KR20120048563A - Ｃ?말단 요소를 가진 펩타이드 및 단백질의 사용방법 및 그 조성물 - Google Patents

Ｃ?말단 요소를 가진 펩타이드 및 단백질의 사용방법 및 그 조성물 Download PDF

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KR20120048563A
KR20120048563A KR1020127001440A KR20127001440A KR20120048563A KR 20120048563 A KR20120048563 A KR 20120048563A KR 1020127001440 A KR1020127001440 A KR 1020127001440A KR 20127001440 A KR20127001440 A KR 20127001440A KR 20120048563 A KR20120048563 A KR 20120048563A
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어키 루오슬라히티
탐벳 테살루
카즈키 스가하라
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번햄 인스티튜트 포 메디칼 리서치
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Abstract

본 발명은 목적하는 세포를 표적화하고 분자를 그 세포에 내재화시키며 분자에 의해 목적하는 조직을 침투하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 조성물 및 방법은 선택적으로 세포에 내재화되거나, 조직 침투하거나 둘 다 가능한 펩타이드 서열을 기초로 한다. 본 발명의 내재화 및 조직 침투는 목적하는 세포 또는 조직에 치료제 및 검출제를 전달하는데 유용하다.

Description

Ｃ?말단 요소를 가진 펩타이드 및 단백질의 사용방법 및 그 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS USING PEPTIDES AND PROTEINS WITH C-TERMINAL ELEMENTS}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2009년 6월 22일자 출원된 미국 특허 가출원 제 61/219,086 호, 및 2009년 10월 6일자 출원된 미국 특허 가출원 제 61/249,140 호의 우선권의 이익을 주장한다. 2009년 6월 22일자 출원된 미국 특허 가출원 제 61/219,086 호 및 2009년 10월 6일자 출원된 미국 특허 가출원 제 61/249,140 호의 전체 내용은 본 명세서에 참고 문헌으로 포함된다.
연방 정부 지원에 관한 전문
본 발명은 미국 국립보건원(NIH)의 국립암연구소(NCI)로부터 승인번호 CA 104898, CA 119414, CA 119335, CA 124427, CA 115410 및 30199, 그리고 미국방부(DoD)로부터 승인번호 BC 076050 하에 정부 지원으로 행해진 것이다. 미국 정부는 본 발명에 대한 특정 권리를 갖는다.
본 발명은 전체적으로 분자의학(molecular medicine), 특히 세포 및 조직 침투 펩타이드에 관한 것이다.
통상적으로 세포에 내재화되는 펩타이드를 세포-침투 펩타이드라고 부른다. 이러한 펩타이드에는 두가지 주요한 부류, 즉 소수성 펩타이드와 양이온성 펩타이드가 있다(Zorko and Langel, 2005). 통상적으로 핵산, 단백질을 세포속으로 도입하기 위해 사용되는 양이온성 펩타이드에는 원형 세포-침투 펩타이드(CPP), Tat 및 페너트라틴(penetratin) 등이 있다(Derossi et al., 1998; Meade and Dowdy, 2007). 헤르페스 바이러스(herpesvirus) 단백질인 VP22는 세포로 유입 및 유출될 수 있으며 페이로드(payload)를 운반할 수 있다(Eliott and O'Hare, 1997; Brewis et al., 2003). 세포전달 운반체로서 이러한 펩타이드의 중요한 한계점은 이러한 펩타이드가 선택적이지 않다는 것이다. 즉, 이러한 펩타이드는 모든 세포에 유입된다. 하나의 세포 유형 또는 조직에 보다 특이적인 활성화가능한 전달 시스템이 사용될 수 있다.
조직 침투 문제는 조성물이 세포로 전달되는데 있어서 심각한 한계점이 된다. 플루오레세인(fuorescein)-표지된 펩타이드의 분포와, 같은 펩타이드로 코팅된 산화철 입자의 분포를 비교해 보면, 입자는 종양 혈관에 가깝게 잔류하는 반면, 플루오레세인 펩타이드는 종양의 모든 면적에 도달한다는 것을 알 수 있다. 종종 인용되는 종양 혈관의 "누수(leakiness)"는 사실상 상기 문제점을 완화시키는 것으로 보이지 않는다. 더군다나, 종양 혈관계(tumor vasculature)의 "정상화 (normalization)"(Jain, 2005)를 유발하는 항혈관신생(anti-angiogenic) 치료는 혈관 누수가 없는 표적 종양에 대한 필요성을 갖게 한다. 따라서, 다양한 조성물이 혈관외부 공간(extravascular space)으로 통과하는 것을 개선시키기 위한 새로운 방법을 찾는 것이 중요하다. 다수의 단백질이 뇌혈관 장벽을 포함한 혈관의 내피세포를 통해 이동시키는 것으로 알려져 있다. 대표적인 예는 트랜스페린으로서, 이것은 트랜스페린 수용체에 의해 뇌혈관장벽을 넘어서 운반한다. 이 시스템은 다른 페이로드를 뇌로 운반하는데 사용되고 있다(Li et al., 2002; Fenart and Cecchelli, 2003). 순환계로부터 조직으로의 조성물 이동을 매개할 수 있는 내피세포를 통한 트랜스사이토시스(endothelial transcytosis)를 위한 펩타이드 신호가 유용하다.
따라서, 다양한 유형의 세포를 선택적으로 표적화하고, 단백질 및 펩타이드를 이러한 세포에 내재화시키며 단백질 및 펩타이드에 의한 조직 침투를 위한 새로운 치료 방법에 대한 필요성이 대두되고 있다. 또한, 화합물 및 조성물의 세포 및 조직으로의 전달을 향상시킬 필요성이 있다.
본 발명은 다양한 유형의 세포를 선택적으로 표적화할 수 있고 선택적으로 내재화될 수 있으며 및/또는 조직을 침투할 수 있는 펩타이드를 제공함으로써 상기 필요성을 만족시킨다. 또한 관련 이점도 제공한다.
본 발명의 간단한 설명
본 발명은 공조성물(co-composition)의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 요소 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직에의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포, 조직 또는 세포/조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 공조성물의 세포내의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 요소 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포를 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 요소 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 CendR 요소 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소 및 악세사리 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하고 상기 아미노산 서열은 CendR 요소 및 악세사리 펩타이드를 함유하며, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 요소, 악세사리 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 요소와 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이 조성물에서, 악세사리 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다.
유용한 악세사리 분자의 예로는 귀소 분자(homing molecules), 표적화 분자, 친화성 리간드(affinity ligand), 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출(endosomal escape) 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 등이 있다. 서로 다른 악세사리 분자들은 서로 같은 기능 또는 다른 기능을 가질 수도 있다. 같은 기능, 다른 기능 또는 같은/다른 기능을 가진 악세사리 분자는 CendR 요소, CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트(conjugate), CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, 및/또는 CendR 펩타이드와 결합될 수 있다.
또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소 및 귀소 펩타이드를 함유하며, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하며, 상기 아미노산 서열은 CendR 요소 및 귀소 펩타이드를 함유하며, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 요소, 귀소 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 요소와 귀소 분자는 서로 공유결합되어 있거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이 조성물에서, 귀소 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다.
또한, 본 발명은 카고 조성물(cargo composition)의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 CendR 요소 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소와 악세사리 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하고, 상기 아미노산 서열은 CendR 요소 및 악세사리 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 요소, 악세사리 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 요소와 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이 조성물에서, 악세사리 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다.
또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소 및 귀소 펩타이드를 함유하며, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하며, 상기 아미노산 서열은 CendR 요소 및 귀소 펩타이드를 함유하며, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 요소, 귀소 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 요소와 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이 조성물에서, 귀소 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다.
일부 형태에서, CendR 요소는 타입 1 CendR 요소이다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 2 CendR 요소이다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 1 CendR 요소가 아니다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 2 CendR 요소가 아니다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 1 CendR 요소이고 타입 2 CendR 요소는 아니다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 2 CendR 요소이고 타입 1 CendR 요소는 아니다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 1 CendR 요소 또는 타입 2 CendR 요소이다.
CendR 요소는 세포, 조직 또는 세포/조직의 투과성을 높일 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 대상자 내에 존재할 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 요소 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 요소 및 공조성물에 노출될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 CendR 요소과 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 아니면 CendR 요소 및 공조성물은 별개의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 별개의 경로를 통해 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에서, CendR 요소와 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 요소 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출될 수 있다. CendR 요소 및 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 카고 조성물은 CendR 요소과 카고 조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다.
다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물은 함께 사용될 수 있다. 이와 마찬가지로, 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물도 함께 사용될 수 있다. 다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물이 함께 사용되는 경우, 단일 타입의 공조성물, 단일 타입의 카고 조성물, 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물과 함께 사용될 수 있다. 마찬가지로, 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물이 함께 사용되는 경우, 단일 타입의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트 또는 CendR 조성물과 함께, 혹은 다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물과 함께 사용될 수 있다.
예를 들어, iRGD(단일 펩타이드 내에 CendR 요소와 RGD 요소가 혼합되어 있음)는 하나 또는 다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물; 하나 또는 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물; 또는 이들 중 어떠한 배합물과도 함께 사용될 수 있다. 이러한 배합물에 있어서, iRGD 자체는 하나 이상의 카고 조성물, 하나 이상의 악세사리 분자, 하나 이상의 귀소 분자 등을 함유하는 동일한 콘쥬게이트 또는 조성물 형태로 배합될 수 있다.
세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 성분 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 서로 다른 CendR 성분의 배합물 및 서로 다른 공조성물의 배합물에 노출될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분과 하나 이상의 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 공조성물은 CendR 성분(들) 및 공조성물(들)을 함유하는 하나 이상의 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 하나 이상의 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 공조성물은 하나 이상의 별도의 경로로 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소 및 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다.
세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 성분 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 서로 다른 CendR 성분의 배합물 및 서로 다른 카고 조성물의 배합물에 노출될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분과 하나 이상의 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 카고 조성물은 CendR 성분(들) 및 카고 조성물(들)을 함유하는 하나 이상의 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 카고 조성물은 하나 또는 그 이상의 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 카고 조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 카고 조성물은 하나 또는 그 이상의 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 카고 조성물은 하나 이상의 별도의 경로로 대상자에 투여될 수 있다.
세포, 조직 또는 세포/조직은 iRGD 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 iRGD 및 공조성물에 노출될 수 있다. iRGD와 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 iRGD 및 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 하나 이상의 별도의 경로로 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소 및 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 iRGD 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 iRGD 및 카고 조성물에 노출될 수 있다. iRGD와 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 카고 조성물은 iRGD 및 카고 조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다.
CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드 중의 아미노산 서열 내에 함유될 수 있다. 일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 단백질 또는 펩타이드 내의 유일한 기능성 내재화 요소이다.
일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 아미노산 서열이 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 아미노산 서열이 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 환형일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 직선형일 수 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재할 수 있다. 공조성물 및/또는 카고 조성물은 치료제를 함유할 수 있다. 공조성물 및/또는 카고 조성물은 검출제(detection agent)를 함유할 수 있다. 공조성물 및/또는 카고 조성물은 담체, 운반체, 또는 둘 다를 함유할 수 있다. 공조성물 및/또는 카고 조성물은 치료성 단백질, 치료성 화합물, 치료성 조성물, 항혈관형성제, 혈관형성제, 암 화학치료제, 톡신, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 성장인자, 사이토킨, 케모카인, 하나 이상의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물, 항체, 핵산, 핵산 유사체, 세포, 바이러스, 파지(phage), 바이러스 입자, 파지 입자, 바이러스 캡시드, 파지 캡시드, 바이러스 유사입자, 리포솜, 미셀(micelle), 비드, 나노입자, 마이크로입자, 화학치료제, 조영제(contrast agent), 영상제(imaging agent), 표지(label), 표지화제 또는 그 배합물 등을 함유할 수 있다.
CendR 요소는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 CendR 요소, 또는 CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드와 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 악세사리 분자는 CendR 요소와 별개일 수도 있고 중복될 수도 있다. 예를 들어, 일부 악세사리 분자는 아미노산 서열이다. 이러한 경우, CendR 요소로 구성되어 있는 아미노산 서열이 악세사리 아미노산 서열로 구성되어 있는 아미노산 서열과 중복될 수 있다. 예를 들어, iRGD, LyP-1, iNGR 및 RGR 펩타이드 각각은 펩타이드 내에서 서로 중복되는 악세사리 서열과 CendR 서열을 함유한다. 이와는 다르게, 악세사리 펩타이드는 CendR 요소와 중복되지 않는 별도의 독립체일 수 있다. 예를 들어, CendR 요소가 아닌 HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드 또는 RGD 펩타이드는 CendR 요소와 중복되지 않는 아미노산 서열을 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 악세사리 분자는 예를 들어, CendR 요소에 대한 수용체와는 다른 특이적 수용체에 결합하는 CendR 펩타이드의 서열을 함유할 수 있다.
아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 서열은 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CenR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 예를 들어,아미노산 서열은 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CendR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다.
일부 형태에 있어서, 공조성물은 악세사리 분자를 함유하지 않는다. 공조성물은 하나 이상의 악세사리 분자를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 악세사리 펩타이드를 함유하지 않는다. 공조성물은 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하지 않는다. 공조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물은 악세사리 분자를 함유하지 않는다. 카고 조성물은 하나 이상의 악세사리 분자를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물은 악세사리 펩타이드를 함유하지 않는다. 카고 조성물은 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유할 수 있다. 카고 조성물은 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하지 않는다. 카고 조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다.
CendR 요소는 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드의 일부일 수 있다. 또 다른 예로서, 귀소 분자는 CendR 요소, 혹은 CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드와 공유결합될 수도 있고 비공유 결합될 수도 있다. 귀소 분자는 CendR 요소와 별개일 수 있고 CendR 요소와 중복될 수도 있다. 예를 들어, 일부 귀소 분자는 아미노산 서열이다. 이러한 경우, CendR 요소로 구성되어 있는 아미노산 서열이 귀소 아미노산 서열로 구성되어 있는 아미노산 서열과 중복될 수 있다. 예를 들어, iRGD, LyP-1, iNGR 및 RGR 펩타이드 각각은 펩타이드 내에서 서로 중복되는 귀소 서열과 CendR 서열을 함유한다. 이와는 다르게, 귀소 펩타이드는 CendR 요소와 중복되지 않는 별도의 독립체일 수 있다. 예를 들어, CendR 요소가 아닌 HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드 또는 RGD 펩타이드는 CendR 요소와 중복되지 않는 아미노산 서열을 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 귀소 분자는 예를 들어, CendR 요소에 대한 수용체와는 다른 특이적 수용체에 결합하는 CendR 펩타이드 내의 서열을 함유할 수 있다.
많은 귀소 분자 및 귀소 펩타이드는 표적 조직의 혈관계에 귀소한다. 그러나, 편의상 본 명세서에서 일부의 경우, 귀소는 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드가 실제로 귀소하는 혈관계과 관련된 조직으로의 귀소를 의미한다. 따라서, 예를 들어, 종양 혈관계에 귀소하는 귀소 펩타이드는 종양 조직이나 종양 세포에 귀소하는 귀소 펩타이드를 의미할 수 있다. 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드를 예를 들어, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물, 또는 CendR 요소에 함유시키거나 결합시킴으로써, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물, 또는 CendR 요소가 표적화될 수도 있고, 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드의 표적에 귀소할 수도 있다. 이러한 방식으로, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물, 또는 CendR 요소는 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드의 표적에 귀소할 수 있다. 편의상, 별도의 설명이 없는 한, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물, 또는 CendR 요소의 귀소는 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물, 또는 CendR 요소 등이 적합한 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드와 결합하거나 함유하는 것을 의미한다.
단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 하나 이상의 특정 유형의 종양의 혈관계에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 종양 또는 암에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 종양 또는 암의 혈관계에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 하나 이상의 다른 단계의 하나 이상의 특정 유형의 종양의 혈관계에 귀소할 수 있다.
단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 폐 조직에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 폐 혈관계에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 심장 조직에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 심장 혈관계에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 뇌세포, 뇌 줄기세포, 뇌조직 및/또는 뇌혈관계, 신장세포, 신장 줄기세포, 신장조직 및/또는 신장혈관계, 피부세포, 피부 줄기세포, 피부조직 및/또는 피부혈관계, 폐세포, 폐조직 및/또는 폐혈관계, 췌장세포, 췌장조직 및/또는 췌장혈관계, 장세포, 장조직 및/또는 장혈관계, 부신세포, 부신조직 및/또는 부신혈관계, 망막세포, 망막조직 및/또는 망막혈관계, 간세포, 간조직 및/또는 간혈관계, 전립선 세포, 전립선 조직 및/또는 전립선 혈관계, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 및/또는 자궁내막증 혈관계, 난소세포, 난소조직 및/또는 난소혈관계, 종양세포, 종양, 종양혈관, 및/또는 종양 혈관계, 골세포, 골조직, 및/또는 골 혈관계, 골수세포, 골수조직, 및/또는 골수 혈관계, 연골세포, 연골조직, 및/또는 연골 혈관계, 줄기세포, 배아 줄기세포, 만능 줄기세포, 유도 만능 줄기세포, 성체 줄기세포, 조혈 줄기세포, 신경 줄기세포, 간엽성 줄기세포, 유방 줄기세포, 내피 줄기세포, 후각 성체 줄기세포, 신경능선 줄기세포(neural crest stem cell), 암 줄기세포, 혈액 세포, 적혈구, 혈소판, 백혈구, 과립구, 호중구, 에오신 호성 백혈구, 호염기성 세포, 림프구성 세포, 림프구, 단핵세포, 손상 혈관계, 손상 조직의 혈관계, 염증있는 조직의 혈관계, 아테롬성 동맥경화 플라크(atherosclerotic plaque) 또는 그 배합체에 귀소할 수 있다.
아미노산 서열은 세포에의 내재화를 위해 선택될 수 있다. 아미노산 서열은 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 아미노산 서열은 세포에의 내재화 및 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 아미노산 서열은 하나 이상의 귀소 펩타이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 서열은 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CendR 요소가 아닌 RGD 펩타이드, 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 아미노산 서열은 CREKA 펩타이드를 함유할 수 있다.
단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 귀소 펩타이드를 함유할 수 있다. 예를 들어, 단백질 또는 펩타이드는 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CendR 요소가 아닌 RGD 펩타이드, 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 iRGD를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 LyP-1 펩타이드를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 iNGR을 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 RGR 펩타이드를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 CREKA를 함유할 수 있다.
일부 형태에 있어서, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 기능성 내재화 요소를 함유하지 않는다. 공조성물은 기능성 내재화 요소를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 귀소 분자를 함유하지 않는다. 공조성물은 하나 이상의 귀소 분자를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 귀소 펩타이드를 함유하지 않는다. 공조성물은 하나 이상의 귀소 펩타이드를 함유할 수 있다. 공조성물은 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하지 않는다. 공조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다.
일부 형태에 있어서, CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물은 기능성 내재화 요소를 함유하지 않는다. 카고 조성물은 기능성 내재화 요소를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물은 귀소 분자를 함유하지 않는다. 카고 조성물은 하나 이상의 귀소 분자를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물은 귀소 펩타이드를 함유하지 않는다. 카고 조성물은 하나 이상의 귀소 펩타이드를 함유할 수 있다. 카고 조성물은 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하지 않는다. 카고 조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다.
아미노산 서열은 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 하나 이상의 특정 유형의 종양의 혈관계에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 종양 또는 암에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 종양 또는 암의 혈관계에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 하나 이상의 다른 단계의 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다.
아미노산 서열은 선택적으로 폐 조직에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 폐 혈관계에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 심장 조직에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 심장 혈관계에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 뇌세포, 뇌 줄기세포, 뇌조직 및/또는 뇌혈관계, 신장세포, 신장 줄기세포, 신장조직 및/또는 신장혈관계, 피부세포, 피부 줄기세포, 피부조직 및/또는 피부혈관계, 폐세포, 폐조직 및/또는 폐혈관계, 췌장세포, 췌장조직 및/또는 췌장혈관계, 장세포, 장조직 및/또는 장혈관계, 부신세포, 부신조직 및/또는 부신혈관계, 망막세포, 망막조직 및/또는 망막혈관계, 간세포, 간조직 및/또는 간혈관계, 전립선 세포, 전립선 조직 및/또는 전립선 혈관계, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 및/또는 자궁내막증 혈관계, 난소세포, 난소조직 및/또는 난소혈관계, 종양세포, 종양, 종양혈관, 및/또는 종양 혈관계, 골세포, 골조직, 및/또는 골 혈관계, 골수세포, 골수조직, 및/또는 골수 혈관계, 연골세포, 연골조직, 및/또는 연골 혈관계, 줄기세포, 배아 줄기세포, 만능 줄기세포, 유도 만능 줄기세포, 성체 줄기세포, 조혈 줄기세포, 신경 줄기세포, 간엽성 줄기세포, 유방 줄기세포, 내피 줄기세포, 후각 성체 줄기세포, 신경능선 줄기세포, 암 줄기세포, 혈액 세포, 적혈구, 혈소판, 백혈구, 과립구, 호중구, 에오신 호성 백혈구, 호염기성 세포, 림프구성 세포, 림프구, 단핵세포, 손상 혈관계, 손상 조직의 혈관계, 염증있는 조직의 혈관계, 아테롬성 동맥경화 플라크 또는 그 배합체에 귀소할 수 있다.
CendR 요소는 귀소 분자와 결합 또는 연결될 때 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. 이러한 CendR 요소는 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다. 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다. 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 하나 이상의 특정 유형의 종양의 혈관계에 귀소할 수 있다. 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 종양 또는 암에 귀소할 수 있다. 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 종양 또는 암의 혈관계에 귀소할 수 있다. 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다. 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 하나 이상의 다른 단계의 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다.
귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 폐 조직에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 폐 혈관계에 귀소할 수 있다. 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 심장 조직에 귀소할 수 있다. 아미노산 서열은 선택적으로 심장 혈관계에 귀소할 수 있다. 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소는 선택적으로 뇌세포, 뇌 줄기세포, 뇌조직 및/또는 뇌혈관계, 신장세포, 신장 줄기세포, 신장조직 및/또는 신장혈관계, 피부세포, 피부 줄기세포, 피부조직 및/또는 피부혈관계, 폐세포, 폐조직 및/또는 폐혈관계, 췌장세포, 췌장조직 및/또는 췌장혈관계, 장세포, 장조직 및/또는 장혈관계, 부신세포, 부신조직 및/또는 부신혈관계, 망막세포, 망막조직 및/또는 망막혈관계, 간세포, 간조직 및/또는 간혈관계, 전립선 세포, 전립선 조직 및/또는 전립선 혈관계, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 및/또는 자궁내막증 혈관계, 난소세포, 난소조직 및/또는 난소혈관계, 종양세포, 종양, 종양혈관, 및/또는 종양 혈관계, 골세포, 골조직, 및/또는 골 혈관계, 골수세포, 골수조직, 및/또는 골수 혈관계, 연골세포, 연골조직, 및/또는 연골 혈관계, 줄기세포, 배아 줄기세포, 만능 줄기세포, 유도 만능 줄기세포, 성체 줄기세포, 조혈 줄기세포, 신경 줄기세포, 간엽성 줄기세포, 유방 줄기세포, 내피 줄기세포, 후각 성체 줄기세포, 신경능선 줄기세포, 암 줄기세포, 혈액 세포, 적혈구, 혈소판, 백혈구, 과립구, 호중구, 에오신 호성 백혈구, 호염기성 세포, 림프구성 세포, 림프구, 단핵세포, 손상 혈관계, 손상 조직의 혈관계, 염증있는 조직의 혈관계, 아테롬성 동맥경화 플라크 또는 그 배합체에 귀소할 수 있다.
CendR 요소는 CendR 조성물, 콘쥬게이트, 분자, 단백질, 펩타이드 등 내의 유일한 기능성 내재화 요소일 수도 있고, CendR 요소는 CendR 조성물, 콘쥬게이트, 분자, 단백질, 펩타이드 등 내의 유일한 기능성 조직 침투 요소일 수도 있으며, 두 가지 다 일수도 있다. 선택된 아미노산 서열은 CendR 조성물, 콘쥬게이트, 분자, 단백질, 펩타이드 등 내의 유일한 기능성 내재화 요소일 수도 있고, CendR 요소는 CendR 조성물, 콘쥬게이트, 분자, 단백질, 펩타이드 등 내의 유일한 기능성 조직 침투 요소일 수도 있으며, 두 가지 다 일수도 있다.
CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. CendR 요소는 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 원형(환형)일 수도 있고 루프를 함유할 수도 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재할 수 있다. CendR 요소는 말단 카르복실기를 함유할 수 있다. 차단기(blocking group)는 말단 카르복실기와 결합될 수 있다. 차단기와 말단 카르복실기의 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제(cleaving agent), 및/또는 절단 조건에 의해 절단되도록 선택될 수 있다. 차단기는 CendR 요소의 C-말단 아미노산에 결합될 수 있다. 차단기는 CendR 요소의 C-말단 아미노산이 아닌 다른 CendR 요소의 아미노산에 결합될 수 있다.
또한, 본 발명은 목적하는 세포 가까이서 활성화될 수 있는 활성화가능한 CendR 요소의 제조 방법으로서, 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키는 단계를 포함하며, 이 때 차단기는 절단가능한 결합에 의해 CendR 요소와 결합되어 있고, 상기 절단가능한 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의해 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 방법에 관한 것이다. 세포는 대상자 내에 존재할 수 있다. 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건은 확인될 수 있다. 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에 확인될 수 있다. 절단가능한 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소를 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 CendR 요소가 목적하는 세포에 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나, 축적되는 부위에 존재하는 절단제를 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 CendR 요소가 목적하는 세포 등에 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나, 축적되는 부위에 존재하는 절단 조건을 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에 선택될 수 있다. CendR 요소는 말단 카르복실기를 함유할 수 있는데, 이 때 차단기는 말단 카르복실기에 결합되어 있다. 또한, 본 발명은 활성화가능한 CendR 요소의 제조 방법으로서, 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키는 단계를 포함하며, 이 때 차단기는 절단가능한 결합에 의해 CendR 요소와 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법에 관한 것이다. 절단가능한 결합은 어떠한 적합한 방법으로도 절단될 수 있다. 예를 들어, 절단가능한 결합은 효소적으로 또는 비효소적으로 절단될 수도 있다. 효소적 절단(enzymatic cleavage)의 경우, CendR 요소가 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나, 축적되는 부위에 절단 효소가 존재하게 하거나 공급될 수 있다. 예를 들어, 효소는 CendR 요소가 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나, 축적되는 부위에 세포 가까이 존재할 수 있다. 비효소적 절단의 경우, CendR 요소를 절단제와 접촉시키도록 하거나 절단 조건에 놓이게 하거나, 또는 둘 다 가능하다. 절단제는 절단가능한 결합의 절단을 매개하거나 자극할 수 있는 어떠한 물질이어도 된다. 절단 조건은 절단가능한 결합의 절단을 매개하거나 자극할 수 있는 용액일 수도 있고 환경 상태일 수도 있다.
또한, 본 발명은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키는 방법으로서, 차단기가 CendR 요소와 공유결합되도록 유발하는 단계를 포함하며 이 때 차단기와 CendR 요소의 결합은 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키는 방법으로서, 차단기가 아미노산 서열과 공유결합되도록 유발하는 단계를 포함하며, 이 때 아미노산 서열은 CendR 요소를 함유하고 차단기와 CendR 요소의 결합은 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키는 방법으로서, (a) 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위한 아미노산 서열을 선택하는 단계로서 이 때 아미노산 서열은 CendR 요소를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계; 및 (b) 차단기가 상기 CendR 요소와 공유결합되도록 유발하는 단계로서 이 때 차단기와 CendR 요소의 결합은 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. CendR 요소와 공유결합된 차단기는 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 감소 또는 방해한다. CendR 요소와 공유결합된 차단기는 차단기가 결합되지 않은 동일한 CendR 요소에 비해 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 감소 또는 방해할 수 있다. 활성화 가능한 CendR 요소는 선택된 아미노산 서열 및 차단기를 함유할 수 있다. 세포는 대상자 내에 존재할 수 있다. 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건은 확인될 수 있다. 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에 확인될 수 있다. 절단가능한 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소를 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 CendR 요소가 목적하는 세포처럼 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나, 축적되는 부위에 존재하는 절단제를 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 CendR 요소가 목적하는 세포에 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나 축적되는 부위에 존재하는 절단 조건을 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에 선택될 수 있다. CendR 요소는 말단 카르복실기를 함유할 수 있는데, 이 때 차단기는 말단 카르복실기에 결합되어 있다.
본 발명은 귀소 CendR 조성물을 형성시키는 방법으로서, 세포에의 내재화를 위한 아미노산 서열을 선택하는 단계로서 이 때 아미노산 서열은 C-말단 요소를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계; 및 귀소 분자가 상기 선택된 아미노산 서열과 공유결합되거나 비공유결합 되도록 유발하는 단계로서 이 때 CendR 조성물은 선택된 아미노산 서열 및 결합 또는 연결되는 귀소 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 귀소 CendR 조성물을 제조하는 방법으로서, (a) 세포에의 내재화를 위한 아미노산 서열을 선택하는 단계로서 이 때 아미노산 서열은 C-말단 요소를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계; 및 (b) 귀소 분자가 상기 선택된 아미노산 서열과 공유결합되거나 비공유결합 되도록 유발하는 단계로서 이 때 CendR 조성물은 선택된 아미노산 서열 및 결합 또는 연결되는 귀소 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 공조성물을 세포로 전달하는 방법으로서, 세포를 CendR 조성물 및 공조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 CendR 조성물은 조직 내의 세포로 유입될 수 있으며, 그럼으로써 공조성물이 세포 내로 전달될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 공조성물의 조직 침투를 유발하는 방법으로서, 조직을 CendR 조성물 및 공조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 CendR 조성물은 조직 내의 세포로 유입 및 유출할 수 있으며, 그럼으로써 공조성물이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 공조성물을 세포로 전달하는 방법으로서, 세포를 공조성물 및 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 절단제가 CendR 조성물의 활성화가능한 CendR 요소를 활성화시키고 나서, CendR 조성물이 조직 내의 세포로 유입될 수 있으며, 그럼으로써 공조성물이 세포 내로 전달될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 공조성물의 조직 침투를 유발하는 방법으로서, 조직을 공조성물 및 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 절단제가 CendR 조성물의 활성화가능한 CendR 요소를 활성화시키고 나서, CendR 조성물이 조직 내의 세포로 유입 및 통과될 수 있으며, 그럼으로써 공조성물이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 카고 조성물을 세포로 전달하는 방법으로서, 세포를 CendR 조성물 및 카고 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 CendR 조성물은 조직 내의 세포로 유입될 수 있으며, 그럼으로써 카고 조성물이 세포 내로 전달될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 조직 침투를 유발하는 방법으로서, 조직을 CendR 조성물 및 카고 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 CendR 조성물은 조직 내의 세포로 유입 및 유출될 수 있으며, 그럼으로써 카고 조성물이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 카고 조성물을 세포로 전달하는 방법으로서, 세포를 카고 조성물 및 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 절단제가 CendR 조성물의 활성화가능한 CendR 요소를 활성화시키고 나서, CendR 조성물이 조직 내의 세포로 유입될 수 있으며, 그럼으로써 카고 조성물이 세포 내로 전달될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 조직 침투를 유발하는 방법으로서, 조직을 카고 조성물 및 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 절단제가 CendR 조성물의 활성화가능한 CendR 요소를 활성화시키고 나서, CendR 조성물이 조직 내의 세포로 유입 및 통과될 수 있으며, 그럼으로써 카고 조성물이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 카고 조성물을 세포로 전달하는 방법으로서, 세포를 CendR 조성물 및 카고 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 CendR 조성물은 카고 조성물을 함유하며, CendR 조성물이 조직 내의 세포로 유입될 수 있고, 그럼으로써 카고 조성물이 세포 내로 전달될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 조직 침투를 유발하는 방법으로서, 조직을 CendR 조성물 및 카고 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 CendR 조성물은 카고 조성물을 함유하며, CendR 조성물이 조직 내의 세포로 유입 및 유출될 수 있고, 그럼으로써 카고 조성물이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 카고 조성물을 세포로 전달하는 방법으로서, 세포를 카고 조성물 및 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 절단제가 CendR 조성물의 활성화가능한 CendR 요소를 활성화시키고 나서, CendR 조성물이 조직 내의 세포로 유입될 수 있고, 그럼으로써 카고 조성물이 세포 내로 전달될 수 있으며, CendR 조성물은 카고 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 조직 침투를 유발하는 방법으로서, 조직을 카고 조성물 및 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 조성물에 노출시키는 단계로서 이 때 절단제가 CendR 조성물의 활성화가능한 CendR 요소를 활성화시키고 나서, CendR 조성물이 조직 내의 세포로 유입 및 통과될 수 있고, 그럼으로써 카고 조성물이 조직을 침투할 수 있으며, CendR 조성물은 카고 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
CendR 요소를 내재화시킬 수 있는 세포는 (a) 세포를 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 내재화되었는지를 결정하는 단계에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 세포는 분석물 내에 존재할 수 있다. CendR 요소는 귀소 분자와 결합됨으로써 CendR 조성물을 형성할 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소를 내재화시킬 수 있는 세포는 (a) 세포를 활성화가능한 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) 활성화가능한 CendR 요소가 내재화되었는지를 결정하는 단계에 의해 확인될 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 세포에 노출되기 전에 비-차단될 수 있으나, 필수적인 것은 아니다. 예를 들어, 이는 차단제의 차단 능력을 테스트하는데 사용될 수 있다. 또한, 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제-활성화된 CendR 요소일 수도 있다.
암세포 또는 암세포를 갖고 있는 대상자는 (a) 암세포를 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 암세포에 의해 내재화되었는지를 결정하는 단계로서 내재화된 CendR 요소가 암세포 또는 대상자를 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 것을 특징으로 하는 단계에 의해 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 세포는 분석물 내에 존재할 수도 있고, 대상자 내에 존재할 수도 있다. CendR 요소는 귀소 분자와 결합됨으로써 CendR 조성물을 형성할 수 있다.
종양 또는 종양을 갖고 있는 대상자는 (a) 종양 조직을 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 조직을 통과했는지 또는 조직 내의 세포에 의해 내재화되었는지를 결정하는 단계로서 조직 통과된 또는 내재화된 CendR 요소가 종양 또는 대상자를 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 것을 특징으로 하는 단계에 의해 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인될 수 있다.
목적하는 세포 가까이서 활성화될 수 있는 활성화가능한 CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키는 단계로서 이 때 차단기는 절단가능한 결합에 의해 CendR 요소와 결합되어 있고, 상기 절단가능한 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소에 의해 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 이 방법은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에, 효소에 의거해서 절단가능한 결합을 선택하는 단계 및/또는 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건을 확인하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 이 방법은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에, 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의거해서 절단가능한 결합을 선택하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.
활성화가능한 CendR 요소는 (a) 세포에의 내재화를 위한 아미노산 서열을 선택하는 단계로서 이 때 아미노산 서열은 C-말단 요소를 함유하며, C-말단 요소는 말단 카르복실기를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계; 및 (b) 차단기가 상기 선택된 아미노산 서열의 말단 카르복실기와 공유결합되도록 유발하는 단계로서 이 때 차단기와 말단 카르복실기의 결합은 절단가능하며, 활성화가능한 CendR 요소는 선택된 아미노산 서열 및 차단기를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계에 의해 형성될 수 있다. 이는 (b) 단계 이전에, 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의해 절단될 수 있는 차단기와 말단 카르복실기의 결합을 선택하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
활성화가능한 CendR 요소는 (a) 세포에의 내재화를 위한 아미노산 서열을 선택하는 단계로서 이 때 아미노산 서열은 C-말단 요소를 함유하며, C-말단 요소는 말단 카르복실기를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계; 및 (b) 차단기가 상기 선택된 아미노산 서열의 말단 카르복실기와 공유결합되도록 유발하는 단계로서 이 때 차단기와 말단 카르복실기의 결합은 절단가능하며, 활성화가능한 CendR 요소는 선택된 아미노산 서열 및 차단기를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 이 방법은 (b) 단계 이전에, 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의해 절단될 수 있는 차단기와 말단 카르복실기의 결합을 선택하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상술한 본 발명의 방법 및 조성물의 추가적인 이점은 일부는 하기의 상세한 설명에서 기술될 것이고, 일부는 상세한 설명으로부터 이해될 것이며, 상술한 본 발명을 실시함으로써 알게 될 것이다. 상술한 본 발명의 방법 및 조성물의 이점은 첨부되는 특허청구의 범위에서 특정하게 명시되는 요소 및 배합물에 의해 실현 및 달성될 것이다. 상술한 일반적 기술 및 하기의 상세한 설명은 단지 예시적인 것으로 의도된 것이며, 본 발명을 제한하기 위한 것은 아니라는 것을 이해해야 할 것이다.
본 명세서에 포함되는 첨부도면은 본 발명의 방법 및 조성물의 몇몇 예를 설명하는 것으로, 본 발명의 조성물 및 방법의 원리를 설명하기 위한 것이다.
도 1은 조직 표적화/조직 침투 CendR 시스템을 도시한 개략도이다.
도 2는 펩타이드 RPARPAR(SEQ ID NO:2)의 주입 후 여러 가지 조직의 파지 역가의 그래프를 보여준다. 계통적 올리고머 RPARPAR는 혈관 누수를 증가시킴으로써 비표적 추적자 파지를 순환시킨다. 마우스에 뉴트라비딘 스캐폴드(scaffold)를 이용하여 올리고머화된 8μM RPARPAR(또는 대조용) 및 1010 pfu의 대조용 파지를 함유하는 150㎕ PBS를 정맥내 주사하였다. 30분간 순환시킨 후, 마우스를 관류시키고, 조직 내에 잔류하는 파지의 수를 결정하였다. y축 값은 RPARPAR/대조용 비를 나타낸다. Student's t-test에 의해 통계학적 분석을 수행하였다(n=4). 오류 바는 s.e.m을 나타내며, 별표(*) 2개는 p<0.01, 별표 3개는 p<0.001이고, 스케일 바는 20㎛(B, C) 및 50㎛(F)이다.
도 3은 iRGD의 다단계의 결합 및 침투 메카니즘의 예를 보여주는 다이어그램이다. 서열은 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:37이다.
도 4A - 4C는 iRGD 펩타이드의 생체 내에서의 종양 귀소를 보여준다. (a), 플루오레세인-표지(FAM) iRGD 또는 대조용 펩타이드(PBS 중 200㎍)를 새 췌관 선암종(pancreatic ductal adenocarcinoma; PDAC)이 있는 LSL-Kras, p53-fl/+, p48-Cre 마우스에 정맥내 주사하였다. 2시간 동안 펩타이드가 순환되게 한 다음, 기관을 수집하고 UV광 하에 검사하였다. 화살표 머리는 종양을 가리킨다. 점선은 기관이 어디에 위치하는 지를 보여준다. (b), 기재되어 있는 펩타이드, 파지 및 미셀이 주입된 마우스의 동소이식(orthotopic) 22Rv-1 인간 전립선암 이종이식편(xenograft)의 공초점 이미지이다. iRGD를 유사한 인테그린-결합 펩타이드이나 비침투성인 펩타이드 CRDGC(SEQ ID NO:36)와 비교한다. 순환 시간은 프리 펩타이드의 경우 2시간, 펩타이드-디스플레잉 파지의 경우 15분, 펩타이드-결합 미셀의 경우 3시간이었다. 화살표는 혈관벽 내부 또는 바로 외부의 FAM-CRGDC 펩타이드 또는 CRGDC 파지를 가리키는데, 이는 종양 혈관계로의 귀소를 보여주는 것이다. 3가지 종양 각각의 여러 절편으로부터 대표적인 필드가 도시되어 있다. 스케일 바=50㎛ (c), iRGD 및 CRGDC 펩타이드의 종양 귀소 면적의 정량화를 보여준다. FAM-iRGD 또는 FAM-CRGDC 펩타이드가 주입된 마우스의 동소이식 22Rv-1 종양의 냉동절편(cryo-section)을 항-FITC 항체를 이용하여 면역조직화학법으로(immunohistochemically) 염색하였다. 스캔스코프(Scanscope) CM-1 스캐너를 사용하여 샘플을 영상 분석하였다. 통계학적 분석은 Student's t-test에 의해 수행하였다(n=3). 오류 바는 s.e.m을 나타내며, 별표 3개는 p<0.001이다.
도 5A 및 도 5B는 iRGD-주입된 마우스의 혈관외 종양 조직내로 Evans Blue(알부민)의 종양 특이적 유입을 보여준다. iRGD는 SEQ ID NO:3이다. iRGDD는 SEQ ID NO:4이다. 동소이식적으로 이식된 췌장암 또는 유방암 이종이식편을 가진 마우스에 1㎍의 Evans Blue를 주입하고, 5분 후에 PBS 중 100㎍의 iRGD 펩타이드, PBS, 또는 대조용 펩타이드를 주입하였다. 30분 후에 종양 및 조직을 수집하고, 염료 함량을 조사하였다. 도 5A는 iRGD-주입된 마우스의 종양이 대조용 종양보다 더 청색이 많다는 것을 보여준다. 도 5B는 동일한 마우스에 대해 췌장 종양을 가진 마우스와 비종양 조직을 가진 마우스의 정량화 결과를 보여준다. iRGD-처리된 종양의 경우 대조용 종양에 비해 약 4배 이상 염료가 축적되었다. 대조용 펩타이드는 CendR이 없는 RGD 펩타이드를 함유하였다.
도 6A 및 도 6B는 생체 외부에서의 종양 침투를 보여준다. 도 6A에서는 iRGD, 1010 파지 입자/ml, 도 6B에서는 CG7C 인서트를 함유하는 대조용 파지를 포함하는 단기간 배양액 내에서 PPC1 인간 전립선 암 피하지방 이종이식편을 유지하였다. 37℃에서 90분 유지한 후에, 종양을 세척하고 고정시킨 다음, 절편화하였다. 파지 코트 단백질에 대한 항체를 이용하여 파지를 검출하였다. 주목해야 할 점은 iRGD 파지가 종양 깊숙히 침투하였다는 것이다. 스케일 바는 200㎛이다.
도 7은 서로 다른 조성물의 주입 후 시간(일)에 대한 종양 부피(mm3)의 그래프이며, 이는 헤르셉틴(Herceptin)과 iRGD 펩타이드를 병용해서 처리한 마우스의 종양 억제 효과가 향상되었다는 것을 보여준다. HER2 발현(BT474)이 증가된 인간 유방암의 동소이식성 이종이식편을 갖고 있는 마우스에, 도면에 기재한 바와 같이 4 mg/kg의 iRGD 또는 PBS를 매일 주입하면서, 3 mg/kg(종양 세포 접종 후 21일에 최초 주입 = 그래프 상에서는 0일), 또는 1.5 mg/kg(후속 주입)의 헤르셉틴을 매주 주입하였다.
도 8은 비결합 공조성물의 표적화, 내재화 및 조직 침투의 CendR 증가를 보여주는 다이어그램이다. 3가지 예의 귀소 펩타이드가 기재되어 있으나, CendR 요소는 표적화 또는 귀소 분자없이 사용될 수도 있고, 다른 표적화 또는 귀소 분자, 작용제, 펩타이드 또는 서열과 함께 사용될 수도 있다.
도 9A - 9D는 iRGD-주입된 마우스의 혈관외 종양 조직내로 Evans Blue의 종양 특이적 유입을 보여준다. iRGD는 SEQ ID NO:3이다. iRGDD는 SEQ ID NO:4이다. 동소이식 MIA PaCa-2 인간 췌장 암종 이종이식편을 가진 마우스에 1㎍의 알부민-결합 염료 Evans Blue를 정맥내 주입하고, 5분 후에 PBS 중 100㎍의 iRGD 펩타이드 또는 대조용 펩타이드, 혹은 PBS를 주입하였다. 30분 후에 조직을 수집하였다. (A) iRGD-주입된 마우스의 조직(메인 패널) 및 PBS-주입된 대조용 마우스의 종양(삽입 도면)내의 Evans Blue 축적을 보여준다. iRGD-주입된 마우스의 왼쪽 신장에 침입한 종양(화살표 머리)과 원시 종양의 진청색을 주목해야 한다. T는 종양, P는 췌장, S는 비장을 나타낸다. (B - D)는 췌장 종양 및 조직에서의 정량화 결과를 보여준다. (B)에서, 서로 다른 양의 iRGD를 주입하였다. (C)에서, iRGD의 효과를 RXXK/R CendR 서열(SEQ ID NO:6)이 없는 대조용 RGD 펩타이드의 효과와 비교하였다. (D)에서, iRGD 주입 이전에, 50㎍의 항-뉴로필린-1 차단 항체 또는 대조용 IgG를 주입하였다. 통계학적 분석은 (B) 및 (D)에서는 ANOVA에 의해, (C)에서는 Student's t-test에 의해 수행하였다(n=3). 오류 바는 s.e.m을 나타내며, 별표 2개는 p<0.01, 별표 3개는 p<0.001이다.
도 10A - 10C는 여러가지 종양 모델에 있어서 혈관외 종양 조직내로 Evans Blue의 종양 특이적 유입을 보여준다. 서열은 SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 및 SEQ ID NO:40이다. 종양 마우스에 1㎍의 알부민-결합 염료 Evans Blue를 주입하고, 5분 후에 PBS 중 10 nmol의 iRGD 펩타이드 또는 대조용 펩타이드, 혹은 단독 PBS를 주입하였다. 30분 후에 조직을 수집하였다. (A) 조직 및 종양들의 육안상 외관이 나타나있다. 종양은 BT474 인간 유방 암 및 22Rv-1 인간의 전립선 암의 동소이식 이종이식편, 유전자 조작에 의한 새로운 마우스 췌관 선암종(PDAC)이다. (B) 종양세포 및 정상 조직의 심장내 주입에 의해 유발되는 GFP-PC-3 파종성 종양의 육안상 외관이 나타나있다. GFP-PC-3 파종성 종양 모델(왼쪽 상단 패널, 화살표 머리)의 많은 작은 결절(nodule)을 포함하여, 염료 및 iRGD 둘 다 주입된 마우스의 종양의 청색을 주목해야 한다. GFP-PC-3 파종성 종양의 오른쪽 패널의 녹색 형광 신호(흰색 컬러링)는 종양 결절의 위치를 보여준다. (C)는 GFP-PC-3 파종성 종양 모델의 턱 종양 에서의 정량화 결과를 보여준다. iRGD를 염료와 동시 주입하면 염료의 종양 특이적 축적이 달성되나, RXXK/R CendR 모티프(SEQ ID NO:6)가 없는 대조용 RGD 펩타이드 또는 단독 PBS를 동시 주입하는 경우에는 염료의 종양 특이적 축적이 이루어지지 않는다. 통계학적 분석은 Student's t-test에 의해 수행하였다. 오류 바는 s.e.m을 나타내며, 별표 2개는 p<0.01, n=3이다.
도 11은 iRGD의 CendR 요소(CRGDK; SEQ ID NO:34)가 피부 내의 국소적 혈관 투과성을 유도한다는 것을 보여준다. 수정된 Miles 분석이 수행되었다(Miles and Miles, 1952, Murohara et al., 1998, Teesalu et al., 2009). 마우스에 0.5% Evans Blue, 13㎍의 콴틸룸(Quantilum) 재조합 루시페라제 및 109 비표적 파지 입자의 혼합물을 함유하는 150㎕의 PBS를 정맥내 주입하였다. 10분 후에, 마우스에 VEGF-165, RPARPAR 펩타이드(SEQ ID NO:2), RPAR 펩타이드, CRGDK(SEQ ID NO:34) 펩타이드를 함유하는 30㎕의 PBS, 또는 단독 PBS를 제시된 농도로 피부내 주입하였다. 30분 후, 피부 샘플을 4mm 펀처를 이용하여 수집하였다. 피부의 혈관외 조직에서의 작용제의 잔류를 정량화하기 위해서 루시페라제 활성 및 파지 역가를 측정하였다. 수치는 PBS를 주입한 피부 샘플에 대해 정규화하였다. 통계학적 분석은 ANOVA에 의해 수행되었다. n=3, 오류 바는 s.e.m을 나타내며, 별표 1개는 p<0.05, 별표 2개는 p<0.01, 별표 3개는 p<0.001이다. RPAR은 SEQ ID NO:5이다.
도 12는 iRGD-콤보 전달 시스템을 보여준다. 서열은 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:37이다. 정맥내 투여된 iRGD 펩타이드는 3 단계 과정으로 종양 조직을 침투한다(오른쪽 패널, 보다 상세한 사항은 Sugahara et al, 2009 참조). (1) iRGD는 RGD 모티프를 포함하는 종양 혈관 내피세포 상의 αv 인테그린을 인식한다. (2) 그런 다음, C-말단에서 단백질 분해되어 잠재성(cryptic) CenR 요소인 RGDK/R(SEQ ID NO:31)를 노출시키며(오른쪽 패널의 작고 가는 화살표), 이황화물 결합은 붕괴된다(오른쪽 패널의 좁은 선) (3) CenR 요소는 뉴로필린-1과의 결합을 매개함으로써, CenR-유도 내피세포 사이 & 조직(CenRIT) 효과를 유도하여 세포 및 조직 침투를 유발한다. 통상적인 수송체-부착 전달 방법에 있어서, 카고(예를 들어, 약물, 진단물질)는 N-말단시스테인과 화학적으로 결합된다(오른쪽 패널의 좁은 선 아래의 "C"는 이황화물 결합 붕괴를 나타냄). 콤보 전달 방법에 있어서, 카고는 별도로 펩타이드와 동시 투여된다. iRGD가 유도하는 CenRIT 효과는 동시 투여되는 카고의 혈관외 종양 조직으로의 침투를 가능하게 한다.
도 13A - 13C는 iRGD-주입된 마우스의 혈관외 종양 조직 내에 분자 및 나노입자가 축적되었다는 것을 보여준다. 동소이식 22Rv-1 인간 전립선 종양을 갖고 있는 마우스에 200nmol의 플루오레세인 표지된 CRGDC 펩타이드(FAM-CRDGC, SEQ ID NO:36), 0.2mg의 텍사스 레드 표지된 3-kDa 또는 10-kDa 덱스트란, 5mg 철/kg의 플루오레세인 표지된 산화철 나노웜, 또는 109 플라크 형성 단위(pfu)의 비표적 파지 입자를 주입하고, 5분 후에 PBS 중의 100 nm iRGD 펩타이드, 또는 단독 PBS를 주입하였다. 30분 후에, 조직을 수집하여 덱스트란 및 파지에 대해 조사하고, 2시간 후에 FAM-CRDGC 및 나노웜에 대해 조사하였다. (A) 종양의 면역형광염색법(immunofluorescence). FAM-CRDGC에 대해서 UV광 하에 취해진 이미지도 또한 보여주고 있다(왼쪽 대부분 패널). 점선은 조직이 위치하는 장소를 보여준다. T7 파지 항체를 이용하여 파지를 검출하였다. 색상은 패널에 나타나있다. 밝은 색의 스펙은 FAM-CRDGC에 양성인 염색을 의미하며, 밝은 회색 면적은 덱스트린에 양성인 염색을 의미한다. 밝은 색의 스펙은 산화철 나노웜 또는 파지 염색을 의미한다. 스케일 바 = 100㎛. (B) 종양 절편에 있어서, FAM-CRDGC 및 덱스트린에 양성인 면적의 정량화. 냉동절편을 항-FITC 항체(FAM-CRDGC) 또는 항-덱스트란 항체(덱스트란)를 이용하여 면역조직화학법으로 염색한 다음, 분석을 위해 스캔스코프를 사용하여 스캔하였다. (C) 파지 역가를 기초로 한, 조직 내에 축적된 파지의 정량화.
도 14A - 14D는 iRGD와 독소루비신(Doxorubicin; DOX)-리포솜의 동시 주입에 의해 종양 억제 효과가 향상되었다는 것을 보여준다. (A 및 B) 동소이식 22Rv-1 인간 전립선 종양을 갖고 있는 누드 마우스에 DOX-리포솜(3 mg DOX/kg)을 주입하고, 5분 후에 100 nm iRGD 또는 PBS를 주입하였다. 3시간 후에 종양 및 조직을 수집하였다. (A)에서, 종양을 절편화하고 항-CD31 항체를 이용하여 염색하였다. 독소루비신은 왼쪽 패널에서 4개의 후광과 같이 보이는 밝은 스펙으로 나타나 있다. 스케일 바 = 200㎛, n=3. (B)에서, 조직 내의 DOX를 정량화하였다. (C) 2주된 동소이식 22Rv-1 종양을 갖고 있는 누드 마우스에 2 μmol/kg iRGD, 시클로(-RGDfK-)(SEQ ID NO:40) 또는 PBS와 함께, DOX-리포솜(1 또는 3 mg DOX/kg) 또는 PBS를 매일 정맥내 주입하였다. 처리 후 17일에 종양을 수집하고 무게를 재었다. 각 그룹의 마우스 수는 5 마리였다. 유사한 결과를 나타낸 3회 실험 중 하나가 도시되어 있다. (D) 치료 연구에서 종양 및 심장 샘플의 조직 절편에 대해 TUNEL 염색법을 면역조직화학법으로 행하고, 양성에 대해 정량화하였다. 통계학적 분석은 (B)에서는 Student's t-test에 의해, (C) 및 (D)에서는 ANOVA에 의해 수행하였다(n=3). 오류 바는 s.e.m을 나타내며, n.s.는 무의미, 별 1개는 p<0.05, 별표 2개는 p<0.01, 별표 3개는 p<0.001이다.
도 15는 iRGD와 DOX-리포솜(3 mg DOX/kg)의 병용 처리에 의해 종양 억제 효과가 향상되었다는 것을 보여준다. 2주된 동소이식 22Rv-1 종양을 갖고 있는 누드 마우스에 2 μmol/kg iRGD, 시클로(-RGDfK-)(SEQ ID NO:40) 또는 PBS와 함께, DOX-리포솜(3 mg DOX/kg) 또는 PBS를 매일 정맥내 주입하였다. 처리 후 17일에 종양을 수집하고 무게를 재었다. 각 그룹의 동물 수는 3 마리였다. 유사한 결과를 나타낸 3회 실험 중 하나가 도시되어 있다. 통계학적 분석은 Student's t-test에 의해 수행하였다. 오류 바는 s.e.m을 나타내며, 별 1개는 p<0.05, 별표 2개는 p<0.01이다.
도 16은 iRGD와 DOX-리포솜의 병용 처리 후 심장의 조직 절편에 대해 TUNEL 염색법을 수행하였다. 도 14C에서 보여주는 처리 후 수집된 심장 샘플을 절편화하고, TUNEL 분석 키트 및 DAPI(청색)를 사용하여 면역형광법으로 염색한 후에, 공초점 현미경으로 조사하였다. 윤곽이 흐릿하게 보이는 적색 점들(화살표가 예를 향함)은 TUNEL 신호를 나타낸다. 스케일 바 = 200㎛.
도 17은 iRGD와 DOX-리포솜으로 병용 처리된 종양 마우스의 체중 변화를 보여준다. 도 14C에서 보여주는 처리 후 마우스의 체중을 처리 과정 동안 4일마다 재었다. 체중 변화 퍼센트를 나타내었다. 통계학적 분석은 ANOVA에 의해 수행하였다(n=3). 오류 바는 s.e.m을 나타내며, n.s.는 무의미, 별표 3개는 p<0.001이다.
도 18A - 18C는 iRGD와 헤르셉틴의 동시 주입에 의해 종양 억제 효과가 향상되었다는 것을 보여준다. (A 및 B) 동소이식 BT474 인간 유방 종양을 갖고 있는 마우스에 헤르셉틴(3 mg/kg)을 정맥내 주입하고, 5분 후에 100 nmol iRGD 또는 PBS를 정맥내 주입하였다. 3시간 후에, 조직을 수집하였다. (A)에서, 종양 절편을 항-인간 IgG 항체를 이용하여 면역조직화학법으로 염색하여 헤르셉틴에 대해 분석한 후에, 양성 면적(어두운 음영부분)을 정량화하였다. n=3. (B)에서, 경쟁적 ELISA를 이용하여 조직 내의 헤르셉틴을 정량화하였다. n=3. (C) 헤르셉틴과 iRGD의 동시 투여에 의한 종양 치료. BT474 종양 마우스에 24일 동안 4일마다 치료 첫날(그래프에서는 0일)에는 3 또는 9 mg/kg, 그 후에는 1.5 또는 4.5 mg/kg의 헤르셉틴 또는 PBS를 정맥내 주입하였다. 치료는 헤르셉틴 주입하는 날에는 4 μmol/kg iRGD 또는 PBS를, 다른 날에는 2 μmol/kg iRGD 또는 PBS를 매일 정맥내 주입하였다. 각 그룹의 동물 수는 10 마리였다. 유사한 결과를 나타낸 4회 실험 중 하나가 도시되어 있다. 통계학적 분석은 (A) 및 (B)에서는 Student's t-test에 의해, (C)에서는 ANOVA에 의해 수행하였다. 오류 바는 s.e.m을 나타내며, n.s.는 무의미, 별 1개는 p<0.05, 별표 2개는 p<0.01, 별표 3개는 p<0.001이다.
도 19는 iRGD를 발현시키는 T7 파지의 생체 외부에서의 종양 침투를 보여준다. 하기와 같은 109 pfu/ml 파지 및 억제제의 배합물, 즉 (왼쪽 상단) 억제제없이 iRGD 펩타이드를 발현시키는 파지(iRGD 파지); (오른쪽 상단) 억제제없이 대조용 G7 펩타이드를 발현시키는 비표적 파지(CG7C 파지); (왼쪽 중앙) 10 mM 아지드화 나트륨을 함유하는 iRGD 파지; (오른쪽 중앙) 억제제가 없는, 그러나 4℃에서 배양되는 iRGD 파지; (왼쪽 하단) 기능-차단 항-뉴로필린-1 항체를 함유하는 iRGD 파지; (오른쪽 하단) 대조용 염소 IgG를 함유하는 iRGD 파지를 포함하는 단기간 배양액 내에서 PPC1 인간 전립선 암 피하지방 종양을 유지하였다. 처음에는 4℃에서 20분 동안 종양을 배양하였다. 그 다음 명시되어 있는 파지를 배양액에 가하고, 37℃에서 90분간 더 배양하였다(패널 D에서는 4℃). 배양 후에, 종양을 세척하고 고정시킨 다음, 절편화하였다. 항-T7 파지(밝은 색의 염색), 항-CD31 항체(중간 음영의 염색 - A에서는 전혀 보이지 않고, B에서는 매우 적게 존재함), 및 DAPI(회색 염색)를 이용하여 절편을 염색하고, 공초점 현미경을 사용하여 검사하였다. 주목해야 할 점은 iRGD 파지가 종양 깊숙히 침투하였다는 것과 그 과정이 아지드화 나트륨, 저온, 또는 항-뉴로필린-1 항체에 의해 저해된다는 것이다. 스케일 바 = 200㎛.
도 20은 iRGD-콤보 요법으로 치료 후 종양 조직 내에 DOX-리포솜이 확산되었다는 것을 보여준다. 도 14C에서와 같이 처리 후 수집된 종양을 고정시키고 절편화하였다. (A) 도 14C의 종양 절편을 항-CD31 항체를 이용하여 면역형광법으로 염색하였다. 왼쪽 패널에 전체에 걸쳐 보여지는 회색 스펙은 Dox 염색을 나타낸다. 주목해야 할 점은 iRGD-콤보 요법으로 치료 후 2 - 3 주 후에 DOX가 광범위하게 확산되었다는 것이다. 5개의 종양 각각의 대표적인 이미지가 나타나 있다. 스케일 바 = 200㎛.
본 발명의 방법 및 조성물은 본 명세서에 포함되어 있는 하기의 특정 실시에 관한 상세한 정의 및 실시예, 그리고 첨부 도면 및 이에 대한 설명에 의해 보다 용이하게 이해될 수 있다.
본 발명의 화합물, 조성물, 물질, 장치 및/또는 방법은 기술 및 설명하기 전에 별도의 설명이 없는 한, 특정 합성법 또는 특정 재조합 생물공학법에 한정되는 것이 아니며, 특별히 명시되지 않는 한, 특정 물질은 변경될 수 있다는 점을 이해해야 한다. 또한 본 명세서에서 사용되는 전문 용어는 특정 실시예를 설명하기 위한 것으로, 본 발명에 제한하려는 것이 아니라는 점도 이해해야 할 것이다.
A. 정의
본 명세서 및 첨부되는 특허청구의 범위에서 사용되는 "한" 및 "하나"는 별도의 설명이 없는 한 복수 형태도 포함하는 의미이다. 따라서, 예를 들어, "약학적 담체(carrier)"라는 용어는 이러한 담체의 2종 이상의 혼합물을 포함하는 의미이다.
범위는 "약" 한 특정 값으로부터 "약" 다른 특정 값까지로 표현될 수 있다. 이러한 방식으로 범위를 표현할 때, 또 다른 예는 한 특정 값으로부터 및/또는 다른 특정 값까지 포함한다. 이와 마찬가지로, 앞에 "약"이라는 용어를 사용하여 값을 근사치로 표현하는 경우, 특정 값은 특정 예를 형성한다는 점을 이해해야 한다. 또한, 각 범위의 한 끝값이 다른 끝값과 관련해서 중요하며, 다른 끝값에 독립적이라는 점도 이해해야 할 것이다. 또한, 본 명세서에는 다수의 수치가 존재하며, 각 수치는 그 수치 자체 이외에도 그 특정 값의 근사치도 포함한다는 점도 이해해야 할 것이다. 예를 들어, 수치 "10"이 기재되어 있다면, "약 10"으로도 기재된 것이다. 또한, 예를 들어, 당업자라면 이해할 수 있는 바와 같이, 어떤 수치가 기재되어 있다면, "수치와 같거나 그 이하", "수치와 같거나 그 이상의 수치" 및 그 수치들 사이의 범위도 포함한다. 예를 들어, 수치 "10"이 기재되어 있다면, "10과 같거나 그 이하" 뿐만 아니라 "10과 같거나 그 이상"의 의미로 기재된 것이다. 또한, 명세서에서, 다수의 서로 다른 포맷으로 데이터가 제공되며, 이러한 데이터는 시작 포인트, 종결 포인트 및 조합된 데이터 포인트의 범위를 대표한다. 예를 들어, 특정 데이터 포인트 "10"과 특정 데이터 포인트 "15"로 기재되어 있다면, 10 및 15 보다 큰, 같거나 큰, 보다 작은, 같거나 작은, 같은 것 뿐만 아니라 10과 15 사이를 포함하는 것이다. 또한 두 특정 단위 사이의 각각의 단위도 포함되는 것으로 이해해야 한다. 예를 들어, 10과 15로 기재되어 있다면, 11, 12, 13, 14도 포함되는 것으로 이해해야 할 것이다.
본 명세서 및 첨부되는 특허청구 범위에서, 다수의 용어에 대해 다음과 같은 의미를 가지는 것으로 정의된다.
"임의선택적" 또는 "임의선택적으로"라는 것은 그 후에 기술되는 상황 또는 환경이 발생할 수도 있고 발생하지 않을 수도 있는 것으로, 상기 상황 또는 환경이 발생하는 경우와 발생하지 않는 경우를 포함하는 의미이다.
본 명세서에서 다양한 문헌이 언급된다. 이러한 문헌은 전체적으로 본 발명이 속해 있는 당해 분야를 보다 충분히 기술하기 위해 참고 문헌으로 기재하고 있다. 또한 기재되는 참고 문헌은 본 명세서에서 관련 내용에서 설명되고 있는 자료에 대해 개별적으로 특별하게 참고사항으로 언급된다.
본 발명의 방법 및 조성물은 별도의 설명이 없는 한, 특정 제조 방법, 특정 분석 기법 또는 특정 작용제에 한정되지 않으며, 변경이 가능하다는 점을 이해해야 한다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 전문 용어는 특정 실시예를 설명하기 위한 것으로, 본 발명에 제한하려는 것이 아니라는 점도 이해해야 할 것이다.
B. 총론
본 명세서는 조성물의 세포내 전달, 유출 및 조직 침투를 가능하게 하는 새로운 기술적 플랫폼에 대해 기술하고 있다. 전달은 전체적으로 이루어질 수도 있고, 종양과 같이 목적하는 세포나 조직을 표적화할 수도 있다. 조성물(나노입자, 약물, 검출가능한 마커 및 다른 화합물 포함) 및 그 페이로드의 표적 세포에의 내재화 및 표적 세포로의 침투는 표적화 효율성을 증가시킬 수 있다. 세포 또는 조직 특이적인 침투성 펩타이드와 페이로드의 공유 결합 또는 비공유 결합 없이 페이로드의 세포 유형-특이적 내재화 및 조직 유형-특이적 침투는 이전에는 가능하지 않았다.
세포-침투성 전달 운반체는 여러가지 면에서 중요하다. 첫째로, 세포-침투성 표적화 요소는 예를 들어 핵산-기초 치료법의 전달에 있어서 중요한 페이로드를 세포질로 운반할 수 있다. 둘째로, 펩타이드 및 그 페이로드의 세포에의 내재화는 귀소를 보다 효과적으로 만들기 때문에 표적화를 향상시킬 수 있다(Christian et al., 2003; Jiang et al., 2004; Laakkonen et al., 2004; Weissleder et al., 2005). 셋째로, 본 명세서에서 기술한 바와 같이, 세포-침투 특성은 조직-침투 특성과 함께 혈관외 유출 및 조직 확산을 향상시킨다. Tat, 페네트라틴 및 다른 원형(prototypic) 세포-침투성 펩타이드는 조직-침투 특성을 갖지 못한다.
CenR 펩타이드의 세포-침투 특성이 특이적 세포 표면 수용체와의 입체-특이적 결합에 의존하는 반면, L-아미노산 및 D-아미노산 원형 세포-침투성 펩타이드(CPP)는 둘 다 활성인 점에서, 본 발명의 CenR 펩타이드는 원형 세포-침투성 펩타이드(CPP)와 다르다(Langel, 2007; Meade and Dowdy, 2007). 더욱이, CenR 펩타이드는 특정 병리학적 병소(종양과 같은) 또는 개별적 조직에 특이적일 수 있다.
조성물이 혈관외 공간으로 침투하는 능력은 생체 내에서 조성물의 표적화 효율성을 제한하는 중요한 인자이다. 정의적 세부특징(defining feature)으로서 C-말단 요소를 함유하는 간단한 펩타이드 모티프는 파지 및 프리 펩타이드가 세포 내로 매우 효과적으로 내재화되도록 신호를 보내는 것으로서 확인된다. 이러한 내재화 현상을 "C-말단 규칙(C-end rule)" 또는 "CenR"이라고 부른다. C-말단 요소를 노출시키는 단백질분해는 내재화 신호를 유발하는 스위치로서 작용할 수 있다. 이러한 매커니즘을 통해서 다양한 조성물이 내재화될 수 있다. 예를 들어, 귀소 펩타이드-매개 축적은 표적에 의해 유발되는 내재화가 이루어지는 고도로 특이적인 귀소 시스템을 가능하게 하는 C-말단 요소를 노출시키는 전체적 또는 세포 유형-특이적 단백질 분해가 이루어지는 표적 부위에서 발생할 수 있다. 또한 CenR 경로는 목적하는 조성물이 혈관계로부터 유출되어 조직 내로 확산되기 위해 사용될 수 있다. C-말단 요소는 조성물의 혈관계로부터의 확산을 유발할 수 있다(그럼으로써, 예를 들어, 정맥내 주입에 의해 종양 조직내로 확산될 수 있다). 또한 CenR 요소는 다른 CenR-가능한 막, 예를 들어 점막 및 뇌혈관장벽을 통한 목적하는 조성물의 통과를 매개하는데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "조직 침투" 및 "조직의 침투"라는 용어는 조직을 통해 또는 그 내로, 세포의 외부나 제 1 층을 통해 또는 그 너머, 혹은 조직막을 통해 통과하는 것을 의미한다. 이러한 조직을 통한 통과 또는 침투(혈관외 유출 및 조직 침투라고도 함)은 예를 들어, 세포 내재화와 조직 내의 세포들 사이의 통과의 기능일 수 있다. 본 명세서에서, "조직 침투"라는 용어가 사용될 때, 침투는 뇌혈관장벽과 같이 몸 어느 곳에서도 발견되는 CenR-가능한 막 및 다른 장벽까지 포함하는 의미이다.
공지된 세포-침투성 펩타이드와는 달리, 본 발명의 내재화 요소는 위치-의존적이다. 즉, 펩타이드의 C-말단이 아닌 위치에 존재할 때는 불활성이다. 또 다른 차이점은 CenR 요소는 입체특이적이다. 즉, 전적으로 D-아미노산으로 구성된 CenR 요소는 불활성이다. 잠재성 CenR 펩타이드는 예를 들어, C-말단 아르기닌, 리신 또는 리신-글리신을 노출시키기 위해 적합한 단백질 분해 효소에 의한 절단에 의해 활성화될 수 있다. 본 명세서에서, "CenR 요소" 또는 "C-말단 요소"라는 용어가 사용될 때, 이는 글리신이 가장 먼 C-말단 위치에 있는 C-말단 아르기닌, C-말단 리신, 또는 C-말단 리신-글리신 페어를 포함하는 의미이다. 다시 말해서, 리신이 C 말단 상에 위치하는 경우, CenR 요소는 리신의 C 말단부에 있는 글리신을 함유하는 작용기를 잔류시킬 수 있다. 그러나, 리신 잔기가 C-말단 요소로서 작용하기 위해서, 말단에 글리신을 가지는 것이 필수적인 것은 아니다. 리신은 글리신없이 존재하며 작용할 수 있다. 그러나, 글리신은 리신이 가까이 존재하지 않으면 C-말단 요소로서 작용할 수 없다는 점에서 역관계는 성립하지 않는다. 아르기닌은 가장 먼 C-말단 위치에 존재한다면, C-말단 요소로서 작용하는데 리신이나 글리신을 필요로 하지 않는다. 이러한 CenR 요소는 타입 1 CenR 요소라고 부를 수 있다.
또한, "CenR 요소" 또는 "C-말단 요소"라는 용어는 C-말단 히스티딘 및 서열 X1X2X3X4(X1은 R, K 또는 H이고, X4는 R, K, H 또는 KG이며, X2 및 X3는 각각 아미노산임)를 갖는 아미노산 서열을 표현하는데 사용될 수 있다. 이러한 CenR 요소는 타입 2 CenR 요소라고 부를 수 있다. X2 및 X3 아미노산은 특정 목적을 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, X2, X3 또는 둘 다는 프로테아제 인식 서열의 일부 또는 전부를 형성하도록 선택될 수 있다. 이는 예를 들면, X4 아미노산 이후 부분의 절단에 의해 활성화되는 잠재적 또는 잠재성 CenR 요소로서 CenR 요소를 함유하는 펩타이드의 절단을 가능하게 하는데 그리고 특정화하는데 유용할 수 있다. 이러한 아미노산 선택의 예는 표 1 및 2에 나타나 있다. 또한, X1, X2 및 X3 아미노산은 예를 들어, 세포 표면에서 NRP-1 분자에 대한 추가적인 단백질을 보강하기 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, X1, X2 및 X3 아미노산은 CenR 요소(및 CenR 요소를 함유하는 조성물, 콘쥬게이트, 단백질 및 펩타이드)의 선택성 및 내재화 및/또는 조직 침투 잠재성을 조정하는데 사용될 수 있다. 또한, X2 및 X3 아미노산은 X1 - X4 모티프 내에서의 프로테아제 절단을 감소 또는 억제시키기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, X2 및/또는 X3는 프롤린과 그 다음의 다운스트림 아미노산 사이에 예컨대, 카르복시펩티다아제에 의해 프로테아제 절단을 감소 또는 억제시키는 프롤린일 수 있다. 또 다른 예로서, X1, X2, X3 및/또는 X4 사이의 하나 이상의 결합은 이러한 결합에서의 프로테아제 절단을 감소 또는 억제시키도록 변경될 수 있다. 또한 임의선택적으로, X2, X3 또는 둘 다에서 아미노산을 제외시킬 수 있다. 예를 들어, 필요하다면 X2 및 X3로서 각각 G 및 D의 동시 사용을 배제할 수 있다. 또한, 일부 타입 2 CenR 요소는 R/K/HXXR/K/H (SEQ ID NO:20), R/KXXR/K (SEQ ID NO:23), 및 R/K/HXXKG (SEQ ID NO:21)로서 기재될 수 있다.
CenR 요소의 예로는 XXR/K/H, XXR/K, XXR/H, XXK/H, XXR, XXK, XXH, XXKG, RXXR/K/H, RXXR/K, RXXR/H, RXXK/H, RXXR, RXXK, RXXH, RXXKG, KXXR/K/H, KXXR/K, KXXR/H, KXXK/H, KXXR, KXXK , KXXH, KXXKG, HXXR/K/H, HXXR/K, HXXR/H, HXXK/H, HXXR, HXXK, HXXH, HXXKG, R/K/HXXR, R/KXXR, R/HXXR, K/HXXR, RXXR, KXXR, HXXR, R/K/HXXK, R/KXXK, R/HXXK, K/HXXK, RXXK, KXXK, HXXK, R/K/HXXH, R/KXXH, R/HXXH, K/HXXH, RXXH, KXXH, HXXH, R/K/HXXKG, R/KXXKG, R/HXXKG, K/HXXKG, RXXKG, KXXKG, 및 HXXKG 등이 있다.
편의상, 아르기닌, 리신, 리신-글리신 페어 또는 히스티딘이 C-말단에 위치하고, C-말단에 위치하는 아르기닌, 리신, 리신-글리신 페어 또는 히스티딘의 노출이 예정되거나 의도되는 경우, CenR 요소를 구성하는 아미노산 모티프는 CenR 요소 또는 잠재적 CenR 요소라고 말할 수 있다.
프로테아제-제어가능한 내재화 시스템은 세포 유형-특이적 및/또는 조직 유형-특이적 흡수 및 조성물의 조직으로의 확산 능력과 같은 기능을 갖는 조성물을 처리하는데 유용하다. 또한, 이러한 규칙은 바이러스 감염 및 식세포 활동을 포함한 다수의 생물학적 과정과 관련이 있다. 바이러스는 자연적으로 세포를 감염시키기 위해 CenR 경로를 사용할 수 있기 때문에, 바이러스 감염 과정을 방해하는 데에 있어서 CenR 조성물, 콘쥬게이트, 분자, 단백질 및/또는 요소가 유용할 수 있다.
본 발명의 조직/세포 침투 시스템은 특이적 표적 조직에 귀소할 뿐만 아니라 그 조직내로 침투하는 펩타이드를 유도하는 것을 가능하게 한다. 이러한 펩타이드는 두개의 활성 서열 모티프, 특이적 수용체에 대한 결합 부위 뿐만 아니라 조직-침투 수용체와 결합하는 서열 모티프를 함유한다. 두개의 서열 모티프는 서로 중복될 수 있다. CenR 펩타이드는 CenR 펩타이드와 함께 제공되는 물질을 운반하는 수송 시스템을 활성화시킨다. 약물 및 다른 화합물 및 조성물을 서로 다른 표적 세포 및 조직에 표적화하기 위해 다양한 귀소 CenR 펩타이드가 사용될 수 있다. 예를 들어, 한 유형의 CenR 펩타이드에 대한 수용체는 종양의 저산소증 부위에서 우선적으로 발현되며, 따라서 이러한 펩타이드 군을 가지는 것이 단일 펩타이드로 달성될 수 있는 것 보다 더 많이 종양 조직을 커버할 수 있다. 다양한 크기의 공조성물 및 카고가 CenR 펩타이드와 함께 사용될 수 있다. 약물에 종양 침투성 CenR 펩타이드(또는 2가지의 배합물)를 함께 사용하면, 비종양 조직 내의 농도에 영향을 주지 않으면서 종양 내의 약물 농도를 높일 수 있다. 또한, 본 발명의 방법 및 조성물은 종양 내에 약물의 분포를 증가시킬 수 있다. 결과적으로, 종양 억제 활성이 향상될 수 있다. CenR 요소는 여러 가지 다른 요소, 예를 들어 악세사리 분자 및 귀소 모티프 뿐만 아니라, 공조성물 및 카고 조성물과 같은 전달 및 내재화되는 성분과 배합될 수 있다.
종양내 유압이 높으면 조직액을 종양 외부로 유출하게 만들어서, 혈관외 종양 조직내로 약물이 확산되는 것을 막는 역할을 하기 때문에, 종양 조직으로의 침투는 모든 항암제에 있어서 중심 문제이다(Jain et al., 2007). 그 이유는 혈관이 누수되는 경향이 있고 림프관이 종양에서 제 기능을 하지 못하게 되기 때문인 것으로 생각된다. 약물이 완벽하게 종양-특이적이고 정상 조직에 해를 주지 않는다면(그리고 비용이 문제가 되지 않는다면), 종양 전체 부분에 걸쳐 충분한 양의 전달에 방해되는 어떠한 장벽도 압도할 만한 양의 약물을 투여하는 것이 가능할 것이다. 그러나 항암제의 경우에는 그럴 가능성이 없는 것이 명백하다. 약물 독성으로 인해 투여량이 제한되며, 종양 침투가 주요 장애가 되기 때문이다. 본 발명의 방법 및 조성물은 침투 문제를 가지고 있거나 효과적이긴 하지만 표준 치료 투여량에서 조차도 독성이 높은 약물에 대해 가장 강한 효과를 나타낼 수 있다. 기본적으로 모든 항암제는 상기 문제점들 중 하나 또는 둘 다를 가지고 있다.
특정 펩타이드 모티프가 약물의 종양 및 다른 세포 및 조직 내로의 침투를 현저하게 증가시킨다는 사실을 발견하였다. 본 발명은 약물의 종양 내로의 침투를 현저하게 증가시키는 종양-귀소 펩티드를 제공한다. 이 펩타이드는 종양 특이적 귀소 서열 뿐만 아니라 CenR이라고 불리는 조직-침투 및 내재화 모티프를 둘 다 함유한다. CenR 요소는 이러한 펩타이드 내에 은신하고 있으며, 표적 종양에서 단백질 분해 절단에 의해 활성화된다. 이 펩타이드에 부착되어 있는 약물, 형광발색단 및 나노입자 페이로드는 종양 내에서 축적되어 혈관외부 종양 조직으로 깊숙히 침투한다. 그러나, 페이로드는 CenR 펩타이드와 반드시 결합되어야 하는 것은 아니라는 사실도 또한 발견하였다. 유리 CenR 펩타이드는 종양 내에서의 특이적 조직 침투를 유도하며(CendIT 효과; CenR-유도 내피세포 사이 & 조직 효과), 그럼으로써 동시 주입되는 약물 또는 나노입자가 관외유출되어 종양 조직 내로 침투하는 것을 가능하게 한다. 이와 같은 효과는 CenR 수용체를 갖고 있는 세포 및 조직에서 달성될 수 있다. 명시되어 있는 동시 주입된 화합물의 종양 내에서의 농도 증가는 약 4배이다.
종양-침투성 CenR 펩타이드는 예를 들어, 항암제를 사용하는 종양 치료 및 종양 이미지화를 증대하는데 사용될 수 있다. FDA-승인 영상제, 예를 들어 산화철 나노입자 MRI 조영제를 종양-귀소 CenR 펩타이드(또는 펩타이드의 배합물)와 함께 종양을 가진 마우스에 주입한 후에 이미지화를 수행하였다. 종양 성장에 영향을 주고 그 성장을 억제하기 위해서 공지된 또는 미래의 약물을 CenR 펩타이드와 함께 사용할 수 있다. 예를 들어, 공조성물은 임상적으로 사용되는 어떠한 항암제이어도 된다. 약물 축적 및 종양 내의 분포 뿐만 아니라 종양 억제 효과는 공지 기술(본 명세서의 실시예에서 설명함)을 이용하여 측정될 수 있다.
본 발명에 의한 내재화 및 조직 침투의 향상은 광범위하게 적용될 수 있다. 본 발명의 CenR 요소 및 펩타이드를 사용함으로써, 약물, 화합물 또는 조성물의 효과적인 표적화, 전달, 및 침투가 증대 및 향상될 수 있다. 표적화 및 귀소 CenR 펩타이드의 효과는 몇가지 중요한 의미를 갖는다. 첫째로, 약물과 다른 화합물 및 조성물이 표준 치료법에서 가능한 것보다 높은 농도로 목적하는 세포 및 조직으로 전달될 수 있다. 이는 CenR 펩타이드에 의해 매개되는 내재화 및 조직 침투가 증가한 결과이다. 이 점은 일반적으로 투여될 수 있는 약물의 양이 부작용으로 인해 제한되기 때문에 특히 중요하다. 따라서, 투여되는 약물의 양을 증가시키지 않고 표적에서의 약물 농도를 증가시킬 수 있고, 공지된 또는 미래의 약물이나 치료법의 효과를 증진시킬 수 있다. 표적화 또는 귀소 CenR 펩타이드를 사용할 때, 표적 세포 및 조직에서만 약물 농도 증가가 발생하고, 비표적 조직에서는 발생하지 않는다. 이러한 경우, 치료 효과는 증가하고 부작용은 동일한 수준이다. 둘째로, 치료 효과를 약화시키지 않고, 약물이나 다른 화합물 또는 조성물의 양 또는 투여량을 감소시킬 수 있다. CenR 펩타이드는 약물 투여량이 감소된 경우에도 표적 세포 또는 조직에서 동일한 약물 농도를 얻게 한다. 셋째로, 보조 CenR 펩타이드 및 약물, 영상제 또는 다른 화합물이나 조성물은 서로 결합되어야 할 필요가 없기 때문에, 약물, 영상제 또는 다른 화합물이나 조성물을 보강하기 위해서 법적으로 유효하고 승인된 CenR 펩타이드를 사용할 수 있다.
본 발명의 방법 및 조성물은 일반적으로 치료 및 생체내 진단에 있어서, 특히, 암의 치료 및 생체내 진단에 있어서 중요한 문제점을 다루고 있다. 즉, 약물 및 다른 화합물과 조성물의 조직으로의 침투가 잘 이루어지지 않는다는 점이다. 본 발명자는 효과적이고 특이적으로 종양 조직 내로 침투하며, 형광발색단, 약물 또는 나노입자 조영제와 같은 부착된 페이로드를 혈관외부 종양 조직 내로 깊숙히 수송할 수 있는 종양-귀소 펩타이드를 발견하였다. 그리고, 페이로드는 종양-침투 펩타이드와 결합 또는 연결될 필요가 없다는 사실도 발견하였다. 이 펩타이드는 특이적으로 종양 내에서 조직 투과성을 유도하며, 그럼으로써 동시 주입되는 조성물이 관외유출되어 종양 조직 내로 침투하는 것을 가능하게 한다.
종양-침투성 펩타이드 개념은 엄청난 유용성을 가진다. (1) 종양-침투성 펩타이드는 표준 방법에 의해 종양에 도달하는 것보다 많은 양의 약물(또는 진단 프로브 또는 다른 화합물이나 조성물)을 종양 내로 전달한다. 이는 효능을 증대시키고 부작용을 감소시킨다는 것을 의미한다. (2) 이 방법은 종양 침투 문제를 해결하는데 도움을 줄 수 있다. 일반적으로, 약물은 혈관으로부터 3 ~ 5 세포 직경 이상 먼 곳은 침투하지 못하므로, 보다 멀리 위치하는 종양 세포는 약물이 없는 상태로 잔류하게 되거나 내성 생성을 촉진시킬 수 있는 낮은 약물 농도에 노출되게 한다(Hambley and Hait, 2009). 본 발명의 방법 및 조성물은 약물이 종양 내에 보다 고르게 분포되는 것을 가능하게 한다. (3) 약물이 펩타이드와 결합되어야 할 필요가 없다는 사실은, 일단 종양-침투성 펩타이드가 임상적으로 유효하다면 영상제 또는 항암제의 효능을 증대시키기 위해 사용될 수 있다는 것을 의미한다.
또 다른 실시예에서, CenR 펩타이드는 나노약물(nanomedicine)에 사용될 수 있다. 나노약물의 주요 목표 중의 하나는 질병의 진단, 모니터링 및 치료에 있어서 여러 기능을 수행함으로써 단순 약물을 능가하는 수단을 설계하는 것이다. 새로운 기술은 다기능성 나노입자의 의학적 용도에 있어서 주요 문제점 중의 일부, 예를 들어 혈관외부 조직 내로의 침투가 미약한 점을 해결하는데 이용될 수 있다.
본 발명은 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 및 CendR 요소에 대해 기술한다. CenR 요소 및 CenR 화합물은 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 등의 기본 구성이다. CenR 조성물은 CenR 요소 또는 CenR 화합물를 함유하는 조성물, 복합체, 콘쥬게이트, 분자, 단백질, 펩타이드 등이다. CenR 콘쥬게이트는 공유 결합이든 비공유 결합이든, CenR 요소 또는 CenR 화합물과 하나 이상의 다른 요소, 펩타이드, 단백질, 화합물, 분자, 작용제, 화합물 등과의 결합체이다. 예를 들어, CenR 콘쥬게이트는 CenR 펩타이드, CenR 단백질, CenR 화합물, CenR 분자 등을 함유할 수 있다. CendR 분자는 CenR 요소 또는 CenR 화합물을 함유하는 분자이다. 예를 들어, CendR 분자는 CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 등을 함유할 수 있다. 일반적으로, CenR 펩타이드, CenR 단백질, CenR 화합물, CenR 분자 및 CenR 콘쥬게이트는 CenR 조성물의 모든 형태들이다. CendR 화합물, CendR 펩타이드, CenR 단백질은 CenR 분자의 형태들일 수 있다. 별도의 설명이 없는 한, CenR 조성물에 대한 언급은 CendR 조성물, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드, CendR 요소 등을 의미하는 것이다. CenR 성분은 CenR 요소를 함유하는 분자, 펩타이드, 단백질, 화합물, 콘쥬게이트, 분자, 조성물 등이다. 예를 들어, CenR 성분의 예로는 CendR 조성물, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 및 CendR 요소 등이 있다.
CenR 성분은 하나 이상의 CenR 요소를 함유할 수 있다. CenR 요소가 둘 이상의 CenR 요소들로 구성되는 경우, CenR 성분은 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에서 CenR 요소들의 일부 또는 전부가 노출되도록 설계되는 것이 유용하다. 이는 여러 방식으로, 예를 들어 콘쥬게이트 및 조성물에서 달성될 수 있다. 이는 또한 예를 들어, 브랜칭 펩타이드 및 단백질에서 달성될 수 있다.
본 발명은 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 요소 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포, 조직 또는 세포/조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 요소 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포를 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 요소 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 펩타이드 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포, 조직 또는 세포/조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 펩타이드 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포를 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 본 발명은 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 펩타이드 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 조성물 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포, 조직 또는 세포/조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 조성물 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포를 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 조성물 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 콘쥬게이트 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포, 조직 또는 세포/조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 콘쥬게이트 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포를 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 콘쥬게이트 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명의 방법, 예를 들어 공조성물을 사용하는 본 발명의 방법에 있어서, 이 방법에 사용되는 CenR 요소(들) 또는 다른 CenR 성분(들)은 카고 조성물을 구성하는 CenR 요소일 수 있다. 이와 마찬가지로, 본 발명의 방법, 예를 들어 카고 조성물을 사용하는 본 발명의 방법에 있어서, 하나 이상의 조성물이 또한 이 방법에 사용될 수 있는데, 이 때 CendR 요소와 공조성물(들)은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있다.
본 발명은 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포, CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 펩타이드 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직내의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 펩타이드 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 본 발명은 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 펩타이드 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 조성물 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직에의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 조성물 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 조성물 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직에의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 방법으로서, 세포를 CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포에의 내재화를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명은 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 방법으로서, 조직을 CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 조직을 통한 및 그 내로의 침투를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
CendR 요소는 세포, 조직 또는 세포/조직의 투과성을 높일 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 대상자 내에 존재할 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 요소 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 요소 및 공조성물에 노출될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 CendR 요소과 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 아니면 CendR 요소 및 공조성물은 별개의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 별개의 경로를 통해 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에서, CendR 요소와 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 요소 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출될 수 있다. CendR 요소 및 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 카고 조성물은 CendR 요소 및 카고 조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 단독으로 투여될 수도 있고, 본 발명에서 기술한 바와 같은 다른 성분과 함께 투여될 수도 있다. 예를 들어, CenR/카고 조성물은 단독으로 투여될 수도 있고, 하나 이상의 다른 CenR 성분, 하나 이상의 다른 카고 조성물, 하나 이상의 공조성물, 또는 이들의 배합물과 함께 사용될 수 있다. CenR 요소는 CenR 요소 및 본 발명에서 기술한 바와 같은 다른 성분을 함유하는 조성물 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어, CenR 조성물은 하나 이상의 다른 CenR 성분, 하나 이상의 카고 조성물, 또는 이들의 배합물을 추가로 함유할 수 있다.
다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물은 함께 사용될 수 있다. 이와 마찬가지로, 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물도 함께 사용될 수 있다. 다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물이 함께 사용되는 경우, 단일 타입의 공조성물, 단일 타입의 카고 조성물, 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물과 함께 사용될 수 있다. 마찬가지로, 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물이 함께 사용되는 경우, 단일 타입의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트 또는 CendR 조성물과 함께, 혹은 다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물과 함께 사용될 수 있다. 함께 사용된다는 것은 동일한 조성물 형태로, 동시에, 동일한 치료에, 동일한 치료 방법으로, 동일한 치료 과정 등으로 함께 사용되는 것을 의미한다.
예를 들어, CenR 요소는 하나 또는 다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물; 하나 또는 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물; 또는 이들 중 어떠한 배합물과 함께 사용될 수 있다. 이러한 배합물에 있어서, CenR 요소 자체는 하나 이상의 카고 조성물, 하나 이상의 악세사리 분자, 하나 이상의 귀소 분자 등을 함유하는 동일한 콘쥬게이트 또는 조성물 형태로 배합될 수 있다.
또 다른 예로서, iRGD(단일 펩타이드 내에 CendR 요소와 RGD 요소가 혼합되어 있음)는 하나 또는 다수의 서로 다른 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 화합물, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물 또는 그 배합물; 하나 또는 다수의 서로 다른 공조성물, 다수의 서로 다른 카고 조성물 또는 그 배합물; 또는 이들 중 어떠한 배합물과 함께 사용될 수 있다. 이러한 배합물에 있어서, iRGD 자체는 하나 이상의 카고 조성물, 하나 이상의 악세사리 분자, 하나 이상의 귀소 분자 등을 함유하는 동일한 콘쥬게이트 또는 조성물 형태로 배합될 수 있다.
세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 성분 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 서로 다른 CendR 성분의 배합물 및 서로 다른 공조성물의 배합물에 노출될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분과 하나 이상의 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 공조성물은 CendR 성분(들) 및 공조성물(들)을 함유하는 하나 이상의 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 하나 이상의 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 공조성물은 하나 이상의 별도의 경로로 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소 및 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다.
세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 성분 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 서로 다른 CendR 성분의 배합물 및 서로 다른 카고 조성물의 배합물에 노출될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분과 하나 이상의 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 카고 조성물은 하나 이상의 CendR 성분(들) 및 하나 이상의 카고 조성물(들)을 함유하는 하나 이상의 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 카고 조성물은 하나 이상의 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다.하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 카고 조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 카고 조성물은 하나 또는 그 이상의 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 하나 이상의 CendR 성분 및 하나 이상의 카고 조성물은 하나 이상의 별도의 경로로 대상자에 투여될 수 있다. 본 명세서에 기술된 여러 가지 형태의 다양한 CenR 성분 및 임의선택적인 다양한 공조성물은 다양한 시간에서, 다양한 방식, 형태, 방법, 투여량 등으로 함께 또는 별도로 투여될 수 있다.
세포, 조직 또는 세포/조직은 iRGD 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 iRGD 및 공조성물에 노출될 수 있다. iRGD와 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 iRGD 및 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 공조성물은 하나 이상의 별도의 경로로 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소 및 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 iRGD 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 iRGD 및 카고 조성물에 노출될 수 있다. iRGD와 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. iRGD 및 카고 조성물은 iRGD 및 카고 조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 단독으로 투여될 수도 있고, 본 발명에서 기술한 바와 같은 다른 성분과 함께 투여될 수도 있다. 예를 들어, iRGD/카고 조성물은 단독으로 투여될 수도 있고, 하나 이상의 다른 CenR 성분, 하나 이상의 다른 카고 조성물, 하나 이상의 공조성물, 또는 이들의 배합물과 함께 사용될 수 있다. iRGD는 iRGD 및 본 발명에서 기술한 바와 같은 다른 성분을 함유하는 조성물 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어, iRGD 조성물은 하나 이상의 다른 CenR 성분, 하나 이상의 카고 조성물, 또는 이들의 배합물을 추가로 함유할 수 있다.
CendR 펩타이드는 세포, 조직 또는 세포/조직의 투과성을 높일 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 대상자 내에 존재할 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 펩타이드 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 펩타이드 및 공조성물에 노출될 수 있다. CendR 펩타이드 및 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드 및 공조성물은 CendR 펩타이드와 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드 및 공조성물은 별개의 경로를 통해 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에서, CendR 펩타이드와 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 펩타이드 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 펩타이드 및 카고 조성물에 노출될 수 있다. CendR 펩타이드 및 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드 및 카고 조성물은 CendR 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다.
CendR 조성물은 세포, 조직 또는 세포/조직의 투과성을 높일 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 대상자 내에 존재할 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 조성물 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 조성물 및 공조성물에 노출될 수 있다. CendR 조성물 및 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 조성물 및 공조성물은 CendR 조성물와 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 조성물 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 조성물 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 조성물 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 조성물 및 공조성물은 별개의 경로를 통해 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에서, CendR 조성물과 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 조성물 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 조성물 및 카고 조성물에 노출될 수 있다. CendR 조성물 및 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 조성물 및 카고 조성물은 CendR 조성물 및 카고 조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 보다 일반적으로, CendR 성분은 CendR 요소 및 카고 조성물 둘 다를 함유할 수 있다. 예를 들어, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 및 CendR 조성물은 CendR 요소 및 카고 조성물 둘 다를 함유할 수 있다.
CendR 콘쥬게이트는 세포, 조직 또는 세포/조직의 투과성을 높일 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 대상자 내에 존재할 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 콘쥬게이트 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 콘쥬게이트 및 공조성물에 노출될 수 있다. CendR 콘쥬게이트 및 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 콘쥬게이트 및 공조성물은 CendR 콘쥬게이트와 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 콘쥬게이트 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 콘쥬게이트 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 콘쥬게이트 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 콘쥬게이트 및 공조성물은 별개의 경로를 통해 대상자에 투여될 수 있다. 일부 형태에서, CendR 콘쥬게이트와 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물에 노출될 수 있다. CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물은 CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다.
CendR 요소는 아미노산 서열의 전부 또는 일부일 수 있다. 아미노산 서열은 단백질 또는 펩타이드의 전부 또는 일부일 수 있다. CendR 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드의 전부 또는 일부일 수 있다. CendR 콘쥬게이트는 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 CendR 요소를 함유할 수 있다. 아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 분자를 추가로 함유할 수 있다. 아미노산 서열은 하나 이상의 귀소 분자를 추가로 함유할 수 있다. CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 카고 조성물을 함유할 수 있다. CendR 조성물은 하나 이상의 카고 조성물을 함유할 수 있다.
일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 단백질 또는 펩타이드 내의 유일한 기능성 내재화 요소이다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있지만, CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있지만, CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소는 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소는 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소는 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드 내의 유일한 기능성 내재화 요소이다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
일부 형태에 있어서, CendR 펩타이드는 CendR 요소가 CendR 펩타이드 내에 존재할 때 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, CendR 요소가 CendR 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 펩타이드는 CendR 요소가 CendR 펩타이드 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있지만, CendR 요소가 CendR 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 펩타이드는 CendR 요소가 CendR 펩타이드 내에 존재할 때 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있지만, CendR 요소가 CendR 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 펩타이드는 공조성물과 결합됨이 없이 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하다. 일부 형태에 있어서, CendR 펩타이드는 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 펩타이드는 공조성물과 결합됨이 없이 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소는 CendR 펩타이드 내의 유일한 기능성 내재화 요소이다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 펩타이드에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 펩타이드에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 펩타이드에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 펩타이드에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 펩타이드에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 펩타이드에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 펩타이드에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 펩타이드에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 펩타이드에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 펩타이드에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 펩타이드에 노출될 때 향상될 수 있으나, 세포 및 조직이 CendR 펩타이드에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
일부 형태에 있어서, CendR 콘쥬게이트는 CendR 요소가 CendR 콘쥬게이트 내에 존재할 때 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, CendR 요소가 CendR 콘쥬게이트 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 콘쥬게이트는 CendR 요소가 CendR 콘쥬게이트 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있지만, CendR 요소가 CendR 콘쥬게이트 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 콘쥬게이트는 CendR 요소가 CendR 콘쥬게이트 내에 존재할 때 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있지만, CendR 요소가 CendR 콘쥬게이트 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 콘쥬게이트는 공조성물과 결합됨이 없이 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하다. 일부 형태에 있어서, CendR 콘쥬게이트는 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소는 CendR 콘쥬게이트 내의 유일한 기능성 내재화 요소이다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 콘쥬게이트에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
일부 형태에 있어서, CendR 조성물은 CendR 요소가 CendR 조성물 내에 존재할 때 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, CendR 요소가 CendR 조성물 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 조성물은 CendR 요소가 CendR 조성물 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있지만, CendR 요소가 CendR 조성물 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 조성물은 CendR 요소가 CendR 조성물 내에 존재할 때 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있지만, CendR 요소가 CendR 조성물 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, CendR 조성물은 공조성물과 결합됨이 없이 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하다. 일부 형태에 있어서, CendR 조성물은 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소는 CendR 조성물 내의 유일한 기능성 내재화 요소이다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 조성물에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 조성물에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 조성물에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 조성물에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 조성물에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 조성물에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 조성물에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 조성물에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 조성물에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 조성물에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 조성물에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 조성물에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. CendR 펩타이드는 활성화가능한 CendR 펩타이드일 수 있다. 활성화가능한 CendR 펩타이드는 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. CendR 펩타이드는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재할 수 있다. CendR 콘쥬게이트는 활성화가능한 CendR 콘쥬게이트일 수 있다. 활성화가능한 CendR 콘쥬게이트는 프로테아제-활성화가능한 CendR 콘쥬게이트일 수 있다. CendR 콘쥬게이트는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재할 수 있다. CendR 조성물은 활성화가능한 CendR 조성물일 수 있다. 활성화가능한 CendR 조성물은 프로테아제-활성화가능한 CendR 조성물일 수 있다. CendR 조성물은 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재할 수 있다.
단백질 또는 펩타이드는 환형일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 직선형일 수 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재할 수 있다. 공조성물은 치료제를 함유할 수 있다. 공조성물은 검출제를 함유할 수 있다. 공조성물은 담체, 운반체, 또는 둘 다를 함유할 수 있다. 공조성물은 예를 들어, 치료성 단백질, 치료성 화합물, 치료성 조성물, 항혈관형성제, 혈관형성제, 암 화학치료제, 톡신, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 성장인자, 사이토킨, 케모카인, 하나 이상의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물, 항체, 핵산, 핵산 유사체, 세포, 바이러스, 파지, 바이러스 입자, 파지 입자, 바이러스 캡시드, 파지 캡시드, 바이러스 유사입자, 리포솜, 미셀, 비드, 나노입자, 마이크로입자, 화학치료제, 조영제, 영상제, 표지, 표지화제 또는 그 배합물 등을 함유할 수 있다.
카고 조성물은 치료제를 함유할 수 있다. 카고 조성물은 검출제를 함유할 수 있다. 카고 조성물은 담체, 운반체, 또는 둘 다를 함유할 수 있다. 카고 조성물은 예를 들어, 치료성 단백질, 치료성 화합물, 치료성 조성물, 항혈관형성제, 혈관형성제, 암 화학치료제, 톡신, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 성장인자, 사이토킨, 케모카인, 하나 이상의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물, 항체, 핵산, 핵산 유사체, 세포, 바이러스, 파지, 바이러스 입자, 파지 입자, 바이러스 캡시드, 파지 캡시드, 바이러스 유사입자, 리포솜, 미셀, 비드, 나노입자, 마이크로입자, 화학치료제, 조영제, 영상제, 표지, 표지화제 또는 그 배합물 등을 함유할 수 있다.
일부 형태에 있어서, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 펩타이드와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 콘쥬게이트와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 조성물과 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 펩타이드와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 콘쥬게이트와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다. 일부 형태에 있어서, CendR 조성물과 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
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본 발명은 CendR 요소 및 하나 이상의 공조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드 및 하나 이상의 공조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트 및 하나 이상의 공조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물 및 하나 이상의 공조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 CendR 요소 및 하나 이상의 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 하나 이상의 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드 및 하나 이상의 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 하나 이상의 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트 및 하나 이상의 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 하나 이상의 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물 및 하나 이상의 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 하나 이상의 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다.
본 발명은 CendR 요소 및 카고 조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물 및 카고 조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 CendR 요소 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다.
본 발명은 CendR 요소 및 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드 및 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트 및 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물 및 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 CendR 요소 및 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 하나 이상의 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드 및 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 하나 이상의 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트 및 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 하나 이상의 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물 및 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 하나 이상의 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 CendR 요소, 악세사리 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 요소와 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드, 악세사리 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 펩타이드와 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트, 악세사리 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 콘쥬게이트와 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물, 악세사리 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 조성물과 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드, 악세사리 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 펩타이드는 악세사리 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트, 악세사리 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 콘쥬게이트는 악세사리 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물, 악세사리 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 조성물은 악세사리 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이들 조성물에서, 악세사리 분자는 악세사리 펩타이드일 수도 있고 이를 함유할 수도 있다. 악세사리 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다. 이들 조성물에 있어서, 조성물은 하나 이상의 공조성물 및/또는 하나 이상의 악세사리 분자를 함유할 수 있으며, 이 때 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물과 하나 이상의 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고, CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물과 하나 이상의 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
또한, 본 발명은 CendR 요소, 귀소 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 요소와 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드, 귀소 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 펩타이드와 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트, 귀소 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 콘쥬게이트와 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물, 귀소 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 조성물과 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드, 귀소 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 펩타이드는 귀소 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트, 귀소 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 콘쥬게이트는 귀소 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물, 귀소 분자 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 조성물은 귀소 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이들 조성물에서, 귀소 분자는 귀소 펩타이드일 수도 있고 이를 함유할 수도 있다. 귀소 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다. 이들 조성물에 있어서, 조성물은 하나 이상의 공조성물 및/또는 하나 이상의 귀소 분자를 함유할 수 있으며, 이 때 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물과 하나 이상의 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고, CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물과 하나 이상의 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
또한, 본 발명은 CendR 요소, 악세사리 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 요소와 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드, 악세사리 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 펩타이드와 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트, 악세사리 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 콘쥬게이트와 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물, 악세사리 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 조성물과 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드, 악세사리 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 펩타이드는 악세사리 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트, 악세사리 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 콘쥬게이트는 악세사리 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물, 악세사리 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 조성물은 악세사리 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이들 조성물에서, 악세사리 분자는 악세사리 펩타이드일 수도 있고 이를 함유할 수도 있다. 악세사리 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다. 이들 조성물에 있어서, 조성물은 하나 이상의 카고 조성물 및/또는 하나 이상의 악세사리 분자를 함유할 수 있으며, 이 때 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물과 하나 이상의 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고, CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물과 하나 이상의 악세사리 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
또한, 본 발명은 CendR 요소, 귀소 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 요소와 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드, 귀소 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 펩타이드와 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트, 귀소 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 콘쥬게이트와 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물, 귀소 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 조성물과 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 펩타이드, 귀소 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 펩타이드와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 펩타이드는 귀소 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 콘쥬게이트, 귀소 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 콘쥬게이트와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 콘쥬게이트는 귀소 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 조성물, 귀소 분자 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 조성물과 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고 상기 CendR 조성물은 귀소 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이들 조성물에서, 귀소 분자는 귀소 펩타이드일 수도 있고 이를 함유할 수도 있다. 귀소 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다. 이들 조성물에 있어서, 조성물은 하나 이상의 카고 조성물 및/또는 하나 이상의 귀소 분자를 함유할 수 있으며, 이 때 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물과 하나 이상의 카고 조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고, CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물과 하나 이상의 귀소 분자는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소 및 악세사리 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하고, 상기 아미노산 서열은 CendR 요소와 악세사리 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이들 조성물에서, 악세사리 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다. 이들 조성물에 있어서, 조성물은 하나 이상의 공조성물 및/또는 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유할 수 있으며, 이 때 단백질 또는 펩타이드와 하나 이상의 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고, 단백질 또는 펩타이드와 하나 이상의 악세사리 펩타이드는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소 및 귀소 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하고, 상기 아미노산 서열은 CendR 요소와 귀소 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이들 조성물에서, 귀소 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다. 이들 조성물에 있어서, 조성물은 하나 이상의 공조성물 및/또는 하나 이상의 귀소 펩타이드를 함유할 수 있으며, 이 때 단백질 또는 펩타이드와 하나 이상의 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고, 단백질 또는 펩타이드와 하나 이상의 귀소 펩타이드는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소 및 악세사리 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하고, 상기 아미노산 서열은 CendR 요소와 악세사리 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이들 조성물에서, 악세사리 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다. 이들 조성물에 있어서, 조성물은 하나 이상의 카고 조성물 및/또는 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유할 수 있으며, 이 때 단백질 또는 펩타이드와 하나 이상의 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있고, 단백질 또는 펩타이드와 하나 이상의 악세사리 펩타이드는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 CendR 요소 및 귀소 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 단백질 또는 펩타이드 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열을 함유하고, 상기 아미노산 서열은 CendR 요소와 귀소 펩타이드를 함유하며 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 이들 조성물에서, 귀소 펩타이드는 CendR 요소와 중복될 수 있고 CendR 요소와 별개일 수도 있다. 이들 조성물에 있어서, 조성물은 하나 이상의 카고 조성물 및/또는 하나 이상의 귀소 펩타이드를 함유할 수 있으며, 이 때 단백질 또는 펩타이드와 하나 이상의 카고 조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고, 단백질 또는 펩타이드와 하나 이상의 귀소 펩타이드는 서로 공유결합되거나 비공유 결합되어 있다.
본 명세서에서, 성분(CendR 요소 및 공조성물의 경우)에 대한 언급에서 "공유결합되어 있지 않은"이라는 용어는 성분들이 공유 결합에 의해 연결되어 있지 않다는 것을 의미한다(예를 들어, CendR 요소와 공조성물은 공유결합에 의해 연결되어 있지 않다). 즉, 예를 들어 CendR 요소와 공조성물 사이에 연소 사슬의 공유 결합이 존재하지 않는다. 역으로, 성분(CendR 요소 및 카고 조성물의 경우)에 대한 언급에서 "공유결합된"이라는 용어는 성분들이 공유 결합에 의해 연결되어 있다는 것을 의미한다(예를 들어, CendR 요소와 카고 조성물은 공유 결합에 의해 연결되어 있다). 즉, 예를 들어 CendR 요소와 카고 조성물 사이에 연속 사슬의 공유 결합이 존재한다. 성분들은 직접적으로 또는 간접적으로 공유결합될 수 있다. 직접적인 공유 결합은 각 성분들의 원자 사이에 공유 결합이 존재하는 것을 말한다. 간접적인 공유 결합은 각 성분들의 원자 사이에는 공유 결합이 존재하지 않는 것을 말한다. 즉, 연결되어 있는 성분들 중 어느 것에 속하지 않는 원자 또는 일부 다른 원자가 성분들의 원자 사이에 있다는 것을 의미한다. 직접 및 간접 공유 결합은 연속 사슬의 공유 결합을 포함한다.
비공유 결합은 비공유 결합 및 상호작용에 의해 성분들이 결합되는 것을 의미한다. 비공유 결합은 직접적 또는 간접적일 수도 있다. 직접적인 비공유 결합이라는 것은 각각 공유 결합의 사슬에 의해 성분들에 연결되는 원자를 포함하는 비공유 결합을 의미한다. 따라서, 직접적인 비공유 결합의 경우, 연결되는 성분들 사이에 다른 분자가 위치하지 않는다. 직접적인 비공유 결합이라는 것은 성분들이 공유 결합되어 있지 않은, 성분을 연결하는 분자 및 결합의 사슬을 의미한다(즉, 비공유 결합에 의해 성분들 사이에 존재하는 성분들이 아닌 하나 이상의 별도의 분자가 존재한다).
성분(CendR 요소 및 공조성물의 경우)에 대한 언급에서 "비공유 결합되어 있지 않은"이라는 것은 성분들 사이에 어떠한 직접적인 또는 간접적인 비공유 결합이 없다는 것을 의미한다. 즉, 예를 들어, CendR 요소에 공유결합되어 있는 원자가 공조성물에 공유결합되어 있는 원자와의 비공유 결합에 포함되어 있지 않다. 이러한 의미에서, CendR 요소와 공조성물은 이들이 다수의 개입성 비공유 결합에 의해 간접적으로 연결되는 조성물 중에 함께 존재할 수 있다. 예를 들어, CendR 요소와 공조성물은 이들이 직접적으로 비공유 결합되어 있지 않은 담체 중에 함께 존재할 수 있다. 간접적으로 비공유 결합되어 있지 않는 것으로 언급되는 CendR 요소와 공조성물은 연속적인 조성물 중에 함께 존재할 수 있다. 성분(CendR 요소 및 공조성물의 경우)에 대한 언급에서 "직접적으로 비공유 결합되어 있지 않은"이라는 것은 성분들 사이에 어떠한 직접적인 비공유 결합이 없다(간접적인 비공유 결합이 존재할 수도 있다)는 것을 의미한다. 성분(CendR 요소 및 공조성물의 경우)에 대한 언급에서 "간접적으로 비공유 결합되어 있지 않은"이라는 것은 성분들 사이에 어떠한 직접적인 또는 간접적인 비공유 결합이 없다는 것을 의미한다.
성분들은 직접적인 및 간접적인 비공유 결합을 포함하는 다수의 사슬 및 경로에 의해 비공유 결합될 수 있다는 점을 이해해야 한다. 이러한 정의의 목적을 위해서, 단일의 직접적인 비공유 결합의 존재는 비록 간접적인 비공유 결합도 존재할지라도, 직접적인 비공유 결합의 연결을 가능하게 한다. 이와 마찬가지로 성분들 사이의 공유 결합의 존재는 비록 비공유 결합도 존재할지라도, 성분들이 공유 결합되어 있다는 것을 의미한다. 또한, 서로 비공유적 연결이 없는 공유 결합 성분들은 비공유 결합되어 있지 않은 성분들의 정의의 범위 내에 있는 것으로 고려되지 않는다는 것을 이해해야 한다.
일부 형태에 있어서, 공조성물은 기능성 내재화 요소를 함유하지 않는다. 공조성물은 기능성 내재화 요소를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 귀소 분자를 함유하지 않는다. 공조성물은 귀소 분자를 함유할 수 있다. 공조성물은 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하지 않는다. 공조성물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 악세사리 분자를 함유하지 않는다. 공조성물은 악세사리 분자를 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물은 악세사리 펩타이드를 함유하지 않는다. 공조성물은 악세사리 펩타이드를 함유할 수 있다. 공조성물은 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다.
CendR 요소는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트, 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 CendR 요소, 또는 CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 악세사리 분자는 CendR 요소, CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질 및/또는 CendR 펩타이드와 배합되어 사용될 수 있으며 유용한 기능을 가지는 어떠한 분자, 화합물, 성분 등일 수도 있다. 유용한 악세사리 분자의 예로는 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 등이 있다. 서로 다른 악세사리 분자들은 서로 같은 기능 또는 다른 기능을 가질 수도 있다. 같은 기능, 다른 기능 또는 둘 다의 기능을 가진 악세사리 분자는 CendR 요소, CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, 및/또는 CendR 펩타이드와 결합될 수 있다.
악세사리 분자는 CendR 요소와 별개일 수도 있고, CendR 요소와 중복될 수 있다. 예를 들어, 일부 악세사리 분자는 아미노산 서열이다. 이러한 경우, CendR 요소로 구성되어 있는 아미노산 서열이 악세사리 아미노산 서열로 구성되어 있는 아미노산 서열과 중복될 수 있다. 예를 들어, iRGD, LyP-1, iNGR 및 RGR 펩타이드 각각은 펩타이드 내에서 서로 중복되는 악세사리 서열과 CendR 서열을 함유한다. 이와는 다르게, 악세사리 분자는 CendR 요소와 중복되지 않는 별도의 독립체일 수 있다. 예를 들어, CendR 요소가 아닌 HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iKGR 또는 RGD 펩타이드는 CendR 요소와 중복되지 않는 아미노산 서열을 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 악세사리 분자는 예를 들어, CendR 요소에 대한 수용체와는 다른 특이적 수용체에 결합하는 CendR 펩타이드의 서열을 함유할 수 있다.
CendR 펩타이드는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 CendR 펩타이드를 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 CendR 펩타이드, 또는 CendR 펩타이드를 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 CendR 콘쥬게이트를 함유하는 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 콘쥬게이트를 함유하는 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. CendR 조성물은 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 CendR 조성물을 함유하는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 CendR 조성물, 또는 CendR 조성물을 함유하는 조성물과 공유결합될 수도 있고 비공유 결합될 수도 있다.
아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 아미노산 서열을 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 아미노산 서열, 또는 아미노산 서열을 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 아미노산 서열은 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CenR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 서열은 CREKA 펩타이드를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 펩타이드를 함유하는 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 펩타이드, 또는 펩타이드를 함유하는 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 단백질을 함유하는 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 단백질, 또는 단백질을 함유하는 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 단백질 또는 펩타이드는 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CenR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 콘쥬게이트는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 콘쥬게이트를 함유하는 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 콘쥬게이트, 또는 콘쥬게이트를 함유하는 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 콘쥬게이트는 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CenR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 조성물은 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 악세사리 분자는 조성물을 함유하는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 악세사리 분자는 조성물, 또는 조성물을 함유하는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 조성물은 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CenR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다.
CendR 요소는 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예로서, 귀소 분자는 CendR 요소, 혹은 CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고 비공유 결합될 수도 있다. 귀소 분자는 CendR 요소와 별개일 수 있고 CendR 요소와 중복될 수도 있다. 예를 들어, 일부 귀소 분자는 아미노산 서열이다. 이러한 경우, CendR 요소로 구성되어 있는 아미노산 서열이 귀소 아미노산 서열로 구성되어 있는 아미노산 서열과 중복될 수 있다. 예를 들어, iRGD, LyP-1, iNGR 및 RGR 펩타이드 각각은 펩타이드 내에서 서로 중복되는 귀소 서열과 CendR 서열을 함유한다. 이와는 다르게, 귀소 분자는 CendR 요소와 중복되지 않는 별도의 독립체일 수 있다. 예를 들어, CendR 요소가 아닌 HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드 또는 RGD 펩타이드는 CendR 요소와 중복되지 않는 아미노산 서열을 함유할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 귀소 분자는 예를 들어, CendR 요소에 대한 수용체와는 다른 특이적 수용체에 결합하는 CendR 펩타이드의 서열을 함유할 수 있다.
CendR 펩타이드는 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 CendR 펩타이드를 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예로서, 귀소 분자는 CendR 펩타이드, 혹은 CendR 펩타이드를 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고 비공유 결합될 수도 있다. CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 CendR 콘쥬게이트를 함유하는 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예로서, 귀소 분자는 CendR 콘쥬게이트, 혹은 CendR 콘쥬게이트를 함유하는 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고 비공유 결합될 수도 있다. CendR 조성물은 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 CendR 조성물을 함유하는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예로서, 귀소 분자는 CendR 조성물, 혹은 CendR 조성물을 함유하는 조성물과 공유결합될 수도 있고 비공유 결합될 수도 있다.
아미노산 서열은 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 아미노산 서열, 혹은 아미노산 서열을 함유하는 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 귀소 분자는 아미노산 서열, 혹은 아미노산 서열을 함유하는 아미노산 서열, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 아미노산 서열은 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CenR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 아미노산 서열은 CREKA 펩타이드를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 펩타이드를 함유하는 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 귀소 분자는 펩타이드 또는 단백질, 혹은 펩타이드를 함유하는 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 단백질을 함유하는 단백질, 콘쥬게이트 또는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 귀소 분자는 단백질, 혹은 단백질을 함유하는 단백질, 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 단백질 또는 펩타이드는 iRGD를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 LyP-1 펩타이드를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 iNGR을 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 RGR 펩타이드를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 CREKA 펩타이드를 함유할 수 있다. 콘쥬게이트는 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 콘쥬게이트 또는, 콘쥬게이트를 함유하는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 귀소 분자는 콘쥬게이트, 혹은 콘쥬게이트를 함유하는 콘쥬게이트 또는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 콘쥬게이트는 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CenR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 콘쥬게이트는 iRGD를 함유할 수 있다. 콘쥬게이트는 LyP-1 펩타이드를 함유할 수 있다. 콘쥬게이트는 iNGR을 함유할 수 있다. 콘쥬게이트는 RGR 펩타이드를 함유할 수 있다. 콘쥬게이트는 CREKA 펩타이드를 함유할 수 있다. 조성물은 하나 이상의 귀소 분자와 결합될 수 있다. 예를 들어, 귀소 분자는 조성물을 함유하는 조성물의 일부일 수 있다. 또 다른 예를 들면, 귀소 분자는 조성물, 또는 조성물을 함유하는 조성물과 공유결합될 수도 있고, 비공유 결합될 수도 있다. 예를 들어, 조성물은 iRGD 펩타이드, LyP-1 펩타이드, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, CREKA 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, CenR 요소가 아닌 RGD 펩타이드 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 조성물은 iRGD를 함유할 수 있다. 조성물은 LyP-1 펩타이드를 함유할 수 있다. 조성물은 iNGR을 함유할 수 있다. 조성물은 RGR 펩타이드를 함유할 수 있다. 조성물은 CREKA 펩타이드를 함유할 수 있다.
아미노산 서열은 세포에의 내재화를 위해 선택될 수 있다. 아미노산 서열은 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 아미노산 서열은 세포에의 내재화 및 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 세포에의 내재화를 위해 선택될 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 콘쥬게이트는 세포에의 내재화 및 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 콘쥬게이트는 세포에의 내재화를 위해 선택될 수 있다. 아미노산 서열은 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 콘쥬게이트는 세포에의 내재화 및 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 조성물은 세포에의 내재화를 위해 선택될 수 있다. 조성물은 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 조성물은 세포에의 내재화 및 조직 침투를 위해 선택될 수 있다.
CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 종양 혈관계에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 종양 또는 암에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 종양 또는 암의 혈관계에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 하나 이상의 특정 단계의 하나 이상의 특정 유형의 종양에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 하나 이상의 서로 다른 단계의 하나 이상의 특정 유형의 종양의 혈관계에 귀소할 수 있다.
CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 폐조직에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 폐 혈관계에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 심장 조직에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 심장 혈관계에 귀소할 수 있다. CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 콘쥬게이트, CendR 조성물, 아미노산 서열, 단백질 또는 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물, 공조성물, 카고 조성물, 또는 그 배합물은 선택적으로 뇌세포, 뇌 줄기세포, 뇌조직 및/또는 뇌혈관계, 신장세포, 신장 줄기세포, 신장조직 및/또는 신장혈관계, 피부세포, 피부 줄기세포, 피부조직 및/또는 피부혈관계, 폐세포, 폐조직 및/또는 폐혈관계, 췌장세포, 췌장조직 및/또는 췌장혈관계, 장세포, 장조직 및/또는 장혈관계, 부신세포, 부신조직 및/또는 부신혈관계, 망막세포, 망막조직 및/또는 망막혈관계, 간세포, 간조직 및/또는 간혈관계, 전립선 세포, 전립선 조직 및/또는 전립선 혈관계, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 및/또는 자궁내막증 혈관계, 난소세포, 난소조직 및/또는 난소혈관계, 종양세포, 종양, 종양혈관 및/또는 종양 혈관계, 골세포, 골조직, 및/또는 골 혈관계, 골수세포, 골수조직, 및/또는 골수 혈관계, 연골세포, 연골조직, 및/또는 연골 혈관계, 줄기세포, 배아 줄기세포, 만능 줄기세포, 유도 만능 줄기세포, 성체 줄기세포, 조혈 줄기세포, 신경 줄기세포, 간엽성 줄기세포, 유방 줄기세포, 내피 줄기세포, 후각 성체 줄기세포, 신경능선 줄기세포, 암 줄기세포, 혈액 세포, 적혈구, 혈소판, 백혈구, 과립구, 호중구, 에오신 호성 백혈구, 호염기성 세포, 림프구성 세포, 림프구, 단핵세포, 손상 혈관계, 손상 조직의 혈관계, 염증있는 조직의 혈관계, 아테롬성 동맥경화 플라크 또는 그 배합체에 귀소할 수 있다.
CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 및 CendR 요소는 적합한 방식에 의해서 설계 및 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질 및 CendR 펩타이드 중의 CendR 요소는 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 아미노산을 선택함으로써 설계 또는 제조될 수 있는데, 이 때 아미노산 서열은 C-말단 요소를 함유하며; 단백질 또는 펩타이드는 상기 선택된 아미노산 서열을 함유하고, 상기 선택된 아미노산 서열은 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재한다.
본 발명은 CendR 요소 및 공조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 CendR 요소 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서, 상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있고 CendR 요소가 타입 2 CendR 요소인 것을 특징으로 하는 조성물을 제공한다.
본 발명은 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 요소 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직에의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 일부 형태에서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서, 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직에의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. CendR 요소는 타입 2 CendR 요소일 수 있다. 본 방법은 세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR에 노출시키기 전에, CendR 요소와 카고 조성물을 결합시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
CendR 요소는 세포, 조직 또는 세포/조직을 투과할 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 대상자 내에 존재할 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 요소 및 공조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 요소 및 공조성물에 노출될 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 요소 및 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출될 수 있다.
CendR 요소는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. CendR 요소는 다수의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 일부 형태에서, 하나 이상의 악세사리 분자는 CendR와 중복된다. 일부 형태에서, 하나 이상의 악세사리 분자는 CendR와 중복되지 않는다. 일부 형태에서, 하나 이상의 악세사리 분자는 RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, 또는 그 배합물을 함유할 수 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 독립적으로, 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 핵 표적화 분자 또는 그 배합물일 수 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 귀소 분자일 수도 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 악세사리 펩타이드일 수도 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 iRGD를 함유할 수 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 LyP-1 펩타이드를 함유할 수 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 iNGR을 함유할 수 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 RGR 펩타이드를 함유할 수 있다.
CendR 요소는 선택적으로 뇌세포, 뇌조직 또는 둘다, 신장세포, 신장조직 또는 둘다, 피부 및 힘줄 세포, 피부 및 힘줄 조직 또는 둘다, 폐세포, 폐조직 또는 둘다, 췌장세포, 췌장조직 또는 둘다, 장세포, 장조직 또는 둘다, 부신세포, 부신조직 또는 둘다, 망막세포, 망막조직 또는 둘다, 간세포, 간조직 또는 둘다, 전립선 세포, 전립선 조직 또는 둘다, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 또는 둘다, 난소세포, 난소조직 또는 둘다, 심장 세포, 심장 조직 또는 둘다, 종양세포, 종양, 종양혈관 또는 그 배합체에 귀소할 수 있다. CendR 요소는 선택적으로 종양 맥관조직에 귀소할 수 있다. CendR 요소는 선택적으로 폐 조직에 귀소할 수 있다. CendR 요소는 선택적으로 심장 조직에 귀소할 수 있다.
CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소는 세린 프로테아제, 플라스민, 플라스미노겐 활성화제, 우로키나아제, 프로프로테인 컨버타아제, 퓨린, 카르복시펩티다아제, 카르복시펩티다아제 A, 글루타메이트-특이적 카르복시펩티다아제, 프롤린-특이적 카르복시펩티다아제, PSMA 또는 그 배합물에 의해 활성화될 수 있다.
CendR 요소 및 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 CendR 요소 및 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 별개의 경로를 통해 대상자에 투여될 수 있다.
일부 형태에서, CendR 요소와 공조성물은 서로 결합되어 있지 않다. 공조성물은 치료제를 함유할 수 있다. 공조성물은 검출제를 함유할 수 있다. 공조성물은 담체, 운반체, 또는 둘 다를 함유할 수 있다. 공조성물 또는 카고 조성물은 치료성 단백질, 치료성 화합물, 치료성 조성물, 암 화학치료제, 톡신, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 성장인자, 사이토킨, 케모카인, 하나 이상의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물, 항체, 핵산, 핵산 유사체, 세포, 바이러스, 파지, 바이러스 입자, 파지 입자, 바이러스 캡시드, 파지 캡시드, 바이러스 유사입자, 리포솜, 미셀, 비드, 나노입자, 마이크로입자, 화학치료제, 조영제, 영상제, 표지, 표지화제, 항혈관형성제, 혈관형성제, 또는 그 배합물 등을 함유할 수 있다.
CendR 요소는 아미노산 서열 내에 함유될 수 있다. 아미노산 서열은 단백질 또는 펩타이드 내에 함유될 수도 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드 내에 함유될 수도 있다. 일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 일부 형태에 있어서, 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다.
일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포, 조직 또는 세포/조직에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 카고 조성물과 결합됨이 없이 세포, 조직 또는 세포/조직에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 카고 조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 아미노산 서열은 단백질 또는 펩타이드 내의 유일한 기능성 내재화 요소일 수 있다.
단백질 또는 펩타이드는 환형일 수 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재할 수 있다. 일부 형태에 있어서, 공조성물 또는 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상될 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물 또는 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상될 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물 또는 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상될 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물 또는 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상될 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물 또는 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상될 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합될 수 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 독립적으로, 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 펩타이드, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 또는 그 배합물일 수 있다. 하나 이상의 악세사리 분자는 귀소 분자일 수 있다. 하나 이상의 귀소 분자는 독립적으로 RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, 또는 그 배합물일 수 있다.
단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유할 수 있다. 아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유할 수 있다. 하나 이상의 악세사리 펩타이드는 독립적으로, 귀소 펩타이드, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 펩타이드, 엔도솜에서 세포질로의 방출 펩타이드, 세포내 표적화 펩타이드, 핵 표적화 펩타이드 또는 그 배합물일 수 있다. 하나 이상의 귀소 펩타이드는 독립적으로, RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드, 또는 그 배합물일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 iRGD를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 LyP-1 펩타이드를 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 iNGR을 함유할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 RGR 펩타이드를 함유할 수 있다.
단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 뇌세포, 뇌조직 또는 둘다, 신장세포, 신장 줄기세포, 신장조직 또는 둘다, 피부 및 힘줄 세포, 피부 및 힘줄 조직 또는 둘다, 폐세포, 폐조직 또는 둘다, 췌장세포, 췌장조직 또는 둘다, 장세포, 장조직 또는 둘다, 부신세포, 부신조직 또는 둘다, 망막세포, 망막조직 또는 둘다, 간세포, 간조직 또는 둘다, 전립선 세포, 전립선 조직 또는 둘다, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 또는 둘다, 난소세포, 난소조직 또는 둘다, 심장 세포, 심장 조직 또는 둘다, 종양세포, 종양, 종양혈관 또는 그 배합체에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 종양에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 종양 맥관조직에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 폐 조직에 귀소할 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 심장 조직에 귀소할 수 있다.
아미노산 서열은 세포에의 내재화를 위해 선택될 수 있다. 아미노산 서열은 조직 침투를 위해 선택될 수 있다. 아미노산 서열은 세포에의 내재화 및 조직 침투를 위해 선택될 수 있다.
일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상될 수 있으나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상될 수 있으나, 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다. 일부 형태에 있어서, 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상될 수 있으나, 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는다.
CendR 요소는 CendR 조성물 내에 함유될 수 있다. CendR 조성물은 하나 이상의 악세사리 분자를 함유할 수 있다. CendR 조성물은 하나 이상의 카고 조성물을 함유할 수 있다. CendR 조성물은 하나 이상의 귀소 분자를 함유할 수 있다. CendR 요소는 CendR 콘쥬게이트 내에 함유될 수 있다. CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 악세사리 분자를 함유할 수 있다. CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 카고 조성물을 함유할 수 있다. CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 귀소 분자를 함유할 수 있다.
세포, 조직 또는 세포/조직은 다수의 악세사리 분자에 노출될 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 다수의 귀소 분자에 노출될 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 다수의 카고 조성물에 노출될 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 다수의 CendR 요소에 노출될 수 있다. 세포, 조직 또는 세포/조직은 다수의 공조성물에 노출될 수 있다.
상술한 바와 같이, C-말단 요소(CendR 요소)는 아르기닌, 리신 또는 리신-글리신(타입 1 CendR 요소의 경우), 혹은 히스티딘 또는 서열 X1X2X3X4(X1은 R, K 또는 H이고, X4는 R, K, H 또는 KG이며, X2 및 X3는 각각 독립적인 아미노산임)을 갖는 아미노산 서열(타입 2 CendR 요소의 경우)이다.
본 명세서에서, "세포에의 내재화를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 것은 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포 내로 유입시키기 위한 특정 의도를 가지고 아미노산 서열을 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포 내로 유입시키기 위한 의도 없이 아미노산 서열을 선택하는 것은 "세포에의 내재화를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 아미노산 서열을 선택하는 것은 "세포에의 내재화를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 아미노산 서열의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "세포에의 내재화를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, "조직 침투를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 것은 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 조직 내로 유입(즉, 조직 침투)시키기 위한 특정 의도를 가지고 아미노산 서열을 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드의 조직 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 조직 내로 유입시키기 위한 의도 없이 아미노산 서열을 선택하는 것은 "조직 침투를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드의 조직 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 아미노산 서열을 선택하는 것은 "조직 침투를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드의 조직 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 아미노산 서열의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "조직 침투를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 것은 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 특정 의도를 가지고 아미노산 서열을 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포, 조직 또는 세포/조직 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포, 조직 또는 세포/조직 내로 유입시키기 위한 의도 없이 아미노산 서열을 선택하는 것은 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 아미노산 서열을 선택하는 것은 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 세포, 조직 또는 세포/조직 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 아미노산 서열의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 아미노산 서열을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, 별도의 설명이 없는 한, "세포에의 내재화를 위해 공조성물을 선택한다"는 것은 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 세포 내로 유입시키기 위한 특정 의도를 가지고 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 선택된 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 함께 세포 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 세포 내로 유입시키기 위한 의도 없이 공조성물을 선택하는 것은 "세포에의 내재화를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 공조성물을 세포 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 공조성물을 선택하는 것은 "세포에의 내재화를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 공조성물을 세포 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 공조성물의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "세포에의 내재화를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, 별도의 설명이 없는 한, "조직 침투를 위해 공조성물을 선택한다"는 것은 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 조직 내로 유입(즉, 조직 침투)시키기 위한 특정 의도를 가지고 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 선택된 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 함께 조직 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 조직 내로 유입시키기 위한 의도 없이 공조성물을 선택하는 것은 "조직 침투를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 공조성물을 조직 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 공조성물을 선택하는 것은 "조직 침투를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 공조성물을 조직 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 공조성물의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "조직 침투를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, 별도의 설명이 없는 한, "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 공조성물을 선택한다"는 것은 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 특정 의도를 가지고 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 선택된 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 함께 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 공조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 의도 없이 공조성물을 선택하는 것은 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 공조성물을 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 공조성물을 선택하는 것은 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 공조성물을 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 공조성물의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 공조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, 별도의 설명이 없는 한, "세포에의 내재화를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 것은 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 세포 내로 유입시키기 위한 특정 의도를 가지고 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 선택된 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 함께 세포 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 세포 내로 유입시키기 위한 의도 없이 카고 조성물을 선택하는 것은 "세포에의 내재화를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 카고 조성물을 세포 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 카고 조성물을 선택하는 것은 "세포에의 내재화를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 카고 조성물을 세포 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 카고 조성물의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "세포에의 내재화를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, 별도의 설명이 없는 한, "조직 침투를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 것은 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 조직 내로 유입(즉, 조직 침투)시키기 위한 특정 의도를 가지고 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 선택된 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 함께 조직 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 조직 내로 유입시키기 위한 의도 없이 카고 조성물을 선택하는 것은 "조직 침투를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 카고 조성물을 조직 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 카고 조성물을 선택하는 것은 "조직 침투를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 카고 조성물을 조직 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 카고 조성물의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "조직 침투를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, 별도의 설명이 없는 한, "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 것은 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 특정 의도를 가지고 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 선택, 확인, 설계, 또는 범주화하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 선택된 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 함께 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 것이 아닌 일부 의도 또는 능력을 위해, 카고 조성물과 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소를 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 의도 없이 카고 조성물을 선택하는 것은 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당되지 않는다. 카고 조성물을 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입시키기 위한 의도 뿐만 아니라 일부 그 목적 또는 능력을 위해 카고 조성물을 선택하는 것은 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다. 따라서, 카고 조성물을 세포 및 조직 중의 하나 또는 둘 다 내로 유입하기 위한 특정 의도 이외에도 카고 조성물의 선택을 변경시키지 않는 추가적인 목표 및 목적이 존재하는 경우는 "세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위해 카고 조성물을 선택한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, "한 화합물 또는 조성물이 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 것은 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되어 있지 않은 화합물 또는 조성물을 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되는 상태로 되게 하거나 그런 상태를 발생시키는 어떤 작용을 의미한다. 한 예로서, 귀소 분자와 CendR 요소가 공유결합된다는 것은 "귀소 분자가 CendR 분자와 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 의미에 해당된다. 또 다른 예로서, 비존재물 개념으로서 출발해서, CendR 펩타이드가 결합 또는 연결되어야 하는 물질을 포함하는 조성물의 일부로서 제조되는 CendR 펩타이드의 경우, "CendR 펩타이드가 그 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 의미에 해당된다. 예를 들어, 목적하는 아미노산 서열 및 C-말단 요소를 함유하는 아미노산 서열을 둘 다 포함하는 펩타이드의 제조는 목적하는 아미노산 서열이 C-말단 요소를 함유하는 아미노산 서열과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다는 의미에 해당된다. 그러나, 일반적으로, 목적하는 아미노산 서열 및 C-말단 요소를 함유하는 아미노산 서열을 자연적으로 둘 다 포함하는 단백질 또는 펩타이드의 합성은 "목적하는 아미노산 서열이 C-말단 요소를 함유하는 아미노산 서열과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 의미에 해당되지 않는다.
본 명세서에서, "공조성물이 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 것은 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되어 있지 않은 공조성물을 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되는 상태로 되게 하거나 그런 상태를 발생시키는 어떤 작용을 의미한다. 보다 명확하게 말하자면, "공조성물이 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 것은 공조성물과 다른 어떤 물질이 공유 결합되거나 비공유 결합되는 상태로 되게 하거나 그런 상태를 발생시키는 어떤 작용을 의미한다. 한 예로서, 공조성물과 또 다른 공조성물이 공유결합된다는 것은 "공조성물이 또 다른 조성물과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 의미에 해당된다. 또 다른 예로서, 비존재물 개념으로서 출발해서, 공조성물이 결합 또는 연결되어야 하는 물질을 포함하는 조성물의 일부로서 제조되는 공조성물의 경우, "공조성물이 그 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, "카고 조성물이 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 것은 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되지 않은 카고 조성물을 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되는 상태로 되게 하거나 그런 상태를 발생시키는 어떤 작용을 의미한다. 보다 명확하게 말하자면, "카고 조성물이 다른 어떤 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 것은 카고 조성물과 다른 어떤 물질이 공유 결합되거나 비공유 결합되는 상태로 되게 하거나 그런 상태를 발생시키는 어떤 작용을 의미한다. 한 예로서, 카고 조성물과 또 다른 카고 조성물이 공유결합된다는 것은 "카고 조성물이 또 다른 조성물과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 의미에 해당된다. 또 다른 예로서, 비존재물 개념으로서 출발해서, 카고 조성물이 결합 또는 연결되어야 하는 물질을 포함하는 조성물의 일부로서 제조되는 카고 조성물의 경우, "카고 조성물이 그 물질과 공유 결합되거나 비공유 결합되도록 유발한다"는 의미에 해당된다.
본 명세서에서, "CenR 요소" 라는 용어는 C-말단 아르기닌, C-말단 리신, 또는 리신-글리신 서열(타입 1 CendR 요소의 경우), 혹은 C-말단 히스티딘 또는 서열 X1X2X3X4(X1은 R, K 또는 H이고, X4는 R, K, H 또는 KG이며, X2 및 X3는 각각 독립적으로 아미노산임)를 갖는 C-말단 아미노산 서열(타입 2 CendR 요소의 경우)을 의미한다. 또한, 일부 타입 2 CenR 요소는 R/K/HXXR/K/H (SEQ ID NO:20), R/KXXR/K (SEQ ID NO:23), 및 R/K/HXXKG (SEQ ID NO:21)로 기재될 수 있다. 또한, X1, X2 및 X3 아미노산은 예를 들어, 중복 악세사리 펩타이드 및 귀소 펩타이드의 혼입에 의해 세포 표면에서 NRP-1 분자에 대한 추가적인 단백질을 보강하기 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, X1, X2 및 X3 아미노산은 CenR 요소(및 CenR 요소를 함유하는 조성물, 콘쥬게이트, 단백질, 및 펩타이드)의 선별성 및 내재화 및/또는 조직 침투 잠재성을 조정하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, CendR 요소는 C-말단 요소를 갖는 아미노산 서열을 함유하는 단백질 또는 펩타이드를 포함하거나, C-말단 요소를 갖는 아미노산 서열로 구성되는 단백질 또는 펩타이드를 포함하거나, C-말단 요소를 갖는 아미노산 서열로 구성되는 단백질 또는 펩타이드를 포함할 수 있다. 또한 임의선택적으로, X1X2X3X4 형태의 CendR에 있어서 X2, X3 또는 둘 다에서 아미노산을 제외시킬 수 있다. 예를 들어, 필요하다면 X2 및 X3로서 각각 G 및 D의 동시 사용을 배제할 수 있다.
CenR 요소의 예로는 XXR/K/H, XXR/K, XXR/H, XXK/H, XXR, XXK, XXH, XXKG, RXXR/K/H, RXXR/K, RXXR/H, RXXK/H, RXXR, RXXK, RXXH, RXXKG, KXXR/K/H, KXXR/K, KXXR/H, KXXK/H, KXXR, KXXK , KXXH, KXXKG, HXXR/K/H, HXXR/K, HXXR/H, HXXK/H, HXXR, HXXK, HXXH, HXXKG, R/K/HXXR, R/KXXR, R/HXXR, K/HXXR, RXXR, KXXR, HXXR, R/K/HXXK, R/KXXK, R/HXXK, K/HXXK, RXXK, KXXK, HXXK, R/K/HXXH, R/KXXH, R/HXXH, K/HXXH, RXXH, KXXH, HXXH, R/K/HXXKG, R/KXXKG, R/HXXKG, K/HXXKG, RXXKG, KXXKG, 및 HXXKG 등이 있다.
편의상, 아르기닌, 리신, 리신-글리신 페어 또는 히스티딘이 C-말단에 위치하고, C-말단에 위치하는 아르기닌, 리신, 리신-글리신 페어 또는 히스티딘의 노출이 예정되거나 의도되는 경우, CenR 요소를 구성하는 아미노산 모티프는 CenR 요소 또는 잠재적 CenR 요소라고 말할 수 있다.
CendR 요소는 예를 들어, 아미노산, 아미노산 모방체, 펩타이드 동족체, 아미노산 유사체, 펩타이드 유사체 등으로 구성될 수 있다. CendR 요소 및 CendR 펩타이드의 구조, 설계 등은 본 명세서에서 편의상 아미노산 및 아미노산으로 구성되는 펩타이드의 용어로 기재되지만, 아미노산 및 펩타이드의 유사체, 모방체, 수정된 형태 등도 또한 CendR 요소 및 CendR 펩타이드로서 사용될 수 있으며, 유사한 원리를 이용하여 설계될 수 있다는 점을 이해해야 한다.
본 명세서에 기재한 바와 같이, 일부 성분은 CendR 요소와 중복될 수 있다. 일반적으로, CendR 요소와 중복되는 성분은 아미노산 서열을 함유하는 성분일 것이며, 그 성분의 아미노산 서열의 일부 또는 전부는 CendR 요소의 아미노산과 중복될 것이다. 일반적으로, 이러한 중복은 성분의 일부이거나 성분 중에 존재하거나 성분을 특정화하는 아미노산이 CendR 요소를 구성하는 아미노산과 공유되거나 그 범위 내에 있다는 점이 특징이다. 타입 1 CendR 요소의 경우, C-말단 아르기닌, 리신 또는 리신-글리신 서열이 성분의 일부이거나 성분 중에 존재하거나 성분을 특정화하는 아미노산일 때, 성분이 CendR 요소와 중복된다. 예를 들어, 귀소 펩타이드 NGPAHA(SEQ ID NO:24)는 아르기닌을 함유하는 CendR 요소와 중복될 수 있다. 본 실시예에서는, 귀소 펩타이드 내의 아르기닌 잔기가 CendR 요소이다.
타입 2 CendR 요소의 경우, 하나 이상의 아미노산 X1, X2, X3, 및/또는 X4, 혹은 C-말단 히스티딘이 성분의 일부이거나 성분 중에 존재하거나 성분을 특정화하는 아미노산일 때, 성분이 CendR 요소와 중복된다. 예를 들어, 귀소 펩타이드 CREKA(SEQ ID NO:7)는 RGCR(SEQ ID NO:19)을 함유하는 CendR 요소와 중복됨으로써 RGCREKA(SEQ ID NO:18)(밑줄친 CendR와 함께)를 형성할 수 있다. 본 실시예에서, CendR 요소의 마지막 두 아미노산(CR)도 또한 귀소 펩타이드 중의 처음 2개 아미노산으로서 역할을 한다. 또 다른 실시예에서, 귀소 펩타이드 NGRAHA(SEQ ID NO:24)는 아르기닌(또는 리신이나 히스티딘)의 첨가에 의해 타입 2 CendR 요소와 중복될 수 있으며, 내부 아르기닌을 사용함으로써 중복된 귀소 펩타이드 및 CendR 요소 RNGRAHA (SEQ ID NO:25)(밑줄친 CendR와 함께)를 생성시킬 수 있다. 또 다른 예로서, 귀소 펩타이드 CREKA(SEQ ID NO:7)는 RREK(SEQ ID NO:26)을 함유하는 CendR 요소와 중복됨으로써 RREKA(SEQ ID NO:27)(밑줄친 CendR와 함께)를 형성할 수 있다. CREKA 펩타이드 중의 시스테인은 귀소 기능에 중요한 물질은 아니다. 또 다른 예로서, 귀소 펩타이드 NGR은 CendR 요소, 절단성 모티프, GPDC(SEQ ID NO:28)와 중복될 수도 있고, 이를 활성화하기 위해 첨가될 수도 있으며, 말단 시스테인을 사용하여 환형화됨으로써 CRNGRGPDC(SEQ ID NO:41)(밑줄친 CendR와 함께)를 형성할 수 있다. 또 다른 예로서, 신생혈관(종양 표적화에 있어서)에 친화성을 갖는 우로키나아제 활성화가능한 CendR 펩타이드는 CendR 요소(밑줄친 부분), 우로키나아제 절단 서열(글자색이 짙은 부분), 및 신생혈관성 인테그린(두번 밑줄친 부분)을 조합시킴으로써 다음과 같이 제조할 수 있다.
Figure pct00001
(SEQ ID NO:43). 또 다른 예로서, 신생혈관(종양 표적화에 있어서)에 친화성을 갖는 퓨린 활성화가능한 CendR 펩타이드는 CendR 요소(밑줄친 부분), 퓨린 절단 서열, 및 CD13-귀소 서열(두번 밑줄친 부분)을 조합시킴으로써 다음과 같이 제조할 수 있다.
Figure pct00002
(SEQ ID NO:42). 또 다른 예로서, 신생혈관(CNS 표적화에 있어서)에 친화성을 갖는 퓨린 활성화가능한 CendR 펩타이드는 CendR 요소(밑줄친 부분), 퓨린 절단 서열, 및 신생혈관성 인테그린(두번 밑줄친 부분)을 조합시킴으로써 다음과 같이 제조할 수 있다.
Figure pct00003
(SEQ ID NO:44).
또한, 특정 아미노산 서열을 갖는 성분 및 예를 들어 특정 아미노산 서열을 갖지 않는 특정 스페이서도, 아미노산과 공유되거나 그 범위 내에 있는 성분의 스페이스의 일부 또는 전부가 CendR 요소를 구성하는 경우, CendR 요소와 중복될 수 있다. 예를 들어, 성분이 아미노산 서열 TGLTAXXXXW (SEQ ID NO:45)로 정의되는 경우, 그 성분은 CendR 요소가 성분의 XXXX 부분 내에 있는 CendR 요소와 중복된다. CendR 요소와 중복되는 성분은 한쪽 또는 양쪽 말단에서 CendR 요소를 초과하여(즉, CendR 요소의 N-말단을 초과하여, CendR 요소의 C-말단을 초과하여, 또는 둘다를 초과하여) 확장될 수 있으고, 일반적으로 확장될 것이다.
이러한 원리, 본 명세서에서 기술되는 CendR 요소의 구조적 특이성, 및 CendR 요소와 중복되어야 하는 성분의 구조적인 특이성을 고려하여, 다수의 중복성 CendR 요소가 설계되고 사용될 수 있다. CendR 요소와 성분의 구조적 특이성이 양립될 수 있는 경우, 다수의 서로 다른 성분들이 단일 CendR 요소와 중복될 수 있다. 예를 들어, 귀소 펩타이드 및 프로테아제 절단 부위는 동일한 CendR 요소와 중복될 수 있다.
또한 성분들은 CendR 요소와 인접할 수 있다. 본 명세서에서, CendR 요소와 인접해 있는 성분들은 CendR 요소와 중복되지 않는다. CendR 요소와 인접해 있는 성분들은 CendR 요소의 말단 중 어느 한 쪽에 인접할 수 있다. 성분의 아미노산(또는 다른 분자)가 CendR 요소의 말단 아미노산과 공유 결합되어 있는 경우, 성분은CendR 요소와 인접하는 것이다. CendR 요소와 중복되지 않고 인접하지도 않으나 CendR 요소와 공유 결합되어 있는 성분은 CendR 요소의 업스트림(N-말단), 다운스트림(C-말단) 또는 둘 다(환형 분자에 있어서)일 수 있다.
본 명세서에 기술되는 성분들과 같은 어떠한 성분도 CendR 요소와 중복될 수 있고, 인접할 수 있으며, 및/또는 CendR 요소의 업스트림(N-말단), 다운스트림(C-말단) 또는 둘 다(환형 분자에 있어서)일 수 있다. 이러한 성분의 예로는 악세사리 분자, 귀소 분자,프로테아제 절단 부위 등이 있다. CendR 요소와 결합 또는 연결되어 있는 일부 성분은 CendR 요소의 다운스트림(C-말단)인 것이 유용하다. 예를 들어, CendR 요소의 악세사리 단백질 또는 귀소 펩타이드 다운스트림(및 따라서 활성화를 위한 절단 부위로부터의 다운스트림)을 갖는 활성화가능한 CendR 요소는 활성화될 때 CendR 요소로부터 분리될 것이다. 또 다른 예로서, CendR 요소의 악세사리 분자 또는 귀소 분자 다운스트림(및 따라서 활성화를 위한 절단 부위로부터의 다운스트림)을 갖는 활성화가능한 CendR 요소는 활성화될 때 CendR 요소로부터 분리될 것이다. 이는 CendR 요소 기능을 보다 효과적으로 만들거나, 또는 제거된 성분의 본질과 무관한 효과를 감소시키는 등의 이점을 가질 수 있다.
본 명세서에서 내용, 조합 또는 사용에 대해 기술되는 CendR 요소는 일반적인 CendR 요소, 타입 1 CendR 요소, 타입 2 CendR 요소, 특이적 CendR 요소, 또는 그 배합물일 수 있다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 1 CendR 요소이다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 2 CendR 요소이다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 1 CendR 요소가 아니다. 타입 1 CendR 요소가 아닌 CendR 요소의 예는 C-말단 히스티딘을 갖는 CendR 요소이다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 2 CendR 요소가 아니다. 타입 2 CendR 요소가 아닌 CendR 요소의 예는 아르기닌 또는 리신의 3개의 아미노산 업스트림이 아르기닌, 리신 또는 히스티딘이 아닌, C-말단 아르기닌, 리신, 리신-글리신 페어를 갖는 CendR 요소이다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 1 CendR 요소이고 타입 2 CendR 요소는 아니다. 타입 1 CendR 요소이고 타입 2 CendR 요소가 아닌 CendR 요소의 예는 아르기닌 또는 리신의 3개의 아미노산 업스트림이 아르기닌, 리신 또는 히스티딘이 아닌, C-말단 아르기닌, 리신, 리신-글리신 페어를 갖는 CendR 요소이다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 2 CendR 요소이고 타입 1 CendR 요소는 아니다. 타입 2 CendR 요소이고 타입 1 CendR 요소가아닌 CendR 요소의 예는 C-말단 히스티딘을 갖는 CendR 요소이다. 타입 2 CendR 요소이고 타입 1 CendR 요소가아닌 CendR 요소의 또 다른 예는 아르기닌, 리신 또는 히스티딘의 3개의 아미노산 업스트림이 아르기닌, 리신 또는 히스티딘이 아닌, C-말단 아르기닌, 리신, 히스티딘, 리신-글리신 페어를 갖는 CendR 요소이다. 일부 형태에서, CendR 요소는 타입 1 CendR 요소 또는 타입 2 CendR 요소이다. 특히, 어떤 타입의 CendR 요소, CendR 요소 세트, 및/또는 특정 CendR 요소는 내용, 조합 또는 사용에 있어서 포함될 수도 있고 제외될 수도 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개공보 제 20090226372 호에 기술되어 있는 어떤 CendR 요소는 포함될 수도 있고 제외될 수도 있다. 미국 특허 출원 공개공보 제 20090226372 호는 그 전체 내용, 특히 CendR 요소의 설명 부분이 본 명세서에 참고 문헌으로 포함된다.
세포에 내재화될 수 있는 CendR 요소는 내재화 CendR 요소라고 말할 수 있다. 조직을 침투할 수 있는 CendR 요소는 침투성 CendR 요소라고 말할 수 있다. 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있는 CendR 요소는 내재화 및 침투성 CendR 요소라고 말할 수 있다. 별도의 설명이 없는 한, "CendR 요소"라는 용어는 개별적, 집합적, 또는 배합 형태의 의미를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 "CendR 조성물"이라는 용어는 CendR 요소를 함유하는 조성물을 의미한다. 예를 들어, CendR 요소는 활성일 수도 있고 활성화가능할 수도 있으며 차단될 수도 있다. 예를 들어, CendR 조성물은 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 위치하는 경우, CendR 요소를 함유하는 아미노산 서열을 갖는 단백질 또는 펩타이드를 함유할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "활성화가능한 CendR 요소"라는 용어는 C-말단 요소의 말단 카르복실기와 같은 CendR 요소에 공유 결합되어 있는 분자, 모이어티(moiety), 나노입자, 화합물 또는 다른 조성물을 갖는 CendR 요소를 의미하며, 상기 분자, 분자, 모이어티, 나노입자, 화합물 또는 다른 조성물은 CendR 조성물, 콘쥬게이트, 분자, 단백질, 펩타이드 등의 내재화 및/또는 조직 침투를 차단할 수 있고, 상기 분자, 분자, 모이어티, 나노입자, 화합물 또는 다른 조성물은 제거될 수 있다(예를 들어 말단 카르복실기를 노출하기 위해). 예를 들어, 활성화가능한 CendR 요소는 펩타이드의 C-말단 에 존재할 수 있으며, CendR 요소의 내재화 및/또는 조직 침투를 억제시킬 수 있다. CendR 요소와 공유 결합되어 있는 분자, 모이어티, 나노입자, 화합물 또는 다른 조성물을 "차단기"라고 부른다. 예를 들어, 차단기는 CendR 요소의 C-말단 아르기닌 또는 리신, 혹은 다른 C-아미노산의 말단 카르복실기와, CendR 요소의 C-말단 아미노산과, 또는 C-말단 아미노산이 아닌 CendR 요소의 아미노산과 결합될 수 있다. 또한, 차단기는 CendR 요소의 내재화 및/또는 조직 침투를 억제시킬 수 있는 한, CendR 요소가 아닌 CendR 조성물, 콘쥬게이트, 분자, 단백질, 펩타이드 등의 일부와 결합 또는 연결될 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 조성물은 활성화가능한 CendR 조성물이라고 부른다. 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 콘쥬게이트는 활성화가능한 CendR 콘쥬게이트라고 부른다. 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 단백질은 활성화가능한 CendR 단백질이라고 부른다. 활성화가능한 CendR 요소를 함유하는 CendR 펩타이드는 활성화가능한 CendR 펩타이드라고 부른다.
활성화가능한 CendR 요소는 세포에의 내재화, 조직 침투, 또는 둘 다로부터 차단될 수 있다. 일반적으로 활성화가능한 CendR 요소는 세포에의 내재화 및 조직 침투로부터 차단될 것이다. 적합한 활성화가능한 CendR 요소는 활성화가능한 내재화 및 침투성 CendR 요소라고 부를 수 있다. 그러나, 일부 활성화가능한 CendR 요소는 조직 침투만 또는 세포에의 내재화만 차단될 수 있다. 이러한 활성화가능한 CendR 요소는 활성화가능한 내재화 CendR 요소(세포에의 내재화만 차단되는 CendR 요소의 경우) 또는 활성화가능한 침투성 CendR 요소(조직 침투만 차단되는 CendR 요소)라고 부를 수 있다. 일반적으로, 활성화할 수 있는 내재화 CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소일 것이다. 마찬가지로, 일반적으로 활성화할 수 있는 침투성 CendR 요소는 활성화가능한 침투성 CendR 요소일 것이다. 활성화할 수 있는 내재화 및 침투성 CendR 요소는 활성화가능한 내재화 및 침투성 CendR 요소일 것이다. 차단기의 제거는 CendR 요소의 세포에의 내재화, 조직 침투 또는 둘 다를 가능하게 한다.
활성화가능한 CendR 요소의 절단가능한 결합은 어떠한 적합한 방법으로도 절단될 수 있다. 예를 들어, 절단가능한 결합은 효소적으로 또는 비효소적으로 절단될 수 있다. 효소적 절단의 경우, CendR 요소가 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나, 축적되는 부위에 절단 효소가 존재하게 하거나 공급될 수 있다. 예를 들어, 효소는 CendR 요소가 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나 축적되는 부위에 세포 가까이 존재할 수 있다. 비효소적 절단의 경우, CendR 요소를 절단제와 접촉시키도록 하거나 절단 조건에 놓이게 하거나, 또는 둘 다 가능하다. 절단제는 절단가능한 결합의 절단을 매개하거나 자극할 수 있는 어떠한 물질이어도 된다. 절단 조건은 절단가능한 결합의 절단을 매개하거나 자극할 수 있는 용액일 수도 있고 환경 상태일 수도 있다. 예를 들어, 일부 불안정한 결합은 산성 조건하에, 염기성 조건하에, 또는 반응성 기의 존재하에 절단될 수 있다. 비효소적 절단 조건은 효소의 존재를 제외한 어떠한 절단 조건이어도 된다. 비작용제 절단 조건은 절단제의 존재를 제외한 어떠한 절단 조건이어도 된다.
활성화가능한 CendR 요소는 광범위한 또는 협소한 환경에서 활성화될 수 있다. 일반적으로, CendR 요소는 CendR 요소를 활성화시킬 수 있는 작용제의 기 또는 특이적 작용제와 관련해서 활성화될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 특정 활성화가능한 CendR 요소는 특정 프로테아제에 의해서만 활성화될 수 있다. 이러한 CendR 요소를 활성화가능한 CendR 요소라고 부를 수 있지만, 특정 프로테아제에 의해 활성화가능한 CendR 요소라고도 부를 수 있다.
"프로테아제 활성화가능한 CendR 요소"(또는 "프로테아제-활성화된 CendR 요소"라는 용어는 차단기가 펩타이드 결합에 의해 CendR 요소와 결합되어 있고, 이 결합이 프로테아제에 의해 절단될 수 있을 때의 활성화가능한 CendR 요소를 의미한다. 프로테아제 활성화가능한 CendR 요소 내의 이러한 펩타이드 결합을 절단함으로써 CendR 요소의 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 가능하게 할 수 있다. 한 실시예에서, 차단기는 절단가능한 또는 불안정한 결합에 의해 CendR 요소와 결합될 수 있다. 절단가능한 결합은 예를 들어 효소 또는 화학적 화합물에 의해 절단될 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소 내의 결합을 절단 또는 '파열(labilization)'함으로써 CendR 요소의 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 가능하게 할 수 있다. 이러한 절단 또는 '파열'은 CendR 요소의 활성화라고 부를 수 있다. 프로테아제 활성화가능한 CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소의 한 형태이다. X1X2X3X4 형태의 CendR에 있어서 X2 및 X3 아미노산은 특정 목적을 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, X2, X3 또는 둘 다는 프로테아제 인식 서열의 일부 또는 전부를 형성하도록 선택될 수 있다. 이는 예를 들면, X4 아미노산 이후 부분의 절단에 의해 활성화되는 잠재적 또는 잠재성 CenR 요소로서 CenR 요소를 함유하는 펩타이드의 절단을 가능하게 하거나 특정화하는데 유용할 것이다. 이러한 아미노산 선택의 예는 표 1 및 2에 나타나 있다. 프로테아제 절단 부위는 당업자에게 알려져 있고 개발되어 온 지식을 기초로 하여 예측할 수 있다. 예를 들어, 절단 예측은 웹사이트 cbs.dtu.dk/services/ProP/에서 판단될 수 있다. 유용한 부류의 CendR 요소는 비차단 CendR 요소 및 활성화가능한 CendR 요소로 구성될 수 있으며, 여기에서 활성화가능하지 않은 차단 CendR 요소는 제외된다.
유용한 프로테아제는 염기성 잔기의 C-말단부에서 절단시키는 효소(CendR 요소의 C-말단 잔기는 염기성 잔기일 수 있음) 및 절단 부위의 C-말단부에서 서열을 인식하는(그럼으로써 절단 생성물의 C-말단 서열의 자유로운 선택을 가능하게 하는) 효소를 포함한다. 유용한 프로테아제의 예로는 세린 프로테아제(예를 들어, 플라스민 및 플라스미노겐 활성화제), 우로키나아제, 프로프로테인 컨버타아제(예를 들어, Ducker et al., '프로프로테인 컨버타아제 절단 부위 예측-단백질 공학 설계 및 선택(Prediction of proprotein convertase cleavage sites-Protein engineering Design and Selection)' 17(1): 107 - 112 (2004) 참조), 퓨린, 카르복시펩티다아제, 예컨대 카르복시펩티다아제 A(방향족 또는 분지형 탄화수소 가지 사슬을 가진 아미노산), 글루타메이트-특이적 카르복시펩티다아제, 프롤린-특이적 카르복시펩티다아제, PSMA 및 그 배합물 등이 있다. 세린 프로테아제는 특히 암세포 및 종양을 표적화하는 CendR 요소 및 CendR 조성물에 유용하다. 염기성 잔기의 C-말단부에서 절단시키는 효소의 예로는 Arg-C 프로테아제(아르기닌 잔기의 C-말단부에서 절단시킴; Keil, '단백질분해 특이성(Specificity of Proteiolysis)', Springer-Verlag, Berlin - Heidelberg - New York (1992)), 클로스트리파인(아르기닌 잔기의 C-말단부에서 절단시킴; Keil, 1992), 엔테로키나제(서열 - Asp - Asp - Asp - Asp - Lys -; SEQ ID NO:22), Factor Xa(서열 - Gly - Arg -; Fujikawa et al., 소 인자 X(Stuart factor): '인자 Xa 알파에서 인자 Xa 베타로의 전환(conversion of factor Xa alpha to factor Xa beta)', Proc. Natl. Acad. Sci. 72: 3359 - 3363(1975)), Lys-C(리신 잔기의 C-말단부에서 절단시킴; Keil, 1992), 트롬빈(아르기닌 잔기의 C-말단부에서 절단시킴; Keil, 1992), 트립신(아르기닌 및 리신 잔기의 C-말단부에서 절단시킴; Keil, 1992), 세린 프로테아제, 프로프로테인 컨버타아제(예를 들어, PC1, PC2, PC3, PC4, PC6, PC7, PC8, 퓨린, 페이스(Pace), PACE4, 사이트 1 프로테아제, SIP, SKI, NARC-1, PCSK1, PCSK2, PCSK3, PCSK4, PCSK5, PCSK6, PCSK7, PCSK8 및 PCSK9), 플라스민, 및 플라스미노겐 활성화제 등이 있다. 절단 부위의 C-말단부에서 서열을 인식하는 효소의 예로는 Asp-N 엔도펩티다아제(아스파르트산의 N-말단부에서 절단시킴; Keil, 1992) 및 카르복실펩티다아제, 예컨대 카르복시펩티다아제 A(프롤린, 리신 및 아르기닌을 제외한 C-말단 잔기를 절단시킴) 등이 있다.
또한, 프로테아제의 예는 문헌(Hook, '프로호르몬 및 프로프로테인 프로세싱에 있어서 단백질분해 및 세포 메카니즘(Proteolytic and cellular mechanisms in prohormone and proprotein)', RG Landes Company, Austin, Texas, USA (1998); Hooper et al., Biochem. J. 321: 265 - 279(1997); Werb, 'Cell' 91: 439 - 442(1997); Wolfsberg et al., J. Cell Biol. 131: 275 - 278(1995); Murakami and Dtlinger, Biochem. Biophys. Res. Comm. 146: 1249 - 1259(1987); Ber et al., Biochem. J. 307: 313 - 326(1995); Smyth and Trapani, '최신 면역학(Immunology Today)' 16: 202 - 206(1995); Talanian et al., J.Biol.Chem. 272: 9677 - 9682(1997); 및 Thornberry et al., J. Biol. Chem. 272: 17907 - 17911(1997))에 기재되어 있다.
표 1은 시험관 및 생체 내에서의 표적화 연구에 사용되는 프로테아제-절단가능한 파지 및 대조용 파지를 나타낸 것이다. 기질 파지의 절단 부위는 화살표로 표시되어 있다. 단백질분해에 의해 노출되는 C-말단 잔기는 굵은 글자로 표기되어 있다.

기질 모티프
활성화 효소		 T7박테리오파지의 G10의 C-말단에
디스플레이되는 펩타이드 서열
기질 파지
 후절단 기질 파지의
모방체
1.퓨린절단
컨센서스 		퓨린 GGGRKKR↑STGGG-
(SEQ ID NO:8)
보편적으로 절단 & 내재화될 수 있음.
 GGGRKKR-
(SEQ ID NO:9)
보편적으로 내재화될 수 있음.
2. 트롬빈
기질
 트롬빈 GGGLVPR↑GSGGG-
(SEQ ID NO:10)
배양세포에 트롬빈 첨가시
보편적으로 절단 & 내재화될 수 있음.
 GGGLVPR
(SEQ ID NO:11)
보편적으로 내재화될 수 있음.
3. 플라스미노겐
-유래 서열		 uPA/tPA GGGPCPGR↑VVGGG-
(SEQ ID NO:12)
uPA/tPA-발현 세포에 의해
절단 & 내재화될 수 있음.
 GGGPCPGR-
(SEQ ID NO:13)
보편적으로 내재화될 수 있음.
4. uPA 최소
최적 기질
 uPA GGGPGSGR↑SAGGG-
(SEQ ID NO:14)
uPA-발현 세포에 의해
절단 & 내재화될 수 있음.
 GGGPGSGR-
(SEQ ID NO:15)
보편적으로 내재화될 수 있음.
5. uPA 대체
기질		 uPA GGGPGSGK↑SAGGG-
(SEQ ID NO:16)
uPA-발현 세포에 의해
절단될 수 있음.
 GGGPGSGK-
(SEQ ID NO:17)
내재화될 수 없음.
표 2는 절단 규칙을 나타낸 것이다.
Figure pct00004
하기의 효소는 절단 부위의 반응성 조성물이 발견될 때 절단시킬 수 있다.
효소명 P4 P3 P2 P1 PT P2'
Arg-C
프로테이나제		 - - - R - -
Asp-N
엔도펩티다아제		 - - - - D -
클로스리파인
(클로스트리디오펩티다아제 B)		 - - - R - -
엔테로키나아제
 D 또는 N D 또는 N D 또는 N K - -
인자 Xa A,F,G,I,L,T,V 또는 M D 또는 E G R - -
LysC
 - - - K - -
트롬빈 - - G R G
A,F,G,I,L,T,V 또는 M A,F,G,I,L,T,V,W 또는 A P R D 또는 E 아님 DE 아님
트립신
(예외를 주목)		 - - -
K 또는 R		 P 아님 -
- - W K P -
- - M R P -
효소명
 P4 P3 P2 P1 P1' P2'
예외 법칙: 상기 절단 법칙은 하기의 절단 부위의 조성물에는 적용되지 않는다(즉, 절단이 발생하지 않음).
Figure pct00005
CendR 요소를 활성화시키기 위해 카르복시펩티다아제와 같은 엑소펩티다아제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 카르복시펩티다아제는 CendR 요소를 활성화시키는데 유용한 프로테아제이다. 카르복시펩티다아제는 단백질 및 펩타이드로부터 C-말단 아미노산을 제거한다. 카르복시펩티다아제는 그 기질 선호도의 한계 내에서, 단백질 또는 펩타이드로부터 순차적으로 아미노산을 제거한다. 따라서, 예를 들어, 카르복시펩티다아제는 단백질 또는 펩타이드를 완전하게 또는 거의 완전하게 가수분해할 수 있다. 여러 카르복시펩티다아제는 특정 기질 선호도 또는 한계를 가지기 때문에, 또한 일반적으로 카르복시펩티다아제는 펩타이드 결합만을 절단시키기 때문에, 특정 아미노산, 수정 및/또는 비펩타이드 결합이 존재함으로써 단백질 또는 펩타이드의 카르복시펩티다아제 절단을 제어할 수 있다.
CendR 요소에 있어서, CendR 요소를 함유하는 단백질, 펩타이드 또는 아미노산 서열의 구조 및/또는 수정은 CendR 요소의 C-말단 아미노산에서 카르복시펩티다아제 말단에 의해 절단되도록 선택될 수 있다. 이는 예를 들어, 말단에서 두번째(penultimate) 아미노산으로서, 카르복시펩티다아제가 C-말단 아미노산과의 결합을 절단시키는 것을 싫어하거나 차단하는 아미노산을 CendR 요소 내에 포함시킴으로써 달성될 수 있다. 프롤린은 이러한 아미노산의 한 예이다(많은 카르복시펩티다아제의 경우). 또 다른 예로서, CendR 요소 내의 C-말단 아미노산과 말단에서 두번째 아미노산 사이의 결합은 프로테아제 절단으로부터 보호될 수 있다. 예를 들어, 결합은 비펩타이드 결합일 수도 있고, 메틸레이션과 같은 변형을 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, CendR 요소 내에서 C-말단 아미노산, 말단에서 두번째 아미노산 또는 그 둘다로서 D-아미노산을 사용할 수 있다. D-아미노산의 사용이 제한되는 CendR 요소는 내재화 및 침투 활성을 보유한다. 또 다른 예로서, 카르복시펩티다아제에 대한 기질로서 작용하는 아미노산을 CendR 요소 내의 C-말단 아미노산의 C-말단에 위치시킬 수 있다. 예를 들어, PSMA와 같은 글루타메이트-특이적 카르복시펩티다아제의 경우, CendR 요소의 C-말단 아미노산의 C-말단 및 이에 인접한 위치에 및 CendR 요소를 함유하는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단 위치에 글루탐산 아미노산을 위치시킬 수 있다. 다른 아미노산-특이적(또는 선호적인) 카르복시펩티다아제도 유사한 방식으로 사용될 수 있다. 이러한 경우, CendR 요소 내의 C-말단 아미노산은 카르복시펩티다아제에 대한 기질이 아니어야 한다(또는 카르복시펩티다아제에 대해 선호되지 않는 기질이어야 한다).
결합에 있어서 프로테아제 절단을 감소시키거나 억제할 수 있는 아미노산 결합 및 변형은 공지되어 있으며, 본 발명에서 기술되는 CendR 요소에 사용될 수 있다. 예를 들어, 다양한 화학적 변형 기법 및 변형 모이어티에 대해서는 예컨대, 미국 특허 제 5,554,728 호, 제 6,869,932 호, 제 6,673,580 호, 제 6,552,170 호, 제 6,420,339 호, 미국 특허 공개공보 제 2006/02105226 호 및 국제 특허 출원 WO 2006/136586에 기술되어 있다. 이러한 변형의 몇몇 예를 들면, 펩타이드 결합 서로서로게이트(surrogate)(Cudic and Stawikowski, '펩타이드모방체: Fmoc 고상 슈도펩타이드 합성, 분자 생물학의 방법(Peptidomimetics:Fmoc Solid-Phase Pseudopeptide Synthesis, in Methods in Molecular Biology)' vol 294, 223 - 246 (2008)); 및 화학적 변형, 예를 들어, 펩타이드의 구조적 유사체를 생성하기 위한 말레이미드 캡핑(maleimide capping), 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 부착, 말레이디피케이션(maleidification), 아실레이션, 알킬레이션 및 아미디피케이션을 포함한다. 이러한 변형 및 다른 변형에 대해서는 본 명세서의 다른 부분에서 추가로 기술하고 있다.
몇몇 유용한 형태의 활성화가능한 CendR 요소는 환형 단백질 또는 펩타이드일 수도 있고, 환형 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 수도 있다. CendR 요소는 프리 C-말단에 존재하기 않기 때문에, 이러한 환형 구조체 내에 잠재할 수 있다. 환형 단백질 및 펩타이드는 당해 분야에 공지되어 있는 다양한 방식으로, 예를 들어, 시스테인 결합에 의해, 공유 결합에 의해, 활성기의 반응에 의해, 및 링커에 의해 형성될 수 있다. 환형화 링케이지는 반드시 CendR 요소의 C-말단에서 발생하지 않아도 된다는 점을 이해해야 한다. CendR 요소의 C-말단에서 멀리 떨어져 있는 위치에 환형화 링케이지를 위치시킴으로써, 환형화 결합의 선택 및 잠재적 CendR 요소의 절단가능한 결합의 선택은 각각 독립적으로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 환형화 링케이지는 시스테인인 반면, 잠재적 CendR 요소의 절단가능한 결합은 펩타이드 결합일 수 있다(예컨대, 펩타이드 결합이 프로테아제 표적의 절단가능한 부위에 존재하는 경우).
일반적으로, 본 발명에서 기술되는 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 또는 CendR 조성물 내의 CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소의 절단 부위의 N-말단부에, 또는 프리 C-말단부에 위치해야 한다.
일부 형태에서, 펩타이드 또는 단백질의 프리 C-말단부에 존재하지 않는 CendR 요소가 세포 내재화 및/또는 조직 침투화를 매개할 수 있다. 이러한 경우, 일반적으로 그 효과는 비차단 CendR 요소를 사용한 내재화 및 조직 침투에 비해 덜 효과적이다. 펩타이드 또는 단백질의 프리 C-말단부에 존재하지 않지만 세포 내재화 및/또는 조직 침투화를 매개할 수 있는 CendR 요소를 내부 CendR 요소라고 말할 수 있다. 차단된 CendR 요소는 세포 내재화 및/또는 조직 침투를 매개하지 않기 때문에(비차단된 요소가 아닌 경우), 내부 CendR 요소는 차단된 CendR 요소와 구별된다. 내부 CendR 요소는 직선형, 환형 또는 분지형 펩타이드 및 단백질 내에서 사용될 수 있다. 또한, 내부 CendR 요소는 절단에 의해 활성화됨으로써 단백질 또는 펩타이드의 C-말단부에서 CendR 요소를 노출시킬 수 있다. 이러한 내부 CendR 요소의 활성화는 내재화 및/또는 조직 침투 활성을 증가시키는 역할을 할 것이다.
일부 형태에서, CendR 조성물 중의 펩타이드 또는 단백질은 선택된 아미노산 서열(CendR 요소)이 펩타이드 또는 단백질 내에 존재할 때 세포에 내재화될 수 있으나, 선택된 아미노산 서열이 펩타이드 또는 단백질 내에 존재하지 않는 경우에는 내재화되지 않는다. 이는 예를 들어, 단백질 또는 펩타이드가 CendR 요소를 함유하는지 아닌지를 검출하기 위해 사용될 수 있다. CendR 요소는 예를 들어, 자신의 아미노산 서열과 다른 그 어떤 것과 결합됨이 없이 세포에 내재화될 수 있다. CendR 요소가 단백질이나 펩타이드, 또는 CendR 조성물 내의 유일한 기능성 내재화 요소일 수도 있고, 하나 이상의 추가적인 기능성 내재화 요소가 존재할 수도 있다. 일부 형태에서, CendR 조성물은 선택된 아미노산 서열(CendR 요소)이 CendR 조성물 내에 존재할 때 세포에 내재화될 수 있으나, 선택된 아미노산 서열이 CendR 조성물 내에 존재하지 않는 경우에는 내재화되지 않는다.
마찬가지로, 일부 형태에서, CendR 조성물 중의 펩타이드 또는 단백질은 선택된 아미노산 서열(CendR 요소)이 펩타이드 또는 단백질 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있으나, 선택된 아미노산 서열이 펩타이드 또는 단백질 내에 존재하지 않는 경우에는 조직을 침투하지 않는다. 이는 예를 들어, 단백질 또는 펩타이드가 CendR 요소를 함유하는지 아닌지를 검출하기 위해 사용될 수 있다. CendR 요소는 예를 들어, 자신의 아미노산 서열과 다른 그 어떤 것과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있다. CendR 요소가 단백질이나 펩타이드, 또는 CendR 조성물 내의 유일한 기능성 조직 침투 요소일 수도 있고, 하나 이상의 추가적인 기능성 조직 침투 요소가 존재할 수도 있다. 일부 형태에서, CendR 조성물은 선택된 아미노산 서열(CendR 요소)이 CendR 조성물 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있으나, 선택된 아미노산 서열이 CendR 조성물 내에 존재하지 않는 경우에는 조직을 침투하지 않는다.
마찬가지로, 일부 형태에서, CendR 조성물 중의 펩타이드 또는 단백질은 선택된 아미노산 서열(CendR 요소)이 펩타이드 또는 단백질 내에 존재할 때 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있으나, 선택된 아미노산 서열이 펩타이드 또는 단백질 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다. 이는 예를 들어, 단백질 또는 펩타이드가 CendR 요소를 함유하는지 아닌지를 검출하기 위해 사용될 수 있다. CendR 요소는 예를 들어, 자신의 아미노산 서열과 다른 그 어떤 것과 결합됨이 없이 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있다. CendR 요소가 단백질이나 펩타이드, 또는 CendR 조성물 내의 유일한 기능성 내재화 및 조직 침투 요소일 수도 있고, 하나 이상의 추가적인 기능성 내재화 및/또는 조직 침투 요소가 존재할 수도 있다. 일부 형태에서, CendR 조성물은 선택된 아미노산 서열(CendR 요소)이 CendR 조성물 내에 존재할 때 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있으나, 선택된 아미노산 서열이 CendR 조성물 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 아니하다.
"내재화"라는 용어는 플라스마 막 또는 다른 생물학적 장벽을 통과하는 것을 의미한다. "침투"라는 용어는 세포, 조직 또는 다른 생물학적 장벽 및 그 내부로 통과하는 것을 의미한다. 일반적으로, 침투는 내재화를 포함한다. 일반적으로, 본 발명에 기술되는 CendR 요소는 내재화(예컨대, 세포에의 내재화) 및 침투(예컨대, 조직 침투)를 촉진 및 가능하게 한다. 내재화 또는 침투에 관한 언급은 별도의 설명(예컨대, 세포에의 내재화 및 조직 침투 각각에 관한 별도의 구별된 논의 및 기술 - 본 단락은 이러한 별도의 설명의 한 예임)이 없는 한, 내재화 및 침투 둘 다를 언급하는 것으로 이해해야 한다.
"세포에의 내재화"라는 용어는 CendR 요소가 플라스마 막을 침투할 수 있고, 그럼으로써 세포에 내재화될 수 있는 것을 의미한다. 이러한 내재화는 예를 들어, 주어진 CendR 요소 및 주어진 세포에 대해 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100% 효율성으로 발생할 수 있다. 일반적으로 CendR 요소는 내재화; 침투; 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 및/또는 그 내로의 내재화; 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 및/또는 그 내로의 침투; 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 및/또는 그 내로의 투과; 또는 그 조합을 촉진, 매개, 유발 및 향상시킬 수 있다. "투과성을 높임(permeabilization)"이라는 용어는 세포 및/또는 조직 가까이에 존재하는 조성물, 콘쥬게이트, 분자 등이 세포 및/또는 조직을 통해 통과하거나 그 내부로 유입할 수 있도록 그 능력, 및/또는 세포 및/또는 조직의 조건을 촉진, 매개, 유발 및 향상시키는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명의 CendR 요소, 단백질, 펩타이드, 콘쥬게이트, 조성물 등은 세포 및/또는 조직의 투과성을 높일 수 있다고 말할 수 있다. "투과시킬 수 있는(permeable)"이라는 용어는 세포 및/또는 조직 가까이에 존재하는 조성물, 콘쥬게이트, 분자 등이 세포 및/또는 조직을 통해 통과하거나 그 내부로 유입할 수 있게 하는 능력, 및/또는 세포 및/또는 조직의 조건을 의미한다.
CendR 요소를 내재화시킬 수 있는 세포는 예를 들어, (a) 세포를 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 내재화되었는지를 결정하는 단계에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 세포는 분석물 내에 존재할 수 있다. 예를 들어, CendR 요소는 귀소 분자와 결합됨으로써 CendR 조성물을 형성할 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소를 내재화시킬 수 있는 세포는 (a) 세포를 활성화가능한 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) 활성화가능한 CendR 요소가 내재화되었는지를 결정하는 단계에 의해 확인될 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 세포에 노출되기 전에 비-차단될 수 있으나, 필수적인 것은 아니다. 예를 들어, 이는 차단제의 차단 능력을 테스트하는데 사용될 수 있다. 또한, 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제-활성화된 CendR 요소일 수도 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
암세포 또는 암세포를 갖고 있는 대상자는 예를 들어, (a) 암세포를 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 암세포에 의해 내재화되었는지를 결정하는 단계로서 내재화된 CendR 요소가 암세포 또는 대상자를 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 것을 특징으로 하는 단계에 의해 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 세포는 분석물 내에 존재할 수도 있고, 대상자 내에 존재할 수도 있다. 예를 들어, CendR 요소는 귀소 분자와 결합됨으로써 CendR 조성물을 형성할 수 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
종양 또는 종양을 갖고 있는 대상자는 예를 들어, (a) 종양 조직을 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 조직을 통과했는지 또는 조직 내의 세포에 의해 내재화되었는지를 결정하는 단계로서 조직 통과된 또는 내재화된 CendR 요소가 종양 또는 대상자를 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 것을 특징으로 하는 단계에 의해 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인될 수 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
목적하는 세포 가까이서 활성화될 수 있는 활성화가능한 CendR 요소는 예를 들어, 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키는 단계로서 이 때 차단기는 절단가능한 결합에 의해 CendR 요소와 결합되어 있고, 상기 절단가능한 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의해 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 의해 형성될 수 있다. 이 방법은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에, 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건을 확인하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 이 방법은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에, 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의거해서 절단가능한 결합을 선택하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
활성화가능한 CendR 요소는 예를 들어,(a) 세포에의 내재화를 위한 아미노산 서열을 선택하는 단계로서 이 때 아미노산 서열은 C-말단 요소를 함유하며, C-말단 요소는 말단 카르복실기를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계; 및 (b) 차단기가 상기 선택된 아미노산 서열의 말단 카르복실기와 공유결합되도록 유발하는 단계로서 이 때 차단기와 말단 카르복실기의 결합은 절단가능하며, 활성화가능한 CendR 요소는 선택된 아미노산 서열 및 차단기를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계에 의해 형성될 수 있다. 이는 (b) 단계 이전에, 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의해 절단될 수 있는 차단기와 말단 카르복실기의 결합을 선택하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
활성화가능한 CendR 요소는 (a) 세포에의 내재화를 위한 아미노산 서열을 선택하는 단계로서 이 때 아미노산 서열은 C-말단 요소를 함유하며, C-말단 요소는 말단 카르복실기를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계; 및 (b) 차단기가 상기 선택된 아미노산 서열의 말단 카르복실기와 공유결합되도록 유발하는 단계로서 이 때 차단기와 말단 카르복실기의 결합은 절단가능하며, 활성화가능한 CendR 요소는 선택된 아미노산 서열 및 차단기를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 의해 형성될 수 있다. 이 방법은 (b) 단계 이전에, 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의해 절단될 수 있는 차단기와 말단 카르복실기의 결합을 선택하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. CendR 요소는 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 원형(환형)일 수도 있고 루프를 함유할 수도 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재할 수 있다. CendR 요소는 말단 카르복실기를 함유할 수 있다. 차단기는 말단 카르복실기와 결합될 수 있다. 차단기와 말단 카르복실기의 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의해 절단될 수 있도록 선택될 수 있다. 차단기는 CendR 요소의 C-말단 아미노산에 결합될 수 있다. 차단기는 CendR 요소의 C-말단 아미노산이 아닌 다른 CendR 요소의 아미노산에 결합될 수 있다.
공조성물은 예를 들어, 치료용 또는 진단용 나노입자, 분자 또는 분자 복합체일 수 있다. CendR 요소에 의해 표적화될 수 있는 치료용 공조성물에는 나노입자, 분자, 분자 복합체, 항혈관형성제, 혈관형성제, 암 화학치료제, 세포독성 물질, 전구세포(pro-cell) 생존제, 세포분화 유도제(cell differentiating agent), 신경세포 보호제, 면역조절제, 소염제, 관절염 치료제, 항바이러스제, 또는 그 배합물 등이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. CendR 요소에 의해 표적화될 수 있는 치료용 공조성물에는 치료성 단백질, 치료성 화합물, 치료성 조성물, 항혈관형성제, 혈관형성제, 암 화학치료제, 톡신, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 성장인자, 사이토킨, 케모카인, 하나 이상의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물, 항체, 핵산, 핵산 유사체, 세포, 바이러스, 파지, 바이러스 입자, 파지 입자, 바이러스 캡시드, 파지 캡시드, 바이러스 유사입자, 리포솜, 미셀, 비드, 나노입자, 마이크로입자, 화학치료제, 조영제, 영상제, 표지, 표지화제 또는 그 배합물 등이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. CendR 요소에 의해 표적화될 수 있는 진단용 공조성물에는 나노입자, 분자, 분자 복합체, MRI 영상제, 방사선 영상제, 광학 영상제, 분자 태그(예컨대, 비오틴), 형광발색단(fluorophore), 에피토프 태그(예를 들어, 특이적 분자 분석법을 이용하여 검출될 수 있음), 또는 그 배합물 등이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다.
카고 조성물은 예를 들어, 치료용 또는 진단용 나노입자, 분자 또는 분자 복합체일 수 있다. CendR 요소에 의해 표적화될 수 있는 치료용 카고 조성물에는 나노입자, 분자, 분자 복합체, 항혈관형성제, 혈관형성제, 암 화학치료제, 세포독성 물질, 전구세포 생존제, 세포분화 유도제, 신경세포 보호제, 면역조절제, 소염제, 관절염 치료제, 항바이러스제, 또는 그 배합물 등이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. CendR 요소에 의해 표적화될 수 있는 치료용 카고 조성물에는 치료성 단백질, 치료성 화합물, 치료성 조성물, 항혈관형성제, 혈관형성제, 암 화학치료제, 톡신, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 성장인자, 사이토킨, 케모카인, 하나 이상의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물, 항체, 핵산, 핵산 유사체, 세포, 바이러스, 파지, 바이러스 입자, 파지 입자, 바이러스 캡시드, 파지 캡시드, 바이러스 유사입자, 리포솜, 미셀, 비드, 나노입자, 마이크로입자, 화학치료제, 조영제, 영상제, 표지, 표지화제 또는 그 배합물 등이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. CendR 요소에 의해 표적화될 수 있는 진단용 카고 조성물에는 나노입자, 분자, 분자 복합체, MRI 영상제, 방사선 영상제, 광학 영상제, 분자 태그(예컨대, 비오틴), 형광발색단, 에피토프 태그(예를 들어, 특이적 분자 분석법을 이용하여 검출될 수 있음), 또는 그 배합물 등이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다.
CendR 요소를 내재화시킬 수 있는 세포는 예를 들어, (a) 세포를 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 내재화되었는지를 결정하는 단계에 의해 확인될 수 있다. 또한, 본 발명은 암세포를 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 방법으로서, (a) 암세포를 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 암세포에 의해 내재화되었는지를 결정하는 단계로서 내재화된 CendR 요소가 암세포를 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 세포는 분석물 내에 존재할 수 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드와 결합될 수 있다. CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 세포에 노출되기 전에 활성화될 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제- 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 환형일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 직선형일 수 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단부에 존재할 수 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
CendR 요소에 의해 침투될 수 있는 조직은 예를 들어, (a) 조직을 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 조직을 침투하였는지를 결정하는 단계에 의해 확인될 수 있다. 또한, 본 발명은 종양을 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 방법으로서, (a) 종양 세포를 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 암세포에 의해 내재화되었는지를 결정하는 단계로서 내재화된 CendR 요소가 종양을 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 종양은 예를 들어, (a) 종양 세포를 CendR 요소에 노출시키는 단계; 및 (b) CendR 요소가 종양을 침투하였는지를 결정하는 단계로서 침투된 CendR 요소가 종양을 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인하는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 의해 CendR-기초 치료법의 후보자로서 확인될 수 있다. 종양은 분석물 내에 존재할 수 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드와 결합될 수 있다. CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 종양에 노출되기 전에 활성화될 수 있다. 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제- 활성화가능한 CendR 요소일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 환형일 수 있다. 단백질 또는 펩타이드는 직선형일 수 있다. CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단부에 존재할 수 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
목적하는 세포 가까이서 활성화될 수 있는 활성화가능한 CendR 요소는 예를 들어, 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키는 단계로서 이 때 차단기는 절단가능한 결합에 의해 CendR 요소와 결합되어 있고, 상기 절단가능한 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건에 의해 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 의해 형성될 수 있다. 세포는 대상자 내에 존재할 수 있다. 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건은 확인될 수 있다. 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에 확인될 수 있다. 절단가능한 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건을 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 CendR 요소가 목적하는 세포 등에 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나 축적되는 부위에 존재하는 절단제를 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 CendR 요소가 목적하는 세포 등에 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나 축적되는 부위에 존재하는 절단 조건을 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에 선택될 수 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
예를 들어, 활성화가능한 CendR 요소는 차단기가 CendR 요소와 공유결합되도록 유발하는 단계로서 이 때 차단기와 CendR 요소의 결합은 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 의해 형성될 수 있다. 또한, 활성화가능한 CendR 요소는 차단기가 아미노산 서열과 공유결합되도록 유발하는 단계로서, 이 때 아미노산 서열은 CendR 요소를 함유하고 차단기와 CendR 요소의 결합은 절단될 수 있는 것을 특징으로 단계를 포함하는 방법에 의해 형성될 수 있다. 예를 들어, 활성화가능한 CendR 요소는 (a) 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 위한 아미노산 서열을 선택하는 단계로서 이 때 아미노산 서열은 CendR 요소를 함유하는 것을 특징으로 하는 단계; 및 (b) 차단기가 상기 CendR 요소와 공유결합되도록 유발하는 단계로서 이 때 차단기와 CendR 요소의 결합은 절단될 수 있는 것을 특징으로 하는 단계를 포함하는 방법에 의해 형성될 수 있다. CendR 요소와 공유결합된 차단기는 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 감소 또는 억제시킨다. CendR 요소와 공유결합된 차단기는 차단기가 결합되지 않은 동일한 CendR 요소에 비해 세포에의 내재화 및/또는 조직 침투를 감소 또는 억제시킬 수 있다. 활성화 가능한 CendR 요소는 선택된 아미노산 서열 및 차단기를 함유할 수 있다. 세포는 대상자 내에 존재할 수 있다. 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건은 확인될 수 있다. 목적하는 세포 가까이에 존재하는 프로테아제, 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에 확인될 수 있다. 절단가능한 결합은 목적하는 세포 가까이에 존재하는 효소, 절단제, 및/또는 절단 조건을 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 CendR 요소가 목적하는 세포처럼 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나 축적되는 부위에 존재하는 절단제를 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 CendR 요소가 목적하는 세포 등에 전달되거나, 귀소하거나, 이동하거나 축적되는 부위에 존재하는 절단 조건을 기초로 해서 선택될 수 있다. 절단가능한 결합은 활성화가능한 CendR 요소를 형성시키기 전에 선택될 수 있다. CendR 요소는 말단 카르복실기를 함유할 수 있는데, 이 때 차단기는 말단 카르복실기에 결합되어 있다. 어떠한 형태 또는 유형의 CendR 요소, CendR 펩타이드, CendR 단백질, CendR 콘쥬게이트, 또는 CendR 조성물도 이 방법에 사용될 수 있다.
CendR 요소는 10, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 또는 2000개 이하의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 특정 실시예에서, CendR 요소는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 90, 100 또는 200개의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 또 다른 실시예에서, CendR 요소는 2 - 200개의 잔기, 2 - 100개의 잔기, 2 - 90개의 잔기, 2 - 80개의 잔기, 2 - 70개의 잔기, 2 - 60개의 잔기, 2 - 50개의 잔기, 2 - 40개의 잔기, 2 - 30개의 잔기, 2 - 20개의 잔기, 2 - 15개의 잔기, 2 - 10개의 잔기, 3 - 200개의 잔기, 3 - 100개의 잔기, 3 - 90개의 잔기, 3 - 80개의 잔기, 3 - 70개의 잔기, 3 - 60개의 잔기, 3 - 50개의 잔기, 3 - 40개의 잔기, 3 - 30개의 잔기, 3 - 20개의 잔기, 3 - 15개의 잔기, 3 - 10개의 잔기, 4 - 200개의 잔기, 4 - 100개의 잔기, 4 - 90개의 잔기, 4 - 80개의 잔기, 4 - 70개의 잔기, 4 - 60개의 잔기, 4 - 50개의 잔기, 4 - 40개의 잔기, 4 - 30개의 잔기, 4 - 20개의 잔기, 4 - 15개의 잔기, 4 - 10개의 잔기, 5 - 200개의 잔기, 5 - 100개의 잔기, 5 - 90개의 잔기, 5 - 80개의 잔기, 5 - 70개의 잔기, 5 - 60개의 잔기, 5 - 50개의 잔기, 5 - 40개의 잔기, 5 - 30개의 잔기, 5 - 20개의 잔기, 5 - 15개의 잔기, 5 - 10개의 잔기, 10 - 200개의 잔기, 10 - 100개의 잔기, 10 - 90개의 잔기, 10 - 80개의 잔기, 10 - 70개의 잔기, 10 - 60개의 잔기, 10 - 50개의 잔기, 10 - 40개의 잔기, 10 - 30개의 잔기, 10 - 20개의 잔기, 20 - 200개의 잔기, 20 - 100개의 잔기, 20 - 90개의 잔기, 20 - 80개의 잔기, 20 - 70개의 잔기, 20 - 60개의 잔기, 20 - 50개의 잔기, 20 - 40개의 잔기, 20 - 30개의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "잔기(residue)"라는 용어는 아미노산 또는 아미노산 유사체를 의미한다.
CendR 요소를 함유하는 단백질 또는 펩타이드는 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 또는 2000개 이하의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 특정 실시예에서, CendR 조성물의 단백질 또는 펩타이드 부분은 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 90, 100 또는 200개의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 또 다른 실시예에서, CendR 요소를 함유하는 단백질 또는 펩타이드는 2 - 200개의 잔기, 2 - 100개의 잔기, 2 - 90개의 잔기, 2 - 80개의 잔기, 2 - 70개의 잔기, 2 - 60개의 잔기, 2 - 50개의 잔기, 2 - 40개의 잔기, 2 - 30개의 잔기, 2 - 20개의 잔기, 2 - 15개의 잔기, 2 - 10개의 잔기, 3 - 200개의 잔기, 3 - 100개의 잔기, 3 - 90개의 잔기, 3 - 80개의 잔기, 3 - 70개의 잔기, 3 - 60개의 잔기, 3 - 50개의 잔기, 3 - 40개의 잔기, 3 - 30개의 잔기, 3 - 20개의 잔기, 3 - 15개의 잔기, 3 - 10개의 잔기, 4 - 200개의 잔기, 4 - 100개의 잔기, 4 - 90개의 잔기, 4 - 80개의 잔기, 4 - 70개의 잔기, 4 - 60개의 잔기, 4 - 50개의 잔기, 4 - 40개의 잔기, 4 - 30개의 잔기, 4 - 20개의 잔기, 4 - 15개의 잔기, 4 - 10개의 잔기, 5 - 200개의 잔기, 5 - 100개의 잔기, 5 - 90개의 잔기, 5 - 80개의 잔기, 5 - 70개의 잔기, 5 - 60개의 잔기, 5 - 50개의 잔기, 5 - 40개의 잔기, 5 - 30개의 잔기, 5 - 20개의 잔기, 5 - 15개의 잔기, 5 - 10개의 잔기, 10 - 200개의 잔기, 10 - 100개의 잔기, 10 - 90개의 잔기, 10 - 80개의 잔기, 10 - 70개의 잔기, 10 - 60개의 잔기, 10 - 50개의 잔기, 10 - 40개의 잔기, 10 - 30개의 잔기, 10 - 20개의 잔기, 20 - 200개의 잔기, 20 - 100개의 잔기, 20 - 90개의 잔기, 20 - 80개의 잔기, 20 - 70개의 잔기, 20 - 60개의 잔기, 20 - 50개의 잔기, 20 - 40개의 잔기, 20 - 30개의 잔기의 길이를 가질 수 있다.
CendR 콘쥬게이트는 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 또는 2000개 이하의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 특정 실시예에서, CendR 콘쥬게이트는 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 90, 100 또는 200개의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 또 다른 실시예에서, CendR 콘쥬게이트는 5 - 200개의 잔기, 5 - 100개의 잔기, 5 - 90개의 잔기, 5 - 80개의 잔기, 5 - 70개의 잔기, 5 - 60개의 잔기, 5 - 50개의 잔기, 5 - 40개의 잔기, 5 - 30개의 잔기, 5 - 20개의 잔기, 5 - 15개의 잔기, 5 - 10개의 잔기, 10 - 200개의 잔기, 10 - 100개의 잔기, 10 - 90개의 잔기, 10 - 80개의 잔기, 10 - 70개의 잔기, 10 - 60개의 잔기, 10 - 50개의 잔기, 10 - 40개의 잔기, 10 - 30개의 잔기, 10 - 20개의 잔기, 20 - 200개의 잔기, 20 - 100개의 잔기, 20 - 90개의 잔기, 20 - 80개의 잔기, 20 - 70개의 잔기, 20 - 60개의 잔기, 20 - 50개의 잔기, 20 - 40개의 잔기, 20 - 30개의 잔기의 길이를 가질 수 있다.
CendR 조성물의 단백질 또는 펩타이드 부분은 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 또는 2000개 이하의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 특정 실시예에서, CendR 조성물의 단백질 또는 펩타이드 부분은 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 90, 100 또는 200개의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 또 다른 실시예에서, CendR 조성물의 단백질 또는 펩타이드 부분은 2 - 200개의 잔기, 2 - 100개의 잔기, 2 - 90개의 잔기, 2 - 80개의 잔기, 2 - 70개의 잔기, 2 - 60개의 잔기, 2 - 50개의 잔기, 2 - 40개의 잔기, 2 - 30개의 잔기, 2 - 20개의 잔기, 2 - 15개의 잔기, 2 - 10개의 잔기, 3 - 200개의 잔기, 3 - 100개의 잔기, 3 - 90개의 잔기, 3 - 80개의 잔기, 3 - 70개의 잔기, 3 - 60개의 잔기, 3 - 50개의 잔기, 3 - 40개의 잔기, 3 - 30개의 잔기, 3 - 20개의 잔기, 3 - 15개의 잔기, 3 - 10개의 잔기, 4 - 200개의 잔기, 4 - 100개의 잔기, 4 - 90개의 잔기, 4 - 80개의 잔기, 4 - 70개의 잔기, 4 - 60개의 잔기, 4 - 50개의 잔기, 4 - 40개의 잔기, 4 - 30개의 잔기, 4 - 20개의 잔기, 4 - 15개의 잔기, 4 - 10개의 잔기, 5 - 200개의 잔기, 5 - 100개의 잔기, 5 - 90개의 잔기, 5 - 80개의 잔기, 5 - 70개의 잔기, 5 - 60개의 잔기, 5 - 50개의 잔기, 5 - 40개의 잔기, 5 - 30개의 잔기, 5 - 20개의 잔기, 5 - 15개의 잔기, 5 - 10개의 잔기, 10 - 200개의 잔기, 10 - 100개의 잔기, 10 - 90개의 잔기, 10 - 80개의 잔기, 10 - 70개의 잔기, 10 - 60개의 잔기, 10 - 50개의 잔기, 10 - 40개의 잔기, 10 - 30개의 잔기, 10 - 20개의 잔기, 20 - 200개의 잔기, 20 - 100개의 잔기, 20 - 90개의 잔기, 20 - 80개의 잔기, 20 - 70개의 잔기, 20 - 60개의 잔기, 20 - 50개의 잔기, 20 - 40개의 잔기, 20 - 30개의 잔기의 길이를 가질 수 있다.
CendR 조성물은 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 1000 또는 2000개 이하의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 특정 실시예에서, CendR 조성물은 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 90, 100 또는 200개의 잔기의 길이를 가질 수 있다. 또 다른 실시예에서, CendR 조성물은 5 - 200개의 잔기, 5 - 100개의 잔기, 5 - 90개의 잔기, 5 - 80개의 잔기, 5 - 70개의 잔기, 5 - 60개의 잔기, 5 - 50개의 잔기, 5 - 40개의 잔기, 5 - 30개의 잔기, 5 - 20개의 잔기, 5 - 15개의 잔기, 5 - 10개의 잔기, 10 - 200개의 잔기, 10 - 100개의 잔기, 10 - 90개의 잔기, 10 - 80개의 잔기, 10 - 70개의 잔기, 10 - 60개의 잔기, 10 - 50개의 잔기, 10 - 40개의 잔기, 10 - 30개의 잔기, 10 - 20개의 잔기, 20 - 200개의 잔기, 20 - 100개의 잔기, 20 - 90개의 잔기, 20 - 80개의 잔기, 20 - 70개의 잔기, 20 - 60개의 잔기, 20 - 50개의 잔기, 20 - 40개의 잔기, 20 - 30개의 잔기의 길이를 가질 수 있다.
CendR (및 다른) 펩타이드는 단백질분해에 안정적일 수 있다. 예를 들어, 종양-귀소 펩타이드 CREKA와 같은 펩타이드의 안정성 및 활성도(Simberg et al., 2007)는 N-메틸레이션 및 C-메틸레이션에 의해 일부 펩타이드 결합을 보호함으로써 달성될 수 있다. 활성도를 향상시키기 위해 보호되어야 하는 가장 중요한 결합은 R-G 결합인데, 그 이유는 이 결합이 인테그린-결합 및 CendR 활성도를 불활성화시키는 절단을 저지하기 때문이다. 예를 들어, 펩타이드 C(CMe)RGDKGPDC (SEQ ID NO:92) 및 CR(NMe)GDKGPDC (SEQ ID NO:93) 화합물은 원하지않는 단백질분해에 대해 안정적이다. 또한, 이와 마찬가지로, 악세사리 펩타이드 및 귀소 펩타이드도 단백질분해에 안정적일 수 있다.
LyP-1 펩타이드 및 다른 CendR 펩타이드의 활성도는 iRGD에서 사용된 것과 동일한 Evans Blue 분석법을 이용하여 테스트될 수 있다(도 5). LyP-1 펩타이드의 활성도 테스트에는 MDA-MB-435 인간 암종을 사용할 수 있는데, 그 이유는 이 종양이 세포 표면에서 LyP-1에 대한 원시 수용체인 p32의 최대 발현을 보여주기 때문이다(Fogal et al., 2008). RGR은 RGR 펩타이드의 활성도를 테스트하기 위해 사용될 수 있는 RIP-태그 췌도세포 암종(Joyce et al., 2003)을 갖는 파지 라이브러리 스크린에서 확인되었다. LyP-1의 일차적 표적은 혈관이 아닌, 종양 임파, 종양 대식세포, 종양세포의 저산소증/저영양 부위이다(Laakkonen et al., 2004; Fogal et al., 2008). 이런 이유 때문에, LyP-1과 동시 주입되는 화합물은 펩타이드가 선호하는 부위에 우선적으로 축적된다는 것을 예측할 수 있다.
iRGD는 다양한 크기의 공조성물, 즉 1.3kDa FAM-CRGDC 펩타이드(CendR 모티프가 부족하며 그 자신만으로는 최소한으로 종양 조직을 침투함), 알부민-결합 염료(Evans Blue), 항체, 및 2가지 유형의 나노입자, T7 파지(직경 65nm) 및 산화철 나노웜(길이 80nm, 두께 30nm)의 축적을 향상시킬 수 있다. 예를 들어, iRGD 및 비-CendR RGD 펩타이드(종양-관련 인테그린에의 귀소에 관여하는 종양 축적에 해한 대조용으로서 역할을 함, 그러나 CendR 메커니즘은 아님)를 사용하여 어떠한 공조성물도 테스트할 수 있다. 이러한 iRGD 펩타이드의 불활성 D 내지 E 변이체는 인테그린과 결합하지 않는 대조용 펩타이드로서 사용될 수 있다. 최대 효과를 갖는 범위를 찾아내기 위한 CendR 펩타이드의 사용량을 적정할 수 있다. 또한, CendR 펩타이드에 의해 매개화되는 공조성물의 내재화 및 조직 침투는 예를 들어, 표지 형태의 공조성물로 관류된 iRGD-처리 종양을 염색함으로써 테스트될 수 있다.
본 명세서에 기술되는 CendR 펩타이드(및 다른 CendR 형태)와 공조성물은 함께 또는 별도로; 같은 형태 및 방식으로, 또는 서로 다른 형태 및/또는 방식으로; 동시에 또는 서로 다른 시간에 투여할 수 있으며, CendR 펩타이드(및 다른 CendR 형태)를 처음에 또는 두번째에 투여할 수 있다. 예를 들어, 투여는 동시투여(같은 시간에, 같은 또는 서로 다른 경로/수단/형태로), 별도 투여(같은 또는 서로 다른 경로/수단/형태로 병행 투여), 순차 투여(다른 시간에, 같은 또는 서로 다른 경로/수단/형태로) 등이 될 수 있다. 공조성물과 CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)가 서로 다른 시간에 투입되는 경우, 투여 사이의 시간 간격은 다양한 시간이 사용될 수 있다. 예를 들어, CendR 펩타이드(및 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이전, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 또는 120 분 이상 전에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이전, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 54, 60, 66 또는 72 시간 이상 전에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이전, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 이상 전에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이후, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 또는 120 분 이상 후에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이후, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 54, 60, 66, 또는 72 시간 이상 후에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이후, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 이상 후에 투여될 수 있다.
CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이전, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 또는 120 분 이내에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이전, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 54, 60, 66, 또는 72 시간 이상 이내에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이전, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 이내에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이후, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 20, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 또는 120 분 이내에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이후, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 54, 60, 66, 또는 72 시간 이상 이내에 투여될 수 있다. CendR 펩타이드(또는 다른 CendR 형태)는 공조성물 투여 이후, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 이내에 투여될 수 있다. 특히, 같은 날 또는 같은 시간 이내에 투여하는 것이 효과적이다.
CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 공조성물은 동시에 대상자에 투여될 수 있다. 본 명세서에서, 동시에라는 것은 중복되는 또는 연속적인 시간 동안을 의미한다. CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 공조성물은 CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소 및 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드 또는 CendR 요소와 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여될 수 있다. CendR 요소와 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여될 수 있다. 본 명세서에서, 별도의 조성물이라는 것은 서로 접촉되거나 혼합되지 않는 조성물(투여 후에 발생하는 것은 제외)을 의미한다. CendR 요소 및 공조성물은 별개의 경로를 통해 대상자에 투여될 수 있다. 본 명세서에서, 별개의 경로라는 것은 별도의 위치에서 서로 다른 수단이나 모드에 의한 것을 의미한다.
CendR 펩타이드는 안정화된 펩타이드 형태로 제조 및/또는 긴-순환 형태로서 조성될 수 있다. 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 콘쥬게이트가 사용될 수 있다. 또한, CendR 펩타이드 및/또는 공조성물은 일정 시간 동안 투여될 수 있다. 예를 들어, CendR 펩타이드 및/또는 공조성물은 삼투 펌프(osmotic pump)를 이용하여 전달될 수 있다. 이는 표적 세포 및 조직에 대한 투과성을 확장시킨다. 변형된 형태의 CendR 펩타이드를 사용할 수 있다. 예를 들어, CendR 펩타이드를 메틸화시킬 수 있다(펩타이드를 단백질분해에 대해 안정화시킬 수 있음). CendR 요소를 활성화시키기 위해 절단되어야 하는 결합의 경우는 제외하고, 절단에 대해 안정한 것이 바람직하다. 일반적으로, CendR 요소의 변형은 활성화 이후 기능성을 그대로 유지하거나 기능성을 가질 수 있도록 이루어져야 한다.
본 발명의 CendR 조성물, 콘쥬게이트, 분자, 단백질, 펩타이드, 및 요소에 혼입될 수 있는 다수의 아미노산 및 펩타이드 유사체가 존재한다는 점을 이해해야 한다. 예를 들어, 다수의 D-아미노산 및 다른 비천연 아미노산이 사용될 수 있다. 천연 펩타이드의 반대편 입체이성질체 뿐만 아니라 펩타이드 유사체의 입체이성질체도 공지되어 있다. 이러한 아미노산은 예를 들어, 부위 특이적 방식으로 펩타이드 사슬에 유사 아미노산을 삽입하기 위해서 앰버 코돈(amber codon)을 사용하는 유전공학적 구성체 및 선택된 아미노산을 tRNA 분자에 충진하는 방식에 의해 또는 화학 합성법에 의해 폴리펩티드 사슬에 쉽게 혼입될 수 있다(Thorson et al., Methods in Molec. Biol. 77:43 - 73(1991), Zoller, Current Opinion in Biotechnology, 3 :348-354 (1992); Ibba, Biotechnology & Genetic Engineering Reviews 13: 187-216 (1995); Cahillet al., TIBS, 14(10): 400-403 (1989); Benner, TIB Tech, 12: 158-163 (1994); Ibba and Hennecke, Bio/technology, 12:678-682 (1994)). 본 명세서에서, 상기 문헌들 모두는 적어도 아미노산 유사체와 관련한 물질에 대해 참고 문헌으로 포함된다.
펩타이드와 유사하나 천연 펩타이드 링케이지에 의해 연결되어 있지 않은 분자를 제조할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 또는 아미노산 유사체에 대한 링케이지는 CH2NH--, --CH2S--, --CH2--CH2--, --CH=CH--(시스 및 트랜스), --COCH2--, --CH(OH)CH2--, 및 --CHH2SO--를 포함할 수 있다. 이들 및 다른 링케이지는 여러 문헌에서 찾아볼 수 있다. 즉, Spotola, A.F. in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, B. Weinstein, eds., Marcel Dekker, New York, p.267 (1983); Spotola, A.F., Vega Data (March 983), Vol. 1, Issue 3, Peptide Backbone Modifications (general review); Morley, Trends Pharm Sci (1980), pp. 463-468; Hudson,D. et al., Int J Pept Prot Res 14: 177-185 (1979)(--CH2NH--, CH2CH2--); Spotola et al., Life Sci 38: 1243-1249 (1986)(--CH H2S); hann J. Chem. Soc Perkin Trans. I 307-314 (1982)(--CH--CH--, 시스 및 트랜스); Almquist et al., J. Med. Chem. 23: 1392-1398 (1980)(--COCH2--); Jannings-White et al., Tetrahedron Lett 23: 2533 (1982)(--COCH2--); Szelke et al., European. Appln, EP 45665CA (1982), 97: 39405 (1982)(--CH(OH)CH2--); Holladay et al., Tetrahedron Lett 24: 4401-4404 (1983)(--C(OH)CH2--); 및 Hruby Life Sci 31: 189-199(1982)(--CH2--S--). 이들 문헌 각각은 본 명세서에서 참고문헌으로 포함된다. 이들 링케이지 중 특히 바람직한 비펩타이드 링케이지는 --CH2NH--이다. 펩타이드 유사체는 예를 들어, b-알라닌, g-아미노부틸산 등과 같이 결합원자들 사이에 하나 이상의 원자를 가질 수 있다.
아미노산 유사체 및 펩타이드 유사체는 종종 향상된 또는 바람직한 특성, 예를 들어, 보다 경제적인 제조, 높은 안정성, 향상된 약리학적 특성(반감기, 흡수력, 효능, 효율성 등), 변화된 특이성(예컨대, 광범위한 생물학적 활성 스펙트럼), 감소된 항원성 등을 가진다.
D-아미노산은 펩티다아제 등에 의해 인식되지 않기 때문에, 보다 안정한 펩타이드를 제조하는데 사용될 수 있다. 보다 안정한 펩타이드를 제조하기 위해서, 활성이 보존되는 한, 하나 이상의 컨센서스 배열(consensus sequence)의 아미노산을 동일 유형의 D 아미노산으로 계통적 치환을 하는 방법(예컨대, L-리신 대신 D-리신 사용)을 사용할 수 있다. 둘 이상의 펩타이드를 함께 환형화하거나 결합시키기 위해 시스테인 잔기를 사용할 수 있다. 이는 펩타이드를 특정 공간배열(conformation)로 강제하는데 유익할 수 있다. (Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem 61:387 (1992), 본 명세서에서 참고문헌으로 기재됨).
본 발명은 CendR 요소 이외에도, 예를 들어 악세사리 펩타이드, CendR 요소에 융합되어 있는 악세사리 펩타이드, CendR 요소 또는 CendR 펩타이드와 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 악세사리 분자, CendR 요소에 융합되어 있는 귀소 펩타이드, CendR 요소 또는 CendR 펩타이드와 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 귀소 분자, CendR 요소에 융합되어 있는 카고 조성물, 및/또는 CendR 요소 또는 CendR 펩타이드와 공유결합되거나 비공유 결합되어 있는 카고 조성물을 포함하는 다기능성 CendR 조성물을 제공한다. 별도의 기능을 가지는 추가적인 화합물도 본 조성물에 첨가될 수 있다. 이러한 다기능 콘쥬게이트는 조성물의 서로 다른 부분에 의해 부여되는 2개 이상의 기능성을 가지며, 예를 들어 선택적인 귀소 활성 이외에도, 항혈관신생 활성 또는 전구-세포사멸유도 활성을 발휘할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "펩타이드"라는 용어는 펩타이드, 단백질, 단백질 단편 등을 포함하는 포괄적 의미이다. 본 명세서에서 사용되는 "펩타이드 모방체"라는 용어는 구조적으로 기본이 되는 펩타이드의 활성을 가지는 펩타이드 유사 분자를 의미한다. 이러한 펩타이드 모방체에는 화학적으로 변형된 펩타이드, 비-천연 아미노산을 함유하는 펩타이드 유사 분자, 및 펩타이드 모방체가 유래되는 것과 같은 활성을 갖는 펩토이드 등이 있다(예를 들어, Goodman and Ro Peptidomimetics for Drug Design, in "Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery" Vol. 1(ed. M.E.Wolf; John Wiley & Sons 1995), pages 803-861).
CendR 요소는 세포 표면에 존재하는 뉴로필린-1(NRP-1)과 결합한다. CendR 요소와 뉴로필린-1(NRP-1)의 결합은 CendR 요소, CendR에 부착되는 그 어떠한 것 및 공조성물의 내재화를 매개한다. 또한, 비-펩타이드 화합물도 NRP-1와 결합하여 내재화 및 조직 침투를 매개하는데 사용될 수 있다. 이러한 비-펩타이드 화합물을 CendR 화합물이라고 부른다. CendR 화합물은 CendR 요소가 사용되는 본 명세서에 기술되는 모든 조성물에 및 모든 방법에 사용될 수 있다(단, CendR 성분이 펩타이드이어야 하는 특정 용도 및 조성물의 경우는 제외됨).
귀소 펩타이드의 설계 원리는 3가지 기능, 즉 조직-특이적 귀소, 표적 조직 내로 확산, 및 조직 내의 세포에의 내재화를 함께 가지도록 개발되고 있다. 이러한 펩타이드는 조직-특이적 귀소 서열 및 CendR 요소 내에서 구현되는 조직-침투 및 내재화 모티프를 둘다 함유한다. 활성화가능한 CendR 요소는 예를 들어, 표적 조직에서의 단백질 분해 절단에 의해 활성화될 수 있다. 이 실시예는 선택된 조직의 표적화에 의해 이러한 플랫폼 기술의 원리의 증거를 제시한다.
1. 본 발명의 원리 및 실시예를 이용함으로써, 정상 조직 또는 질환이 있는 조직에의 특이적인 귀소, 조직 침투 및 세포 내재화 기능을 함께 가지는 펩타이드를 선별 및 제조할 수 있다. 또한, 본 발명은 조직-특이적 귀소, 조직 침투 및 세포 내재화 기능을 함께 가지는 펩타이드를 제공한다. 이 펩타이드는 귀소 및 조직-침투 요소의 다양한 배합물을 사용할 수 있으며, 심장, 폐 또는 전립선을 표적화할 수 있다.
2. 본 발명의 펩타이드는 조직 및 그 사용이 시험관 내 세포 결합 및 내재화, 및 생체내 귀소 분석을 수행함으로써 확립되고 유효화될 수 있다는 점에서 조직-특이적 귀소, 표적 조직내로의 확산, 세포에의 내재화에 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 표적 조직 내로 물질을 주입시키는데 사용되는 유용한 수단이다. 이 화합물은 진단용 및 치료용 화합물의 질환-특이적 또는 세포 유형이나 조직-특이적 표적화로 인해 효능을 증진시키고 부작용을 감소시키게 할 수 있다. 본 발명에 따르는 원리는 특이적 귀소 펩타이드가 수득될 수 있고 CendR 수용체를 발현시킬 수 있는(모든 세포의 경우 가능) 세포 또는 조직에 적용할 수 있다.
최근 연구에서, 서로 다른 정상 조직의 혈관계 내의 광범위한 분자 이종성(heterogeneity)이 밝혀졌다. 또한, 종양과 같은 병리학적 병소는 자신의 변화를 혈관계에 부과한다. 이러한 분자 표지자 시스템을 '혈관 우편번호(vascular zip code)'라고 부른다(Ruoslahti, 2004). 이 혈관 우편변호는 도킹-기반('시냅스') 표적화로 인해 진단물질 및 치료물질이 특이적인 조직에 선택적으로 전달될 수 있게 한다. 이 방법은 효능을 증진시키고 부작을 최소화시킨다. 표적 전달 원리는 특히, 암에서 확립된다. 항체를 이용하여 방사선 동위원소가 백혈병 세포를 표적화하는 원리는 확립된 치료법이며, 고상 종양의 진단 및 치료를 목적으로 하는 몇몇 제품들은 임상 시험 중에 있다. 이들 중 많은 제품은 이미 종양-펩타이드 또는 그 유도체의 제조에 사용한다. 그러나, 일반적으로 보다 유용한 시냅스 전달 달성에 있어서 한가지 문제점은 그 효능이 낮다는 점이다. 혈관의 내피조직은 순환 프로브가 쉽게 이용할 수 있기 때문에 혈관에의 전달을 표적으로 하는 데에는 보다 효과적일 수 있지만, 종양 유조직내로의 침입은 문제가 되고 있다는 점이 알려졌다(Jain. 1990). 따라서, 표적화되는 물질과 표적 혈관의 결합을 입증하는 것이 용이해졌으나, 표적 조직 내의 물질의 농도가 사실상 반드시 높지는 않다(예컨대, Liu et al., 2007).
현재 페이로드를 표적으로 전달하는데 사용할 수 있는 펩타이드보다 효과적이고 특이적인 새로운 종류의 귀소 펩타이드를 발견하였다. 본 명세서에서 기술하한 바와 같이, 이 펩타이드의 중요한 특징(초성능에 대한 근거)은 이 펩타이드가 표적 조직에 도달하고 능동적으로 혈관외로 유출하여 조직 및 그 내부의 세포 내로 침투한다는 점이다. 이러한 작용의 원리 및 분자 매커니즘은 종양-귀소 펩타이드로서 확립되었다. 그러나 이 원리는 어떠한 세포 및 조직에 사용 및 적용될 수 있으며, 어떠한 세포 또는 조직 표적화 화합물 또는 귀소 화합물을 사용할 수 있다.
현재 가능한 것 이상의 고농도 또는 다량의 물질을 신체 내의 특이적 표적에 및 그 내부로 전달하는 능력은 의학계에 있어서 매우 중요한 의미를 갖는다. 본 발명의 기술은 생체내 진단성 화합물, 비경구 투여용 약물, 나노메디칼 화합물, 유전자 및 세포 치료제 등에 있어서 유용하다. 이 기술은 표적 조직에서 전달되어야 하는 물질을 농축화시킴으로써 효능을 증진시키고 상대적으로 물질을 덜 전달받는 다른 조직 내에서 부작용을 감소시킬 수 있다. 선택적인 표적 조직 내로의 침투는 효능을 더욱 증진시킨다. 또한, 본 발명의 조직-침투성 펩타이드는 변형이 이루어질 수 있고 약물 유사 화학제제로 조성될 수 있으며, 이로써 본 기술은 경구 투여용 치료제에도 적용될 수 있다.
최근에 특이적 표적 조직에 귀소할 수 있을 뿐만 아니라 그 조직 내로 침투할 수 있는 조직/세포 침투 시스템을 발견하였다. 조직-침투 모티프는 활성이어야 하는 펩타이드(또는 단백질)의 C-말단에서 노출되어야 한다. 따라서, 조직-침투 모티프는 CendR(C-end Rule)이라고 불린다. 도 1은 CendR 시스템의 원리를 보여준다. CendR 귀소 펩타이드는 조직-특이적 귀소 서열 및 CendR 서열(도 1에서 보여주는 바와 같이, 잠재성 또는 활성화가능한 CendR 배열일 수 있음) 둘 다를 함유한다. 귀소 서열은 표적 조직의 혈관 내피로 펩타이드를 운반하며, 이 때 귀소 서열이 잠재성 CendR 서열을 갖는 경우 펩타이드가 내생 프로테아제에 의해 단백질 분해됨으로써 CendR 모티프가 C-말단이 되며 활성화된다. 그 다음, 활성화된 CendR 모티프는 수용체(뉴로필린-1)과 결합하고, 이는 CendR 펩타이드와 이에 부착되는 페이로드의 혈관외 유출, 조직 침투 및 세포 유입을 매개한다(Teesalu et al., 2009; 미국 특허 출원 공개공보 제 20090226372 호).
다단계의 귀소, 프로세싱 및 조직 침투 절차는 CendR이 수용체 결합에만 의존하는 펩타이드 및 다른 프로브보다 특이적으로 되게 한다. 조직 및 세포 침투는 조직 내의 모든 파트 및 세포 유형으로의 전달을 촉진시킨다.
첫 번째로 주목할 점은 세포 결합 및 조직 귀소 펩타이드에 있어서 불균형적인 수의 펩타이드 T7 파지 라이브러리 스크린이 C-말단 잔기로서 아르기닌(또는 때로는 리신이나 히스티딘)을 갖는다는 점이다. (펩타이드 인서트는 T7 시스템의 파지 코트 단백질의 C-말단에서 보여진다). 일반적으로, C-말단 아르기닌은 RXXR 서열(R는 아르기닌, X는 아미노산을 나타냄)에서 존재한다. 이러한 서열 모티프는 파지 입자가 세포에 내재화되는 것을 촉발시킴으로써 농축화를 유발할 수 있다는 것을 알게 되었다. 이러한 시스템 및 그 메카니즘을 설명하기 위한 광범위한 데이터가 형성되었다. 첫재로, R(K)XXR 모티프를 디스플레이하는 파지를 37℃에서 배양된 세포(PPC1 전립선 암세포)로부터 회수하고, 산성(pH 2.5) 완충액으로 세척하였다. T7 파지는 pH 2.5에서 안정하지 않으며, 이 결과는 파지의 내재화를 시사한다. 선택된 풀로부터 얻어지는 개개의 파지를 이용한 결합성 조사에서, 파지와 PPC1 세포의 약한 결합은 C-말단 아르기닌만의 존재(G6R에서와 같이)로 충분한 반면, 강한 결합 및 내재화에는 예를 들어, 선택된 파지 풀에서 가장 빈번하게 제공되는 서열인 RPARPAR(SEQ ID NO:2)에서와 같이 C-밀단 RXXR 모티프의 존재가 필요하다는 것이 밝혀졌다.
RPARPAR 펩타이드의 알라닌 스캔에서, C-말단 아르기닌(또는 리신)이 파지 결합에 중요한 역할을 하며, 다른 2가지 염기성 아미노산은 사용량 및 위치에 의존적인 방식으로 상호작용을 증가시킨다는 점을 알게 되었다. RPARPAR-기능화 양자점(qdot)은 파지 입자와 구별될 수 있는 방식으로 결합 및 내재화되기 때문에, 세포와의 상호작용은 다른 파지 요소들과 관련이 없다. 양자점 내재화는 가공된 인공물로 인한 세포내 축적을 제외하고는, 살아있는 비고정 세포에서 관찰되었다. 흥미롭게도, D-아미노산으로 구성된 펩타이드(D-RPARPAR; SEQ ID NO:2)는 양자점의 흡수를 촉발시키는 능력을 현저히 감소시키는데, 이는 키랄 결합 부위가 관여한다는 것을 시사한다. C-말단 RXXR 요소를 추가적인 C-말단 아미노산(RPARPARA; SEQ ID NO:94에서와 같이)으로 차폐시키거나 C-말단 카르복실기를 아미드화시킴으로써 세포 결합 및 내재화를 차단할 수 있다. RPARPARA 파지를 트립신(염기성 잔기 이후 부분을 절단하고 C-말단 아르기닌을 노출시키는 것으로 추정됨)으로 처리함으로써 PPC-1 세포 결합을 보존할 수 있다. 이러한 발견은 세포 결합 및 내재화에는 프리 카르복실기를 갖는 말단 염기성 아미노산의 존재가 필요하다는 것을 시사한다. 또한, 종양 및 정상 세포계 중의 각각의 세포계 및 정상 마우스 기관으로부터 유래된 원시 세포도 RPARPAR 파지와 결합하였다.
정맥내 주입되는 RPARPAR 파지는 처음 만나는 혈관상(vascular bed), 예컨대 폐 및 더 멀리있는 심장에서 강하게 축적되었다. RPARPAR 파지는 폐 조직 전체에 걸쳐 분포된 반면, 대조용 파지는 폐에서 검출되지 않았다. 이 결과는 CendR 파지가 종양 유조직을 침투할 수 있다는 것을 시사하는 것이다. 따라서, RPARPAR 펩타이드는 다양한 유형의 세포에 유입될 수 있는 세포-침투성 펩타이드이며, 또한 조직 침투를 촉진시킬 수 있다. 다양한 세포 내재화 경로에 유용한 억제제 중 RPARPAR CendR 펩타이드에 의해 매개되는 내재화를 저지하는 억제제는 없었는데, 이는 새로운 경로를 시사하는 것이다.
뉴로필린 -1은 세포상에 있는 CendR 펩타이드의 수용체이다: RPARPAR 결합 단백질을 확인하기 위해서, 아가로오스 비즈 상에서 유동화시킨 RPARPAR 펩타이드를 사용하는 친화성 크로마토그래피에 의해 PPC-1 종양 추출물을 분별하였다. 프리 RPARPAR 펩타이드를 함유하는 완충액으로 용출시킨 용출액은 130-kDa 단백질을 생성하였으며, MALDL-TOF 질량 분석법(mass spectroscopy)에 의해 NRP-1으로서 확인되었다. 확인은 면역블로팅에 의해 수행되었다.
몇몇 증빙 자료는 CendR 수용체로서 NRP-1의 역할을 뒷바침해준다. M21 흑색종 세포는 RPARPAR 펩타이드와 결합하지도 내재화하지도 않으며, NRP-1을 발현시키지도 않는다. RPARPAR 파지와 결합 및 내재화할 수 있는 세포 내에서는 NRP-1의 강제 발현이 나타난 반면, NRP-1 결합 포켓 변이체로 트랜스펙션된 세포는 RPARPAR 결합을 제공하지 못했다. 마지막으로, 면역형광 동시염색에서 RPARPAR 파지 및 양자점은 세포 표면에서 및 세포 내부에서 NRP-1과 코로칼라이제이션(co-localization)된다는 것을 보여준다.
혈관 내피 성장인자의 또 다른 형태 중의 하나인 VEGF-165는 exon 8(CRCDKPRR; SEQ ID NO:95; Jia et al., 2006)에 의해 암호화되는 C-말단 CendR-유사 서열을 사용하여 NRP-1과 결합한다. 또한, A7R(ATWLPPR; SEQ ID NO:96; Starzec et al., 2006), 면역조절 펩타이드인 터프친(tuftsin)(TKPR; SEQ ID NO:97) 및 그 변이체인 강화 터프친(TKPPR; SEQ ID NO:98; von Wronski et al., 2006)과 같은 몇몇 펩타이드도 NRP-1의 동일한 부위에 결합한다(Geretti et al., 2008). 또한 상기 부위에 결합하는 세마포린 3A(Semaphorin 3A)는 혈관 투과성을 향상시킨다(Acevedo et al., 2008). VEGF-165, 강화 터프친 또는 A7R의 7개의 C-말단 아미노산을 디스플레이하는 T7 파지는 PPC-1 세포와 결합하고 그 세포에 의해 흡수되었으며, 두 활성도는 표지되지 않은 RPARPAR 펩타이드가 결합 완충액 내에 함유되거나 아닐린 잔기가 VEGF-C7의 C-말단에 첨가되는 경우 감소되었다. 이 실험은 CendR 펩타이드는 NRP-1이 중요한 성분으로서 관여하는 경로에 의해 내재화된다는 것을 보여준다.
안테나페디아, 헤르페스 심플렉스 바이러스-1 단백질 VP22, 및 인간 면역결핍 바이러스-1 트랜스액티베이터 TAT 단백질과 같은 호메오도메인(homeodomain) 전사인자는 세포에의 내재화에 사용되는 것으로 알려져 있다. 이러한 단백질로부터 유도되는 짧은 사슬의 양이온 세포 침투성 펩타이드(CPP)는 내재화 능력을 보유한다. 그러나, 이러한 펩타이드는, 펩타이드 중의 아미노산의 키랄성(chirality)에 의존적이고, 활성을 위해 세포 표면 헤르파란 술페이트를 필요로 하며 조직-침투 활성을 가지지 못한다는 점에서 CendR 펩타이드와 다르다(Langel, 2007).
파지 스크린으로부터의 종양- 귀소 펩타이드 내의 잠재성 CendR 서열: 트립신에 의해 RPARPARA 펩타이드의 활성이 C-말단 차단된다는 것은 내부 CendR 모티프가 프로테아제에 의해 활성화되어 내재화 및 조직 침투를 촉진할 수 있다는 것을 시사하는 것이다. 사실상, 종양 귀소 스크린으로부터의 세포-침투성 펩타이드의 검사에서, 몇몇 잠재적 CendR 펩타이드가 밝혀졌다. 이러한 펩타이드에는 KRTR 서열(SEQ ID NO:100; Laakkonen et al., 2002, 2004; PCT 공개공보 WO 2007/090194; 미국 특허 출원 공개공보 제 2008/0014143 호)을 함유하는 Lyp-1(CGNKRTRGC; SEQ ID NO:99), CRGRRST(SEQ ID NO:1010, RGRR(SEQ ID NO:102; Joyce et al., 2003), 및 탁월한 세포 및 조직 침투 활성을 가진 신규한 RGD 펩타이드, iRGD(Sugahara et al., 2009; 2009년 1월 19일 출원된 미국 특허 출원 제 12/355,672 호) 등이 있다.
상기 열거한 종양-귀소 펩타이드 각각은 CendR 모티프인 R/KXXK/R을 함유하지만, 이 모티프는 C-말단이 아니다. 단백질 분해 과정이 이 펩타이드 내의 CendR 모티프를 활성화할 수 있다고 가정하였다. 실제로, iRGD 파지 또는 LyP-1 파지를 트립신으로 처리함으로써 파지와 PPC1 세포의 결합을 향상시킬 수 있다. 트립신은 비-내재화 펩타이드 CRGDC (SEQ ID NO:36) 또는 RGD-4C에 영향을 주지 않았다. 원래 그대로의 iRGD 파지가 아닌, 트립신으로 처리된 iRGD 파지의 4℃에서의 결합은 원형 CendR 펩타이드인 RPARPAR를 발현시키는 비감염성 파지에 의해 차단되었으나, C-말단(RPARPARA; SEQ ID NO:2)에 알라닌 잔기를 첨가함으로써 CendR 모티프가 차폐되는 펩타이드를 디스플레이하는 파지에 의해서는 차단되지 않았다. 또한, 세포내 생성물은 iRGD 펩타이드로 처리된 세포로부터 분리되었으며, 질량 분석법에서, 예측되는 CendR-활성 단편인 CRGDK (SEQ ID NO:34)가 상기 세포로부터 회수될 수 있다는 것을 알게 되었다(Sugahara et al., 2009; 2009년 1월 19일 출원된 미국 특허 출원 제 12/355,672 호).
iRGD 펩타이드는 혈관외 유출 및 조직 침투를 촉진하는데 매우 효과적이다. 즉, iRGD 펩타이드 및 iRGD 파지는 종양 조직 내로 확산되는 반면, 잠재성 CendR 모티프가 결여된 종래의 iRGD 펩타이드는 종양 혈관에만 도달한다(도 4 참조). iRGD 펩타이드는 정상 조직에 귀소하는 양이 감지되지 않는 정도의 양이다. iRGD 펩타이드로 코팅된 나노입자는 놀랄정도로 조직 내에 확산되며, 그럼으로서 광학 영상화, MRI를 가능하게 하고, 파클리탁셀(paclitaxel)과 알부민으로 구성된 나노입자 약물인 아브락산의 활성을 향상시킨다. iRGD에 의한 귀소 기능의 향상 정도는 비표적 대조용에 비해 평균 12배 높았다(Sugahara et al., 2009; 2009년 1월 19일 출원된 미국 특허 출원 제 12/355,672 호). 또한, LyP-1 펩타이드는 나노입자 및 다른 공조성물을 혈관외부 종양 조직 내로 깊숙히 수송한다(Laakkonen et al., 2002, 2004; PCT 공개공보 WO 2007/090194; 미국 특허 출원 공개공보 제 2008/0014143 호). 이러한 결과는 CendR 요소가 조직 침투 및 세포 내재화를 매개한다는 점과, 잠재성 CendR 요소를 함유하는 종양-귀소 펩타이드가 특이적인 페이로드의 종양 내로의 전달에 매우 효과적이라는 점을 입증한다. 본 명세서에서 기술한 바와 같이, CendR 요소와 CendR 귀소 펩타이드의 사용은 종양이 아닌 조직에까지 확장될 수 있다.
기관-특이적 CendR 귀소 펩타이드: 대부분의(아마도 모든) 정상 조직은 특이적 분자 마커에 의해 정의되는 조직-특이적인 분자 표시를 그 혈관계 상에 위치시킨다(Rouslahti, 2004). 종양의 경우, 이러한 차이는 파지 디스플레이 스크린으로부터의 펩타이드를 이용하여 탐침될 수 있으며, CendR 요소 및 CendR 펩타이드와 같은 화합물 및 조성물의 전달에 있어서 표적으로서 활용될 수 있다.
여태까지 생체내 파지 디스플레이에 의해 분석되는 모든 정상 조직은 조직-특이적 내피 마커를 발현시키는 것으로 판명되었다. 이러한 조직에는 뇌, 폐, 심장 및 신장과 같은 주요 기관 뿐만 아니라 전립선과 같은 소기관도 포함된다(Ruoslahti and Rajotte, 2000; Arap et al, 2002; Zhang et al., 2005). 초기 연구는 파지 표면 단백질 상의 N-말단 연장으로서 인서트가 발현되는 섬유성 파지 라이브러리를 사용하여 수행되었다. 이 라이브러리는 CendR 펩타이드를 선호하지 않으며, 따라서 이 스크린으로부터 회수되는 조직-특이적 귀소 펩타이드는 CendR 모티프를 함유하지 않는다.
T7을 이용한 최근 연구에서 기관-특이적 귀소 펩타이드에 대한 조사 결과, 잠재성 CendR 서열을 가지는 다수의 펩타이드가 밝혀졌다. 심장-귀소 펩타이드 수집물(Zhang et al., 2005; 미국 특허 출원 공개공보 제 2006/0160743 호 및 제 2009/0092548 호)은 3가지 상기 펩타이드를 함유한다. 그 중 가장 강력한 2가지 펩타이드는 CGRKSKTVC(SEQ ID NO:103)(제안된 수용체, 시스테인이 풍부한 단백질 2) 및 CPKTRRVPC(SEQ ID NO:104)(수용체, 방광암 관련 단백질 b10)이다. 더욱 최근에는 정상 전립선 조직을 이용하여 T7-기초 스크리닝을 수행하였는데, 초기의 섬유성 파지 스크린(Arap et al., 2002)과는 달리, T7 스크린도 또한 CendR 펩타이드의 우세함을 보여주었다. 마우스 전립선으로부터 분리된 세포 상의 3개의 생체외 스크리닝 라운드와 전립선 귀소를 위한 하나의 생체내 스크리닝 라운드로 구성되는 스크린으로부터 얻은 21개의 펩타이드 중 9개의 펩타이드는 잠재성 CendR 모티프를 함유하였다. 흥미롭게도, 이 9개 중 8개의 펩타이드는 모두 CRXTRXXRC 컨센서스(SEQ ID NO:105)와 일치한다는 점에서 서로 매우 유사하였다. 외관 CendR 모티프를 함유하는 광견병 마이러스-유도 펩타이드는 siRNA를 뇌혈관 장벽을 통해 뇌로 전달하는데 사용되고 있다(Kumar et al., 2007). 이러한 결과는 CendR 특성을 갖는 기관-특이적 펩타이드가 제조 및 사용될 수 있다는 것을 시사한다.
본 명세서에서 기술한 바와 같이, 조직-특이적 귀소, 조직 침투 및 세포 내재화 기능을 함께 가지는 펩타이드를 스크리닝 및 제조할 수 있다. 이 펩타이드는 귀소 및 조직-침투 요소의 다양한 배합물을 사용할 수 있으며, 심장, 폐 또는 전립선을 표적화할 수 있다.
정상 기관은 중재술(intervention)이 가장 유리한 것으로 생각되는 단계, 특히 질병 초기 단계의 병든 조직 내에서도 혈관계 및 유조직의 조직-특이적 특성이 유지되는 것으로 예측될 수 있기 때문에, 표적으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 심장, 폐 및 전립선이 표적 대상이 될 수 있다. 이러한 조직의 혈관계의 경우, 종래의 CendR 펩타이드 및 후보자 CendR 펩타이드 둘 다 고려될 수 있다. 특이적 표적화 및 조직 침투를 이용하는 치료(낭포성 섬유증이 이러한 질병의 한 예임)에 있어서 표적으로서 특히 관심있는 대상은 심장 및 폐이다. 더욱이, 오른쪽 심장 및 폐는 정맥 주입된 펩타이드와 처음 만나는 조직이다. 실제로, 사전-활성화된 CendR 펩타이드(노출된 R/KXXR/K 배열을 갖는 펩타이드; SEQ ID NO:23)는 이러한 조직에 의해 선택적으로 보유된다. 따라서, 이들 조직은 RPARPAR(SEQ ID NO:2) 및 CRPPR(SEQ ID NO:106; Zhang et al., 2005)과 같은 펩타이드로 선택적으로 표적화될 수 있다. 이미 형질전환된 전립선 암 마우스를 사용하여 전립선 종양이 현저히 진행되기 전에 전립선 조직을 표적 파괴함으로써 전립선 암 마우스의 종양 진행을 늦출수 있다는 것을 보여주고 있다(Arap et al., 2002). 본 발명의 펩타이드는 이러한 절차를 개선하는데 보다 효과적일 것이다. 게다가, 전립선은 소기관을 대표하는 것으로, 일차통과 효과(first pass effect)가 하나의 인자가 아닌 기관이다. 뉴로필린-1은 내피세포, 여러 유조직 세포의 도처에서 발현되고, 다수의 외관 CendR 펩타이드가 전립선 스크린에서 얻어지므로, 전립선의 경우에도 CendR 방법을 이용할 수 있다.
예를 들어, 선택된 기관에 대한 조직-침투성 펩타이드의 경우 하기의 3가지 방법을 이용할 수 있다. (1) 심장 및 전립선에 대해 이미 가까이 존재하는 CendR 모티프 펩타이드를 테스트함; (2) 이미 확인된 귀소 서열 및 유전자 CendR 모티프를 함유하는 키메릭 펩타이드를 구축함; (3) 새로운 펩타이드에 대한 파지 스크리닝을 수행함.
CendR 모티프 귀소 펩타이드 존재: 폐에 귀소하는 펩타이드(Rajotte and Ruoslahti,1999; Brown and Ruoslahti,2004), 심장에 귀소하는 펩타이드(Zhang et al., 2005, 및 공표되지 않은 결과), 및 전립선에 귀소하는 펩타이드(Arap et al., 2002, 및 공표되지 않음)가 고려된다. 이러한 펩타이드 중 일부 펩타이드는 CendR 모티프를 함유한다. 펩타이드의 귀소는 몇 가지 방식으로 정립될 수 있다. 한 예는 "플레이 오프 스크리닝(play off screening)"이라고 불리는 스크리닝법을 이용하는 것이다. 후보자 파지를 동일 비율로 배합하고, 그 풀을 마우스에 주입한 후에, 표적 기관 또는 조직을 여러 다른 기관 또는 조직과 함께 수집한 다음, 정량적 PCR 분석에 의해 파지 디스플레이 펩타이드가 우선적으로 표적에 귀소하였는지를 결정한다. 폐(및 심장)은 활성화된 CendR 펩타이드(예컨대, RPARPAR; SEQ ID NO:2)로 어느 정도까지는 표적화될 수 있다. 귀소는 일차통과 효과를 기초로 하며, 심장(특히 오른쪽)을 포함한다. 또한, 다른 기관에서도 이 펩타이드의 실질적 축적이 이루어질 수 있다. 결과적으로, 엄격한 표적화가 요구되는 경우에 최상의 방법이다.
키메릭 펩타이드: 이미 확인된(및 미래의) 비-CendR 귀소 펩타이드는 활성화된 또는 활성화가능한 CendR 요소와 배합될 수 있다. 예를 들어, 폐에 귀소하는 펩타이드(Rajotte and Ruoslahti,1999; Brown and Ruoslahti,2004) 및 전립선에 귀소하는 펩타이드(Arap et al., 2002, 및 공표되지 않음)를 RPARPAR(SEQ ID NO:2)와 배합함으로써, 귀소 펩타이드는 RPARPAR(SEQ ID NO:2)의 C-말단이 되고(CendR 활성을 차단하기 위해), CendR 활성을 위한 프로테아제 절단 부위를 제공하는 서열에 의해 분리될 수 있다. 이러한 펩타이드 내의 잠재성 CendR 요소는 퓨린에 의해 활성화될 수 있다. 이 효소는 RXXR(특히, X 중의 하나가 염기성 아미노산일 때) 구조식의 C-말단 아르기닌 이후 부분의 절단을 선호한다. 그러나, 트립신에 의한 RPARPARA(SEQ ID NO:2) 및 iRGD의 활성화에서 알 수 있는 바와 같이, 염기성 아미노산 이후 부분을 절단하는 어떠한 효소도 잠재적으로 잠재성 CendR 서열을 활성화시킬 수 있다. CendR 귀소 펩타이드에 대한 원시 수용체와 연관된 효소의 위치가 활성화에 영향을 줄 수 있다. 판독시 파지 적정법을 이용한 파지-디스플레이 펩타이드로서 구조체(construct)를 테스트할 수 있다. 필요하다면, 구조체 RPARPXRXXXX-귀소 펩타이드(SEQ ID NO:107)를 함유하는 파지 라이브러리를 제조하고, 표적 조직으로부터 분리된 세포에의 결합 및 내재화를 위해 스크리닝함으로써 프로테아제 절단 부위를 최적화할 수 있다.
폐 귀소의 경우, 예를 들어, 서열 CGFELETC(SEQ ID NO:108; Rajotte and Ruoslahti, 1999; 표적 분자; 맴브레인 디펩티딜 펩티다아제)를 사용하여 키메릭 펩타이드 라이브러리를 구축할 수 있다.
심장 귀소에 대한 또 다른 전략으로서, 비-CendR 펩타이드 심장-귀소 펩타이드 수집물(Zhang et al., 2005)을 사용하여 키메릭 펩타이드 라이브러리를 구축할 수 있다. 또 다른 전략으로서, 심장에 대한 선호도를 보여주는(Zhang et al., 2005) 활성화된 CendR 펩타이드 CRPPR(SEQ ID NO:106)을 사용할 수 있다. 예를 들어, 활성화 및/또는 내재화(CendR 요소를 활성화시키기 위해 C-말단 아미노산이 절단되어 제거되어야 함 - 또한 다른 아미노산도 사용될 수 있음)에 대해 CRPPRA 서열(SEQ ID NO:109)을 테스트하거나, 또는 예를 들어, 구조체 CRPRPXXXX(SEQ ID NO:110)를 함유하는 파지 라이브러리를 스크리닝함으로써, CendR-모티프 펩타이드를 생성시킬 수 있다.
전립선의 경우, 예를 들어, 전립선-귀소 펩타이드(SMSIARL; 알려지지 않은 표적 분자; Arap et al., 2002)를 키메릭 펩타이드 라이브러리 구축에 있어서 출발점으로서 사용할 수 있다. 전립선 특이적 막 항체(PSMA)는 전립선에서 활성화되는 CendR 펩타이드의 또 다른 흥미있는 공급원을 제공한다. PSMA는 글루타밀-선호 카르복시펩티다아제이다(예컨대, Liu et al., 2002). RPARPAR 펩타이드를 C-말단 글루탐산(RPARPARE; SEQ ID NO:111)로 차단함으로써 전립선에서 선택적으로 활성화되는 CendR 펩타이드가 제공될 것이다. 카르복시펩티다아제의 발현은 암세포 내에서 상향조절되며, 이는 암치료에 있어서 활성화에 특히 유용하다. 전립선 내의 펩타이드 농도를 증가시키기 위해서, 이 경우, 예를 들어 RPARE 서열(SEQ ID NO:111의 아미노산 4-8)(SMSIARLARPARE; SEQ ID NO:113)의 N-말단부에 전립선-귀소 SMSIARL 서열(SEQ ID NO:112)이 첨가된 구조체를 형성시킨다. 두 펩타이드 사이에 하나의 아미노산(예를 들어, 알라닌)을 삽입함으로써, RPARPAR(SEQ ID NO:2)의 것과 유사한 이중 CendR 모티프가 형성된다.
본 발명의 펩타이드는 예를 들어, 시험관 내에서의 세포 결합 및 내재화, 및 생체 내에서의 귀소를 테스트함으로써 유효화될 수 있다. 선택된 파지와 연관된 활성이 파지가 디스플레이하는 펩타이드에 의해 재생성된다는 것을 보여주기 위해서 합성 펩타이드가 사용될 수 있다. 이에 대한 기술은 잘 알려져 있다(예를 들어, Zhang et al., 2005; Simberg et al., 2007; Karmalivet al., 2008). 일반적으로 펩타이드는 발색단으로 표지됨으로써 조직 내에서 검출을 가능하게 하며, 나노입자 상의 프리 펩타이드 및 다중결합 콘쥬게이트 둘 다를 테스트할 수 있다.
본 발명은 CendR 요소를 정해진 세포에 선택적으로 전달하고, 그럼으로써 귀소 CendR 조성물을 형성하기 위해서 CendR 요소와 결합하는 귀소 분자에 관한 것이다. 본 발명의 조성물, 콘쥬게이트 및 방법에 다양한 귀소 분자를 사용할 수 있다. 이러한 귀소 분자에는 본 명세서에서 기술되는 펩타이드가 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. 본 발명의 화합물, 조성물, 콘쥬게이트 및 방법은 앞서 기술한 바와 같이 펩타이드 및 펩타이드 모방체를 포함한 다양한 형태의 귀소 분자를 함유하거나 사용할 수 있다. 표현의 편의상, 본 명세서의 많은 부분에서 펩타이드의 사용 또는 함유에 대해 다시 인용될 것이다. 이러한 경우, 펩타이드에 관하여 기술되는 것과 동일하거나 유사한 방식으로 다양한 형태의 귀소 분자를 사용 또는 함유할 수 있으며, 이러한 사용 및 함유는 구체적으로 의도되고 기술된다. 귀소 펩타이드, 분자 등은 하나 이상의 귀소 펩타이드 또는 분자와 배합되어 있는 CendR 요소를 의미한다.
본 명세서에서, "귀소 분자"라는 용어는 생체 내에서 정상 조직 보다는 선택적으로 특이적 세포 또는 특이적 조직에 귀소하는 분자를 의미한다. 이와 마찬가지로, "귀소 펩타이드" 또는 "귀소 펩타이드 모방체"는 생체 내에서 정상 조직 보다는 선택적으로 특이적 세포 또는 특이적 조직에 귀소하는 펩타이드를 의미한다. 귀소 분자는 생체 내에서 선택적으로 특이적 세포 또는 특이적 조직에 귀소하거나, 우선적으로 특이적 세포 또는 특이적 조직에 귀소할 수 있다는 점을 이해해야 한다.
"선택적으로 귀소한다"라는 용어는 생체 내에서 귀소 분자가 비-표적 보다는 표적에 우선적으로 결합한다는 의미이다. 예를 들어, 귀소 분자는 비종양 보다는 종양에 우선적으로 결합할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포에의 선택적인 귀소는 일반적으로 여러 조직 형태의 비종양 세포보다 종양 세포 내에 위치하는 경향이 2배 이상 높은 특징이 있다. 귀소 분자는 대부분 또는 모든 비표적 세포보다 표적 세포에 우선적으로 위치하는 경향이 5배, 10배, 20배 이상 높은 특징이 있다. 따라서, 일부 경우에 귀소 분자는 표적 세포 및 조직에 귀소할 뿐만 아니라, 하나 이상의 정상 세포, 조직 및 기관에도 일부 귀소한다는 점을 이해해야 한다. 선택적인 귀소를 표적화라고도 말할 수 있다.
예를 들어, 귀소 분자가 공유 및/또는 비공유 결합에 의해 그 표적에 결합, 부착 또는 연결될 수 있는 경우에, 표적을 인식 및/또는 결합하는 귀소 분자에 있어서 결합은 공유 결합 및 비공유 결합 둘다를 의미하는 것이다. 결합은 높은 친밀성 또는 낮은 친밀성이 가능하나, 높은 친밀성인 것이 바람직하다. 효과적일 수 있는 결합력의 예로는 공유 결합, 쌍극자 상호작용, 정전기력, 수소 결합, 소수성 상호작용, 이온 결합 및/또는 반데르 발스의 힘이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 이러한 결합은 CendR 요소와 발생하는 결합 외에도 발생할 수 있다.
많은 귀소 분자 및 귀소 펩타이드는 표적 조직의 혈관계에 귀소한다. 그러나, 편의상 귀소는 귀소 분자 및 귀소 펩타이드가 자연적으로 귀소하는 혈관계와 연관되는 조직에 귀소하는 것을 포함한다. 따라서, 예를 들어, 종양 혈관계에 귀소하는 귀소 펩타이드는 종양 조직 또는 종양 세포에 귀소하는 것을 의미한다. 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드를 예컨대, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 키고 조성물 또는 CendR 요소에 연결 또는 함유시킴으로써, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물 또는 CendR 요소는 표적화될 수도 있고 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드의 표적에 귀소할 수 있다. 이런 방식으로, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물 또는 CendR 요소는 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드의 표적에 귀소한다고 말할 수 있다. 편의상 별도의 설명이 없는 한, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물 또는 CendR 요소 등의 귀소에 관한 언급은 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물 또는 CendR 요소 등이 적합한 귀소 분자 또는 귀소 펩타이드를 함유하거나 이와 연결된다는 것을 시사하는 것이다.
본 발명의 아미노산 서열, 공조성물, 카고 조성물, 단백질 또는 펩타이드(및 귀소 분자와 결합 또는 연결되는 CendR 요소)는 예를 들어, 뇌세포, 뇌 줄기세포, 뇌조직 및/또는 뇌혈관계, 신장세포, 신장 줄기세포, 신장조직 및/또는 신장혈관계, 피부세포, 피부 줄기세포, 피부조직 및/또는 피부혈관계, 폐세포, 폐조직 및/또는 폐혈관계, 췌장세포, 췌장조직 및/또는 췌장혈관계, 장세포, 장조직 및/또는 장혈관계, 부신세포, 부신조직 및/또는 부신혈관계, 망막세포, 망막조직 및/또는 망막혈관계, 간세포, 간조직 및/또는 간혈관계, 전립선 세포, 전립선 조직 및/또는 전립선 혈관계, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 및/또는 자궁내막증 혈관계, 난소세포, 난소조직 및/또는 난소혈관계, 종양세포, 종양, 종양혈관 및/또는 종양 혈관계, 골세포, 골조직, 및/또는 골 혈관계, 골수세포, 골수조직, 및/또는 골수 혈관계, 연골세포, 연골조직, 및/또는 연골 혈관계, 줄기세포, 배아 줄기세포, 만능 줄기세포, 유도 만능 줄기세포, 성체 줄기세포, 조혈 줄기세포, 신경 줄기세포, 간엽성 줄기세포, 유방 줄기세포, 내피 줄기세포, 후각 성체 줄기세포, 신경능선 줄기세포, 암 줄기세포, 혈액 세포, 적혈구, 혈소판, 백혈구, 과립구, 호중구, 에오신 호성 백혈구, 호염기성 세포, 림프구성 세포, 림프구, 단핵세포, 손상 혈관계, 손상 조직의 혈관계, 염증있는 조직의 혈관계, 아테롬성 동맥경화 플라크 또는 그 배합체에 귀소할 수 있다.
귀소 분자 및 귀소 펩타이드의 예는 알려져 있다. 그 예를 들면 다음과 같다. 즉, 뇌 귀소 펩타이드, 예컨대, CNSRLHLRC (SEQ ID NO:114), CENWWGDVC (SEQ ID NO:115), WRCVLREGPAGGCAWFNRHRL (SEQ ID NO:116), CLSSRLDAC (SEQ ID NO:117), CVLRGGRC (SEQ ID NO:118), CNSRLQLRC (SEQ ID NO:119), CGVRLGC (SEQ ID NO:120), CKDWGRIC (SEQ ID NO:121), CLDWGRIC (SEQ ID NO:122), CTRITESC (SEQ ID NO:123), CETLPAC (SEQ ID NO:124), CRTGTLFC (SEQ ID NO:125), CGRSLDAC (SEQ ID NO:126), CRHWFDVVC (SEQ ID NO:127), CANAQSHC (SEQ ID NO:128), CGNPSYRC (SEQ ID NO:129), YPCGGEAVAGVSSVRTMCSE (SEQ ID NO:130), LNCDYQGTNPATSVSVPCTV (SEQ ID NO:131); 신장 귀소 펩타이드, 예컨대, CLPVASC (SEQ ID NO:132), CGAREMC (SEQ ID NO:133), CKGRSSAC (SEQ ID NO:134), CWARAQGC (SEQ ID NO:135), CLGRSSVC (SEQ ID NO:136), CTSPGGSC (SEQ ID NO:137), CMGRWRLC (SEQ ID NO:138), CVGECGGC (SEQ ID NO:139), CVAWLNC (SEQ ID NO:140), CRRFQDC (SEQ ID NO:141), CLMGVHC (SEQ ID NO:142), CKLLSGVC (SEQ ID NO:143), CFVGHDLC (SEQ ID NO:144), CRCLNVC (SEQ ID NO:145), CKLMGEC (SEQ ID NO:146); 피부 귀소 펩타이드, 예컨대, CARSKNKDC (SEQ ID NO:147), CRKDKC (SEQ ID NO:148), CVALCREACGEGC (SEQ ID NO:149), CSSGCSKNCLEMC (SEQ ID NO:150), CIGEVEVC (SEQ ID NO:151), CKWSRLHSC (SEQ ID NO:152), CWRGDRKIC (SEQ ID NO:153), CERVVGSSC (SEQ ID NO:154), CLAKENVVC (SEQ ID NO:155); 폐 귀소 펩타이드, 예컨대, CGFECVRQCPERC (SEQ ID NO:156), CGFELETC (SEQ ID NO:157), CTLRDRNC (SEQ ID NO:158), CIGEVEVC (SEQ ID NO:159), CTLRDRNC (SEQ ID NO:160), CGKRYRNC (SEQ ID NO:161), CLRPYLNC (SEQ ID NO:162), CTVNEAYKTRMC (SEQ ID NO:163), CRLRSYGTLSLC (SEQ ID NO:164), CRPWHNQAHTEC (SEQ ID NO:165); 췌장 귀소 펩타이드, 예컨대, SWCEPGWCR (SEQ ID NO:166), CKAAKNK (SEQ ID NO:167), CKGAKAR (SEQ ID NO:168), VGVGEWSV (SEQ ID NO:169); 장 귀소 펩타이드, 예컨대, YSGKWGW (SEQ ID NO:170); 자궁 귀소 펩타이드, 예컨대, GLSGGRS (SEQ ID NO:171); 부신 귀소 펩타이드, 예컨대, LMLPRAD (SEQ ID NO:172), LPRYLLS (SEQ ID NO:173); 망막 귀소 펩타이드, 예컨대, CSCFRDVCC (SEQ ID NO:174), CRDVVSVIC (SEQ ID NO:175); 내장 귀소 펩타이드, 예컨대, YSGKWGK (SEQ ID NO:176), GISALVLS (SEQ ID NO:177), SRRQPLS (SEQ ID NO:178), MSPQLAT (SEQ ID NO:179), MRRDEQR (SEQ ID NO:180), QVRRVPE (SEQ ID NO:181), VRRGSPQ (SEQ ID NO:182), GGRGSWE (SEQ ID NO:183), FRVRGSP (SEQ ID NO:184), RVRGPER (SEQ ID NO:185); 간 귀소 펩타이드, 예컨대, VKSVCRT (SEQ ID NO:186), WRQNMPL (SEQ ID NO:187), SRRFVGG (SEQ ID NO:188), ALERRSL (SEQ ID NO:189), ARRGWTL (SEQ ID NO:190); 전립선 귀소 펩타이드, 예컨대, SMSIARL (SEQ ID NO:191), VSFLEYR (SEQ ID NO:192), RGRWLAL (SEQ ID NO:193); 난소 귀소 펩타이드, 예컨대, EVRSRLS (SEQ ID NO:194), VRARLMS (SEQ ID NO:195), RVGLVAR (SEQ ID NO:196), RVRLVNL (SEQ ID NO:197); 응고 결합 귀소 펩타이드, 예컨대, CREKA (SEQ ID NO:7), CLOT1 및 LOT2; 심장 귀소 펩타이드, 예컨대, CRPPR (SEQ ID NO:198), CGRKSKTVC (SEQ ID NO:199), CARPAR (SEQ ID NO:200), CPKRPR (SEQ ID NO:201), CKRAVR (SEQ ID NO:202), CRNSWKPNC (SEQ ID NO:203), RGSSS (SEQ ID NO:204), CRSTRANPC (SEQ ID NO:205), CPKTRRVPC (SEQ ID NO:206), CSGMARTKC (SEQ ID NO:207), GGGVFWQ (SEQ ID NO:208), HGRVRPH (SEQ ID NO:209), VVLVTSS (SEQ ID NO:210), CLHRGNSC (SEQ ID NO:211), CRSWNKADNRSC (SEQ ID NO:212), CGRKSKTVC (SEQ ID NO:213), CKRAVR (SEQ ID NO:214), CRNSWKPNC (SEQ ID NO:215), CPKTRRVPC (SEQ ID NO:216), CSGMARTKC (SEQ ID NO:217), CARPAR (SEQ ID NO:218), CPKRPR (SEQ ID NO:219); 종양 혈관 귀소 펩타이드, 예컨대, CNGRC (SEQ ID NO:220) 및 NGR 모티프를 함유하는 다른 펩타이드(미국 특허 제 6,177,542 호 및 제 6,576,239; 미국 특허 출원 공개공보 제 20090257951 호); RGD 펩타이드, 및 PGR 펩타이드 등이 있다. 다른 귀소 펩타이드는 종양에 귀소하는 CSRPRRSEC (SEQ ID NO:221), CSRPRRSVC (SEQ ID NO:222), 및 CSRPRRSWC (SEQ ID NO:223)(Hoffman et al., Cancer Cell, vol.4(2003)), F3 (KDEPQRRSARLSAKPAPPKPEPKPKKAPAKK; (SEQ ID NO:224)), PQRRSARLSA (SEQ ID NO:225), PKRRSARLSA (SEQ ID NO:226)(미국 특허 제 7,544,767 호) 및 CGRECPRLCQSSC (SEQ ID NO:62)를 포함한다.
많은 귀소 및 표적화 모티프 및 서열은 한 말단 또는 양쪽 말단에 시스테인 잔기를 가지는 것으로 알려져 있으나, 일반적으로 이러한 시스테인 잔기는 귀소 기능에 필요하지 않다는 점을 이해해야 한다. 일반적으로 이러한 잔기는 귀소 및 표적화 서열을 확인하는 방법으로 인해 존재하는 것이다. 이러한 말단 시스테인은 본 명세서에서 기술한 바와 같이 펩타이드를 환형화하는데 사용될 수 있다. 이러한 이유로, 본 발명의 어떠한 펩타이드의 말단에 시스테인 잔기를 첨가할 수 있다는 점을 이해해야 한다.
유용한 NGR 펩타이드는 직선형 또는 환형일 수도 있는 X2CNGRCX2 (SEQ ID NO:89), CX2(C/X)NGR(C/X)X2C (SEQ ID NO:90) 및 CNGRCX6 (SEQ ID NO:91)(여기에서, "X"는 아미노산임)과 같은 펩타이드를 포함한다. NGR 펩타이드의 예로는 CNGRCVSGCAGRC (SEQ ID NO:63), NGRAHA (SEQ ID NO:24), CVLNGRMEC (SEQ ID NO:67), CNGRC (SEQ ID NO:68), ALNGREESP (SEQ ID NO:66), CVLNGRME (SEQ ID NO:87), CKVCNGRCCG (SEQ ID NO:88), CEMCNGRCMG (SEQ ID NO:69), CPLCNGRCAL (SEQ ID NO:70), CPTCNGRCVR (SEQ ID NO:71), CGVCNGRCGL (SEQ ID NO:72), CEQCNGRCGQ (SEQ ID NO:73), CRNCNGRCEG (SEQ ID NO:74), CVLCNGRCWS (SEQ ID NO:75), CVTCNGRCRV (SEQ ID NO:76), CTECNGRCQL (SEQ ID NO:77), CRTCNGRCLE (SEQ ID NO:78), CETCNGRCVG (SEQ ID NO:79), CAVCNGRCGF (SEQ ID NO:80), CRDLNGRKVM (SEQ ID NO:81), CSCCNGRCGD (SEQ ID NO:82), CWGCNGRCRM (SEQ ID NO:83), CPLCNGRCAR (SEQ ID NO:84), CKSCNGRCLA (SEQ ID NO:85), CVPCNGRCHE (SEQ ID NO:86), CQSCNGRCVR (SEQ ID NO:47), CRTCNGRCQV (SEQ ID NO:48), CVQCNGRCAL (SEQ ID NO:49), CRCCNGRCSP (SEQ ID NO:50), CASNNGRVVL (SEQ ID NO:51), CGRCNGRCLL (SEQ ID NO:52), CWLCNGRCGR (SEQ ID NO:53), CSKCNGRCGH (SEQ ID NO:54), CVWCNGRCGL (SEQ ID NO:55), CIRCNGRCSV (SEQ ID NO:56), CGECNGRCVE (SEQ ID NO:57), CEGVNGRRLR (SEQ ID NO:58), CLSCNGRCPS (SEQ ID NO:59), CEVCNGRCAL (SEQ ID NO:60) 등이 있다.
종양 표적화에 유용한 펩타이드는 예를 들어, iRGD, LyP-1, iNGR 및 RGR 펩타이드를 포함한다. 원형 종양-귀소 CendR 펩타이드인 iRGD를 사용하여 본 명세서에 기술되는 결과를 도출하였다. 추정 CendR 요소를 함유하는 펩타이드인 LyP-1는 종양 침투 특성을 가진다. 이 펩타이드는 종양 내부에 고유한 표적을 가진다. 즉, 이 펩타이드는 종양의 저산소증/저영양 부위에 우선적으로 축적된다(Laakkonen et al., 2002; 2004; Karmali et al., 2009). CRGRRST(RGR; Joyce et al., 2003)는 사이토킨 항체 배합물을 종양 내에 표적화하는데 성공적으로 사용되어 온 펩타이드이다(Hamzah et al., 2008). 이 펩타이드는 직선형으로, 합성을 단순화시킨다. NGR 펩타이드는 종양, αv 인테그린 및 α5β1 인테그린과 연관된 혈관신생 혈관계를 포함한 혈관신생 혈관계에 귀소한다(미국 특허 제 6,576,239 호 및 제 6,177,542 호 및 미국 특허 출원 공개공보 제 20090257951 호). LyP-1과 마찬가지로, RGR은 적어도 어느 정도까지는 종양 유형에 특이적이지만(Joyce et al., 2003), 두 펩타이드에 의해 인식되는 종양 유형은 부분적으로 다르게 보이며, 이는 팬-종양 iRGD를 함유하는 조성물을 테스트하는데 있어서 장점이 될 수 있다. 표 3은 종양-귀소 CendR 펩타이드의 예를 보여준다.
MLGDPNS
다음 서열		 참고문헌
CRKDKC Jarvinen et al., Am. J. Pathol. 171(2):702-711(2007);
SEQ ID NO:148
CGNKRTRGC Laakkonen et al., Nature Medicine 8:751-755 (2002);
SEQ ID NO:99
AKVKDEPQRR
SARLSAKPAPP
Christian et al., JCB, 163(4): 871-878 (2003);
미국 특허 제 7,544,767 호; SEQ ID NO:35
KPEPKPKKAPAKK
CSRPRRSEC Hoffman et al., Cancer Cell, vol. 4 (2003);
SEQ ID NO:221,222,223
CSRPRRSVC
CSRPRRSWC
CNRRTKAGC Zhang et al., cANCER rES.66(11):5696-5706(2006);
SEQ ID NO:227
CRGRRST
Joyce et al.,4(5):393-403(2003);
SEQ ID NO:101,228,167,168
CRSRKG
CKAAKNK
CKGAKAR
PQRRSARLSA Porkka et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 99(11):7444-7449 (2002);
미국특허 제 7,544,767 호; SEQ ID NO:225
PKRRSARLSA 미국 특허 제 7,544,767 호;
SEQ ID NO:226
CRGDKGPDC iRGD, Sugahara et al., 2009;
2009년 1월 19일 출원된 미국 특허 출원 제 12/355,672 호; SEQ ID NO:3
RGD 펩타이드는 RGD(Arg-Gly-Asp) 모티프를 함유하며 혈관신생 및 종양 혈관계에 귀속하는 펩타이드이다. NGR 펩타이드는 NGR(Asn-Gly-Arg) 모티프를 함유하며 혈관신생 및 종양 혈관계에 귀속하는 펩타이드이다. NGR 펩타이드의 예로는 CNGRCVSGCAGRC(SEQ ID NO:63), NGRAHA(SEQ ID NO:24), CVLNGRMEC(SEQ ID NO:67) 및 CNGRC(SEQ ID NO:68)가 있다. GSL 펩타이드는 GSL(Gly-Ser-Leu) 모티프를 함유하며 종양 혈관계에 귀속하는 펩타이드이다. GSL 펩타이드의 예로는 CGSLVRC(SEQ ID NO:65) 및 CLSGSLSC(SEQ ID NO:64)가 있다.
내재화 RGD(iRGD)는 RGD 모티프와 CendR 요소를 합한 펩타이드를 의미한다. 예를 들어, 서열 CRGDK/RGPD/EC(SEQ ID NO:71)를 갖는 환형 RGD는 혈관외 유출을 조정하고 결합되어 있는 페이로드를 종양 조직 내로 확산시켜, 결과적으로 종양 세포에 내재화하는데 매우 효과적이다. iRGD 펩타이드는 두 가지 기능적 요소, 즉, 종양 특이성을 부여하는 RGD 모티프(Pierschbacher and Ruoslahti, '피브로넥틴의 세포 부착 활성은 분자의 소형 합성 단편에 의해 복제될 수 있다(E. Cell attachment activity of fibronection can be duplicated by small synthetic fragments of the molecule)', Nature 309, 30-33 (1984); Ruoslahti(2003); Eliceiri and Cheresh (2001); Ruoslahti(2002); Arap et al. (1998); Curnis et al. (2004); Sipkins et al. (1998); Murphy et al.(2008)); 및 침투를 매개하는 CendR 모티프를 함유한다. iRGD는 αv 인테그린을 발현시키는 배양 세포에 쉽게 부착되며, 다른 RGD 펩타이드보다 훨씬 효과적으로 내재화된다. 내재화는 CendR 모티프의 수용체인 뉴로필린-1의 발현에 좌우된다. 플루오레세인, 파지 또는 인공 나노입자의 페이로드에 결합되는 iRGD는 생체 내에서 종양 혈관 주위에 축적되어, 종양 간극을 통해 확산되며, 다양한 종양 모델의 종양 세포 내로 내재화된다. 근적외선 염료로 표지된 iRGD 미쉘의 전신적인 투여는 마우스의 전신 이미지화에 있어서 강하고 특이적인 종양 신호를 발생시킨다. iRGD 내의 CendR 요소는 활성가능한 CendR 요소로서 Lys/Arg 이후 부분의 절단에 의해 활성화되며, 이로써 펩타이드가 내재화를 매개할 수 있게 한다.
내재화 NGR(iRGD)는 NGR 모티프와 CendR 요소를 합한 펩타이드를 의미한다. 예를 들어, 서열 K/RNGR(SEQ ID NO:46)을 갖는 NGR은 혈관외 유출을 조정하고 결합되어 있는 페이로드를 종양 조직 내로 확산시켜, 결과적으로 종양 세포에 내재화하는데 효과적이다. iNGR 펩타이드는 두 가지 기능적 요소, 즉 종양 특이성을 부여하는 NGR 모티프 및 침투를 매개하는 CendR 모티프를 함유한다. iNGR 펩타이드의 또 다른 예는 NGRAHA(SEQ ID NO:24)이다. iNGR 펩타이드 NGRAHA(SEQ ID NO:24) 내의 CendR 요소는 활성가능한 CendR 요소로서 Arg 이후 부분의 절단에 의해 활성화되며, 이로써 펩타이드가 내재화를 매개할 수 있게 한다.
악세사리 분자는 CendR 요소, CendR 조성물, CendR 콘쥬게이트, CendR 분자, CendR 화합물, CendR 단백질, CendR 펩타이드, 조성물, 공조성물 및/또는 카고 조성물과 배합되어 사용될 수 있으며 유용한 기능을 가지는 어떠한 분자, 화합물, 성분일 수도 있다. 유용한 악세사리 분자의 예로는 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 등이 있다. 서로 다른 악세사리 분자들은 서로 같은 기능 또는 다른 기능을 가질 수도 있다.
분자, 구조체, 세포, 조직 등을 표적으로 삼거나, 귀소하거나, 친화성을 가지는 분자가 특히 악세사리 분자로서 유용하다. 본 명세서에서 다른 부분에 기술한 귀소 펩타이드 이외에도, 특정 표적 분자, 구조체, 세포, 조직 등에 대한 친화성을 가지며 목적하는 표적에 본 발명의 성분 및 조성물을 축적 및/또는 지향하는데 도움을 줄 수 있는 다수의 분자 및 화합물이 공지되어 있다. 편의상, 이러한 친화성 효과를 귀소라고 말할 수 있다. 본 명세서의 다른 부분에 기술된 귀소 및 귀소 효과에 대한 설명은 이 분자에 적용될 수 있다.
친화성 리간드는 특정 분자, 모이어티, 세포 조직 등과 특이적으로 상호작용하는 분자이다. 친화성 리간드와 특이적으로 상호작용하는 특정 분자, 모이어티, 세포 조직 등은 본 명세서에서는 표적 또는 표적 분자, 모이어티, 세포 조직 등을 의미한다. 표적 분자라는 용어는 친화성 리간드와 특이적으로 상호작용하는 단백질의 에피토프와 같은 분자 모이어티 및 별도의 분자를 의미하는 것으로 이해해야 한다. 친화성 리간드의 예로는 항체, 수용체/리간드 페어의 한 멤버, 합성 폴리아미드(Dervan and Burli, '폴리아미드에 의한 서열-특이적 DNA 인식(Sequence-specific DNA recognition by polyamides)', Curr Opin Chem Biol, 3(6): 688-93 (1999); Wemmer and Dervan, 'DNA의 마이너 그루브 표적화(Targeting the minor groove of DNA)', Curr Opin Struct Biol, 7(3): 355-61 (1997)) 및 특이적 결합 친화성을 갖는 다른 분자 등이 있다.
특정 표적 분자와 특이적으로 상호작용하는 친화성 리간드는 그 표적 분자에 대해 특이적이라고 말한다. 예를 들어, 친화성 리간드가 특정 항원에 결합하는 항체인 경우, 친화성 리간드는 그 항원에 대해 특이적이라고 말한다. 항원은 표적 분자이다. 또한 친화성 리간드는 특정 표적 분자에 특이적이고 불릴 수 있다. 유용한 친화성 리간드의 예로는 항체, 리간드, 결합 단백질, 수용체 단백질, 합텐, 압타머, 탄수화물, 렉틴, 엽산, 합성 폴리아미드, 및 올리고뉴클레오티드 등이 있다. 유용한 결합 단백질에는 DNA 결합 단백질이 포함된다. 유용한 DNA 결합 단백질에는 아연 핑거 모티프, 로이신 지퍼 모티프, 및 헬릭스-턴-헬릭스 모티프가 포함된다. 이러한 모티프는 동일한 친화성 리간드와 배합될 수 있다.
항체는 친화성 리간드로서 유용하다. 항체는 잘 정립된 방법을 이용하여 제조될 수도 있고 시중에서 입수할 수도 있다. 예를 들어, 문헌(Johnstone and Thorpe, '면역화학 실습(Immunochemistry In Practice)', Blackwell Scientific Publications, Oxford, English, 1987, p30-85)에는 폴리클론 및 모노클론 항체를 제조하는데 유용한 일반적인 방법이 기술되어 있다. 전체 문헌에는 분석 시스템 내에서의 항체 사용에 관한 일반적인 기술 및 원리에 대해 기술되어 있다. 특정 단백질, 탄수화물, 당단백질, 분자, 세포, 조직 등에 결합되는 다수의 항체 및 다른 친화성 리간드는 공지되어 있다. 이러한 항체는 본 발명의 성분 및 조성물에 사용될 수 있다.
세포 침투성 펩타이드의 예는 미국 특허 출원 공개공보 제 20100061942 호, 제 20100061932 호, 제 20100048487 호, 제 20100022466 호, 제 20100016215 호, 제20090280058 호, 제 20090186802 호, 제 20080234183 호, 제 20060014712 호, 제 20050260756 호, 및 제 20030077289 호에 기재되어 있다. 이들 문헌에서 그 전체 내용 및 특히 세포 침투성 펩타이드 및 모티프에 대한 기술이 본 명세서에 참고 사항으로 포함된다. 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자의 예는 미국 특허 출원 공개공보 제 20090325866 호, 제 20090317802 호, 제 20080305119 호, 제 20070292920 호, 제 20060147997 호, 제 20050038239 호, 제 20040219169 호, 제 20030148263 호, 제 20030082143 호, 제 20020132990 호 및 제 20020068272 호에 기재되어 있다. 이들 문헌에서 그 전체 내용 및 특히 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자 및 모티프에 대한 기술이 본 명세서에 참고 사항으로 포함된다. 세포내 표적화 분자의 예는 미국 특허 출원 공개공보 제 2009031733 호, 제 20090258926 호, 제 20090176660 호, 제 20080311136 호, 제 20070287680 호, 제 20070157328 호, 제 20070111270 호, 제 20070111251 호, 제 20060257942 호, 제 20060154340 호, 제 20060014712 호, 제 20050281805 호, 제 20050233356 호, 제 20040005309 호, 제 20030082176 호, 및 제 20010021500 호에 기재되어 있다. 이들 문헌에서 그 전체 내용 및 특히 세포내 표적화 분자 및 모티프에 대한 기술이 본 명세서에 참고 사항으로 포함된다. 핵 표적화 분자의 예는 미국 특허 출원 공개공보 제 10100143454 호, 제 20100099627 호, 제 20090305329 호, 제 20090176710 호, 제 20090087899 호, 제 20070231862 호, 제 20070212332 호, 제 20060242725 호, 제 20060233807 호, 제 20060147922 호, 제 20060070133 호, 제 20060051315 호, 제 20050147993 호, 제 20050071088 호, 제 20030166601 호, 제 20030125283 호, 제 20030083261 호, 제 20030003100 호, 제 20020068272 호 및 20020055174 호에 기재되어 있다. 이들 문헌에서 그 전체 내용 및 특히 핵 표적화 분자 및 모티프에 대한 기술이 본 명세서에 참고 사항으로 포함된다.
본 명세서에서, "공조성물"이라는 용어는 CendR와 함께 사용될 수 있는 물질의 조성물을 의미한다. 이와 마찬가지로, "카고 조성물"이라는 용어는 CendR와 함께 사용될 수 있는 물질의 조성물을 의미한다. 일반적으로, 예를 들어, 공조성물 또는 카고 조성물은 내재화 및/또는, 세포 및/또는 조직으로 침투되어야 하는 어떠한 조성물이어도 된다. 예를 들어, 공조성물 또는 카고 조성물은 분자, 콘쥬게이트, 분자 회합체, 조성물 또는 그 혼합물일 수 있다. 공조성물 또는 카고 조성물의 예로는 암 화학치료제, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 폴리펩타이드, 핵산 분자, 소분자, 나노입자, 마이크로입자, 형광발색단, 플루오레세인, 로다민, 방사성 핵종, 루테튬-177(177Lu), 레늄-188(188Re), 갈륨-68(68Ga), 이트륨-90(90Y), 테크네튬-99m(99 mTc), 홀뮴-166(166Ho), 요오드-131(131I), 인듐-111(111In), 불소-18(18F), 탄소-11(11C), 질소-13(13N), 산소-15(15O), 브롬-75(75Br), 브롬-76(76Br), 요오드-124(124I), 탈륨-201(201Tl), 테크네튬-99(99Tc), 요오드-123(123I), 항혈관형성제, 혈관형성제 또는 그 배합물 등이 있다.
본 발명의 CendR 성분은 치료제의 세포 및 조직으로의 전달에 도움을 주기 위한 일반적인 모드 및 플랫폼을 제시하므로, 어떠한 치료제와도 함께 사용될 수 있다. 따라서, 어떠한 치료제도 본 발명의 조성물 내에 또는 함께 사용될 수 있다. 치료제 및 약물의 포괄적인 리스트는 오렌지 북과 같은 여러 곳에서 찾아볼 수 있으며, 미국 식약청에서 보유하는 다른 리스트 (웹사이트 fda.gov/Drugs/InformationOnDrugs/ucm129662.htm 및 fda.gov/Drugs/InformationOnDrugs/ApprovedDrugs/default.htm에서 입수가능한 정보), 및 다른 국가 및 웹사이트(clinicaltrial.gov/, 임상 시험을 행한 약물 및 치료제에 관한 정보)에서 보유하는 유사한 리스트도 찾아 볼 수 있다.
공조성물 및 카고 조성물은 모이어티일 수 있다. 본 명세서에서 "모이어티"라는 용어는 일반적으로 관련된 공조성물 또는 관련된 카고 조성물에 생물학적으로 유용한 기능을 부여하는 물리학적, 화학적 또는 생물학적 물질을 광범위하게 포함하는 의미이다. 모이어티는 세포, 파지 또는 다른 바이러스와 같은 생물학적 물질; 소분자와 같은 유기 화학물질; 나노입자, 방사성 핵종; 핵산 분자 또는 올리고뉴클레오티드; 폴리펩타이드; 또는 펩타이드(이에 국한되는 것은 아님) 등을 포함하는 천연 또는 비천연 물질이다. 예를 들어, 치료 효과를 갖는 모이어티와 같이 표적에 영향을 주는 모이어티, 또는 형광 분자 또는 방사성 핵종과 같이 표적의 검출, 가시화 또는 이미지화를 촉진시키는 모이어티가 있다.
본 발명의 공조성물 및 카고 조성물의 성분들은 적합한 방식으로 배합, 링크 및/또는 결합될 수 있다. 예를 들어, 모이어티와 기타 다른 분자는 링커 부분 없이 또는 링커 부분에 의해 공유 또는 비공유적으로, 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다.
일부 실시예에서, 공조성물은 암 화학치료제를 함유할 수 있다. 본 명세서에서, "암 화학치료제"라는 것은 암세포의 증식, 성장, 수명 또는 전이 활성을 억제시키는 화학 작용제이다. 이러한 암 화학치료제에는 탁산, 예컨대 도데탁셀; 안트라사이클린, 예컨대 독소루비신; 알킬화제; 빈카 알칼로이드; 대사길항물질; 백금 작용제, 예컨대 시스플라틴 또는 카보플라틴; 스테로이드, 예컨대 메토트렉세이트; 항생제, 예컨대 아드리아마이신; 이소파미드; 또는 선택성 에스트로겐 수용체 조절제; 항체, 예컨대 트라스투주맵(trastuzumab); 파클리탁셀, 예컨대 아브락산; 독실등이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.
공조성물 또는 카고 조성물은 치료제를 함유할 수 있다. 유용한 치료제는 예를 들어, 세포 사멸을 직접 또는 간접적으로 촉진하는 분자인 세포 독성물질일 수 있다. 유용한 세포 독성물질에는 소분자, 폴리펩타이드, 펩타이드 모장체, 핵산 분자, 세포 및 바이러스 등이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. 비한정적인 예로서, 유용한 세포독성물질에는 세포독성 소분자, 예컨대 독소루비신, 도세탁셀 또는 트라스투주맵; 이후에 상세히 기술하게 될 항균성 펩타이드; 전구-세포사멸유도 폴리펩타이드, 예컨대 캐스파스(caspase) 및 톡신, 예컨대 캐스파스-8; 디프테리아 톡신 A 사슬, 슈도모나스 엑소톡신 A, 콜레라 톡신, 리간드 융합 톡신, 예컨대 DAB389EGF, 리시누스 콤무니스 톡신(리신); 및 독성 세포, 예컨대 독성 T 세포 등이 있다(Martin et al., Cancer Res. 60: 3218-3224(2000); Kreitman and Pastan, Blood 90:252-259 (1997); Allam et al., Cancer Res. 57: 2615-2618 (1996) 참조). 당업자는 본 명세서에 기술되어 있거나 당해 분야에 공지된 상기 세포 독성물질 및 추가적인 세포 독성물질이 본 발명의 조성물 및 방법에 유용할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
일부 형태에서, 치료제는 치료 폴리펩타이드일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 치료 폴리펩타이드는 생물학적으로 유용한 기능을 가진 어떠한 폴리펩타이드어도 된다. 유용한 치료 폴리펩타이드에는 사이토킨, 항체, 세포독성 폴리펩타이드; 전구-세포사멸유도 펩타이드; 및 항혈관생성 펩타이드 등이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. 비한정적인 예로서, 유용한 치료 폴리펩타이드는 사이토킨, 예컨대 종양 괴사 인자-α(TNF-α), 종양 괴사 인자-β(TNF-β), 과립구 대식세포 콜로니 자극인자(GM-CSF), 과립구 콜로니 자극인자(G-CSF), 인터페론-α(IFN-α), 인터페론-γ(IFN-γ), 인터루킨-1(IL-1), 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-3(IL-3), 인터루킨-4(IL-4), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-7(IL-7), 인터루킨-10(IL-10), 인터루킨-12(IL-12), 림포택틴(lymphotactin; LTN) 또는 수지상 세포 케모카인 1(DC-CK1); 항-HER2 항체 또는 그 단편; 톡신 또는 캐스파스, 예컨대 디프테리아 톡신 A 사슬, 슈도모나스 엑소톡신 A, 콜레라 톡신, 리간드 융합 톡신, 예컨대DAB389EGF 또는 리신과 같은 세포독성 폴리펩타이드; 항혈관신생 펩타이드, 예컨대 안지오스타틴, 엔도스타틴, 트롬보스폰딘, 혈소판 인자 4; 아나스텔린; 또는 본 명세서에서 이후 보다 상세히 기술할 또는 당해 분야에 공지된 펩타이드이다. 생물학적 활성을 가진 상기 폴리펩타이드 및 다른 폴리펩타이드가 "치료 폴리펩타이드"일 수 있다는 점을 이해해야 할 것이다.
본 명세서에서 사용되는 "항혈관형성제"라는 용어는 혈관의 성장 및 발달을 의미하는 혈관 신생을 감소 또는 억제시키는 분자를 말한다. 혈관신생과 관련된 질병, 이상 또는 장애를 치료 또는 진단하는데 공조성물 및 카고 조성물이 사용될 수 있다. 예를 들어, 황반 변성(macular degeneration) 및 당뇨 혈관 합병증을 진단 및/또는 치료할 수 있다. 통상적인 방법에 의해 다양한 항혈관형성제가 제조될 수 있다. 이러한 항혈관형성제에는 소분자; 단백질, 예컨대 우성 음성 형태(dominant negative form)의 혈관형성 인자, 전사 인자 및 항체; 펩타이드; 예를 들어, 우성 음성 형태의 혈관형성 인자 및 수용체, 전사 인자, 및 항체 및 그 항원-결합 단편을 암호화하는 핵산 분자, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 및 리보자임을 포함한 핵산 분자 등이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 예를 들어, 문헌(Hagedorn and Bikfalvi, Crit. Rev. Oncol. Hematol. 34: 89-110 (2000), and Kirsch et al., J. Neurooncol, 50: 149-163 (2000))을 참조한다.
유용한 치료제의 몇몇 다른 예로는 질소 머스타드, 니트로소우레아 (nitrosoureas), 에틸렌이민, 알칸 술포네이트, 테트라진, 백금 화합물, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체, 대사길항물질, 폴레이트 유사체, 안트라사이클린, 탁산, 빈카 알칼로이드, 토포아이소머라제(topoisomerase) 억제제 및 호르몬 작용제 등이 있다. 화학치료 약물의 예로는 액티노마이신-D, 알케란, Ara-C, 아나스트로졸, 아스파라기나제, BiCNU, 비칼루타미드, 블레오마이신, 부술판, 카페시타빈, 카보플라틴, 카보플래티늄, 카무스틴, CCNU, 클로람부실, 클로마파진, 클로로포스파미드, 시스플라틴, 클라드리빈, CPT-11, 사이클로포스파미드, 시타라빈, 시토신 아라비노시드, 시톡산, 다카바진, 닥티노마이신, 다우노루비신, 덱스라족산, 도세탁셀, 독소루비신, DTIC, 에피루비신, 에스트라무스틴, 에틸렌아민, 에토포사이드, 플록수리딘, 플루다라빈, 플루오로우라실, 플루타미드, 포테무스틴, 젬시타빈, 헤르셉틴, 헥사메틸아민, 하이드록시우레아, 이다루비신, 이포스파미드, 이라노테칸, 로무스타인, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 미토마이신, 미토탄, 미톡산트론, 노벰비힌, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파미드로네이트, 펜토스타틴, 페네스테린, 플리카마이신, 프레드니무스틴, 프로카바진, 리툭시맵, 스테로이드, 스트렙토조신 STI-571, 스트렙토조신, 타목시펜, 테모졸로미드, 테니포사이드, 테트라진, 티오구아닌, 티오테파, 토무덱스, 토포테칸, 트레오술판, 트리메트렉세이트, 트로포스파미드, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, VP-16 및 젤로다(xeloda) 등이 있다. 알킬화제, 예컨대 티오페타; 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카보퀴온, 메투레도파 및 우레도파; 알드레타민, 트리에틸렌아민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스파오라미드 및 트리메틸롤로멜라민을 포함한 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 니트로우레아, 예컨대 칸누스틴(cannustine), 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대 아클라시노마이신, 액티노마이신, 안트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리키마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카지노필린, 크로모이나이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-50옥소-L-노르로이신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이담비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 미토페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페프로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 켈라마이신(quelamycin), 스트렙토니그린, 스트렙도조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴 및 조루비신; 대사길항물질, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노페린, 메토트렉세이트, 프테로프테린 및 트리메드렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린 및 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플로수리딘, 및 5-FU; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피토스타놀, 르네피티오스탄, 및 테스톨락톤; 항-아드레날, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄 및 트릴로스탄; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코사이드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지퀴온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토가우존; 미토크산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸하이드라지; 프로카바진; PSK？; 라족산; 시조프란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지퀴온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 아라비노사이드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파(thiotEPa); 탁소이드, 예컨대 파클리탁셀(TAXOL？, Bristol-Myers Suibb Oncology, Princeton, N.J.) 및 독세탁셀(TAXOTERE？, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 젬시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포사이드(VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미토크산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포사이드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포아이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸로르니틴(DMFO); 레티노산; 에스페라마이신; 카페시타빈; 및 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 상기 물질들의 유도체 등이 사용된다. 또한, 종양에서의 호르몬 작용을 조절 또는 억제하는 역할을 하는 항호르몬제에는 안티에스트로겐, 예를 들어, 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타아제 억제 4(5)-이미다졸, 4 하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, 오나프리스톤, 및 토레미펜(Fareston); 및 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 로이프롤리드 및 고세렐린; 및 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 상기 물질들의 유도체 등이 포함된다. 유용한 공조성물 및 카고 조성물은 예를 들어, 독소루비신, 헤르셉틴 및 리포솜 독소루비신을 함유한다.
또한 공조성물 및 카고 조성물은 붕소 함유 조성물을 함유할 수 있다. 붕소 함유 화합물은 유기 합성 기술이 이 원자를 함유하는데 까지 확장되면서, 과거 수년에 걸쳐 치료제로서 주목을 받고 있다(Boron Therapeutics on the horizon, Groziak, M.P.; American Journal of Therapeutics (2001) 8, 321-328). 대부분의 주목할만한 붕소 함유 치료는 최근 다발성 골수종(multiple myeloma)의 치료를 위해 론칭된 붕산 보르테조밉(bortezomib)이다. 이러한 약진은 의약제로서 붕소 함유 화합물의 사용에 대한 실현가능성을 입증한다. 붕소 함유 화합물은 제초('제초제로서 유기 붕소화합물(Organic boron compounds as herbicides)', Barnsley,G.E.; Eaton,J.K.; Airs,R.S. (1957), DE 1016978 19571003), 붕소 중성자 포집 치료('중성자 포집 치료를 위한 B-10 담체의 분자 설계 및 합성(Molecular Design and Synthesis of B-10 Carriers for Neutron Cature Therapy)', Yamamoto,Y.; Pure Appl. Chem., (1991) 63, 423-426), 세린 프로테아제 억제('섭틸리신 칼스버그 및 알파-카모트립신의 활성 부위의 결합에 관여하는 인자의 프로브로서의 보리닉 애시드 억제제(Borinic acid inhibitors as probes of the factors involved in binding at the active sites of Subtilisin Calsberg and alpha-chymotrypsin)', Simpelkamp,J., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (1992), 2(11), 1391-4; '선택적인 붕소-함유 트롬빈 억제제의 설계, 합성및 생물학적 평가(Design, Synthesis and Biological Evaluation of Selective Boron-containing Thrombin Inhibitors)', Weinand,A., Ehrhardt,C., Metternich,R., Tapparelli,C., Bioorganic & Medicinal Chemistry (1999), 7, 1295-1307), 아세틸콜린에스테라제 억제('아세틸콜린에스테라제의 새롭고 특이적이고 가역성인 이기능성 알킬보리닉 애시드 억제제(New, specific and reversible bifunctional alkylborinic acid inhibitor of acetylcholinesterase)', Koehler,K.A.; Hess,G.P., Biochemistry (1974), 13, 5345-50) 및 항균 작용('붕소 함유 항균제: 다양한 배양 조건 하에 박테리아의 성장 및 형태에 미치는 영향(Boron-Containing Antibacterial agent: Effects on Growth and Morphology of Bacteria Under Various Culture Conditions)', Bailey,P.J., Cousins,G., Snow,G.A., and White,A.J., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, (1980), 17, 549-553)을 포함하여 다양한 생물학적 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 항균 활성을 갖는 붕소 함유 화합물은 두 종류로 나눌 수 있는데, 하나는 1960년대에서부터 알려진 디아자보리닌이고, 다른 하나는 디티에닐보리닉 애시드 복합체이다. 후자는 강력한 항균 활성을 갖는 많은 다른 디아릴보리닉 애시드 복합체도 포함한다('DNA 메틸 트랜스퍼라제 억제제로서의 디아릴보리닉 애시드 에스테르의 제조(Preparation of diarylborinic acid esters as DNA methyl transferase inhibitors)', Benkovic,S.J., Shapiro,L., Baker,S.J., Wahnon,D.C., Wall,M., Shier,V.K., Scott,C.P., Baboval,J., PCT Int. Appl.(2002), WO 2002044184).
공조성물 또는 카고 조성물은 또한 하나 이상의 이소토프를 함유할 수 있다. 이러한 이소토프는 예를 들어, 치료제로서, 검출제로서, 또는 둘 다로서 유용할 수 있다. 유용한 이소토프의 예를 들면 루테튬-177(177Lu), 레늄-188(188Re), 갈륨-68(68Ga), 이트륨-90(90Y), 테크네튬-99m(99 mTc), 홀뮴-166(166Ho), 요오드-131(131I), 인듐-111(111In), 불소-18(18F), 탄소-11(11C), 질소-13(13N), 산소-15(15O), 브롬-75(75Br), 브롬-76(76Br), 요오드-124(124I), 탈륨-201(201Tl), 테크네튬-99(99Tc), 요오드-123(123I) 등이 있다.
공조성물 또는 카고 조성물은 또한 검출제를 가질 수 있다. 다양한 검출제가 본 발명의 방법에 유용하다. 본 명세서에서 사용되는 "검출제"라는 용어는 검출될 수 있는 분자를 의미한다. 유용한 검출제는 생체 내에 투여된 후에 검출될 수 있는 모이어티를 포함한다. 본 발명의 조성물 및 이미지화 방법에 유용한 검출제에는 방사성동위원소 표지 및 형광 분자 등이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 검출제는 예를 들어, 바람직하게는 비침습적 및/또는 생체내 가시화 기술에 의해 직접 또는 간접적으로 검출을 촉진하는 어떠한 모이어티이어도 된다. 예를 들어, 검출제는 방사선 기술을 포함하여 공지된 영상화 기술에 의해 검출될 수 있다. 예를 들어, 검출제는 조영제를 포함할 수 있다. 조영제는 예를 들어 페리덱스(Feridex)일 수 있다. 일부 실시예에서, 예를 들어, 검출제는 탄탈룸 화합물을 함유한다. 일부 실시예에서, 검출제는 방사성 요오드와 같은 요오드를 함유한다. 일부 실시예에서, 예를 들어, 검출제는 요오드 카르복실산과 같은 유기 요오드 산, 트리요오드페놀, 요오드포름, 및/또는 테트라요오드에틸렌을 함유한다. 일부 실시예에서, 검출제는 비-방사성 검출제, 예컨대 비-방사성 이소토프를 함유한다. 예를 들어, 산화철 및 Gd는 특정 실시예에서 비-방사성 검출제로서 사용될 수 있다. 또한, 검출제는 방사성 이소토프, 효소, 형광발색단 및 양자점(Qdot？)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 검출 모이어티는 효소, 비오틴, 금속, 또는 에피토프 태그일 수 있다. 다른 공지된 또는 새롭게 발견된 검출 마커를 상기 기술된 조성물과 함께 사용하는 것을 고려할 수 있다. 일부 실시예에서, 예를 들어, 검출제는 바륨 화합물, 예컨대 황산 바륨을 함유한다.
검출제는 하나 이상의 영상제일 수 있다(아니면, 공조성물 또는 카고 조성물은 하나 이상의 영상제를 함유할 수 있다). 영상제의 예로는 방사성 조영제, 예컨대 디아트리조산 나트륨염 이수화물, 요오드 및 황산 바륨; 형광성 조영제, 예컨대 리사민 로다민(Lissamine Rhodamine) PE, 예를 들어 가시광선이나 다른 파장(예; 적외선 또는 자외선)에서 특징적인 전자기 방사선의 스펙트럼을 반사시키거나 가시성 색상을 부여할 수 있는 형광 또는 비형광 착색제 또는 염료, 예컨대 로다민; 방사성이소토프; 양전자-방출 이소트프, 예컨대 18F 또는 124I(양전자-방출 이소트프의 반감기가 짧아서 한계점이 있음); 금속; 강자성 화합물; 상자성 화합물, 예컨대 가돌리늄; 초상자성 화합물, 예컨대 산화철; 및 반자성 화합물, 예컨대 황산 바륨 등이 있다. 영상제는 선택된 영상화 기술에 의해 형성되는 이미지의 유효성을 최적화하기 위해 선택될 수 있다. 예를 들어, 위장 용종과 같은 목적하는 대상과 정상 위장 조직 사이의 대비를 증진시키기 위해 영상제를 선택할 수 있다. 이미지화는 X-선, 컴퓨터단층촬영(CT), MRI, 양전자 방출 단층촬영(PET) 또는 SPECT와 같은 적합한 영상화 기술을 이용하여 달성될 수 있다. 일부 형태에서, 조성물 및 카고 조성물은 인듐-III 또는 테크네튬-99와 같은 핵의학 영상제, PET 영상제, 또는 나노입자와 같은 MRI 영상제에 결합될 수 있다.
이미지화 기술의 예를 들면, 자기공명영상(MRI), 컴퓨터단층촬영(CT), 단일광자 단층촬영(SPECT), 및 양전자방출 단층촬영(PET) 등이 있다. 일반적으로, 영상제는 그 용도에 따라 진단용 또는 치료용으로 분류될 수 있다. 방사선 조사로 인한 조직 손상 때문에, 가능한 한 정확하게 방사선 의약품의 체내분포를 표적화하는 것이 유용하다. PET는 예를 들어, 18F, 11C, 13N, 15O, 75Br, 76Br 및 124I와 같은 양전자 방사제로 표지된 영상제를 사용할 수 있다. SPECT는 예를 들어, 201Tl, 99Tc, 123I, 및 131I와 같은 단일광자 방사제로 표지된 영상제를 사용할 수 있다.
글루코오스-기반 및 아미노산-기반 화합물을 영상제로서 사용할 수 있다. 아미노산-기반 화합물은 단백질 합성으로의 흡수 및 혼입이 신속하게 이루어지기 때문에 종양을 분석하는데 있어서 보다 유용하다. 아미노산-기반 화합물 중 11C- 및 18F-함유 화합물이 성공적으로 사용되어 왔다. 이미지화에 사용되는 적합한 11C-함유 방사성 동위원소로 표지된 아미노산의 예를 들면, L-[1-11C]로이신(Keen et al.,J. Cereb. Blood Flow Metab. 1989 (9): 429-45), L-[1-11C]티로신(Wiesel et al. J. Nucl. Med. 1991 (32): 2041-49), L-[메틸-11C]메티오닌(Comar et al. Eur.J.Nucl. Med. 1976 (1): 11-14) 및 L-[1-11C]메티오닌(Bolster et al. Appl. Radiat. Isot. 1986 (37): 1069-70) 등이 있다.
PET는 합치법(coincidence method)을 이용하여, 반감기가 약 110분인 18F, 반감기가 약 20분인 11C, 반감기가 약 10분인 13N, 반감기가 약 2분인 15O을 포함한(이에 국한되는 것은 아님) 단수명 양전자 방출 방사성 이소토프로부터 소멸 광자 형태로 감마선을 검출하는 것이다. PET 이미지화 연구에서는, [11C]메타하이드록시에페드린(HED) 및 2-[18F]플루오로-2-데옥시-D-글루코오스(FDG)가 사용될 수 있다. SPECT는 반감기가 약 6시간인99mTc 및 반감기가 약 74시간인 201Tl을 포함한(이에 국한되는 것은 아님) 장수명 양전자 방출 방사성 이소토프를 사용할 수 있다. 방사선 요오드화 메타-요오드벤질구아니딘(MIBG)은 핵의학 이미지화 연구에서 사용될 수 있는 방사선 추적자이다.
본 발명의 CendR 조성물 및 공조성물 및 카고 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 내에서 생체 내로 투여될 수 있다. "약학적으로 허용가능한"이라는 것은 생물학적인 또는 다른 부작용이 없는 물질, 즉, 약학적 조성물의 다른 함유 성분과 해로운 방식으로 상호작용하거나 생물학적 부작용을 유발하지 않고 핵산 또는 벡터와 함께 대상자에 투여될 수 있는 물질을 의미한다. 담체는 당해 분야에 잘 알려져 있는 바와 같이, 활성 성분의 분해를 최소화하고 대상자의 부작용을 최소화하도록 선택되는 것이 당연하다. 이 물질은 용액 또는 현탁액(예를 들어, 마이크로입자,리포솜 또는 세포에 혼입됨)일 수도 있다.
CendR 조성물 및 공조성물 및 카고 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 배합되어 치료용으로 사용될 수 있다. 적합한 담체 및 그 조성물은 문헌(Remington: '조제술의 과학 및 실습(The Sciece and Practice of Pharmacy (19th ed.) ed. A.R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA 1995)에 기재되어 있다. 전형적으로, 제제(formulation)를 등장액으로 제조하기 위해서 제제에 적당량의 약학적으로 허용가능한 염을 사용한다. 약학적으로 허용가능한 담체의 예를 들면, 함염 링거액 및 포도당액 등이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 용액의 pH는 바람직하게는 약 5 ~ 약 8이며, 보다 바람직하게는 약 7 ~ 7.5이다. 추가적인 담체에는 매트릭스가 예를 들어 막, 리포솜 또는 마이크로입자와 같이 모양이 있는 물질의 형태인 항체를 함유하는 고형 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스와 같은 지속형 방출 제제가 포함된다. 당업자는 어떤 담체가 예를 들어, 투여 경로 및 투여되는 조성물의 농도에 따라 더욱 선호되는지 명백히 알 것이다.
제제는 그 자체로, 또는 적합한 담체나 부형제와 혼합되어 약학적 조성물 형태로 대상자 또는 유기체에 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "약학적 조성물"이라는 것은 본 명세서에서 기술되는 1종 이상의 활성 성분과 생리학적으로 적합한 담체 및 부형제와 같은 다른 화학적 성분이 조합된 제제를 의미한다. 약학적 조성물의 목적은 대상자 또는 유기체에 화합물의 투여를 촉진시키기 위한 것이다.
본 명세서에서 "활성 성분"이라는 용어는 생물학적 효과를 제공할 수 있는 제제를 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 "생리학적으로 허용가능한 담체" 및 "약학적으로 허용가능한 담체"라는 것은 상호대체할 수 있는 용어로서, 대상자 또는 유기체에 유의한 자극을 유발하지 않으며, 투여되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 파괴하지 않는 담체 또는 희석제를 의미한다. 이 용어에는 보조제도 포함된다.
본 명세서에서, "부형제"라는 용어는 활성 성분의 투여를 더욱 촉진시키기 위해 약학적 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 의미한다. 부형제의 예로는 탄산 칼슘, 인산 칼슘, 다양한 형태의 당류 및 전분, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 식물성 오일 및 폴리에틸렌 글리콜 등이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.
약물의 조제 및 투여 기술에 관한 것은 문헌(Reminton's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., lastest edtion)에서 찾아볼 수 있다. 이 문헌은 본 명세서에서 참고문헌으로 언급되어 있다.
본 발명의 조성물에 적합한 투여 경로가 사용될 수 있다. 적합한 투여 경로는 예를 들어, 국소, 장, 국부, 전신 또는 비경구 투여를 포함한다. 예를 들어, 투여는 피내, 흡입, 관장, 결막, 안약, 귀약, 폐포, 코, 비강, 질, 질내, 경질, 장, 구강, 구강내, 경구강, 내장, 직장, 작장내, 경직장, 주사, 주입, 정맥내, 동맥내, 근육내, 대뇌내, 심실내, 뇌실내, 심장내, 피하내, 골내, 진피내, 수막강내, 복강내, 방광내, 음경해면체내, 골수강내, 수정체내, 두개압내, 경피, 경점막, 경비, 흡입, 뇌수조내, 경막상, 경막외, 유리체강내 등으로 이루어질 수 있다. 본 발명의 조성물은 다른 절차로 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 HIPEC 치료의 일부로서 투여될 수 있다. HIPEC에 있어서, 목적하는 조성물을 함유하는 가열 살균 용액은 복강 전체에 걸쳐 지속적으로 순환될 수 있다.
약학적 조성물은 당해 분야에 잘 알려진 방법에 의해, 예를 들어 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정 제조, 레비게이팅(levigating), 유화, 캡슐화, 인트래핑 또는 동결건조 공정에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 방법에 사용하기 위한 약학적 조성물은 활성 성분가 약학적으로 사용될 수 있는 제제로 가공될 수 있도록 부형제 및 보조제를 함유하는 1종 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체를 사용하여 통상적인 방식으로 조성될 수 있다. 적절한 조성은 선택되는 투여 경로에 따라 달라진다.
주사의 경우, 활성 성분은 수용액으로, 바람직하게는 행크 용액(Hank's solution), 링거액 또는 생리적 식염 완충액과 같은 생리학적으로 병용할 수 있는 완충액으로 조성될 수 있다. 경점막 투여의 경우, 침투해야 하는 장벽에 적합한 침투물을 조성물에 사용할 수 있다. 일반적으로 이러한 침투물은 당해 분야에 알려져 있다.
경구 투여의 경우, 활성 화합물을 당해 분야에 잘 알려져 있는 담체와 혼합시킴으로써 화합물을 쉽게 조성할 수 있다. 이러한 담체는 환자에 의한 경구 섭취를 위해, 화합물이 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 액제, 젤, 시럽, 글러리, 현탁액 등으로 조성되도록 한다. 경구용 약리학적 제제는 고형 부형제를 사용하여 제조될 있는데, 임의선택적으로 혼합물을 그라인딩하고, 원한다면, 적합한 보조제를 첨가한 후에, 이 그라인딩 혼합물을 가공함으로써 정제 또는 당의정 코어를 얻게 된다. 특히 적합한 부형제에는 충진물, 예를 들어 락토오스, 슈크로오스, 만니톨 또는 솔비톨과 같은 당류; 셀룰로오스 제제, 예를 들어 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트라가칸트 고무, 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로오스, 카보메틸셀룰로오스 나트륨; 및/또는 약리학적으로 허용가능한 폴리머, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈(PVP) 등이 있다. 필요하다면, 가교결합된 폴리비닐피롤리돈, 한천 또는 알긴산 또는 그 염(예컨대 알긴산 나트륨)과 같은 붕해제(disintegrating agent)를 첨가시킬 수 있다.
당의정 코어는 적당한 코팅이 이루어진다. 이러한 목적을 위해서, 아라비아 고무, 활석, 폴리비닐피롤리돈, 카보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜, 이산화 티타늄, 래커 용액 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 임의선택적으로 함유할 수 있는 농축 당 용액을 사용할 수 있다. 식별을 위해서 또는 활성 성분의 양의 서로 다른 조합 특징을 나타내기 위해서 정제 또는 당의정 코팅에 색소 또는 염료를 첨가할 수 있다.
경구용으로 사용될 수 있는 약학적 조성물에는 젤라틴과 가소제(예컨대 글리세롤 또는 솔비톨)로 만들어진 밀봉 연질 캡슐 뿐만 아니라 젤라틴으로 만들어진 푸쉬-핏(Push-fit) 캡슐도 포함된다. 푸쉬-핏 캡슐은 락토오스와 같은 충진물, 전분과 같은 결합제, 활석 및 스테아르산 마그네슘과 같은 윤활제, 및 임의선택적인 안정화제와 함께 활성성분을 함유할 수 있다. 연질 캡슐의 경우, 활성 성분이 적합한 액제, 예를 들어 지방유, 액체 파라핀 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜 속에 용해 또는 현탁될 수 있다. 또한, 안정화제가 첨가될 수 있다. 모든 경구 투여용 조성물은 선택된 투여 경로에 적합한 투여량이어야 한다.
구강 투여의 경우, 조성물은 통상적인 방식으로 제조된 정제 또는 마름모꼴 형태를 취할 수 있다.
코 흡입에 의한 투여의 경우, 본 발명의 방법에 사용되는 활성 성분은 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄 또는 이산화탄소와 같은 적합한 추진제의 사용과 함께 가압팩 또는 분무기로부터 발사되는 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 정량 전달을 위한 밸브를 구비함으로써 투여량 단위를 결정할 수 있다. 화합물과 락토오스 또는 전분과 같은 적합한 분말 베이스의 분말 혼합물을 함유하는 디스펜서 내에서 사용하기 위해, 예를 들어 젤라틴으로 된 캡슐 또는 카트리지를 제조할 수 있다.
본 명세서에서 기술되는 제제는 일회식 주입 또는 연속식 주입식 비경구적 투여용으로 조성될 수 있다. 주사용 조성물은 단위 투여량 형태, 예컨대 임의선택적으로 보존료가 첨가된 앰플 또는 수회투여 용기로 제공될 수 있다. 본 조성물은 유성 또는 수성 운반체 내의 현탁액, 용액 또는 유화액일 수 있으며, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 조성제를 함유할 수 있다.
비경구 투여용 약학적 조성물은 수용성 형태의 활성 제제 수용액을 포함한다. 또한, 적합한 오일 또는 물-기반 주사 현탁액으로서 활성성분의 현탁액을 제조할 수 있다. 적합한 친유성 용매 또는 운반체에는 참기름과 같은 지방유, 또는 올레에이트, 트리글리세라이드 또는 리포좀과 같은 합성 지방산 에스테르가 있다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점성도를 증가시키는 물질, 예컨대 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, 솔비톨 또는 덱스트란 등을 함유할 수 있다. 현탁액은 또한 임의선택적으로 고농도 용액의 제조가 가능하도록 활성 성분의 용해도를 증가시키는 적합한 작용제 또는 안정화제를 함유할 수 있다.
또 다른 방법으로, 활성 성분은 분말형태일 수 있으며, 사용 전에 피로겐-비함유 물을 기반으로 하는 무균 용액과 같은 적합한 운반체와 함께 조성된다.
또한, 제제는 예컨대 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드와 같은 통상적인 좌약 베이스를 사용하여 좌약 또는 정체관장(retention enemas)과 같은 직장 조성물로 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물은 적합한 제제 형태로 제공될 수 있다. 예를 들면, 고형물, 액제, 용액, 젤, 패치, 서방형, 정해진 시간 방출형 등으로 제조될 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 약학적 조성물은 활성 성분이 의도한 목적을 달성하는데 유효한 양으로 함유되는 조성물을 포함한다. 치료학적으로 유효한 양은 치료 대상자의 수명을 연장시키거나 질병의 증상을 예방, 감소 또는 완화시키는데 효과적인 활성성분의 양을 의미한다.
치료학적으로 유효한 양은 특히 본 명세서에서 기술되는 상세한 설명에서 볼 때, 당업자에게 잘 인지될 것이다.
본 발명의 방법에서 사용되는 제제의 경우, 치료학적으로 유효한 양 또는 투여량은 초기에 시험관 내 분석 및 세포 배양 분석으로부터 산정될 수 있다. 예를 들어, 원하는 순환성 항체 농도 또는 적정량을 달성하기 위해서 동물 모델에서의 투여량을 공식화할 수 있다. 이러한 정보를 이용하여 인간에 있어서 유용한 투여량을 보다 정확하게 결정할 수 있다.
본 명세서에서 기술되는 활성 성분의 독성 및 치료 효능은 시험관 내에서, 세포 배양물 내에서 또는 실험 동물에서 표준 의약품 절차에 의해 결정될 수 있다. 이러한 시험관 내 분석 및 세포 배양 분석 및 동물 조사에서 확보되는 데이터는 인간에서의 투여량 범위를 공식화하는데 사용될 수 있다. 투여량은 사용 형태, 및 사용되는 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 정확한 조성, 투여 경로 및 투여량은 환자 상태를 고려해서 의사 개인에 따라 선택될 수 있다(예컨대, Fingl et al in The Pharmacological Basis of Therapeutics, CH.1 P.1 (1975)).
투여량 및 투여 간격은 바이러스 침입을 방지하거나 감소시키기에 충분한 항체의 플라스마(최소 유효 농도, MEC)를 제공하도록 개별적으로 조절할 수 있다. MEC는 각 제제마다 다르지만, 시험관 내 데이터로부터 산정될 수 있다. MEC를 달성하는데 필요한 투여량은 개별적인 특성 및 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 플라스마 농도를 결정하기 위해 결합 분석을 이용할 수 있다.
또한 투여 간격은 MEC 값을 이용하여 결정될 수 있다. 제제는 시간의 10 ~ 90%, 바람직하게는 30 ~ 90%, 가장 바람직하게는 50 ~ 90% 동안 MEC 이상으로 플라스마 레벨을 유지하는 방식으로 투여될 수 있다.
투여는 치료 대상자의 상태의 심한 정도 및 반응성에 따라, 수일에서 수주 동안 지속되는 치료 과정에서, 또는 치료가 달성되거나 병의 상태가 완화될 때까지 1회 또는 수회 투여로 이루어질 수 있다.
물론, 투여되는 조성물의 양은 치료 대상자, 고통의 심한 정도, 투여 방식, 처방 의사의 판단 등에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 CendR 조성물 및 공조성물 및 카고 조성물에 콘쥬게이트될 수 있는 지방산(즉, 지질)은 펩타이드가 리포솜으로 효과적으로 혼입되게 할 수 있는 물질이다. 일반적으로, 지방산은 극성 지질이다. 따라서, 지방산은 인지질일 수 있다. 제공되는 조성물은 천연 또는 합성 인지질을 함유할 수 있다. 인지질은 포화 또는 불포화 모노 또는 이치환 지방산 및 그 배합물을 함유하는 인지질로부터 선택될 수 있다. 이러한 인지질의 예를 들면, 디올레오일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜세린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민, 디올레오일포스파티딜글리세롤, 디올레오일포스파티드산, 팔미토일올레일포스파티딜콜린, 팔미토일올레일포스파티딜세린, 팔미토일올레일포스파티딜에탄올아민, 팔미토일올레일포스파티딜글리세롤, 팔미토일올레일포스파티드산, 팔미텔라이도일올레오일포스파티딜콜린, 팔미텔라이도일올레오일포스파티딜세린, 팔미텔라이도일올레오일포스파티딜에탄올아민, 팔미텔라이도일올레오일포스파티딜글리세롤, 팔미텔라이도일올레오일포스파티드산, 미리스톨레오일올레오일포스파티딜콜린, 미리스톨레오일올레오일포스파티딜세린, 미리스톨레오일올레오일포스파티딜에탄올아민, 미리스톨레오일올레오일포스파티딜글리세롤, 미리스톨레오일올레오일포스파티드산, 딜리놀레오일포스파티딜콜린, 딜리놀레오일포스파티딜세린, 딜리놀레오일포스파티딜에탄올아민, 딜리놀레오일포스파티딜글리세롤, 딜리놀레오일포스파티드산, 팔미틱리놀레오일포스파티딜콜린, 팔미틱리놀레오일포스파티딜세린, 팔미틱리놀레오일포스파티딜에탄올아민, 팔미틱리놀레오일포스파티딜글리세롤, 팔미틱리놀레오일포스파티드산 등이 있다. 또한 이러한 인지질은 포스파티딜콜린(리소포스파티딜콜린), 포스파티딜세린(리소포스파티딜세린), 포스파티딜에탄올아민(리소포스파티딜에탄올아민), 포스파티딜글리세롤(리소포스파티딜글리세롤) 및 포스파티드산(리소포스파티드산)의 모노아실화 유도체일 수도 있다. 이러한 리소포스파티딜 유도체 내의 모노아실 사슬은 팔미토일, 올레오일, 팔미톨레오일, 리놀레오일, 미리스토일 또는 미리스톨레오일이다. 또한 인지질은 합성일 수 있다. 합성 인지질은 다양한 공급처로부터 용이하게 시중 구입할 수 있다(예; AVANTI Polar Lipids (Albaster, Ala.); Sigma Chemical Company (St. Louis, Mo.). 이러한 합성 화합물은 변형될 수도 있고, 천연 인지질에서는 존재하지 않는 지방산 가지 사슬에 변이체를 가질 수도 있다. 지방산은 PS 및 PC 중 어느 하나 또는 둘 다에 C14, C16, C18 또는 C20 사슬 길이를 갖는 불포화 지방산 가지 사슬을 함유할 수 있다. 합성 인지질은 구성요소로서 디올레오일(18:1)-PS; 팔미토일(16:0)-올레오일(18:1)-PS, 디미리스토일(14:0)-PS; 디팔미토올레오일(16:1)-PC, 디팔미토일(16:0)-PC, 디올레오일(18:1)-PC, 팔미토일(16:0)-올레오일(18:1)-PC, 및 미리스토일(14:0)-올레오일(18:1)-PC를 함유할 수 있다. 예를 들어, 제공되는 조성물은 팔미토일 16:0을 함유할 수 있다.
공조성물 또는 카고 조성물은 마이크로입자 또는 나노입자(예를 들어, 나노스페어, 나노쉘, 나노웜, 발열 나노쉘 등)일 수 있다. 본 명세서에서 "나노쉘"이라는 것은 별개의 유전성 또는 반전도성 코어 섹션이 하나 이상의 전도성 쉘 층으로 둘러싸여 있는 나노입자를 의미한다. 본 명세서에서 참고 문헌으로 언급되어 있는 미국 특허 제 6,530,944 호는 금속 나노쉘의 제조 방법 및 사용 방법에 대해 기술하고 있다. 예를 들어, 나노쉘은 규소와 같은 유전성 또는 불활성 물질로 된 코어에 근적외선(약 800 ~ 1300nm)과 같은 조사선에 의해 여기될 수 있는 고전도성 금속과 같은 물질을 코팅함으로써 형성될 수 있다. 여기시, 나노쉘은 열을 방출한다. 이렇게 하여 발생된 고열은 주변의 세포(들) 또는 조직을 사멸시킬 수 있다. 나노쉘의 쉘과 코어를 합한 직경은 수십 내지 수백 나노미터 범위이다. 조직 침투 능력을 위해서는 근적외선이 유리하다. 다른 종류의 조사선을 사용할 수도 있는데, 이는 나노입자 코팅의 선택 및 표적 세포에 따라 달라진다. 그 예로는 X-선, 자기장, 전기장 및 초음파 등이 있다. 또한, 특히 적외선 확산 광자 영상화 방법을 이용한 영상화를 개선시키기 위해서 입자를 사용할 수 있다. 표적화 분자는 항체 또는 그 단편, 특이적 수용체에 대한 리간드, 또는 표적 세포의 표면에 특이적으로 결합하는 다른 단백질일 수 있다.
다른 분자, 요소, 모이어티 등은 예를 들어, 본 발명의 공조성물, 카고 조성물, CendR 조성물, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 또는 CendR 요소와 공유 결합되거나 비공유 결합될 수 있다. 이러한 분자, 요소, 모이어티 등은 예를 들어, 본 발명의 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 또는 CendR 요소의 아미노 말단에; 본 발명의 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 또는 CendR 요소의 내부 아미노산에; 본 발명의 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 또는 CendR 요소의 카르복시 말단에; CendR 요소의 N 말단부의 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열에; 링커에 의해 본 발명의 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 또는 CendR 요소에; 또는 이들 배합물에 결합될 수 있다. 본 발명의 CendR 조성물은 분자, 요소, 모이어티 등과 본 발명의 CendR 조성물, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 또는 CendR 요소를 연결해주는 링커를 추가로 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 CendR 조성물, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 또는 CendR 요소는 나노입자, 나노웜, 나노쉘 등을 코팅하는데 사용될 수 있는 소 혈청알부민(BSA; Tkachenko et al., (2003) J Am Chem Soc, 125, 4700-4701)과 같은 코팅 분자와 콘쥬게이트될 수 있다.
다른 분자, 요소, 모이어티 등과 본 발명의 공조성물, 카고 조성물, CendR 조성물, 단백질, 펩타이드, 아미노산 서열 등을 가교결합시키는데 사용될 수 있는 단백질 가교결합제는 당해 분야에 알려져 있으며, 유용성 및 구조를 기초로 해서 한정되는데, 그 예로는 DSS(디숙신이미딜수베레이트), DSP(디티오비스(숙신아미딜프로피오네이트), DTSSP(3,3-디티오비스(술포숙신아미딜프로피오네이트)), SULFO BSOCOES(비스[2-(술포숙시님도옥시카보닐옥시)에틸]술폰), BSOCOES(비스[2-(숙시님도옥시카보닐옥시)에틸]술폰), SULFO DST(디술포숙시님딜타르트레이트), DST(디숙시님딜타르트레이트), SULFO EGS(에틸렌 글리콜비스(숙시니미딜숙시네이트)), EGS(에틸렌 글리콜비스(술포숙시니미딜숙시네이트)), DPDPB(1,2-디[3'-(2'-피리딜디티오)프로피온아미도]부탄), BSSS(비스(술포숙시님딜)수베레이트), SMPB(숙시님딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트), SULFO SMPB(술포숙시님딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트), MBS(3-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르), SULFO MBS(3-말레이미도벤조일-N-하이드록시술포숙신이미드 에스테르), SIAB(N-숙신이미딜(4-요도아세틸)아미노벤조에이트), SULFO SIAB(N-술포숙신이미딜(4-요도아세틸)아미노벤조에이트), SMCC(숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트), SULFO SMCC(술포숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트), NHS LC SPDP(숙신이미딜-6-[3-(2-피리딜디티오)프로피온아미도]헥사노에이트), SULFO NHS LC SPDP(술포숙신이미딜-6-[3-(2-피리딜디티오)프로피온아미도]헥사노에이트), SPDP(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), NHS BROMOACETATE(N-하이드록시숙신이미딜브로모아세테이트), NHS IODOACETATE(N-하이드록시숙신이미딜요도아세테이트), MPBH(4-N-말레이미도메틸)부틸산 하이드라지드 하이드로클로라이드), MCCH((4-N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실산 하이드라지드 하이드로클로라이드), MBH(m-말레이미도벤조산 하이드라지드 하이드로클로라이드), SULFO EMCS(N-(엡실론-말레이미도카프로일옥시)술포숙신이미드), EMCS(N-(엡실론-말레이미도카프로일옥시)숙신이미드), PMPI(N-(p-말레이미도페닐)이소시아네이트), KMUH(N-카파-말레이미도운데카노산)하이드라지드), LC SMCC(숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카르복시(6-아미도카프로에이트)), SULFO GMBS(N-(감마-말레이미도부틸옥시)술포숙신이미드 에스테르), SMPH(숙신이미딜-6-(베타-말레이미도프로피온아미도헥사노에이트)), SULFO KMUS((N-카파-말레이미도운데카노일옥시)술포숙신이미드 에스테르), GMBS(N-감마-말레이미도부틸옥시)숙신이미드), DMP(디메틸피멜이미데이트 하이드로클로라이드), DMS(디메틸수베리미에이트 하이드로클로라이드), MHBH(우드 시약(Wood's reagent); 메틸-p-하이드록시벤지미데이트 하이드로클로라이드, 98%), DMA(디메틸아디피미데이트 하이드로클로라이드) 등이 있다.
또한, 공조성물 또는 카고 조성물의 성분들은 예를 들어, 말레이미드 커플링을 이용하여 결합될 수 있다. 실례로서, 성분들은 성분의 프리 시스테인 술프하이드릴기를 이용하여 예를 들어, 1,2-디스테이로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[말레이미드(폴리에틸렌 글리콜)2 000; DSPE-PEG2000-말레이미드](Avanti Polar Lipids)와의 커플링에 의해 지질과 결합될 수 있다. 반응은 예를 들어, 실온에서 4시간 동안 수용액 속에서 수행될 수 있다. 이러한 커플링 화학은 공조성물 및 카고 조성물의 성분들을 커플링하는데 이용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물, 성분 및 조성물은 예를 들어, 아미노기-기능화 덱스트란 화학을 이용하여 결합될 수 있다. 예를 들어, 나노입자, 나노웜 및 미셀과 같은 입자는 아미노기-기능성 덱스트란으로 코팅될 수 있다. PEG를 아미노화 입자에 부착시키면, 옵소닌 작용(opsonization)에 관여하는 플라스마 단백질의 결합을 감소시킴으로써 순환 시간이 증가한다(Moghimi et al., 2001). 입자는 예를 들어, 세망내피계 회피(PEG) 및 귀소(귀소 분자), 엔도솜에서 세포질로의 방출(pH-민감성 펩타이드; 예컨대 Pirello et al., 2007), 검출제, 치료성 화합물 또는 그 배합물용으로 표면 개질을 할 수 있다. 한 입자에 이러한 모든 기능을 수용하기 위해서, 상기 요소들 중 어느 한 요소가 입자의 표면의 이용가능한 결합 부위의 얼마 정도의 비율을 차지하여야 표적화와 페이로드 배달의 최상 조합이 이루어지는지를 결정하기 위한 최적화 검사를 수행할 수 있다. 이러한 공조성물 및 카고 조성물의 세포 내재화 및/또는 조직 침투는 본 발명의 CendR 요소, 아미노산 서열, 펩타이드, 단백질, 분자, 콘쥬게이트, 및 조성물에 의해 매개될 수 있다.
CendR 요소, 아미노산 서열, 펩타이드, 단백질, 분자, 콘쥬게이트, 및 조성물 그 자체는 본 명세서에 기술된 방법(일반적으로 본 발명의 공조성물에 대한 것은 아니지만, 본 명세서의 다른 곳에서 기술됨)이나 공지 기술을 이용하여 본 명세서에 기술한 바와 같은 다른 성분과 결합될 수 있다. 본 발명의 CendR 요소는 환형 펩타이드 형태로 사용될 수 있다. 이러한 환형 펩타이드가 다른 성분과 결합하도록 하기 위해서, 프리 술프하이드릴기를 제공하는 엑스트라 시스테인을 함유하는 환형 펩타이드를 합성하는데 선택성 가지사슬기 보호를 이용할 수 있다. 이 펩타이드는 이황화물 결합의 스크램블링(scrambling)이 검출되지 않고 안정하다. 또한 커플링기로서 말레이미드 기능을 사용할 수 있다. 이 화학은 CendR 요소, 아미노산 서열, 펩타이드, 단백질, 분자, 콘쥬게이트 및 조성물을 서로 및 다른 성분과 커플링하는데 이용될 수 있다.
또한, CendR 요소, 아미노산 서열, 펩타이드 및 단백질은 예를 들어, 말레이미드 커플링을 이용하여 다른 성분들과 결합될 수 있다. 실례로서, CendR 요소, 아미노산 서열, 펩타이드 및 단백질은 CendR 요소, 아미노산 서열, 펩타이드 및 단백질의 프리 시스테인 술프하이드릴기를 이용하여 예를 들어, 1,2-디스테이로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[말레이미드(폴리에틸렌 글리콜)2000; DSPE-PEG2000-말레이미드](Avanti Polar Lipids)와의 커플링에 의해 지질과 결합될 수 있다. 반응은 예를 들어, 실온에서 4시간 동안 수용액 속에서 수행될 수 있다. 이러한 커플링 화학은 본 발명의 CendR 요소, 아미노산 서열, 펩타이드 및 단백질을 많은 다른 성분들과 커플링하는데 이용될 수 있다.
"치료"라는 것은 질병, 병리학적 이상, 또는 장애를 치료, 호전, 안정화 또는 예방하기 위한 목적으로 환자에게 행하는 의료적 행위이다. 이 용어는 능동적 치료, 즉 질병, 병리학적 이상, 또는 장애를 개선시키기 위한 치료 뿐만 아니라 일상적 치료, 즉 관련된 질병, 병리학적 이상, 또는 장애의 원인을 제거하기 위한 처리를 포함한다. 또한, 이 용어는 완화 치료, 즉 질병, 병리학적 이상, 또는 장애의 치료 보다는 증상 원화를 위한 치료; 예방 치료, 즉 관련 질병, 병리학적 이상, 또는 장애의 진행을 최소화하거나 부분적으로 또는 완전히 억제하기 위한 치료; 및 지지 치료(supportive treatment), 즉, 관련 질병, 병리학적 이상, 또는 장애를 개선시키기 위한 다른 특정 치료를 지지하기 위해 행하는 치료를 포함하는 의미이다.
본 명세서에서 사용되는 "대상자"라는 것은 핵산을 가지고 있는 동물, 식물, 박테리아, 바이러스, 기생체 및 다른 유기체 또는 독립체를 의미한다. 대상자는 척추동물, 특히 포유동물(예컨대, 인간, 말, 돼지, 토끼, 개, 양, 염소, 인간이 아닌 영장류, 소, 고양이, 기니아 피그 또는 설치류), 어류, 조류, 파충류 또는 양서류일 수 있다. 특히, 애완 동물 및 가축류가 대상자가 될 수 있다. 대상자는 벌레 또는 절지동물(예컨대, 곤충류 및 갑각류)와 같은 무척추동물도 될 수 있다. 이 용어는 특정 연령이나 성별을 요하지 않는다. 따라서, 남성 또는 여성에 상관없이 성인 및 갓 태어난 대상자 뿐만 아니라 태아도 포함된다. 환자라는 것은 질병 또는 장애를 가진 대상자를 의미한다. "환자"라는 의미는 인간 및 동물을 포함한다. 자궁내막증 및 자궁내막증 세포에 관한 내용에서, 문맥상 대상자는 자궁내막증 및/또는 자궁내막증 세포를 갖고 있거나 가질 수 있는 대상자를 의미한다는 점을 이해해야 할 것이다.
종양-침투 CendR 펩타이드는 종양 이미지화 및 항암제 사용에 의한 종양 치료를 증대시키는데 사용될 수 있다. 이미지화에 미치는 CendR 펩타이드의 효과는 테스트될 수 있다. 예를 들어, Kodak IN VIVO Fx 이미저 및 Li-Cor Odyssey 이미저(예컨대, Simberg et al., 2007; Sugahara et al., 2009)를 이용하여 근적외선 형광발색단을 사용하는 광학적 이미지화, 및 MRI 이미지화를 이용할 수 있다. MRI 이미지화의 경우, 공조성물 또는 카고 조성물은 Feridex 산화철 나노입자 및 가돌리늄 화합물과 같은 MRI 조영제일 수 있다. 이러한 화합물을 종양-귀소 CendR 펩타이드 또는 펩타이드의 배합물과 함께 및 없이 종양이 있는 마우스에 주입한 후에 이미지화를 행한다. 이렇게 하여 도출된 결과를 이용하여 치료 효과를 결정하고, 공조성물 또는 카고 조성물로서 치료법과 CendR 펩타이드 사용에 대한 서로 다른 치료 프로토콜을 평가한다.
서로 다른 CendR 펩타이드와 서로 다른 공조성물 및/또는 카고 조성물의 다양한 조합을 테스트해서, 예를 들어, 최대 효과를 제공하는 펩타이드의 투여량을 사용하여 약물의 투여량을 달리함으로써 표적 세포 및 조직내의 공조성물 또는 카고 조성물의 최적 축적 및 분포를 알아낼 수 있다. 그 결과는 CendR - 약물 조합이 약물 필요량을 감소시키고, 따라서 부작용을 감소시키면서, 동일한 종양억제 효과를 나타낸다는 것을 보여준다. 또한 CendR 펩타이드는 공조성물 또는 카고 조성물 단독으로 사용할 때는 달성될 수 없는 효과를 나타낸다. 예를 들어, CendR 펩타이드를 사용하면 세포 및 조직 내에 공조성물 또는 카고 조성물이 고농도로 존재하는 것이 가능하다. 이러한 경우, 공조성물 또는 카고 조성물의 효능은 종래의 치료에서 얻어질 수 있는 효능보다 높다.
2009년 1월 19일 출원된 미국 특허 출원 제 12/355,672 호 및 2009년 1월 19일 출원된 미국 특허 출원 제 12/390,061 호는 그 전체 내용 및 특히 iRGD 펩타이드 및 CendR 요소, 펩타이드 및 콘쥬게이트에 대한 기술이 본 명세서에 참고 사항으로 포함된다.
실시예
본 실시예는 본 명세서에서 특허 청구를 하는 화합물, 조성물, 제품, 장치 및/또는 방법이 어떻게 제조되고 평가되는지에 관한 상세한 기술 및 설명을 당업자에게 제공하기 위한 것으로, 단순히 본 발명을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하기 위한 것은 아니다. 숫자(예컨대, 양, 온도 등)에 관해서는 정확성을 담보하려는 노력을 하였으나, 일부 오류 및 편차는 고려되어야 할 것이다. 별도의 설명이 없는 한, 부는 중량부를 의미하며, 온도는 ℃ 또는 실온이고, 압력은 대기압 또는 그 근접치이다.
A. 실시예 1: CendR 펩타이드에 의해 매개되는 공조성물의 세포 내재화 및 조직 침투
전신적으로 투여되는 CendR 펩타이드의 혈관 누수를 유발시키는(따라서 공조성물의 세포 내재화 및 조직 침투를 향상시키는) 능력을 알아보기 위해, 올리고머 RPARPAR-뉴트라비딘 복합체(SEQ ID NO:2)를 정맥내 주입한 후에, 동시 주입된 추적자 파지의 조직 분포를 결정하였다. 이 분석에서, 혈액은 관류에 의해 제거되고, 추적자 파지를 포함하여 혈관외 유출된 혈액 구성물이 조직 내에 남아있게 된다. 올리고머 조절 펩타이드가 아닌 올리고머 RPARPAR(SEQ ID NO:2)는 파지 입자의 혈관외 유출이 증가된 계통의 폐 및 다른 기관 내에서 파지의 보유율을 증가시켰다(도 2). 이러한 테이터는 RPARPAR 펩타이드가 부착된 페이로드의 조직 침투를 촉진시키고, 투여되는 또는 존재하는 공조성물과 같은 거대분자가 유입되도록 조직을 침투할 수 있다는 것을 보여준다.
B. 실시예 2: 귀소 CendR 펩타이드를 사용한 조직 침투 및 투과성
도 3은 iRGD(서열: CRGDK/RGPD/EC; SEQ ID NO:61)라고 불리는 종양-귀소 RGD 펩타이드에 적용되는 CendR 시스템의 원리를 보여준다. iRGD 내의 2가지 모티프는 종양 내피의 인테그린 αv 에 펩타이드가 결합되는 것을 매개하는 RGD 모티프(Ruoslahti, 2002)와 잠재성 CendR 서열 RGDK(또는 RGDR; SEQ ID NO:229)이다. RGD 귀소 서열은 펩타이드가 내생 프로테아제에 의해 단백질분해 과정을 거침으로써 CendR 모티프가 C-말단 및 활성이 되는 장소인 종양 내피(혈관신생 혈관계는 인테그린 αv를 발현시킴)로 펩타이드를 유도한다. 활성화된 CendR 모티프는 서로 다른 수용체(뉴로필린-1; Teesalu et al., 2009; 2009년 1월 19일 출원된 미국 특허 제 12/355,672 호)와 결합하며, 이것은 C-말단 절단된 펩타이드(및 이에 부착된 페이로드)의 혈관외 유출, 종양 침투 및 세포유입을 매개한다. 이러한 각각의 단계는 생화학 실험에서 인용되어 왔는데, 이는 세포 내부로부터 예상 N-말단 iRGD 단편의 분리 단계를 포함한다(Sugahara et al., 2009; 2009년 2월 20일 출원된 미국 특허 출원 제 12/390,061 호). 다단계의 귀소 및 조직 침투 과정은 CendR을 수용체 결합에만 의존하는 펩타이드 및 다른 프로브보다 특이적으로 만든다. 뉴로필린-1은 다양한 종류의 세포 내에서 광범위하게 발현되지만, 종양은 종종 이 단백질을 정상 조직보다 높은 수준에서 발현시킨다.
iRGD의 놀랄만한 종양 침투 특성은 도 4에 도시되어 있는데, iRGD와 유사한 친화성으로 인테그린αv와 결합하나(Sugahara et al., 2009) CendR 모티프가 없는 2가지 RGD 펩타이드와 iRGD를 비교한다.
CendR 모티프는 몇몇 단백질의 C-말단에 존재한다. 혈관 내피 성장인자의 또 다른 형태 중의 하나인 VEGF-165는 exon 8(CRCDKPRR; SEQ ID NO:95)에 의해 암호화되는 C-말단 CendR-유사 서열을 사용하여 NRP-1과 결합한다. 또한, A7R(ATWLPPR; SEQ ID NO:96; Starzec et al., 2006), 면역조절 펩타이드인 터프친(TKPR; SEQ ID NO:97) 및 그 변이체인 강화 터프친(TKPPR; SEQ ID NO:98)과 같은 몇몇 펩타이드도 NRP-1의 동일한 부위에 결합한다(Geretti et al., 2008). 또한, C-말단 CendR 모티프를 함유하며 상기 부위에 결합하는 세마포린 3A(Semaphorin 3A)는 혈관 투과성을 향상시킨다(Acevedo et al., 2008). 이 효과는 표적 세포 표면에서의 축적 및 단백질분해에 의한 활성화를 필요로 하기 때문에 종양 특이적일 수 있다.
안테나페디아, 헤르페스 심플렉스 바이러스-1 단백질 VP22, 및 인간 면역결핍 바이러스-1 트랜스액티베이터 TAT 단백질과 같은 호메오도메인 전사인자는 세포에의 내재화에 사용되는 것으로 알려져 있다. 이러한 단백질로부터 유도되는 짧은 사슬의 양이온 세포 침투성 펩타이드는 내재화 능력을 보유한다. 그러나, 이러한 펩타이드는, 펩타이드 중의 아미노산의 키랄성에 의존적이고, 활성을 위해 세포 표면 헤르파란 술페이트를 필요로 하며(본 발명의 펩타이드는 그렇지 않음) 조직-침투 활성을 가지지 못한다는 점에서 CendR 펩타이드와 다르다(Langel, 2007).
파지 스크린으로부터의 종양- 귀소 펩타이드 내의 잠재성 CendR 서열: iRGD 외에도 다수의 다른 귀소 펩타이드도 CendR 요소를 함유한다. 이러한 펩타이드에는 KRTR 서열(SEQ ID NO:100; Laakkonen et al., 2002, 2004)을 함유하는 Lyp-1(CGNKRTRGC; SEQ ID NO:99) 및 RGRR(SEQ ID NO:101 및 102; Joyce et al., 2003)을 함유하는 CRGRRST가 포함된다. iRGD에서와 같이, 이러한 펩타이드의 CendR 모티프는 C-말단이 아니다. 단백질 분해 과정이 CendR 모티프를 활성화할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 실제로, iRGD 파지 또는 LyP-1 파지를 트립신으로 처리함으로써 파지와 PPC1 세포상의 뉴트로필린-1의 결합을 향상시킬 수 있다. 트립신은 비-CendR 펩타이드 CRGDC (SEQ ID NO:36) 또는 RGD-4C에 영향을 주지 않았다. LyP-1은 혈관으로부터 멀리 떨어져 있는 종양의 저산소증/저영양 부위에 귀소하며, 이 위치에 나노입자 크기의 페이로드를 전달한다(Laakkonen et al., 2002, 2004; Karmali et al., 2009). 따라서, LyP-1은 종양-침투성 CendR 펩타이드이다.
iRGD 는 종양내의 혈관 투과성을 향상시킨다: iRGD의 종양 침투 특성은 종양내의 혈관 투과성을 증가시키는 능력을 포함한다. 혈관 투과성 조사에 통상적으로 사용되는 알부민-결합 염료인 Evans Blue를 종양이 있는 마우스에 주입한 후에, iRGD 펩타이드를 주입하였다. 도 5에서 보여지는 바와 같이, iRGD는 대조용 펩타이드에 비해 많은 염료를 종양 내로 누수되도록 하였으며, 이 누수는 종양 조직에 특이적이다. 이는 CendR 모티프를 함유하지 않는 RGD 펩타이드에 의해서는 발생되지 않았다. 전이성 종양을 포함한 4가지 종양 유형을 테스트하였는데, 수회 실험에서 일관된 결과를 도출하였다. CendR 시스템이 혈관 누수에 관여한다는 사실은 실험에 의해 입증되었는데, 이 실험에서 NRP-1에 대한 억제성 항체를 사용함으로써 혈관 투과성에 미치는 RGD 효과는 차단되었다.
iRGD 는 종양 내로의 산화철 나노입자 유입을 향상시킨다: 종양 내로의 나노입자 유입은 임상적으로 사용되는 MRI 조영제인 Feridex(직경이 약 150nm인 덱스트란-코팅된 상자성 산화철 나노입자임)를 종양이 있는 마우스에 주입함으로써 테스트되었다. Feridex와 iRGD를 배합함으로써 Feridex 단독 사용할 때 보다 강력한 종양 내에서의 MRI 조영제를 얻었다.
iRGD 는 조직 침투를 유도한다: iRGD 및 LyP-1이 혈관으로부터 떨어져 있는 종양 조직내로 신속하게 침투하는 현상(Laakkonen et al., 2004; Sugahara et al., 2009)은 iRGD가 혈관외 유출을 촉진시키는 것 이외에도 유조직 종양 조직을 통한 수송을 증가시킬 수 있다는 것을 시사하는 것이다. 이를 입증하기 위해서, 파지를 함유하는 배양 배지 속에 갓 절제된 종양을 배양시킴으로써 순환 효과를 배제시켰다. iRGD 파지는 종양 조직 내로 신속하게 침투하여 90분 동안 약 4 mm 이동한 반면, 대조용 파지는 단지 종양 표면에서만 미량 관찰되었다(도 6). 따라서, CendR 펩타이드는 조직 침투를 유도하며, 이 침투는 능동적 수송 과정에 의존한다. 이 과정을 CendR-유도 내피세포 사이 & 조직(CenRIT) 효과라고 부를 수 있다.
iRGD 는 헤르셉틴의 종양 축적 및 항암 활성을 증가시킨다: iRGD는 또한 종양 내로의 약물 전달을 향상시킨다는 것이 밝혀졌다. 헤르셉틴은 공조성물 약물로서 사용되었다. 헤르셉틴은 임상적으로 항암제로서 널리 사용되고 있는 HER2 수용체에 대한 항체이다. iRGD와 헤르셉틴을 함께 투여함으로써 동량의 헤르셉틴을 단독으로 사용했을 때 보다 종양 성장 억제에 있어서 훨씬 더 큰 효과를 얻었다(도 7).
이 결과는 신개념의 종양 치료법, 즉, 종양 조직 내로의 약물 침투에 있어서 종양 특이적 개선법을 시사한다. 종양 혈관은 누수되기 쉬운 경향이 있는데, 이로 인해 물질들이 혈관외로 유출되어 종양 혈관 주변의 조직 내로 가게 한다(소위 투과성 및 보유 향상 - EPR - 효과). CendIT라고도 불리는 CendR 펩타이드의 효과는 EPR 효과보다 훨씬 효과적이다(예를 들어, 도 4 참조). 또한, CendIT는 능동적인 과정으로 누수가 아니며 수용체(NRP-1) 의존적이기 때문에, 깊숙한 종양 침투가 이루어지고 순환의 부재하의 수동적인 확산 및 운반은 이루어지지 않는다(도 6).
1. 논의
본 연구에서 여태까지 인지되지 않은 세포 내재화 경로(CendR)가 밝혀졌다. CendR의 두드러진 특징은 다음과 같다. 즉, (i) R/KXXR/K (SEQ ID NO:23) 인식 모티프, (ii) 결합 및 내재화 활성을 위해 상기 모티프의 C-말단 노출, (iii) 결합 및 내재화에 NRP 관여, 및 (iv) 단백질분해 과정을 통해 잠재성 CendR 모티프의 활성 형태로의 전환이다.
일련의 심장-귀소 펩타이드는 노출된 CendR 모티프를 함유하지만(Zhang, L. et al., 2005), CendR 모티프는 잠재성 모티프일 수도 있다. 세포 침투 특성을 갖는 몇몇 종양-귀소 펩타이드는 잠재성 CendR 모티프를 함유한다(Laakkonen, P. et al., 2002b; Porkka, K. et al., 2002; Jarvinen, T.A. et al., 2007; Zhang, L. et al., 2006). 이러한 펩타이드는 CendR 모티프 외에도, 특이적인 수용체에 결합하는 배열을 가진다. 문헌(Sugahara et al., 2009 및 2009년 2월 20일 출원된 미국 특허 출원 제 12/390,061 호)에 기술되어 있는 인테그린-결합 iRGD 펩타이드는 이러한 펩타이드가 어떻게 작용하는지에 관한 설명을 제공한다. 즉, 특이적인 귀소 요소는 표적(종양)에 펩타이드를 응집시키고, 프로테아제가 CendR 모티프를 노출시킨 후에, NRP-1과 결합함으로써 펩타이드(및 존재하는 경우 그 페이로드)의 세포내 흡수를 유발시킨다.
많은 양이온 CPP는 활성 또는 잠재성 CendR 요소를 함유한다(Langel, 2007). CendR 모티프를 함유하는 HIV-1 TAT 단백질의 염기 도메인은 VEGFA-165가 NRP-1과 결합하는 것을 방해하지만(Jia, H. et al., 2001), 양이온 CPP의 결합 및 흡수 메카니즘은 아직 확실하게 밝혀지지 않았다. 양이온 CPP와 CendR 펩타이드 사이의 가장 중요한 차이점은 D-아미노산으로 구성된 CCP는 활성이라는 것이며(Polyakov, V. et al., 2000; Gammon, S.T. et al., 2003), 본 발명의 결과는 CendR 흡수가 L-펩타이드 만의 특이적 인식에 의존한다는 것을 보여준다. 또한, 많은 CPP는 코어 CendR 개념과는 정반대로, C-말단 고정된 카고를 내재화시킬 수 있다. CendR는 양이온 CPP의 흡수에 관여할 수 있는 몇몇 평행 경로 중의 하나일 수 있다.
CendR-매개 내재화 시스템의 생리학적 중요성은 아직 잘 밝혀지지 않았으나, CendR 요소는 단백질 전체에 걸쳐 존재하며, 많은 세린 및 시스테인 프로테아제가 이를 활성화시킬 수 있다(Barrett, Alan et al., 1998). 프로프로테인 컨버타아제 및 맴브레인 프로테아제, 예컨대, 마트립타아제가 특히 관련이 있으며, 이러한 효소에 의한 절단이 다양한 내생 단백질(펩타이드 호르몬, 성장인자, 부착 분자, 프로테아제; Thomas, G., 2002; Uhland, K., 2006)의 C-말단에서 RXXR 배열을 노출시킨다. NRP-1 공수용체(co-receptor) 기능, 수용체 활성화 및 활성 단백질의 세포내 흡수는 가능한 생리학적 CendR 서열의 기능이다.
바이러스 및 다른 미생물은 CendR 메카니즘을 감염 촉진자로서 강제하는 것으로 보인다. 바이러스 외피 단백질(viral coat protein)의 단백질분해로 인한 절단과 이에 부수적인 CendR 요소의 노출은 많은 바이러스성 병원균의 전염성에 있어서 계속 마주치게 되는 주제가 될 것으로 보인다(표 4). 표 4는 표면 CendR 요소를 함유하는 인간 병원성 바이러스의 예를 나타낸 것이다.
바이러스 단백질 서열[*-절단] SEQ ID
NO:		 참고문헌
인간
사이토메갈로
바이러스		 엔벨로프
당단백질 B
(UL55)		 LNITHRTRR*STDDN
 1 Vey, M. et al.,
1995; SEQ ID
NO:230
홍역 바이러스 융합 단백질 SVASSRRHKR*FAGVV 3 Varsanyi, T.M.
et al., 1985;
SEQ ID NO: 231
진드기매개뇌염
바이러스		 PreM 단백질 KQEGSRTRR*SVLIP 4 Chambers, T.J.
et al.,1990;
SEQ ID NO:232
호흡기 세포융합
바이러스		 융합 단백질 PATNNRARR*ELPRF 5 Gonalez-Reyes, L et al.,2001;
SEQ ID NO:233
인플루엔자 A
바이러스(H5N1)		 적혈구응집소 PQRRRRRKKR*GLFGA 6 Steinhauer, D.A.,1999;
SEQ ID NO:234
HIV-1 엔벨로프
전구체 gp160		 RRVVQREKR*AVGIG 7 Moulard, M.
et al., 2000;
SEQ ID NO:235
자이레
에볼라바이러스		 비리온 스파이크
당단백질 전구체		 LITGGRRTR*REAIV 18 Wool-Lewis, R.J. et al., 1999;
SEQ ID NO:236
유행성 이하선염
바이러스		 융합 단백질 PSSGSRRHKR*FAGIA 19 Elango N.
et al., 1989;
SEQ ID NO:237
황열병
바이러스		 PreM 단백질 CDSAGRSRR*SRRAI 24 Ruiz-Linares, A et al., 1989;
SEQ ID NO:238
인간 헤르페스
바이러스 4		 BALF
(당단백질
전구체 B)		 AAVLRRRR*RDAGN 25 Johannesen, E
et al., 2004;
SEQ ID NO:239
인간
메타뉴모바이러스		 융합 당단백질
전구체		 QIENPRQSR*FVLGA 26 Biacchesi,S.
et al., 2006;
SEQ ID NO:240
인간 T-세포
림프종바이러스		 엔벨로프
당단백질 전구체		 PPPATRRRR*AVPIA 27 Sjoberg, M
et al., 2006;
SEQ ID NO:241
크림-콩고
출혈열		 당단백질
전구체		 PSPTNRSKR*NLKME 28 Sanchez, A.J. et al., 2006;
SEQ ID NO:242
도처에서 발현되는 프로테아제인 퓨린에 의한 바이러스성 표면 단백질의 절단은 몇몇 바이러스의 전체적 확산에 중요한 기여 인자인 반면, 제한된 발현 패턴을 가진 프로테아제에 민감한 바이러스의 전염성은 감염을 적합한 프로테아제를 발현시키는 조직으로 제한할 수 있다. 이 개념은 인플루엔자 바이러스에서 증명된다(Steinhauer, D.A. et al., 1999). 국소적으로 감염된 포유동물 및 조류 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌(haemagglutinin)은 단일 아르기닌 잔기에서 절단된다. 이러한 절단은 기도 및 소화관과 같이 한정된 세포 유형으로 제한된다. 이와 대조적으로, 전체적 감염을 유발하는 조류 인플루엔자 바이러스는 퓨린에 의해 활성화되어 다염기성 CendR 요소를 노출시킨다. 본 발명에서, 병원균 및 그 생성물의 CendR-매개 내재화 및 조직 침투를 억제하는 것이 감염성 질병과 싸우는 새로운 방법을 제공하는 것이라는 점을 시사한다.
CendR 기술은 예를 들어, 세포 유형에 특이적인 나노입자 전달을 개선시키는 것과 같이, 많은 다른 생물공학에 응용될 수 있다. 사전노출된 CendR 펩타이드로 코팅된 나노입자는 처음으로 입자가 만나는 혈관상(심장 및 폐, RPARPAR(SEQ ID NO:2) 파지의 정맥내 주입 후)에서 흡수된다. 문헌(Sugahara et al., 2008)에서 설명되는 바와 같이, 잠재성 CendR 서열이 말초 조직으로의 카고물질 전달에 유용할 수 있다. 혈액 플라스마는 고농도의 일반적인(예컨대, 알파-2-매크로글로불린) 및 효소-특이적인(예컨대, 알파-2-안티플라스민, 안티드롬빈) 프로테아제 억제제를 함유한다. 이는 혈액 속에서 미성숙 CendR 활성화로부터 보호할 수 있게 하는 것으로 추측된다. 활성 프로테아제는 전형적으로 즉시 세포주위 면적에 한정된다. 이 프로테아제는 귀소 펩타이드-매개 전달에 의해 또는 수동적인 축적을 통해 표적 조직에 도달되는 나노입자에 있는 잠재성 CendR 펩타이드를 활성화시킬 수 있다. 잠재성 CendR 서열을 드러내게 할 수 있는 조직-특이적 프로테아제는 생체내 표적 선택성을 더욱 향상시킬 수 있다. 활성화된 CendR 요소에 의해 매개되는 세포내 흡수는 처리된 펩타이드 및 그 카고가 표적 조직 또는 세포에 축적되는 메카니즘을 제공한다. 이 조사로부터 도출되는 또 다른 중요한 결론은 CendR 요소가 나노입자의 조직 내 확산을 촉진시킬 수 있으며, 도킹-기반 CendR 표적화 요소와 프로테아제-민감성 CendR 표적화 요소를 배합함으로써 선택적인 CendR-매개 내재화 및 조직 침투가 달성할 수 있다는 것이다. iRGD 펩타이드(Sugahara et al., 2009) 및 (가능한 경우) 앞서 논의한 잠재성 CendR 요소를 함유하는 다른 내재화 혈관 귀소 펩타이드는 전형적인 예를 설명해준다. 또한, 파지 및 다른 나노입자 조사를 통해서 유추할 수 있는 점은 다양한 감염원이 조직을 통한 확산을 촉진시키는데 CendR 시스템을 사용할 수 있다는 것이다.
2. 방법
동물 실험: 모든 동물 실험은 캘리포니아 대학(Santa Babara)의 동물 실험 위원회가 승인한 절차에 따라 BALB/c 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Inc., Indianapolis, IN)를 사용하여 수행되었다.
파지 디스플레이: 생체내 파지 디스플레이를 위해, 109 플라크 형성 단위(pfu)의 T7 파지를 마우스에 정맥내 주입하고, 순환계를 관류시킨 다음, 적정(titration)에 의해 표적 기관 내의 결합된 파지를 결정하였다. 배양 세포(시험관 내 디스플레이) 및 기관-유래 세포 현탁액(생체 외 디스플레인)의 세포 결합 조사를 위해, 4℃에서 109 pfu의 파지로 세포를 배양한 후에, 세척하고 용해시킨 다음, 적정에 의해 정량화하였다. 37℃에서 배양한 후에, 저PH(글리신-HCl, pH 2.5)에서 세척한 다음, 내재화 파지의 양을 분석하였다.
양자점의 표지화: 비오티닐화 펩타이드를 사용하여, 제조자의 설명서에 따라 605 ITK 스트렙타비딘 양자점(Invitrogen, Calsbad, CA)을 기능화하였다.
면역형광법: 배양된 세포 및 조직 절편을 4% 완충 파라포름알데히드 또는 차가운(-20℃) 메탄올로 고정시킨 다음, 적절한 일차 항체 및 Alexa-표지 이차 항체를 이용하여 배양시킨 후에, DAPI 또는 Hoechst 342 DNA 염료로 핵 염색을 수행하였다.
친화성 크로마토그래피: PPC-1 종양을 200mM n-옥틸-베타-D-글루코피라노시드를 함유하는 PBS 속에 용해시키고, RPARPAR(SEQ ID NO:2)-코팅된 술포링크 (Sulfolink)-비드(Pierce, Rockford, IL)로 배양시킨 다음, 2mM 프리 RPARPAR(SEQ ID NO:2) 펩타이드를 함유하는 용해 완충액 속에 용출시켰다. 용출된 프랙션의 은염색된 젤로부터 절제된 젤 단편 분석을 위해, 번햄 의료 리서치 프로테오믹스 리소스 연구소(Burnham Institute for Medical Research Proteomics Resource)에서 MALDI-TOF 질량 분석법을 수행하였다.
마우스 및 조직: 모든 동물 실험은 캘리포니아 대학(Santa Babara)의 동물 실험 위원회가 승인한 절차에 따라 수행되었다. 종양 주입을 위해, 마우스에 크실라진(10 mg/kg) 및 케타마인(50 mg/kg)을 복강내 주입하여 마취시킨 후에 희생시켰다. 종양 이종이식편 및 생체내 및 생체외 파지 디스플레이 실험을 위해서, BALB/c 무흉선증 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Inc., Indianapolis, IN)를 사용하였다. 전립선의 후엽(ventral lobe)에 106 PPC-1 세포(Zhang, L. et al., 2006)을 주입함으로써 동소이식성 전립선암 이종이식편을 생성시켰다. 조직학적 분석을 위해, 조직을 4% 파라포름알데히드로 고정시키고, 30% 슈크로오스를 함유하는 인산염 완충염 용액 속에서 동결보호한 다음, 10㎛에서 절편화하였다.
세포계: PPC-1, PC-3, Du-145, 4T1, MIA PaCa-2, PDAC1.3, B16F10, M21 및 MDA-MB-435 세포계를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신이 보강된 둘베코스 모디파이드 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium; DMEM) 내에서 유지시켰다. 제조자의 설명서에 따라 인간 제대혈관 내피세포를 배양하였다.
파지 디스플레이: 파지 라이브러리 구축(라이브러리 다양성 - 108) 및 개개의 파지 클로닝을 위해, 제조자의 설명서(EMD Biosciences, Gibbstown, NJ)에 따라 T7-선택 파지 디스플레이 시스템을 사용하였다. PEG-8000(Sigma, St. Louis, MO)로 침전시킴으로써 파지를 정제한 다음, CsCl2 구배 초원심분리 및 다이얼리시스를 수행하였다. T7 메이저 외피 단백질 gp10의 C-말단에서 인서트 함유 부분을 암호화하는 DNA로부터 디스플레이된 펩타이드의 서열을 결정하였다.
바이오패닝(biopanning) 및 파지 결합 조사(Hoffman, J.A.et al., 2004)를 위해, 세포를 군집될 때 까지 성장시킨 후에 트립신으로 수확하고, 메디머신(BD Biosciences, San Jose, CA)을 이용하여 마우스의 기관을 분리하였다. 파지 결합을 측정하기 위해, 결합 완충액(1% BSA를 함유하는 DMEM) 속의 106 세포를 4℃에서 1시간 동안 109 pfu의 T7 파지로 배양시켰다. 이 세포를 결합 완충액으로 4회 세척한 다음, 1% NP-40을 함유하는 LB 박테리아 성장 배지 내에 용해시키고 적정하였다. 파지 내재화 분석은 세포를 37℃에서 파지로 배양시킨다는 점과 2차 세척에서 결합 완충액 대신 산성 완충액(500mM 염화나트륨, 0.1M 글리세린, 1% BSA, pH 2.5)을 사용한다는 점을 제외하고는 동일한 절차로 수행되었다.
시간대별 실험 동안 세포로부터 결합안된 파지를 분리시키기 위해, 실리콘 오일 쿠션(1.03 g/ml) 원심분리를 이용하였다. 파지로 배양시키기 20분 전에 세포에 파지 결합 및 내재화 억제제(헤파린, 콘드로이틴, 글리코칼리스 제거 효소, 세포내이입 저해제, 프리 펩타이드, 양자점 및 UV-불활성화 파지)를 가하였다. 이 조사에 사용된 세포내이입 저해제는 니스타틴(50 ㎍/ml), 제니스테인(100 ㎍/ml), 클로르프로마진(5 ㎍/ml), 5-(N-에틸-N-이소프로필)아밀로라이드(100μM), 워트만닌 (10μM)이다.
마우스의 생체내 파지 귀소 조사를 위해, 109 pfu의 T7 파지를 마우스의 꼬리 정맥으로 주입하고, 10분 내지 1시간 후에 좌심실을 통해 DMEM으로 마우스를 관류시켰다. 목적하는 기관을 수집하고 1% NP40으로 균질화시킨 후에 적정에 의해 정량화하였다.
펩타이드 합성 및 양자점 표지화: 마이크로웨이브 보조 자동 펩타이드 신시사이저(Liberty, CEM Corporation)에서 Fmoc/t-Bu 화학법을 이용하여 펩타이드를 합성하였다. 순도 90% ~ 95%의 아세토니트릴-물 혼합물 중의 0.1% TFA를 사용하여 HPLC에 의해 펩타이드를 정제하고, Q-TOF 질량 분석에 의해 유효화하였다. 100배 몰 과량의 펩타이드로 배양시킴으로써 비오티닐화 펩타이드로 605 ITK 스트렙타비딘 양자점(Invitrogen, Calsbad, CA)을 기능화하고, 다이알리시스에 의해 프리 펩타이드를 제거하였다.
친화성 크로마토그래피: 동소이식 PC-1 종양을 400mM n-옥틸-베타-D-글루코피라노시드, 1mM MgSO4, 1mM MnCl2, 1mM CaCl2 및 1 정제/5ml의 EDTA-프리 프로테아제 억제제 칵테일(Sigma, St. Louis, MO)을 함유하는 PBS 속에 균질화시켰다. 4℃에서 회전 플랫폼 상에서 추출을 수행한 다음, 6시간 후에 원심분리(냉장 미량원심분리기에서 14,000rpm으로 20분간)에 의해 용해물을 정제하고, 제조자의 설명서(Pierce, Rockford, IL)에 따라 시스테인-태그 RPARPAR(SEQ ID NO:2) 펩타이드와 술포링크 커플링 젤의 커플링에 의해 제조되는 친화성 컬럼에 로딩하였다. 밤새 결합이 이루어지게 한 후에, 200mM n-옥틸-베타-D-글루코피라노시드를 함유하는 컬럼 세척 완충액, 그렇지 않으면 용해 완충액으로 컬럼을 세척한 다음, 동일한 완충액 내에서 2mM 프리 RPARPAR(SEQ ID NO:2) 펩타이드로 용출시켰다.
Novex 4-205 트리스-글리신 폴리아크릴아미드 젤(Invitrogen, Calsbad, CA)을 사용하여 세척 및 용출 프랙션 샘플을 분리한 후에, 실버 스냅 키트(Pierce, Rockford, IL)를 사용하여 은염색을 수행하고, 번햄 의료 리서치 프로테오믹스 팩실리티 연구소(Burnham Institute for Medical Research Proteomics Facility)에서 MALDI-TOF 질량 분석법을 수행하였다. 친화성 크로마토그래피 샘플을 면역블로팅(immunoblotting)하고 항체로 프로브한 후에, 결합에 대한 화학형광검출(chemiluminescent detection)을 수행하였다.
면역형광 염색: 콜라겐-I 코팅된 커버립(BD Biosciences, San Jose, CA) 상의 조직 배양 플레이트 내에서 5% CO2 하에 37℃에서 밤새도록 배양 세포(2 × 105 세포)를 성장시키고 나서, 108 pfu의 T7 파지로 배양시켰다. 이 세포를 4% 파라포름알데히드 또는 차가운(-20℃) 메탄올로 고정시킨 다음, 항체로 염색하였다. 핵은 DAPI 또는 Hoechst 342로 염색하였다. CsCl2 원심분리에 의한 추가적인 파지 정제 단계가 포함되는 것을 제외하고는 앞서 기술한 것과 동일한 방법으로 폴리클론 토끼 항-T7 항체가 집단적으로 생성되었다(Laakkonen, P. et al., 2002b). 사용된 다른 일차 항체는 랫 항-마우스 CD31 모노클론 항체(BD Biosciences), 토끼 항-NRP-1, 마우스 항-인간 Lamp-1, 마우스 항-인간 카베올린(Millipore, Temecula, CA), 마우스 항-NRP-1(Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA), 마우스 항-인간 EEA-1(BD Biosciences, San Jose, CA)이다. 마우스, 랫 및 토끼 면역글로불린에 대한 이차 항체인 Alexa 594 염소 항체 및 Alexa 488 당나귀 항-토끼 항체는 Invitrogen(Calsbad, CA)으로부터 입수되었다. 공초점 현미경(Fluoview 500, Olympus America Inc., Center Valley, PA)에 의해 세포 및 조직 절편을 검사하였다.
DNA 구조체 및 감염: pcDNA3.1(+) 중의 야생형 NRP-1 cDNA의 발현 구조체는 Dr. Michael Klagsburn가 현물 기부한 것이다. 부위-지정 돌연변이유발(site-directed mutagenesis)을 이용하여, TCAAAAGAAACC(SEQ ID NO:29; 아미노산 SKET를 암호화)를 GCAAAAGAAACC(SEQ ID NO:30; 아미노산 AKAA를 암호화)로 대체함으로써 NRP-1의 b1 도메인의 VEGF-165 결합 부위의 3중 돌연변이가 생기게 하였다.
제조자의 설명서(Invitrogen, Calsbad, CA)에 따라 리포펙타민을 사용하여 상기 구조체로 M21 흑색종 세포를 일시적으로 트랜스펙션(trasfection)하였다.
파지 및 양자점의 프로테아제 처리: 109 파지 입자 및 50㎕의 펩타이드-코팅된 양자점 파지를 50iu의 uPA, 25㎍의 결정형 트립신, 50iu의 트롬빈, 또는 25㎍의 콜라게나제 타입 I(모두 Sigma, St. Louis, MO)으로 처리하였다.
C. 실시예 3: 종양-선택적 혈관 투과성을 유도함으로써 종양을 표적화
암 치료법의 중요한 문제점은 항암제가 종양 조직을 적절하게 침투하지 못한다는 점이다. 여기에서, 이러한 한계점을 극복할 신개념의 암치료 방법이 도입된다. 본 발명은 다양한 크기의 동시 투여되는 화합물의 선택적인 혈관 유출 및 종양 침투를 증가시키는 종양-침투성 펩타이드, iRGD(CRGDK/RGPD/EC; SEQ ID NO:61)를 제공한다. 이 활성은 iRGD 내의 2가지 서열 모티프, 즉, 종양 혈관 내에서 (및 종종 종양 세포 상에서) 발현되는 인테그린 αv 에 대한 RGD 결합 모티프와 조직 침투 수용체인 뉴로필린-1과 결합하는 RXXR/K CendR 모티프에 의존한다. iRGD를 병용 투여하면 두 약물(독소루비신 리포솜 및 헤르셉틴)의 종양 억제 활성을 증가시킬 수 있다. iRGD는 암 진단 및 치료의 범용 부스터로서 사용될 수 있다.
현 항암제는 두 가지 중요한 문제점을 갖고 있다. 즉, 종양 조직내의 침투가 잘 이루어지지 않는다는 점과 정상 조직에 대한 독성이 높다는 점이다. 고형 종양의 경우, 항암제는 혈관으로부터 단지 3 ~ 5 세포 직경까지만 침투하므로, 종양의 일부 면적은 약물이 없는 상태거나 낮은 농도의 약물이 잔류한다(Hambley et al, Minchinton et al., 2006). 종양은 높은 간극압력(interstitial pressure)을 가지고 있는데, 아마도 그 이유는 혈관이 누수되는 경향이 있고 림프관이 종양 내에서 기능적이지 못하기 때문이며, 이것이 약물이 종양 조직 내로 침투하는 것을 방해한다(Jain, 1990; Heldin et al., 2004). 이러한 환경은 치료 효율성을 감소시키고 약물 내성의 진행을 촉진시킨다.
최근에, 종양 혈관에 특이적으로 결합하고 종양 조직 내로 침투하며 형광발색단, 약물 또는 나노입자 조영제와 같은 부착된 페이로드를 혈관외부 종양 조직 깊숙히 운반할 수 있는 종양-침투성 펩타이드, iRGD((CRGDK/RGPD/EC; SEQ ID NO:61; 시스테인 사이의 이황화물 결합에 의해 환형화됨)가 확인되었다(Sugahara, 2009). 페이로드는 종양-침투 펩타이드와 반드시 결합될 필요가 없다. 이 펩타이드는 특이적으로 종양 내에서 혈관 투과성을 증가시키며, 그럼으로써 동시 주입되는 조성물이 관외유출되어 종양 조직 내로 침투하는 것을 가능하게 한다(Sugahara, 2010). 이 과정은 표적화를 위해 약물을 변경시키지 않으면서 약물 부작용의 증가없이, 종양 내부에서 작용하는 약물 효능을 증진시킬 수 있다.
iRGD 펩타이드는 선택적으로 종양에 귀소하는데, 그 이유는 이 펩타이드가 종양 혈관 내에서 및 종종 종양 세포 상에서 발현되는 인테그린 αv와 결합하기 때문이다(Ruoslahti et al., 2003; Eliceiri et al., 2001; Sugahara et al., 2009). iRGD 펩타이드 및 그 모방체는 종양 진단 및 치료와 같은 다양한 의료 용도로 사용되고 있으며 임상 시험에서 평가되고 있다(Tucker et al., 2003). iRGD 펩타이드는 혈관신생 종양 내피세포 상의 αv 인테그린와 결합하고 그 다음, 단백질 분해에 의해 절단되어 C-말단 RGDK/R 서열(SEQ ID NO:31; Sugahara et al., 2009; Teesalu et al., 2009)을 노출시킨다는 점에서 현재 사용되는 RGD 펩타이드와 다르다. 절단된 펩타이드는 더 이상 인테그린과 결합하지 않으나 뉴로필린-1에 대한 친화성을 갖고 있으므로, 혈관외부 유출 및 조직 침투 활성을 매개한다(Sugahara et al., 2009; Teesalu et al., 2009). 이러한 특성은 iRGD이 매우 효과적이고 종양 선택적이며, 펩타이드를 혈류 내로 주입한 지 수분 이내에 세포 침투가 이루어지게 한다( Sugahara, 2009).
C-말단 R/KXXR/R (SEQ ID NO:23) 서열을 갖는 펩타이드 및 단백질은 뉴로필린-1과의 결합을 통해 혈관 투과성을 증가시킨다((Acevedo et al., 2008; Jia et al., 2006; Soker et al., 1998; Teesalu et al., 2009). 종양 내에서의 iRGD의 신속한 혈관외 유출 및 조직 침투는 iRGD의 CendR 서열에 의해 유도되는 종양 특이적 혈관 투과성 증가에 의해 유발될 수 있다. 혈관 투과성을 알아보기 위해 통상적으로 사용되는 알부민-결합 염료인 Evans Blue를 종양이 있는 마우스에 주입하였다(Miles et al., 1952; Murohara et al., 1998). 화학적으로 합성된 iRGD 펩타이드는 염료와 동시 주입되는 경우, 동소이식 MIA PaCa-2 인간 췌장 암종 이종이식편(도 9) 내에 및 이 종양에 의해 침입당한 이차 부위(도 9A, 화살표머리) 내에 염료의 특이적 축적을 유발시켰다. 이렇게 유도되는 투과성은 다른 종양 유형에서도 관찰되었는데, 이는 iRGD가 동소이식 BT474 인간 유방암 및 22Rv 1 인간 전립선 종양 이종이식편, 전이성 종양과 흡사한 인간 GFP-PC-3 파종성 전립선 종양, 새로운 췌관선암의 유전공학적 모델에 효율적으로 귀소한다는 것을 보여준다(Hezel et al., 2006; 도 9A 및 도 10A 및 10B). 조직 내의 염료의 정량화 결과는 투과성이 종양에 특이적이며 iRGD 투여량에 의존한다는 것을 입증해 준다. 종양에서의 축적 증가는 약 4배였다(도 9B).
iRGD-유도 혈관 투과성에 있어서 CendR 요소와의 관련성을 테스트하기 위해, CendR 모티프, 즉 RGD-4C(CDCRGDCFC; SEQ ID NO:32; Koivunen et al., 1995) 및 사이클로(-RGDfK-)(SEQ ID NO:40; Murphy et al., 1995)를 함유하지 않는 통상적으로 사용되는 2가지 RGD 펩타이드에 대해 투과성 효과를 검사하였는데, 비활성인 것으로 밝혀졌다(도 9C 및 도 10C). 또한, RGD를 함유하지만 CendR 모티프(CRGDDGPKC; SEQ ID NO:33)를 함유하지 않는 스크럼블 iRGD 변이체도 종양내로의 투과성을 향상시키지 못하였다(도 9C 및 도 10C). CendR 펩타이드에 대한 수용체인 뉴로필린-1을 기능적으로 차단하는 항체를 종양이 있는 마우스에 사전 주입하면, iRGD-유도 투과성 증가를 방해한다(도 9D). iRGD가 종양을 표적화 할 때, iRGD는 단백질분해에 의해 절단되어 CRGDK(SEQ ID NO:34)로 되는데, 이것이 뉴로필린-1-결합 CendR 펩타이드로서 작용을 한다(Sugahara et al., 2009). 화학적으로 합성된 CRGDK(SEQ ID NO:34) 펩타이드는 VEGF-165 및 원형 CendR 펩타이드인 RPARPAR(SEQ ID NO:2) 및 RPAR(SEQ ID NO:5; Teesalu et al., 2009; 도 11)과 유사한 투여량-의존 방식으로 세포 내의 국소적 혈관 투과성을 증가시켰다. 종합적으로, 이러한 결과는 종양 내에서 iRGD에 의해 증가되는 투과성은 CendR에 의존적이라는 것을 보여준다.
iRGD에 의해 매개되는 종양 특이적 조직 접근의 증가는 종양 유조직내로의 약물 및 영상제 전달을 향상시키는 신규한 방법을 제공한다(도 12에 도식화되어 있음). 다수의 화합물을 iRGD와 함께 주입하였다. CendR 모티프를 함유하지 않으며 그 자체로는 종양 조직을 단지 최소로 침투하는 1.3-kDa 펩타이드인 플루오레세인-표지된 CRGDC(FAM-CRGDC, SEQ ID NO:36)(Koivunen et al., 1993; Sugahara et al., 2009)는 iRGD와 함께 주입되면, 광범위한 혈관외 분포를 보여주었다(도 13A). 3-kDa 및 10-kDa 덱스트란, 초상자성 산화철 나노웜(길이 80nm, 두께 30nm; Park et al., 2009), 및 T7 파지(직경 약 65nm; Sokoloff et al., 2000)의 경우도 유사한 결과를 얻었다. 조직학 섹션에서 확산 면적의 정량화 결과는 iRGD의 존재하에 FAM-CRGDC(SEQ ID NO:36) 및 덱스트란이 iRGD 없는 경우보다 3 ~ 5배 이상 종양 내에 확산되었다(도 13B)는 것을 보여주었다. T7 파지는 파지 적정에 의해 입증되는 바와 같이, iRGD와 함께 주입했을 때, 대조용에 비해 3 ~ 5배 이상 종양 내에 축적되었다(도 13C). 이러한 결과는 iRGD 콤보 시스템이 10-kDa 펩타이드 내지 약 70nm 크기의 나노입자까지 광범위한 다른 크기 및 화학 특성을 가지는 조성물의 종양내 축적을 증가시킬 수 있다는 것을 보여준다. 동시 주입되는 CendR 펩타이드, 예컨대 iRGD에 의해 유도되는 분자의 이러한 조직-특이적 침투를 CendR-유도 내피세포 사이 & 조직 효과(CendIT 효과-발음상 'send it'과 유사함)라고 부른다.
iRGD 콤보 요법의 종양 치료에의 응용 가능성을 알아보기 위해서, 동소이식 22Rv 1 종양을 iRGD와 독소루비신(DOX)-리포솜(직경 약 120nm)의 배합물로 치료하였다. 리포솜은 iRGD와 함께 주입된 경우, iRGD이 없는 경우에 비해 휠씬 광범위하게 확산되고 종양 조직내에 보다 많이 축적되었다(도 14A 및 14B). 종양 치료 조사는 iRGD-콤보 요법(1 mg DOX/kg + iRGD)이 DOX-리포솜을 단독 투여할 때의 3배 이상 만큼 강력하다는 것을 보여주었다. 특정 RGD 펩타이드는 종양 성장을 억제하는 것으로 알려져 있다(Brooks et al., 1994; Tucker et al., 2003). 그러나, 콤보 요법에 사용되는 양의 iRGD 단독 대조용은 종양 성장에 영향을 주지 못하는데, 이는 콤보 요업이 약물 단독보다 효과적이며 그 이유는 iRGD가 종양 내로의 약물 접근을 향상시키기 때문이라는 것을 뒷받침해 준다. 3 mg DOX/kg의 리포솜을 17일 동안 매일 투여하면, 마우스 내의 약물의 누적 최대내약용량(maximum tolerated dose)에 도달한다(Parr et al., 1997). 상기 양의 iRGD를 함께 사용하면(3 mg DOX/kg + iRGD), 약물 효과가 더욱 증진되었다(도 15).
콤보 요법은 약물의 효능은 현저히 증가시키면서도 부작용은 증가시키지 않는다. DOX의 주요 부작용인 심독성(cardiotoxicity)은 분자 레벨에서의 심근세포 사멸에 의해 확인된다(Arola et al., 2000). TUNEL 염색법에 의해 검출한 결과, 3 mg DOX/kg 그룹에서는 다량의 심근세포 사멸이 관찰된 반면, 1 mg DOX/kg 그룹과 동일한 양의 콤보(1 mg DOX/kg + iRGD) 그룹에서는 세포 사멸이 최소로 존재하였다(도 14D 및 도 16). 이와 대조적으로, 콤보(1 mg DOX/kg + iRGD) 그룹의 종양은 3 mg DOX/kg 그룹과 비슷한 수준의 강력한 TUNEL 염색을 보여주었으며, 이는 치료 데이터를 뒷바침해 준다(도 14D). 또한, 3 mg DOX/kg 그룹은 체중이 급격히 줄어든 반면, 콤보(1 mg DOX/kg + iRGD) 그룹은 1 mg DOX/kg 그룹과 비슷한 수준의 적은 체중 감소를 보여주었다(도 17). 이러한 결과는 콤보 요법이 부작용을 증가시키지 않으면서 보다 다량의 약물만으로 치료할 때와 같은 종양 억제 효과를 발휘한다는 것을 시사한다.
iRGD 콤보 요법은 BT474 세포로 생성된 또 다른 동소이식 종양 모델에서 테스트하였다. BT474 세포는 148-kDa 항-HER2 항체, 헤르셉틴의 표적인 HER2를 고도로 발현시킨다(Spiridon et al., 2002). 헤르셉틴은 iRGD와 함께 주입되는 경우, 대조용 주입보다 종양 조직 내에 훨씬 더 효과적으로 확산된다(도 18A). ELISA 정량화 결과는 iRGD가 HER2-발현 종양 세포에 대한 친화성으로 인해 종양 내에서 내의 헤르셉틴의 축적을 40배까지 현저하게 증가시켰다는 것을 보여준다(도 18B). 따라서, 동소이식 BT474 종양 치료에 있어서 iRGD과 헤르셉틴을 병용해서 투여함으로써 약물의 효능을 상당히 증가시켰다(도 18C). 콤보 요법에 사용되는 양의 iRGD 펩타이드 단독 사용은 종양 성장에 영향을 주지 못한다. 콤보 요법은 동일한 양 또는 3배 많은 양의 헤르셉틴 단독 사용에 의한 치료보다 훨씬 더 효과적이었다. iRGD와 3배 많은 양의 헤르셉틴을 병행해서 사용하면 약물 효능을 훨씬 더 개선시킨다. 이러한 병용 투여는 모든 종양을 박멸시키는 결과를 가져왔다(도 18C). 종양이 사라진 후 2주의 관찰 기간동안 어떠한 치료도 없이 종양이 재발되지 않았다.
신규한 종양 표적화 방법의 기초가 되는 CendR 효과는 소위 투과성 및 보유 향상(EPR) 효과와는 다르다. EPR는 종양 혈관의 누수 경향으로 인해서 물질들이 혈관외로 유출되어 종양 혈관 주변의 조직 내로 가게 하는 것이다(Maeda et al., 2003). CendIT 효과는 EPR 효과보다 훨씬 효과적이다(예를 들어, 도 13 참조). CendIT는 능동적인 과정으로, 수동적인 혈관 누수 현상이 아니다. 그 이유는 (i) CendIT는 수용체(NRP-1)-매개적이고 EPR은 수용체-매개적이지 않으며, (ii) CendIT는 수분 이내에 혈관외부 유출을 유발시키는 반면, EPR은 시작이 느리고 점차적으로 6 ~ 8시간 내에 정점에 도달되며(Maeda et al., 2003), (iii) CendIT는 소분자에 효과적인 반면, EPR은 45-kDa보다 큰 분자의 종양내 보유를 연장시키며(Maeda et al., 2003), (iv) iRGD를 발현시키는 파지는 순환없이도 종양 조직으로 침투하며, 이 과정은 뉴로필린-1 및 에너지에 의존적이다(도 19). 그러나, 이러한 과정에 관여하는 VEGF-165가 C-말단에 활성 CendR 모티프를 가지고 있기 때문에 EPR(및 일반적으로 혈관 투과성)에 CendR 성분이 존재할 수 있다(Maeda et al., 2003; Jia et al., 2006; Soker et al., 1998; Teesalu et al., 2009).
CendIT를 기초로 하는 iRGD 콤보 시스템은 신개념의 종양 치료법이다. 즉, 펩타이드와 프리 약물을 병용 투여함으로써 약물의 종양내 접근을 향상시키는 방법이다. 종래의 약물 전달 시스템은 종종 표적화 요소들(예컨대, 펩타이드 및 항체)을 약물에 부착시키기 위한 광범위한 화학을 필요로 한다. 본 발명의 시스템은 약물의 활성이 어떠한 변형도 없이 향상될 수 있는 그러한 시스템의 장점을 제공한다(도 12). 또한, 종래의 시스템은 표적에서의 항원-수용체 도킹(시냅스 표적화)에 의존하며, 따라서 종양 혈관계 상에서 이용할 수 있는 수용체의 양이 한정되기 때문에 포화상태가 된다. 이와 대조적으로, 콤보 시스템은 포화상태가 되지 않는다. 일단 침투 신호(CendIT 효과)가 개시되면, 본 조사에서 약물의 양을 달리하면서 보여주는 바와 같이, 어떠한 정해진 농도의 분자라도 혈관외부 유출되어 종양 조직 내에 잔류한다.
iRGD 콤보 시스템은 매우 종양 선택적이다. 종양 특이성은 3단계의 iRGD의 종양 표적화 메카니즘으로부터 유래한다(Sugahara et al., 2009 및 2010; 도 12). 즉, iRGD 펩타이드는 (i) RGD로 종양 혈관계를 표적화하고, (ii) 그런 다음, 절단되어 CendR가 되며(CRGDK/R 단편, SEQ ID NO:37), (iii) 뉴로필린-1과 결합함으로써 CendIT 효과를 개시한다. 만일 절단이 이루어지지 않으면, iRGD가 CendR 특성을 디스플레이할 수 없거나 조직 침투 수용체인 뉴로필린-1에 대한 적절한 친화성을 가질 수 없게 되므로, 정상 조직 내에서 최소 배경을 제공한다(Sugahara et al., 2009). VEGF에 대해 동일한 시도를 행하였는데, 분자 및 나노입자가 종양 조직 내로 깊숙히 침투할 수 있도록 혈관 투과성을 향상시킨다(Monsky et al., 1999). VEGF는 종양에 국소적으로 주입될 때, 종양 내에서 알부민 및 나노입자의 혈관외부 유출을 4배까지 성공적으로 향상시켰다. 그러나, 이와 동일한 효과는 VEGF를 국소 주입했을 때 피부에서(Monsky et al., 1999; Murahara et al., 1998; Teesalu et al., 2009) 및 비표적 CendR 펩타이드를 전체 주입했을 때 폐에서(Teesalu et al., 2009) 관찰되었는데, 이는 성공적인 종양-선택적 CendR 효과를 위해 표적화 요소가 필요하다는 것을 입증한다.
다른 곳 아닌 종양 내에서의 분자의 축적의 4배 증가는 거의 최적화 작업 없이 달성되었다. 증가 배수는 예를 들어, 나노입자 상의 다량체 iRGD, 구조적으로 안정화된 iRGD, 다른 종양-귀소 CendR 펩타이드(Hoffman et al., 2003; Joyce et al., 2003; Laakkonen et al., 2002; Porkka et al., 2002), 또는 펩타이드 배합물을 사용함으로써, 아니면 투여량 및 투여 계획을 최적화함으로써 향상될 수 있다. 놀랍게도, 콤보 요법에 의한 치료 후 수집된 종양(도 14B)은 동일한 양 또는 그 이상 양의 약물 단독 사용에 의한 치료에 비해 종양 내의 약물 분포가 현저하게 광범위하다는 것을 보여주었다(도 20). 헤르셉틴 콤보 요법 치료 후 수집된 종양(도 18C)은 동일한 양 또는 그 이상 양의 약물 단독 사용에 의한 치료에 비해 종양 내의 약물 분포가 광범위하다는 것을 보여주었다. 따라서, 콤보 요법 수회 주입 및 장시간 순환시간은 종양 내의 화합물 축적을 증가시키는데 도움을 줄 수 있다. 또한, 헤르셉틴에서 입증된 바와 같이, 종양 조직에 친화성을 가진 항암제를 사용하면, 이 시스템을 향상시키는데 도움을 줄 수 있다.
종양 내의 분자 축적은 보다 높은 종양 억제 활성을 달성할 수 있게 한다. 그 중요 내용은 종양 침투 면에서 서로 다른 약물을 사용하는 2가지 종양 모델에서 설명된다(Yuan et al., 1994; Thurber et al., 2008). 본 발명자가 테스트한 8가지 서로 다른 화합물(1-kDa 분자에서부터 직경 약 120nm의 나노입자) 중 어느 화합물의 종양 전달도 향상될 수 있으며, 어느 약물의 활성도 이 시스템으로 향상될 수 있다. 이와는 달리, 투여량을 감소시킴으로써, 부작용을 줄이면서 종래의 치료와 같은 수준의 종양 활성을 달성할 수 있다. 이렇게 하여, 독성때문에 이미 거절된 약물도 재활용할 수 있다. 암 치료(및 진단)에 있어서 실질적인 향상이 이루어질 수 있다.
1. 방법
세포 및 종양 모델: MIA PaCa-2 인간 췌관 선암 및 22Rv 1, GFP-PC-3 및 PPC1 인간 전립선암 세포계를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신이 보강된 둘베코스 모디파이드 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium; DMEM) 내에서 배양하였다. BT474 인간 유방암 세포계는 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신이 보강된 SFM4MAB 배지 내에서 배양하였다. BALB/c 무흉선증 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Inc., Indianapolis, IN)에 106 인간 암 세포를 동소이식적으로 주입시킴으로써 이종이식편을 생성시켰다. BT474 이종이식편에 있어서, 마트리겔 내에 현탁된 5 ×106 종양 세포(BD Biosciences, San Jose, CA)를 동소이식적으로 주입하기 하루 전에, 마우스의 등에 17β-에스트라디올 펠릿(Innovative Research of America, Sarasota, FL)을 피하 주입하였다. 마우스의 좌심실에 2 ×106 GFP-PC-3 세포를 주입함으로써 파종성 전립선 종양이 형성되게 하였다. Illumatool Bright System LT-9900(Lightools Reaserch, Encinitas, CA)를 이용하여 UV광 하에 파종성 종양 결절을 검출하였다. 새로운 췌관 선암종으로 형질전환된 마우스는 캘리포니아 대학의 Dr. Douglas Hanahan(San Fransico, CA)가 현물 제공한 것이다. 모든 동물 실험은 캘리포니아 대학(Santa Babara)의 동물 실험 위원회가 승인한 절차에 따라 수행되었다.
화합물 제조: 합성 펩타이드(Teesalu et al., 2009), G7(SEQ ID NO:38) 또는 CG7C(SEQ ID NO:39) 펩타이드를 발현시키는 비표적화 T7 파지, iRGD 파지(Teesalu et al., 2009), 및 플루오레세인-표지 비표적화 산화철 나노웜(Park et al., 2009)을 기재한 바대로 제조하였다. DOX-리포솜은 몰비가 2:1.5:1.25:0.25인 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 콜레스테롤, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 및 1,2-디스테아릴-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000]으로 구성되어 있다. 지질(Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL)은 클로로포름에 용해시킨 다음, 모이스춰 프리 질소기체 박막으로 용매를 증발시켰다. 건조된 지질 박막을 60℃에서 1시간 동안 300mM 인산 암모늄(pH 7.4)으로 수화시켰다. 그 다음, 이 유리병을 일시적으로 교반(vortexing)시키고, 경우에 따라 초음파세척기 내에서 초음파 처리하였다. 이렇게 하여 생성된 다층막 소포체(multilamellar vesicle)를 작은 단층막 소포체의 반투명 용액이 형성될 때까지 2 ~ 3분 동안 Ti 프로브 초음파분쇄기를 이용하여 더 초음파 처리하였다. 이렇게 형성된 작은 단층막 소포체를 Avanti 미니 압출성형기(Avanti Polar Lipids)를 이용하여 직경 200nm 및 100nm의 포어를 가진 폴리카보네이트 맴브레인 필터를 통해 11회에 걸쳐 순차적으로 압출시켰다. 그 다음, NAP-10 또는 NAP-25 컬럼(GE Healthcare, Milwaukee, WI)을 이용한 겔 여과에 의해 완충액을 HEPES-완충염 용액(20mM HEPES, 150mM NaCl, pH 7.4)으로 교환하였다. 앞서 기술한 바와 같이(Murphy et al., 2008), 트랜스맴브레인 인산염 구배를 통해 이 리포솜 내에 DOX(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 캡슐화하였다. 이 DOX-리포솜은 Malvern Zetasizer Nano(Malvern, UK)를 이용한 동적 레이저광 산란법(굴절률 1.59; 점성도 0.89)에 의해 측정시, 직경이 119.8 ± 7.6이었다.
생체내 전체적 투과성 분석( iRGD - 콤보 시스템): 종양 마우스에 1㎍의 Evans Blue, 200nmol의 플루오레세인-표지된 CRGDC FAM-CRGDC(SEQ ID NO:36), 200㎍의 고정가능한 덱스트란(Molecular Probes, Eugene, OR), 109 플라크 형성 단위(pfu)의 G7 발현시키는 T7 파지, 5mg 철/kg의 플루오레세인-표지된 비표적화 산화철 나노웜 및 1 mg DOX/kg의 DOX-리포솜, 아니면 3 mg DOX/kg의 헤르셉틴(Genentech, South San Francisco, CA)을 함유하는 PBS 100㎕를 정맥내 주입하였다. 5분 후에, 다양한 농도로 iRGD를 함유하는 또는 함유하지 않는, 아니면 대조용 펩타이드를 함유하는 PBS 100㎕를 마우스에 정맥내 주입하였다. 제시된 순환 시간 후에, 1% BSA를 함유하는 PBS 20ml로 마우스를 관류시키고, 조직을 수집하였다. Evans Blue 정량화에 있어서, 37℃에서 24시간 동안 N,N-디메틸포름아미드를 사용하여 조직으로부터 염료를 추출한 다음, 분광광도계를 이용하여 600nm에서 흡광도를 측정함으로써 염료 함량을 정량화하였다. FAM-CRGDC(SEQ ID NO:36)를 갖고 있는 마우스의 조직을 Illumatool Bright System LT-9900(Lightools Reaserch, Encinitas, CA)을 이용하여 UV광 하에 이미지화한 다음, 면역형광분석 및 면역조직화학법을 수행하였다. 덱스트란, 나노웜, DOX-리포솜, 또는 헤르셉틴을 함유하는 조직에 대해 면역형광분석과 면역조직화학법 중의 하나 또는 둘 다를 수행하였다. 면역조직화학법으로 염색된 절편의 양성 면적의 정량화 및 조직 내의 항체 총량은 본 명세서의 다른 부분에 기술되어 있다.
생체내 피부 투과성 분석(수정된 Miles 분석): 마취된 누드 마우스에 0.5% Evans Blue(MP Biomedicals, Irvine, CA), 13㎍의 콴틸룸(Quantilum) 재조합 루시페라제(Promega, Madison, Wi) 및 109의 G7(SEQ ID NO:38)-발현 파지 입자로 구성된 3-추적자 혼합물을 함유하는 150㎕의 PBS를 정맥내 주입하였다. 10분 후에, 마우스에 다양한 농도의 펩타이드 및 15 ng의 VEGF-165(Calbiochem, San Diego, CA)를 함유하는 30㎕의 PBS를 배쪽에서 2열로 피부내 주입하였다. 30분 후, 마우스의 심장을 통해 관류시키고, Evans Blue로 검출된 주입 부위를 포함하는 피부를 떼어내서 철저히 세척하였다. 주입 부위로부터 피부 샘플(직경 4mm)를 펀처를 이용하여 수집하고, 이것을 1% NP40을 함유하는 용원 배지(lysogeny broth) 내에서 균질화한 후에 루시페라제 활성 및 파지 역가를 분석하였다.
면역형광분석: 냉동 절편의 조직 침투 및 염색을 기재한 바와 같이 수행하였다(Sugahara et al., 2009). 일차 항체는 랫 항-마우스 CD31 모노클론 항체(BD Biosciences), 토끼 항-T7 파지 폴리클론 항체(Teesalu et al., 2009)였다. 이차 항체인 Alexa Fluor 594 염소 항-랫, 647 염소 항-랫, 488 당나귀 항-토끼 항체는 Molecular Probes로부터 입수되었다. 일부 실험에서, 조직 절편은 TUNEL 분석 키트(In Situ Cell Death Detection Kit, TMR red; Roche Applied Science, Indianapolis, IN)를 이용하여 염색되었다. 공초점 현미경(Olympus America, Center Valley, PA)에 의해 조직 절편을 검사하였다.
면역조직화학법: 냉동 절편을 면역조직화학법으로 염색한 후에, 스캔스코프(Scanscope) CM-1 스캐너를 사용하여 스캐닝하고, 이미지스코프(ImageScope) 소프트웨어(Apero Technologies, Vista, CA; Sugahara et al., 2009)로 양성 염색 면적을 정량화하였다. 사용된 일차 항체는 비오티닐화 토끼 항-FITC/오레곤 그린 폴리클론(Molecular Probes), 마우스 항-덱스트란 모노클론(Stemcell Technologies, Vancouver, BC, Canada), 및 비오티닐화 랫 항-마우스 CD31 모노클론 항체(BD Bioscience)였다. 이차 항체는 비오티닐화 염소 항-토끼(Pierce Biotechnology, Rockford, IL), 염소 항-마우스(Vector Laboratories, Burlingame, CA), 및 토끼 항-인간(Pierce Biotechnology) 폴리클론 항체였다. 일부 실험에서, 조직 절편은 TUNEL 분석 키트(In Situ Cell Death Detection Kit, TMR red; Roche Applied Science, Indianapolis, IN)를 이용하여 염색되었다.
종양 및 정상 조직 내의 DOX 정량화: 정량화는 다른 곳에 기재된 바와 같이(Mayer et al., 1997) 수행되었다. 간단하게 말하자면, 22Rv1 동소이식 종양을 갖고 있는 마우스에 iRGD(4 μmol/kg)을 함유하는 또는 함유하지 않는 DOX-리포솜(5 mg DOX/kg), 또는 리포솜만을 정맥내 주입하였다. 마우스의 심장을 통해 관류시키고, 목적하는 기관 및 종양을 수집하였다. 1% 도데실 황산 나트륨 및 1mM H2SO4의 혼합물을 함유하는 물 속에서 조직을 기계적으로 균질화시켰다. 그 다음, 2ml의 클로로포름/이소프로필 알코올(1:1, v/v)을 가함으로서 DOX를 추출한 후에, 교반 및 동결/해동 사이클을 수행하였다. 이렇게 하여 생성된 샘플을 15분 동안 14,000xg로 원심분리시킨 후에, 분광광도계를 이용하여 유기상(최저의 상)의 OD490nm에서의 DOX를 측정하였다.
22 Rv1 이종이식편을 DOX -리포솜으로 처리: 22주된 동소이식 22Rv1 이종이식편(전형적으로, 종양 부피 약 250mm3)을 갖고 있는 누드 마우스에 2μmol/kg iRGD, 사이클로(-RGDfK-, SEQ ID NO:40) 또는 PBS를 매일 정맥내 주입하면서, DOX-리포솜(1 또는 3 mg DOX/kg) 또는 PBS를 매일 정맥내 주입하였다. 치료가 진행되는 동안 4일마다 마우스의 체중을 재었다. 치료 17일 후에, 심장을 통해서 마우스를 관류시킨 후에, 조직을 수집하였다. 종양의 무게를 재고 심장 샘플을 본 명세서의 다른 부분에서 기재한 바와 같이 조직학적으로 처리하였다.
헤르셉틴 정량화에 사용되는 경쟁적 ELISA: ELISA는 헤르셉틴과 비오티닐화 인간 IgG 사이의 경쟁적 결합 원리를 기초로 한다. 측정이 수행되는 시간에 따라 표준 곡선을 나타내었다. 표준 곡선에 있어서, 5 ㎍/ml의 토끼 항-인간 IgG(SouthernBiotech)로 코팅된 미세적정 웰을 다양한 농도의 헤르셉틴(0.001 내지10 ㎍/ml의 범위)과 최종 농도 1 ㎍/ml의 비오티닐화 인간 IgG(Pockland Immunochemicals, Gilbertsville, PA)의 혼합물로 배양하였다. 실온에서 2시간 배양 후에, 상기 웰을 스트렙타비딘-콘쥬게이트 호스레디쉬 페록시다제가 첨가된 0.01% Tween 20을 함유하는 PBS로 세척하고, 실온에서 30분간 더 배양하였다. 기질로서 2,2-아지노-비스(3-에틸벤즈티아졸린-6-술폰산)을 사용하여 미세적정 웰 상에 포집된 비오티닐화 인간 IgG의 양을 정량화하고, 405nm에서의 흡광도를 측정하였다. 헤르셉틴에 대한 흡광도의 표준 곡선을 그리고, 이것을 이용하여 조직 추출물 중의 헤르셉틴 농도를 산출하였다. 동일한 경쟁적 ELISA 시스템에서 표준 헤르셉틴 샘플을 조직 추출물로 치환함으로써, BT474 이종이식편 및 조직으로 유입된 헤르셉틴의 양을 측정하였다. 조직 추출물은 다음과 같이 제조되었다. 헤르셉틴이 주입된 BT474 종양 마우스의 조직을 0.01% Tween 20 및 프로테아제 억제제(Complete Mini EDTA-프리; Poche Applied Science)를 함유하는 0.1M 글리신(pH2) 1ml 속에서 균질화시킨 다음, 원심분리하였다(4℃, 10분, 14,000rpm). 600 마이크로리터의 상등액을 수집하고, 여기에 150㎕의 1M 트리스(pH8) 및 50㎕의 5M NaCl을 가하였다.
BT474 이종이식편을 헤르셉틴으로 처리: 동소이식 BT474 이종이식편(종양 부피 약 100mm3)을 갖고 있는 누드 마우스에 종양 세포 주입(그래프에서는 0일)후 21일에 첫번째 주입에서는 3 mg/kg, 그 후에는 1.5 mg/kg의 헤르셉틴을 4일마다 정맥내 주입하였다. 헤르셉틴 치료에서, 헤르셉틴 주입하는 날에는 4 μmol/kg iRGD 또는 PBS, 다른 날에는 2μmol/kg iRGD 또는 PBS를 매일 주입함으로써 병행 치료가 이루어졌다. 일부 그룹에서는, iRGD 콤보 요법보다 3배 많은 양의 헤르셉틴을 사용하였다. 치료 24일 후에, 심장을 통해서 마우스를 관류시킨 후에, 조직을 수집하였다. 종양 부피는 다음과 같은 식을 이용하여 산출되었다. 부피(mm3) = (d2 × D)/2 (이 식에서, d는 가장 작은 종양의 직경이고 D는 가장 큰 종양의 직경임)(Karmali et al., 2009).
생체외부 종양 침투 분석(종양 디핑 분석): PPC1 인간 전립선 피하 종양(직경 약 1cm)을 절제한 후에, iRGD 또는 G7(SEQ ID NO:38) 펩타이드를 발현시키는 109 pfu/ml의 T7 파지 및 다양한 억제제를 함유하는 DMEM 내에서 유지시켰다. 처음에는 4℃에서 20분간 억제제로 종양을 배양하였다. 용액에 상기 파지를 가하고 37℃ 또는 4℃에서 90분간 종양을 더 배양하였다. 배양 후, 1% BSA를 함유하는 차가운 DMEM로 세척하고, 고정시킨 다음, 절편화하고 면역형광법에 의해 염색시킨 후에, 공초점 현미경 검사를 행하였다.
통계학적 분석: 데이터는 투-테일드 Student's t-test 또는 원-웨이 분산분석(ANOVA)에 의해 분석되었으며, 그 후 적합한 사후 분석(post hoc test)이 수행되었다. 그 결과는 표 5에 요약되어 있다.
본 명세서에는 다양한 문헌이 언급되어 있다. 이러한 문헌은 그 전체 내용이 본 명세서에서 참고문헌으로 포함되어 있으며, 이는 본 발명과 관련된 기술 내용을 보다 상세하게 설명하기 위한 것이다.
참고문헌(References )
Abi-Habib RJ, Liu S, Bugge TH, Leppla SH, Frankel AE.(2004) A urokinase-activated recombinant diphtheria toxin targeting the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor is selectively cytotoxic to human to acute myeloid leukemia blasts. Blood. 104, 2143-8.
Acevedo,LM., Barillas S., Weis, SM., Gothert,JR. and Cheresh., DA.Semaphorin 3A suppresses VEGF-mediated angiogenesis yet acts as a vascular permeability factor. Blood 111: 2674-2680, 2008.
Akerman,M.E., Chan, W.C.W., Laakkonen,P.,Bhatia,S.N., and Ruoslahti,E.(2002) Nanocrystal targeting in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 12617-12621.
Allen,J.W., Johnson,R.S., and Bhatia,S.N.(2005). Hypoxic inhibition of 3-methylcholanthrene-induced CYP1A1 expression is independent of HIF-1 alpha.
Toxicol Lett 155, 151-159.
Altin JG, Pagler EB.(1995) A one-step procedure for biotinylation and chemical cross-linking of lymphocyte surface and intracellular membrane-associated molecules. Anal Biochem. 224, 382-9.
Andreasen,P.A., Egelund, R., and Petersen, H. H., The plasminogen activation system in tumor growth, invation, and metastasis. Cell. Mol. Life Sci. 57, 25-40 (2000).
Arap, W., Pasqualini, R., and Ruoslahti, E. (1998) Cancer treatment by targeted drug delivery to tumor vasculature in a mouse model. Science 279, 377-380.
Arap, W., W. Haedicke, M.Bernasconi, R. Kain, D. Rajotte, S. Krajewski, H.M. Ellerby, D.E. Bredesen, R. Pasqualini, and E. Ruoslahti, (2002) Targeting the prostate for destruction through a vascular address. Proc. Natl Acad. Sci. USA 99, 1527-1531.
Arola, O.J., Saraste, A., Pulkki, K., Kallajoki, M., Parvinen, M., and Voipio-Pulkki, L. M. (2000). Acute doxorubicin cardiotoxicity involves cardiomyocyte apoptosis. Cancer Res 60, 1789-1792.
Assa-Munt, N., Jia X., Laakkonen, P., and Ruoslahti, E. (2001) Solution structures and integrin binding activities of an RGD peptide with isomers. Biochemistry 40, 2373-2378.
Backhaus, R., Zehe,C., Wegehingel, S., Kehlebach, A., Schwappach. B., and Nickel, W. (2004) Unconventional protein secretion: membrane translocation of FGF-2 does not require protein unfolding. J.Cell Sci. 117, 1727-1736.
Bagri, A., Tessier-Lavigne, M., Watts, R.J. Neuropilins in tumor biology. Clin Cancer Res. 15:1860-4, 2009.
Barinaga, M., Peptide-guided cancer drugs show promise in mice. Science. 279:323-324 (1998).
Barrett, Alan J., Rawlings, Neil D., and Woessner, J.F., Handbook of proteolytic enzymes. (Academic Press, San Diego, 1998).
Bartlett, DW., Su, H., Hildebrandt, IJ., Weber, W.A., Davis, ME. (2007). Impact of tumor-specific targeting on the biodistribution and efficacy of siRNA nanoparticles measured by multimodality in vivo imaging. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 104, 15549-15554.
Biacchesi, S. et al., Modification of the trypsin-dependent cleavage activation site of the human metapneumovirus fusion protein to be trypsin independent does not increase replication or spread in rodentsor nonhuman primates. J. Virol. 80, 5798-5806 (2006).
Blasi F, Carmeliet P. (2002) uPAR: a versatile signalling orchestrator. Nat Rev Mol Cell Biol. 3, 932-43.
Brewis N.D., Phelan, A., Normand, N., Choolun, E., and O'Hare, P. (2003) Particle assembly incorporating a VP22-BH3 fusion protein, facilitating intracellular delivery, regulated release, and apoptosis. Mol. Ther. 7, 262-270.
Brooks, P. C., Montgomery, A. M., Rosenfeld, M., Resifeld, R. A., Hu, T., Klier, G., and Cheresh, D.A. (1994). Integrin alpha v beta 3 antagonists promote tumor regression by inducing apoptosis of angiogenic blood vessels. Cell 79, 1157-1164.
Brown, D. and Ruoslahti, E. Metadherin, a cell-surface protein in breast tumors that mediates lung metastasis. Cancer Cell 5: 365-374 (2004).
Chambers, T.J., Hahn, C.S., Galler, R., and Rice, C.M., Flavivirus genome organization, expression, and replication. Annu. Rev. Microbiol. 44, 649-688 (1990).
Chatterjee. J., Gilon, C., Hoffman, A. and Kessler, H. N-Methylation of Peptides: A New Perspective in Medicinal Chemistry. Accounts Chem. Res. 41:1331-1342, 2008.
Choi Y, McCarthy JR, Weissleder R, Tung CH.(2006) Conjugation of a photosensitizer to an oligoarginine-based cell-penetrating peptide increases the efficacy of photodynamic therapy. ChemMedChem. 1, 458-463.
Christian, S., Pilch, J., Porkka, K., Laakkonen, P., and Ruoslahti, E. (2003) Nucleolin expressed at the cell surface is a marker of endothelial cells in tumor blood vessels. J Cell Biol. 163, 871-878.
Curnis, F., Gasparri, A., Longhi, R. & Corti, A. Coupling tumor necrosis factor-a with av integrin ligands improves its antineoplastic activity. Cancer REs.64, 565-571 (2004).
Debela M, Magdolen V, Schechter N, Valachova M, Lottspeich F, Craik CS, Choe Y, Bode W, Goettig P. (2006) Specificity profiling of seven human tissue kallikreins reveals individual subsite preferences J Biol Chem, 281, 25678-88.
Derfus, A., Chen A., Dal-Hee M., Ruoslahti, E., Bhatia, S.,(2007) Targeted Quantum Dot Conjugates for siRNA Delivery Bioconjug Chem. 18, 1391-6.
Derossi D, Chassaing G, Prochiantz A. (1998) Trojan peptides: the penetratin system for intracellular delivery. Trends Cell Biol.8, 84-7.
Deshayes S. Morris MC. Divita G. Heitz F. (2005) Interactions of primary amphipathic cell penetrating peptides with model membrances: consequences on the mechnisms of intracellular delivery of therapeutics. Current Pharmaceutical Design. 11, 3629-38.
Devine, D.V. and Bradley, A.J.(1998) The complement system in liposome clearance: can complements deposition be inhibited? Adv Drug Delivery Rev 32, 19-39.
Dharap SS, Minko T.(2003) Targeted proapoptotic LHRH-BH3 peptide. Pharm Res. 20, 889-96.
Duchardt F. Fotin-Mleczek M. Schwarz H. FischerR. Brock R.(2007) A comprehensive model for the cellular uptake of cationic cell-penetrating peptides. Traffic. 8, 848-66.
Dykxhoorn, D.M., Palliser, D., and Lieberman,J.(2006) The silent treatment: siRNAs as small molecule drugs. Gene Ther. 13, 541-552.
Elango,N., Varsanyi, T.M., Kovamees,J., and Norrby, E., The mumps virus fusion protein mRNA sequence and homology among the paramyxoviridae proteins. J. Gen. Virol. 70, 801-807 (1989).
Eliceiri, B. P., and Cheresh, D.A.(2001). Adhesion events in angiogenesis. Curr Opin Cell Biol 13, 563-568.
Elliott, G. and O'Hare, P.(1997) Intercellular trafficking and protein delivery by a herpesvirus structural protein. Cell 88, 223-233.
Esmon, C.T., Cell mediated events that control blood coagulation and vascular injury. Annu. Rev. Cell. Biol. 9, 1-26 (1993).
Fenart, L. and Cecchelli R.(2003) Protein transport in cerebral endothelium. In vitro transcytosis of transferrin. Meth. Mol. Med. 89, 277-290.
Fogal, V., Zhang, L., and Ruoslahti, E. Mitochondrial/ Cell surface protein p32/gC1qR as a molecular target in tumor cells and tumor stroma. Cancer Res. 68: 7210-7218, (2008).
Frankel, A. D. and Pabo, C.O., Cellular uptake of the tat protein from human immunodeficiency virus. Cell 55, 1189-1193 (1998).
Gammon, S. T. el al., Quantitative Analysis of Permeation Peptide Complexes Labeled with Technetiu-99m: Chiral and Sequence-Specific Effects on Net Cell Uptake Bioconjugate Chem. 14, 368-376 (2003).
Geier, M.R., Trigg, M.E., and Merril, C.R.(1973) Fate of bacteriophage lambda in non-immune germ-free mice. Nature 246, 221-223.
Geretti, E., Shimizu, A., and Klagsbrun, M., Neuropilin structure governs VEGF and semaphorin binding and regulates angiogenesis. Angiogenesis 11, 31-39 (2008).
Ghebrehiwet, B., Jesty,J., and Peerschke, E.I.(2002). gC1q-R/p33: structure-function predictions from the crystal structure. Immunobiology 205, 421-432.
Gonzalez-Reyes, L. et al., Cleavage of the human respiratory syncytial virus fusion protein at two distinct sites is required for activation of membrane fusion. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 9859-9864 (2001).
Gordon, V. M. et al., Proteolytic activation of bacterial toxins by eukaryotic cells is performed by furin and by additional cellular proteases. Infect. Immun. 63, 82-87 (1995).
Green, M. and Loewenstein, P. M., Autonomous functional domains of chemically synthesized human immunodeficiency virus tat trans-activator protein. Cell55, 1179-1188 (1988).
Gump JM. And Dowdy SF. TAT transduction: the molecular mechanism and therapeutic prospects. Trends Molec. Med. 13:443-448,(2007).
Hambley, T.W. and Hait, W.N. Is Anticancer Drug Development Heading in the Right Direction? Cancer Res. 69: 1259-1262,(2009).
Hamzah J., Nelson D., Moldenhauer G., Arnold B., Hammerling G. and Ganss R. Vascular Targeting of Anti-CD40/IL2 into Autochthonous Tumors Enhances Immunotherapy, J. Clin. Invest. 118: 1691-1699,(2008).
Hansen M, Wind T, Blouse GE, Christensen A, Petersen HH, Kjelgaard S, Mathiasen L, Holtet TL, Andreasen PA.(2005) A urokinase-type plasminogen activator-inhibiting cyclic peptide with an unusual P2 residue and an extended protease binding surface demonstrates new modalities for enzyme inhibition. J Biol Chem. 280, 38424-37.
Heldin, C. H., Rubin, K., Pietras, K., and Ostman, A.(2004). High interstitial fluid pressure - an obstacle in cancer therapy. Nat Rev Cancer 4, 806-813.
Hezel, A. F., Kimmelman, A. C.,Stanger, B. Z., Bardeesy, N., and Depinho, R.A.(2006). Genetics and biology of pancreatic ductal adenocarcinoma. Genes Dev 20, 1218-1249.
Hoffman, J.A., Giraudo E.,Singh, M., Inoue, M., Porkka, K., Hanahan'D., and Ruoslahti'E.(2003) Progressive vascular changes in a transgenic mouse model of squamous cell carcinoma. Cancer Cell 4, 383-391.
Hoffman, J.A.,Laakkonen, P., Porkka, K., Bernasconi, M., and Ruoslahti, E.(2004) In vivo and ex vivo selections using phage-displayed libraries. In Phage Display: A Practical Approach, T. Clarkson and H.Lowman, eds.(Oxford, U.K.: Oxford University Press), Chap 10, p 171.
Hood,J.D., Bednarski, M., Frausto, R., Guccione, S., Reisfeld, R.A., Xiang, R., and Cheresh, D.A.(2002) Tumor regression by targeted gene delivery to the neovasculature. Science 296, 2404-2407.
Jain R K. Vascular and interstitial barriers to delivery of therapeutic agents in tumors, Cancer Metastasis Rev, 1990,9: 253-266.
Jain R K., Tong, R.T. and Munn, L.L. Effects of vascular normalization by antiangiogenic therapy on interstitial hypertension, peritumor edema, and lymphatic metastasis: insights from a mathematical model. Cancer Res. 67: 2729-2735,(2007).
Jain. R K.(2005) Normalization of tumor vasculature: An emerging concept in anti-angiogenic therapy. Science 307, 58-62.
Jarvinen T. and Ruoslahti E.(2007). Molecular changes in the vasculature of injured tissues. Am. J. Path. 171:702-711.
Jia et al. Characterization of a bicyclic peptide neuropilin-1 (NP-1) antagonist (EG3287) reveals importance of vascular endothelial growth factor exon 8 for NP-1 binding and role of NP-1 in KDR signaling. J. Biol. Chem. 281: 13493-13502,(2006).
Jia, H. et al., Cysteine-rich and basic domain HIV-1 Tat peptides inhibit angiogenesis and induce endothelial cell apoptosis. Biochem. Biophys. Res. Commun. 283, 469-479 (2001).
Jiang, T., Olson, E.S., Nguyen, Q.T., Roy, M., Jennings, P.A., and Tsien, R.Y.(2004). Tumor imaging by means of proteolytic activation of cell-penetrating peptides. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, 17867-17872.
Johannsen, E. et al., Proteins of purified Epstein-Barr virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, 16286-16291 (2004).
Joliot, A., Pernelle, C., Deagostini-Bazin, H., and Prochiantz, A., Antennapedia homeobox peptide regulates neural morphogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 1864-1868 (1991).
Joyce, J.A., Laakkonen P., Bernasconi, M., Bergers, G., Ruoslahti, E., and Hanahan, D.(2003) Stage-specific vascular markers revealed by phage display in a mouse model of pancreatic islet tumorigenesis. Cancer Cell 4, 393-403.
Karmali, P. P., Kotamraju, V. R.,Kastantin, M., Black, M., Missirlis, D., Tirrell, M., and Ruoslahti,E.(2009). Targeting of albumin-embedded paclitaxel nanoparticles to tumors. Nanomedicine 5, 73-82.
Ke, S. H. et al., Optimal subsite occupancy and design of a selective inhibitor of urokinase. J. Biol. Chem. 272, 20456-20462 (1997).
Kelly KA. Nahrendorf M. Yu AM. Reynolds F. Weissleder R.(2006). In vivo phage display selection yields atherosclerotic plaque targeted peptides for imaging. Molecular Imaging & Biology. 8(4):201-207.
Kerbel, R.S. and B.A. Kamen,(2004) The anti-angiogenic basis of metronomic chemotherapy. Nat Rev Cancer 4, 423-436.
Kirpotin, D.B. el al. Antibody Targeting of Long-Circulating Lipidic Nanoparticles Does Not Increase Tumor Localization but Does Increase Internalization in Animal Models. Cancer Re. 66, 6732-6740 (2006).
Klenk HD, Garten W.(1994) Host cell proteases controlling virus pathogenicity. Trends Microbiol. 1994 2, 39-43.
Koivunen, E., Gay, D. A., and Ruoslahti, E.(1993). Selection of peptides binding to the alpha 5 beta 1 integrin from phage display library. J Biol Chem 268, 20205-20210.
Koivunen, E., Wang, B., and Ruoslahti, E.(1995). Phage libraries displaying cyclic peptides with different ring sizes: ligand specificities of the RGD-directed integrins. Biotechnology (N Y) 13, 265-270.
Kruithof EK.(1998) Plasminogen activator inhibitors--a review. Enzyme. 40, 113-21.
Kumar P, Wu H, McBride JL, Jung KE, Kim MH, Davidson BL, Lee SK, Shankar P, Manjunath N. Transvascular delivery of small interfering RNA to the central nervous system. Nature 448: 39-43,(2007).
Laakkonen, P., Akerman, M.E., Biliran, H., Yang, M., Ferrer,F., Karpanen, T., Hoffman, R.M., and Ruoslahti, E.(2004) Antitumor activity of a homing peptide that targets tumor lymphatics and tumor cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 9381-9386.
Laakkonen, P.,Porkka, K., Hoffman, J.A., and Ruoslahti, E., A tumor-homing peptide with a targeting specificity related to lymphatic vessels. Nature Med.8, 751-755 (2002b).
Laakkonen, P., Porkka, K., Hoffman, J.A., and Ruoslahti,E.(2002a) A tumor-homing peptide with a lymphatic vessel-related targeting specificity. Nature Med 8, 743-751.
Langel, Ulo, Handbook of cell-penetrating peptides, 2nd ed.(CRC/Taylor & Francis, Boca Raton, 2007).
Li, H., Sun, H., and Qian,Z.M.(2002) The role of the transferrin-transferrin-receptor system in drug delivery and targeting. Trends pharmacol. Sci.23, 206-209.
Li,S-D. and Huang, L.(2006). Ann N.Y. Acad. Sci. 1082, 1-8.
Liu S, Bugge TH, Leppla SH.(2001) Targeting of tumor cells by cell surface urokinase plasminogen activator-dependent anthrax toxin. J Biol Chem. 276, 17976-84.
Liu, C., Huang, H., Donate, F., Dickinson, C., Santucci, R., Seikh, A., Vessella, R. and Edgington, T.S. Prostate-specific Membrane Antigen Directed Selective Thrombotic Infarction of Tumors. Cancer Res. 62:5470-5475,(2002).
Liu, Z. et al.In vivo biodistribution and highly efficient tumour targeting of carbon nanotubes in mice. Nat. Nanotech. 2,47-52 (2007).
Mae M. Langel U.(2006). Cell-penetrating peptides as vectors for peptide, protein and oligonucleotide delivery. Current Opinion in Pharmacology. 6, 509-514.
Maeda, H., Fang,J., Inutsuka, T., and Kitamoto, Y.(2003). Vascular permeability enhancement in solid tumor: various factors, mechanisms involved and its implications. Int Immunopharmacol 3, 319-328.
Mayer, L. D., Dougherty, G., Harasym, T. O., and Bally, M. B.(1997). The role of tumor-associated macrophages in the delivery of liposomal doxorubicin to solid murine fibrosarcoma tumors. J Pharmacol Exp Ther 280, 1406-1414.
McCarthy JR. Kelly KA. Sun EY. Weissleder R.(2007). Targeted delivery of multifunctional magnetic nanoparticles. Nanomedicine. 2, 153-167.
Meade BR. Dowdy SF.(2007). Exogenous siRNA delivery using peptide transduction domains/cell penetrating peptides. Advanced Drug Delivery Reviews. 59(2-3):134-40.
Medarova Z, Pham W, Farrar C, Petkova V, Moore A.(2007) In vivo imaging of siRNA delivery and silencing in tumors. Nat Med. 13, 372-7.
Merril, C.R.,Biswas, B., Carlton, R., Jensen, N.C., Creed, G.J., Zullo, S., and Adhya, S.(1996) Long-circulating bacteriophage as antibacterial agents. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 3188-3192.
Miles, A. A., and Mils, E. M.(1952). Vascular reaction to histamine, histamine-liberator and leukotaxine in the skin of guinea-pigs. J Physiol 118, 28-257.
Minchinton, A.I., and Tannock, I. F.(2006). Drug penetration in solid tumours. Nat Rev Cancer 6, 583-592.
Moghimi, S. M., Hunter, A. C. & Murray,J. C.(2001). Long-circulating and target-specific nanoparticles: Theory to practice. Pharm. Rev. 53, 283-318.
Monsky, W.L., Fukumura, D., Gohongi, T., Ancukiewcz, M., Weich, H. A., Torchilin, V.P., Yuan, F., and Jain, R.K.(1999). Augmentation of transvascular transport of macromolecules and nanoparticles in tumors using vascular endothelial growth factor. Cancer Res 59, 4129-4135.
Moulard, M. and Decroly, E., Maturation of HIV envelope glycoprotein precursors by cellular endoproteases. Biochim. Biophys. Acta 1469, 121-132 (2000).
Murohara, T., Horowitz, J. R., Silver, M., Tsurumi, Y., Chen, D., Sullivan, A., and Isner, J.M.(1998). Vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor enhances vascular permeability via nitric oxide and prostacyclin. Circulation 97, 9-107.
Murphy, E. A., Majeti, B. K., Barnes, L. A., Makale, M., Weis, S. M., Lutu-Fuga, K., Wrasidlo, W., and Cheresh, D. A.(2008). Nanoparticle-mediated drug delivery to tumor vasculature suppresses metastasis. Proc Natl Acad Sci USA 105, 9343-9348.
Newton JR. Kelly KA. Mahmood U. Weissleder R. Deutscher SL.(2006). In vivo selection of phage for the optical imaging of PC-3 human prostate carcinoma in mice. Neoplasia (New York). 8, 772-780.
Nyberg P, Ylipalosaari M, Sorsa T, Salo T.(2006) Trypsins and their role in carcinoma growth. Exp Cell Res. 312, 1219-28.
Pakalns. T., Haverstick, K.L., Fields, G.B., McCarthy, J.B., Mooradian, D.L., and Tirrell, M.(1999) Cellular recognition of synthetic peptide amphiphiles in self-assembled monolayer films. Biomaterials. 20, 2265-2279.
Palmacci, S. and Josephson, L.(Advanced Magnetics, Inc.(Canbridge, MA) USA, 1993).
Park, J-H., v Maltzahn G.A., Zhang, L., Schwartz, M.P., Ruoslahti, E., Bhatia, S.N., and Sailor, M.J. Magnetic iron oxide nanoworms for tumor targeting and imaging. Adv. Mater. 20: 1630-1635 (2008).
Park, J.H., von Maltzahn, G., Zhang, L., Derfus, A. M., Simberg, D., Harris, T.J., Ruoslahti,E., Bhatia,S.N., and Sailor, M.J.(2009).Systematic surface engineering of magnetic nanoworms for in vivo tumor targeting. Small 5, 694-700.
Parr, M. J., Masin, D., Cullis, P. R., and Bally, M. B.(1997). Accumulation of liposomal lipid and encapsulated doxorubicin in murine Lewis lung carcinoma: the lack of beneficial effects by coating liposomes with poly(ethylene glycol). J Pharmacol Exp Ther 280, 1319-1327.
Pasqualini R. Koivunen E. Ruoslahti E.(1997). Alpha v integrins as receptors for tumor targeting by circulating ligands. Nat. Biotech. 15, 542-546.
Pasqualini, R. and Ruoslahti, E. Organ targeting in vivo using phage display peptide libraries. Nature 380:364-366 (1996).
Pilch J, Brown DM, Komatsu M, Jarvinen TA, Yang M, Peters D, Hoffman RM, Ruoslahti E.(2006) Peptides selected for binding to clotted plasma accumulate in tumor stroma and wounds. Proc Natl Acad Sci USA. 103, 2800-4.
Pirollo KF, Rait A, Zhou Q, Hwang SH, Dagata JA, Zon G, Hogrefe RI, Palchik G, Chang EH.(2007) Materializing the potential of small interfering RNA via a tumor-targeting nanodelivery system. Cancer Res.67, 2938-43.
Polyakov, V. et al., Novel Tat-Peptide Chelates for Direct Transduction of Technetium-99m and Rhenium into Human Cells for Imaging and Radiotherapy Bioconjugate Chem. 11, 762-771 (2000).
Poon GM, Gariepy J. (2007) Cell-surface proteoglycans as molecular portals for cationic peptide and polymer entry into cells. Biochem Soc Trans. 35, 788-93.
Porkka, K., Laakkonen, P., Hoffman, J.A., Bernasconi, M., and Ruoslahti, E.(2002) Targeting of peptides to the nuclei of tumor cells and tumor endothelial cells in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 7444-7449.
Puente XS, Sanchez LM, Overall CM, Lopez-Otin C.(2003) Human and mouse proteases: a comparative genomic approach. Nat Rev Genet. 4,544-58.
Rajotte, D. and Ruoslahti, E. Membrane dipeptidase is the receptor for a lung-targeting peptide identified by in vivo phage display. J. Biol. Chem. 274:11593-11598 (1999).
Reynolds, A.R., Hart, I.R. et al. Stimulation of tumor growth and angiogenesis by low concentrations of RGD-mimetic integrin inhibitors. Nat. Med. published online 22 March 2009.
Rijken DC.(1995) Plasminogen activators and plasminogen activator inhibitors: biochemical aspects. Baillieres Clin Haematol. 8, 291-312.
Rubinstein, D. B., Stortchevoi, A., Boosalis, M., Ashfaq, R., Ghebrehiwet, B., Peerschke, E. I., Calvo, F., and Guillaume, T.(2004). Receptor for the globular heads of C1q (gC1q-R, p33, hyaluronan-binding protein) is preferentially expressed by adenocarcinoma cells. Int J Cancer 110, 741-750.
Ruiz-Linares, A. et al., Processing of yellow fever viru polyprotein: role of cellular proteases in maturation of the structural proteins. J. Virol. 63, 4199-4201 (1989).
Ruoslahti, E. Vascular zip codes in angiogenesis and metastasis. Biochem. Soc. Transact. 32: 397-402 (2004).
Ruoslahti, E.(2002) Specialization of tumour vasculature. Nat, Rev. Cancer 2, 83-90.
Ruoslahti, E. and Rajotte, D. An address system in the vasculature of normal tissues and tumors. Annu. Rev. Immunol. 18:813-827 (2000).
Sanchez, A. J., Vincent, M. J., Erickson, B. R., and Nichol, S. T., Crimean-congo hemorrhagic fever virus glycoprotein precursor is cleaved by Furin-like and SKI-1 proteases to generate a novel 38-kilodalton glycoprotein. J. Virol. 80, 514-525 (2006).
Sandgren, S., Cheng, F., and Belting, M., Nuclear targeting of macromolecular polyanions by an HIV-Tat derived peptide. Role for cell-surface proteoglycans. J. Biol. Chem. 277, 38877-38883 (2002).
Simberg, D., Duza T., Park, J.H., Essler M., Pilch, J., Zhang, L., Derfus A.M., Yang M., Hoffman R.M., Bhatia,S., Sailor, M.J. and Ruoslahti, E. Biomimetic amplification of nanoparticle homing to tumors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104: 932-936 (2007).
Sjoberg, M., Wallin, M., Lindqvist, B., and Garoff, H., Furin cleavage potentiates the membrane fusion-controlling intersubunit disulfide bond isomerization activity of leukemia virus Env. J. Virol. 80, 5540-5551 (2006).
Soker, S. el al., Neuropilin-1 is expressed by endothelial and tumor cells as an isoform-specific receptor for vascular endothlial growth factor. Cell 92, 735-745 (1998).
Sokoloff, A.V., Bock, I., Zhang, G., Sebestyen, M.G., and Wolff, J.A.(2000) The interactions of peptides with the innate immune system studied with use of T7phage peptide display. Mol. Ther. 2, 131-139.
Sokoloff, A.V., Wong, S.C. Ludtke, J.J., Sebestyen, M.G., Stubbotin, V.M., Zhang, G., Budker, T., Bachhuber, M., Sumita, Y., and Wolff, J.A.(2003) A new peptide ligand that targets particles and heterologous proteins to hepatocytes in vivo. Mol. Ther. 8, 867-872.
Spirindon C.L., Ghetie, M.A., Uhr, J., Marches. R., Li, J. L., Shen, G.L., and Vitetta, E. S.(2002). Targeting multiple Her-2 epitopes with monoclonal antibodies results in improved antigrowth activity of a human breast cancer cell line in vitro and in vivo. Clin Cancer Res 8, 1720-1730.
Starzec, A., Vassy, R., Martin, A., Lecouvey, M., Di Benedetto, M., Crepin, M. and Perret, GY. Antiangiogenic and antitumor activities of peptide inhibiting the vascular endothelial growth factor binding to neuropilin-1. Life Sci 79: 2370-2381, 2006.
Steinhauer, D. A., Role of hemagglutinin cleavage for the pathogenicity of influenza virus. Virology 258, 1-20 (1999).
Sternlicht, M.D. and Werb, Z., How matrix metalloproteinases regulate cell behavior. Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 17, 463-513 (2001).
Sugahara, K.N., Teesalu, T., Karmali, P. P., Kotamraju V. R., Agemy, L., Girard, O.M., Hanahan, D., Mattrey, R. F., and Ruoslahti, E.(2009). Tissue-penetrating delivery of compounds and nanoparticles into tumors. Cancer Cell, 16(6):510-20 (2009)
Sugahara KN, Teesalu T, Karmali PP, Kotamraju VR, Agemy L, Greenwald DR, Ruoslahti E. Coadministration of a Tumor-Penetrating Peptide Enhances the Efficacy of Cancer Drugs. Science. 2010:328:1031-5.
Teesalu, T., Sugahara, K. N., Kotamraju, V. R., and Ruoslahti, E.(2009). C-end rule peptides mediate neuropilin-1-dependent cell, vascular, and tissue penetration. PNAS 106(38):16157-16162 (2009).
Thomas, G., Furin at the cuting edge: from protein traffic to embryogenesis and disease. Nature Rev. Mol. Cell. Biol. 3, 753-766 (2002).
Thurber, G. M., Schmidt, M.M., and Wittrup, K. D. (2008). Antibody tumor penetration: transport opposed by systemic and antigen-mediated clearance. Adv Drug Deliv Rev 60, 1421-1434.
Torgersen, M. L., Skretting, G., van Deurs, B., and Sandvig, K., Internalization of cholera toxin by different endocytic mechanisms. J. Cell. Sci. 114, 3737-3747 (2001).
Tucker,G. C.(2003). Alpha v integrin inhibitors and cancer therapy. Curr Opin Investig Drugs 4, 722-731.
Tyagi, M., Rusnati, M., Presta, M., and Giacca, M., Internalization of HIV-1 tat requirescell surface heparan sulfate proteoglycans. J. Biol. Chem. 276, 3254-3261 (2001).
Uhland, K., Matriptase and its putative role in cancer. Cell. Mol. Life Sci. 63, 2968-2978 (2006).
Uprichard, S. L.(2005) The therapeutic potential of RNA interference. FEBS Lett. 579, 5996-6007.
Vander Kooi, C. W. et al., Structural basis for ligand and heparin binding to neuropilin B domains. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104, 6152-6157 (2007).
Varsanyi, T. M., Jornvall, H., and Norrby, E., Isolation and characterization of the measles virus F1 polypeptide: comparison with other paramyxovirus fusion proteins. Virology 147, 110-117 (1985).
Vey, M. et al., Proteolytic processing of human cytomegalovirus glycoprotein B (gpUL55) is mediated by the human endoprotease furin. Virology 206, 746-749 (1995).
von Wronski, M.A., Raju, N., Pillai, R.et al. Tuftsin binds neuropilin-1 through a sequence similar to that encoded by exon 8 of vascular endothelial growth factor. J Biol Chem 281: 5702-5710,(2006).
Wadia, J.S., and Dowdy, S.F.(2002) Protein transduction technology. Curr. Opin. Biotech. 13, 52-56.
Waisman, David Morton, Plasminogen : structure, activation, and regulation. (Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York, 2003).
Weissleder, R., Bogdanov, A., Neuwelt, E. A. & Papisov, M.(1995). Long-circulating iron oxide for MR imaging. Adv. Drug Deliv. Rev. 16, 321-334.
Weissleder,R., Kelly, K., Sun, E.Y., Shtatland, T. & Josephson, L. Cell-specific targeting of nanoparticles by multivalent attachment of small molecules. Nat. Biotechnol. 23, 1418-1423 (2005).
Wool-Lewis, R. J. and Bates, P., Endoproteolytic processing of the ebola virus envelope glycoprotein: cleavage is not required for function. J. Virol. 73, 1419-1426 (1999).
Yuan, F., Leunig, M., Huang, S. K., Berk, D. A., Papahadjopoulos, D., and Jain, R. K.(1994). Microvascular permeability and interstitial penetration of sterically stabilized (stealth) liposomes in a human tumor xenograft. Cancer Res 54, 3352-3356.
Zhang, H., Jiro Kusunose, J., Kheirolomoom, A., Seo, J.W., Qi, J., Watson, K.D., Lindfors, H.A., Ruoslahti, E., Julie L. Sutcliffe, J.L. and Ferrara, K.W. Dynamic imaging of arginine-rich heart-targeted vehicles in a mouse model. Biomaterials 29: 1976-1988, 2008.
Zhang, L. et al., Lymphatic zip codes in premalignant lesions and tumors. Cancer Res. 66, 5696-5706 (2006).
Zhang, L., Hoffman, J.A., and Ruoslahti, E. Molecular profiling of heart endothelial cells. Circulation. 112:1601-1611 (2005).
Zorko M, Langel U.(2005) Cell-penetrating peptides: mechanism and kinetics of cargo delivery. Adv Drug Deliv Rev. 57, 529-45.
본 명세서 및 첨부되는 특허청구의 범위에서 사용되는 "한", "하나" 및 "그"라는 단수형은 별도의 설명이 없는 한 복수 형태도 포함하는 의미로 이해해야 한다. 따라서, 예를 들어, "펩타이드"라는 것은 그러한 펩타이드의 복수를 포함하는 것이며, " 그 펩타이드"라는 것은 당업자에게 알려져 있는 것과 같이 하나 이상의 펩타이드 및 동등물을 의미한다.
"임의선택적" 또는 "임의선택적으로"라는 것은 그 후에 기술되는 상황, 환경 또는 물질이 발생 또는 존재할 수도 있고 발생 또는 존재하지 않을 수도 있는 것으로, 상기 상황, 환경 또는 물질이 발생 또는 존재하는 경우와 발생 또는 존재하지 않는 경우를 포함하는 의미이다.
범위는 "약" 한 특정 값으로부터 "약" 다른 특정 값까지로 표현될 수 있다. 이러한 방식으로 범위를 표현할 때, 별도의 설명이 없는 한, 한 특정 값으로부터 및/또는 다른 특정 값까지 포함하는 것으로 구체적으로 의도하고 고려한 것이다. 이와 마찬가지로, 앞에 "약"이라는 용어를 사용하여 값을 근사치로 표현하는 경우, 별도의 설명이 없는 한, 특정 값은 구체적으로 의도하고 기재되는 또 다른 예를 형성한다는 점을 이해해야 한다. 또한, 각 범위의 한 끝값이 다른 끝값과 관련해서 중요하며, 별도의 설명이 없는 한, 다른 끝값에 독립적이라는 점도 이해해야 할 것이다. 또한, 본 명세서에는 다수의 수치가 존재하며, 각 수치는 그 수치 자체 이외에도 그 특정 값의 근사치도 포함한다는 점도 이해해야 할 것이다. 마지막으로, 명시적으로 기재되어 있는 범위 이내의 개별적인 값 및 하위 범위의 값도 또한 별도의 설명이 없는 한, 구체적으로 의도하고 기재된 것으로 봐야 한다. 상기 내용은 특별히 구현 예의 일부 또는 전부가 구체적으로 명시되어 있느냐에 관계없이 적용된다.
별도로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명의 방법 및 조성물이 속해 있는 당해 분야의 기술자가 통상적으로 이해하고 있는 것과 같은 의미로 사용된다. 본 명세서에서 기술된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 방법 및 조성물의 실시 및 테스트에 사용될 수 있으나, 특히 유용한 방법, 장치 및 물질은 본 명세서에 기재된 바와 같다. 본 명세서에서 인용한 공보 및 그 공보에서 언급된 자료는 특별히 참고사항으로 본 명세서에 포함된다. 상기 공보가 선행 발명이라는 이유로 본 발명이 권리를 갖지 못하는 것으로 해석되어서는 안된다. 참고 문헌이 종래 기술을 구성한다고 허용되어서는 안된다. 참고문헌에 대한 논의는 그 발명자가 권리를 주장하는 것에 대해 언급하고 있고, 출원인은 인용된 문헌의 정확성 및 적절성에 도전할 권리를 가지고 있다. 많은 공보가 본 명세서에서 인용되고 있지만 이들 인용문헌이 당해 기술분야에서 일반적인 상식의 일부분을 형성하는 것으로 허용되는 것은 아니다.
본 명세서의 상세한 설명과 청구범위 전반을 통해 용어 "포함한다(comprise)"와 "포함하는(comprising)", "포함한다(comprises)"와 같은 변형용어는 "포함하나 한정하는 것은 아니다"를 의미하며, 예를 들어 다른 첨가제, 성분, 완전체 또는 단계들을 배제하기 위한 의도가 아니다.
본 발명의 방법과 조성물은 특히 기재된 방법론, 프로토콜, 반응물에 한정되지 않는다. 또한, 본 명세서에서 사용된 용어는 특정 실시예만을 기술하기 위한 것이며, 첨부된 특허청구범위에 의해서만 한정될 본 발명의 범위를 한정하기 위해 의도된 것은 아니다.
당해 기술분야의 기술자라면 일상적인 실험 정도를 이용하는 것과, 본 명세서에 기재된 방법과 조성물의 특정 실시예와 동등한 많은 것을 인식 및 확인할 수 있을 것이다. 이러한 동동물은 청구된 특허청구범위에 포함될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Ruoslahti, Erkki <120> METHODS AND COMPOSITIONS USING <130> 24520.46.9001 <160> 242 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 1 Cys Arg Gly Asp Lys Arg Gly Pro Asp Cys 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(7) <400> 2 Arg Pro Ala Arg Pro Ala Arg 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <400> 3 Cys Arg Gly Asp Lys Gly Pro Asp Cys 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <400> 4 Cys Arg Gly Asp Asp Gly Pro Asp Cys 1 5 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(4) <400> 5 Arg Pro Ala Arg 1 <210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X can be Lys or Arg <400> 6 Arg Xaa Xaa Xaa 1 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <400> 7 Cys Arg Glu Lys Ala 1 5 <210> 8 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(12) <400> 8 Gly Gly Gly Arg Lys Lys Arg Ser Thr Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(7) <400> 9 Gly Gly Gly Arg Lys Lys Arg 1 5 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(12) <400> 10 Gly Gly Gly Leu Val Pro Arg Gly Ser Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(7) <400> 11 Gly Gly Gly Leu Val Pro Arg 1 5 <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <400> 12 Gly Gly Gly Pro Cys Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(8) <400> 13 Gly Gly Gly Pro Cys Pro Gly Arg 1 5 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <400> 14 Gly Gly Gly Pro Gly Ser Gly Arg Ser Ala Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 15 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(8) <400> 15 Gly Gly Gly Pro Gly Ser Gly Arg 1 5 <210> 16 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <400> 16 Gly Gly Gly Pro Gly Ser Gly Lys Ser Ala Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(8) <400> 17 Gly Gly Gly Pro Gly Ser Gly Lys 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(7) <400> 18 Arg Gly Cys Arg Glu Lys Ala 1 5 <210> 19 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(4) <400> 19 Arg Gly Cys Arg 1 <210> 20 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X can be Arg, Lys, or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X can be Arg, Lys, or His <400> 20 Xaa Xaa Xaa Xaa 1 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X can be Arg, Lys, or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <400> 21 Xaa Xaa Xaa Lys Gly 1 5 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <400> 22 Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 23 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X can be Arg or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(3) <223> X can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X can be Arg or Lys <400> 23 Xaa Xaa Xaa Xaa 1 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(6) <400> 24 Asn Gly Arg Ala His Ala 1 5 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(7) <400> 25 Arg Asn Gly Arg Ala His Ala 1 5 <210> 26 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <400> 26 Arg Arg Glu Lys 1 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <400> 27 Arg Arg Glu Lys Ala 1 5 <210> 28 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <400> 28 Gly Pro Asp Cys 1 <210> 29 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> misc_feature <222> (1)..(12) <223> VEGF-165 binding site in the b1 domain of NRP-1 <400> 29 tcaaaagaaa cc 12 <210> 30 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> misc_feature <222> (1)..(12) <223> triple mutation of VEGF-165 binding site of b1 domain of NRP-1 <400> 30 gctaaagctg ct 12 <210> 31 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X can be Lys or Arg <400> 31 Arg Gly Asp Xaa 1 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <400> 32 Cys Asp Cys Arg Gly Asp Cys Phe Cys 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <400> 33 Cys Arg Gly Asp Asp Gly Pro Lys Cys 1 5 <210> 34 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <400> 34 Cys Arg Gly Asp Lys 1 5 <210> 35 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(34) <400> 35 Ala Lys Val Lys Asp Glu Pro Gln Arg Arg Ser Ala Arg Leu Ser Ala 1 5 10 15 Lys Pro Ala Pro Pro Lys Pro Glu Pro Lys Pro Lys Lys Ala Pro Ala 20 25 30 Lys Lys <210> 36 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <400> 36 Cys Arg Gly Asp Cys 1 5 <210> 37 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X can be Lys or Arg <400> 37 Cys Arg Gly Asp Xaa 1 5 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(7) <400> 38 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <400> 39 Cys Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Cys 1 5 <210> 40 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <400> 40 Arg Gly Asp Phe Lys 1 5 <210> 41 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <400> 41 Cys Arg Asn Gly Arg Gly Pro Asp Cys 1 5 <210> 42 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <400> 42 Arg Pro Ala Arg Val Lys Arg Asn Gly Arg Ala His Ala 1 5 10 <210> 43 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(17) <400> 43 Arg Pro Ala Arg Ser Gly Arg Ala Gly Gly Ser Val Ala Cys Arg Gly 1 5 10 15 Asp <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <400> 44 Arg Pro Ala Arg Val Lys Arg Gly Gly Ser Cys Ala Gly Ala Leu Cys 1 5 10 15 Tyr <210> 45 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(9) <223> X can be any amino acid <400> 45 Thr Gly Leu Thr Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Trp 1 5 10 <210> 46 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(4) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X can be Lys or Arg <400> 46 Xaa Asn Gly Arg 1 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 47 Cys Gln Ser Cys Asn Gly Arg Cys Val Arg 1 5 10 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 48 Cys Arg Thr Cys Asn Gly Arg Cys Gln Val 1 5 10 <210> 49 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 49 Cys Val Gln Cys Asn Gly Arg Cys Ala Leu 1 5 10 <210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 50 Cys Arg Cys Cys Asn Gly Arg Cys Ser Pro 1 5 10 <210> 51 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 51 Cys Ala Ser Asn Asn Gly Arg Val Val Leu 1 5 10 <210> 52 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 52 Cys Gly Arg Cys Asn Gly Arg Cys Leu Leu 1 5 10 <210> 53 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 53 Cys Trp Leu Cys Asn Gly Arg Cys Gly Arg 1 5 10 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 54 Cys Ser Lys Cys Asn Gly Arg Cys Gly His 1 5 10 <210> 55 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 55 Cys Val Trp Cys Asn Gly Arg Cys Gly Leu 1 5 10 <210> 56 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 56 Cys Ile Arg Cys Asn Gly Arg Cys Ser Val 1 5 10 <210> 57 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(11) <400> 57 Cys Thr Gly Glu Cys Asn Gly Arg Cys Val Glu 1 5 10 <210> 58 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 58 Cys Glu Gly Val Asn Gly Arg Arg Leu Arg 1 5 10 <210> 59 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 59 Cys Leu Ser Cys Asn Gly Arg Cys Pro Ser 1 5 10 <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 60 Cys Glu Val Cys Asn Gly Arg Cys Ala Leu 1 5 10 <210> 61 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X can be Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X can be Asp or Glu <400> 61 Cys Arg Gly Asp Xaa Gly Pro Xaa Cys 1 5 <210> 62 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <400> 62 Cys Gly Arg Glu Cys Pro Arg Leu Cys Gln Ser Ser Cys 1 5 10 <210> 63 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <400> 63 Cys Asn Gly Arg Cys Val Ser Gly Cys Ala Gly Arg Cys 1 5 10 <210> 64 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(8) <400> 64 Cys Leu Ser Gly Ser Leu Ser Cys 1 5 <210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(7) <400> 65 Cys Gly Ser Leu Val Arg Cys 1 5 <210> 66 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <400> 66 Ala Leu Asn Gly Arg Glu Glu Ser Pro 1 5 <210> 67 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(9) <400> 67 Cys Val Leu Asn Gly Arg Met Glu Cys 1 5 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(5) <400> 68 Cys Asn Gly Arg Cys 1 5 <210> 69 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(10) <400> 69 Cys Glu Met Cys Asn Gly Arg Cys Met 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<221> PEPTIDE <222> (1)..(15) <223> fusion protein <400> 231 Ser Val Ala Ser Ser Arg Arg His Lys Arg Phe Ala Gly Val Val 1 5 10 15 <210> 232 <211> 14 <212> PRT <213> Tick-borne encephalitis virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> PreM protein <400> 232 Lys Gln Glu Gly Ser Arg Thr Arg Arg Ser Val Leu Ile Pro 1 5 10 <210> 233 <211> 14 <212> PRT <213> respiratory syncytial virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> fusion protein <400> 233 Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro Arg Phe 1 5 10 <210> 234 <211> 15 <212> PRT <213> Influenza A virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(15) <223> hemaglutinin <400> 234 Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala 1 5 10 15 <210> 235 <211> 14 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus type 1 <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> envelope precursor gp160 <400> 235 Arg Arg Val Val Gln Arg Glu Lys Arg Ala Val Gly Ile Gly 1 5 10 <210> 236 <211> 14 <212> PRT <213> Ebola virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> virion spike glycoprotein precursor <400> 236 Leu Ile Thr Gly Gly Arg Arg Thr Arg Arg Glu Ala Ile Val 1 5 10 <210> 237 <211> 15 <212> PRT <213> Mumps virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(15) <223> fusion protein <400> 237 Pro Ser Ser Gly Ser Arg Arg His Lys Arg Phe Ala Gly Ile Ala 1 5 10 15 <210> 238 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <400> 238 Cys Asp Ser Ala Gly Arg Ser Arg Arg Ser Arg Arg Ala Ile 1 5 10 <210> 239 <211> 13 <212> PRT <213> Human herpesvirus 4 <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <223> glycoprotein B <400> 239 Ala Ala Val Leu Arg Arg Arg Arg Arg Asp Ala Gly Asn 1 5 10 <210> 240 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human metapneumo-virus; fusion glycoprotein precursor <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <400> 240 Gln Ile Glu Asn Pro Arg Gln Ser Arg Phe Val Leu Gly Ala 1 5 10 <210> 241 <211> 14 <212> PRT <213> Human T-cell lymphotropic virus type 2 <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> Env propeptide <400> 241 Pro Pro Pro Ala Thr Arg Arg Arg Arg Ala Val Pro Ile Ala 1 5 10 <210> 242 <211> 14 <212> PRT <213> Crimean-Congo hemorrhagic fever virus <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(14) <223> glycoprotein precursor <400> 242 Pro Ser Pro Thr Asn Arg Ser Lys Arg Asn Leu Lys Met Glu 1 5 10

Claims (183)

  1. 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서,
    세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 요소 및 공조성물에 노출시킴으로써 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직에의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 세포, 조직 또는 세포/조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키기 위한 방법으로서,
    세포, 조직 또는 세포/조직을 CendR 요소 및 카고 조성물에 노출시킴으로써 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직에의 내재화, 침투 또는 둘 다를 향상시키는 단계를 포함하며, 이 때 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되어 있거나 비공유 결합되어 있으며, CendR 요소는 타입 2 CendR 요소인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 2 항에 있어서,
    세포, 조직 또는 세포/조직을 노출시키기 전에, CendR 요소와 카고 조성물을 결합시키는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 세포, 조직 또는 세포/조직의 투과성을 높이는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 세포/조직은 대상자 내에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 요소와 공조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 요소와 공조성물에 노출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 5 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 세포/조직은 CendR 요소와 카고 조성물을 대상자에 투여함으로써 CendR 요소와 카고 조성물에 노출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 다수의 악세사리 분자와 결합되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 8 항 내지 제 9 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 CendR 요소와 중복되는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 8 항 내지 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 CendR 요소와 중복되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 8 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드 또는 그 배합물을 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 8 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 독립적으로 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 13 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 귀소 분자인 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 13 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 악세사리 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 8 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 뇌세포, 뇌조직 또는 둘다, 신장세포, 신장조직 또는 둘다, 피부 및 힘줄 세포, 피부 및 힘줄 조직 또는 둘다, 폐세포, 폐조직 또는 둘다, 췌장세포, 췌장조직 또는 둘다, 장세포, 장조직 또는 둘다, 부신세포, 부신조직 또는 둘다, 망막세포, 망막조직 또는 둘다, 간세포, 간조직 또는 둘다, 전립선 세포, 전립선 조직 또는 둘다, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 또는 둘다, 난소세포, 난소조직 또는 둘다, 심장 세포, 심장 조직 또는 둘다, 종양세포, 종양, 종양혈관 또는 그 배합체에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 8 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 iRGD를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 8 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 LyP-1 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 8 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 iNGR을 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 8 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 RGR 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제 8 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 종양에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제 21 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 8 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 폐조직에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제 8 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 심장조직에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소인 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제 25 항에 있어서,
    상기 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소인 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제 26 항에 있어서,
    상기 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소는 세린 프로테아제, 플라스민, 플라스미노겐 활성화제, 우로키나아제, 프로프로테인 컨버타아제, 퓨린, 카르복시펩티다아제, 카르복시펩티다아제 A, 글루타메이트-특이적 카르복시펩티다아제, 프롤린-특이적 카르복시펩티다아제, PSMA 또는 그 배합물에 의해 활성화될 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제 6 항 또는 제 8 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소와 공조성물은 동시에 대상자에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 제 28 항에 있어서,
    상기 CendR 요소 및 공조성물은 CendR 요소과 공조성물을 함유하는 단일 조성물 형태로 대상자에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 제 6 항 또는 제 8 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소 및 공조성물은 별개의 조성물 형태로 대상자에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제 6 항 또는 제 8 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소 및 공조성물은 서로 다른 시간에 대상자에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 제 31 항에 있어서,
    상기 CendR 요소 및 공조성물은 별도의 조성물 형태로 대상자에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제 30 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소 및 공조성물은 별개의 경로를 통해 대상자에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제 1 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소 및 공조성물은 서로 결합되어 있지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물은 치료제를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물은 검출제를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물은 담체, 운반체, 또는 둘 다를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물은 치료성 단백질, 치료성 화합물, 치료성 조성물, 암 화학치료제, 톡신, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 성장인자, 사이토킨, 케모카인, 하나 이상의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물, 항체, 핵산, 핵산 유사체, 세포, 바이러스, 파지, 바이러스 입자, 파지 입자, 바이러스 캡시드, 파지 캡시드, 바이러스 유사입자, 리포솜, 미셀, 비드, 나노입자, 마이크로입자, 화학치료제, 조영제, 영상제, 표지(label), 표지화제, 항혈관형성제, 혈관형성제, 또는 그 배합물을 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 제 1 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 아미노산 배열 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
  40. 제 39 항에 있어서,
    상기 아미노산 배열은 단백질 또는 펩타이드 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
  41. 제 1 항 내지 제 39 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
  42. 제 40 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
  43. 제 40 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 침투하지 못하는 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 제 40 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
  45. 제 39 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능한 것을 특징으로 하는 방법.
  46. 제 39 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 카고 조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능한 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 제 39 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  48. 제 39 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 카고 조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  49. 제 39 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  50. 제 39 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 카고 조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
  51. 제 39 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 단백질 또는 펩타이드 내의 유일한 기능성 내재화 요소인 것을 특징으로 하는 방법.
  52. 제 40 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 원형인 것을 특징으로 하는 방법.
  53. 제 40 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  54. 제 40 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  55. 제 40 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  56. 제 40 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 제 40 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 제 40 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 제 40 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  60. 제 39 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 분자와 결합되는 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 제 40 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합되는 것을 특징으로 하는 방법.
  62. 제 60 항 또는 제 61 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 독립적으로 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 제 62 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 귀소 분자인 것을 특징으로 하는 방법.
  64. 제 63 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 귀소 분자는 독립적으로 RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  65. 제 40 항 내지 제 64 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 악세사리 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  66. 제 39 항 내지 제 64 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  67. 제 65 항 또는 제 66 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 펩타이드는 독립적으로 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  68. 제 67 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 펩타이드는 귀소 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법.
  69. 제 68 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 귀소 펩타이드는 독립적으로 RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  70. 제 61 항 내지 제 69 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 뇌세포, 뇌조직 또는 둘다, 신장세포, 신장조직 또는 둘다, 피부 및 힘줄 세포, 피부 및 힘줄 조직 또는 둘다, 폐세포, 폐조직 또는 둘다, 췌장세포, 췌장조직 또는 둘다, 장세포, 장조직 또는 둘다, 부신세포, 부신조직 또는 둘다, 망막세포, 망막조직 또는 둘다, 간세포, 간조직 또는 둘다, 전립선 세포, 전립선 조직 또는 둘다, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 또는 둘다, 난소세포, 난소조직 또는 둘다, 심장 세포, 심장 조직 또는 둘다, 종양세포, 종양, 종양혈관 또는 그 배합체에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  71. 제 40 항 내지 제 70 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 iRGD를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  72. 제 40 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 LyP-1 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  73. 제 40 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 iNGR을 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  74. 제 40 항 내지 제 73 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 RGR 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  75. 제 61 항 내지 제 74 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 종양에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  76. 제 75 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  77. 제 61 항 내지 제 70 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 폐조직에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  78. 제 61 항 내지 제 70 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 심장조직에 귀소하는 것을 특징으로 하는 방법.
  79. 제 39 항 내지 제 78 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 세포에의 내재화를 위해 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  80. 제 39 항 내지 제 79 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 조직 침투를 위해 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  81. 제 39 항 내지 제 80 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 세포에의 내재화 및 조직 침투를 위해 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  82. 제 1 항 내지 제 81 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  83. 제 1 항 내지 제 81 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  84. 제 1 항 내지 제 81 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  85. 제 1 항 내지 제 84 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 CendR 조성물 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
  86. 제 85 항에 있어서,
    상기 CendR 조성물은 하나 이상의 악세사리 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  87. 제 85 항 또는 제 86 항에 있어서,
    상기 CendR 조성물은 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  88. 제 85 항 내지 제 87 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 조성물은 하나 이상의 귀소 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  89. 제 1 항 내지 제 84 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 CendR 콘쥬게이트 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
  90. 제 89 항에 있어서,
    상기 CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 악세사리 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  91. 제 89 항 또는 제 90 항에 있어서,
    상기 CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  92. 제 1 항 내지 제 91 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 귀소 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  93. 제 1 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 악세사리 분자에 노출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  94. 제 1 항 내지 제 93 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 귀소 분자에 노출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  95. 제 1 항 내지 제 94 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 카고 조성물에 노출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  96. 제 1 항 내지 제 95 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 CendR 요소에 노출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  97. 제 1 항 내지 제 96 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 공조성물에 노출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  98. CendR 요소 및 공조성물을 함유하는 조성물로서,
    상기 CendR 요소와 공조성물은 서로 공유결합되어 있지 않거나 비공유 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
  99. CendR 요소 및 카고 조성물을 함유하는 조성물로서,
    상기 CendR 요소와 카고 조성물은 서로 공유결합되어 있거나 비공유 결합되어 있으며, CendR 요소는 타입 2 CendR 요소인 것을 특징으로 하는 조성물.
  100. 제 98 항 또는 제 99 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  101. 제 100 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 다수의 악세사리 분자와 결합되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  102. 제 100 항 내지 제 101 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 CendR 요소와 중복되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  103. 제 100 항 내지 102 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 CendR 요소와 중복되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  104. 제 100 항 내지 제 103 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드 또는 그 배합물을 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  105. 제 100 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 독립적으로 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  106. 제 105 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 귀소 분자인 것을 특징으로 하는 조성물.
  107. 제 105 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 악세사리 펩타이드인 것을 특징으로 하는 조성물.
  108. 제 100 항 내지 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 뇌세포, 뇌조직 또는 둘다, 신장세포, 신장조직 또는 둘다, 피부 및 힘줄 세포, 피부 및 힘줄 조직 또는 둘다, 폐세포, 폐조직 또는 둘다, 췌장세포, 췌장조직 또는 둘다, 장세포, 장조직 또는 둘다, 부신세포, 부신조직 또는 둘다, 망막세포, 망막조직 또는 둘다, 간세포, 간조직 또는 둘다, 전립선 세포, 전립선 조직 또는 둘다, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 또는 둘다, 난소세포, 난소조직 또는 둘다, 심장 세포, 심장 조직 또는 둘다, 종양세포, 종양, 종양혈관 또는 그 배합체에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  109. 제 100 항 내지 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 iRGD를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  110. 제 100 항 내지 제 109 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 LyP-1 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  111. 제 100 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 iNGR을 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  112. 제 100 항 내지 제 111 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 RGR 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  113. 제 100 항 내지 제 112 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 종양에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  114. 제 113 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  115. 제 100 항 내지 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 폐조직에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  116. 제 100 항 내지 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 선택적으로 심장조직에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  117. 제 96 항 내지 제 116 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 활성화가능한 CendR 요소인 것을 특징으로 하는 조성물.
  118. 제 117 항에 있어서,
    상기 활성화가능한 CendR 요소는 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소인 것을 특징으로 하는 조성물.
  119. 제 118 항에 있어서,
    상기 프로테아제-활성화가능한 CendR 요소는 세린 프로테아제, 플라스민, 플라스미노겐 활성화제, 우로키나아제, 프로프로테인 컨버타아제, 퓨린, 카르복시펩티다아제, 카르복시펩티다아제 A, 글루타메이트-특이적 카르복시펩티다아제, 프롤린-특이적 카르복시펩티다아제, PSMA 또는 그 배합물에 의해 활성화될 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
  120. 제 98 항 내지 제 119 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소 및 공조성물은 서로 결합되어 있지 않은 것을 특징으로 하는 조성물.
  121. 제 98 항 내지 제 120 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물은 치료제를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  122. 제 98 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물은 검출제를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  123. 제 98 항 내지 제 122 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물은 담체, 운반체, 또는 둘 다를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  124. 제 98 항 내지 제 123 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물은 치료성 단백질, 치료성 화합물, 치료성 조성물, 암 화학치료제, 톡신, 세포독성 물질, 소염제, 관절염 치료제, 성장인자, 사이토킨, 케모카인, 하나 이상의 신호 전달 경로를 조절하는 화합물, 항체, 핵산, 핵산 유사체, 세포, 바이러스, 파지, 바이러스 입자, 파지 입자, 바이러스 캡시드, 파지 캡시드, 바이러스 유사입자, 리포솜, 미셀, 비드, 나노입자, 마이크로입자, 화학치료제, 조영제, 영상제, 표지(label), 표지화제, 항혈관형성제, 혈관형성제, 또는 그 배합물 등을 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  125. 제 98 항 내지 제 124 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 아미노산 배열 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  126. 제 125 항에 있어서,
    상기 아미노산 배열은 단백질 또는 펩타이드 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  127. 제 98 항 내지 제 125 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  128. 제 126 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능하지만, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 않은 것을 특징으로 하는 조성물.
  129. 제 126 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 조직을 침투할 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 침투하지 못하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  130. 제 126 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 세포에 내재화되고 조직을 침투할 수 있으나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 그렇지 않은 것을 특징으로 하는 조성물.
  131. 제 125 항 내지 제 130 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능한 것을 특징으로 하는 조성물.
  132. 제 125 항 내지 제 130 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 카고 조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되거나 조직을 침투하거나 또는 두 가지 모두 가능한 것을 특징으로 하는 조성물.
  133. 제 125 항 내지 제 130 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
  134. 제 125 항 내지 제 130 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 카고 조성물과 결합됨이 없이 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
  135. 제 125 항 내지 제 130 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 공조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
  136. 제 125 항 내지 제 130 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 카고 조성물과 결합됨이 없이 세포 내에 내재화되고 조직을 침투할 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
  137. 제 125 항 내지 제 136 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 단백질 또는 펩타이드 내의 유일한 기능성 내재화 요소인 것을 특징으로 하는 조성물.
  138. 제 126 항 내지 제 137 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 원형인 것을 특징으로 하는 조성물.
  139. 제 126 항 내지 제 137 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 단백질 또는 펩타이드의 C-말단에 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  140. 제 126 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  141. 제 126 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  142. 제 126 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  143. 제 126 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  144. 제 126 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산 서열이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  145. 제 126 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물 또는 카고 조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 CendR 요소가 단백질 또는 펩타이드 내에 존재할 때 향상되나, 아미노산이 단백질 또는 펩타이드 내에 존재하지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  146. 제 125 항 내지 제 145 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 분자와 결합되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  147. 제 126 항 내지 제 146 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 악세사리 분자와 결합되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  148. 제 146 항 또는 제 147 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 독립적으로 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  149. 제 148 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 분자는 귀소 분자인 것을 특징으로 하는 조성물.
  150. 제 149 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 귀소 분자는 독립적으로 RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  151. 제 126 항 내지 제 150 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 하나 이상의 악세사리 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  152. 제 125 항 내지 제 150 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 하나 이상의 악세사리 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  153. 제 151 항 또는 제 152 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 펩타이드는 독립적으로 귀소 분자, 표적화 분자, 친화성 리간드, 세포 침투성 분자, 엔도솜에서 세포질로의 방출 분자, 세포내 표적화 분자, 핵 표적화 분자 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  154. 제 153 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 악세사리 펩타이드는 귀소 펩타이드인 것을 특징으로 하는 조성물.
  155. 제 154 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 귀소 펩타이드는 독립적으로 RGD 펩타이드, iRGD, LyP-1 펩타이드, NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, HER2 결합 펩타이드 또는 그 배합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  156. 제 147 항 내지 제 155 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 뇌세포, 뇌조직 또는 둘다, 신장세포, 신장조직 또는 둘다, 피부 및 힘줄 세포, 피부 및 힘줄 조직 또는 둘다, 폐세포, 폐조직 또는 둘다, 췌장세포, 췌장조직 또는 둘다, 장세포, 장조직 또는 둘다, 부신세포, 부신조직 또는 둘다, 망막세포, 망막조직 또는 둘다, 간세포, 간조직 또는 둘다, 전립선 세포, 전립선 조직 또는 둘다, 자궁내막증 세포, 자궁내막증 조직 또는 둘다, 난소세포, 난소조직 또는 둘다, 심장 세포, 심장 조직 또는 둘다, 종양세포, 종양, 종양혈관 또는 그 배합체에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  157. 제 126 항 내지 제 156 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 iRGD를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  158. 제 126 항 내지 제 157 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 LyP-1 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  159. 제 126 항 내지 제 158 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 iNGR을 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  160. 제 126 항 내지 제 159 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 RGR 펩타이드를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  161. 제 147 항 내지 제 160 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 종양에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  162. 제 161 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 종양 혈관계에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  163. 제 147 항 내지 제 156 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 폐조직에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  164. 제 147 항 내지 제 156 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 또는 펩타이드는 선택적으로 심장조직에 귀소하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  165. 제 125 항 내지 제 164 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 세포에의 내재화를 위해 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  166. 제 125 항 내지 제 165 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 조직 침투를 위해 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  167. 제 125 항 내지 제 166 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 아미노산 서열은 세포에의 내재화 및 조직 침투를 위해 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  168. 제 98 항 내지 제 166 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물의 세포, 조직 또는 세포/조직을 통한 또는 그 내로의 내재화, 침투 또는 둘 다는 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포, 조직 또는 세포/조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  169. 제 98 항 내지 제 166 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물의 조직을 통한 또는 그 내로의 침투는 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  170. 제 98 항 내지 제 166 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공조성물의 세포 및 조직을 통한 또는 그 내로의 내재화 및 침투는 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출될 때 향상되나, 세포 및 조직이 CendR 요소에 노출되지 않는 경우에는 향상되지 않는 것을 특징으로 하는 조성물.
  171. 제 98 항 내지 제 170 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 CendR 조성물 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  172. 제 171 항에 있어서,
    상기 CendR 조성물은 하나 이상의 악세사리 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  173. 제 171 항 또는 제 172 항에 있어서,
    상기 CendR 조성물은 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  174. 제 171 항 내지 제 173 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 조성물은 하나 이상의 귀소 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  175. 제 98 항 내지 제 170 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 요소는 CendR 콘쥬게이트 내에 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  176. 제 175 항에 있어서,
    상기 CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 악세사리 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  177. 제 175 항 또는 제 176 항에 있어서,
    상기 CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 카고 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  178. 제 98 항 내지 제 177 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CendR 콘쥬게이트는 하나 이상의 귀소 분자를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  179. 제 98 항 내지 제 178 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 악세사리 분자에 노출되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  180. 제 98 항 내지 제 179 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 귀소 분자에 노출되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  181. 제 98 항 내지 제 180 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 카고 조성물에 노출되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  182. 제 98 항 내지 제 181 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 CendR 요소에 노출되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  183. 제 98 항 내지 제 182 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포, 조직 또는 둘 다는 다수의 공조성물에 노출되는 것을 특징으로 하는 조성물.
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014189303A1 (ko) * 2013-05-23 2014-11-27 아주대학교산학협력단 뉴로필린에 특이적인 종양 침투성 펩타이드 및 이 펩타이드가 융합된 융합 단백질
WO2016089126A1 (ko) * 2014-12-03 2016-06-09 사회복지법인 삼성생명공익재단 뉴로필린 1(Neuropilin 1)에 대한 항체 및 이의 용도
WO2017039358A1 (ko) * 2015-09-01 2017-03-09 일동제약 주식회사 종양 투과성 펩타이드와 향-신생혈관생성 제제가 융합된 융합단백질을 유효성분으로 포함하는 암 또는 혈관신생관련 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물
WO2017209554A3 (ko) * 2016-06-03 2018-01-18 사회복지법인 삼성생명공익재단 항-nrp1 항체 스크리닝 방법
WO2017209553A3 (ko) * 2016-06-03 2018-01-18 사회복지법인 삼성생명공익재단 환자 유래 세포를 이용한 항체 스크리닝 방법
KR102176415B1 (ko) * 2019-08-02 2020-11-09 중앙대학교 산학협력단 원핵세포 투과성 재조합 단백질 및 이의 용도
US11085930B2 (en) 2016-06-03 2021-08-10 Aimed Bio Inc. Anti-NRP1 antibody screening method
US11199536B2 (en) 2016-06-03 2021-12-14 Aimed Bio Inc. Method for screening antibody using patient-derived tumor spheroids

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7501486B2 (en) * 2004-09-07 2009-03-10 Burnham Institute For Medical Research Peptides that selectively home to heart vasculature and related conjugates and methods
US9078428B2 (en) 2005-06-28 2015-07-14 Transmedics, Inc. Systems, methods, compositions and solutions for perfusing an organ
US8642009B2 (en) * 2005-12-16 2014-02-04 Catherine M. Shachaf Diagnostic system for the detection of skin cancer
US9457179B2 (en) 2007-03-20 2016-10-04 Transmedics, Inc. Systems for monitoring and applying electrical currents in an organ perfusion system
EP2538957B1 (en) 2010-02-26 2019-07-24 Vascular Biosciences, Inc. Car peptide for homing, diagnosis,&targeted therapy for pulmonary and fibrotic disorders
EP2555802A1 (en) 2010-04-08 2013-02-13 Sanford-Burnham Medical Research Institute Methods and compositions for enhanced delivery of compounds
WO2012118778A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Sanford-Burnham Medical Research Institute Truncated car peptides and methods and compositions using truncated car peptides
AU2012242578B2 (en) 2011-04-14 2016-07-21 Transmedics, Inc. Organ care solution for ex-vivo machine perfusion of donor lungs
US10179801B2 (en) 2011-08-26 2019-01-15 Sanford-Burnham Medical Research Institute Truncated LYP-1 peptides and methods and compositions using truncated LYP-1 peptides
US20140024501A1 (en) * 2012-07-19 2014-01-23 Juan Cruz Tabena Isern Swimming training device
EP3044314B1 (en) 2013-07-12 2019-04-10 SeNa Research, Inc. Methods and compositions for interference with dna polymerase and dna synthesis
AU2015271799B2 (en) 2014-06-02 2019-07-11 Transmedics, Inc. Ex vivo organ care system
EP3031821A1 (en) * 2014-12-08 2016-06-15 Life Science Inkubator polyomavirus VLPs with a fusion protein
EP3031820A1 (en) 2014-12-08 2016-06-15 Life Science Inkubator JC Polyomavirus VLP (virus-like particle) with a targeting peptide
EP3229588A4 (en) 2014-12-12 2019-03-13 Freed, Darren APPARATUS AND METHOD FOR ORGAN PERFUSION
KR101551306B1 (ko) * 2015-03-23 2015-09-09 아주대학교산학협력단 뉴로필린1 특이적 결합 펩타이드 및 이 펩타이드가 융합된 융합 단백질, 및 이의 용도
KR101846306B1 (ko) * 2015-03-31 2018-05-18 일동제약(주) 조직투과성 펩타이드와 항-혈관 내피세포 성장인자 제제가 융합된 융합단백질을 유효성분으로 포함하는 안질환 예방 및 치료용 약학적 조성물
US10669311B2 (en) 2015-04-23 2020-06-02 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute Targeted delivery system and methods of use therefor
EP3124052A1 (de) 2015-07-30 2017-02-01 Albrecht Piiper Verfahren zur diagnose von karzinomen mittels irgd und magnetresonanztomographie (mrt)
RU2599462C1 (ru) * 2015-09-22 2016-10-10 Общество с ограниченной ответственностью "БИОТЕХНОЛОГИЯ" (ООО "БИОТЕХНОЛОГИЯ") Способ полисигнальной активации апоптоза клеток злокачественных солидных опухолей
CN105294841A (zh) * 2015-11-24 2016-02-03 中国人民解放军第四军医大学 基于CendR内化增效序列的放射性核素标记肿瘤靶向分子影像探针及其合成方法与应用
EP3354270A4 (en) * 2016-10-21 2019-04-24 Obshestvo S Ogranichennoi Otvetstvennost'yu "Biotehnologiya" METHOD FOR ACTIVATION OF APOPTOSIS OF CELLS WITH MULTIPLE SIGNALING OF SOLID MALIGNANT TUMORS
WO2018085050A1 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute Compositions and methods for imaging tissues and tumors
RU2656188C1 (ru) * 2017-05-03 2018-06-04 Общество с ограниченной ответственностью "Анкрим" (ООО "Анкрим") Синтетическое анальгетическое средство пептидной природы и способ его применения
WO2018236931A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Allegro Pharmaceuticals, Inc. PEPTIDE COMPOSITIONS AND ASSOCIATED METHODS
EP3713410A4 (en) 2017-11-20 2021-01-20 Tevosol, Inc. EXCISED ORGAN INFUSION DEVICE
CN108676097B (zh) * 2018-05-24 2020-01-14 北京肽和生物科技有限公司 一种靶向肿瘤细胞的嵌合肽或嵌合蛋白及其应用
CN108948149A (zh) * 2018-07-11 2018-12-07 江苏省原子医学研究所 一种68Ga标记的化合物及其制备的弗林酶靶向PET显像剂
WO2020030954A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Integrative Medicine Clinic, Sia Theranostics-like protein sanps conjugated to integrin and pmsa targeting peptides and therapy of prostate cancer
WO2020161602A1 (en) 2019-02-04 2020-08-13 University Of Tartu Bi-specific extracellular matrix binding peptides and methods of use thereof
EP3934680A4 (en) * 2019-03-08 2022-12-07 Cend Therapeutics, Inc. LOW-DOSE CYTOKINE ADMINISTRATED WITH ANYTHING FOR THE TREATMENT OF CANCER
CN114555625A (zh) * 2019-07-02 2022-05-27 塔夫茨学院托管部 用于将剂递送至细胞和组织中的新型肽、组合物和方法
US10915081B1 (en) * 2019-09-20 2021-02-09 Fisher-Rosemount Systems, Inc. Edge gateway system for secured, exposable process plant data delivery
US11436242B2 (en) 2019-09-20 2022-09-06 Fisher-Rosemount Systems, Inc. Edge gateway system with contextualized process plant knowledge repository
US11165839B2 (en) 2019-09-20 2021-11-02 Fisher-Rosemount Systems, Inc. Edge gateway system with data typing for secured process plant data delivery
EP4146274A4 (en) * 2020-05-04 2024-04-17 Drugcendr Australia Pty Ltd METHODS OF TREATING PANCREATIC CANCER AND OTHER SOLID TUMORS
EP3913370A1 (en) 2020-05-18 2021-11-24 Albrecht Piiper Method for diagnosing carcinomas using irgd as a tumor marker booster
JP2024517221A (ja) * 2021-05-04 2024-04-19 センド セラピューティクス，インコーポレイテッド ｉＲＧＤ類似体及び関連する治療方法
CN116251195B (zh) * 2022-12-27 2023-12-05 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 一种紫杉醇靶向肽偶联物及其应用

Family Cites Families (103)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3556722A (en) 1966-09-24 1971-01-19 Furukawa Mining Co Process for treating sulfurous acid gas-containing exhaust gas
NO812612L (no) 1980-08-06 1982-02-08 Ferring Pharma Ltd Enzym-inhibitorer.
US5262176A (en) 1986-07-03 1993-11-16 Advanced Magnetics, Inc. Synthesis of polysaccharide covered superparamagnetic oxide colloids
US6552170B1 (en) 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
US5554728A (en) 1991-07-23 1996-09-10 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Lipid conjugates of therapeutic peptides and protease inhibitors
US5536814A (en) 1993-09-27 1996-07-16 La Jolla Cancer Research Foundation Integrin-binding peptides
US5569745A (en) 1994-02-25 1996-10-29 Resolution Pharmaceuticals Inc. Peptide-Chelator conjugates
US5662885A (en) 1994-07-22 1997-09-02 Resolution Pharmaceuticals Inc. Peptide derived radionuclide chelators
CA2232344C (en) 1995-10-20 2005-04-05 University Of Nebraska Board Of Regents Compositions and methods for enhancing immune responses mediated by antigen-presenting cells
US6270954B1 (en) 1996-04-10 2001-08-07 The Regents Of The University Of California Correction of genetic defects using chemical chaperones
US6465427B1 (en) 1996-07-12 2002-10-15 Mcgill University Compounds and methods for modulating cell adhesion
US6576239B1 (en) 1996-09-10 2003-06-10 The Burnham Institute Angiogenic homing molecules and conjugates derived therefrom
US6222654B1 (en) 1997-08-04 2001-04-24 Lucent Technologies, Inc. Optical node system for a ring architecture and method thereof
US6054312A (en) 1997-08-29 2000-04-25 Selective Genetics, Inc. Receptor-mediated gene delivery using bacteriophage vectors
US20030148263A1 (en) 1997-08-29 2003-08-07 Selective Genetics, Inc. Methods and compositions using genetic package display
US6723512B2 (en) 1997-08-29 2004-04-20 Selective Genetics Inc. Methods using genetic package display for detecting and identifying protein-protein interactions that facilitate internalization and transgene expression and cells or tissues competent for the same and methods for evolving gene delivery vectors
US6180084B1 (en) 1998-08-25 2001-01-30 The Burnham Institute NGR receptor and methods of identifying tumor homing molecules that home to angiogenic vasculature using same
EP0922446A1 (en) 1997-12-03 1999-06-16 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Solution-phase site-specific preparation of GRF-PEG conjugates
US6927278B1 (en) 1998-09-01 2005-08-09 Trustees Of The University Of Pennsylvania Peptide scaffolds for transfer of molecules into eukaryotic cells
US6420339B1 (en) 1998-10-14 2002-07-16 Amgen Inc. Site-directed dual pegylation of proteins for improved bioactivity and biocompatibility
GB9825555D0 (en) 1998-11-20 1999-01-13 Imp College Innovations Ltd Suppression of xenotransplant rejection
CA2381755A1 (en) 1999-08-26 2001-03-01 Vion Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for delivery of an agent using attenuated salmonella containing phage
CN1433478A (zh) 1999-12-30 2003-07-30 诺瓦提斯公司 用于基因治疗的新的胶体合成载体
US6530944B2 (en) 2000-02-08 2003-03-11 Rice University Optically-active nanoparticles for use in therapeutic and diagnostic methods
AU4801501A (en) 2000-05-26 2001-11-29 Transgene S.A. Complex for transferring an anionic substance of interest into a cell
US8263739B2 (en) * 2000-06-02 2012-09-11 Bracco Suisse Sa Compounds for targeting endothelial cells, compositions containing the same and methods for their use
GB0027328D0 (en) 2000-06-23 2000-12-27 Aventis Pharma Inc Bioengineered vehicles for targeted nucleic acid delivery
GB0103110D0 (en) 2000-08-25 2001-03-28 Aventis Pharma Inc A membrane penetrating peptide encoded by a nuclear localization sequence from human period 1
WO2002018572A2 (en) 2000-08-25 2002-03-07 Aventis Pharmaceuticals Inc Membrane penetrating peptides and uses thereof
AU2002220979A1 (en) 2000-10-13 2002-04-22 Xigen Sa Intracellular delivery of biological effectors by novel transporter peptide sequences
ATE456655T1 (de) 2000-10-16 2010-02-15 Genentech Inc Behandlungsverfahren unter verwendung von wisp- polypeptiden
US6673580B2 (en) 2000-10-27 2004-01-06 Genentech, Inc. Identification and modification of immunodominant epitopes in polypeptides
US7273722B2 (en) 2000-11-29 2007-09-25 Allergan, Inc. Neurotoxins with enhanced target specificity
CA2430562C (en) 2000-11-30 2010-02-02 The Penn State Research Foundation Dna methyl transferase inhibitors
AU2002240448A1 (en) 2001-02-15 2002-08-28 Baylor College Of Medicine Use of cell penetrating peptides to generate antitumor immunity
US20020193295A1 (en) 2001-05-04 2002-12-19 Emanuel Calenoff Immunogenic peptides and uses thereof
US20030083261A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Hongtao Yu Class of 12mer peptides that inhibit the function of the mitotic check point protein Mad2
DE60224816T2 (de) 2001-04-30 2009-01-22 ZyStor Therapeutics, Inc., Milwaukee Subzelluläres targeting von therapeutischen proteinen
US7629309B2 (en) 2002-05-29 2009-12-08 Zystor Therapeutics, Inc. Targeted therapeutic proteins
US20040005309A1 (en) 2002-05-29 2004-01-08 Symbiontics, Inc. Targeted therapeutic proteins
AU2002309567A1 (en) 2001-05-16 2002-12-03 The Children's Hospital Of Philadelphia Dna-antibody complexes to enhance gene transfer
GB0114719D0 (en) 2001-06-15 2001-08-08 Glaxo Group Ltd Compound
US20050071088A1 (en) 2001-08-13 2005-03-31 Landfield Philip W Gene expression profile biomarkers and therapeutic targets for brain aging and age-related cognitive impairment
US7671010B2 (en) 2002-08-30 2010-03-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods of use of targeting peptides for diagnosis and therapy of human cancer
EP1480657A4 (en) 2002-02-01 2006-07-05 Intradigm Corp POLYMERS FOR ADMINISTERING PEPTIDES AND SMALL MOLECULES IN VIVO / I
US7666979B2 (en) 2002-03-01 2010-02-23 Bracco International B.V. Methods for preparing multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications and methods of preparing the same
US20090176660A1 (en) 2002-03-12 2009-07-09 Seppo Yla-Herttuala Engineered Baculoviruses and Their Use
US7544767B2 (en) 2002-04-05 2009-06-09 Burnham Institute For Medical Research HMGN2 peptides and related molecules that selectively home to tumor blood vessels and tumor cells
GB0211658D0 (en) 2002-05-22 2002-07-03 Svanborg Catharina Novel therapies and methods of screening for therapeutic compounds
SE0201863D0 (en) 2002-06-18 2002-06-18 Cepep Ab Cell penetrating peptides
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
US20030125283A1 (en) 2002-09-16 2003-07-03 Gatenby Robert A. Therapy of proliferative disorders by direct irradiation of cell nuclei with tritiated nuclear targetting agents
US20040147027A1 (en) 2003-01-28 2004-07-29 Troy Carol M. Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof
CA2514979A1 (en) 2003-01-31 2004-09-02 Celldex Therapeutics, Inc. Antibody vaccine conjugates and uses therefor
KR100512483B1 (ko) 2003-05-07 2005-09-05 선바이오(주) 신규한 폴리에틸렌글리콜-말레이미드 유도체의 합성방법
GB0316294D0 (en) 2003-07-11 2003-08-13 Polytherics Ltd Conjugated biological molecules and their preparation
WO2005022362A2 (en) 2003-09-02 2005-03-10 The Regents Of The University Of Michigan Chemical address tags
US20050085417A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Thomas Jefferson University Compounds and methods for diagnostic imaging and therapy
EP2418281B1 (en) 2003-10-24 2016-06-01 Gencia Corporation Methods and compositions for delivering polynucleotides
US7431915B2 (en) * 2003-10-31 2008-10-07 The Regents Of The University Of California Peptides whose uptake by cells is controllable
US7985401B2 (en) 2003-10-31 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Peptides whose uptake by cells is controllable
US7655434B2 (en) 2004-02-03 2010-02-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Live-cell biosensor polypeptides and methods of use
US7514530B2 (en) 2004-04-26 2009-04-07 Centre National De La Recherche Scientifique Peptide carrier for delivering siRNA into mammalian cells
US20070287680A1 (en) 2004-05-10 2007-12-13 University Of Utah Research Foundation Combined Active and Passive Targeting of Biologically Active Agents
WO2005117992A2 (en) 2004-05-30 2005-12-15 Cemines, Inc. Controlled delivery of therapeutic compounds
US7604798B2 (en) 2004-07-15 2009-10-20 Northwestern University Methods and compositions for importing nucleic acids into cell nuclei
US8236523B2 (en) 2004-08-23 2012-08-07 The Johns Hopkins University Camp reporters and high throughput assays
US7501486B2 (en) 2004-09-07 2009-03-10 Burnham Institute For Medical Research Peptides that selectively home to heart vasculature and related conjugates and methods
WO2006044614A2 (en) 2004-10-14 2006-04-27 Sopherion Therapeutics, Inc. Anti-angiogenic peptides and methods of use thereof
EP1846041A4 (en) 2004-10-29 2008-05-07 Univ Rochester MODIFIED BACTERIOPHAGE VECTORS AND ITS USES
US20060147997A1 (en) 2004-11-30 2006-07-06 Virosys Pharmaceuticals, Inc. PenetraBodies: receptor-mediated targeted delivery of functionally-active human antibody fragments into cytosol for the treatment of chronic infections and diseases
WO2006062877A2 (en) 2004-12-04 2006-06-15 The Regents Of The University Of California Protein subcellular localization assays using split fluorescent proteins
US20060154340A1 (en) 2005-01-07 2006-07-13 Louie Michael T Expression of potato proteinase inhibitor II in microbial hosts
JP5103748B2 (ja) 2005-02-16 2012-12-19 東レ株式会社 医薬組成物
US7741113B2 (en) 2005-04-25 2010-06-22 Loma Linda University Cell-specific molecule and method for importing DNA into osteoblast nuclei
GB2427360A (en) 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
EP1919939A2 (en) 2005-07-27 2008-05-14 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Tight junction modulating peptide components for enhancing mucosal delivery
WO2007018431A2 (en) 2005-08-05 2007-02-15 Syntarga B.V. Triazole-containing releasable linkers and conjugates comprising the same
US20070212332A1 (en) 2005-08-11 2007-09-13 Department Of Veterans Affairs Methods for accelerating bone repair
US20070299043A1 (en) 2005-10-03 2007-12-27 Hunter William L Anti-scarring drug combinations and use thereof
WO2007049731A1 (ja) 2005-10-28 2007-05-03 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation 新規細胞膜透過ペプチド
US20090325866A1 (en) 2005-11-30 2009-12-31 Jung Moon Kim Non-activated wnt inhibition polypeptides and method for preparing the same
WO2007067733A2 (en) 2005-12-09 2007-06-14 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods to monitor rna delivery to cells
CA2633063A1 (en) 2005-12-16 2007-06-21 Diatos Cell penetrating peptide conjugates for delivering of nucleic acids intocells
WO2007076904A1 (en) 2005-12-30 2007-07-12 Evonik Röhm Gmbh Peptides useful as cell-penetrating peptides
CA2643075A1 (en) 2006-01-27 2007-08-09 The University Of Mississippi Medical Center Thermally-targeted delivery of medicaments, including doxorubicin
US7919466B2 (en) 2006-02-01 2011-04-05 The Regents Of The University Of California Lymphatic zip codes in tumors and pre-malignant lesions
ATE495197T1 (de) 2006-03-20 2011-01-15 Cepep Iii Ab Chimäre konstrukte zwischen auf krebs zielenden peptiden und zellpenetrierenden peptiden gekoppelt an antikrebsmittel und/oder diagnostische mittel
WO2007109648A2 (en) 2006-03-20 2007-09-27 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Compositions and methods for modulating store-operated calcium entry
WO2008100328A2 (en) 2006-07-13 2008-08-21 Burnham Institute For Medical Research METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETING gC1qR/p32
HU0600578D0 (en) 2006-07-13 2006-09-28 Szilak Labor Bioinformatikai E Nuclear protein transport
WO2008033285A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 The Trustees Of Culumbia University In The City Of New York Delivery of double-stranded rna into the central nervous system
US7906484B2 (en) 2006-09-21 2011-03-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complex for transferring an anionic substance into a cell
EP2839839B1 (en) 2007-02-28 2018-01-17 Yeda Research And Development Company Limited Nuclear targeting sequences
WO2008127840A2 (en) 2007-03-22 2008-10-23 University Of Iowa Research Foundation Flavivirus ns5a proteins for the treatment of hiv
US20100016215A1 (en) 2007-06-29 2010-01-21 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
US20090031733A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 General Electric Company Thermotunneling refrigeration system
US8506928B2 (en) 2007-09-07 2013-08-13 The Regents Of The University Of California Methods and compounds for targeting tissues
CN101854955B (zh) * 2007-09-10 2012-07-18 马萨诸塞大学 靶向线粒体的抗肿瘤剂
US8101388B2 (en) 2007-09-28 2012-01-24 Ut-Battelle, Llc Method and structure for extracting molecular species
CN101951938B (zh) * 2008-01-18 2016-04-13 伯纳姆医学研究所 内化rgd肽相关的方法和组合物
US11260133B2 (en) 2008-02-21 2022-03-01 Sanford-Burnham Medical Research Institute Methods and compositions related to peptides and proteins with C-terminal elements
US8753604B2 (en) 2008-12-23 2014-06-17 Sanford-Burnham Medical Research Institute Methods and compositions for synaphically-targeted treatment for cancer

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014189303A1 (ko) * 2013-05-23 2014-11-27 아주대학교산학협력단 뉴로필린에 특이적인 종양 침투성 펩타이드 및 이 펩타이드가 융합된 융합 단백질
WO2016089126A1 (ko) * 2014-12-03 2016-06-09 사회복지법인 삼성생명공익재단 뉴로필린 1(Neuropilin 1)에 대한 항체 및 이의 용도
US10364289B2 (en) 2014-12-03 2019-07-30 Samsung Life Public Welfare Foundation Antibody binding to neuropilin 1 and use thereof
WO2017039358A1 (ko) * 2015-09-01 2017-03-09 일동제약 주식회사 종양 투과성 펩타이드와 향-신생혈관생성 제제가 융합된 융합단백질을 유효성분으로 포함하는 암 또는 혈관신생관련 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물
US10919947B2 (en) 2015-09-01 2021-02-16 Il Dong Pharmaceutical Co., Ltd. Pharmaceutical composition containing, as active ingredient, fusion protein in which tumor-penetrating peptide and anti-angiogenesis agent are fused, for preventing and treating cancer or angiogenesis-related diseases
WO2017209554A3 (ko) * 2016-06-03 2018-01-18 사회복지법인 삼성생명공익재단 항-nrp1 항체 스크리닝 방법
WO2017209553A3 (ko) * 2016-06-03 2018-01-18 사회복지법인 삼성생명공익재단 환자 유래 세포를 이용한 항체 스크리닝 방법
US11085930B2 (en) 2016-06-03 2021-08-10 Aimed Bio Inc. Anti-NRP1 antibody screening method
US11199536B2 (en) 2016-06-03 2021-12-14 Aimed Bio Inc. Method for screening antibody using patient-derived tumor spheroids
KR102176415B1 (ko) * 2019-08-02 2020-11-09 중앙대학교 산학협력단 원핵세포 투과성 재조합 단백질 및 이의 용도

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