BRPI0923569B1 - Anticorpo monoclonal anti-hcv, composição farmacêutica e uso - Google Patents
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Abstract
anticorpo anti-hcv como um medicamento para tratamento terapêutico e prevenção das infecções por hcv a presente invenção refere-se ao anticorpo monoclonal e20 ou um fragmento funcional do mesmo como um medicamento para um tratamento terapêutico e prevenção das infecções por hcv. o anticorpo e20 é capaz de se ligar a todos os genótipos hcv conhecidos e exibe uma forte atividade neutralizante contra o vírus, particularmente para os genótipos ia, ib, 2(a) e 4. uma composição farmacêutica também é descrita para o tratamento ou prevenção de infecções por hcv, que compreende o anticorpo monoclonal e20 ou um fragmento funcional do mesmo, e escipientes, veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.
Description
A presente invenção refere-se a um anticorpo monoclonal contra a glicoproteína E2 do vírus da hepatite C (HCV) como um medicamento para o tratamento terapêutico e prevenção das infecções pelo HCV. HCV é um vírus que tem um pericapsídeo e um RNA de fita simples, pertencente à família Flavivirus. Com base nas diferenças genéticas observadas entre os diferentes isolados de HCV, esta espécie de vírus é classificada em 6 genótipos diferentes, cada um dos quais sendo marcado com um número. Cada genótipo, por sua vez, compreende uma série de subtipos, cada um deles sendo marcado com uma letra. A prevalência e a distribuição dos diferentes genótipos do HCV são variáveis em todo o mundo. Na Europa, o genótipo predominante é 1b, enquanto na América do Norte, o genótipo 1a prevalece. A determinação do genótipo é importante do ponto de vista clínico, uma vez que tal característica contribui na determinação da resposta potencial para a terapia com base na combinação de interferon alfa com a ribavirina, que é atualmente o tratamento mais utilizado.
De fato, os genótipos 1 e 4 são menos responsivos do que os genótipos 2, 3, 5 e 6 para a terapia à base de interferon.
Até o momento, nenhuma vacina e nem imunoterapias estão disponíveis, que provaram ser realmente eficazes contra o vírus da hepatite C. A alta variabilidade de estrutura antigênica de HCV tem até o momento impedido o desenvolvimento de anticorpos capazes de neutralizar o vírus, enquanto sendo dotado com reatividade cruzada para os genótipos de vírus diferentes. Há, portanto, uma necessidade por anticorpos anti-HCV que são fornecidos com tais características e, consequentemente, são realmente eficazes na terapia e prevenção das infecções pelo HCV.
Anticorpos direcionados contra o HCV são descritos na técnica anterior. Por exemplo, Burioni et al., Hepatology Vol. 28, n. 3, de 1998, descrevem a clonagem e caracterização de sequências que codificam cinco fragmentos de anticorpos humanos recombinantes (Fab) específicos para a glicoproteína E2 de HCV (E2 HCV), capaz de se ligar as glicoproteínas de diferentes genótipos do vírus (reatividade cruzada). Entre os Fabs descritos neste artigo há o fragmento de anticorpo designado como e20. Burioni et al., 1998, cit. descrevem que e20 tem uma alta atividade mínima na neutralização da ligação ao E2 HCV (atividade NOB). No entanto, apesar da alta atividade NOB, no pedido de patente internacional WO 03/064473, o fragmento de anticorpo e20 é descrito como incapaz de neutralizar a infecção viral mesmo em altas concentrações (80 μg/mL) (ver, em particular, a página 16, linhas 8 a 10 em WO 03/064473).
Os inventores averiguaram surpreendentemente agora que, ao contrário do que é afirmado na técnica anterior e em particular em WO 03/064473, o fragmento e20 é capaz de neutralizar efetivamente a infecção por diferentes genótipos de HCV in vitro. Isso torna o e20 particularmente adequado para neutralização de HCV e eliminação de células infectadas por HCV e para uso como um medicamento para a imunoterapia e imunoprevenção de infecções por HCV.
A obtenção de tal resultado necessitou de um longo e complexo trabalho experimental, que é ilustrado em detalhes na seção experimental a seguir.
Em síntese extrema, o trabalho experimental realizado pelos presentes inventores permitiu demonstrar que o fragmento de anticorpo e20 apresenta as seguintes características inesperadas: - ele é gerado durante uma infecção natural devido a um tipo HCV pertencente ao genótipo 1b, mas é capaz de se ligar às glicoproteínas de todos os genótipos HCV conhecidos (particularmente genótipos 1a, 1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 e 6) e, como tal, é bastante reativo de modo cruzado; - ele possui uma capacidade de neutralização particularmente elevada para genótipos HCV 1a, 1b, 2a e 4, conforme medido pelo ensaio de neutralização à base de pseudopartículas de HCV (HCVpp); - determinados resíduos de aminoácidos essenciais para a ligação de e20 à glicoproteína E2 HCV também são essenciais na infecção por HCV, o que sugere que mutantes capazes de escapar da ligação ao e20 são, ao mesmo tempo, fornecidos com uma capacidade de replicação reduzida.
As características acima mencionadas são aparentemente vantajosas para o fim de uso do fragmento de anticorpo e20 como um medicamento para a imunoterapia e immunoprevenção de infecções por HCV.
Um primeiro objeto da invenção é, assim, um anticorpo monoclonal ou um fragmento do mesmo, capaz de se ligar à glicoproteína E2 de HCV a partir de uma pluralidade de diferentes genótipos HCV, como um medicamento para o tratamento terapêutico ou prevenção de infecções por HCV, caracterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo compreende pelo menos uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1 ou uma sequência pelo menos 90% idêntica à SEQ ID NO: 1 e pelo menos uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 2 ou uma sequência pelo menos 90% idêntica à SEQ ID NO: 2.
Porcentagens de identidade de sequência adicionalmente preferidas são pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, em que a expressão “pelo menos” refere-se a cada uma das porcentagens listadas.
Em uma modalidade da invenção, a região variável de cadeia pesada é codificada pela sequência de nucleotídeos SEQ ID NO: 3, e a região variável da cadeia leve é codificada pela SEQ ID NO: 4.
O termo “anticorpo” destina-se a se referir a qualquer classe de imunoglobulinas de comprimento total e qualquer fragmento do mesmo compreendendo uma região variável da cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada, como, por exemplo, uma Fab, uma F(ab’)2, uma CDR (Região Determinante de Complementaridade) ou um anticorpo de cadeia única que compreende regiões variáveis de cadeia pesada, assim como de cadeia leve ou CDRs, ou armações compreendendo uma ou mais cópias de fragmentos de CDR a partir de regiões variáveis de cadeia pesada e leve de imunoglobulina. Isto inclui fragmentos de anticorpos funcionais designados como ScFvs, diacorpos, VHHs ou cadeias pesadas ou leves isoladas. A expressão “anticorpo” ainda engloba anticorpos que podem ser gerados usando as sequências da região variável de fragmento de anticorpo e20 em um processo de baralhamento para a região variável da cadeia leve, a fim de estabelecer combinações VH/VL com afinidade, estabilidade e/ou propriedades de produção recombinantes melhoradas. A expressão “anticorpo” também inclui qualquer tipo de imunoglobulina de comprimento total ou fragmento de imunoglobulina fundida às imunoglobulinas de comprimento total ou fragmentos de imunoglobulina, que podem direcionar o fragmento de anticorpo e20 ou a imunoglobulina a tecidos, células ou estruturas de proteínas solúveis específicos. O anticorpo monoclonal da invenção é de preferência humano.
O anticorpo utilizado na invenção pode estar na forma livre ou em uma forma conjugada. Uma forma conjugada é um anticorpo, como definido acima, conjugado com uma molécula capaz de modular a persistência in vivo, promover ou limitar a distribuição corporal, diminuindo a sensibilidade aos agentes proteolíticos, diminuindo a antigenicidade, aumentando a capacidade citotóxica e/ou facilitando a detecção em fluidos corporais e tecidos. Exemplos não- limitativos de moléculas adequadas para conjugação incluem albumina de soro humano, proteína de ligação à maltose, glutationa-S-transferase, proteínas p3 ou p8 de capa de peptídeos, açúcares, moléculas tipo PEG ou PEG, toxinas derivadas de animais, vegetais ou micróbios, citocinas, enzimas, compostos quimiluminescentes, compostos bioluminescentes, átomos de metal, radioisótopos, compostos fluorescentes, grupos de marcação ou substratos para a fosforilação, glicosilação, ubiquitinação SUMOilação ou clivagem endoproteolítica. A fim de facilitar a conjugação, o anticorpo C-terminal ou N-terminal pode ser modificado, por exemplo, através da inserção de resíduos de aminoácidos adicionais, por exemplo, um ou mais resíduos de cisteína que sejam capazes de formar pontes dissulfeto. O anticorpo utilizado na invenção também pode ser ligado a eritrócitos humanos ou outros veículos celulares, para formulações específicas ou para sistemas de liberação sustentada tais como, mas sem limitação, a lipossomas, dendrímeros, microssomos, nanopartículas, microcápsulas, vetores virais e similares.
Outro objeto da invenção é uma composição farmacêutica para o tratamento terapêutico ou prevenção de infecções por HCV, que compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo, tal como definido acima.
A composição da invenção pode ser administrada a um indivíduo infectado ou em risco de ser infectado com HCV. Qualquer via de administração adequada pode ser utilizada, incluindo administração parenteral, oral, ocular, tópica, loco-regional, enema ou aerossol. A administração parenteral inclui a injeção intramuscular, injeção intravenosa, injeção intralinfática, injeção subcutânea ou intradérmica e infusão.
A composição da invenção pode ser preparada em qualquer forma farmacêutica que seja adequada para a via de administração selecionada, por exemplo, na forma de uma solução ou suspensão injetável, infusão, comprimido, cápsula, creme, unguento, loção ou supositório.
A composição da invenção compreende o anticorpo ou um fragmento do mesmo, conforme definido acima, como o princípio ativo, bem como excipientes, veículos ou diluentes farmaceuticamente adequados conhecidos para a pessoa versada na técnica.
Um objeto adicional da invenção é um anticorpo antiidiotipo capaz de se ligar especificamente ao idiotipo do anticorpo ou fragmento do mesmo, tal como definido acima. O anticorpo antiidiotipo da invenção pode ser obtido por métodos convencionais para a obtenção de anticorpos antiidiotipo, que são conhecidos per se para a pessoa versada na técnica.
A invenção é adicionalmente descrita em detalhes na seção experimental a seguir fornecida somente a título de ilustração, por referência às figuras anexas, em que:
A figura 1 mostra a ligação de e20 às glicoproteínas HCV E2 de genótipos diferentes. Os dados são apresentados como a porcentagem de células fluorescentes positivas.
A figura 2 mostra a atividade neutralizante do e20 Fab pelo uso de pseudopartículas virais que exibem glicoproteínas E1-E2 do genótipo 1a: UKN1A20.8 (a); genótipo E1E2 1b: UKN1B5.23 (b); genótipo E1E2 2a: UKN2A1.2 (c); genótipo E1E2 2b: UKN2B1.1 (d); genótipo E1E2 4: UKN4.21.16 (e). (f) Atividade neutralizante de e20 Fab a 15 μg/mL usando pseudopartículas virais que exibem E1-E2 de diferentes genótipos (UKN1A20.8, UKN1B5.23, UKN2A1.2, UKN2B1.1; UKN3A13.6, UKN4.21.16 , UKN5.15.11, UKN6.5.8).
A figura 3 mostra a atividade neutralizante de e20 e outros anticorpos anti-HCV (e137, AP33) usando o sistema HCVcc (genótipo 2a). A infectividade de JFH-1 na presença de e20 e o controle negativo Fab (c33-3) são apresentados como a quantidade de RNA viral normalizada para RNA de gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase, conforme determinado por PCR de transcrição reversa quantitativa.
A preparação de bibliotecas combinatórias aleatórias exibidas nas superfícies de fagos filamentosos representa uma ferramenta altamente potente para a seleção de anticorpos monoclonais humanos de alta afinidade. Na verdade, o processo de seleção com base na exibição de fago é extremamente versátil e pode ser otimizado de modo a selecionar anticorpos de reação cruzada. Em particular, e20 foi clonado como um fragmento Fab IgG1 do repertório de linfócitos B de uma mulher de 58 anos de idade, que foi persistentemente infectada com uma cepa HCV pertencente ao genótipo 1b. A fim de selecionar os clones de reação cruzada, a biblioteca derivada do paciente foi submetida a ao uso de placas revestidas com antígeno contra a glicoproteína E2 de HCV recombinante derivada de um isolado de vírus pertencente a um genótipo diferente, que é 1a. Resumidamente, com esta abordagem tem sido possível obter anticorpos que são gerados durante uma infecção natural, ainda que todos sejam capazes de se ligar a diferentes glicoproteínas nunca encontradas pelo sistema imune do paciente selecionado para o estudo.
O sequenciamento dos genes de cadeia pesada e leve e20 e o estudo de seus padrões de mutação (Tabela 1) mostraram que este anticorpo é derivado de um processo de mutação somática, que é um processo estimulado em um clone de anticorpo pelo contato contínuo com o antígeno específico, a fim de melhorar a afinidade do anticorpo em si para o antígeno.
Em relação à cadeia pesada, e20 exibe uma homologia de sequência de nucleotídeos com o gene da linhagem germinal abaixo de 85%. O padrão de mutação mostra uma distribuição típica para um clone somaticamente modificado, com uma polarização específica nas Regiões Determinantes de Complementaridade (CDRs). O exame da região de união e20 (que é a região de união que gera a CDR3) mostra que esta é composta de um gene V pertencente à subfamília VH1-69 (um gene altamente representado em uma resposta humoral anti- HCV humana), um gene D pertencente à subfamília D2-21, e um gene JH pertencente à subfamília JH4.
De maneira semelhante, a cadeia leve e20 (isotipo K) apresenta um porcentual de mutação consistente com um processo de mutação somática, como mostrado pela polarização nas CDRs. O exame da região de união revela que a CDR3 da cadeia leve e20 surge a partir da união de um gene kV pertencente à subfamília kV3-15, e um gene kJ pertencente à subfamília kJ5.
Os dados da sequência permitem a conclusão de que e20 não é um anticorpo artificial, mas pelo contrário, ele está efetivamente presente no repertório de anticorpo do paciente selecionado para o estudo. Tabela 1 a)
b) 
A Tabela 1 aqui acima mostra os padrões de mutação para as linhagens germinativas e o gene V na cadeia pesada a) e na cadeia leve b) de e20. As porcentagens de mutação de aminoácidos e nucleotídeo foram calculadas de acordo com o método de alinhamento de Kabat e Wu, levando em consideração FR1, FR2 e FR3 para as cadeias leves e pesadas, CDR1 e CDR2 para as cadeias pesadas e CDR1, CDR2 e CDR3 para as cadeias leves. A proporção de mutações de substituição (R) para mutações silenciosas (S) também é relatada.
O fragmento e20 na forma de Fab foi testado quanto a capacidade de reconhecer a glicoproteína E2 dos genótipos HCV diferentes de 1b (isto é, o genótipo do tipo que infectou o paciente, de quem foi obtido e20) e 1a (isto é, o genótipo utilizado para a clonagem de Fab). As dificuldades experimentadas na obtenção de formas E2 solúveis de diferentes genótipos HCV requerem o uso de uma abordagem baseada em FACS alternativa. Resumidamente, células renais epiteliais humanas 293T (HEK) foram cultivadas em meio Eagle Modificado da Dulbecco (DMEM) suplementado com de soro de bezerro fetal 10%, 5% de aminoácidos não-essenciais, glutamina 200 mM, estreptomicina (100 μg/mL) e penicilina (100 U/mL). Uma vez que 80% de confluência foi alcançada, 2 x 106células HEK foram semeadas em placas de 10 cm e 24 horas depois foram transfectadas com 3 μg de phCMV-7, uma vetor de expressão que codifica as glicoproteínas E1E2 de diferentes genótipos HCV, usando um protocolo de transfecção de fosfato de cálcio. O médio foi substituído 16 horas após a transfecção e as células foram a seguir incubadas a 37 °C por 24 horas. O meio foi descartado e a monocamada de células foi lavada duas vezes com PBS. 5 mL de tampão de dissociação foram adicionados e as células foram incubadas a 37 °C por 5 minutos. As células foram lavadas duas vezes com PBS e centrifugadas a 1000 rpm por 5 minutos; 1,2 mL de reagente de fixação foram adicionados ao pélete obtido a partir de cada placa. As células foram incubadas por 15 minutos em temperatura ambiente. As amostras foram lavadas em 5 mL de PBS suplementado com 2% de soro de bezerro fetal (FPBS), a seguir centrifugadas a 1000 rpm por 5 minutos. 100 μL do reagente permeabilizante foram adicionados ao pélete com 50 μL de Fab e20 em uma concentração final de 10 μg/mL. Um protocolo semelhante também foi seguido para células não-transfectadas, utilizadas como controle. Depois de uma incubação de 40 minutos em temperatura ambiente, as amostras foram lavadas em 5 mL de FPBS e 50 μL de anticorpo secundário conjugado com FITC foram adicionados ao pélete. As células foram incubadas por 20 minutos em temperatura ambiente e foram lavadas duas vezes em 5 mL de FPBS. Finalmente, o sobrenadante foi removido, o pélete foi ressuspenso em 300 μL de FPBS, e as células foram analisadas por FACS. A atividade de ligação foi expressa como a porcentagem de células fluorescentes positivas obtidas a partir da porcentagem de células com um nível de fluorescência maior do que as células sem Fab e20. Um Fab humano recombinante (c33-3) específico para um antígeno HCV não-estrutural (NS3) foi incluído como controle negativo em cada experimento.
Esta abordagem mostrou que Fab e20 foi capaz de reconhecer todos os genótipos HCV E2 expressos (1a; 1b; 2a; 2b; 3; 4; 5; 6), com um maior porcentual de células fluorescentes do que aquele obtido com o controle Fab. Os resultados são mostrados na Figura 1.
Avaliação da ligação de e20 às glicoproteínas E2 a partir de HCV 1a modificado nas regiões de ligação CD81
Fab e20 também foi testado contra um painel de E1E2 derivado de H77 (genótipo 1a) modificado dentro das regiões conservadas, descrito como sendo crucial para a ligação de CD81 e para a infectividade das pseudopartículas de HCV (HCVpp). Cada local conservado nesta região foi modificado na alanina. Todas estas substituições resultaram em perda de infectividade no ensaio HCVpp descrito abaixo. A ligação do Fab e20 da glicoproteína E2 HCV é anulada por algumas dessas mutações cruciais (Tabela 2).
Os dados descritos na Tabela 2 sugerem que e20 se liga a uma região E2 essencial para a infecção viral. Estes dados também confirmam que e20 se liga a uma região crítica para a ligação de AP33, o anticorpo anti-HCV neutralizante com a maior reatividade cruzada, porém menos adequado como um modelo para o design de um medicamento de vacina e para o uso na imunoterapia, levando em consideração que a imunoterapia com anticorpos heterólogos não é viável e que a presença de anticorpos semelhantes no repertório humano é extremamente rara (Tarr et al. J Gen Virol. 88:2991. 2007).
Ainda de modo mais interessante, esta análise mostrou claramente que todos os mutantes não reconhecidos por e20 não permitem a infecção de células alvo em um modelo pseudoviral. Tabela 2
A Tabela 2 aqui acima mostra a ligação de e20 ao E1E2 derivado de mutantes H77 (genótipo 1a). A atividade de ligação é expressa como a porcentagem daquela medida com a proteína H77 tipo selvagem.
A atividade de neutralização Fab foi a seguir verificada em um ensaio de neutralização baseado em pseudopartículas HCV (HCVpp).
Resumidamente, células renais epiteliais humanas 293T (HEK) e células de hepatoma humano Huh-7 foram cultivadas em DMEM suplementado com 10% de soro de bezerro fetal, 5% de aminoácidos não-essenciais, glutamina 200 mM, estreptomicina (100 μg/mL) e penicilina (100 U/mL). Uma vez que 80% de confluência foi alcançado, 2 x 106células HEK foram semeadas em placas de 10 cm e 24 horas depois foram co-transfectadas com 8 μg de vetor viral de leucemia de camundongo (MLV) Gag-Pol, 8 μg de vetor de transferência MLV que codifica a luciferase, e 3 μg de vetor de expressão phCMV-7a de comprimento total que codifica as glicoproteínas E1E2 de diferentes genótipos HCV. Um dia depois, o meio de transfecção foi substituído com 5 mL de meio fresco contendo HEPES 10 mM. As células foram incubadas por 24 horas a 37 °C. As células-alvo (Huh-7) foram semeadas em placas de 24 poços a 2,5 x 104por poço e incubadas de um dia para o outro a 37 °C. As pseudopartículas de HCV (HCVpp) foram coletadas 24 horas após a substituição do meio, centrifugadas a 2000 rpm por 10 minutos e filtradas através de membranas de tamanho de poro de 0,45 μM e usadas em um ensaio de neutralização.
Em particular, 60 μL de meio contendo HCVpp foram misturados com 90 μL de diferentes concentrações de Fab e20 e incubados por 1 hora a 37 °C. Tal mistura foi adicionada às células alvo Huh-7 e as células foram incubadas por 3 horas a 37 °C. Finalmente, a inoculação foi removida, 1 mL de meio fresco foi adicionado a cada poço e as células foram incubadas a 37 °C por 4 dias. As células foram lavadas duas vezes com PBS e a seguir lisadas com 100 μL de tampão de lise (Promega), seguindo as instruções do fabricante. O lisado celular foi transferido para placas de 96 poços e 100 μL de substrato/tampão (Promega) foram adicionados a cada poço. A infecção das células foi analisada através da medição da atividade da luminescência (leitor de placas Chameleon, Hidex), dado em unidades de luz relativa (RLUs). A atividade neutralizante foi determinada como a porcentagem de infecção, pela comparação da luminescência obtida com aquela detectada nos poços HCVpp na ausência de anticorpos capazes de competição (neg). Um Fab humano recombinante (c33-3) específico para um antígeno HCV não-estrutural (NS3) foi incluído como controle negativo em cada experimento.
Esta abordagem mostrou que e20 é capaz de neutralizar fortemente genótipos HCV 1a e 4. E20 exibe uma atividade neutralizante de 50% no genótipo 1a em concentrações de 7,5 mg/mL e uma inibição de 75% no genótipo 4 a 15 mg/mL (Figuras 2a, 2e e 2f). No entanto, este anticorpo também é capaz de neutralizar fortemente genótipos HCV 1b e 2a. Em mais detalhes, a 15 mg/mL, e20 mostra uma neutralização de 40% e 75% de infectividade dos genótipos 1b e 2a, respectivamente (Figuras 2b, 2c e 2f). Finalmente, e20 é capaz de neutralizar em um menor grau HCVpps tendo glicoproteínas E1E2 de genótipo-2b, mostrando uma inibição de 20% a 15 mg/mL (Figuras 2d e 2f).
A atividade neutralizante de HCV e20 também foi testada usando um sistema modelo HCVcc (cultura de células HCV), usando uma linhagem de células de hepatoma humano estáveis contendo um DNAc, integrado em um cromossomo, a partir do genótipo de HCV 2a (JFHl) e altamente produzindo vírus infecciosos (Figura 3). Tal sistema permite a avaliação da atividade neutralizante usando um tipo de vírus de hepatite C infeccioso. Neste conjunto de experimentos, diferentes concentrações de Fab e20 foram incubadas com o meio contendo o vírus gerado no ensaio HCVcc. Após 3 horas, a mistura foi adicionada às células- alvo (Huh7.5). A infectividade foi avaliada através da medição dos níveis do RNA de fita positiva de HCV. Fab e20 mostrou uma forte atividade neutralizante, como em uma concentração de 1 μg/mL, que é muito baixa, é capaz de anular completamente a capacidade de infecção do genótipo 2ade HCV. A atividade neutralizante de Fab e20 é comparável com a do anticorpo monoclonal de IgG de camundongo AP33, um dos anticorpos de neutralização cruzada 5 mais forte descritos até o momento.
Claims (9)
1. Anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo, capaz de ligar a glicoproteína HCV E2 a partir de genótipos 1a, 1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 e 6 de HCV, caracterizadopelo fato de que o anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo compreende pelo menos uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 1 e pelo menos uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 2.
2. Anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopor ser uma imunoglobulina de tamanho completo ou um fragmento de imunoglobulina compreendendo pelo menos uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve.
3. Anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizadopelo fato de que o fragmento é selecionado a partir de uma Fab, um F(ab')2, ou um anticorpo de cadeia única que compreende regiões variáveis tanto de cadeia pesada quanto da leve.
4. Anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizadopor ser conjugado com uma molécula capaz de modular a persistência in vivo, promover ou limitar a distribuição corporal, diminuir a sensibilidade aos agentes proteolíticos, diminuir antigenicidade, aumentar a capacidade citotóxica e/ou facilitar a detecção em fluidos e tecidos corporais.
5. Anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizadopor ser fundido com uma imunoglobulina de comprimento total específica ou fragmento de imunoglobulina capaz de atingir o anticorpo para tecidos, células ou estruturas de proteínas solúveis.
6. Composição farmacêutica para o tratamento terapêutico ou prevenção de infecções pelo HCV caracterizada por compreender uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo, tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5.
7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizadapor estar em uma forma farmacêutica adequada para parenteral, oral, ocular, tópica, loco-regional, enema ou aerossol.
8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizadapor estar na forma de uma solução injetável ou suspensão, uma infusão, um comprimido, uma cápsula, um creme, uma pomada, uma loção ou um supositório.
9. Uso de um anticorpo monoclonal ou fragmento do mesmo, tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizadopor ser para a preparação de um medicamento para o tratamento terapêutico ou prevenção de infecções pelo HCV.
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