecido. Tais elementos CendR ativáveis podem ser referidos como elementos CendR de internalização e penetração ativáveis. Porém, alguns elementos CendR poderiam ser bloqueados apenas da penetração em tecido ou apenas da internalização em uma célula. Tais elementos CendR ativáveis podem ser referidos como elementos CendR de internalização ativáveis (para elementos CendR que são bloqueados apenas para internalização em uma célula) ou como elementos CendR de internalização e penetração ativáveis (para elementos CendR que são bloqueados apenas de penetração de tecido). Geralmente, os elementos CendR de internalização que são ativáveis serão elementos CendR de internalização ativáveis. Similarmente, elementos CendR de penetração que são geralmente ativáveis serão elementos CendR de penetração ativáveis. Elementos CendR de internalização e penetração que são ativáveis serão elementos CendR de internalização e penetração ativáveis. Remoção do grupo de bloqueio permitirá que o elemento CendR seja internalizado em uma célula, penetre o tecido, ou ambos.

A ligação clivável de um elemento CendR ativável pode ser clivada de qualquer forma adequada. Por exemplo, a ligação clivável pode ser clivada enzimaticamente ou não-enzimaticamente. Para clivagem enzimática, a enzima de clivagem pode ser suprida ou pode estar presente em um local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou se acumula. Por exemplo, a enzima pode estar presente em proximidade a uma célula para a qual o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou se acumula. Para clivagem não- enzimática, o elemento CendR pode ser posto em contato com um agente de clivagem, pode ser colocado em condições de clivagem, ou ambos. Um agente de clivagem é qualquer substância que pode mediar ou estimular a clivagem da ligação clivável. Um agente de clivagem não enzimática é qualquer agente de clivagem exceto enzimas. Condições de clivagem podem ser qualquer solução ou condições ambientais que podem mediar ou estimular a clivagem da ligação clivável. Por exemplo, algumas ligações lábeis podem ser clivadas em condições ácidas, condições alcalinas, na presença de um grupo reativo, etc. Condições de clivagem não-enzimática são quaisquer condições de clivagem exceto a presença de enzimas. Condições de clivagem de não-agente são quaisquer condições de clivagem exceto a presença de agentes de clivagem.

Elementos CendR ativáveis podem ser ativáveis em circunstâncias amplas ou restritas. Geralmente, os elementos CendR ativáveis são ativáveis em relação a um agente específico ou grupo de agentes que podem ativar os elementos CendR. Assim, por exemplo, um elemento CendR ativável particular só pode ser ativável por certas proteases. Tal elemento CendR pode ser referido como um elemento CendR ativável, mas também pode ser referido como sendo ativável pelas proteases particulares.

Um”elemento CendR ativável por protease" (ou”elemento CendR ativável por protease") refere-se a um elemento CendR ativável em que o grupo de bloqueio é acoplado ao elemento CendR através de uma ligação peptídica e em que a ligação peptídica pode ser clivada por uma protease. Clivagem dessa ligação peptídica em um elemento CendR ativável por protease torna o elemento CendR capaz de internalização em uma célula e/ou de penetração nos tecidos. Em um exemplo, o grupo de bloqueio pode ser acoplado ao elemento CendR por meio de uma ligação clivável ou lábil.

A ligação clivável pode ser clivada, por exemplo, por uma enzima ou um composto químico. Clivagem ou 'labilização' da ligação em um elemento CendR ativável torna o elemento CendR capaz de internalização em uma célula e/ou de penetração nos tecidos. Tal clivagem ou 'labilização' pode ser referida como uma ativação do elemento CendR. O elemento CendR ativável por protease é uma forma de elemento CendR ativável. Os aminoácidos X2 e X3 de um elemento CendR da forma X1X2X3X4 podem ser selecionados para fins específicos. Por exemplo, X2, X3, ou ambos, podem ser escolhidos para formar a totalidade ou uma porção de uma sequência de reconhecimento de protease. Isso seria útil, por exemplo, para especificar ou permitir a clivagem de um peptídeo tendo o elemento CendR como um elemento CendR latente ou críptico que é ativado por clivagem após o ácido amino X4. Exemplos de tais escolhas de aminoácidos são mostrados nas Tabelas 1 e 2. Locais de clivagem da protease podem ser previstos com base no conhecimento desenvolvido e conhecido daqueles versados na técnica. Por exemplo, a previsão da clivagem pode ser avaliada no site cbs.dtu.dk/services/Prop/. Uma classe útil de elementos CendR pode consistir de elementos CendR desbloqueados e elementos CendR ativáveis, o que exclui classe de elementos CendR bloqueados que não são ativáveis.

Proteases úteis incluem enzimas que clivam no lado da terminação C dos resíduos básicos (os resíduos de terminação C termina dos elementos CendR podem ser resíduos básicos) e enzimas que reconhecem sequência no lado de terminação C dos seus locais de clivagem (permitindo assim a livre escolha da sequência de terminação C do produto de clivagem). Exemplos de proteases úteis incluem, por exemplo, proteases de serina (incluindo, por exemplo, ativadores de plasmina e de plasminogênio), uroquinase, convertases de proproteina (ver, por exemplo, Duckert et al. Prediction of proprotein convertase cleavage sites Protein engineering Design and Selection 17 (1): 107-112 (2004)), furinas e carboxipeptidases, tais como carboxipeptidase A (aminoácidos com cadeias laterais de hidrocarbonetos aromáticos ou ramificados), carboxipeptidase específica de glutamato, carboxipeptidase específica de prolina e PSMA. Proteases de serina são particularmente úteis para os elementos CendR e as composições CendR selecionadas para células de câncer e tumores. Exemplos de enzimas que clivam no lado da terminação C de resíduos básicos incluem Arg- C protease (que cliva no lado da terminação terminal C de resíduos de arginina; Keil, especificidade de proteólise (Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg-New York (1992)), clostripaína (que cliva no lado da terminação C dos resíduos de arginina; Keil, 1992), enteroquinase (que cliva após a sequência-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys; SEQ ID NO: 22), Fator Xa (que cliva após a sequência-Gly-Arg; Fujikawa et al, Ativação de fator X bovino (fator Stuart): conversão do fator Xa alfa para fator Xa beta, Proc Natl Acad Sci 72: 3359-3363 (1975) ), Lys-C (que cliva no lado de terminação C dos resíduos de lisina; Keil, 1992), trombina (que cliva no lado da terminação C de resíduos de arginina; Keil, 1992), tripsina (que cliva no lado da terminação C da arginina e resíduos de lisina; Keil, 1992), proteases de serina, convertases de proproteína (tais como PCl, PC2, PC3, PC4, PC5, PC6, PC7, PC8, furina, Pace, PACE4, protease de Local 1, S1P, SKI, NARC-1, PCSK1, PCSK2, PCSK3, PCSK4, PCSK5, PCSK6, PCSK7 , PCSK8 e PCSK9), plasmina e ativadores do plasminogênio. Exemplos de enzimas que reconhecem sequência no lado de terminação C de seus locais de clivagem incluem endopeptidase Asp- N (que cliva no lado da terminação N do ácido aspártico; Keil, 1992) e carboxipeptidases tal como carboxipeptidase A (que cliva resíduos de terminação C, exceto prolina, lisina e arginina).

Exemplos de proteases também são descritos em Hook, mecanismos proteolíticos e celulares no processamento de prohormônio e proproteína, empresa RG Landes, Austin, Texas, EUA (1998); Hooper et al, Biochem. J. 321: 265-279 (1997); Werb, Cell 91:. 439-442 (1997); Wolfsberg et al, Cell J. Biol. 131: 275-278 (1995); Murakami e Etlinger, Biochem. Biophys. Res. Comm. 146: 12491259 (1987); Berg et al, Biochem. J. 307: 313-326 (1995); Smyth e Trapani, Imunologia Hoje 16: 202-206 (1995); Talanian et al, J. Biol. Chem. 272: 96779682 (1997) e Thornberry et al, J. Biol. Chem. 272: 17907-17911 (1997). Tabela 1. Fago de controle clivável por protease usado para estudos de alvejamento in vitro e in vivo. Locais de clivagem no fago de substrato são indicados por uma seta. Resíduos de terminação C proteoliticamente expostos estão em negrito.

Tabela 2. Regras de Clivagem

As seguintes enzimas podem clivar quando as respectivas composições dos locais de clivagem são encontradas.

Regras de Exceção: As regras de clivagem acima não se aplicam, ou seja, não ocorre clivagem, com as seguintes composições dos locais de clivagem:

Exopeptidases, tais como carboxipeptidases, podem ser usadas para ativar os elementos CendR. Por exemplo, carboxipeptidases são proteases úteis para ativar elementos CendR. Carboxipeptidases removem o ácido amino de terminação C de proteínas e peptídeos. Carboxipeptidases podem, dentro dos limites de suas preferências de substrato, remover aminoácidos sequencialmente a partir de uma proteína ou peptídeo. Assim, por exemplo, a carboxipeptidase poderia hidrolizar completamente ou quase completamente uma proteína de peptídeo. Devido ao fato de várias carboxipeptidases terem certas preferências de substrato ou limitações, e porque carboxipeptidases geralmente clivam apenas ligações peptídicas, a presença de certos aminoácidos, modificações e/ou ligações de não-peptídeo podem controlar clivagem de carboxipeptidase de uma proteína ou peptídeo.

No contexto de elementos CendR, a estrutura de e/ou modificações para uma proteína, peptídeo ou sequência de aminoácidos compreendendo um elemento CendR pode ser escolhido para resultar em clivagem por uma carboxipeptidase terminando no ácido amino de terminação C do elemento CendR. Isso pode ser feito, por exemplo, incluindo como o penúltimo aminoácido em um elemento CendR um aminoácido que é desfavorecido por, ou que bloqueia a carboxipeptidase de clivar sua ligação com os aminoácidos de terminação C. Prolina é um exemplo de tal aminoácido (para muitas carboxipeptidases). Como outro exemplo, a ligação entre o aminoácido de terminação C e do penúltimo aminoácido no elemento CendR pode ser protegida da clivagem da protease. Por exemplo, a ligação pode ser uma ligação não-peptídica ou pode incluir uma modificação, tal como a metilação. Como outro exemplo, um ácido D-amino pode ser usado como o aminoácido de terminação C, o penúltimo aminoácido, ou ambos, em um elemento CendR. Como outro exemplo, um ácido D-amino pode ser usado como o aminoácido de terminação C em um elemento CendR. Elementos CendR com o uso limitado de aminoácidos D retêm atividade de internalização e de penetração. Como outro exemplo, um aminoácido que serve como um substrato para uma carboxipeptidase pode estar localizado na terminação C para o aminoácido de terminação C no elemento CendR. Por exemplo, para uma carboxipeptidase específica de glutamato, tal como PSMA, um ácido de aminoácido glutâmico pode ser colocado adjacente à terminação C do aminoácido de terminação C no elemento CendR e na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo contendo o elemento CendR. Outros aminoácidos específicos (ou preferindo) carboxipeptidases podem ser usados de maneiras similares. Nestes casos, o aminoácido de terminação C no elemento CendR não deve ser um substrato (ou deveria ser um substrato desfavorecido) para a carboxipeptidase.

Modificações e ligações em aminoácidos que podem reduzir ou eliminar a clivagem de protease em uma ligação são conhecidas e podem ser usadas nos elementos CendR revelados. Por exemplo, uma variedade de técnicas de modificação química e frações são descritas, por exemplo, nas Pat. US N°s 5.554.728, 6.869.932, 6.828.401, 6.673.580, 6.552.170, 6.420.339, U. S. Pat. Pub. 2006/0210526 e Pedido de patente Intl. Pat. App. WO 2006/136586. Alguns exemplos dessas modificações incluem substitutos de ligação peptídica, tais como aqueles descritos no Cudic e Stawikowski, Peptidomimetics: Fmoc SolidPhase Pseudopeptide Synthesis, in Methods in Molecular Biology, vol. 294, 223246 (2008), e modificações químicas, tais como um nivelamento de maleimida, anexação de polietileno glicol (PEG), maleidificação, acilação, alquilação, esterificação e amidificação, para produzir análogos estruturais do peptídeo. Estas e outras modificações são adicionalmente descritas neste documento.

Algumas formas úteis de elementos CendR ativáveis podem ser, ou podem estar em, proteínas ou peptídeos circulares. O elemento CendR seria latente em tais estruturas circulares porque o elemento CendR não estaria em uma extremidade de terminação C livre. Proteínas e peptídeos circulares podem ser formados em uma variedade de formas conhecidas na técnica, tais como por ligações de cisteína, por ligações covalentes, pela reação de grupos ativos e por meio de ligantes. Ligações de cisteína são uma maneira útil para circularizar proteínas e peptídeos. Deve ser entendido que a ligação de circularização não precisa estar na extremidade de terminação C do elemento CendR. Ao colocar a ligação de circularização longe da extremidade de terminação C do elemento CendR, a escolha da ligação de circularização e a escolha da ligação clivável do elemento CendR latente podem ser, cada uma, de forma independente. Por exemplo, a ligação de circularização pode ser uma ligação de cisteína, enquanto a ligação clivável do elemento CendR latente pode ser uma ligação peptídica (em que a ligação peptídica pode estar, por exemplo, no local de clivagem de um alvo de protease).

O elemento CendR em uma proteína, peptídeo, sequência de aminoácido ou composição CendR revelada geralmente deve estar em uma extremidade de terminação C livre ou no lado de terminação N do local de clivagem em um elemento CendR ativável.

Em algumas formas, um elemento CendR que não está em uma extremidade de terminação C livre de um peptídeo ou proteína pode mediar a internalização celular e/ou penetração nos tecidos. Quando presente, este efeito é normalmente menos eficiente do que a internalização e penetração nos tecidos usando um elemento CendR desbloqueado. Elementos CendR que não estão em uma extremidade de terminação C livre de um peptídeo ou proteína, mas que podem mediar a internalização celular e/ou penetração nos tecidos podem ser referidos como elementos CendR internos. Elementos CendR internos são distinguidos dos elementos CendR bloqueados porque os elementos CendR bloqueados não mediam a internalização celular e/ou penetração nos tecidos (a não ser desbloqueados). Elementos CendR internos podem ser usados em peptídeos lineares, circulares ou ramificados e proteínas. Elementos CendR internos também podem ser ativáveis por clivagem para expor o elemento CendR na extremidade de terminação C de uma proteína ou peptídeo. Esta ativação de um elemento CendR interno serviria para aumentar a atividade de internalização e/ou de penetração nos tecidos.

Em algumas formas, o peptídeo ou proteína da composição CendR pode ser internalizada em uma célula quando a sequência de aminoácido selecionada (elemento CendR) está presente no peptídeo ou proteína, mas não quando o aminoácido selecionado não está presente no peptídeo ou proteína. Isto pode ser usado para detectar se uma proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR, por exemplo. O elemento CendR pode ser internalizado em uma célula sem ser associado a outra coisa senão sua própria sequência, por exemplo. O elemento CendR pode ser o único elemento de internalização funcional na proteína ou peptídeo, ou a composição CendR, ou pode haver um ou mais elementos adicionais de internalização funcional. Em algumas formas, a composição CendR pode ser internalizada em uma célula quando a sequência de aminoácido selecionada (elemento CendR) está presente na composição CendR, mas não quando o aminoácido selecionado não está presente na composição CendR.

Similarmente, em algumas formas, o peptídeo ou proteína da composição CendR pode penetrar o tecido quando a sequência de aminoácido selecionada (elemento CendR) está presente no peptídeo ou proteína, mas não quando o aminoácido selecionado não está presente no peptídeo ou proteína. Isto pode ser usado para detectar se uma proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR, por exemplo. O elemento CendR pode penetrar o tecido sem estar associado a outra coisa senão sua própria sequência, por exemplo. O elemento CendR pode ser o único elemento de penetração funcional do tecido na proteína ou peptídeo, ou a composição CendR, ou pode haver um ou mais elementos adicionais de penetração dos tecidos funcionais. Em algumas formas, a composição CendR pode penetrar o tecido quando a sequência de aminoácido selecionada (elemento CendR) está presente na composição CendR, mas não quando o aminoácido selecionado não está presente na composição CendR.

Similarmente, em algumas formas, o peptídeo ou proteína da composição CendR pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido quando a sequência de aminoácido selecionada (elemento CendR) está presente no peptídeo ou proteína, mas não quando o aminoácido selecionado não está presente no peptídeo ou proteína. Isto pode ser usado para detectar se uma proteína ou peptídeo compreende um elemento CendR, por exemplo. O elemento CendR pode ser internalizado em uma célula e penetrar o tecido sem estar associado a outra coisa senão sua própria sequência, por exemplo. O elemento CendR pode ser apenas a internalização funcional e elemento de penetração nos tecidos na proteína ou peptídeo, ou a composição CendR, ou pode haver um ou mais elementos de internalização adicional funcional e/ou de penetração nos tecidos. Em algumas formas, a composição CendR pode ser internalizada em uma célula e penetrar o tecido quando a sequência de aminoácido selecionada (elemento CendR) está presente na composição CendR, mas não quando o aminoácido selecionado não está presente na CendR composição.

"Internalização", refere-se à passagem através de uma membrana plasmática ou outra barreira biológica”. Penetração" refere-se à passagem em e através de uma célula, tecido ou outra barreira biológica. Penetração geralmente envolve e inclui internalização. Os elementos CendR revelados geralmente promovem e permitem tanto a internalização (tal como internalização em uma célula) quanto penetração (tal como a penetração no tecido). Referência à internalização ou à penetração deve ser entendida para se referir tanto à internalização quanto à penetração a menos que o contexto indique o contrário (tal como discussão em separado ou distinta e descrição da internalização em uma célula e penetração de tecidos separadamente- o presente parágrafo é um exemplo disso).

Por ”internalização em uma célula" entende-se que aquele elemento CendR é capaz de penetrar a membrana plasmática, sendo assim internalizado na célula. Essa internalização pode ocorrer com, por exemplo, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 100% de eficiência para um dado elemento CendR e uma dada célula. Elementos CendR geralmente um promotor, mediador, causam, reforçam, e etc internalização; penetração; internalização em e/ou através de células, tecidos ou ambos; penetração em e/ou através de células, tecidos ou ambos; permeabilização de células e/ou tecidos, ou uma combinação. Por”permeabilização" significa-se a promoção, mediação, fazendo, reforçando, etc a capacidade e/ou condição de células e/ou tecidos permitirem composições, conjugados, moléculas, etc., na proximidade com as células e/ou tecidos entrarem e ou passarem através das células e/ou tecidos. Assim, os elementos CendR revelados, proteínas, peptídeos conjugados, composições, etc podem ser ditos para permeabilizar as células e/ou tecidos. Por”permeável" se entende a capacidade e/ou condição das células e/ou tecidos para permitirem composições, conjugados, moléculas, etc, em proximidade com as células e/ou tecidos entrarem e ou passarem através das células e/ou tecidos.

Células que podem internalizar um elemento CendR podem ser identificados, por exemplo, pela (a) exposição de uma célula a um elemento CendR, e (b) determinação se o elemento CendR foi internalizado. A célula pode estar em um ensaio, por exemplo. O elemento CendR pode ser acoplado à, ou exemplo, uma molécula de homing, formando assim uma composição CendR. Células que podem internalizar um elemento CendR ativável podem ser identificadas, por exemplo, (a) expondo uma célula a um elemento CendR ativável, (b) determinando se o elemento CendR ativável foi internalizado. O elemento CendR ativável pode ser desbloqueado antes da exposição à célula, mas não precisa ser. Isto pode ser usado para testar a capacidade de bloqueio do bloqueador, por exemplo. O elemento CendR ativável também pode ser um elemento CendR ativado por protease. Qualquer forma ou tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR pode ser usada nesses métodos.

Células cancerosas, ou sujeitos que abrigam células cancerosas, podem ser identificados como candidatos para terapia baseada em CendR, por exemplo, (a) expondo a célula cancerosa a um elemento CendR, e (b) determinando se o elemento CendR foi internalizado pela célula de câncer, em que um elemento interiorizado CendR identifica a célula de câncer ou o sujeito como sendo um candidato para terapia baseada em CendR. A célula pode estar em um ensaio, ou pode estar em um sujeito, por exemplo. O elemento CendR pode ser acoplado a, por exemplo, uma molécula de homing, formando uma composição CendR.

Qualquer forma ou tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR pode ser usada nesses métodos.

Tumores, ou sujeitos que abrigam um tumor, podem ser identificados como um candidato para terapia baseada em CendR, por exemplo, (a) expondo o tecido do tumor a um elemento CendR, e (b) determinando se o elemento CendR passado através do tecido ou foi internalizado pelas células no tecido, em que um elemento CendR repassado ou internalizado identifica o tumor ou o sujeito como sendo um candidato para terapia baseada em CendR. Qualquer forma ou tipo de Elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR pode ser usada nesses métodos.

Um elemento CendR ativável que pode ser ativado na proximidade à uma célula de interesse pode ser feito, por exemplo, formando um elemento CendR ativável em que um grupo de bloqueio é acoplado a um elemento CendR através de uma ligação clivável, em que a ligação clivável é clivável por uma enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse. Isto pode compreender ainda, antes de formar o elemento CendR ativável, identificar a enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse. Isto pode compreender ainda, antes de formar o elemento CendR ativável, selecionar a ligação clivável baseada na enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse. Qualquer forma ou tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR pode ser usado nesses métodos.

Um elemento CendR ativável pode ser formado pela, por exemplo, (a) seleção de uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento de terminação C, em que o elemento de terminação C compreende um grupo carboxila terminal, e (b) fazendo com que um grupo de bloqueio seja covalentemente acoplado ao grupo carboxila terminal da sequência de aminoácido selecionada, em que a ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal é clivável, em que o elemento CendR ativável compreende a sequência de aminoácido selecionada e o grupo de bloqueio. Isto pode compreender ainda, antes da etapa (b), selecionar a ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal para ser clivável por uma protease, enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse.

Elementos CendR ativáveis podem ser feitos, por exemplo, pelo método compreendendo (a) selecionar uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento de terminação C, em que o elemento de terminação C compreende um grupo carboxila terminal, e (b) fazer com que um grupo de bloqueio seja covalentemente acoplado ao grupo carboxila terminal da sequência de aminoácido selecionada, em que a ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal é clivável, em que o elemento CendR ativável compreende a sequência de aminoácidos selecionada e o grupo de bloqueio. O método pode compreender ainda, antes da etapa (b), selecionar a ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal a ser clivável por uma protease, enzima, agente de cllivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse. Qualquer forma ou tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR pode ser usada nesses métodos.

O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável. O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável pela protease. A proteína ou peptídeo pode ser circular ou pode conter um ciclo. O elemento CendR pode estar na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo. O elemento CendR pode compreender um grupo carboxila terminal. Um grupo de bloqueio pode ser acoplado ao grupo carboxila terminal. A ligação acoplando o grupo de bloqueio e o grupo carboxila terminal pode ser selecionada para ser clivável por uma protease, enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse. O grupo de bloqueio pode ser acoplado ao aminoácido de terminação C do elemento CendR. O grupo de bloqueio pode ser acoplado a um aminoácido do elemento CendR que não seja o aminoácido de terminação C do elemento CendR.

A co-composição pode ser, por exemplo, uma nanopartícula ou uma molécula, ou complexo de moléculas com aplicações terapêuticas ou de diagnóstico. Co-composições terapêuticas que podem ser alvejadas com elementos CendR incluem mas não estão limitados a uma nanopartícula, uma molécula, um complexo de moléculas, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, um agente quimioterápico de câncer, um agente citotóxico, um agente de sobrevivência pró-célula, uma agente de diferenciação de célula, um agente neuroprotetor, um agente imunomodulador, um agente antiinflamatório, um agente anti-artrítico, um agente anti-viral ou uma combinação destes. Co- composições terapêuticas que podem ser alvejadas com elementos CendR incluem mas não estão limitados a uma proteína terapêutica, um composto terapêutico, uma composição terapêutica, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, um agente quimioterápico de câncer, uma toxina, um agente citotóxico, um agente anti-inflamatório, um agente anti-artrítico, um fator de crescimento, uma citocina, uma quimiocina, um composto que modula uma ou mais vias de sinalização, um anticorpo, um ácido nucléico, um análogo de ácido nucléico, uma célula, um vírus, um fago, uma partícula viral, uma partícula de fago, um capsídeo viral, um capsídeo do fago, uma partícula tipo vírus, um lipossoma, uma micela, uma conta, uma nanopartícula, uma micropartícula, um agente quimioterapêutico, um agente de contraste, um agente de imagem, um rótulo, um agente de rotulagem ou uma combinação. Co-composições de diagnóstico que podem ser alvejadas com elementos CendR incluem mas não estão limitadas a uma nanopartícula, uma molécula, um complexo de moléculas, um agente da imagem MRI, um agente de radio imagem, um agente de imagem óptica, uma etiqueta molecular (como a biotina), um fluoróforo, uma etiqueta de epítopo (que pode, por exemplo, ser detectada através de um ensaio específico molecular), ou uma combinação desses.

A composição de carga pode ser, por exemplo, uma nanopartícula, ou uma molécula, ou complexo de moléculas com aplicações terapêuticas ou de diagnóstico. Composições de carga terapêuticas que podem ser alvejadas com elementos CendR incluem mas não estão limitadas a uma nanopartícula, uma molécula, um complexo de moléculas, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, um agente quimioterápico de câncer, um agente citotóxico, um agente de sobrevivência pró-célula, uma agente de diferenciação de célula, um agente neuroprotetor, um agente imunomodulador, um agente antiinflamatório, um agente anti-artrítico, um agente anti-viral ou uma combinação destes. Composições de cargas terapêuticas que podem ser alvejadas com elementos CendR incluem, mas não estão limitadas a uma proteína terapêutica, um composto terapêutico, uma composição terapêutica, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, um agente quimioterápico de câncer, uma toxina, um agente citotóxico, um agente antiinflamatório, um agente anti-artrítico, um fator de crescimento, uma citocina, uma quimiocina, um composto que modula uma ou mais vias de sinalização, um anticorpo, um ácido nucléico, um análogo de ácido nucléico, uma célula, um vírus, um fago, uma partícula viral, uma partícula de fago, um capsídeo viral, um capsídeo do fago, uma partícula do tipo vírus, um lipossoma, uma micela, uma conta, uma nanopartícula, uma micropartícula, um agente quimioterapêutico, um agente de contraste, um agente de imagem, um rótulo, um agente de rotulagem, ou uma combinação. Composições de carga de diagnóstico que podem ser alvejadas com elementos CendR incluem, mas não estão limitadas a uma nanopartícula, uma molécula, um complexo de moléculas, um agente da imagem MRI, um agente de radio imagem, um agente de imagem óptica, uma etiqueta molecular (tal como biotina), um fluoróforo, uma etiqueta de epítopo (que pode, por exemplo, ser detectada usando um ensaio molecular específico), ou uma combinação destes.

Uma célula que pode internalizar um elemento CendR pode ser identificada, por exemplo, (a) expondo uma célula a um elemento CendR, e (b) determinando se o elemento CendR foi internalizado. Também são revelados métodos de identificação de uma célula cancerosa como um candidato para terapia baseada em CendR, o método compreendendo (a) expor a célula cancerosa a um elemento CendR, e (b) determinar se o elemento CendR foi internalizado pela célula cancerosa, em que um elemento CendR internalizado identifica a célula cancerosa como sendo um candidato para terapia baseada em CendR. A célula pode estar em um ensaio. O elemento CendR pode ser acoplado a uma proteína ou peptídeo. O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável. O elemento CendR ativável pode ser ativado antes da exposição à célula. O elemento CendR ativável pode ser um elemento CendR ativável ou protease. A proteína ou peptídeo pode ser circular. A proteína ou peptídeo pode ser linear. O elemento CendR pode estar na extremidade da terminação C da proteína ou peptídeo. Qualquer forma ou tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR podem ser usados nesses métodos.

Um tecido que pode ser penetrado por um elemento CendR pode ser identificado, por exemplo, (a) expondo um tecido a um elemento CendR, e (b) determinando se o elemento CendR penetrou no tecido. Também são revelados métodos de identificação de um tumor como um candidato para terapia baseada em CendR, o método compreendendo (a) expor uma célula do tumor a um elemento CendR, e (b) determinar se o elemento CendR foi internalizado pela célula, em que um elemento CendR internalizado identifica o tumor como sendo um candidato para terapia baseada em CendR. Um tumor pode ser identificado como um candidato para terapia baseada em CendR, por exemplo, (a) expor o tumor a um elemento CendR, e (b) determinar se o elemento CendR penetrou o tumor, em que um elemento CendR que penetrou identifica o tumor como sendo um candidato para terapia baseada em CendR. O tumor pode estar em um ensaio. O elemento CendR pode ser acoplado a uma proteína ou peptídeo. O elemento CendR pode ser um elemento CendR ativável. O elemento CendR ativável pode ser ativado antes da exposição ao tumor. O elemento CendR ativável pode ser um elemento CendR ativável por protease. A proteína ou peptídeo pode ser circular. A proteína ou peptídeo pode ser linear. O elemento CendR pode estar na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo. Qualquer forma ou tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR pode ser usado nesses métodos.

Um elemento CendR ativável que pode ser ativado na proximidade de uma célula de interesse pode ser produzido, por exemplo, formando um elemento CendR ativável em que um grupo de bloqueio é acoplado a um elemento CendR por meio de uma ligação clivável, em que a ligação clivável é clivável por uma enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes na proximidade da célula de interesse. A célula pode estar em um sujeito. A enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes na proximidade com a célula de interesse podem ser identificados. A enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse podem ser identificados antes de formar o elemento CendR ativável. A ligação clivável pode ser selecionada com base na enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada com base no agente de clivagem presente no local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou se acumula, como a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada com base nas condições de clivagem presentes no local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou se acumula, como a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada antes de formar o elemento CendR ativável. O elemento CendR pode compreender um grupo carboxila terminal, em que o grupo de bloqueio é acoplado ao grupo carboxila terminal. Qualquer forma ou tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR pode ser usado nesses métodos.

Um elemento CendR ativável pode ser formado, por exemplo, fazendo com que um grupo de bloqueio a ser covalentemente acoplado a um elemento CendR, em que uma ligação acoplando o grupo de bloqueio e o elemento CendR é clivável. Um elemento CendR ativável pode ser formado, por exemplo, fazendo com que um grupo de bloqueio seja covalentemente acoplado a uma sequência de aminoácidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR o elemento CendR, e em que uma ligação acoplando o grupo de bloqueio e o elemento CendR é clivável. Um elemento CendR ativável pode ser formado, por exemplo, pela (a) seleção de uma sequência de aminoácidos para a internalização em uma célula e/ou penetração nos tecidos, em que a sequência de aminoácidos compreende um elemento CendR, e (b), fazer um grupo de bloqueio ser covalentemente acoplado ao elemento CendR, em que uma ligação acoplando o grupo de bloqueio e o elemento CendR é clivável. O grupo de bloqueio covalentemente acoplado ao elemento CendR reduz ou impede a internalização em uma célula e/ou penetração nos tecidos. O grupo de bloqueio covalentemente acoplado ao elemento CendR pode reduzir ou prevenir a internalização em uma célula e/ou penetração no tecido em comparação ao mesmo elemento CendR com nenhum grupo de bloqueio. O elemento CendR ativável pode compreender a sequência de aminoácido selecionada e o grupo de bloqueio. A célula pode estar em um sujeito. A enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem que está presente em proximidade com a célula de interesse pode ser identificado. A enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse pode ser identificada antes de formar o elemento CendR ativável. A ligação clivável pode ser selecionada com base na enzima, agente de clivagem e/ou condições de clivagem presentes em proximidade com a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada com base no agente de clivagem presente no local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou se acumula, como a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada com base nas condições de clivagem presentes no local em que o elemento CendR é entregue, endereça, transita ou se acumula, tal como a célula de interesse. A ligação clivável pode ser selecionada antes de formar o elemento CendR ativável. O elemento CendR pode compreender um grupo carboxila terminal, em que o grupo de bloqueio é acoplado ao grupo carboxila terminal. Qualquer forma ou tipo de elemento CendR, peptídeo CendR, proteína CendR, conjugado CendR ou composição CendR pode ser usada nesses métodos.

O elemento CendR pode ter um comprimento de até 10, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 ou 2000 resíduos. Em modalidades particulares, um elemento CendR pode ter um comprimento de pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 ou 200 resíduos. Em modalidades adicionais, um elemento CendR pode ter um comprimento de 2 a 200 resíduos, 2 a 100 resíduos, 2 a 90 resíduos, 2 a 80 resíduos, 2 a 70 resíduos, 2 a 60 resíduos, 2 a 50 resíduos, 2 a 40 resíduos, 2 a 30 resíduos, 2 a 20 resíduos, 2 a 15 resíduos, 2 a 10 resíduos, 3 a 200 resíduos, 3 a 100 resíduos, 3 a 90 resíduos, 3 a 80 resíduos, 3 a 70 resíduos, 3 a 60 resíduos, 3 a 50 resíduos, 3 a 40 resíduos, 3 a 30 resíduos, 3 a 20 resíduos, 3 a 15 resíduos, 3 a 10 resíduos, 4 a 200 resíduos, 4 a 100 resíduos, 4 a 90 resíduos, 4 a 80 resíduos, 4 a 70 resíduos, 4 a 60 resíduos, 4 a 50 resíduos, 4 a 40 resíduos, 4 a 30 resíduos, 4 a 20 resíduos, 4 a 15 resíduos, 4 a 10 resíduos, 5 a 200 resíduos, 5 a 100 resíduos, 5 a 90 resíduos, 5 a 80 resíduos, 5 a 70 resíduos, 5 a 60 resíduos, 5 a 50 resíduos, 5 a 40 resíduos, 5 a 30 resíduos, 5 a 20 resíduos, 5 a 15 resíduos, 5 a 10 resíduos, 10 a 200 resíduos, 10 a 100 resíduos, 10 a 90 resíduos, 10 a 80 resíduos, 10 a 70 resíduos, 10 a 60 resíduos, 10 a 50 resíduos, 10 a 40 resíduos, 10 a 30 resíduos, 10 a 20 resíduos, 20 a 200 resíduos, 20 a 100 resíduos, 20 a 90 resíduos, 20 a 80 resíduos, 20 a 70 resíduos, 20 a 60 resíduos, 20 a 50 resíduos, 20 a 40 resíduos ou 20 a 30 resíduos. Como usado aqui, o termo”resíduo" se refere a um aminoácido ou análogo de aminoácido.

Uma proteína ou peptídeo contendo um elemento CendR pode ter um comprimento de até 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 ou 2000 resíduos. Em modalidades particulares, a porção de proteína ou peptídeo de uma composição CendR pode ter um comprimento de pelo menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 ou 200 resíduos. Em modalidades adicionais, a proteína ou peptídeo contendo um elemento CendR pode ter um comprimento de 2 a 200 resíduos, 2 a 100 resíduos, 2 a 90 resíduos, 2 a 80 resíduos, 2 a 70 resíduos, 2 a 60 resíduos, 2 a 50 resíduos, 2 a 40 resíduos, 2 a 30 resíduos, 2 a 20 resíduos, 2 a 15 resíduos, 2 a 10 resíduos, 3 a 200 resíduos, 3 a 100 resíduos, 3 a 90 resíduos, 3 a 80 resíduos, 3 a 70 resíduos, 3 a 60 resíduos, 3 a 50 resíduos, 3 a 40 resíduos, 3 a 30 resíduos, 3 a 20 resíduos, 3 a 15 resíduos, 3 a 10 resíduos, 4 a 200 resíduos, 4 a 100 resíduos, 4 a 90 resíduos, 4 a 80 resíduos, 4 a 70 resíduos, 4 a 60 resíduos, 4 a 50 resíduos, 4 a 40 resíduos, 4 a 30 resíduos, 4 a 20 resíduos, 4 a 15 resíduos, 4 a 10 resíduos, 5 a 200 resíduos, 5 a 100 resíduos, 5 a 90 resíduos, 5 a 80 resíduos, 5 a 70 resíduos, 5 a 60 resíduos, 5 a 50 resíduos, 5 a 40 resíduos, 5 a 30 resíduos, 5 a 20 resíduos, 5 a 15 resíduos, 5 a 10 resíduos, 10 a 200 resíduos, 10 a 100 resíduos, 10 a 90 resíduos, 10 a 80 resíduos, 10 a 70 resíduos, 10 a 60 resíduos, 10 a 50 resíduos, 10 a 40 resíduos, 10 a 30 resíduos, 10 a 20 resíduos, 20 a 200 resíduos, 20 a 100 resíduos, 20 a 90 resíduos, 20 a 80 resíduos, 20 a 70 resíduos, 20 a 60 resíduos, 20 a 50 resíduos, 20 a 40 resíduos ou 20 a 30 resíduos.

O conjugado CendR pode ter um comprimento de até 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 ou 2000 resíduos. Em modalidades particulares, um conjugado CendR pode ter um comprimento de pelo menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 e 200 resíduos. Em modalidades adicionais, um conjugado CendR pode ter um comprimento de 5 a 200 resíduos, 5 a 100 resíduos, 5 a 90 resíduos, 5 a 80 resíduos, 5 a 70 resíduos, 5 a 60 resíduos, 5 a 50 resíduos, 5 a 40 resíduos, 5 a 30 resíduos, 5 a 20 resíduos, 5 a 15 resíduos, 5 a 10 resíduos, 10 a 200 resíduos, 10 a 100 resíduos, 10 a 90 resíduos, 10 a 80 resíduos, 10 a 70 resíduos, 10 a 60 resíduos, 10 a 50 resíduos, 10 a 40 resíduos, 10 a 30 resíduos, 10 a 20 resíduos, 20 a 200 resíduos, 20 a 100 resíduos, 20 a 90 resíduos, 20 a 80 resíduos, 20 a 70 resíduos, 20 a 60 resíduos, 20 a 50 resíduos, 20 a 40 resíduos ou 20 a 30 resíduos.

A porção de proteína ou peptídeo de uma composição CendR pode ter um comprimento de até 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 ou 2000 resíduos. Em modalidades particulares, a porção de proteína ou peptídeo de uma composição CendR pode ter um comprimento de pelo menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 ou 200 resíduos. Em modalidades adicionais, a porção de proteína ou peptídeo de uma composição CendR pode ter um comprimento de 2 a 200 resíduos, 2 a 100 resíduos, 2 a 90 resíduos, 2 a 80 resíduos, 2 a 70 resíduos, 2 a 60 resíduos, 2 a 50 resíduos, 2 a 40 resíduos, 2 a 30 resíduos, 2 a 20 resíduos, 2 a 15 resíduos, 2 a 10 resíduos, 3 a 200 resíduos, 3 a 100 resíduos, 3 a 90 resíduos, 3 a 80 resíduos, 3 a 70 resíduos, 3 a 60 resíduos, 3 a 50 resíduos, 3 a 40 resíduos, 3 a 30 resíduos, 3 a 20 resíduos, 3 a 15 resíduos, 3 a 10 resíduos, 4 a 200 resíduos, 4 a 100 resíduos, 4 a 90 resíduos, 4 a 80 resíduos, 4 a 70 resíduos, 4 a 60 resíduos, 4 a 50 resíduos, 4 a 40 resíduos, 4 a 30 resíduos, 4 a 20 resíduos, 4 a 15 resíduos, 4 a 10 resíduos, 5 a 200 resíduos, 5 a 100 resíduos, 5 a 90 resíduos, 5 a 80 resíduos, 5 a 70 resíduos, 5 a 60 resíduos, 5 a 50 resíduos, 5 a 40 resíduos, 5 a 30 resíduos, 5 a 20 resíduos, 5 a 15 resíduos, 5 a 10 resíduos, 10 a 200 resíduos, 10 a 100 resíduos, 10 a 90 resíduos, 10 a 80 resíduos, 10 a 70 resíduos, 10 a 60 resíduos, 10 a 50 resíduos, 10 a 40 resíduos, 10 a 30 resíduos, 10 a 20 resíduos, 20 a 200 resíduos, 20 a 100 resíduos, 20 a 90 resíduos, 20 a 80 resíduos, 20 a 70 resíduos, 20 a 60 resíduos, 20 a 50 resíduos, 20 a 40 resíduos ou 20 a 30 resíduos.

A composição CendR pode ter um comprimento de até 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 ou 2000 resíduos. Em modalidades particulares, uma composição CendR pode ter um comprimento de pelo menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 ou 200 resíduos. Em modalidades adicionais, uma composição CendR pode ter um comprimento de 5 a 200 resíduos, 5 a 100 resíduos, 5 a 90 resíduos, 5 a 80 resíduos, 5 a 70 resíduos, 5 a 60 resíduos, 5 a 50 resíduos, 5 a 40 resíduos, 5 a 30 resíduos, 5 a 20 resíduos, 5 a 15 resíduos, 5 a 10 resíduos, 10 a 200 resíduos, 10 a 100 resíduos, 10 a 90 resíduos, 10 a 80 resíduos, 10 a 70 resíduos, 10 a 60 resíduos, 10 a 50 resíduos, 10 a 40 resíduos, 10 a 30 resíduos, 10 a 20 resíduos, 20 a 200 resíduos, 20 a 100 resíduos, 20 a 90 resíduos, 20 a 80 resíduos, 20 a 70 resíduos, 20 a 60 resíduos, 20 a 50 resíduos, 20 a 40 resíduos ou 20 a 30 resíduos.

CendR (e outros) peptídeos podem ser estabilizados contra a proteólise. Por exemplo, a estabilidade e a atividade de peptídeos, tais como peptídeos que endereçam tumor CREKA (Simberg et al., 2007), protegendo algumas das ligações peptídicas com N-metilação ou C-metilação. A ligação mais importante para proteger, para reforçar a atividade é a ligação R-G porque impediria uma clivagem que iria inativar tanto as atividades de ligação à integrina quanto de CendR. Por exemplo, os peptídeos C(CMe)RGDKGPDC (SEQ ID NO: 92) e compostos CR(NMe)GDKGPDC (SEQ ID NO: 93) são estáveis contra a proteólise indesejada. Peptídeos acessórios e peptídeos de homing também podem ser estabilizados de forma similar ou estabilizados contra a proteólise.

A atividade de peptídeos LyP-1 e qualquer outro peptídeo CendR pode ser testada usando o mesmo ensaio de Evans Blue usado para iRGD (Figura 5). O carcinoma humano MDA-MB-435 pode ser usado para testar a atividade de peptídeos LyP-1 porque este tumor apresenta a mais alta expressão da superfície celular p32, o receptor primário para LyP-1 (Fogal et al., 2008). RGR foi identificado em uma tela de biblioteca de fagos com carcinomas da célula de ilhota pancreática RIP-Tag (Joyce et al., 2003), que pode ser usada para testar a atividade dos peptídeos RGR. O principal alvo do LyP-1 é tumor linfático, macrófagos de tumor e células tumorais em áreas de hipoxia/de baixos nutrientes, não os vasos sanguíneos (Laakkonen et al, 2004;. Fogal et al, 2008). Devido a isso, um composto co-injetado com LyP-1 pode se esperar que se acumule preferencialmente nas áreas favorecidas pelo peptídeo. iRGD pode elevar o acúmulo da co-composição de uma variedade de tamanhos: um peptídeo 1,3 kDa-FAM-CRGDC (que não tem um motif CendR e por conta própria penetra apenas minimamente o tecido tumoral), um corante de ligação à albumina (Evans Blue), um anticorpo, e dois tipos de nanopartículas: fago T7 (65 nm de diâmetro) e nanoworms de óxido de ferro (80 nm de comprimento e 30 nm de espessura). Qualquer co-composição pode ser testada usando, por exemplo, iRGD e um peptídeo RGD de não CendR (que serve como um controle para o acúmulo de tumor que envolve endereçar as integrinas associadas ao tumor, mas não o mecanismo CendR). Um D inerte a variante E desse peptídeo RGD pode ser usado como um peptídeo de controle que não se liga às integrinas. A dose do peptídeo CendR pode ser ajustada para encontrar o intervalo que é maximamente eficaz. Internalização e penetração nos tecidos de co-composições mediadas por peptídeos CendR também podem ser testadas, por exemplo, pela coloração perfundida, tumores tratados com iRGD com um formulário rotulado da co-composição.

Os peptídeos CendR revelados (e outras formas CendR) e co-composições podem ser administrados em conjunto ou separadamente, na mesma forma e maneira ou de diferentes formas e/ou maneiras; ao mesmo tempo ou em momentos diferentes, com o peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) administrado em primeiro ou em segundo. Administração pode ser, por exemplo, a co-administração (ao mesmo tempo e pela mesma rota/meio/forma ou diferente), administração separada (administração paralela pela mesma rota/meio/forma ou diferente), administração sequencial (em momentos diferentes pela mesma rota/meio/forma ou diferente), etc. Quando a co-composição e peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) são administrados em momentos diferentes, uma variedade de atrasos diferentes pode ser usada entre as administrações. Por exemplo, o peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 20, 30, 40, 45 , 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 ou 120 minutos ou mais antes de administrar uma co- composição. O peptídeo CendR (ou outra forma CendR) pode ser administrada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 54, 60, 66 ou 72 horas ou mais antes de administrar uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrada 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias ou mais antes de administrar uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrado 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 , 110 ou 120 minutos ou mais após a administração de uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrado 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 54, 60, 66 ou 72 horas ou mais após a administração de uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrado 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias ou mais após a administração de uma co-composição.

O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrado dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 20, 30, 40, 45, 50 , 60, 70, 80, 90, 100, 110 ou 120 minutos antes da administração de uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrado dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 , 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 , 45, 46, 47, 48, 54, 60, 66 ou 72 horas antes da administração de uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrada dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias antes da administração de uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrado dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 20, 30, 40, 45, 50 , 60, 70, 80, 90, 100, 110 ou 120 minutos após a administração de uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrado dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 , 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 , 45, 46, 47, 48, 54, 60, 66 ou 72 horas após a administração de uma co-composição. O peptídeo CendR (ou outra forma de CendR) pode ser administrado dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias após a administração de uma co-composição. Administração no mesmo dia ou hora é particularmente útil.

A composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e a co-composição podem ser administradas simultaneamente ao sujeito. Por simultaneamente é entendido durante períodos de tempo sobrepostos ou contíguos. A composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e a co-composição podem ser administradas ao sujeito em uma única composição compreendendo a composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e a co-composição. A composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR ou elemento CendR e a co-composição podem ser administradas ao sujeito em composições separadas. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em momentos diferentes. O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito em composições separadas. Por composições separadas entendem-se composições que não são misturadas ou que estão em contato entre si (exceto como pode ocorrer após a administração). O elemento CendR e a co-composição podem ser administrados ao sujeito por rotas separadas. Por rotas separadas entende-se em locais separados, por diferentes meios ou modo.

Peptídeos CendR podem ser feitos na forma de peptídeos estabilizados e/ou formulados como formas de circulação longa. Por exemplo, um conjugado de polietileno glicol pode ser usado. Peptídeos CendR e/ou co-composições também pode ser administrado durante um período de tempo. Por exemplo, peptídeos CendR e/ou co-composições podem ser entregues com uma bomba osmótica. Esta pode estender a permeabilidade das células-alvo e tecidos. Formas modificadas de peptídeos CendR podem ser usadas. Por exemplo, peptídeos CendR podem ser metilados (que pode estabilizar os peptídeos contra a proteólise). Estabilidade contra a clivagem é desejável, exceto para as ligações a serem clivadas para ativar elementos CendR. Modificações para elementos CendR geralmente devem deixá-los funcionais ou capazes de funcionar após a ativação.

Entende-se que existem inúmeros análogos de aminoácidos e peptídeos que podem ser incorporados em composições CendR reveladas, conjugados, moléculas, proteínas, peptídeos e elementos. Por exemplo, existem inúmeros aminoácidos D ou outros aminoácidos não-naturais que podem ser usados. Os estereoisômeros opostos de peptídeos que ocorrem naturalmente são revelados, bem como os estéreos isômeros de análogos de peptídeo. Estes aminoácidos podem ser facilmente incorporados em cadeias de polipeptídeos por síntese química ou através do carregamento de moléculas de tRNA com o aminoácido de escolha e construções de engenharia genética que utilizam, por exemplo, códons âmbar, para inserir o aminoácido análogo em uma cadeia peptídica em uma forma específica de local site (Thorson et al, Methods in Molec Biol 77:43-73 (1991), Zoller, Current Opinion in Biotechnology, 3:348-354 (1992); Ibba, Biotechnology & Genetic Engineering Reviews 13:197 - 216 (1995), Cahill et al, TIBS, 14(10):400-403 (1989); Benner, TIB Tech, 12: 158-163 (1994); Ibba e Hennecke, Bio/technology, 12:678 -. 682 (1994) todos dos quais são aqui incorporados por referência, pelo menos para material relacionado com análogos de aminoácidos).

Moléculas podem ser produzidas que reagrupem peptídeos, mas que não são ligadas por meio de uma ligação de peptídeo natural. Por exemplo, ligações de aminoácidos ou análogos de aminoácidos podem incluir CH2NH--, --CH2S--,-- CH2--CH2--,--CH=CH--(cis e trans),--COCH2--,--CH(OH)CH2--, e --CHH2SO-(Estes e outros podem ser encontrados em Spatola, A F. in Chemistry and Biochemistry of Amino acids, Peptides, and Proteins, B. Weinstein, eds. Marcel Dekker, New York, p. 267 (1983); Spatola, A F., Vega Data (março 1983), vol. 1 Edição, 3, Peptide Backbone Modifications (revisão geral); Morley, Trends Pharm Sci (1980), pp 463-468; Hudson, D. et al, Int J Pept Prot Res 14:177-185 (1979) (--CH2NH--, CH2CH2--); Spatola et al. Vida Sci 38:1243-1249 (1986) (--CH H2--S); Hann J. Chem. Soc Perkin Trans. I 307-314 (1982) (--CH--CH--, cis e trans); Almquist et al. J. Med. Chem. 23:1392-1398 (1980) (--COCH2--); Jennings-White et al. Tetrahedron Lett 23:2533 (1982) (-COCH2); Szelke et al. Europeu Appln, EP 45665 CA (1982): 97:39405 (1982) (--CH(OH)CH2--); Holladay et al. Tetraedro. Lett 24:4401-4404 (1983) (--C(OH)CH2--); e Hruby Vida Sci 31:189-199 (1982) (-- CH2--S--); cada um dos quais está incorporado aqui por referência. Uma ligação de não-peptídeo particularmente preferida é --CH2NH--. Entende-se que os análogos de peptídeo podem ter mais do que um átomo entre os átomos de ligação, como o b-alanina, ácido g-aminobutírico, e assim por diante.

Análogos de aminoácidos e análogos de peptídeos frequentemente têm propriedades reforçadas ou desejáveis, tais como, a produção mais econômica, maior estabilidade química, propriedades farmacológicas reforçadas (meia-vida, absorção, potência, eficácia e etc), especificidade alterada (por exemplo, um amplo espectro de atividades biológicas), antigenicidade reduzida e outros.

D-aminoácidos podem ser usados para gerar peptídeos mais estáveis, porque os aminoácidos D não são reconhecidos pelas peptidases e tais. Substituição sistemática de um ou mais aminoácidos de uma sequência consenso com um D-aminoácido do mesmo tipo (por exemplo, D-lisina no lugar de L-lisina) pode ser usado para gerar peptídeos mais estáveis, enquanto que a atividade é preservada. Resíduos de cisteína podem ser usados para ciclizar ou anexar dois ou mais peptídeos juntos. Isto pode ser benéfico para restringir peptídeos em conformações particulares. (Rizo e Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992), incorporado aqui por referência).

São reveladas composições CendR polifuncionais que, além do elemento CendR, contêm, por exemplo, um peptídeo acessório, um peptídeo acessório fundido ao elemento CendR, uma molécula acessória covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente ao elemento CendR ou peptídeo CendR, um peptídeo de homing fundido ao elemento CendR, uma molécula de homing covalentemente acoplada ou associada de modo não-covalente com o elemento CendR ou peptídeo CendR, uma composição de carga fundida ao elemento CendR, e/ou uma composição de carga acoplada à ou associada de modo não covalente com o elemento CendR ou peptídeo CendR. Compostos adicionais tendo funções separadas podem ser adicionados à composição. Tais conjugados polifuncionais têm pelo menos duas funções conferidas por porções diferentes da composição e pode, por exemplo, exibir atividade anti-angiogênica ou atividade pró-apoptótica além da atividade de homing seletivo.

Como usado aqui, o termo ”peptídeo" é usado amplamente para significar peptídeos, proteínas, fragmentos de proteínas e outros. O termo”peptidomimético", como usado aqui, significa uma molécula tipo peptídeo que tem a atividade do peptídeo mediante a qual ela se baseia estruturalmente. Esses peptidomiméticos incluem peptídeos quimicamente modificados, moléculas tipo peptídeo contendo aminoácidos ocorrendo de modo não natural e peptóides e tem uma atividade tal como aquela da qual o peptidomimético é derivado (ver, por exemplo, Goodman e Ro, Peptidomimetics for Drug Design, em”Burger’s Medicinal Chemistry and Drug Discovery" Vol. 1 (ed. ME Wolff; John Wiley & Sons, 1995), páginas 803-861).

Elementos CendR se ligam ao neuropilin-1 (NRP-1) presente na superfície celular. Ligação de elementos CendR ao NRP-1 media a internalização do elemento CendR, nada ligado ao elemento CendR, e co-composições. Compostos não-peptídicos também podem ser usados para ligar NRP-1 e mediar a internalização e penetração nos tecidos. Tais compostos não-peptídicos são referidos aqui como compostos CendR. Compostos CendR podem ser usados em todas as formas e em todas as composições descritas aqui onde os elementos CendR são usados (a única exceção é onde um determinado uso ou composição requer que o componente CendR seja um peptídeo).

Um princípio de projeto para peptídeos de homing foi desenvolvido, que combina três funções: homing específico de tecido, espalhamento dentro do tecido alvo e internalização em células naquele tecido. Esses peptídeos contêm tanto uma sequência de homing específico de tecido quanto um motif de penetração e internalização de tecido incorporado em um elemento CendR. Elementos CendR ativáveis podem ser ativados, por exemplo, por uma clivagem proteolítica no tecido alvo. Este exemplo provê a prova de princípio para esta tecnologia de plataforma, alvejando os tecidos selecionados. 1. Usando os princípios revelados e exemplos, peptídeos que combinam homing específico para um tecido normal ou desejado, penetração de tecido e internalização na célula podem ser rastreados por e sintetizados. Também são revelados peptídeos que combinam homing específico de tecido, penetração de tecido e internalização de célula. Os peptídeos podem utilizar várias combinações de elementos de homing e de penetração de tecido e alvejarão o coração, pulmões ou próstata. 2. Os peptídeos revelados podem ser usados para homing específico de tecido, espalhamento dentro do tecido alvo e internalização em células em que tecido e seu uso podem ser estabelecidos e validados através da realização de ligação celular in vitro e internalização, e ensaios de homing in vivo.

Os compostos revelados são ferramentas úteis para a introdução de materiais em tecidos-alvo. Eles podem permitir alvejamento específico de doença ou do tipo de célula e específico de tecido dos compostos de diagnóstico e terapêuticos para aumentarem a eficácia e diminuírem os efeitos colaterais. Os princípios revelados neste documento são aplicáveis a todas as células ou tecidos para os quais peptídeos de homing específicos podem ser obtidos e que expressam um receptor CendR (que a maioria das células o fazem).

Estudos recentes revelaram heterogeneidade molecular extensa na vasculatura de tecidos normais diferentes. Além disso, lesões patológicas, como tumores, impõem suas próprias alterações na vasculatura. Este sistema de marcadores moleculares pode ser referido como 'códigos postais vasculares’ (Ruoslahti, 2004). Os códigos postais permitem alvejar com base na docagem (‘sináfico’) alvejando para entregar seletivamente diagnóstico e terapêutica em um tecido específico. Esta abordagem pode produzir maior eficácia e efeitos colaterais reduzidos. O princípio de entrega alvejado foi estabelecido, particularmente no câncer: o alvejamento de radioisótopos para as células leucêmicas com anticorpos é uma terapia estabelecida, e vários produtos visados no diagnóstico e tratamento de tumores sólidos estão em ensaios clínicos, muitos deles usam peptídeos de homing de tumor de primeira geração ou seus derivados. No entanto, um problema em fazer a entrega sináfico mais geralmente útil é que a eficácia tende a ser baixa. Foi percebido que pode ser mais eficaz alvejar a entrega aos vasos sanguíneos, porque seus revestimentos internos endoteliais estão prontamente disponíveis para sondas de circulação, considerando que a penetração no parênquima tumoral foi um problema no passado (Jain, 1990). Assim, embora tenha sido fácil demonstrar ligação do material alvejado aos vasos alvo, uma concentração substancialmente maior do material no tecido alvo não foi necessariamente alcançada (por exemplo, Liu et al., 2007).

Uma nova classe de peptídeos de homing foi descoberta que é mais eficaz e específica do que os peptídeos atualmente disponíveis no fornecimento de cargas para um alvo. Como descrito aqui, uma característica importante destes peptídeos (e a base para suas para o desempenho superior) é que, tendo chegado ao tecido-alvo, eles extravasam ativamente e penetram o tecido e as células dentro dele. Os mecanismos de princípio e molecular desta atividade foi estabelecido com peptídeos de homing de tumor. No entanto, os princípios podem ser usados e aplicados com quaisquer células e tecidos e usando quaisquer compostos de alvejamento ou homing de célula ou tecido.

A capacidade de entregar uma concentração maior ou quantidade de material para e em um alvo específico no corpo além do que é possível agora tem enormes implicações na medicina. A tecnologia revelada pode beneficiar todos os compostos de diagnóstico in vivo, drogas administradas por via parenteral, compostos nanomédicos, terapias genéticas e celulares, etc. Ela pode aumentar a potência pela concentração do material a ser entregue no alvo, e reduz os efeitos colaterais em outros tecidos que recebem relativamente menos do material. Penetração seletiva no tecido-alvo aumenta adicionalmente a eficácia. Finalmente, peptídeos que penetram tecido podem ser modificados e formulados em uma química tipo droga, o que torna a tecnologia aplicável às terapias administradas por via oral também.

Um sistema de penetração de tecido/célula foi descoberto recentemente que torna possível derivar peptídeos que não apenas endereçam a um tecido-alvo específico, mas também penetram nesse tecido. O motif de penetração do tecido tem de ser exposto na terminação C de um peptídeo (ou proteína) para ser ativo. Por isso, foi CendR para regra de extremidade C. A Figura 1 mostra o princípio do sistema CendR. Um peptídeo de homing CendR contém tanto uma sequência de homing específica de tecido quanto uma sequência CendR (que pode ser uma sequência CendR críptica ou ativável, como exibido na Figura 1). A sequência de homing leva o peptídeo ao endotélio vascular no tecido alvo, onde, se tiver uma sequência CendR críptica, o peptídeo é processados proteoliticamente por uma protease endógena, de tal forma que o motif CendR se torne terminação C e ativo. O motif CendR ativado, se liga então a um receptor (neuropilin-1), que media extravasamento, penetração nos tecidos e entrada de célula do peptídeo CendR e qualquer carga ligada a ele (Teesalu et al, 2009;. Patente dos EUA Publicação do Pedido n ° 20090226372).

O homing de múltiplas etapas, processamento, e processo de penetração nos tecidos torna CendR mais específico do que peptídeos e outras sondas que dependem apenas de ligação ao receptor. A penetração de tecidos e células facilita a entrega de todas as partes e tipos de células dentro do tecido alvo.

Foi observado primeiro que um número desproporcional de telas de biblioteca de fago T7 de peptídeos para peptídeos de ligação celular e de homing de tecidos teve uma arginina (ou às vezes lisina ou histidina) como o resíduo de terminação C. (A inserção de peptídeo é exibida na terminação C da proteína de revestimento do fago no sistema T7). A arginina de terminação C foi geralmente no contexto de uma sequência RXXR (R, arginina, X, qualquer aminoácido). Percebeu-se que este novo motif de sequência poderia provocar internalização celular das partículas de fago para as células, levando ao enriquecimento. Dados extensos foram gerados para demonstrar este sistema e seu mecanismo. Primeiro, fagos exibindo o motif R (K) XXR foram recuperados das células (células de câncer de próstata PPCl) que foram incubados a 37°C e lavados com um tampão de ácidos (pH 2,5). Como o fago T7 não é estável em pH 2,5, este resultado indicou internalização do fago. Estudos de ligação utilizando fagos individuais dos tanques selecionados mostraram que, enquanto apenas a presença de arginina de terminação C (como em G6R) é suficiente para fraca ligação de fago às células PPCl, ligação robusta e internalização exigem a presença de um motif RXXR de terminação C, como, por exemplo, RPARPAR (SEQ ID NO:2), a sequência mais frequentemente representada no tanque de fago selecionado.

Uma seleção de alanina do peptídeo RPARPAR mostrou que a arginina de terminação C (ou lisina) é fundamental para a ligação do fago, e os outros dois aminoácidos básicos aumentam a interação em uma maneira dependente de dose e posição. A interação com as células não envolvem outros elementos de fago, como pontos quânticos funcionalizados de RPARPAR (qdots) ligados e foram internalizados de maneira indistinguível das partículas de fago. A internalização de qdot foi vista com vida, células não fixadas, excluindo que o acúmulo intracelular é devido a um artefato de processamento. Curiosamente, um peptídeo compreendido por D-aminoácidos (D-rparpar; SEQ ID NO: 2) teve uma capacidade muito reduzida de provocar a carga de pontos quânticos, indicando o envolvimento de um local de ligação quiral. Mascarando o elemento RXXR de terminação C com um aminoácido de terminação C adicional (como em RPARPARA; SEQ ID NO: 94) ou uma amidação do grupo carboxila de terminação C aboliu ligação celular e internalização. Tratar o fago RPARPARA com tripsina (que cliva após resíduos básicos e presumivelmente expõe uma arginina de terminação C) restaurou ligação celular de PPC-1. Essas descobertas indicam que a ligação celular e a internalização requerem a presença de um aminoácido básico terminal com um grupo carboxila livre. Cada linha celular em um painel de linhagens de células tumorais e normais e células primárias derivadas de órgãos de camundongo normal também ligam fago RPARPAR.

Fago RPARPAR injetado por via intravenosa acumulou fortemente nos primeiros leitos vasculares: os pulmões e, em menor grau, o coração. O fago RPARPAR espalhou por todo o tecido pulmonar, enquanto que um fago de controle não foi detectado nos pulmões. Este resultado indica que o fago CendR foi capaz de penetrar no parênquima do tecido. Assim, peptídeo RPARPAR é peptídeo que penetra na célula que é capaz de entrar em vários tipos de células e também pode promover a penetração nos tecidos. Nenhum dos inibidores disponíveis das várias vias internalização de célula inibiu internalização mediada pelo peptídeo CendR RPARPAR, indicando uma nova via.

Neuropilin-1 é o receptor celular para peptídeos CendR. Para identificar proteínas de ligação de RPARPAR, extratos de tumor PPC-1 foram fracionados por cromatografia de afinidade no peptídeo RPARPAR imobilizado em núcleos/esferas/contas de agarose. Eluição com uma solução tampão contendo peptídeo RPARPAR livre liberou uma proteína 130-kDa, identificada por espectroscopia de massa MALDI-TOF como NRP-1. A identificação foi confirmada por obscurecimento imunológico.

Diversas linhas de evidência suportaram o papel de NRP-1 como o receptor CendR: As células de melanoma M21, que não se ligam nem internalizam o peptídeo RPARPAR, também não expressam NRP-1. Expressão forçada de NRP-1 rendeu nessas células capazes de se ligarem-se e internalizarem-se ao fago RPARPAR, enquanto que as células transfectadas com um mutente de bolsa de ligação de NRP-1 não conferem ligação de RPARPAR.

Finalmente, co-coloração de imunofluorescência mostrou que o fago RPARPAR e qdots co-localizam com NRP-1 na superfície da célula e no interior das células.

Uma das formas alternativas do fator de crescimento endotelial vascular, VEGF-165, liga-se a NRP-1 utilizando a sua sequência tipo CendR de terminação C codificada pelo exon 8 (CRCDKPRR; SEQ ID NO:95; Jia et al, 2006). Inúmeros peptídeos tais como A7R (ATWLPPR; SEQ ID NO: 96; Starzec et al, 2006), tuftsina de peptídeo imunomodulador (TKPR; SEQ ID NO: 97) e sua variante de tuftsina reforçada (TKPPR; SEQ ID NO: 98; von Wronski et al, 2006. ) também se ligam ao mesmo local sobre o NRP-1 (Geretti et al., 2008). Semaforina 3A, que também se liga a este local, reforça a permeabilidade vascular (Acevedo et al., 2008). Fago T7 exibindo sete aminoácidos de terminação C de VEGF-165, reforçou tuftsina ou A7R ligada a e foram retomados pela células PPC-1, e ambas as atividades foram reduzidas quando peptídeo RPARPAR não rotulado foi incluído na solução tampão de ligação ou um resíduo de alanina foi adicionado à terminação C de VEGF-C7. Essas experiências mostram que os peptídeos CendR são internalizados por meio de uma via que envolve NRP-1 como um componente fundamental.

Fatores de transcrição de homeodomínio tal como Antennapedia, o vírus simples de herpes 1 de proteína VP22, e o vírus da imunodeficiência humana-1 trans ativador da proteína TAT são conhecidos por internalizar nas células. Peptídeos de penetração de célula catiônica curtos (CPP) derivados dessas proteínas retêm a sua capacidade de internalizar. No entanto, estes peptídeos são diferentes de peptídeos CendR na medida em que são independentes da quiralidade dos aminoácidos no peptídeo, requerem sulfato de heparano de superfície celular para a atividade e não foi atribuída atividade de penetração de tecido (Langel, 2007).

Sequências CendR crípticas nos peptídeos de homing de tumor a partir de telas de fago. A ativação do peptídeo RPARPARA bloqueado terminalmente em C pela tripsina indicou que motifs CendR internos podem ser ativados por proteases, provocando internalização e penetração nos tecidos. De fato, o exame dos peptídeos que penetram célula a partir de telas de homing de tumor revelou vários peptídeos CendR potenciais. Esses peptídeos incluem LyP- 1(CGNKRTRGC; SEQ ID NO: 99) contendo a sequência KRTR (SEQ ID NO: 100; Laakkonen et al, 2002, 2004; PCT Publicação n° WO 2007/090194; Pedido de Patentes dos EUA Publicação n° 2008/0014143), CRGRRST (SEQ ID NO: 101; RGRR (SEQ ID NO: 102; Joyce et al, 2003), e um peptídeo RGD recentemente descoberto com célula excepcional e atividades de penetração em tecido, iRGD (Sugahara et al, 2009; pedido de patente EUA n° 12/355,672, depositado em 19 de janeiro, 2009).

Cada um dos peptídeos de homing de tumor listados acima contém um motif CendR, R/KXXK/R, mas esse motif não é de terminação C. Postulou-se que o processamento proteolítico poderia ativar o motif CendR nesses peptídeos. De fato, o tratamento do fago iRGD ou fago LyP-1 com tripsina reforçou a ligação do fago para as células PPC1. Tripsina não teve efeito sobre os peptídeos de não- internalização CRGDC (SEQ ID NO: 36) ou RGD-4C. A ligação a 4°C do fago iRGD tratado por tripsina, mas não do fago iRGD intacto, foi bloqueada por fago não-infeccioso expressando um peptídeo CendR prototípico, RPARPAR, mas não por fago exibindo um peptídeo no qual o motif CendR foi mascarado pela adição de um resíduo de alanina para a terminação C (RPARPARA; SEQ ID NO: 2). Produtos intracelulares também foram isolados das células tratadas com o peptídeo iRGD e mostrados por espectrometria de massa que o fragmento ativo de CendR esperado, CRGDK (SEQ ID NO: 34), poderia ser recuperado a partir de células (Sugahara et al, 2009; Pedido de Patente dos EUA. n ° 12/355,672, depositado em 19 de janeiro de 2009).

O peptídeo iRGD é eficaz unicamente na promoção de extravasamento e penetração no tecido; e espalha peptídeo iRGD e fago iRGD dentro do tecido do tumor, enquanto que peptídeos RGD convencionais faltando um motif CendR críptico só atingem os vasos sanguíneos do tumor (ver Figura 4). O peptídeo iRGD não endereça de modo detectável à qualquer tecido normal. Nanopartículas revestidas com o peptídeo iRGD espalham de modo impressionante nos tecidos, permitindo imagens ópticas, MRI e reforçando a atividade do abraxano, o qual é uma droga de nanopartícula composta de paclitaxel e albumina. O aumento no homing por iRGD foi na média de 12 vezes mais controles não alvejados (Sugahara et al 2009;. Pedido de Patente dos EUA n° 12/355,672, depositado em 19 de janeiro de 2009). O peptídeo LyP-1 também leva nanopartículas e outras co-composições fundo no tecido do tumor extravascular (Laakkonen et al, 2004;. Karmali et al, 2009;. Publicação de PCT n ° WO 2007/090194; Pedido de Patente dos EUA Publicação n° 2008 /0014143). Estes resultados demonstram que o elemento CendR media penetração nos tecidos e internalização celular, e que os peptídeos de homing de tumor contendo um elemento CendR críptico podem ser eficazes unicamente na entrega específica de cargas em tumores. Conforme divulgado aqui, o uso de elementos CendR e peptídeo de homing de CendR podem ser estendidos para tecidos que não de tumores.

Peptídeos de homing CendR específico de órgão. A maioria, talvez todos, os tecidos normais colocados em suas vasculaturas de uma assinatura molecular específica de tecido definida por marcadores moleculares específicos (revisado em Ruoslahti, 2004). Tal como acontece com tumores, estas diferenças podem ser sondadas com peptídeos de telas de amostra de fago, e podem ser exploradas como alvos para a entrega de compostos e composições, tais como elementos CendR e peptídeos CendR.

Todos os tecidos normais que foram analisados por fago in vivo exibidos até agora, acabaram por expressar marcadores endoteliais específicos de tecido. Estes tecidos incluem tanto os principais órgãos, tais como cérebro, pulmões, coração e rins, como os pequenos, tal como a próstata (Ruoslahti e Rajotte, 2000; Arap et al, 2002;. Zhang et al, 2005). O trabalho inicial foi feito com as bibliotecas de fagos filamentosos, em que a inserção é expressa como uma extensão de terminação N sobre uma proteína de superfície do fago. Essas bibliotecas não favorecem peptídeos CendR e, consequentemente, os peptídeos de homing especifico de tecido recuperados destas telas não continham motifs CendR.

Exame de peptídeos de homing específico de órgão do trabalho recente com T7 revelou uma série de peptídeos com sequências CendR crípticas. Uma coleção de peptídeos de homing de coração (Zhang et al, 2005;. Pedido de Patente dos EUA Nos. 2006/0160743 e 2009/0092548) contém três de tais peptídeos; os dois mais potentes entre eles sendo CGRKSKTVC (SEQ ID NO: 103) (receptor proposto, proteínas 2 rica em cisteína) e CPKTRRVPC (SEQ ID NO: 104) (receptor, proteína bc10 associada com câncer de bexiga). Muito recentemente, a seleção com base no T7 com tecido de próstata normal foi realizada, e ao contrário de telas de fago filamentosos anteriores (Arap et al., 2002), as telas T7 também revelaram uma preponderância dos peptídeos CendR. Nove em cada vinte e um peptídeos a partir de uma tela que consistiu de: três rodadas de seleção ex vivo em células isoladas de camundongo a partir da próstata, e uma rodada in vivo para homing de próstata, continham um motif CendR críptico. Curiosamente, oito dos nove eram bastante similares entre si na medida em que todos conformados com um consenso de CRXTRXXRC (SEQ ID: 105). Um peptídeo derivado do vírus da raiva com um motif CendR aparente foi usado para entregar siRNA ao cérebro através da barreira hematoencefálica (Kumar et al., 2007). Estes resultados sugerem que peptídeos específicos de órgãos com propriedades CendR podem ser produzidos e utilizados.

Conforme revelado aqui, peptídeos podem ser selecionados e sintetizados para que combinem homing específico de tecido, penetração de tecido e internalização celular. Os peptídeos podem utilizar várias combinações de elementos de homing vascular e penetração de tecido e podem alvejar, por exemplo, o coração, pulmões ou próstata.

Os órgãos normais podem ser usados como alvo porque as propriedades específicas de tecido da vasculatura e do parênquima podem vir a ser mantidas mesmo em um tecido doente, especialmente no início um processo de doença, quando a intervenção é provável que seja de maior benefício. Por exemplo, o coração, pulmões e próstata, podem ser alvejados. Tanto peptídeos CendR convencionais quanto candidatos à vasculatura desses tecidos estão na mão. O coração e os pulmões são de particular interesse como alvos para terapias que poderiam usar alvejamento específico e penetração de tecido (fibrose cística é um exemplo dessas doenças). Além disso, o lado direito do coração e dos pulmões são os tecidos encontrados primeiro por peptídeos injetados por via intravenosa. De fato peptídeos CendR pré-ativados (peptídeos com uma sequência de R/KXXR/K exposta; SEQ ID NO: 23) são seletivamente retidos por esses tecidos. Assim, eles podem ser de algum modo alvejados seletivamente com peptídeos tipo RPARPAR (SEQ ID NO: 2) e CRPPR (SEQ ID NO: 106; Zhang et al, 2005). Camundongos com câncer de próstata transgênicos foram previamente utilizados para mostrar que a destruição alvejada do tecido da próstata antes dos tumores desenvolverem atrasou significativamente o desenvolvimento de tumores nesses camundongos (Arap et al., 2002). Os peptídeos revelados serão mais eficazes para melhorar o procedimento. Além disso, a próstata representa um pequeno órgão e um em que os primeiros efeitos de passagem não são um fator. Neuropilin-1 é expresso de modo ubíquo em células endoteliais e várias células parenquimais, e um grande número de peptídeos CendR aparentes foram obtidos em uma tela de próstata, por isso a abordagem CendR pode ser usada com a próstata também.

Por exemplo, três abordagens podem ser usadas para peptídeos que penetram tecido para os órgãos selecionados: (1) teste dos peptídeos de motif CendR já em mãos para o coração e próstata; (2) construção de peptídeos quiméricos que incorporam uma sequência de homing previamente identificada e um motif CendR genérico, e (3) varrer o fago por novos peptídeos.

Peptídeos de homing de motif CendR existentes. Peptídeos estão na mão que a endereçam para os pulmões (Rajotte e Ruoslahti, 1999; Brown e Ruoslahti, 2004), coração (Zhang et al, 2005, e os resultados não publicados.) e próstata (Arap et al, 2002;. Não publicado). Alguns desses peptídeos têm um motif CendR. Homing de peptídeos pode ser estabelecido de maneiras diversas. Um exemplo é usando um método de varredura chamado de ”varredura play-off”. Os fagos candidatos são combinados em proporções iguais, o tanque é injetado em camundongos, o órgão ou tecido-alvo, juntamente com vários outros órgãos ou tecidos são coletados, e é determinado por PCR quantitativo se algum dos peptídeos apresentando fago endereçou preferencialmente para o alvo. Os pulmões (e coração) podem ser até certo ponto alvejados com peptídeos CendR ativados (por exemplo, RPARPAR; SEQ ID NO: 2). O homing é baseado em um efeito de primeira passagem, e inclui o coração (lado direito em particular). Há também acúmulo substancial desses peptídeos em outros órgãos, como resultado, eles são melhores se o alvejamento rigoroso é desejado.

Peptídeos quiméricos. Peptídeos de homing de não CendR (e futuro) identificados anteriormente podem ser combinados com elementos CendR ativados ou ativáveis. Por exemplo, peptídeos de homing para os pulmões (Rajotte e Ruoslahti, 1999; Brown e Ruoslahti, 2004) e próstata (Arap et al, 2002) pode ser combinado com RPARPAR (SEQ ID NO: 2) (ou RPAR; SEQ ID NO: 5) de modo que o peptídeo de homing seja terminação C de RPARPAR (SEQ ID NO: 2) (para bloquear a atividade CendR), e separado por uma sequência que provê um local de clivagem da protease para a ativação CendR. Os elementos CendR crípticos em tais peptídeos podem ser ativados por furinas, como essas enzimas preferem para clivar após a arginina de terminação C em um contexto RXXR, particularmente se um dos Xs é um aminoácido básico. No entanto, como demonstrado pela ativação de RPARPARA (SEQ ID NO: 2) e iRGD pela tripsina, qualquer enzima que cliva depois de um aminoácido básico pode ativar potencialmente uma sequência CendR críptica. A localização da enzima em relação ao receptor primário para um peptídeo de homing de CendR pode afetar a ativação. Locais de clivagem conhecidos podem ser feitos pela duplicação de sequências de peptídeos CendR ativáveis existentes. As construções podem ser testadas como peptídeos exibidos no fago usando titulação de fago como a leitura. Se desejado, o local de clivagem da protease pode ser otimizado pela preparação de uma biblioteca de fago com a estrutura de peptídeo de homing de RPARPXRXXXX (SEQ ID: 107) e varredura deste para ligação às e internalização em células isoladas do tecido-alvo.

Para homing de pulmão, a sequência CGFELETC (SEQ ID: 108; Rajotte e Ruoslahti, 1999; molécula-alvo: membrana dipeptidil peptidase), por exemplo, pode ser usado para construir uma biblioteca de peptídeo quimérico.

Como outra estratégia para homing de coração, coleção de peptídeos de homing de coração de peptídeos de não CendR (Zhang et al., 2005) pode ser usada para construir peptídeos quiméricos e bibliotecas. Como outra estratégia, peptídeo CendR ativado CRPPR (SEQ ID NO: 106), que mostra uma preferência para o coração (Zhang et al, 2005), pode ser usado. Peptídeos de motif. CendR de homing de coração adicionais podem ser produzidos por meio de testes, por exemplo, uma sequência CRPPRA (SEQ ID NO: 109) para ativação e/ou Internalização (o aminoácido de terminação C precisa ser clivado off, para ativar o elemento CendR - outros aminoácidos podem ser usados também), ou pela varredura de uma biblioteca de fago com, por exemplo, a estrutura CRPPRXXXX (SEQ ID NO: 110).

Para a próstata, o peptídeo de homing de próstata (SMSIARL; molécula- alvo desconhecida, Arap et al, 2002), por exemplo, pode ser usado como ponto de partida na construção de uma biblioteca de peptídeo quimérico. Antígeno de membrana específica de próstata (PSMA) oferece outra fonte interessante para um peptídeo CendR que é ativado na próstata. PSMA é uma carboxipeptidase que prefere glutamil (por exemplo, Liu et al., 2002). Bloqueando o peptídeo RPARPAR com um ácido glutâmico de terminação C (RPARPARE; SEQ ID NO: 111) vai dar um peptídeo CendR que é seletivamente ativado na próstata. Expressão da carboxipeptidase é regulada ascendentemente nas células cancerosas, tornando-se particularmente útil para a ativação no contexto do tratamento de câncer. Para aumentar a concentração do peptídeo na próstata, uma construção em que, por exemplo, a sequência SMSIARL de homing de próstata (SEQ ID NO: 112) é adicionada, neste caso ao lado da terminação N, por exemplo, uma sequência RPARE (4-8 aminoácidos da SEQ ID NO: 111) (SMSIARLARPARE; SEQ ID NO: 113). Inserindo um aminoácido (por exemplo, alanina) entre os dois peptídeos cria um motif CendR duplo similar à RPARPAR (SEQ ID NO: 2).

Os peptídeos revelados podem ser validados, por exemplo, testando a ligação celular in vitro e internalização, e homing in vivo. Peptídeos sintéticos podem ser usados para mostrar que as atividades associadas com o fago selecionado são reproduzidas pelo peptídeo que exibe o fago. Técnicas para isso são bem conhecidas (por exemplo, Zhang et al, 2005;. Simberg et al, 2007; Karmali et al, 2008). Os peptídeos geralmente podem ser rotulados com um fluoróforo para permitir a detecção nos tecidos, e tanto o peptídeo livre quanto um conjugado multimérico em nanopartículas (que se assemelha mais à apresentação multivalente sobre o fago) podem ser testados.

São reveladas moléculas de homing acopladas a um elemento CendR para entregar seletivamente o elemento CendR para uma dada célula, formando uma composição CendR de homing. Uma variedade de moléculas de homing pode ser usada nas composições reveladas, conjugados e métodos. Tais moléculas de homing incluem, sem limitação, peptídeos, como revelados aqui. Os compostos revelados, composições, conjugados e métodos podem incluir ou usar as moléculas de homing reveladas em várias formas, incluindo peptídeos e peptidomiméticos conforme revelado. Para conveniência de expressão, em muitos lugares aqui o uso ou inclusão de peptídeos será recitado. Entende-se que, em tais casos, considera-se que as moléculas de homing em várias formas também podem ser usadas ou incluídas da mesma forma ou modos similares ao que é descrito em termos de peptídeos, e tal uso e inclusão é especificamente contemplado e, assim, revelado. Um peptídeo CendR de homing, molécula, etc., refere-se a um elemento CendR que é combinado com um ou mais peptídeos de homing ou moléculas.

O termo ”molécula de homing" como usado aqui, significa qualquer molécula que endereça in vivo seletivamente às células específicas ou tecidos específicos de preferência ao tecido normal. Similarmente, o termo ”peptídeo de homing” ou ”peptidomimético de homing" significa um peptídeo que endereça in vivo seletivamente às células específicas ou tecidos específicos de preferência ao tecido normal. Entende-se que uma molécula de homing que endereça in vivo seletivamente às células específicas ou tecidos específicos ou podem exibir homing preferencial às células específicas ou tecido específico.

Por ”endereça seletivamente" entende-se que, in vivo, a molécula de homing se liga preferencialmente ao alvo, em comparação com não-alvo. Por exemplo, a molécula de homing pode ligar preferencialmente aos tumores, em comparação aos não-tumores. Homing seletivo para, por exemplo, as células do tumor geralmente é caracterizado por, pelo menos uma localização duas vezes maior dentro das células do tumor, em comparação com vários tipos de tecidos de células não-tumorais. Uma molécula de homing pode ser caracterizada por 5

vezes, 10 vezes, 20 vezes ou mais a localização preferencial às células-alvo, em comparação com a maioria ou todas as células não-alvo. Assim, entende-se que, em alguns casos, uma molécula de homing endereça, em parte, a uma ou mais células normais, tecidos e órgãos, além de endereçar para células e tecidos alvo. Homing seletivo também pode ser referido como alvejar.

Ligação no contexto de uma molécula de homing reconhecer e/ou ligar ao seu alvo pode se referir tanto à ligação covalente quanto à não-covalente, por exemplo, quando uma molécula de homing pode ligar, anexar ou de outro modo acoplar ao seu alvo por meio de ligação covalente e/ou não covalente. Ligação pode ser ou de alta afinidade ou baixa afinidade, de preferência alta afinidade. Exemplos de forças de ligação que podem ser úteis incluem, mas não estão limitadas à ligações covalentes, interações dipolares, forças eletrostáticas, ligações de hidrogênio, interações hidrofóbicas, ligações iônicas e/ou forças de van der Waals. Esta ligação pode ocorrer, além daquela ligação que ocorre com o elemento CendR.

Muitas moléculas de homing e peptídeos de homing endereçam para a vasculatura do tecido alvo. No entanto, por uma questão de conveniência homing é referido em alguns lugares aqui como homing ao tecido associado com a vasculatura à qual a molécula de homing ou peptídeo de homing pode realmente endereçar. Assim, por exemplo, um peptídeo de homing que endereça à vasculatura do tumor pode ser referido aqui como homing para o tecido do tumor ou células tumorais. Pela inclusão ou associação a uma molécula de homing ou peptídeo de homing, por exemplo, com uma proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co-composição, composição de carga ou elemento CendR a proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co-composição, composição de carga ou elemento CendR pode ser alvejado ou pode endereçar para o alvo da molécula de homing ou peptídeo de homing. Desta forma, a proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co-composição, composição de carga ou elemento CendR pode ser dito para endereçar ao alvo da molécula de homing ou peptídeo de homing. Por conveniência e salvo indicação em contrário, a referência ao homing de uma proteína, peptídeo, sequência de aminoácido, co-composição, composição de carga, elemento CendR e etc., pretende apenas indicar que a proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, co-composição, composição de carga, elemento CendR, etc inclui ou está associado com uma molécula de homing adequada ou peptídeo de homing.

As sequências de aminoácidos reveladas, co-composições, composições de carga, proteínas ou peptídeos (e elementos CendR que são acoplados ou associados a uma molécula de homing) podem, por exemplo, endereçar às células do cérebro, células-tronco do cérebro, tecido cerebral e/ou vasculatura cerebral, células renais, células-tronco de rim, tecido renal e/ou vasculatura renal, células da pele, células-tronco da pele, tecido da pele e/ou vasculatura da pele, células do pulmão, tecido pulmonar e/ou vasculatura pulmonar, células pancreáticas, tecido pancreático e/ou vasculatura pancreática, células intestinais, tecido intestinal e/ou vasculatura intestinal, células da glândula adrenal, tecido adrenal e/ou vasculatura adrenal, células retinais, tecido retinal e/ou vasculatura retinal, células do fígado, tecido hepático e/ou vasculatura do fígado, células da próstata, tecido da próstata e/ou vasculatura da próstata, células da endometriose, tecido da endometriose e/ou vasculatura da endometriose, células de ovário, tecido de ovário e/ou vasculatura de ovário, células tumorais, tumores, vasos sanguíneos tumorais e/ou vascular do tumor, células ósseas, tecido ósseo e/ou vasculatura óssea, células da medula óssea, tecido da medula óssea e/ou vasculatura da medula óssea, células de cartilagem, tecido cartilaginoso e/ou vasculatura de cartilagem, células-tronco, células-tronco embrionárias, células- tronco pluripotentes, células-tronco pluripotentes induzidas, células-tronco adultas, células-tronco hematopoiéticas, células-tronco neurais, células-tronco mesenquimais, células-tronco mamárias, células-tronco endoteliais, células-tronco adultas olfativas, células-tronco da crista neural, células-tronco de câncer, células sanguíneas, eritrócitos, plaquetas, leucócitos, granulócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, células linfóides, linfócitos, monócitos, vasculatura de ferida, vasculatura do tecido lesado, vasculatura do tecido inflamado, placas ateroscleróticas ou uma combinação.

Exemplos de moléculas de homing e peptídeos de homing são conhecidos. Exemplos incluem: peptídeos homing ao cérebro, tais como: CNSRLHLRC (SEQ ID NO: 114), CENWWGDVC (SEQ ID NO: 115), WRCVLREGPAGGCAWFNRHRL (SEQ ID NO: 116), CLSSRLDAC (SEQ ID NO: 117), CVLRGGRC (SEQ ID NO: 118), CNSRLQLRC (SEQ ID NO: 119), CGVRLGC (SEQ ID NO: 120), CKDWGRIC (SEQ ID NO: 121), CLDWGRIC (SEQ ID NO: 122), CTRITESC (SEQ ID NO: 123), CETLPAC (SEQ ID NO:124), CRTGTLFC (SEQ ID NO:125), CGRSLDAC (SEQ ID NO:126), CRHWFDVVC (SEQ ID NO:127), CANAQSHC (SEQ ID NO:128), CGNPSYRC (SEQ ID NO: 129), YPCGGEAVAGVSSVRTMCSE (SEQ ID: 130), LNCDYQGTNPATSVSVPCTV (SEQ ID NO: 131); peptídeos de homing ao rim, tais como: CLPVASC (SEQ ID NO: 132), CGAREMC (SEQ ID NO: 133), CKGRSSAC (SEQ ID NO: 134), CWARAQGC (SEQ ID NO: 135) , CLGRSSVC (SEQ ID NO: 136), CTSPGGSC (SEQ ID NO: 137), CMGRWRLC (SEQ ID NO: 138), CVGECGGC (SEQ ID NO: 139), CVAWLNC (SEQ ID NO: 140), CRRFQDC (SEQ ID NO: 141), CLMGVHC (SEQ ID NO: 142), CKLLSGVC (SEQ ID NO: 143), CFVGHDLC (SEQ ID NO: 144), CRCLNVC (SEQ ID NO: 145), CKLMGEC (SEQ ID NO: 146); peptídeos de homing à pele, tais como: CARSKNKDC (SEQ ID NO: 147), CRKDKC (SEQ ID NO: 148), CVALCREACGEGC (SEQ ID NO: 149), CSSGCSKNCLEMC (SEQ ID NO: 150), CIGEVEVC (SEQ ID NO: 151), CKWSRLHSC (SEQ ID NO:152), CWRGDRKIC (SEQ ID NO: 153), CERVVGSSC (SEQ ID NO: 154), CLAKENVVC (SEQ ID NO: 155); peptídeos de homing ao pulmão, tais como: CGFECVRQCPERC (SEQ ID NO: 156), CGFELETC (SEQ ID NO: 157), CTLRDRNC (SEQ ID NO: 158), CIGEVEVC (SEQ ID NO: 159), CTLRDRNC (SEQ ID NO: 160), CGKRYRNC (SEQ ID NO: 161), CLRPYLNC (SEQ ID NO: 162), CTVNEAYKTRMC (SEQ ID NO: 163), CRLRSYGTLSLC (SEQ ID NO: 164), CRPWHNQAHTEC (SEQ ID NO: 165); peptídeos de homing ao pâncreas, tais como: SWCEPGWCR (SEQ ID NO: 166), CKAAKNK (SEQ ID NO: 167), CKGAKAR (SEQ ID NO: 168), VGVGEWSV (SEQ ID NO: 169); peptídeos de homing ao intestino, tais como: YSGKWGW (SEQ ID NO: 170); peptídeos de homing ao útero, tais como: GLSGGRS (SEQ ID NO: 171); peptídeos de homing à glândula adrenal, tais como: LMLPRAD (SEQ ID NO: 172), LPRYLLS (SEQ ID NO: 173); peptídeos de homing à retina, tais como: CSCFRDVCC (SEQ ID NO: 174), CRDVVSVIC (SEQ ID NO: 175); peptídeos de homing ao intestino, tais como: YSGKWGK (SEQ ID NO: 176), GISALVLS (SEQ ID NO: 177), SRRQPLS (SEQ ID NO: 178), MSPQLAT (SEQ ID NO: 179), MRRDEQR (SEQ ID NO: 180), QVRRVPE (SEQ ID NO: 181), VRRGSPQ (SEQ ID NO: 182), GGRGSWE (SEQ ID NO: 183), FRVRGSP (SEQ ID NO: 184), RVRGPER (SEQ ID NO: 185); peptídeos de homing ao fígado, tais como: VKSVCRT (SEQ ID NO: 186), WRQNMPL (SEQ ID NO: 187), SRRFVGG (SEQ ID NO: 188), ALERRSL (SEQ ID NO: 189), ARRGWTL (SEQ ID NO: 190); peptídeos de homing à próstata, como : SMSIARL (SEQ ID NO: 191), VSFLEYR (SEQ ID NO: 192), RGRWLAL (SEQ ID NO: 193); peptídeos de homing ao ovário, tais como: EVRSRLS (SEQ ID NO: 194), VRARLMS (SEQ ID NO: 195), RVGLVAR (SEQ ID NO: 196), RVRLVNL (SEQ ID NO: 197); peptídeo de homing de ligação coagular, tais como: CREKA (SEQ ID NO: 7), CLOTl e CLOT2; peptídeos de homing ao coração, tais como: CRPPR (SEQ ID NO: 198), CGRKSKTVC (SEQ ID NO: 199), CARPAR (SEQ ID NO: 200), CPKRPR (SEQ ID NO: 201), CKRAVR (SEQ ID NO: 202), CRNSWKPNC (SEQ ID NO: 203), RGSSS (SEQ ID NO: 204), CRSTRANPC (SEQ ID NO: 205), CPKTRRVPC (SEQ ID NO: 206), CSGMARTKC (SEQ ID NO: 207), GGGVFWQ (SEQ ID NO: 208), HGRVRPH (SEQ ID NO: 209), VVLVTSS (SEQ ID: 210), CLHRGNSC (SEQ ID NO: 211), CRSWNKADNRSC (SEQ ID NO: 212), CGRKSKTVC (SEQ ID NO: 213), CKRAVR (SEQ ID NO: 214), CRNSWKPNC (SEQ ID NO: 215), CPKTRRVPC (SEQ ID NO: 216), CSGMARTKC (SEQ ID NO : 217), CARPAR (SEQ ID NO: 218), CPKRPR (SEQ ID NO: 219); peptídeo de homing ao vaso sanguíneo do tumor, tal como: CNGRC (SEQ ID NO: 220) e outros peptídeos com o motif NGR (Patente dos EUA n°s 6.177.542 e 6.576.239; Publicação de pedido de patente dos EUA n° 20090257951); peptídeos RGD e peptídeos RGR. Outros peptídeos de homing incluem CSRPRRSEC (SEQ ID NO: 221), CSRPRRSVC (SEQ ID NO: 222) e CSRPRRSWC (SEQ ID NO: 223) (Hoffman et al, Cancer Cell, vol 4 (2003).), F3 (KDEPQRRSARLSAKPAPPKPEPKPKKAPAKK ;(SEQ ID NO: 224)), PQRRSARLSA (SEQ ID NO: 225), PKRRSARLSA (SEQ ID NO: 226) (Patente dos EUA n° 7.544.767) e CGRECPRLCQSSC (SEQ ID NO: 62), que endereça aos tumores.

Entende-se que, embora muitos motifs de homing e alvejamento e sequências sejam mostrados com resíduos de cisteína em uma ou ambas as extremidades, tais resíduos de cisteína geralmente não são exigidos para a função de homing. Geralmente, tais cisteínas estão presentes devido aos métodos pelos quais as sequências de homing e alvejamento foram identificadas. Tal cisteína terminal como pode ser usada para, por exemplo, circularizar peptídeos, tal como os revelado aqui. Por estas razões, é também entendido que resíduos de cisteína podem ser adicionados às extremidades de qualquer um dos peptídeos revelados.

Peptídeos NGR úteis incluem peptídeos como X2CNGRCX2 (SEQ ID NO: 89), CX2 (C/X) NGR (C/X) X2C (SEQ ID NO: 90) e CNGRCX6 (SEQ ID NO: 91) (onde”X”é qualquer aminoácido), que pode ser linear ou circular. Exemplos de peptídeos NGR incluem CNGRCVSGCAGRC (SEQ ID NO: 63), NGRAHA (SEQ ID NO: 24), CVLNGRMEC (SEQ ID NO: 67), CNGRC (SEQ ID NO: 68), ALNGREESP (SEQ ID NO: 66), CVLNGRME (SEQ ID NO: 87), CKVCNGRCCG (SEQ ID NO: 88), CEMCNGRCMG (SEQ ID NO: 69), CPLCNGRCAL (SEQ ID NO: 70), CPTCNGRCVR (SEQ ID NO: 71), CGVCNGRCGL (SEQ ID NO:72), CEQCNGRCGQ (SEQ ID NO: 73), CRNCNGRCEG (SEQ ID NO: 74), CVLCNGRCWS (SEQ ID NO: 75), CVTCNGRCRV (SEQ ID NO: 76), CTECNGRCQL (SEQ ID NO: 77), CRTCNGRCLE (SEQ ID NO: 78), CETCNGRCVG (SEQ ID NO: 79), CAVCNGRCGF (SEQ ID NO: 80), CRDLNGRKVM (SEQ ID NO: 81), CSCCNGRCGD (SEQ ID NO: 82), CWGCNGRCRM (SEQ ID NO: 83), CPLCNGRCAR (SEQ ID NO: 84), CKSCNGRCLA (SEQ ID NO: 85), CVPCNGRCHE (SEQ ID NO: 86), CQSCNGRCVR (SEQ ID NO:47), CRTCNGRCQV (SEQ ID NO: 48), CVQCNGRCAL (SEQ ID NO: 49), CRCCNGRCSP (SEQ ID NO: 50), CASNNGRVVL (SEQ ID NO: 51), CGRCNGRCLL (SEQ ID NO: 52), CWLCNGRCGR (SEQ ID NO: 53), CSKCNGRCGH (SEQ ID NO: 54), CVWCNGRCGL (SEQ ID NO: 55), CIRCNGRCSV (SEQ ID NO: 56), CGECNGRCVE (SEQ ID NO: 57), CEGVNGRRLR (SEQ ID NO: 58), CLSCNGRCPS (SEQ ID NO: 59), CEVCNGRCAL (SEQ ID NO: 60).

Peptídeos úteis para alvejar tumor incluem, por exemplo, iRGD, LyP-1, iNGR e peptídeos RGR. O peptídeo CendR de homing ao tumor prototípico, iRGD, que foi utilizado na geração dos resultados descritos aqui. LyP-1, um peptídeo que contém um elemento CendR putativo e tem propriedades de penetração no tumor. Este peptídeo tem um alvo único dentro de tumores; este se acumula preferencialmente nas áreas hipóxicas/de baixos nutrientes dos tumores (Laakkonen et al, 2002;. 2004; Karmali et al, 2009). CRGRRST (RGR; Joyce et al, 2003) é um peptídeo que tem sido utilizado com sucesso no alvejamento de uma combinação de anticorpos de citocinas em tumores (Hamzah et al, 2008). Este peptídeo é linear, o que simplifica a síntese. Peptídeos NGR endereçam à vasculatura angiogênica, incluindo vasculatura angiogênica associada aos tumores, e integrina αv e integrina α5βi (Patente dos EUA n°s 6.576.239 e 6.177.542 e publicação de pedido de patente dos EUA n° 20090257951). Como LyP-1, RGR é pelo menos até certo ponto específico de tipo de tumor (Joyce et al., 2003), mas os tipos de tumor reconhecidos pelos dois peptídeos parecem ser parcialmente diferentes, o que pode ser uma vantagem em combinações de testes com o pan-iRGD tumor. A Tabela 3 mostra exemplos de peptídeos de CendR de homing ao tumor. Tabela 3. Exemplos de Peptídeos de homing ao Tumor com elementos CendR

Peptídeos RGD são peptídeos que contêm o motif (Arg-Gly-Asp) RGD e que endereçam à angiogênese e vasculatura do tumor. Peptídeos NGR são 5 peptídeos que contêm o motif (Asn-Gly-Arg) NGR e endereçam à angiogênese e vasculatura do tumor. Exemplos de peptídeos NGR incluem CNGRCVSGCAGRC (SEQ ID NO: 63), NGRAHA (SEQ ID NO: 24), CVLNGRMEC (SEQ ID NO: 67), e CNGRC (SEQ ID NO: 68). Peptídeos GSL são peptídeos que contêm o motif (Gly- Ser-Leu) GSL e que endereçam à vasculatura do tumor. Exemplos de um 10 peptídeo GSL incluem CGSLVRC (SEQ ID NO: 65) e CLSGSLSC (SEQ ID NO: 64).

RGD de internalização (iRGD) refere-se aos peptídeos que combinam um motif RGD e um elemento CendR. Por exemplo, peptídeo RGD cíclico tendo a sequência CRGDK/RGPD/EC (SEQ ID NOs: 71) é excepcionalmente eficaz na orquestração do extravasamento e espalhamento de cargas ligadas dentro do tecido tumoral, e posteriormente internalização dentro das células do tumor. O peptídeo iRGD incorpora dois elementos funcionais: o motif RGD que dá especificidade de tumor (Pierschbacher e Ruoslahti, E. Atividade de anexação celular de fibronectina pode ser duplicada por pequenos fragmentos sintéticos da molécula. Nature 309, 30-33 (1984); Ruoslahti (2003); Eliceiri e Cheresh (2001); Ruoslahti (2002); Arap et al. (1998); Curnis et al. (2004); Sipkins et al. (1998); Murphy et al. (2008)), e um motif CendR que media a penetração. iRGD adere prontamente às células cultivadas expressando integrinas αv, e é internalizado muito mais eficazmente do que outros peptídeos RGD. Internalização foi dependente da expressão de neuropilin-1, o receptor para o iRGD de motif CendR acoplado a uma carga de fluoresceína, fago ou nanopartículas artificiais, acumulou ao redor dos vasos do tumor in vivo, distribuídos através do interstício do tumor e tornou-se internalizado nas células do tumor em vários modelos de tumor. Administração sistêmica de micelas iRGD rotuladas com um corante infravermelho próximo produziu um sinal de tumor forte e específico em toda a imagem do corpo do camundongo. O elemento CendR em iRGD é um elemento CendR ativável que é ativado, provavelmente por clivagem após o Lys/Arg, para permitir que o peptídeo media a internalização.

NGR de internalização (Ingr) refere-se aos peptídeos que combinam um motif NGR e um elemento CendR. Por exemplo, peptídeo NGR tendo a sequência de K/RNGR (SEQ ID NO: 46) pode ser eficaz na orquestração de extravasamento e espalhamento de cargas ligadas no tecido tumoral, e posteriormente internalização dentro das células do tumor. O peptídeo iNGR incorpora dois elementos funcionais: o motif NGR que dá especificidade ao tumor, e um motif CendR que media a penetração. Outro exemplo de um peptídeo iNGR é NGRAHA (SEQ ID NO: 24). O elemento CendR no peptídeo iNGR NGRAHA (SEQ ID NO: 24) é um elemento CendR ativável que é ativado, provavelmente por clivagem após o Arg, para permitir que o peptídeo medie a internalização.

Moléculas acessórias podem ser qualquer molécula, composto, componente, etc, que tenha uma função útil e que possa ser usada em combinação com um elemento CendR, composição CendR, conjugado CendR, molécula CendR, composto CendR, proteína CendR, peptídeo CendR, composição, co-composição e/ou composição de carga. Exemplos de moléculas acessórias úteis incluem moléculas de homing, moléculas alvo, ligantes de afinidade, moléculas que penetram células, moléculas de escape endossômico, moléculas de alvejamento subcelular, moléculas de alvejamento nuclear. Moléculas acessórias diferentes podem ter funções similares ou diferentes umas das outras.

Moléculas que alvejam, endereçam ou têm afinidade para certas moléculas, estruturas, células, tecidos, etc, são particularmente úteis como moléculas acessórias. Além dos peptídeos de homing descritos neste documento, existem numerosas moléculas e compostos conhecidos que têm afinidade por moléculas-alvo particulares, estruturas, células, tecidos, etc, e podem ajudar no acúmulo e/ou direcionar os componentes e composições revelados para alvos desejados. Por conveniência, tais efeitos de afinidade podem ser referidos como homing. Descrições de homing e de efeitos de homing em qualquer outro lugar aqui pode ser aplicado a essas moléculas.

Um ligante de afinidade é uma molécula que interage especificamente com uma molécula particular, fração, tecido celular, etc. A molécula, fração, tecido celular, etc, que interage especificamente com um ligante de afinidade é referido aqui como um alvo ou molécula-alvo, fração, tecido celular, etc. Deve ser entendido que o termo molécula-alvo se refere tanto às moléculas separadas quanto às porções dessas moléculas, tais como um epítopo de uma proteína, que interage especificamente com um ligante de afinidade. Anticorpos, seja membro de um par de receptor/ligante, poliamidas sintéticas ((Dervan and Burli, Sequence-specific DNA recognition by polyamides. Curr Opin Chem Biol, 3(6):688-93 (1999); Wemmer and Dervan, Targeting the minor groove of DNA. Curr Opin Struct Biol, 7(3):355-61 (1997)), e outras moléculas com afinidades de ligação específicas são exemplos de ligantes de afinidade.

Um ligante de afinidade que interage especificamente com uma molécula- alvo particular é dito ser específico para aquela molécula-alvo. Por exemplo, onde o ligante de afinidade é um anticorpo que se liga a um antígeno particular, o ligante de afinidade é dito ser específico para esse antígeno. O antígeno é a molécula-alvo. O ligante de afinidade também pode ser referido como sendo específico para uma molécula-alvo particular. Exemplos de ligantes de afinidade úteis são anticorpos, ligantes, proteínas de ligação, proteínas de receptor, haptenos, aptâmeros, carboidratos, lectinas, ácido fólico, poliamidas sintéticas e oligonucleotídeos. Proteínas de ligação úteis incluem proteínas de ligação ao DNA. Proteínas de ligação de DNA úteis incluem motifs de dedo de zinco, motifs de zíper de leucina e motifs. hélice gira hélice. Estes motifs podem ser combinados no mesmo ligante de afinidade.

Anticorpos são úteis como ligantes de afinidade. Os anticorpos podem ser obtidas comercialmente ou produzidos usando métodos bem estabelecidos. Por exemplo, Johnstone e Thorpe, Immunochemistry In Practice (Blackwell Scientific Publications, Oxford, Inglaterra, 1987) nas páginas 30-85, descreve métodos gerais úteis para a produção tanto de anticorpos policlonais quanto monoclonais. Todo o livro descreve muitas técnicas gerais e princípios para o uso de anticorpos em sistemas de ensaio. Anticorpos numerosos e outros ligantes de afinidade são conhecidos que se ligam às proteínas particulares, carboidratos, glicoproteínas, moléculas, células, tecidos, etc. Tais anticorpos podem ser utilizados nos componentes revelados e composições.

Exemplos de peptídeos que penetram células estão descritos, por exemplo, na Publicação do Pedido de Patente dos EUA Nos 20100061942, 20100061932, 20100048487, 20100022466, 20100016215, 20090280058, 20090186802, 20080234183, 20060014712, 20050260756, 20030077289, que são incorporados por referência aqui, na sua totalidade e especificamente para a sua descrição dos peptídeos célula de penetração e motifs. Exemplos de moléculas de escape endossômico são descritos, por exemplo, na publicação do pedido de patente dos EUA Nos 20090325866, 20090317802, 20080305119, 20070292920, 20060147997, 20050038239, 20040219169, 20030148263, 20030082143, 20020132990, 20020068272, que são incorporados por referência aqui, na sua totalidade e especificamente para a sua descrição de moléculas de escape endossômico e motifs. Exemplos de moléculas de alvejamento subcelular são descritos, por exemplo, na publicação do pedido de patente dos EUA Nos 2009031733 Aplicação de publicação, 20090258926, 20090176660, 20080311136, 20070287680, 20070157328, 20070111270, 20070111251, 20060257942, 20060154340, 20060014712, 20050281805, 20050233356, 20040005309, 20030082176, 20010021500, que são incorporados por referência aqui, na sua totalidade e, especificamente, para a sua descrição de moléculas de alvejamento subcelular e motifs. Exemplos de moléculas de alvejamento nuclear são descritos, por exemplo, na Publicação de pedido de patente dos EUA Nos 10100143454, 20100099627, 20090305329, 20090176710, 20090087899, 20070231862, 20070212332, 20060242725, 20060233807, 20060147922, 20060070133, 20060051315, 20050147993, 20050071088, 20030166601, 20030125283, 20030083261, 20030003100, 20020068272 e 20020055174, que são incorporados por referência aqui, na sua totalidade e, especificamente, para sua descrição das moléculas de alvejamento nuclear e motifs.

Conforme divulgado aqui, o termo”co-composição" refere-se a qualquer composição de matéria que pode ser usada com o elemento CendR. Similarmente, o termo”composição de carga" se refere a qualquer composição de matéria que pode ser usada com o elemento CendR. Geralmente, por exemplo, uma co-composição ou composição de carga pode ser qualquer composição para ser internalizada e/ou penetrar nas células e/ou tecidos. Por exemplo, uma co- composição ou composição de carga pode ser uma molécula, um conjugado, uma associação de moléculas, uma composição, uma mistura. Exemplos de co- composições e composições de carga incluem, mas não estão limitados aos agentes quimioterápicos de câncer, agentes citotóxicos, agentes antiinflamatórios, agentes anti-artríticos, polipeptídeos, moléculas de ácido nucléico, moléculas pequenas, nanopartículas, micropartículas, fluoróforos, fluoresceína, rodamina, um radionuclídeo, Lutécio-177 (177Lu), rênio-188 (188Re), Gálio-68 (68Ga), ítrio-90 (90Y), tecnécio-99m (99mTc), Ólmio-166 (166Ho), Iodo- 131 (131I), índio-111 (111In), Flúor-18 (18F), Carbono-11 (11C), nitrogênio-13 (13N), oxigênio-15 (15O), Bromo-75 (75Br), Bromo- 76 (76Br), Iodo-124 (124I), Tálio-201 (201Tl), tecnécio-99 (99Tc), iodo- 123 (123I), um agente anti-angiogênico, agentes pró-angiogênicos ou uma combinação destes.

Os componentes CendR revelados podem ser usados com quaisquer agentes terapêuticos desde que representem um modo geral e plataforma para ajudar na entrega de agentes terapêuticos para as células e tecidos. Assim, qualquer agente terapêutico pode ser utilizado nas ou com as composições reveladas. Listas abrangentes de agentes terapêuticos e drogas podem ser encontradas em vários lugares, tal como o Orange Book e outras listas mantidas pela Food and Drug Administration dos EUA (informações disponíveis nos sites fda.gov/Drugs/InformationOnDrugs/ucml29662.htm e fda.gov/Drugs/InformationOnDrugs/ApprovedDrugs/default.htm) e listas similares mantidas por outros países, e em clinicaltrials.gov/ (para drogas e agentes terapêuticos submetidos aos ensaios clínicos).

Co-composições e composições de carga podem ser frações. Como usado aqui, o termo” fração" é utilizado amplamente para significar um material físico, químico ou biológico que geralmente transmite uma função biologicamente útil para uma co-composição ligada ou uma composição de carga ligada. A fração pode ser qualquer material natural ou não natural, incluindo, sem limitação, um material biológico, tal como uma célula, fago ou outro vírus, um químico orgânico tal como uma molécula pequena; uma nanopartícula, um radionuclídeo; uma molécula de ácido nucléico ou oligonucleotídeos; um polipeptídeo, ou um peptídeo. Por exemplo, frações que afetam o alvo, como frações com efeito terapêutico, ou que facilitam a detecção, visualização ou imagem do alvo, tais como a molécula fluorescente ou radionuclídeos.

Componentes das co-composições e composições de carga revelados podem ser combinados, ligados e/ou acoplados em qualquer forma adequada. Por exemplo, frações e outras moléculas podem ser associadas covalentemente ou não covalentemente, direta ou indiretamente, com ou sem uma fração ligante.

Em algumas modalidades, uma co-composição ou composição de carga pode compreender um agente quimioterápico de câncer. Como usado aqui, um”agente de quimioterápico contra o câncer" é um agente químico que inibe a proliferação, crescimento, tempo de vida ou atividade metastática de células cancerosas. Tal agente quimioterápico de câncer pode ser, sem limitação, um taxano tal como o docetaxe; uma antraciclina tal como a doxorrubicina; um agente alquilante; um alcalóide de vinca; um anti-metabólito, um agente de platina como a cisplatina ou carboplatina; um esteróide, tal como o metotrexato; um antibiótico como adriamicina; um. Isofamida; ou um modulador de receptor de estrogênio seletivo; um anticorpo como trastuzumab; paclitaxel como Abraxane; Doxil.

Uma co-composição ou composição de carga pode compreender um agente terapêutico. Agentes terapêuticos úteis podem ser, por exemplo, um agente citotóxico, que, como utilizado aqui, pode ser qualquer molécula que promova direta ou indiretamente a morte celular. Agentes citotóxicos úteis incluem, sem limitação, moléculas pequenas, polipeptídeos, peptídeos, peptidomiméticos, moléculas de ácido nucléico, células e vírus. Como exemplos não-limitantes, agentes citotóxicos úteis incluem moléculas pequenas citotóxicas tal como a doxorrubicina, docetaxel ou trastuzumab; peptídeos antimicrobianos, tais como aqueles descritos mais adiante; polipeptídeos pró-apoptóticos tais como caspases e toxinas, por exemplo, caspase-8; cadeia A da toxina da difteria, pseudomonas exotoxina A, toxina da cólera, toxinas de fusão de ligante como DAB389EGF, toxina ricinus communis (ricina) e células citotóxicas, tais como células T citotóxicas. Ver, por exemplo, Martin et al. Cancer Res. 60:3218-3224 (2000); Kreitman e Pastan, Sangue 90:252-259 (1997); Allam et al, Cancer Res. 57:2615-2618 (1997) e Osborne e Coronado-Heinsohn, Câncer J. Sci. Sou. 2:175 (1996). Um sujeito versado na técnica entende que estes e outros agentes citotóxicos adicionais descritos aqui ou conhecidas na técnica podem ser úteis nas composições e métodos revelados.

Em algumas formas, um agente terapêutico pode ser um polipeptídeo terapêutico. Como usado aqui, um polipeptídeo terapêutico pode ser qualquer polipeptídeo com uma função biologicamente útil. Polipeptídeos terapêuticos úteis englobam, sem limitação, citocinas, anticorpos, polipeptídeos citotóxicos; polipeptídeos pró-apoptóticos e polipeptídeos anti-angiogênicos. Como exemplos não-limitantes, polipeptídeos terapêuticos úteis podem ser uma citocina, como fator de necrose tumoral-α (TNF-α), fator de necrose tumoral-β (TNF-β), fator estimulante de colônias de macrófagos granulócitos (GM-CSF), fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSF), interferon-α. (IFN-α); interferon-Y (IFN-Y), interleucina-1 (IL-1), interleucina-2 (IL-2), interleucina-3 (IL-3), interleucina-4 (IL- 4), interleucina-6 (IL-6), interleucina-7 (IL-7), interleucina-10 (IL-10), interleucina- 12 (IL-12), limfotactina (LTN) ou quimiocina 1 de células dendríticas (DC-CK1), um anticorpo anti-HER2 ou seu fragmento, um polipeptídeo citotóxico incluindo uma toxina ou caspase, por exemplo, cadeia A da toxina da difteria, pseudomonas exotoxina A, toxina da cólera, uma toxina de fusão de ligante tal como DAB389EGF ou ricina, ou um polipeptídeo anti-angiogênico tal como angiostatina, endostatina, trombospondina, fator plaquetário 4; anastellin; ou um daqueles descritos mais adiante aqui ou conhecidos na técnica. Entende-se que estes e outros polipeptídeos com atividade biológica podem ser um”polipeptídeo terapêutico".

Um agente terapêutico útil nas co-composições e composições de carga reveladas pode ser um agente anti-angiogênico. Como usado aqui, o termo”agente anti-angiogênico” significa uma molécula que reduz ou impede a angiogênese, que é o crescimento e desenvolvimento dos vasos sanguíneos. As co-composições e composições de carga podem ser usadas para tratar ou diagnosticar qualquer doença, condição ou desordem associada com a angiogênese. Por exemplo macular, degeneração macular e complicações vasculares de diabéticos podem ser diagnosticadas e/ou tratadas. Uma variedade de agentes anti-angiogênicos pode ser preparada por métodos de rotina. Tais agentes anti-angiogênicos incluem, sem limitação, moléculas pequenas, proteínas tal como formas negativas dominantes de fatores angiogênicos, fatores de transcrição e anticorpos; peptídeos e moléculas de ácido nucléico incluindo ribozimas, oligonucleotídeos antisensos e moléculas de ácidos nucleicos codificando, por exemplo, formas negativas dominantes de fatores angiogênicos e receptores, fatores de transcrição e anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. Ver, por exemplo, Hagedorn e Bikfalvi, Crit. Rev. Oncol. Hematol. 34:89-110 (2000), e Kirsch et al., J. Neurooncol. 50:149-163 (2000).

Alguns outros exemplos de agentes terapêuticos úteis incluem mostardas de nitrogênio, nitrosuréias, etilenoimina, sulfonatos de alcano, tetrazina, compostos de platina, análogos da pirimidina, análogos de purina, antimetabólitos, análogos de folatos, antraciclinas, taxanos, alcalóides da vinca, inibidores da topoisomerase e agentes hormonais. São drogas quimioterápicas exemplares actinomicina-D, Alqueran, Ara-C, anastrozol, asparaginase, BiCNU, Bicalutamida, bleomicina, busulfan, capecitabina, Carboplatina, Carboplatinum, carmustina, CCNU, clorambucil, Clomafazina, Colofosfamida, Cisplatina, cladribina, CPT-11, ciclofosfamida, citarabina, citosina arabinosídeo, Citoxano, dacarbazina, Dactinomicina, daunorrubicina, Dexrazoxano, Docetaxel,

Doxorrubicina, DTIC, Epirrubicina, Estramustina, Etilenoimina, Etoposídeo, Floxuridina, Fludarabina, Fluorouracil, Flutamida, Fotemustina, Gemcitabina, Herceptina, Hexametilamina, Hidroxiuréia, Idarrubicina, Ifosfamida, Irinotecano, Lomustina, Mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, mercaptopurina, metotrexato, Mitomicina, mitotano, Mitoxantrona, Novembiehina, oxaliplatina, Paclitaxel, Pamidronato Pentostatina, Fenesterina, Plicamicina, Prednimustina, procarbazina, Rituximab, esteróides, estreptozocina, STI-571, Estreptozocina, Tamoxifeno, Temozolomida, Teniposídeo, tetrazina, Tioguanina, Tiotepa, Tomudex, topotecano, Treosulfano, Trimetrexato, Trofosfamida, vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina, VP-16 e Xeloda. Agentes alquilantes tal como Tiotepa e; sulfonatos de alquila, como busulfano, Improsulfano e Piposulfano; Aziridinas como Benzodopa, Carboquona, Meturedopa e Uredopa; etileniminas e metilamelaminas incluindo Altretamina, Trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenothiofosfaoramida e trimetilolomelamina; nitroureas como Cannustina, Clorozotocina, Fotemustina, Lomustina, Nimustina e Ranimustina; antibióticos como Aclacinomisinas, Actinomicina, Autramicina, Azaserina, Bleomicinas, Cactinomicina,

Caliqueamicina, Carabicina, Caminomicina, Carzinofilina, Cromoinicinas, Dactinomicina, daunorrubicina, Detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina, epirrubicina, Esorubicina, Idambicina, Marcelomicina, Mitomicinas, ácido micofenólico, Nogalamicina, Olivomicinas, Peplomicina, Potfiromicina, Puromicina, Quelamicina, Rodorubicina, Streptonigrina, Estreptozocina, Tubercidina, Ubenimex, Zinostatina e Zorubicina; antimetabólitos tais como o metotrexato e 5-fluorouracil (5-FU); análogos de ácido fólico, como Denopterina, metotrexato, Pteropterina e Trimetrexato; análogos de purina, tais como Fludarabina, 6-mercaptopurina, Tiamiprina e Tioguanina; análogos da pirimidina, como Ancitabina, Azacitidina, 6-azauridina, Carmofur, citarabina, Dideóxiuridina, Doxifluridina, Enocitabina, Floxuridina e 5-FU; andrógenos, tais como Calusterona, propionato de dromostalonona, Epitiostanol, Rnepitiostano e testolactona; anti-adrenais, como aminoglutetimida, mitotano e Trilostano; reforçador de ácido fólico, como o ácido frolínico; aceglatona; aldofosfamida glicosídeo, ácido aminolevulínico; Amsacrina; Bestrabucila; Bisantreno; Edatraxato; Defofamina; Demecolcina; Diaziquona; Elfornitina; acetato de eliptinio; Etoglucid; nitrato de gálio; hidroxiuréia; Lentinano; Lonidamina; Mitoguazona; Mitoxantrona; Mopidamol; Nitracrina; Pentostatina; Fenamet; Pirarubicina; ácido podofilínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; PSK®; Razoxano; Sizofrran;

Spirogermanio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; Uretano; vindesina; dacarbazina; Manomustina; Mitobronitol; Mitolactol; Pipobromano; Gacitosina; arabinosídeo ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotEPa; taxoids, por exemplo, Paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) e Doxetaxel (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, França); gemcitabina; 6- tioguanina; Mercaptopurina; metotrexato; análogos de platina tal como cisplatina e carboplatina; Vinblastina; platina; etoposídeo (VP-16); ifosfamida, mitomicina C; Mitoxantrona; Vincristina; vinorelbina; Navelbina; Novantrona; Teniposídeo; daunomicina; aminopterina; Xeloda; Ibandronato; CPT-11; inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); ácido retinóico; Esperamicinas; capecitabina e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um dos acima. Também estão incluídos os agentes anti- hormonais que atuam para regular ou inibir a ação hormonal sobre os tumores, como anti-estrogênios incluindo, por exemplo tamoxifeno, raloxifeno, 4-imidazóis (5) inibidores de aromatase, 4 Hidróxitamoxifeno, Trioxifeno, Keoxifeno, Onapristona, And Toremifeno (Farestona) e anti-andrógenos, como Flutamida, nilutamida, Bicalutamida, Leuprolida e Goserelina; e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um dos acima. Co-composições e composições de carga úteis incluem, por exemplo, doxorrubicina, Herceptina e doxorrubicina lipossômica.

A co-composição ou composição de carga também pode compreender um composto contendo boro. Compostos contendo boro receberam atenção crescente como agentes terapêuticos ao longo dos últimos anos na medida em que a tecnologia em síntese orgânica se expandiu para incluir este átomo (Boron

Therapeutics on the horizon., Groziak, MP; American Journal of Therapeutics (2001) 8, 321-328). A terapêutica contendo boro mais notável é o ácido borônico bortezomib que foi lançado recentemente para o tratamento do mieloma múltiplo. Este avanço demonstra a viabilidade do uso de compostos contendo boro como agentes farmacêuticos. Compostos contendo boro têm sido demonstrados que têm várias atividades biológicas, incluindo herbicidas (Organic boron compounds as herbicides. Barnsley, da GE; Eaton, JK; Airs, RS; (1957), DE 1016978 19571003), terapia de captura de neutrons de boro (Molecular Design e Synthesis of B-10 Carriers for Neutron Capture Therapy. Yamamoto, Y;. Pure Appl Chem, (1991) 63, 423-426), inibição da protease de serina (Borinic acid inhibitors as probes of the factors involved in binding at the active sites of subtilisin Carlsberg and . alpha, -chymotrypsin. Simpelkamp, J.; Jones, J. B.; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, (1992), 2(11), 1391-4; Design, Synthesis and Biological

Evaluation of Selective Boron-containing Thrombin Inhibitors. Weinand, A.; Ehrhardt, C; Metternich, R.; Tapparelli, C; Bioorganic and Medicinal Chemistry, (1999), 7, 1295-1307), inibição da acetilcolinesterase (New, specific and reversible bifunctional alkylborinic acid inhibitor of acetylcholinesterase. Koehler, K. A.; Hess, G. P.; Biochemistry (1974), 13, 5345-50) e como agentes antibacterianos (Boron- Containing Antibacterial Agents: Effects on Growth and Morphology of Bacteria Under Various Culture Conditions. Bailey, P. J.; Cousins, G.; Snow, G. A.; and White, A. J.; Antimicrobial Agents and Chemotherapy, (1980), 17, 549-553). Os compostos contendo boro com atividade antibacteriana podem ser sub-divididos em duas classes principais, as diazaborininas, que são conhecidas desde a década de 1960, e complexos de ácido ditienilborínico. Esta última classe foi expandida para incluir muitos complexos de ácido diarilborínico diferentes com atividade antibacteriana potente (Preparation of diarylborinic acid esters as DNA methyl transferase inhibitors. Benkovic, S. J.; Shapiro, L.; Baker, S. J.; Wahnon, D. C; Wall, M.; Shier, V. K.; Scott, C. P.; Baboval, J.; PCT Int. Appl. (2002), WO 2002044184).

A co-composição ou composição de carga também pode ter um ou mais isótopos. Tais isótopos podem ser úteis, por exemplo, como um agente terapêutico, como um agente detectável, ou ambos. Exemplos de isopos úteis incluem Lutécio-177 (177Lu), Rênio-188 (188Re), Gálio-68 (68Ga), Ítrio-90 (90Y), Tecnécio-99m (99mTc), Ólmio-166 (166Ho), Iodo-131 (131I), Índio-111 (111In), Flúor- 18 (18F), Carbono-11 (11C), Nitrogênio-13 (13N), Oxigênio-15 (15O), Bromo-75 (75Br), Bromo-76 (76Br), Iodo-124 (124I), Tálio-201 (201Tl), Tecnécio-99 (99Tc) e Iodo-123 (123I).

A co-composição ou composição de carga também pode compreender um agente detectável. Uma variedade de agentes detectáveis são úteis nos métodos revelados. Como usado aqui, o termo”agente detectável" se refere a qualquer molécula que pode ser detectada. Agentes detectáveis úteis incluem frações que podem ser administradas in vivo e posteriormente detectadas. Agentes detectáveis úteis nas composições reveladas e métodos de imagem incluem ainda não estão limitados à rótulos de rádio e moléculas fluorescentes. O agente detectável pode ser, por exemplo, qualquer fração que facilita a detecção, direta ou indiretamente, de preferência por uma técnica de visualização não-invasiva e/ou in vivo. Por exemplo, um agente detectável pode ser detectável por qualquer técnica de imagem conhecida, incluindo, por exemplo, uma técnica radiológica. Agentes detectáveis podem incluir, por exemplo, um agente de contraste. O agente de contraste pode ser, por exemplo, Feridex. Em algumas modalidades, por exemplo, o agente detectável compreende um composto de tântalo. Em algumas modalidades, o agente detectável compreende iodo, tal como iodo radioativo. Em algumas modalidades, por exemplo, o agente detectável compreende um ácido de iodo orgânico, tal como ácido carboxílico de iodo, triiodofenol, iodofórmio e/ou tetraiodoetileno. Em algumas modalidades, o agente detectável compreende um agente detectável não radioativo, por exemplo, um isótopo não-radioativo. Por exemplo, óxido de ferro e Gd podem ser usados como um agente detectável não-radioativo em certas modalidades. Agentes detectáveis também podem incluir isótopos radioativos, enzimas, fluoróforos e pontos quânticos (Qdot ®). Por exemplo, a fração de detecção pode ser uma enzima, biotina, metal ou etiqueta de epítopo. Outros marcadores detectáveis conhecidos ou recém-descobertos são contemplados para o uso com as composições providas. Em algumas modalidades, por exemplo, o agente detectável compreende um composto de bário, por exemplo, sulfato de bário.

O agente detectável pode ser (ou a co-composição ou composição de carga pode incluir) um ou mais agentes de imagem. Exemplos de agentes de imagem incluem agente de contraste radiológico, tais como dihidrato de sal de sódio de ácido diatrizóico, iodo e sulfato de bário, um agente da imagem fluorescente, tal como Lissamina Rodamina PE, um corante ou tinta fluorescentes ou não fluorescente, por exemplo, que pode transmitir uma cor visível ou que reflete um espectro característico da radiação eletromagnética em comprimentos de onda visíveis ou outros, por exemplo, infravermelho ou ultravioleta, tais como rodamina, um radioisótopo, um isótopo emissor de pósitrons, tal como 18F ou 124I (embora a curta meia-vida de um isótopo emissor de pósitrons possa impor algumas limitações), um metal, um composto ferromagnético, um composto paramagnético, tal como o gadolínio, um composto superparamagnético, tal como óxido de ferro, e um composto diamagnético, tal como sulfato de bário. Agentes de imagem podem ser selecionados para otimizar a utilidade de uma imagem produzida por uma tecnologia de imagem escolhida. Por exemplo, o agente de imagem pode ser selecionado para aumentar o contraste entre uma característica de interesse, tal como um pólipo gastrointestinal, e tecido gastrointestinal normal. Imagem pode ser realizada utilizando quaisquer técnicas de imagem adequada, tal como raio-X, tomografia computadorizada (TC), MRI, Tomografia por Emissão de Pósitron (PET) ou SPECT. Em algumas formas, a co-composição ou composição de carga pode ser acoplada a um agente de imagem de medicina nuclear, como Índio-III ou tecnécio-99, aos agentes de imagem PET, ou aos agentes de imagem MRI tais como nanopartículas.

Exemplos de técnicas de imagem incluem imagem por ressonância magnética (MRI), tomografia computadorizada (CT), tomografia computadorizada de emissão de fóton único (SPECT) e tomografia por emissão de pósitron (PET). Agentes de imagem geralmente podem ser classificados como sendo ou de diagnóstico ou terapêutico em suas aplicações. Devido ao efeito prejudicial da radiação sobre os tecidos, é útil para alvejar a biodistribuição de radiofármacos o mais precisamente possível. PET pode usar agentes rotulados com, por exemplo, emissores de pósitrons tais como 18F, 11C, 13N e 15O, 75Br, 76Br e 124I. SPECT pode usar agentes de imagem rotulados com, por exemplo, emissores de fóton único, tais como 201Tl, 99Tc, 123I, 131I.

Compostos à base de glicose e à base de aminoácidos podem ser usados como agentes de imagem. Compostos à base de aminoácidos são mais úteis na análise de células tumorais, devido à sua rápida absorção e incorporação na síntese protéica. Dos compostos à base de aminoácidos, compostos contendo 11C e 18F têm sido utilizados com sucesso. Aminoácidos rotulados por rádio contendo 11C adequados para imagens incluem, por exemplo, L-[1-11C]leucina (Keen et al. J. Cereb. Blood Flow Metab. 1989 (9) :429-45), L-[1- 11C]tirosina (Wiesel et al J. Nucl Med 1991 (32) :2041-49), L-[metil-11C]metionina (Comar et al Eur J. Nucl Med 1976 (1):11-14) e L-[1-11C]metionina (Bolster et al. Appl. Radiat. Isot. 1986 (37): 1069-1070).

PET envolve a detecção de raios gama na forma de fótons de aniquilação a partir de isótopos radioativos que emitem pósitron de vida curta, incluindo mas não limitado à 18F com uma meia-vida de aproximadamente 110 minutos, 11C, com uma meia-vida de aproximadamente 20 minutos, 13N, com uma meia-vida de aproximadamente 10 minutos e 15O com uma meia-vida de aproximadamente 2 minutos, utilizando o método de coincidência. Para estudos de imagem PET, compostos, tais como [11C]meta-hidroxiefedrina (HED) e 2-[18F]fluoro-2-deóxi-D- glicose (FDG) pode ser usado. SPECT pode usar isótopos de mais vida incluindo, mas não limitado a, 99mTc com uma meia-vida de aproximadamente 6 horas e 201Tl com uma meia-vida de aproximadamente 74 horas. Meta- iodobenzilguanidina rádio-iodada (MIBG) é um agente de rastreio por rádio que pode ser usado em estudos de imagem de medicina nuclear.

As composições CendR reveladas e co-composições e composições de carga podem ser administradas in vivo em um transportador farmaceuticamente aceitável. Por” farmaceuticamente aceitável" se entende um material que não é biologicamente ou de modo indesejável, ou seja, o material pode ser administrado a um sujeito, juntamente com o ácido nucléico ou vetor, sem causar quaisquer efeitos biológicos indesejáveis ou interagir de forma deletéria com qualquer um dos outros componentes da composição farmacêutica em que está contido. O transportador seria naturalmente selecionado para minimizar qualquer degradação do ingrediente ativo e para minimizar quaisquer efeitos colaterais adversos no sujeito, como seria bem conhecido de alguém versado na técnica. Os materiais podem estar em solução, suspensão, (por exemplo, incorporados em micropartículas, lipossomos ou células).

As composições CendR e co-composições e composições de carga podem ser usadas terapeuticamente em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável. Transportadores adequados e suas formulações são descritas no Remington: The Science and Practice of Pharmacy (19a ed.) Ed. A.R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA 1995. Tipicamente, uma quantidade adequada de um sal farmaceuticamente aceitável é utilizada na formulação para tornar a formulação isotônica. Exemplos do transportador farmaceuticamente aceitável incluem, mas não estão limitados à salina, solução de Ringer e solução de dextrose. O pH da solução é, de preferência de cerca de 5 a cerca de 8, e mais preferivelmente de cerca de 7 a cerca de 7,5. Transportadores adicionais incluem preparações de libertação prolongada, tais como matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o anticorpo, cujas matrizes são na forma de artigos moldados, por exemplo, filmes, lipossomas ou micropartículas. Será evidente para as pessoas versadas na técnica que certos transportadores podem ser preferenciais, dependendo, por exemplo, da rota de administração e da concentração da composição que está sendo administrada.

A preparação pode ser administrada a um sujeito ou organismo por si só, ou em uma composição farmacêutica onde é misturado com transportadores adequados ou excipientes.

Como usado aqui uma ”composição farmacêutica" refere-se a uma preparação de um ou mais ingredientes ativos descritos neste documento, com outros componentes químicos, tais como transportadores fisiologicamente adequados e excipientes. O propósito de uma composição farmacêutica é facilitar a administração de um composto a um sujeito ou organismo.

Aqui o termo ”ingrediente ativo" refere-se à preparação responsável para o efeito biológico.

Como usado aqui, as frases ”transportador fisiologicamente aceitável" e ”transportador farmaceuticamente aceitável" que podem ser usadas indiferentemente se referem a um transportador ou um diluente que não cause irritação significativa a um sujeito ou organismo e não revogue a atividade biológica e propriedades do composto administrado. Um adjuvante está incluído nestas frases.

Aqui o ”excipiente" se refere a uma substância inerte adicionada a uma composição farmacêutica para facilitar adicionalmente a administração de um ingrediente ativo. Exemplos, sem limitação, de excipientes incluem o carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares e tipos de amido, derivados de celulose, gelatina, óleos vegetais e polietileno glicóis.

Técnicas para a formulação e administração das drogas podem ser encontradas no Pharmaceutical Sciences Remington, Mack Publishing Co., Easton, Pa., última edição, que é incorporado aqui por referência.

Qualquer rota de administração adequada pode ser usada para as composições reveladas. Rotas adequadas de administração podem, por exemplo, incluir tópicas, enterais, locais, sistêmicas ou parenterais. Por exemplo, a administração pode ser epicutânea, inalatória, enemal, conjuntival, gotas nos olhos, gotas auriculares, alveolar, nasal, intranasal, vaginal, intravaginal, transvaginal, enteral, oral, intra-oral, transoral, intestinal, retal, intra-retal, transretal, injeção, infusão, intravenosa, intra-arterial, intramuscular, intracerebral, intraventricular, intracérebroventricular, intracardíaca, subcutânea, intra-óssea, intradérmica, intratecal, intraperitoneal, intravesical, intracavernosa, intramedular, intraocular, intracraniana, transdérmica, transmucosal, transnasal, inalatória, intracisternal, epidural, peridural, intravítrea, etc. As composições reveladas podem ser utilizadas em e com qualquer outro procedimento. Por exemplo, as composições reveladas podem ser administradas como parte da terapia HIPEC. Em HIPEC uma solução estéril aquecida, contendo uma composição de interesse é continuamente circulada por toda a cavidade peritoneal.

Composições farmacêuticas podem ser fabricadas por processos bem conhecidos na técnica, por exemplo, por meio da de processos de mistura convencional, dissolvendo granulando, fazendo drágea, pulverizando, emulsificando, encapsulando, apanhando em armadilha ou liofilizando.

Composições farmacêuticas para uso nos métodos revelados, portanto, podem ser formuladas de maneira convencional usando um ou mais transportadores fisiologicamente aceitáveis compreendendo excipientes e auxiliares, que facilitam o processamento dos ingredientes ativos em preparações que, podem ser usadas farmaceuticamente. Formulação adequada é dependente da rota de administração escolhida.

Por injeção, os ingredientes ativos podem ser formulados em soluções aquosas, de preferência em tampões fisiologicamente compatíveis, tais como solução de Hank, solução de Ringer, ou tampão de salina fisiológica. Para administração transmucosal, penetrantes adequados para a barreira a ser permeada são utilizados na formulação. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica.

Para administração oral, os compostos podem ser formulados prontamente, combinando os compostos ativos com os transportadores farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na técnica. Tais transportadores habilitam os compostos a serem formulados na forma de comprimidos, pílulas, drágeas, cápsulas, líquidos, géis, xaropes, suspensões, suspensões, e outros, para a ingestão oral por um paciente. Preparações farmacológicas para uso oral podem ser feitas usando um excipiente sólido, opcionalmente, moagem da mistura resultante e processamento da mistura de grânulos, após a adição de auxiliares adequados, se desejado, para obter comprimidos ou núcleos de drágea. Excipientes adequados são, em particular, preenchedores tais como os açúcares, incluindo a lactose, sacarose, manitol ou sorbitol; preparações de celulose, tais como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, fécula de batata, gelatina, goma tragacanto, metil celulose, hidróxipropilmetil celulose, carbometilcelulose de sódio e/ou polímeros fisiologicamente aceitáveis, tais como polivinilpirrolidona (PVP). Se desejado, agentes de desintegração podem ser adicionados, tais como polivinil pirrolidona ligados de forma cruzada, Agar ou ácido algínico ou um sal do mesmo, tal como alginato de sódio.

Núcleos de drágea são providos com revestimentos adequados. Para este fim, as soluções concentradas de açúcar podem ser usadas, que podem conter opcionalmente goma arábica, talco, polivinil pirrolidona, gel de carbopol, polietileno glicol, dióxido de titânio, soluções de laca e solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes. Corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos comprimidos ou revestimentos de drágea para identificação ou para caracterizar diferentes combinações de doses de composto ativo.

Composições farmacêuticas, que podem ser usadas por via oral, incluem cápsulas de empurra-encaixa feitas de gelatina, bem como cápsulas seladas moles feitas de gelatina e um plastificante, tais como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de empurra-encaixa podem conter os ingredientes ativos em mistura com preenchedor tais como a lactose, ligadores, tais como amidos, lubrificantes, tais como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizadores. Em cápsulas moles, os ingredientes ativos podem ser dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos graxos, parafina líquida ou polietilenoglicóis líquidos. Além disso, os estabilizadores podem ser adicionados. Todas as formulações para administração oral devem ser em doses adequadas para a rota escolhida de administração.

Para administração bucal, as composições podem tomar a forma de comprimidos ou pastilhas formuladas de maneira convencional.

Para administração por inalação nasal, os ingredientes ativos para uso nos métodos revelados podem ser convenientemente entregues na forma de uma apresentação em spray aerossol de um pacote pressurizado ou um nebulizador com o uso de um propulsor adequado, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, dicloro- tetrafluoroetano ou dióxido de carbono. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada provendo uma válvula para entregar um montante medido. Cápsulas e cartuchos de, por exemplo, gelatina para uso em um dispensador pode ser formulados contendo uma mistura de pó do composto e uma base em pó adequada, como lactose ou amido.

As preparações descritas aqui podem ser formuladas para administração parenteral, por exemplo, por injeção em bolus ou infusão contínua. Formulações injetáveis podem ser apresentadas em forma de dosagem de unidade, por exemplo, em ampolas ou em recipientes multidoses com opcionalmente, um conservante acrescentado. As composições podem ser suspensões, soluções ou emulsões oleosas ou em veículos aquosos, e podem conter agentes de formulação tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou dispersão.

Composições farmacêuticas para administração parenteral incluem soluções aquosas de preparação ativa em forma solúvel em água. Adicionalmente, as suspensões dos ingredientes ativos podem ser preparadas como injeção oleosa ou à base de água adequada. Solventes lipofílicos adequados ou veículos incluem óleos graxos, tais como óleo de gergelim, ou ésteres de ácidos graxos sintéticos, tais como oleato de etila, triglicérides ou lipossomas. Suspensões de injeção aquosa podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão, tais como carbóximetilcelulose de sódio, sorbitol ou dextran. Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabilizadores adequados ou agentes que aumentam a solubilidade dos ingredientes ativos para permitir a preparação de soluções altamente concentradas.

Alternativamente, o ingrediente ativo pode estar na forma de pó para a constituição com um veículo adequado, por exemplo, estéril, solução à base de água apirogênica, antes de usar.

As preparações também podem ser formuladas em composições retais, tais como supositórios ou enemas de retenção, utilizando, por exemplo, bases de supositório convencionais, tais como manteiga de cacau ou outros glicerídeos.

As composições reveladas podem ser providas em qualquer formulação adequada. Por exemplo, sólido, líquido, solução, gel, emplastro, liberação lenta, liberação programada, etc.

Composições farmacêuticas para uso nos métodos revelados incluem composições em que os ingredientes ativos estão contidos em uma quantidade eficaz para atingir o objetivo pretendido. Mais especificamente, uma quantidade terapeuticamente eficaz: significa uma quantidade de ingredientes ativos eficaz para prevenir, aliviar ou melhorar os sintomas de doenças ou prolongar a sobrevida do sujeito sendo tratado.

Determinação de uma quantidade terapeuticamente eficaz está bem dentro da capacidade daqueles versados na técnica, especialmente à luz da revelação detalhada provida neste documento.

Para qualquer preparação utilizada nos métodos revelados, a quantidade terapeuticamente eficaz ou a dose pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura in vitro e de célula. Por exemplo, uma dose pode ser formulada em modelos animais para obter uma concentração ou titulação de anticorpos circulantes desejada. Tal informação pode ser usada para determinar com mais precisão doses úteis em seres humanos.

Toxicidade e eficácia terapêutica dos ingredientes ativos descritos neste documento podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão in vitro, em culturas de células ou animais experimentais. Os dados obtidos a partir destes ensaios de cultura in vitro e de células e estudos com animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para uso em humanos. A dosagem pode variar dependendo da forma de dosagem empregada e a rota de administração utilizada. A formulação exata, rota de administração e a dosagem podem ser escolhidas pelo médico individual em vista da condição do paciente. (Ver, por exemplo, Fingl et al, em The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ch 1. P. 1. (1975)).

Quantidade de dosagem e intervalo podem ser ajustados individualmente para prover plasma de anticorpos que são suficientes para evitar ou reduzir a entrada viral (concentração mínima eficaz, MEC). A MEC irá variar para cada preparação, mas pode ser estimada a partir de dados in vitro. Dosagens necessárias para atingir a MEC vão depender de características individuais e da rota de administração. Ensaios de ligação podem ser usados para determinar as concentrações plasmáticas.

Intervalos de dosagem também podem ser determinados usando o valor MEC. Preparações devem ser administradas utilizando um esquema, que mantém os níveis plasmáticos acima de MEC por 10-90% do tempo, de preferência entre 30-90% e mais preferencialmente 50-90%.

Dependendo da gravidade e capacidade de resposta da condição a ser tratada, a dosagem pode ser de uma única ou uma pluralidade de administrações, com curso de tratamento com duração de vários dias a várias semanas ou até a cura ser efetuada ou diminuição do estado de doença ser alcançado.

A quantidade de uma composição a ser administrada, evidentemente, será dependente do sujeito a ser tratado, da gravidade da aflição, da forma de administração, do juízo do médico que prescreve e etc.

Ácidos graxos (ou seja, lipídios) que podem ser conjugados com as composições CendR e co-composições e composições de carga incluem aqueles que permitem a incorporação eficiente do peptídeo em lipossomas. Geralmente, o ácido graxo é um lipídio polar. Assim, o ácido graxo pode ser um fosfolipídio. As composições providas podem compreender ou fosfolipídios naturais ou sintéticos. Os fosfolipídios podem ser selecionados a partir de fosfolipídios contendo ácidos graxos saturadas ou mono insaturados ou des-substituídos e suas combinações. Estes fosfolipídios podem ser, por exemplo, dioleoilfosfatidilcolina, dioleoilfosfatidilserina, dioleoilfosfatidiletanolamina, dioleoilfosfatidilglicerol, ácido dioleoilfosfatídico, palmitoiloleoilfosfatidilcolina, palmitoiloleoilfosfatidilserina, palmitoiloleoilfosfatidiletanolamina, palmitoiloleoilfofatidilglicerol, ácido palmitoiloleoilfosfatídico, palmitelaidoiloleoilfosfatidilcolina, palmitelaidoiloleoilfosfatidilserina, palmitelaidoiloleoilfosfatidilethanolamina, palmitelaidoiloleoilfosfatidilglicerol, ácido palmitelaidoiloleoilfosfatídico, miristoleoiloleoilfosfatidilcolina, miristoleoiloleoilfosfatidilserina, miristoleoiloleoilfosfatidiletanoamina, miristoleoiloleoilfosfatidilglicerol, ácido miristoleoiloleoilfosfatídico, dilinoleoilfosfatidilcolina, dilinoleoilfosfatidilserina, dilinoleoilfosfatidiletanolamina, dilinoleoilfosfatidilglicerol, ácido dilinoleoilfosfatídico, palmiticlinoleoilfosfatidilcolina, palmiticlinoleoilfosfatidilserina, palmiticlinoleoilfosfatidiletanolamina, palmiticlinoleoilfosfatidilglicerol, ácido palmiticlinoleoilfosfatídico. Estes fosfolipídios também podem ser os derivados de monoacilados de fosfatidilcolina (lisofofatidilidilcolina), fosfatidilserina (lisofosfatidilserina), fosfatidiletanolamina (Iisofosfatidiletanolamina), fofatidilglicerol (lisofosfatidilglicerol) e ácido fosfatídico (ácido lisofosfatídico). A cadeia monoacila nestes derivados de lisofosfatidil pode ser palimtoil, oleoil, palmitoleoil, linoleoil miristoil ou miristoleoil. Os fosfolipídios também podem ser sintéticos. Fosfolipídios sintéticos são prontamente comercialmente disponíveis a partir de fontes diversas, tais como Lipídeos polares AVANTI (Albaster, Alabama), Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Estes compostos sintéticos podem ser variados e podem ter variações nas suas cadeias de ácidos graxos secundárias não encontradas em fosfolipídeos que ocorrem naturalmente. Os ácidos graxos podem ter cadeias laterais de ácidos graxos insaturados com comprimento de cadeias C 14, C16, C18 ou C20 em um ou ambos: PS ou PC.

Fosfolipídios sintéticos podem ter dioleoil (18:1)-PS; palmitoil (16:0)-oleoil (18:1)- PS, dimiristoil (14:0)-PS; dipalmitoleoil (16:1)-PC, dipalmitoil (16:0)-PC, dioleoil (18:1)-PC, palmitoil (16:0)-oleoil (18:1)-PC e miristoil (14:0)-oleoil (18:1)-PC como constituintes. Assim, como exemplo, as composições providas podem compreender 16:0 palmitoyl.

A co-composição ou composição de carga pode ser uma micropartícula ou nanopartícula, tal como uma nanosfera, nanoconcha, nanoworm, nanoconcha gerando calor, e assim por diante. Como usado aqui, “nanoconcha" é uma nanopartícula tendo um dielétrico discreto ou núcleo semi-condutor cercado por uma ou mais camadas de conchas condutoras. Patente dos EUA n° 6.530.944 é incorporada aqui por referência neste documento na sua totalidade para seu ensino dos métodos de fazer e usar nanoconchas de metal. Nanoconchas podem ser formadas com, por exemplo, um núcleo de um dielétrico ou material inerte como o silício, revestido com um material como um metal altamente condutor, que pode ser excitado usando a radiação como luz infravermelha próxima (aproximadamente 800 a 1300 nm). Após a excitação, as nanoconchas emitem calor. A hipertermia resultante pode matar a célula(s) circundante ou tecido. O diâmetro combinado da concha e do núcleo das nanoconchas varia de dezenas a centenas de nanômetros. Luz infravermelha próxima é vantajosa para sua capacidade de penetrar tecidos. Outros tipos de radiação também podem ser usados, dependendo da seleção do revestimento de nanopartículas e células- alvejadas. Os exemplos incluem os raios-x, campos magnéticos, campos elétricos e ultra-som. As partículas também podem ser usadas para reforçar a imagem, especialmente usando métodos de imagem de fóton difuso de infravermelho. Moléculas de alvejamento podem ser anticorpos ou seus fragmentos, ligantes para receptores específicos ou outras proteínas ligando especificamente à superfície das células a serem alvejadas.

As outras moléculas, elementos, frações, etc, podem ser covalentemente ligadas a associadas de modo não covalente com, por exemplo, as co- composições reveladas, composições de carga, composição CendR, proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos ou elemento CendR. Tais moléculas, elementos, frações, etc, podem ser ligadas, por exemplo, à extremidade terminal amino da proteína revelada, peptídeo, sequência de aminoácidos ou elemento CendR; a um aminoácido interno da proteína revelada, peptídeo, sequência de aminoácido, ou elemento CendR; à extremidade terminal carbóxi da proteína revelada, peptídeo, sequência de aminoácidos ou elemento CendR; à proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos no lado de terminação N do elemento CendR; por meio de um ligante para a proteína revelada, peptídeo, sequência de aminoácido ou elemento CendR, ou uma combinação. As composições CendR reveladas podem compreender ainda um ligante conectando tais moléculas, elementos, frações, etc e composição CendR revelada, proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, ou elemento CendR. A composição CendR revelada, proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos ou elemento CendR também pode ser conjugado a uma molécula de revestimento tal como albumina de soro bovino (BSA;. Ver Tkachenko et al, (2003) J Am Chem Soc, 125, 4700-4701), que pode ser usado para revestimento de nanopartículas, nanoworms, nanoconchas e outros com a proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos ou elemento CendR.

Ligantes cruzados/reticuladores de proteína que podem ser usados para reticular outras moléculas, elementos, frações, etc, às co-composições reveladas, composições de carga, composição CendR, proteína, peptídeo, sequência de aminoácidos, etc, são conhecidas na técnica e são definidas com base na utilidade e estrutura e incluem DSS (Disuccinimidilsuberato), DSP (Ditiobis (succinimidilpropionato)), DTSSP (3,3'-Ditiobis (Sulfosuccinimidilpropionato)), SULFO BSOCOES (Bis [2- (sulfosuccinimdooxicarbonilóxi)etil]sulfona), BSOCOES (Bis [2-(succinimdoóxicarbonilóxi)etil]sulfona), SULFO DST (Disulfosuccinimdiltartrato), DST (Disuccinimdiltartrato), SULFO EGS (Etileno glicolbis (succinimidilsuccinato)), EGS (Etileno glicolbis(sulfosuccinimidilsuccinato)), DPDPB (1,2-Di[3'-(2'- piridilditio)propionamido]butano), BSSS (Bis (sulfosuccinimdil)suberato), SMPB (Succinimdil-4-(p-maleimidofenil)butirato), SULFO SMPB (Sulfosuccinimdil-4-(p- maleimidofenil)butirato), MBS (3-Maleimidobenzoil-N-hidróxisuccinimida éster), SULFO MBS (3-Maleimidobenzoil-N-hidróxisulfosuccinimida éster), SIAB (N- Succinimidil-(4-iodoacetil)aminobenzoato), SULFO SIAB (N-Sulfosuccinimidil(4- iodoacetil)aminobenzoato), SMCC (Succinimidil-4-(N-maleimidometil) ciclohexano-1-carboxilato), SULFO SMCC (Sulfosuccinimidil-4-(N-maleimidometil) ciclohexano-1-carboxilato), NHS LC SPDP (Succinimidil-6-[3-(2-piridilditio) propionamido) hexanoato), SULFO NHS LC SPDP (Sulfosuccinimidil-6-[3-(2- piridilditio) propionamido) hexanoato), SPDP (N-Succinimdil-3-(2-piridilditio) propionato), NHS BROMOACETATO (N Hidróxisuccinimidilbromoacetato), NHS IODOACETATO (N-Hidróxisuccinimidiliodoacetato), MPBH (4-(N-Maleimidofenil) cloridrato de hidrazida de ácido butírico), MCCH (4-(N-Maleimidometil) ciclohexano-1-cloridrato de hidrazida do ácido carboxílico), MBH (m- cloridrato de hidrazida do ácido Maleimidobenzóico), SULFO EMCS (N-(epsilon- Maleimidocaproilóxi) sulfosuccinimida), EMCS (N-(epsilon-Maleimidocaproilóxi) succinimida), PMPI (N-(p-Maleimidofenil) isocianato), KMUH (N-(kappa- ácido Maleimidoundecanóico) hidrazida), LC SMCC (Succinimidil-4-(N-maleimidometil)- ciclohexano-1-carbóxi(6-amidocaproato)), SULFO GMBS (N-(gama-Maleimidobutrilóxi) éster sulfosuccinimida), SMPH (Succinimidil-6-(beta- maleimidopropionamidohexanoato)), SULFO KMUS (N-(kappa-Maleimidoundecanoilóxi)sulfosuccinimida éster), GMBS (N-(gama-Maleimidobutirlóxi) succinimida), DMP (cloridrato de Dimetilpimelimidato), DMS (cloridrato de Dimetilsuberimidato), MHBH (reagente de Wood; Metil-p- cloridrato de hidróxibenzimidato, 98%), DMA (cloridrato de Dimetiladipimidato).

Componentes de co-composições ou composição de carga também podem ser acoplados usando, por exemplo, o acoplamento de maleimida. A título de ilustração, os componentes podem ser acoplados aos lipídios pelo acoplamento, por exemplo, ao 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[maleimida (polietileno glicol)2000; DSPE-PEG2000-maleimida] (Avanti Lipídeos Polares), fazendo uso de um grupo sulfidrila livre de cisteína no componente. A reação pode ser realizada, por exemplo, em solução aquosa à temperatura ambiente durante 4 horas. Essa química de acoplamento pode ser usada para acoplar componentes das co-composições e composições de carga.

Os compostos revelados, componentes e composições também podem ser acoplados usando, por exemplo, química de dextran funcionalizado de grupo amino. Partículas, tais como, por exemplo, nanopartículas, nanoworms e micelas, podem ser revestidas com o dextran funcionalizado de grupo amino. Anexação de PEG às partículas aminadas aumenta o tempo de circulação, presumivelmente, reduzindo a ligação das proteínas plasmáticas envolvidas na opsonização (Moghimi et al., 2001). As partículas podem ter modificações de superfícies, por exemplo, para evitar o sistema retículo-endotelial (PEG) e homing (moléculas de homing), escape endossômico (peptídeo sensível ao pH;. por exemplo, Pirello et al, 2007), um agente detectável, um composto terapêutico, ou uma combinação. Para acomodar todas essas funções em uma partícula, estudos de otimização podem ser conduzidos para determinar qual a proporção dos locais de ligação disponíveis na superfície das partículas de qualquer um destes elementos deve ocupar para dar a melhor combinação de alvejamento e entrega de carga. A internalização de células e/ou penetração nos tecidos de tais co-composições e composições de carga pode ser mediada pelos elementos CendR revelados, sequências de aminoácidos, peptídeos, proteínas, moléculas, conjugados e composições.

Os elementos CendR, sequências de aminoácidos, peptídeos, proteínas, moléculas, conjugados e as próprias composições podem ser acoplados a outros componentes como revelado aqui usando qualquer técnica conhecida ou as técnicas descritas aqui (embora geralmente não, conforme já descrito neste documento, para as co-composições reveladas). Os elementos CendR revelados podem ser usados em peptídeos cíclicos. Para permitir que tais peptídeos cíclicos sejam acoplados aos outros componentes, a proteção do grupo lateral seletivo pode ser usada para sintetizar peptídeos cíclicos com uma cisteína extra que apresenta um grupo sulfidrila livre. Esses peptídeos são estáveis sem scrambling detectável da ligação dissulfeto. Uma função maleimida também pode ser usada como um grupo de acoplamento. Estes químicos podem ser usados para acoplar elementos CendR, sequências de aminoácidos, peptídeos, proteínas, moléculas, conjugados e composições entre si e para outros componentes.

Elementos CendR, sequências de aminoácidos, peptídeos e proteínas também podem ser acoplados a outros componentes utilizando, por exemplo, o acoplamento maleimida. A título de ilustração, elementos CendR, sequências de aminoácidos, peptídeos e proteínas podem ser acoplados aos lipídios pelo acoplamento, por exemplo, ao 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N- [maleimida(polietileno glicol)2000; DSPE-PEG2000-maleimida] (Avanti Lipídeos Polares), fazendo uso de um grupo sulfidrila da cisteína livre sobre os elementos CendR, sequência de aminoácidos, peptídeo ou proteína. A reação pode ser realizada, por exemplo, em solução aquosa à temperatura ambiente durante 4 horas. Essa química de acoplamento pode ser usada para acoplar os elementos CendR revelados, sequências de aminoácidos, peptídeos e proteínas para muitos outros componentes, moléculas e composições.

Por”tratamento" se entende o tratamento médico de um paciente com a intenção de curar, melhorar, estabilizar ou evitar a doença, condição patológica ou desordem. Este termo inclui o tratamento ativo, isto é, o tratamento direcionado especificamente para a melhoria de uma doença, condição patológica ou desordem, e também inclui o tratamento causal, isto é, o tratamento direcionado para a remoção da causa da doença associada, condição patológica ou desordem. Além disso, este termo inclui o tratamento paliativo, ou seja, o tratamento projetado para o alívio dos sintomas e não a cura da doença, condição patológica ou desordem; o tratamento preventivo, isto é, o tratamento direcionado para minimizar ou inibir parcial ou totalmente o desenvolvimento da doença associada, condição patológica ou desordem; e tratamento de suporte, isto é, o tratamento empregado para complementar outra terapia específica direcionada para a melhoria da doença associada, condição patológica ou desordem.

Como usado aqui, “sujeito" inclui, mas não é limitado aos animais, plantas, bactérias, vírus, parasitas e qualquer outro organismo ou entidade que tenha ácido nucléico. O sujeito pode ser um vertebrado, mais especificamente um mamífero (por exemplo, um ser humano, cavalo, porco, coelho, cachorro, ovelha, cabra, primatas não-humanos, vaca, gato, porquinho da índia ou roedor), um peixe, um pássaro ou um réptil ou um anfíbio. Em particular, animais de estimação e animais pode ser um sujeito. O sujeito pode ser um invertebrado, como um verme ou um artrópode (por exemplo, insetos e crustáceos). O termo não denota uma determinada idade ou sexo. Assim, os indivíduos adultos e recém-nascidos, bem como os fetos, sejam masculinos ou femininos, se destinam a serem abrangidos. Um paciente refere-se a um sujeito afligido com uma doença ou desordem. O termo”paciente" inclui sujeitos humanos e veterinários. No contexto da endometriose e células de endometriose, entende-se que um sujeito é um sujeito que tem ou pode ter endometriose e/ou células de endometriose.

Peptídeos CendR que penetram tumor podem ser usado para aumentar imagem do tumor e tratamento do tumor com drogas anti-câncer. O efeito dos peptídeos CendR na imagem pode ser testado. Por exemplo, imagem óptica com, por exemplo, fluorforos de infravermelho próximos usando uma Kodak IN VIVO Fx imager e Li-Cor Odyssey imager (por exemplo, Simberg et al, 2007.; Sugahara et al., 2009), e imagem de MRI pode ser utilizada. Para imagem MRI, a co- composição ou composição de carga pode ser um agente de contraste de MRI, tal como as nanopartículas de óxido de ferro Feridex e compostos de gadolínio. Estes compostos serão injetados em camundongos portadores de tumor com e sem um peptídeo CendR de homing de tumor, ou uma combinação de peptídeos, seguida por imagem. Os resultados podem ser usados para determinar a eficácia dos tratamentos e avaliar protocolos de tratamento diferentes para usar peptídeos CendR com a terapêutica como a co-composição ou a composição de carga.

Combinações de peptídeos CendR diferentes e co-composições diferentes e/ou composições de carga podem ser testadas para acúmulo ótimo e distribuição da co-composição ou composição de carga nas células-alvo e tecido, por exemplo, variando a dose da droga e usar a dose do peptídeo que dá o efeito máximo. Os resultados revelados mostram que combinações de CendR-droga podem reduzir a quantidade de droga necessária e, portanto, os efeitos colaterais, ao produzir o mesmo efeito anti-tumor. Peptídeos CendR também podem produzir efeitos não alcançáveis usando a co-composição ou composição de carga sozinha. Por exemplo, o uso de peptídeos CendR pode permitir concentrações mais elevadas da co-composição ou composição de carga em células e tecidos que é outra forma possível. Nesses casos, a eficácia da co-composição ou composição de carga pode ser além daquela passível de obtenção com a terapia convencional.

Pedidos de Patente dos EUA n°s 12/355.672, depositado em 19 de janeiro de 2009, e 12/390.061, depositado em 20 de fevereiro de 2009, são incorporados por referência em sua totalidade e especificamente para a sua revelação dos peptídeos iRGD e elementos CendR, peptídeos e conjugados.

Exemplos

O exemplo a seguir é exibido de modo a prover aqueles versados ordinariamente na técnica com uma revelação completa e a descrição de como os compostos, composições, artigos, equipamentos e/ou métodos reivindicados neste documento são feitos e avaliados, e destinam-se a ser puramente exemplares e não se destinam a limitar a revelação. Foram feitos esforços para garantir a precisão no que diz respeito aos números (por exemplo, quantidades, temperatura, etc), mas alguns erros e desvios devem ser contabilizados. Salvo indicação em contrário, as partes são partes em peso, temperatura está em 0C ou está em temperatura ambiente e pressão está ou é próxima da atmosférica. A. Exemplo 1: Internalização Celular e Penetração nos Tecidos de Co- Composição Mediada por Peptídeo CendR

Para demonstrar a capacidade de peptídeos CendR administrados sistemicamente de provocar um vazamento vascular (e, assim, reforçar a internalização celular e penetração nos tecidos de uma co-composição), complexos de RPARPAR oligomérico-neutravidina (SEQ ID NO: 2) foram injetadas por via intravenosa e distribuição de tecidos de fago rastreador co- injetado foi determinada. Neste ensaio, o sangue é removido por perfusão, e os constituintes do sangue extravasado, incluindo o fago rastreador, permanecem nos tecidos. RPARPAR Oligomérico (SEQ ID NO: 2), mas peptídeo de controle não oligomérico, provocou aumento da retenção de o fago nos pulmões e outros órgãos, em linha com extravasamento elevado das partículas de fago (Figura 2). Esses dados mostram que os peptídeos RPARPAR são capazes de promover a penetração nos tecidos de ambas as cargas e para permeabilizar tecidos para permitir a entrada de macromoléculas, tais como co-composições administradas ou presentes.

B. Exemplo 2: Penetração de Tumor e Permeabilização Usando Peptídeos CendR de homing

A figura 3 mostra o princípio do sistema CendR como se aplica a um peptídeo RGD apelidado iRGD de homing de tumor (sequência: CRGDK/RGPD/EC; SEQ ID NO:61). Os dois motifs em iRGD são o motif RGD (Ruoslahti, 2002), que media a ligação do peptídeo para integrinas αv no endotélio de tumor e uma sequência CendR críptica RGDK (ou RGDR; SEQ ID NO: 229). A sequência de homing de RGD dirige o peptídeo ao endotélio de tumor (integrinas αv expressam vasculatura angiogênica), onde o peptídeo é proteoliticamente processado por uma protease endógena, de tal forma que o motif CendR torna-se terminação C e ativo. O motif CendR ativado, então, liga a um receptor diferente (neuropilin-1; Teesalu et al, 2009; Patente dos EUA No. 12/355,672, depositada em 19 de janeiro de 2009), que media o extravasamento, penetração do tumor e entrada de célula do peptídeo truncado terminalmente em C (e qualquer carga anexada a ele). Cada uma dessas etapas foi documentada em experimentos bioquímicos, que incluem o isolamento do fragmento de terminação N esperado de iRGD a partir do interior das células (Sugahara et al, 2009; Pedido de Patente dos EUA n° 12/390,061, depositado em 20 de fevereiro de 2009). O homing de multiplas etapas e processo de penetração nos tecidos faz CendR mais específico do que peptídeos e outras sondas que dependem apenas de ligação ao receptor. Neuropilin-1 é expresso amplamente em vários tipos de células, mas os tumores frequentemente expressam essa proteína em níveis mais elevados do que tecidos normais.

As propriedades de penetração no tumor notáveis de iRGD são ilustradas na Figura 4, que compara iRGD com dois peptídeos RGD que se ligam às integrinas αv com afinidades similares ao iRGD (Sugahara et al., 2009), mas falta um motif CendR.

O motif CendR está presente na terminação C de algumas proteínas. Uma das formas alternativas do fator de crescimento endotelial vascular, VEGF-165, liga-se a NRP-1 utilizando a sua sequência tipo CendR de terminação C codificada por exon 8 (CRCDKPRR; SEQ ID NO: 95). Inúmeros peptídeos, tais como A7R (ATWLPPR; SEQ ID NO: 96), o peptídeo imunomoduladores tuftsina (TKPR; SEQ ID NO: 97) e sua variante reforçada tuftsina (TKPPR; SEQ ID NO: 98) também se ligam ao mesmo local no NRP-1 (Geretti et al., 2008). Semaforina 3A, que também contém um motif CendR de terminação C e se liga a este site, reforça a permeabilidade vascular (Acevedo et al., 2008). Alguns peptídeos que penetram tumor reproduzem o efeito da permeabilidade vascular destes compostos. O efeito pode ser específico do tumor, pois exige acúmulo na superfície da célula-alvo e ativação proteolítica.

Fatores de transcrição como Antennapedia, o vírus simples do herpes 1 proteína VP22, e o vírus da imunodeficiência humana-1 transativador da proteína TAT são conhecidos por internalizar nas células. Peptídeos que penetram nas células catiônicas derivados dessas proteínas mantêm a sua capacidade de internalizar. No entanto, estes peptídeos são diferentes dos peptídeos CendR revelados na medida em que são independentes da quiralidade dos aminoácidos no peptídeo, requerem sulfato de heparano de superfície celular para a atividade (que nossos peptídeos não), e não foi atribuída atividade de penetração no tecido (Langel, 2007).

Sequências CendR crípticas nos peptídeos de homing ao tumor a partir de telas de fago. Além do iRGD, uma série de outros peptídeos de homing contém elementos CendR. Esses peptídeos incluem LyP-1 (CGNKRTRGC; SEQ ID NO: 99) contendo a sequência KRTR (SEQ ID:. 100; Laakkonen et al, 2002, 2004) e CRGRRST com RGRR (SEQ ID NOS: 101 e 102; Joyce et al., 2003). Como em iRGD, o motif CendR desses peptídeos não é terminação C. Foi descoberto que o processamento proteolítico é necessário para ativar os motifs CendR. De fato, tratamento de fago de iRGD ou fago LyP-1 com tripsina reforçou a ligação do fago para neuropilin-1 em células PPC1. Tripsina não teve efeito sobre os peptídeos não-CendR CRGDC (SEQ ID NO: 36) e RGD-4C. LyP-1 endereça para áreas de nutriente hipóxicas/ou de baixos nutrientes em tumores que estão longe de vasos sanguíneos e entregam cargas de nanopartículas dimensionadas para essas localizações (Laakkonen et al, 2002;. 2004; Karmali et al, 2009). Assim, LyP-1 é um peptídeo CendR que penetra tumor. iRGD reforça a permeabilidade vascular em tumores. Foi descoberto que as propriedades de penetração do tumor de iRGD incluem a capacidade de aumentar a permeabilidade vascular em tumores. Camundongos portando tumor foram injetados com Evans Blue, um corante de ligação à albumina comumente utilizado em estudos de permeabilidade vascular, seguido de uma injeção de peptídeo iRGD. Conforme mostrado na Figura 5, iRGD causou mais vazamento do corante no tumor do que o peptídeo de controle, o vazamento foi específico para o tecido do tumor, e não foi provocado por peptídeos RGD que não contêm um motif CendR. Quatro tipos de tumores foram testados, incluindo metástases tumorais, em múltiplos experimentos com resultados consistentes. O envolvimento do sistema CendR no vazamento vascular foi demonstrado por meio de experimentos, em que o efeito RGD sobre a permeabilidade vascular foi bloqueado usando um anticorpo inibidor contra o NRP-1. iRGD reforça a entrada de nanopartículas de óxido de ferro em tumores. Entrada de nanopartículas em tumores foi testada pela injeção em camundongos com tumor de um agente de contraste de MRI utilizado clinicamente, Feridex, que é um paramagnético, nanopartícula de óxido de ferro revestido com dextrano com um diâmetro de aproximadamente 150 nm. Combinação de Feridex com iRGD resultou em contraste de MRI mais forte nos tumores do que Feridex sozinho. iRGD induz a penetração nos tecidos. A penetração rápida do iRGD e LyP- 1 em tecido tumoral distante dos vasos sanguíneos (Laakkonen et al, 2004;. Sugahara et al, 2009) indicou que iRGD, além de promover o extravasamento, poderia aumentar o transporte através do tecido do tumor parenquimatoso. Para demonstrar isso, o efeito da circulação foi eliminado incubando os tumores recém- extirpados em meios de cultura contendo fago. O fago iRGD penetrou rapidamente no tecido tumoral, viajando cerca de 4 mm em 90 min considerando que o fago de controle foi encontrado somente na superfície do tumor em pequenas quantidades (Figura 6). Assim, peptídeos CendR induzem penetração no tecido e a penetração é dependente de um processo de transporte ativo. Este processo pode ser referido como efeito de Transendotélio & tecido induzido por CendR (CendIT). iRGD aumenta o acúmulo do tumor e atividade anti-câncer de Herceptina. Também foi demonstrado que iRGD reforça a entrega de drogas em tumores. Herceptina foi usada como a droga da co-composição. Herceptina é um anticorpo contra o receptor HER2 que está em amplo uso clínico como um agente anti- câncer. Administração tanto de iRGD quanto de Herceptina foi significativamente mais eficaz em suprimir o crescimento do tumor do que uma dose equivalente de Herceptina sozinha (Figura 7).

Estes resultados demonstram uma nova abordagem conceitual para o tratamento do tumor: reforço específico de tumor da penetração da droga no tecido tumoral. Vasos sanguíneos do tumor tendem a ser vazantes, o que permite o extravasamento de materiais para o tecido ao redor dos vasos do tumor (chamado efeito de permeabilidade reforçada e retenção-EPR). O efeito dos peptídeos CendR, que pode ser referido como CendIT, é claramente muito mais eficaz do que o efeito EPR (por exemplo, ver Figura 4). Também, porque CendIT é um processo ativo, não vazante, e porque é dependente do receptor de (NRP- 1), que resulta em penetração de tumores profunda, cuja difusão passiva e convecção na ausência de circulação não pode realizar (Figura 6).

1. Discussão

Os estudos revelam uma via de internalização celular não reconhecida previamente, denominada CendR. São características principais de CendR: (i) motif de reconhecimento R/KXXR/K (SEQ ID NO: 23), (ii) a exposição da terminação C do motif para atividade de ligação e internalização, (iii) envolvimento de NRP-1 na ligação e internalização, e (iv) conversão de motifs CendR crípticos em ativos através do processamento proteolítico.

Um grupo de peptídeos de homing ao coração contém um motif CendR exposto (Zhang, L. et al. 2005), mas o motif CendR também pode ser críptico. Vários peptídeos de homing ao tumor com propriedades que penetram células contém motifs CendR crípticos (Laakkonen, P., et al 2002b;. Porkka, K. et al, 2002;. Jarvinen, TA et al 2007;. Zhang, L. et al. 2006). Além do motif CendR, esses peptídeos possuem uma sequência que se liga a um receptor específico. Um peptídeo de iRGD de ligação à integrina descrito no Sugahara et al, 2009 e Pedido de Patente dos EUA N° 12/390,061, depositado em 20 fevereiro de 2009, provê uma explicação de como funcionam tais peptídeos; o elemento de homing específico concentra o peptídeo no alvo (tumor), uma protease expõe o motif CendR e a ligação de NRP-1 subsequente provoca captação celular do peptídeo (e sua carga, se houver).

Muitos dos CPP catiônicos contém elementos CeNDR ativos ou crípticos (Langel, 2007). O domínio básico de HIV-1 de proteína TAT com um motif CendR inibe ligação de VEGFA-165 a NRP-1 (Jia, H. et al. 2001), mas o mecanismo de ligação e captação de CPP catiônico ainda não está claro. A diferença mais importante entre CPP catiônico e peptídeos CendR é que CCP composto de D- aminoácidos são ativos (Polyakov, V. et al. 2000, Gammon, ST et al. 2003), enquanto que os resultados aqui mostram que a captação de CendR é dependente de reconhecimento específico apenas dos L-peptídeos. Além disso, muito do CPP pode internalizar carga ancorada terminalmente C, em clara contradição com o conceito CendR nuclear. É possível que CendR seja uma das várias vias paralelas que poderia estar envolvida na captação de CPP catiônico.

A significância fisiológica do sistema de internalização mediado por CendR não é bem compreendida, mas elementos CendR estão presentes durante todo o proteoma, e muitas proteases de serina e cisteína são capazes de ativá-los (Barrett, Alan et al. 1998). Convertases de pró-proteína e proteases de membrana, tais como matriptase poderiam ser particularmente relevantes, como clivagem por estas enzimas expõe uma sequência RXXR na terminação C de 5 várias proteínas endógenas (hormônios peptídicos, fatores de crescimento, moléculas de adesão, proteases; Thomas, G., 2002, Uhland, K. 2006). Permitindo que a função de co-receptor de NRP-1, ativação do receptor e captação de proteínas celulares ativas são possíveis funções das sequências CendR fisiológicas. 10 Vírus e outros micro-organismos parecem ter sequestrado o mecanismo

CendR como um facilitador da infecção. Clivagem proteolítica de proteínas de revestimento viral com a exposição concomitante de elementos CendR parece ser um tema recorrente na infectividade de muitos patógenos virais (Tabela 4). Tabela 4. I Exemplos de vírus patogênicos humanos com elementos CendR 15 de superfície

Clivagem das proteínas de superfície viral pela protease expressa de modo ubiquitoso, furina, é um fator de contribuição importante para espalhamento sistêmico de vários vírus, considerando que a infectividade dos vírus que são sensíveis às proteases com um padrão de expressão restrito pode limitar a 5 infecção para os tecidos que expressam a protease adequada. Este conceito é exemplificado no vírus influenza (Steinhauer, DA et al.1999). Hemaglutininas de vírus influenza de mamíferos e aviária avirulentos são clivados em um único resíduo de arginina; tal clivagem é restrita a tipos de células limitadas, como aquelas do trato respiratório e digestivo. Em contraste, vírus influenza aviário virulentos que provocam infecção sistêmica são ativados por furina para expor um elemento CendR polibásico. É indicado aqui que a internalização mediada por inibição de CendR e penetração nos tecidos de patógenos e seus produtos pode prover uma nova forma de combate às doenças infecciosas.

A tecnologia CendR poderia ter muitas outras aplicações biotecnológicas, por exemplo, melhorias na entrega de nanopartículas específicas do tipo de célula. Nanopartículas revestidas com peptídeos CendR pré-expostos seriam retomadas nos primeiros leitos vasculares que as partículas encontra (coração e pulmões, após a injeção intravenosa de fago RPARPAR (SEQ ID NO: 2)). Como mostrado por Sugahara et al. 2008, sequências de CendR crípticas poderiam ser úteis na entrega de cargas para os tecidos periféricos. Plasma sanguíneo contém altas concentrações de inibidores de protease específicos de enzima (por exemplo, alfa-2 antiplasmina, antitrombina) e gerais (por exemplo, alfa-2- macroglobulina). Isso provavelmente provê proteção contra a ativação de CendR prematura no sangue. Proteases ativas são normalmente confinadas à área pericelular imediata. Estas proteases podem ativar peptídeos CendR crípticos sobre nanopartículas, que chegaram a um tecido alvo através do acúmulo passivo ou por entrega mediada por peptídeo de homing. Proteases específicas de tecido capazes de desmascarar uma sequência CendR críptica pode reforçar adicionalmente a seletividade alvo in vivo. A captação celular mediada pelo elemento CendR ativado provê um mecanismo para o peptídeo processados e sua carga para acumular no tecido-alvo ou célula. Outra conclusão importante do estudo é que os elementos CendR poderiam promover o espalhamento de nanopartículas em tecidos, e que a internalização mediada por CendR seletivo e penetração nos tecidos podem ser alcançados através da combinação de elementos de alvejamento de CendR com base na ancoragem e sensíveis à protease. O peptídeo iRGD (Sugahara et al., 2009), e possivelmente outros peptídeos de homing vascular de internalização com elementos CendR crípticos discutidos acima, ilustram este paradigma. Também é indicado que, em analogia com o fago e outras nanopartículas estudadas, vários agentes infecciosos poderiam usar o sistema CendR para facilitar seu espalhamento através dos tecidos.

2. Métodos

Procedimentos de animais. Todas as experiências de animal foram realizadas utilizando camundongos BALB/c nude (Harlan Sprague Dawley, Inc., Indianapolis, IN) de acordo com os procedimentos aprovados pelo Comitê de Pesquisa em Animal da Universidade da Califórnia, Santa Barbara.

Mostrar fago. Para mostrar fago in vivo, camundongos foram injetados por via intravenosa com 1010 unidades formadoras de placa (pfu) do fago T7 seguido de perfusão do sistema circulatório e determinação do fago ligado nos órgãos- alvo por titulação. Para estudos de ligação de células sobre células cultivadas (mostra in vitro) e suspensões de células derivadas de órgãos (mostra ex vivo), as células foram incubadas com 109 pfu do fago a 4°C, lavadas, lisadas e quantificados por titulação. Incubação a 37°C seguida por lavagem de baixo pH (glicina-HCl, pH 2,5) foi utilizada para avaliar a quantidade de fago internalizada.

Rotulagem of qdots (pontos quânticos). Peptídeos biotinilados foram usados para funcionalizar os qdots de estreptavidina 605 ITK (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acordo com as instruções do fabricante.

Imunofluorescência. Células cultivadas e seções de tecidos foram fixadas com paraformaldeído tamponado 4% ou metanol frio (-20°C), seguido de incubação com o anticorpo primário e secundário rotulado Alexa e coloração nuclear com DAPI ou corantes de Hoechst 342 DNA.

Cromatografia de afinidade. Tumores PPC-1 foram lisados em PBS contendo 200 mM de n-octil-beta-D-glicopiranosídeo, seguido pela incubação com RPARPAR (SEQ ID NO: 2)-revestido por esferas/núcleos/contas de Sulfolink (Pierce, Rockford, IL) e eluição no tampão de lise contendo 2mM de peptídeos RPARPAR livre (SEQ ID NO: 2). Fragmentos de gel excisados a partir gel corado de prata das frações eluídas foram submetidos à espectrometria de massa de MALDI-TOF no Instituto Burnham de Pesquisa Médica de Recursos Proteomicos.

Camundongos e tecidos. Todo o experimento com animal foi realizado de acordo com os procedimentos aprovados pelo Comitê de Pesquisa Animal na Universidade da Califórnia, Santa Barbara. Para injeções no tumor e antes de sacrificar, os camundongos foram anestesiados com injeções intraperitoneais de xilazina (10 mg/kg) e cetamina (50 mg/kg). Camundongos nude atímicos BALB/c (Harlan Sprague Dawley, Inc., Indianapolis, IN) foram usados para xenoenxertos tumorais e experimentos de mostra de fago in vivo e ex vivo. Xenoenxertos de tumor de próstata ortotópico foram gerados através da injeção de 106 de células PPC-1 (Zhang, L. et al. 2006) no lobo ventral da próstata. Para análise histológica, os tecidos foram fixados em 4% de paraformaldeído, crioprotegidos em solução de salina tamponada de fosfato contendo 30% de sacarose, e seccionado em 10μm.

Linhas celulares. Linhagens de células PPC-1, PC-3, Du-145, 4T1, MIA PaCa-2, PDAC1.3, B16F10, M21 e MDA-MB-435 foram mantidas em Meio de Águia Modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal bovino e penicilina/estreptomicina. Células endoteliais da veia umbilical humana foram cultivadas de acordo com as instruções do fabricante.

Mostra de fago. Sistema de mostra de fago selecionado T7 foi usado para construção de biblioteca de fago (diversidade de biblioteca - 108) e clonagem de fago individual de acordo com as instruções do fabricante (EMD Biosciences, Gibbstown, NJ). O fago foi purificado por precipitação com PEG-8000 (Sigma, St. Louis, MO), seguido por ultracentrifugação e diálise de gradiente de CsCl2. As sequências de peptídeos mostradas foram determinadas a partir do DNA codificando a região contendo inserção na terminação C de gp10 proteína de revestimento principal T7.

Para estudos de ligação de biopanning e fago (Hoffman, JA et al., 2004), as células cultivadas foram cultivadas à confluência e colhidas com tripsina e órgãos do camundongo foram dissociados utilizando Medimachine (BD Biosciences, San Jose, CA). Para medir a ligação de fago, 106 de células em tampão de ligação (DMEM contendo 1% de BSA) foram incubadas com 109 de pfu/ml do fago T7 por 1 hora a 4°C. As células foram lavadas 4 vezes com o tampão de ligação, lisadas em meio de crescimento bacteriano LB contendo 1% de NP-40, e tituladas. Ensaios de internalização de fago utilizam o mesmo procedimento, exceto aquele que as células foram incubadas com o fago a 37°C, e que um tampão ácido (500 mM de cloreto de sódio, 0,1 M de glicina, 1% de BSA, pH 2,5) foi usado em vez de tampão de ligação na segunda lavagem.

Centrifugação sobre uma almofada de óleo de silicone (1,03 g/ml) foi usada para separar fago não ligado a partir de células durante o tempo dos experimentos em curso. Inibidores de ligação de fago e internalização (heparina, condroitina, enzimas de remoção de glicocálix, inibidores da endocitose, peptídeos livres, pontos quânticos e fago inativado por UV) foram adicionados às células 20 minutos antes da incubação com fago. Inibidores de endocitose utilizados neste estudo foram os seguintes: nistatina (50 mg/ml), genisteína (100 mg/ml), clorpromazina (5 μg/ml), 5-( N-etil-N -isopropil)amilorida (100 μM), wortmannin (10 mM).

Estudos de homing de fago in vivo em camundongos foram realizados por injeção de 1010 pfu de fago T7 na veia da cauda e 10 minutos a 1 hora depois, os camundongos foram perfundidos com DMEM através do ventrículo esquerdo do

coração. Os órgãos de interesse foram coletados, homogeneizados em 1% de NP40 e o fago foi quantificado por titulação.

Síntese de peptídeo e rotulagem de qdot. Os peptídeos foram sintetizados usando química de Fmoc/t- Bu em um sintetizador de peptídeo automatizado assistido por microondas (Liberty, CEM Corporation). Peptídeos foram purificados por HPLC usando 0,1% de TFA em misturas de acetonitrila-água para 90% - 95% de pureza por HPLC e validadas pela análise espectral de massa de Q-TOF.

Pontos quânticos de ITK-605 estreptavidina (Invitrogen, Carlsbad, CA) foram funcionalizados com peptídeos biotinilados por incubação com 100 vezes o excesso molar de peptídeo seguidos da remoção de peptídeo livre por diálise.

Cromatografia de afinidade. Tumores PPC-1 ortotópicos foram homogeneizados em PBS contendo 400 mM de n-octil-beta-D-glicopiranosídeo, 1 mM de MgSO4, 1 mM de MnCl2, 1 mM de CaCl2 e 1 tablete/5ml de coquetel de inibidores de protease livre de EDTA (Sigma, St. Louis, MO). Após 6 horas de extração em uma plataforma rotativa a 4°C, o lisado foi liberado por centrifugação (20 minutos a 14.000 rpm em microcentrífuga refrigerada) e carregado para uma coluna de afinidade preparada pelo peptídeo RPARPAR etiquetado por acoplamento de cisteína (SEQ ID NO: 2) ao Sulfolink acoploando gel de acordo com as instruções do fabricante (Pierce, Rockford, IL). Após a ligação durante a noite, a coluna foi lavada com uma solução tampão de lavagem, de coluna contendo 200 mM de n-octil-beta-D-glicopiranosídeo, mas por outro lado idêntica à solução tampão de lise, seguida por eluição com 2 mM de peptídeo RPARPAR livre (SEQ ID NO: 2) na mesma solução tampão.

As amostras das frações de lavagem e eluição foram separadas usando géis de poliacrilamida de Tris-glicina 4-20% Novex (Invitrogen, Carlsbad, CA), coradas de prata usando kit de Silver Snap (Pierce, Rockford, IL) e submetidas à espectrometria de massa MALDI-TOF no Instituto Burnham para Facilidade Proteômica de Pesquisa Médica (Medical Research Proteomics Facility). Amostras de cromatografia de afinidade foram imuno-plotadas (immunoblotted) e sondadas com anticorpos seguidos por detecção quimioluminescente de ligação.

Coloração de imunofluorescência. Células cultivadas (2 x 105 de células) foram cultivadas em placas de cultura de tecido de 6 poços sobre lamínulas revestidas de colágeno-I (BD Biosciences, San Jose, CA) durante a noite a 37°C em 5% de CO2, e incubadas com 108 de pfu do fago T7. As células foram fixadas em paraformaldeído a 4% ou metanol frio (-20°C), e corados com anticorpos. Núcleos foram corados com DAPI ou Hoechst 542. Um anticorpo anti-T7 de coelho policlonal foi gerado em-casa, como descrito anteriormente (Laakkonen, P. et al. 2002b), exceto que uma etapa de purificação de fago adicional usando centrifugação de CsCl2 foi incluída. Outros anticorpos primários utilizados foram anticorpo monoclonal anti-camundongo CD31 de rato (BD Biosciences), anti- NRP-1 de coelho, Lamp-1 anti-humano de camundongo, caveolina anti-humana de camundongo (Millipore, Temecula, CA), anti-NRP-1 de camundongo (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA), EEA-1 anti-humano de camundongo (BD Biosciences, San Jose, CA). Os anticorpos secundários, anticorpos de cabra Alexa594 para camundongo, rato e imunoglobulinas de coelho e anticorpo anti-coelho de burro Alexa488 eram da Invitrogen (Carlsbad, CA). Seções de células e tecidos foram examinadas por microscopia confocal (FluoView 500, Olympus America Inc., Center Valley, PA).

Construções de DNA e transfecção. Construção de expressão do cDNA NRP-1 do tipo selvagem em pcDNA3.1(+) foi um presente do tipo do Dr. Michael Klagsbrun. Mutagênese dirigida ao local foi usada para gerar mutação tripla do local de ligação de VEGF-165 no domínio b1 de NRP-1 (S346A-E348A-349A), substituindo TCAAAAGAAACC (SEQ ID NO: 29; SKET aminoácidos de codificação) por GCT AAAGCTGCT (SEQ ID NO: 30; AKAA de codificação).

Células de melanoma M21 foram transitoriamente transfectadas com essas construções usando lipofectamina de acordo com as instruções do fabricante (Invitrogen, Carlsbad, CA).

Tratamento de protease de fagos e qdots. 109 de partículas de fago ou 50 μl de fago de qdots revestidos de peptídeo foram tratados com 50 iu de uPA, 25 μg de tripsina cristalina, 50 iu de trombina ou 25 μg de colagenase tipo I (todas da Sigma, St. Louis, Mo). C. Exemplo 3: Alvejamento de tumores por meio da indução de uma permeabilização vascular seletiva de tumor

Um grande problema da terapia do câncer é que os agentes anti-câncer não penetram adequadamente no tecido do tumor. Aqui, uma abordagem conceitualmente nova é introduzida, que supera esta limitação. Um peptídeo que penetra tumor, iRGD (CRGDK/RGPD/EC; SEQ ID NO: 61), que eleva seletivamente o escape vascular e penetração do tumor dos compostos co- administrados de vários tamanhos é revelado. Esta atividade depende de duas sequência de motifs dentro do iRGD, o motif de ligação ao RGD para integrinas αv, que são expressos em vasos tumorais (e frequentemente em células tumorais) e motif R de regra de extremidade C de RXXR/K que se liga a um receptor de penetração de tecidos, neuropilin-1. Co-administração com iRGD elevou a atividade anti-tumor de duas drogas (lipossomas de doxorrubicina e Herceptina). iRGD pode ser utilizado como um impulsionador genérico de diagnóstico e terapêutica de câncer.

Agentes anti-câncer atuais sofrem de dois problemas principais: pouca penetração no tecido tumoral e alta toxicidade para tecidos normais. Em tumores sólidos, agentes anti-câncer só penetram 3-5 diâmetros de células dos vasos sanguíneos, deixando algumas áreas do tumor, e nenhuma droga ou uma baixa concentração da droga (Hambley et al, 2009;. Minchinton et al, 2006. ). Tumores têm uma alta pressão intersticial, presumivelmente porque os vasos sanguíneos tendem a ser vazantes e os vasos linfáticos são pouco funcionais em tumores, que trabalha contra a penetração das drogas no tecido tumoral (Jain, 1990; Heldin et al, 2004). Estas circunstâncias reduzem a eficácia da terapia e promovem o desenvolvimento da resistência às drogas.

Um peptídeo que penetram tumor, iRGD (CRGDK/RGPD/EC; SEQ ID NO: 61; ciclizado por uma ligação de dissulfeto entre as cisteínas), foi recentemente identificado que se liga especificamente aos vasos sanguíneos do tumor, penetra no tecido tumoral e pode transportar uma carga anexada, tal como um fluoróforo, droga, ou agente de contraste de nanopartículas fundo no tecido tumoral extravascular (Sugahara, 2009). Não é necessário acoplar uma carga ao peptídeo que penetra tumor, o peptídeo aumenta a permeabilidade vascular especificamente no tumor, permitindo que um composto(s) co-injetado extravase e penetre no tecido de tumor Sugahara et al, 2010). Este procedimento possibilita aumentar a eficácia das drogas que atuam dentro de um tumor, sem ter que modificar as drogas para alvejamento, e sem aumentar os efeitos colaterais das drogas.

O peptídeo iRGD endereça seletivamente aos tumores, porque se liga às integrinas αv, que são especificamente expressas na vasculatura do tumor e, frequentemente sobre as células tumorais (Ruoslahti et al, 2002;. Eliceiri et al, 2001; Sugahara et al, 2009). Peptídeos RGD e seus imitadores estão sendo usados em várias aplicações médicas, tais como diagnóstico e tratamento de tumores, e são avaliados em ensaios clínicos (Tucker et al., 2003). O peptídeo iRGD difere dos peptídeos RGD usados atualmente pelo fato de que, embora inicialmente se liga às αv integrinas no endotélio de tumor angiogênico, uma clivagem proteolítica expõe posteriormente uma sequência RGDK/R de terminação C (SEQ ID NO: 31; sequência CendR; Sugahara et al ., 2009; Teesalu et al, 2009). O peptídeo truncado já não se liga mais às integrinas, mas ganhou afinidade para neuropilin-1, que media o extravasamento e atividade de penetração nos tecidos (Sugahara et al, 2009;. Teesalu et al, 2009). Tais propriedades conferem no iRGD uma penetração nos tecido altamente eficiente e seletiva de tumor, que ocorre dentro de minutos após a injeção do peptídeo na corrente sanguínea (Sugahara, 2009).

Peptídeos e proteínas com uma sequência R/KXXR/K de terminação C (SEQ ID NO: 23) aumenta permeabilidade vascular através da ligação a neuropilin-1 (Acevedo et al, 2008; Jia et al, 2006; Soker et al,.1998; Teesalu et al, 2009). O extravasamento rápido e penetração de tecidos de iRGD no tumor pode ser causado por um aumento específico de tumor na permeabilidade vascular induzida pela sequência de CendR de iRGD. Camundongos hospedando tumor foram injetados com Evans Blue, um corante de ligação à albumina comumente usado para estudar permeabilidade vascular (Miles et al, 1952; Murohara et al, 1998). Peptídeo iRGD químicamente sintetizado, quando co-injetado com o corante, causou acúmulo específico do corante em xenoenxertos de carcinoma pancreático humano MIA Paca-2 (Fig. 9A) e locais secundários invadidos por este tumor (Fig. 9A, pontas de seta). A permeabilização induzida também foi observada em outros tipos de tumores, que iRGD mostrou endereçar de modo eficiente aos (Sugahara et al, 2010.); xenoenxertos ortotópicos de tumores de mama humana BT474 e de próstata humana 22RvI, tumores de próstata GFP- PC-3 humano disseminados que imitam metástases, e um modelo fabricado geneticamente do adenocarcinoma ductal pancreático de novo (Hezel et al, 2006;. Fig. 9A e Fig. 10, A e B). Quantificação do corante nos tecidos confirmou que a permeabilização foi específica para os tumores e dependente da dose de iRGD administrada. O aumento no acúmulo de tumor foi de cerca de 4 vezes (Fig. 9B).

Para testar a relevância do elemento CendR na permeabilização vascular induzida por iRGD, dois peptídeos RGD comumente usados que não carregam um motif CendR, RGD-4C (CDCRGDCFC; SEQ ID NO: 32; Koivunen et al, 1995) e ciclo(-RGDfK) (SEQ ID NO: 40; Murphy et al., 2008), foram examinados para o efeito de permeabilidade e encontrado para ser inativo (Fig. 9C e Fig. 10C). Além disso, uma variante de iRGD mexida que transporta um motif RGD, mas não CendR (CRGDDGPKC; SEQ ID NO: 33) também não conseguiu reforçar a permeabilidade nos tumores (Fig. 9C e Fig. 10C). Pré-injeção em camundongos de tumor de um anticorpo que bloqueia funcionalmente neuropilin-1, o receptor para peptídeos CendR, inibiu o aumento induzido por iRGD na permeabilidade (Fig. 9D). Quando iRGD alveja um tumor, é clivado proteoliticamente para se tornar CRGDK (SEQ ID NO: 34), que atua como um peptídeo CendR de ligação à neuropilin-1 (Sugahara et al, 2009). Um peptídeo CRGDK quimicamente sintetizado (SEQ ID NO: 34) reforçou permeabilidade vascular local na pele de uma maneira dependente de dose similar ao VEGF-165 e peptídeos CendR protótipos, RPARPAR (SEQ ID NO: 2) e RPAR (SEQ ID NO: 5; Teesalu et al, 2009; Fig 11). Coletivamente, estes resultados mostram que a permeabilidade reforçada por iRGD no tumor é dependente de CendR.

O aumento específico do tumor no acesso tecidual mediado por iRGD levou a uma nova abordagem para melhorar a entrega de drogas e agentes de imagem ao parênquima tumoral (esquematizado na fig. 12). Um número dos compostos foram injetados em combinação com iRGD. Um peptídeo 1,3-kDa, CRGDC rotulado fluoresceína (FAM-CRGDC, SEQ ID NO: 36), que não contém um motif CendR e apenas penetra minimamente penetra no tecido tumoral, por si só (Koivunen et al, 1993; Sugahara et al., 2009), apresentou distribuição extravascular extensa quando co-injetado com iRGD (Fig. 13A). Resultados similares foram obtidos com 3-kDa e 10-kDa dextrano, nanoworms de óxido de ferro superparamagnético (cerca de 80 nm de comprimento e 30 nm de espessura (Park et al., 2009)), e fago T7 (diâmetro de cerca de 65 nm (Sokoloff et al., 2000)). Quantificação da área de espalhamento nas seções de histologia revelou que FAM-CRGDC (SEQ ID NO: 36) e os dextranos espalham no interior do tumor 3 a 5 vezes mais na presença de iRGD do que sem ele (Fig. 13B). O fago T7 acumulado no tumor 3 vezes mais quando co-injetado com iRGD do que o controle como evidenciado pelo título do fago (Fig. 13C). Estes resultados mostram que o sistema de combo iRGD pode aumentar o acúmulo de tumor dos compostos com tamanhos muito diferentes e propriedades químicas, variando de um peptídeo 1 kDa às nanopartículas de cerca de 70 nm de tamanho. Essa penetração específica de tecido das moléculas induzidas por peptídeos CendR co-administrados, tal como iRGD, foi chamada de efeito de Transendotélio & Tecido induzido por CendR (CendIT - pronunciado como efeito”send-it").

Para investigar a aplicabilidade do regime de combo de iRGD para tratamento de tumor, tumores 22RvI ortotópicos foram tratados com uma combinação de iRGD e doxorrubicina (DOX)-lipossomas (diâmetro de cerca de 120 nm). Os lipossomas espalham muito mais amplamente e acumulam mais no tecido do tumor com iRGD do que sem ele (Fig. 14, A e B). Estudos de tratamento do tumor mostraram que o regime de combo de iRGD (1 mg de DOX/kg + iRGD) foi tão potente quanto os lipossomas DOX administrados isoladamente, em uma dose 3 vezes maior (Fig. 14C). Um peptídeo RGD cíclico que não contém um motif CendR não conseguiu reforçar o efeito da droga. Certos peptídeos RGD foram mostrados para inibir o crescimento tumoral (Brooks et al, 1994; Tucker et al, 2003). Um controle isolado de iRGD na dose utilizada para o regime de combo não mostrou nenhum efeito sobre o crescimento do tumor, suportando a noção que o regime de combo é mais eficaz do que a droga isolada porque iRGD melhora o acesso da droga às células tumorais. Administração diária dos lipossomos em 3 mg de DOX/kg durante 17 dias atinge a dose máxima tolerada cumulativa da droga em camundongos (Parr et al., 1997). Combinação de iRGD com esta dose (3 mg de DOX/kg + iRGD) melhorou adicionalmente a eficácia da droga (Fig. 15).

Enquanto o regime de combinação aumentou significativamente a potência da droga, esta não aumentou os efeitos colaterais. Cardiotoxicidade, o principal efeito colateral de DOX, é evidenciado por apoptose de cardiomiócitos em níveis moleculares (Arola et al., 2000). Apoptose de cardiomiócitos abundantes, detectada por coloração de TUNEL, foi observado no grupo de 3 mg de DOX/kg, enquanto que ela estava minimamente presente no grupo de combo (1 mg de DOX/kg + iRGD) a um nível similar ao grupo de 1 mg de DOX/kg (Fig. 14D e Fig. 16). Em contraste, os tumores do grupo de combo (1 mg de DOX/kg + iRGD) mostrou coloração TUNEL forte em um nível comparável ao do grupo de 3 mg de DOX/kg, suportando os dados do tratamento (Fig. 14D). Além disso, o grupo de 3 mg de DOX/kg perdeu peso abruptamente, enquanto que o grupo de combo (1 mg de DOX/kg + iRGD) mostrou perda de peso leve comparável ao grupo de 1 mg de DOX/kg (Fig. 17). Estes resultados indicam que o regime de combo provê efeitos anti-tumorais equivalentes como tratamento com dose maior da droga isolada sem aumentar os efeitos colaterais.

O regime de combo de iRGD foi testado então em outro modelo de tumor ortotópico criado com células BT474. As células BT474 expressam altamente HER2, o alvo do anticorpo anti-HER2 148-kDa, Herceptina (Spiridon et al., 2002). Herceptina, quando injetada juntamente com iRGD, espalhou muito mais eficientemente dentro do tecido do tumor do que a injeção de controle (Fig. 18A). Quantificação de ELISA mostrou que iRGD reforçou drasticamente o acúmulo de Herceptina nos tumores em 40 vezes, possivelmente devido à sua afinidade para as células tumorais expressando HER2 (Fig. 18B). Assim, o tratamento de tumores BT474 ortotópicos com iRGD combinando com Herceptina aumentou grandemente a potência da droga (Fig. 18C). O peptídeo iRGD sozinho na dose utilizada no regime de combo não afetou o crescimento do tumor. O regime de combo foi significativamente mais eficaz do que o tratamento com a mesma dose ou dose 3 vezes maior de Herceptina isolada. Combinando iRGD com a dose 3 vezes maior de Herceptina melhorou a eficácia da droga ainda mais. Tratamento com esta combinação resultou em uma erradicação de todos os tumores (Fig. 18C). Os tumores não recaem sem qualquer tratamento durante um período de observação de 2 semanas depois de terem desaparecido.

O efeito CendIT, que a nova metodologia de alvejamento de tumor é baseada, é distinta do chamado efeito de Permeabilidade e Retenção reforçado (EPR). O EPR é devido à permeabilidade dos vasos tumorais, o que permite o extravasamento de materiais para o tecido ao redor dos vasos do tumor (Maeda et al., 2003). O efeito CendIT é claramente muito mais eficaz do que o EPR (por exemplo, ver Fig. 13.). O efeito CendIT pode ser possivelmente um processo ativo e não um fenômeno de permeabilidade vascular passiva, porque (i) CendIT é mediado pelo receptor (neuropilin-l), e EPR não é (ii) o CendIT causa extravasamento em poucos minutos, enquanto que EPR mostra um início lento e picos gradualmente dentro de 6-8 horas (Maeda et al., 2003), (iii) CendIT é eficaz com pequenas moléculas, enquanto que EPR prolonga a retenção dentro do tumor das moléculas maiores do que 45 kDa (Maeda et al. fago 2003), e (iv) fago expressando iRGD penetra no tecido tumoral, mesmo na ausência de circulação, e que este processo é dependente de neuropilin-1 e de energia (Fig. 19). No entanto, pode haver um componente CendIT em EPR (e permeabilidade vascular em geral) porque VEGF-165, que está envolvido nestes processos, tem um motif CendR ativo na terminação C (Maeda et al, 2003;. Jia et al ., 2006; Soker et al, 1998;. Teesalu et al, 2009).

O sistema de combo de iRGD baseado em CendIT é uma abordagem conceitualmente nova para o tratamento de tumores; co-administração de um peptídeo com uma droga livre reforça o acesso de drogas aos tumores. Sistemas de entrega de droga convencionais exigem frequentemente química extensa para anexar os elementos de alvejamento (por exemplo, peptídeos e anticorpos) à droga. O sistema revelado provê uma vantagem significativa em relação a tais sistemas de tal forma que a atividade de uma droga pode ser reforçada sem qualquer modificação (ver Fig. 12.). Além disso, os sistemas convencionais dependem da docagem do receptor de antígeno no alvo (alvejamento sinafico), assim, sofrem de estarem saturados devido à quantidade limitada de receptores disponíveis na vasculatura do tumor. Em contraste, o sistema de combo não é saturável. Uma vez que o sinal de penetração (efeito CendIT) é acionado, uma determinada concentração de moléculas é provável que extravase e resida no tecido tumoral, como mostrado com doses diferentes de drogas neste estudo.

O sistema de combo de iRGD é altamente seletivo de tumor. A especificidade do tumor decorre do mecanismo de alvejamento de tumor de 3 etapas do iRGD (Sugahara et al, 2009 e 2010; Fig 12), o peptídeo iRGD (i) alveja a vasculatura do tumor com o seu RGD, (ii) é então clivado para tornar-se um CendR (o fragmento CRGDK/R, SEQ ID NO: 37), (iii) e liga-se à neuropilion-1 para acionar o efeito CendIT. A menos que seja clivado, iRGD não exibe caracteres CendR ou tem uma afinidade mensurável para o receptor de penetração de tecido, neuropilin-1, assim, dá fundamento mínimo em tecidos normais (Sugahara et al., 2009). Tentativas similares foram feitas com VEGF para aumentar a permeabilidade vascular para realizar uma penetração mais profunda das moléculas e nanopartículas no tecido tumoral (Monsky et al., 1999). VEGF, quando superfundido localmente em tumores, alcançou com êxito o extravasamento de albumina e nanopartículas dentro do tumor até 4 vezes. No entanto, efeitos similares foram observados na pele com injeção local de VEGF (Monsky et al, 1999;. Murohara et al, 1998; Teesalu et al, 2009) e no pulmão com injeção sistêmica de peptídeos CendR não alvejados (Teesalu et al., 2009), demonstrando a exigência de um elemento de alvejamento para os efeitos de CendIT seletivo de tumor com êxito.

O aumento de 4 vezes no acúmulo de moléculas em tumores, mas não em outra parte, foi conseguido com pouco trabalho de otimização, é provável que esta relação pode ser melhorada, por exemplo, empregando iRGD multimérico sobre nanopartículas, iRGD estruturalmente estabilizado, outros peptídeos CendR de homing ao tumor (Hoffman et al, 2003;. Joyce et al, 2003;. Laakkonen et al, 2002;. Porkka et al, 2002), ou combinações de peptídeos, ou por meio da otimização da dose e cronograma de administração. Curiosamente, os tumores coletados após o tratamento com o regime de combo (Fig. 14B) apresentaram distribuição notadamente ampla de drogas dentro dos tumores em comparação com aqueles tratados com as drogas isoladamente em doses iguais ou maiores (Fig. 20). Tumores coletados a partir do regime de combo de Herceptina (Fig. 18C) mostraram ampla distribuição de Herceptina dentro dos tumores em comparação com aqueles tratados com as drogas isoladamente em doses iguais ou superiores. Portanto, múltiplas injeções do regime de combo ou um longo tempo de circulação pode ajudar a aumentar o acúmulo de compostos no tumor. Além disso, como demonstrado com Herceptina, utilizar agentes anti-câncer com afinidade ao tecido tumoral pode ajudar a melhorar este sistema.

O acúmulo de moléculas em tumores torna possível alcançar uma maior atividade antitumoral. Este ponto foi demonstrado em 2 modelos de tumor usando drogas diferentes com problemas de penetração de tecido (Yuan et al, 1994;. Thurber et al, 2008). Como a entrega de tumor de cada um dos 8 compostos muito diferentes que testamos poderiam ser reforçada (a partir de uma molécula de 1-kDa- até uma nanopartícula de cerca de 120 nm de diâmetro), é possível que a atividade de qualquer droga pode ser melhorada com este sistema. Alternativamente, reduzir a dose possibilita reduzir os efeitos colaterais e alcançar o mesmo nível de atividade antitumoral como com o tratamento convencional. Assim, pode até ser possível reviver as drogas que tenham sido previamente rejeitadas por causa de toxicidade. Avanços substanciais no tratamento do câncer (e diagnóstico) podem acontecer.

1. Métodos

Modelos de tumor e células. Câncer dutal pancreático humano MIA Paca-2 e 22RvI, GFP-PC-3, e linhagens de células de câncer de próstata humano PPC1 foram cultivadas Meio de Eagle Modificado da Dulbecco (Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM)) suplementado com 10% de soro fetal bovino e penicilina/estreptomicina. Linhagem de célula de câncer de mama humano BT474 foi cultivada em meio de SFM4MAB suplementado com 10% de soro fetal bovino e penicilina/estreptomicina. Xenoenxertos foram criados por meio da injeção de camundongos nude atímicos BALB/c (Harlan Sprague Dawley, Inc., Indianapolis, IN) ortotopicamente com 106 de células de câncer humano. Para os xenoenxertos BT474, pelets de estradiol 17β (Pesquisa Inovativa da América, Sarasota, FL) foram implantados subcutaneamente na parte de trás dos camundongos um dia antes da inoculação ortotópica de 5 x 106 de células tumorais suspensas em Matrigel (BD Biosciences, San Jose, CA). Tumores de próstata disseminados foram gerados por meio da injeção de 2 x 106 de células GFP-PC- 3 para o ventrículo esquerdo do coração. Os nódulos tumorais disseminados foram detectados sob luz UV com um Sistema de Luz brilhante Illumatool LT-9900 (Lightools Research, Encinitas, CA). Camundongos transgênicos para o adenocarcinoma dutal pancreático de novo foram gentilmente providos pelo Dr. Douglas Hanahan da Universidade da Califórnia, San Francisco, CA. Todos os experimentos com animais foram realizados de acordo com os procedimentos aprovados pelo Comitê de Pesquisa Animal da Universidade da Califórnia, Santa Barbara.

Preparação de compostos. Peptídeos sintéticos (Teesalu et al, 2009), fago T7 não alvejado expressando G7 (SEQ ID NO: 38) ou peptídeos CG7C (SEQ ID NO: 39) e fago iRGD (Teesalu et al, 2009.) e nanoworms de óxido de ferro não alvejado rotulado fluoresceína (Park et al., 2009) foram preparados como descrito. DOX-lipossomas foram compostos de 1,2-distearoyl-sn-glicero-3-fosfocolina, colesterol, 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina e 1,2-distearoil-sn-glicero-3- fosfoetanolamina-N-[metóxi(polietileno glicol)-2000] a razões molares de 2:1.5:1.25:0,25. Os lipídios (dos Lipídeos Polares Avanti, Alabaster, AL) foram dissolvidos em clorofórmio e o solvente foi evaporado com um filme fino de umidade de gás livre de nitrogênio. O filme lipídico seco foi hidratado com 300 mM de fosfato de amônio (pH 7,4) por 1 hora a 60°C. O frasco foi então brevemente agitado e, ocasionalmente, sonicado em um sonicador de banho. As vesículas multilamelares, assim formadas, foram ainda sonicadas usando uma sonda Ti de sonicador por 2-3 minutos até que uma solução translúcida de pequenas vesículas unilamelares foi obtida. As vesículas unilamelares pequenas foram então sequencialmente extrudadas 11 vezes através de filtros de membrana de policarbonato com diâmetro de poro de 200 nm e 100 nm usando uma mini-extrusora Avanti (Lipídeos Polares Avanti). A solução tampão foi então trocada com salina tamponada por Hepes (20 mM de Hepes, 150 mM de NaCl, pH 7,4) por filtragem de gel utilizando colunas NAP-10 ou NAP-25 (GE Healthcare, Milwaukee, WI). DOX (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) foi encapsulado nesses lipossomas através de um gradiente de fosfato de transmembrana, como descrito anteriormente (Murphy et al., 2008). Os DOX-lipossomas foram 119,8 ± 7,6 nm de diâmetro (± indica o desvio padrão) como medido por dispersão de luz a laser (índice de refração, 1,59; viscosidade, 0,89) em um Zetasizer Malvern Nano (Malvern, UK).

Ensaio de permeabilidade sistêmica in vivo (sistema de combo de iRGD). Camundongos tumorais foram injetados por via intravenosa com 100 μl de PBS contendo ou 1 μg de Evans Blue, 200 nmol de peptídeo CRGDC rotulado fluoreceina (FAM-CRGDC, SEQ ID NO: 36), 200 μg de dextrano fixavel (Molecular Probes, Eugene, OR), 109 de unidades formadoras de placa (pfu) de fago expressando G7, 5 mg de ferro/kg de nanoworms de oxido de ferro não alvejado rotulado fluoreceina, 1 mg de DOX/kg de DOX-lipossomas ou 3 mg/kg de Herceptina (Genentech , South San Francisco, CA). Cinco minutos depois, os camundongos receberam uma injeção intravenosa com 100 μl de PBS com ou sem iRGD ou peptídeos de controle em várias concentrações. Após o tempo indicado de circulação, os camundongos foram perfundidos com 20 ml de PBS contendo BSA a 1% e tecidos foram coletados. Para quantificação de Evans Blue, o corante foi extraído de tecidos utilizando N,N-dimetilformamida por 24 horas a 37°C e o teor de corante foi quantificado por meio da medição da absorvância a 600 nm com um espectrofotômetro. Tecidos de camundongos que receberam FAM-CRGDC (SEQ ID NO: 36) foram fotografados sob luz UV com o Sistema de Luz brilhante Illumatool LT-9900 antes de serem processados para imunofluorescência e imuno-histoquímica. Tecidos com dextrano, nanoworms, DOX-lipossomas ou Herceptina foram processados para um ou ambos; imunofluorescência e imuno-histoquímica. Quantificação da área positiva nas seções coradas de modo imuno-histoquímico, e a quantidade total de anticorpos nos tecidos são descritos em outra parte deste manuscrito.

Ensaio de permeabilidade da pele in vivo (ensaio de Miles modificado). Camundongos nude anestesiados foram injetados por via intravenosa com uma mistura rastreadora 3 consistindo de 0,5% de Evans Blue (Biomedicals MP, Irvine, CA), 13 μg de luciferase recombinante de Quantilum (Promega, Madison, WI) e 109 pfu de partículas de fago expressando G7 (SEQ ID NO: 38) em 150 μl de PBS. Dez minutos depois, os camundongos foram injetados por via intradérmica no lado ventral em duas fileiras com 30 μl de PBS contendo ou 15 ng de VEGF-165 (Calbiochem, San Diego, CA) ou peptídeos em várias concentrações. Trinta minutos depois, os camundongos foram perfundidos através do coração e da pele contendo os locais de injeção detectados com Evans Blue foi removido e extensivamente limpo. Amostras da pele (4 mm de diâmetro) foram perfurados para fora dos locais de injeção, homogeneizados em caldo de lisogenia com 1% de NP40, e ensaiados para a atividade de luciferase e o título do fago.

Imunofluorescência. Preparação de tecido e coloração da crio-seções foram realizadas como descrito (Sugahara et al., 2009). Os anticorpos primários foram anticorpos monoclonais anti-camundongo CD31 de rato (BD Biosciences) e policlonais de fago anti-T7 de coelho (Teesalu et al., 2009). Os anticorpos secundários, anti-rato de cabra Alexa Fluor 594, anti-rato de cabra 647 e anticoelho de burro 488 foram da Molecular Probes. Em alguns experimentos, seções de tecido foram corados com um kit de ensaio de TUNEL (Kit de Detecção de morte celular no local, vermelho TMR; Roche Applied Science, Indianapolis, IN).

As seções de tecido foram examinadas com um microscópio confocal FluoView 500 (Olympus America, Center Valley, PA).

Imuno-histoquímica. Crio-seções foram coradas por imunohistoquímicamente, digitalizadas com um scanner Scanscope CM-1, e áreas coradas positivamente foram quantificadas com o software ImageScope (Aperio Technologies, Vista, CA;. Sugahara et al, 2009). Os anticorpos primários utilizados foram anti-FITC de coelho biotinilado/policlonal verde Oregon (Molecular Probes), monoclonal anti-dextrano de camundongo (Stemcell Technologies, Vancouver, BC, Canadá) e monoclonal anti-camundongo CD31 de rato biotinilado (BD Biosciences). Anticorpos secundários foram anticorpos policlonais anti-coelho de cabra botinilada (Pierce Biotecnologia, Rockford, IL), anti-camundongo de cabra (Vector laboratórios, Burlingame, CA) e anti-humano de coelho (Biotecnologia Pierce). Em alguns experimentos, seções de tecidos foram corados com um kit de ensaio de TUNEL (Kit de Detecção de morte celular no local, POD; Roche Applied Science).

Quantificação de DOX em tumores e tecidos normais. A quantificação foi realizada conforme descrito em outro lugar (Mayer et al., 1997). Brevemente, camundongos portando tumores ortotópicos 22RvI foram injetados por via intravenosa com DOX-lipossomas (5 mg de DOX/kg) com ou sem iRGD (4 μmol/kg), ou com lipossomas vazios. Após 3 horas, os camundongos foram perfundidos através do coração e os tumores e órgãos de interesse foram coletados. Os tecidos foram homogeneizados mecanicamente em uma mistura de sulfato de dodecil de sódio 1% e 1 mM de H2SO4 em água. Posteriormente, DOX foi extraído pela adição de 2 ml de clorofórmio/álcool isopropílico (1:1, v/v) seguido por ciclos de vórtex e congelamento/descongelamento. As amostras foram centrifugadas a 14.000x g por 15 min e a fase orgânica (fase mais baixa) foi medida para DOX em OD490nm com um espectrofotômetro.

Tratamento de xenoenxerto de 22RvI com DOX-lipossomas. Camundongos nude portando xenoenxertos ortotópicos 22Rv1 de duas semanas de idade (geralmente cerca de 250 mm3 no volume do tumor) receberam diariamente injeções intravenosas de DOX-lipossomas (1 ou 3 mg de DOX/kg) ou PBS, combinadas com injeções intravenosas diárias de 2 μmol/kg de iRGD, ciclo(- RGDfK, SEQ ID NO: 40) ou PBS. Os camundongos foram pesados a cada 4 dias durante o tratamento. Após 17 dias de tratamento, os camundongos foram perfundidos através do coração e os tecidos foram colhidos. Os tumores foram pesados e amostras cardíacas foram processadas para histologia como descrito em outra parte deste estudo.

ELISA competitivo para quantificação de Herceptina. O ELISA é baseado em um princípio de ligação competitiva entre Herceptina e um IgG humano biotinilado. Uma curva padrão foi criada cada vez que uma medição foi realizada. Para a curva padrão, poços de microtitulação revestidos com 5 μg/ml de IgG anti- humano de coelho (SouthernBiotech) foram incubados com uma mistura de diferentes concentrações de Herceptina (variando de 0,01 a 10 μg/ml) e 1 μg/ml na concentração final de IgG humano biotinilado (Rockland Immunochemicals, Gilbertsville, PA). Após 2 horas de incubação à temperatura ambiente, os poços foram lavados com PBS contendo 0,01% de Tween 20, adicionado com peroxidase de rábano conjugada com streptavidina, e incubado por 30 min em temperatura ambiente. A quantidade de IgG humano biotinilado capturada nos poços de microtitulação foi quantificada com 2,2-azino-bis (3-etilbenztiazolina-6- ácido sulfônico) como substrato e absorvância a 405 nm foi medida. Uma curva padrão foi elaborada plotando absorvância contra a concentração de Herceptina, e usada para calcular a concentração de Herceptina em extratos de tecido. A quantidade de Herceptina que entrou nos xenoenxertos BT474 e tecidos foi medida no mesmo sistema ELISA competitivo, substituindo as amostras padrão de Herceptina por extratos de tecido. Os extratos de tecido foram preparados como se segue. Tecidos de camundongos de tumor BT474 que receberam injeções de Herceptina foram homogeneizados em 1 ml de 0,1 M de Glicina pH2 com 1% de Tween-20 e inibidores da protease (Complete Mini EDTA-free; Roche Applied Science), seguido por uma centrifugação (4°C, 10 min, 14.000 rpm). Seiscentos microlitros do sobrenadante foram coletados, e adicionados com 150 μl de 1M de Tris pH8 e 50 μl de 5M de NaCl.

Tratamento de xenoenxerto BT474 com Herceptina. Camundongos nude portando xenoenxertos ortotópicos de BT474 (cerca de 100 mm3 no volume do tumor) foram tratados por via intravenosa a cada 4 dias com Herceptina a 3 mg/kg para a primeira injeção no dia 21 após a inoculação das células tumorais (= dia 0 no gráfico) e 1,5 mg/kg para injeções subsequentes. O tratamento com Herceptina foi combinado com injeções diárias de 4 μmol/kg de iRGD ou PBS nos dias de injeções de Herceptina, e 2 μmol/kg de iRGD ou PBS nos outros dias. Em alguns grupos, a Herceptina de dose 3 vezes maior do que o regime de combo de iRGD foi usada. Após 24 dias de tratamento, os camundongos foram perfundidos através do coração e os tecidos foram colhidos. Volume tumoral foi calculado usando a seguinte fórmula: volume (mm3) = (d2 x D)/2, onde d é o menor e D é o maior diâmetro do tumor (Karmali et al, 2009).

Ensaio de penetração do tumor ex vivo (ensaio de imersão de tumor). Tumores subcutâneos da próstata humanos PPC1 (cerca de 1 cm de diâmetro) foram excisados e mantidos em DMEM contendo 109 de pfu/ml de fago T7 expressando iRGD ou peptídeos G7 (SEQ ID NO: 38) e vários inibidores. Os tumores foram primeiro incubados com os inibidores por 20 min a 4°C. Os fagos indicados foram adicionados à solução e os tumores foram ainda incubados por 90 min a 37°C ou 4°C. Após a incubação, os tumores foram lavados com DMEM frio contendo 1% de BSA, fixados, seccionados,corados de modo imunofluorescente e vistos com um microscópio confocal.

Análise estatística. Os dados foram analisados por Student’s t-test de duas caudas ou análise de variância de uma via (ANOVA) seguida do teste post-hoc adequado. Os resultados estão resumidos na tabela 5.

Ao longo deste pedido, várias publicações são referenciadas. As revelações destas publicações em suas totalidades são incorporadas por referência a este pedido, para descrever mais plenamente o estado da técnica a que pertence esta invenção.

Referências

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Deve ser notado que como usadas aqui e nas reivindicações em anexo, as formas singulares”um”, “uma” e”o” incluem referência plural a menos que o contexto dite claramente o contrário. Assim, por exemplo, referência a”um peptídeo” inclui uma pluralidade de tais peptídeos, referência ao”peptídeo” é uma referência a um ou mais peptídeos e seus equivalentes conhecidos daqueles versados na técnica e assim por diante. “Opcional” ou”opcionalmente” significa que o evento descrito na sequência, circunstância ou material pode ou não ocorrer ou estar presente e que a descrição inclui dados onde o evento, circunstância ou material ocorre ou está presente e casos onde isso não ocorre ou não está presente.

Faixas podem ser expressas aqui como de ”cerca de” um valor particular e/ou a”cerca de” outro valor particular. Quanto tal faixa é expressa, também contemplada especificamente e considerada revelada está a faixa do um valor particular e/ou a outro valor particular a menos que o contexto indique especificamente o contrário. Similarmente, quando os valores são expressos como aproximações, pelo uso do antecedente ”cerca de”, será entendido que as formas de valores particulares, especificamente modalidade contemplada que poderia ser considerada revelada a menos que o contexto indique especificamente o contrário. Será compreendido adicionalmente que pontos finais de cada uma das faixas são significantes tanto em relação ao outro ponto final quanto independentemente do outro ponto final a menos que o contexto indique especificamente o contrário. Finalmente, deve ser entendido que todos dos valores individuais e sub faixas de valores contidos dentro e faixas reveladas explicitamente também são contempladas especificamente e devem ser consideradas reveladas a menos que o contexto indique especificamente o contrário. As considerações das aplicações anteriores ou em casos particulares algumas ou todas dessas modalidades são reveladas explicitamente.

A menos que definido de outro modo, todos os temos técnicos e científicos usados aqui podem ter os mesmo significados e entendidos comumente por alguém versado na técnica ao qual pertencem o método revelado e composições. Embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos aqui podem ser usados na prática ou teste do presente método e composições, os métodos particularmente úteis, dispositivos e materiais são conforme descritos. Publicações citadas aqui e o material para o qual elas são citadas estão incorporadas por este documento por referência. Nada aqui é para ser construído como uma admissão de que a presente invenção não está intitulada para anteceder tal revelação em virtude de invenção anterior. Nenhuma admissão é feita de que qualquer referência constitui estado da técnica. A discussão dos estados das referências que seus autores afirmam, e requerentes reservam o direito de desafiar a precisão e pertinência dos documentos citados.

Será entendido claramente que, embora um número de publicações são referidas aqui, tal referência não constitui uma admissão de que esses documentos formam parte do conhecimento geral comum na técnica.

Ao longo da descrição e reivindicações deste pedido, a palavra 5 ”compreende” e variações da palavra, tais como ”compreendendo” e ”compreende” significa ”incluído, mas não limitado à” e não é destinada a excluir, por exemplo, outros aditivos, componentes, inteiros ou etapas.

É entendido que o método revelado e composições não estão limitados à metodologia particular, protocolos e reagentes descritos na medida em que esses 10 podem variar. Também é entendido que a terminologia usada aqui é apenas para o fim de descrever modalidades particulares e não se destina a limitar o escopo da presente invenção que será limitado apenas pelas reivindicações em anexo.

Aqueles versados na técnica reconhecerão ou poderão ser capazes de verificar o uso não mais do que experimentação de rotina, muitos equivalentes às 15 modalidades específicas do método e composições descritas aqui. Tais equivalentes são considerados abordados pelas reivindicações seguintes.

Claims

1. Composição compreendendo um elemento CendR e uma co- composição, caracterizada pelo fato de que o elemento CendR e a co- composição não são covalentemente acoplados ou não são covalentemente associados entre si, em que o elemento CendR está compreendido em uma sequência de aminoácidos, está na extremidade de terminação C da sequência de aminoácidos e tem um grupo carboxila de terminação C exposto, em que o elemento CendR compreende R/K/HXXR/K/H, em que a composição não inclui VEGF, em que o elemento CendR se liga à neuropilina-1, e em que a internalização do elemento CendR nas células depende da neuropilina-1.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o elemento CendR compreende RXXK/H, KXXR/H, HXXR/K/H, K/HXXR, R/HXXK, R/K/HXXH, ou R/K/HX2X3R/K/H, em que X2X3 é qualquer combinação de aminoácidos exceto RR, WK e RL.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o elemento CendR é associado com uma ou mais moléculas acessórias.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que pelo menos uma das moléculas acessórias sobrepõe-se ao elemento CendR, em que pelo menos uma das moléculas acessórias não se sobrepõe ao elemento CendR, em que pelo menos uma das moléculas acessórias compreende um peptídeo RGD, iRGD, um peptídeo Lyp-1, um peptídeo NGR, iNGR, um peptídeo RGR, um peptídeo de ligação HER2, ou uma combinação, e/ou em que uma ou mais das moléculas acessórias são independentemente uma molécula homing, uma molécula de alvejamento, um ligante de afinidade, um peptídeo de penetração celular, uma molécula de escape endossômico, uma molécula de alvejamento subcelular, uma molécula de alvejamento nuclear, ou uma combinação.

5. Composição, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizada pelo fato de que o elemento CendR endereça seletivamente para células cerebrais, tecido, ou ambos, células renais, tecido, ou ambos, células da pele e de tendão, tecido, ou ambos, células pulmonares, tecido, ou ambos, células pancreáticas, tecido, ou ambos, células intestinais, tecido, ou ambos, células glandulares adrenais, tecido, ou ambos, células de retina, tecido, ou ambos, células do fígado, tecido, ou ambos, células da próstata, tecido, ou ambos, células de endometriose, tecido, ou ambos, células ovarianas, tecido, ou ambos, células do coração, tecido, ou ambos, células tumorais, tumores, vasos sanguíneos tumorais ou uma combinação.

6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o elemento CendR é um elemento CendR ativável, em que o elemento CendR ativável é um elemento CendR ativável por protease, e/ou em que o elemento CendR ativável por protease é ativável por uma serina protease, plasmina, um ativador de plasminogênio, uroquinase, uma convertase de proproteína, uma furina, uma carboxipeptidase, carboxipeptidase A, uma carboxipeptidase específica de glutamato, uma carboxipeptidase específica de prolina, PSMA, ou uma combinação.

7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a co-composição compreende um agente terapêutico, em que a co-composição compreende um agente de detecção, em que a co-composição compreende um transportador, veiculo, ou ambos, e/ou em que a co-composição compreende uma proteína terapêutica, um composto terapêutico, uma composição terapêutica, um agente quimioterapêutico de câncer, uma toxina, um agente citotóxico, um agente anti-inflamatório, um agente antiartrítico, um fator de crescimento, uma citocina, uma quimiocina, um composto que modula uma ou mais vias de sinalização, um anticorpo, um ácido nucléico, um análogo de ácido nucléico, uma célula, um vírus, um fago, uma partícula viral, uma partícula de fago, um capsídeo viral, um capsídeo de fago, uma partícula tipo vírus, um lipossoma, uma micela, uma esfera, uma nanopartícula, uma micropartícula, um agente quimioterapêutico, um agente de contraste, um agente de imagem, um marcador, uma agente de marcação, um agente anti-angiogênico, um agente pró-angiogênico, ou uma combinação.

8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o elemento CendR está compreendido em uma sequência de aminoácido, uma proteína ou peptídeo.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a proteína ou peptídeo pode ser internalizado em uma célula, penetrar tecido, ou ambos, quando a sequência de aminoácido está presente em uma proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácido não está presente na proteína ou peptídeo.

10. Composição, de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizada pelo fato de que a sequência de aminoácido pode ser internalizada em uma célula, penetrar tecido, ou ambos, sem ser associado com a co-composição.

11. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 ou 10, caracterizada pelo fato de que a sequência de aminoácido é o único elemento de internalização funcional na proteína ou peptídeo.

12. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 11, caracterizada pelo fato de que a proteína ou peptídeo é circular, em que o elemento CendR está na extremidade de terminação C da proteína ou peptídeo.

13. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 12, caracterizada pelo fato de que a internalização, penetração, ou ambas, da co- composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando a sequência de aminoácido está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácido não está presente na proteína ou peptídeo, em que a internalização, penetração, ou ambas, da co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, é reforçada quando o elemento CendR está presente na proteína ou peptídeo, mas não quando a sequência de aminoácido não está presente na proteína ou peptídeo, e/ou em que a internalização e penetração da co-composição em ou através de uma célula e tecido é reforçada quando a célula e tecido são expostos ao elemento CendR, mas não quando a célula e tecido não são expostos ao elemento CendR.

14. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizada pelo fato de que o elemento CendR é compreendido em uma composição de CendR, em que a composição de CendR compreende uma ou mais moléculas acessórias, uma ou mais composições de carga, e/ou uma ou mais moléculas homing.

15. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que o elemento CendR é compreendido em um conjugado de CendR, em que o conjugado de CendR compreende uma ou mais moléculas 5 acessórias, uma ou mais composições de carga, e/ou uma ou mais moléculas homing.

16. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que a célula, tecido, ou ambos, são expostos a uma 10 pluralidade de moléculas acessórias, uma pluralidade de moléculas homing, uma pluralidade de composições de carga, uma pluralidade de elementos CendR, e/ou uma pluralidade de co-composições.

17. Composição para uso no reforço da internalização, penetração, ou ambas, de uma co-composição em ou através de uma célula, tecido, ou ambos, caracterizada pelo fato de que compreende um elemento CendR e uma co- composição, em que o elemento CendR e a co-composição não são covalentemente acoplados ou não covalentemente associados entre si.