RU2596409C2 - Моноклональное антитело против hcv в качестве лекарственного средства для терапевтического лечения и профилактики инфекций hcv - Google Patents
Моноклональное антитело против hcv в качестве лекарственного средства для терапевтического лечения и профилактики инфекций hcv Download PDFInfo
- Publication number
- RU2596409C2 RU2596409C2 RU2011130522/10A RU2011130522A RU2596409C2 RU 2596409 C2 RU2596409 C2 RU 2596409C2 RU 2011130522/10 A RU2011130522/10 A RU 2011130522/10A RU 2011130522 A RU2011130522 A RU 2011130522A RU 2596409 C2 RU2596409 C2 RU 2596409C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hcv
- fragment
- monoclonal antibody
- antibody
- variable region
- Prior art date
Links
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title abstract description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 17
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 11
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 claims description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 abstract description 17
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108010073141 Hepatitis C virus glycoprotein E2 Proteins 0.000 description 55
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 description 2
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 2
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000001985 kidney epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- -1 microsomes Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000122205 Chamaeleonidae Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003241 endoproteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108010027225 gag-pol Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 229940102213 injectable suspension Drugs 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical group 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000010741 sumoylation Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1081—Togaviridae, e.g. flavivirus, rubella virus, hog cholera virus
- C07K16/109—Hepatitis C virus; Hepatitis G virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Данное изобретение относится к области биотехнологии. Предложено применение моноклонального антитела или его фрагмента, содержащих по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи и по меньшей мере одну вариабельную область легкой цепи антитела e20 и способных связываться с гликопротеином Е2 HCV из генотипов 1а, 1b, 2а, 2b или 4, для нейтрализации инфекции вируса гепатита С (HCV). Настоящее изобретение может найти дальнейшее применение в лечении и профилактике инфекций HVC. 5 з.п. ф-лы, 2 табл., 3 ил.
Description
Настоящее изобретение относится к моноклональному антителу против гликопротеина E2 вируса гепатита C (HCV) в качестве лекарственного средства для терапевтического лечения и профилактики инфекций HCV.
HCV представляет собой вирус, имеющий перикапсид и одноцепочечную РНК, который принадлежит к семейству Flavivirus. Основываясь на генетических различиях, наблюдаемых среди различных изолятов HCV, этот вид вируса разделяют на 6 различных генотипов, каждый из которых обозначен номером. В свою очередь, каждый генотип содержит несколько субтипов, каждый из которых обозначен буквой. Частота заболеваний и распространение различных генотипов HCV различны по всему миру. В Европе преобладающим генотипом является генотип 1b, тогда как в Северной Америке преобладает генотип 1a. Определение генотипа важно с клинической точки зрения, поскольку такой признак способствует определению возможного ответа на лечение, основанное на комбинации интерферона-α с рибавирином, которое является в настоящее время наиболее используемым лечением. Фактически генотипы 1 и 4 менее чувствительны, чем генотипы 2, 3, 5 и 6, к лечению, основанному на интерфероне.
До сих пор не существует вакцин и иммунотерапевтических средств, для которых действительно доказана эффективность против вируса гепатита C. Высокая вариабельность антигенной структуры HCV до сих пор является помехой для разработки антител, способных нейтрализовать вирус, которые при этом обеспечивают перекрестную реактивность с различными генотипами вируса. Таким образом, существует потребность в антителах против HCV, которые обладают такими признаками и, таким образом, действительно обладают эффективностью при лечении и профилактике инфекций HCV.
Антитела, направленные против HCV, описаны в предшествующем уровне техники. Например, Burioni et al., Hepatology Vol. 28, n. 3, 1998, описывают клонирование и определение характеристик последовательностей, кодирующих пять фрагментов рекомбинантных антитела человека (Fab), обладающих специфичностью к гликопротеину E2 HCV (HCV E2), которые способны связываться с гликопротеинами различных генотипов вируса (перекрестная реактивность). Среди описанных в данной статье Fab представлен фрагмент антитела, обозначенный e20. Burioni et al., 1998, cit. пишут, что e20 обладает высокой минимальной активностью по нейтрализации связывания HCV E2 (NOB-активность). Однако несмотря на высокую NOB-активность в международной патентной заявке WO 03/064473 указано, что фрагмент антитела e20 не способен нейтрализовать вирусную инфекцию при высокой концентрации (80 мкг/мл) (в частности, см. WO 03/064473, стр. 16, строки 8-10).
К настоящему времени авторы настоящего изобретения с удивлением обнаружили, что вопреки установленному в известном уровне техники и, в частности, в WO 03/064473, фрагмент e20 способен эффективно нейтрализовать инфицирование различными генотипами HCV in vitro. Это делает e20 особенно подходящим для нейтрализации HCV и элиминации HCV-инфицированных клеток и для применения в качестве лекарственного средства для иммунотерапии и иммунопрофилактики инфекций HCV.
Для достижения такого результата потребовалась длительная и сложная экспериментальная работа, которая подробно описана в нижеследующем экспериментальном разделе.
В сумме экспериментальная работа, проведенная авторами настоящего изобретения, позволила показать, что фрагмент антитела e20 проявляет следующие неожиданные свойства:
- он образуется в ходе естественной инфекции штаммом HCV, относящимся к генотипу 1b, но способен связываться с гликопротеинами всех известных генотипов HCV (в частности, генотипов 1a, 1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 и 6) и по существу обладает высокой перекрестной реактивностью;
- он обладает чрезвычайно высокой способностью к нейтрализации генотипов 1a, 1b, 2a и 4 HCV, которую измеряли с помощью анализа нейтрализации, основанного на псевдочастицах HCV (HCVpp);
- определенные аминокислотные остатки, необходимые для связывания e20 с гликопротеином E2 HCV, также важны для инфекции HCV, что подсказывает, что мутанты, способные уходить от связывания с e20, в то же самое время обладают сниженной способностью к репликации.
По-видимому, указанные выше признаки полезны в отношении использования фрагмента антитела e20 в качестве лекарственного средства для иммунотерапии и иммунопрофилактики инфекций HCV.
Таким образом, первой целью изобретения является моноклональное антитело или его фрагмент, способные связывать гликопротеин E2 HCV, полученный из нескольких различных генотипов HCV, выполняющие функцию лекарственного средства для терапевтического лечения или профилактики инфекций HCV, которые отличаются тем, что моноклональное антитело или его фрагмент содержат по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No: 1 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID No: 1, и по меньшей мере одну вариабельную область легкой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID No: 2.
Более предпочтительное процентное значение идентичности последовательностей составляет по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, где выражение «по меньшей мере» относится к каждому перечисленному процентному значению.
В одном из вариантов осуществления изобретения вариабельную область тяжелой цепи кодирует нуклеотидная последовательность SEQ ID No: 3, а вариабельную область легкой цепи кодирует SEQ ID No: 4.
Термин «антитело» предназначен для обозначения любого класса полноразмерного иммуноглобулина и любого его фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, такого как, например, Fab, F(ab')2, CDR (определяющая комплементарность область) или одноцепочечное антитело, содержащее вариабельную область как тяжелой, так и легкой цепи, или области CDR или каркас, содержащий одну или несколько копий фрагментов CDR из вариабельной области тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина. Он включает функциональные фрагменты антител, обозначаемые ScFv, диатела, VHH или выделенные легкие или тяжелые цепи. Кроме того, выражение «антитело» охватывает антитела, которые можно создать, используя последовательности вариабельной области фрагмента антитела e20 в процессе перетасовки для вариабельной области легкой цепи, для того, чтобы установить комбинации VH/VL с усовершенствованной аффинностью, стабильностью и/или свойствами рекомбинантного получения. Выражение «антитело» также включает полноразмерные иммуноглобулины любого типа или фрагменты иммуноглобулинов, слитые с обладающими специфичностью полноразмерными иммуноглобулинами или фрагментами иммуноглобулинов, которые могут нацелить фрагмент антитела e20 или иммуноглобулин на конкретные ткани, клетки или растворимые белковые структуры. Моноклональное антитело по изобретению предпочтительно представляет собой моноклональное антитело человека.
Антитело, использованное в изобретении, может находиться в свободной форме или в форме конъюгата. Антитело в форме конъюгата представляет собой антитело, как определено выше, конъюгированное с молекулой, которая способна модулировать персистентность in vivo, содействовать распределению в организме или ограничивать его, снижать чувствительность к протеолитическим средствам, снижать антигенность, повышать цитотоксическую способность и/или облегчать определение в жидкостях и тканях организма. Неограничивающие примеры молекул, подходящих для получения конъюгата, включают сывороточный альбумин человека, мальтоза-связывающий белок, глутатион-S-трансферазу, белки p3 или p8 оболочки фага, пептиды, сахара, ПЭГ или ПЭГ-подобные молекулы, токсины животного, растительного или микробиологического происхождения, цитокины, ферменты, хемилюминесцентные соединения, биолюминесцентные соединения, атомы металлов, радиоизотопы, флуоресцентные соединения, метящие группы или субстраты для фосфорилирования, гликозилирования, убиквитинилирования, сумоилирования или эндопротеолитического расщепления. Для того чтобы облегчить образование конъюгата, C-конец или N-конец антитела можно модифицировать, например, посредством вставки дополнительных аминокислотных остатков, например, одного или нескольких остатков цистеина, которые способны образовывать дисульфидные связи. Антитело, использованное в изобретении, также можно связать с эритроцитами человека или другими клеточными носителями, с конкретными составами или с системами с замедленным высвобождением, такими как, но без ограничения, липосомы, дендримеры, микросомы, наночастицы, микрокапсулы, вирусные векторы и т. п.
Другой целью изобретения является фармацевтическая композиция для терапевтического лечения или профилактики инфекций HCV, которая содержит фармацевтически эффективное количество моноклонального антитела или его фрагмента, как определено выше.
Композицию по изобретению можно вводить субъекту, инфицированному HCV или подверженному риску инфицирования HCV. Можно использовать любой подходящий путь введения, включая парентеральный, пероральный, окулярный, местный, локорегионарный путь, клизму или аэрозольное введение. Парентеральное введение включает внутримышечную инъекцию, внутривенную инъекцию, внутрилимфатическую инъекцию, подкожную или внутрикожную инъекцию и инфузию.
Композицию по изобретению можно получать в любой фармацевтической форме, которая подходит для выбранного пути введения, например, в форме инъецируемого раствора или суспензии, инфузии, таблетки, капсулы, крема, мази, лосьона или суппозитория.
Композиция по изобретению содержит антитело или его фрагмент, как определено выше, в качестве активного начала, а также подходящие фармацевтические эксципиенты, носители или разбавители, известные специалистам в данной области.
Дополнительной целью изобретения является антиидиотипическое антитело, способное специфически связываться с идиотипом антитела или его фрагмента, как определено выше. Антиидиотипическое антитело по изобретению можно получить стандартными способами для получения антиидиотипических антител, которые известны специалистам в данной области per se.
Дополнительно настоящее изобретение подробно описано в следующем экспериментальном разделе, который предоставлен исключительно в качестве иллюстрации со ссылкой на прилагаемые чертежи, где на фиг. 1 показано связывание e20 с гликопротеинами E2 HCV из различных генотипов. Данные приведены в виде процентных значений для положительных флуоресцентных клеток. На фиг. 2 показана нейтрализующая активность Fab e20 при использовании вирусных псевдочастиц, которые экспонируют гликопротеины E1-E2 генотипа 1a: UKN1A20.8 (a); E1E2 генотипа 1b: UKN1B5.23 (b); E1E2 генотипа 2a: UKN2A1.2 (c); E1E2 генотипа 2b: UKN2B1.1 (d); E1E2 генотипа 4: UKN4.21.16 (e). (f) Нейтрализующая активность Fab e20 в концентрации 15 мкг/мл при использовании вирусных псевдочастиц, которые экспонируют E1-E2 из различных генотипов (UKN1A20.8, UKN1B5.23, UKN2A1.2, UKN2B1.1; UKN3A13.6, UKN4.21.16, UKN5.15.11, UKN6.5.8).
На фиг. 3 показана нейтрализующая активность e20 и других антител против HCV (e137, AP33) при использовании системы HCVcc (генотип 2a). JFH-1 инфекционность в присутствии e20 и отрицательного контроля Fab (c33-3) показаны в виде количества вирусной РНК, нормализованного к РНК глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, как определяли посредством количественной ПЦР с обратной транскрипцией.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ РАЗДЕЛ
Стратегия клонирования
Получение случайных комбинаторных библиотек, представленных на поверхностях нитевидных фагов дает инструмент с широкими возможностями для отбора моноклональных антител человека с высокой аффинностью. Фактически процедура отбора, основанная на фаговом дисплее, является чрезвычайно гибкой, и ее можно оптимизировать с тем, чтобы отбирать антитела с перекрестной реактивностью. В частности, e20 клонировали в виде Fab фрагмента IgG1 B-лимфоцитарного репертуара женщины в возрасте 58 лет с персистирующей инфекцией штаммом HCV, относящимся к генотипу 1b. Для того чтобы отобрать клоны с перекрестной реактивностью, библиотеку, полученную от пациента, подвергали пэннингу с рекомбинантным гликопротеином E2 HCV, полученным из изолята вируса, принадлежащего к генотипу, отличному от 1a. В кратком изложении, при таком подходе можно получить антитела, образуемые в ходе естественной инфекции, которые к тому же одинаково способны связываться с различными гликопротеинами, с которыми никогда не сталкивалась иммунная система пациента, выбранного для исследования.
Исследование последовательностей тяжелой и легкой цепи
Секвенирование генов тяжелой и легкой цепи e20 и исследование их мутационных паттернов (таблица 1) показали, что это антитело получено в результате соматического мутационного процесса, который представляет собой процесс, вызванный в клоне антитела посредством непрерывного контакта с конкретным антигеном, для того, чтобы усовершенствовать аффинность самого антитела к антигену.
Что касается тяжелой цепи, e20 проявляет гомологию нуклеотидной последовательности с геном зародышевой линии ниже 85%. Мутационный паттерн показывает типичное распределение для соматически мутировавшего клона, со специфической поляризацией в определяющих комплементарность областях (CDR). Исследование соединительной области e20 (которая представляет собой соединительную область, которая дает начало CDR3) показывает, что она состоит из гена V, принадлежащего к подсемейству VH 1-69 (широко представленный ген в гуморальном ответе человека против HCV), ген D, принадлежащий к подсемейству D2-21, и ген JH, принадлежащий к подсемейству JH4.
Аналогичным образом легкая цепь e20 (изотип κ) проявляет процентное значение мутации, согласующееся с соматическим мутационным процессом, как показано посредством поляризации в CDR. Исследование соединительной области показывает, что CDR3 легкой цепи e20 происходит из соединения гена κV, принадлежащего подсемейству κV3-15, и гена κJ, принадлежащего подсемейству κJ5.
Данные о последовательностях позволяют сделать заключение о том, что e20 не является искусственным антителом, но напротив на самом деле присутствует в репертуаре антител пациента, выбранного для исследования.
| Таблица 1 | |||||||||
| a) | |||||||||
| Ген V | Ген D | Ген J | Длина CDR3 | % мутировавших нуклеотидов | % мутировавших аминокислот | Мутации R:S | |||
| FR | CDR | FR | CDR | FR | CDR | ||||
| V1-69 | D2-21 | J4 | 18 | 9,4 | 16,9 | 19 | 38 | 13:2 | 5:1 |
b)
| Ген V | Ген J | Длина CDR3 | % мутировавших нуклеотидов | % мутировавших аминокислот | Мутации R:S | |||
| FR | CDR | FR | CDR | FR | CDR | |||
| KV3-15 | KJ5 | 9 | 1,5 | 10,4 | 1,5 | 11,5 | 1:2 | 3:5 |
В приведенной выше таблице 1 показаны мутационные паттерны для зародышевых линий и гена V в тяжелой цепи a) и легкой цепи b) e20. Процентные значения мутаций аминокислот и нуклеотидов вычисляли в соответствии со способом выравнивания авторов Kabat и Wu с учетом FR1, FR2 и FR3 для легких и тяжелых цепей, CDR1 и CDR2 для тяжелых цепей и CDR1, CDR2 и CDR3 для легких цепей. Также приведено отношение заместительных мутаций (R) к молчащим мутациям (S).
Оценка связывания e20 с E2, полученными из различных генотипов HCV
Фрагмент e20 в форме Fab исследовали на способность к распознаванию гликопротеина E2 из генотипов HCV, отличных от 1b (т. е. от генотипа штамма, которым был инфицирован пациент, от которого получили e20) и 1a (т. е. от генотипа, использованного для клонирования Fab). Сложности, проявившиеся при получении растворимых форм E2 из различных генотипов HCV, потребовали использования альтернативного подхода, основанного на FACS.
В кратком изложении, эпителиальные клетки почки человека 293T (HEK) растили в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 5% заменимых аминокислот, 200 мМ глутамина, стрептомицина (100 мкг/мл) и пенициллина (100 Ед/мл). После достижения 80% конфлюентности 2×106 клеток HEK высевали в 10 см чашки и через 24 часа трансфицировали с использованием 3 мкг phCMV-7, экспрессирующего вектора, который кодирует гликопротеины E1E2 из различных генотипов HCV, используя протокол трансфекции с фосфатом кальция. Среду заменяли через 16 часов после трансфекции, а затем клетки инкубировали при температуре 37°C в течение 24 часов. Среду удаляли, монослой клеток дважды промывали в PBS. Добавляли 5 мл буфера для диссоциации и инкубировали клетки при температуре 37°C в течение 5 минут. Клетки промывали дважды в PBS и центрифугировали на скорости 1000 об/мин в течение 5 минут; в осадок, полученный из каждой чашки, добавляли 1,2 мл фиксирующего реактива. Клетки инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре. Образцы промывали в 5 мл PBS с добавлением 2% фетальной телячьей сыворотки (FPBS), затем центрифугировали на скорости 1000 об/мин в течение 5 минут.
В осадок добавляли 100 мкл пермеабилизирующего реактива с 50 мкл Fab e20 в конечной концентрации 10 мкг/мл. Аналогичный протокол повторяли для нетрансфицированных клеток, которые использовали в качестве контроля. После инкубации в течение 40 минут при комнатной температуре образцы промывали в 5 мл FPBS и добавляли в осадок 50 мкл ФИТЦ-конъюгированного вторичного антитела. Клетки инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре и промывали дважды в 5 мл FPBS. Наконец, супернатант удаляли, осадок ресуспендировали в 300 мкл FPBS и проводили анализ клеток с помощью FACS. Связывающую активность выражали в виде процентного значения положительных флуоресцентных клеток, полученного из процентного значения клеток, обладающих более высоким уровнем флуоресценции, чем клетки без Fab e20. В каждый эксперимент включали рекомбинантный Fab человека (c33-3), обладающий специфичностью к неструктурному антигену HCV (NS3) в качестве отрицательного контроля.
Этот подход показал, что Fab e20 способен распознавать экспрессируемые E2 HCV из всех генотипов (1a; 1b; 2a; 2b; 3; 4; 5; 6) при более высоком процентном значении флуоресцентных клеток, чем тот, что получен при использовании контрольного Fab. Результаты приведены на фиг. 1.
Оценка связывания e20 с гликопротеинами E2 из HCV 1a, мутировавшими в CD81-связывающих областях
Fab e20 также тестировали на панели E1E2, полученных из H77 (генотип 1a), которые мутировали в консервативных областях, которые, как описано, играют ключевую роль в связывании CD81 и в инфекционности псевдочастиц HCV (HCVpp). Каждое консервативное положение в этой области мутировали в аланин. Все эти замены привели к потере инфекционности в описанном ниже анализе HCVpp. Связывание Fab e20 с гликопротеином E2 HCV устраняли посредством некоторых из этих ключевых мутаций (таблица 2).
Данные, описанные в таблице 2, указывают на то, что e20 связывается с областью E2, необходимой для вирусной инфекции. Эти данные также подтверждают, что e20 связывается с областью, критичной для связывания AP33, нейтрализующим антителом против HCV с большей перекрестной реактивностью, но менее подходящим в качестве шаблона для конструирования вакцинного лекарственного средства и для использования в качестве иммунотерапевтического средства, принимая во внимание, что иммунотерапия гетерологичными антителами не оправдана и что присутствие похожих антител в репертуаре человека встречается чрезвычайно редко (Tarr et al. J Gen Virol. 88:2991. 2007). Еще более примечательно, что данный анализ ясно показал, что все мутанты, которые не распознавал e20, не допускают инфекцию клеток-мишеней в псевдовирусной модели.
В приведенной выше таблице 2 показано связывание e20 с E1E2, полученными из мутантов H77 (генотип 1a). Связывающая активность выражена в виде процентного значения от того, что измерено для белка H77 дикого типа.
Оценка нейтрализующей активности e20 на псевдочастицах HCV, полученных из различных генотипов
Затем подтверждали нейтрализующую активность Fab e20 в анализе нейтрализации, основанном на псевдочастицах HCV (HCVpp).
В кратком изложении эпителиальные клетки почки человека 293T (HEK) и клетки гепатомы человека Huh-7 растили в DMEM с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 5% заменимых аминокислот, 200 мМ глутамина, стрептомицина (100 мкг/мл) и пенициллина (100 Ед/мл). После достижения 80% конфлюентности 2×106 клеток HEK высевали в 10 см чашки и через 24 часа совместно трансфицировали с использованием 8 мкг вектора вируса лейкемии мыши (MLV) Gag-Pol, 8 мкг MLV вектора для переноса, который кодирует люциферазу, и 3 мкг полноразмерного экспрессирующего вектора phCMV-7a, который кодирует гликопротеины E1E2 из различных генотипов HCV. Днем позже среду для трансфекции заменяли на 5 мл свежей среды, содержащей 10 мМ HEPES. Клетки инкубировали в течение 24 часов при температуре 37°C. Клетки-мишени (Huh-7) высевали в 24-луночные планшеты в количестве 2,5×104 на лунку и инкубировали в течение ночи при температуре 37°C. Псевдочастицы HCV (HCVpp) собирали через 24 часа после замены среды, центрифугировали на скорости 2000 об/мин в течение 10 минут и фильтровали через мембраны с размером пор 0,45 мкм и использовали в анализе нейтрализации.
В частности, 60 мкл содержащей HCVpp среды смешивали с 90 мкл Fab e20 с другими концентрациями и инкубировали в течение 1 часа при температуре 37°C. Такую смесь добавляли в клетки-мишени Huh-7 и клетки инкубировали в течение 3 часов при температуре 37°C. В конце удаляли инокулят, в каждую лунку добавляли 1 мл свежей среды и клетки инкубировали при температуре 37°C в течение 4 дней. Клетки промывали дважды в PBS и затем лизировали с использованием 100 мкл лизисного буфера (Promega), по инструкциям производителя. Клеточный лизат переносили в 96-луночные планшеты и в каждую лунку добавляли 100 мкл субстрата/буфера (Promega). Инфекцию клеток анализировали посредством измерения люминесцентной активности (считыватель планшетов Chameleon, Hidex), которая приведена в относительных световых единицах (ОСЕ). Нейтрализующую активность определяли в виде процентного значения инфекции посредством сравнения полученной люминесценции с тем, что определяли в лунках с HCVpp в отсутствие антител, способных к конкуренции (отр.). В каждый эксперимент в качестве отрицательного контроля включали рекомбинантный Fab человека (c33-3) со специфичностью к неструктурному антигену HCV (NS3).
Этот подход показал, что e20 способен резко нейтрализовать генотипы HCV 1a и 4. e20 проявляет 50% нейтрализующую активность в отношении генотипа 1a в концентрации 7,5 мкг/мл и 75% ингибирование в отношении генотипа 4 в концентрации 15 мкг/мл (фиг. 2a, 2e и 2f). Однако это антитело также способно резко нейтрализовать генотипы HCV 1b и 2a. Более подробно, в концентрации 15 мкг/мл e20 показывает 40% нейтрализацию и 75% инфекционность в отношении генотипов 1b и 2a соответственно (фиг. 2b, 2c и 2f). Наконец, e20 способен нейтрализовать в меньшей степени HCVpp, содержащие гликопротеины E1E2 генотипа 2b, проявляя 20% ингибирование в концентрации 15 мкг/мл (фиг. 2d и 2f).
Нейтрализующая активность e20 в отношении штамма HCV, выращенного в культуре клеток (генотип 2a, штамм JFH1)
Также тестировали нейтрализующую активность e20 в отношении HCV, используя модельную систему HCVcc (HCV культура клеток), посредством использования стабильной клеточной линии гепатомы человека, которая содержит кДНК, встроенную в хромосому, из HCV генотипа 2a (JFH1) и высоко продуцирующих контагиозных вирусов (фиг. 3). Такая система позволяет оценить нейтрализующую активность посредством использования контагиозного штамма вируса гепатита C. В этой группе экспериментов Fab e20 в различных концентрациях инкубировали со средой, содержащей вирус, созданный в анализе HCVcc. Через 3 часа смесь добавляли к клеткам-мишеням (Huh7.5). Инфекционность оценивали посредством измерения уровней плюс-цепей РНК HCV. Fab e20 показал сильную нейтрализующую активность, поскольку в концентрации 1 мкг/мл, которая является очень низкой, он способен полностью устранять инфекционность HCV генотипа 2a. Нейтрализующая активность Fab e20 сравнима с моноклональным антителом IgG AP33 мыши, одним из наиболее сильных нейтрализующих антител с перекрестной реактивностью, описанных на сегодняшний день.
Claims (6)
1. Применение моноклонального антитела или его фрагмента, способного связываться с гликопротеином Е2 HCV из генотипов 1а, 1b, 2а, 2b или 4, для нейтрализации HCV инфекции, где моноклональное антитело или его фрагмент содержат по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No: 1, и по меньшей мере одну вариабельную область легкой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2.
2. Применение по п.1, где моноклональное антитело или его фрагмент представляют собой полноразмерный иммуноглобулин или фрагмент иммуноглобулина, содержащий по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи и одну вариабельную область легкой цепи.
3. Применение по п.1, где фрагмент выбран из Fab, F(ab′)2 или одноцепочечного антитела, содержащего вариабельные области как тяжелой, так и легкой цепи.
4. Применение по п.1, где моноклональное антитело или его фрагмент находятся в свободной форме.
5. Применение по п.1, где моноклональное антитело или его фрагмент конъюгировано с молекулой, способной модулировать персистенцию in vivo, содействовать распределению в организме или ограничивать его, снижать чувствительность к протеолитическим средствам, снижать антигенность, повышать цитотоксическую способность и/или облегчать определение в жидкостях и тканях организма.
6. Применение по п.1, где моноклональное антитело или его фрагмент слито со специфическим полноразмерным иммуноглобулином или фрагментом иммуноглобулина, который способен нацеливать антитело на конкретные ткани, клетки или растворимые белковые структуры.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITTO2008A000964 | 2008-12-22 | ||
| IT000964A ITTO20080964A1 (it) | 2008-12-22 | 2008-12-22 | Anticorpo monoclonale anti-hcv come medicamento per il trattamento terapeutico e la prevenzione di infezioni da hcv |
| PCT/IB2009/055867 WO2010073204A1 (en) | 2008-12-22 | 2009-12-21 | Anti-hcv monoclonal antibody as a medicament for the therapeutic treatment and prevention of hcv infections |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011130522A RU2011130522A (ru) | 2013-01-27 |
| RU2596409C2 true RU2596409C2 (ru) | 2016-09-10 |
Family
ID=40848278
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011130522/10A RU2596409C2 (ru) | 2008-12-22 | 2009-12-21 | Моноклональное антитело против hcv в качестве лекарственного средства для терапевтического лечения и профилактики инфекций hcv |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8623363B2 (ru) |
| EP (1) | EP2376119B1 (ru) |
| JP (1) | JP2012513457A (ru) |
| KR (1) | KR101450955B1 (ru) |
| CN (1) | CN102264393B (ru) |
| BR (1) | BRPI0923569B1 (ru) |
| ES (1) | ES2541323T3 (ru) |
| IT (1) | ITTO20080964A1 (ru) |
| MX (1) | MX2011006722A (ru) |
| RU (1) | RU2596409C2 (ru) |
| WO (1) | WO2010073204A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITTO20080204A1 (it) | 2008-03-17 | 2009-09-18 | Pomona Biotechnologies Llc | Anticorpi monoclonali atti a reagire con una pluralita di sottotipi del virus influenzale a |
| ITTO20080398A1 (it) | 2008-05-27 | 2009-11-28 | Pomona Biotechnologies Llc | Anticorpi monoclonali aventi proprieta' di cross-neutralizzazione omosubtipica per virus influenzali di tipo a sottotipo h1 |
| IT1395961B1 (it) | 2009-06-01 | 2012-11-02 | Pomona Biotechnologies Llc | Anticorpi monoclonali come medicamento per il trattamento terapeutico e/o profilattico delle infezioni da virus influenzale a (h1n1) di origine suina (s-oiv) |
| JP6158171B2 (ja) * | 2011-05-02 | 2017-07-05 | ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ | 合成ｃ型肝炎ゲノム、並びに、その製造方法及びその使用 |
| JP2014523878A (ja) * | 2011-06-14 | 2014-09-18 | グローブイミューン，インコーポレイテッド | Ｄ型肝炎ウイルス感染の治療又は予防のための酵母ベースの組成物及び方法 |
| CN104974246A (zh) * | 2014-04-01 | 2015-10-14 | 中国科学院上海巴斯德研究所 | 一种中和丙型肝炎病毒的全人单克隆抗体及其用途 |
| GB201415714D0 (en) * | 2014-09-05 | 2014-10-22 | Medical Res Council | Antibodies and antigen binding fragments thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003064473A2 (en) * | 2002-01-30 | 2003-08-07 | Roberto Burioni | Human monoclonal antibody fab fragments directed against hcv e2 glycoprotein and endowed with in vitro neutralizing activity |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA836080B (en) | 1982-08-23 | 1984-04-25 | Scripps Clinic Res | Broad spectrum influenza antisera |
| US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
| US6812024B2 (en) | 1987-03-16 | 2004-11-02 | Mcgready Roland Keith | Anti-paratopic antibody as an immunogen |
| US5245015A (en) * | 1991-04-26 | 1993-09-14 | Tanox Biosystems, Inc. | Monoclonal antibodies which neutralize HIV-1 through reaction with a conformational epitope in vitro |
| WO1992015885A1 (en) | 1991-03-11 | 1992-09-17 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Methods for selecting antibody reagents; anti-idiotype antibodies; and aids vaccine formulations |
| ATE255902T1 (de) | 1992-03-09 | 2003-12-15 | San Diego Regional Cancer Ct | Ein anti-idiotypischer antikörper und seine verwendung in der diagnose und therapie von hiv- verwandten krankheiten |
| EP0621339B1 (en) | 1992-09-17 | 2001-10-24 | Takara Shuzo Co. Ltd. | Immunogenic human influenza A virus haemagglutinin polypeptides |
| JP2996864B2 (ja) | 1994-03-30 | 2000-01-11 | 寳酒造株式会社 | 抗体可変領域ｄｎａ |
| US6057421A (en) | 1994-11-30 | 2000-05-02 | Immpheron, Inc. | Variable heavy and light chain regions of murine monoclonal antibody 1F7 |
| WO2002055560A2 (en) * | 2000-12-01 | 2002-07-18 | The Gouvernment Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies specific for the e2 glycoprotein of hepatitis c virus and their use in the diagnosis, treatment, and prevention of hepatitis c |
| FR2817869B1 (fr) | 2000-12-07 | 2005-01-14 | Technopharm | Anticorps monoclonal humain dirige contre le virus influenza ou un fragment de celui-ci |
| US6768004B2 (en) | 2001-01-11 | 2004-07-27 | Mueller Sybille | Nucleotide sequences encoding variable regions of heavy and light chains of monoclonal antibody 1F7, an anti-idiotypic antibody reactive with anti-HIV antibodies |
| US6964199B2 (en) * | 2001-11-02 | 2005-11-15 | Cantocor, Inc. | Methods and compositions for enhanced protein expression and/or growth of cultured cells using co-transcription of a Bcl2 encoding nucleic acid |
| JP4495969B2 (ja) | 2002-01-17 | 2010-07-07 | ポリマン サイエンティフィック イミューンバイオロジッシュ フォーシュング ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ファフツング | Ｈｉｖ−１中和抗体を誘導する抗イディオタイプ抗体 |
| US20080014205A1 (en) | 2006-05-15 | 2008-01-17 | Lawrence Horowitz | Neutralizing Antibodies to Influenza Viruses |
| AU2007295073A1 (en) | 2006-09-15 | 2008-03-20 | Fraunhofer Usa, Inc. | Influenza antibodies, compositions, and related methods |
| AU2008300516A1 (en) | 2007-09-20 | 2009-03-26 | Bracco Imaging Spa | Method for the preparation of new oligoclonal antibodies |
| ITTO20080204A1 (it) | 2008-03-17 | 2009-09-18 | Pomona Biotechnologies Llc | Anticorpi monoclonali atti a reagire con una pluralita di sottotipi del virus influenzale a |
| ITTO20080398A1 (it) | 2008-05-27 | 2009-11-28 | Pomona Biotechnologies Llc | Anticorpi monoclonali aventi proprieta' di cross-neutralizzazione omosubtipica per virus influenzali di tipo a sottotipo h1 |
| EP2552485B1 (en) | 2010-03-26 | 2017-03-08 | Pomona Ricerca S.r.l. | Full-length immunoglobulins of the igg isotype capable of recognizing a heterosubtype neutralizing epitope on the hemagglutinin stem region and their use as anti-influenza medicament |
-
2008
- 2008-12-22 IT IT000964A patent/ITTO20080964A1/it unknown
-
2009
- 2009-12-21 BR BRPI0923569-8A patent/BRPI0923569B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-12-21 US US13/141,071 patent/US8623363B2/en active Active
- 2009-12-21 ES ES09805863.9T patent/ES2541323T3/es active Active
- 2009-12-21 WO PCT/IB2009/055867 patent/WO2010073204A1/en active Application Filing
- 2009-12-21 KR KR1020117016888A patent/KR101450955B1/ko active IP Right Grant
- 2009-12-21 JP JP2011542966A patent/JP2012513457A/ja active Pending
- 2009-12-21 RU RU2011130522/10A patent/RU2596409C2/ru not_active Application Discontinuation
- 2009-12-21 CN CN2009801521516A patent/CN102264393B/zh active Active
- 2009-12-21 MX MX2011006722A patent/MX2011006722A/es active IP Right Grant
- 2009-12-21 EP EP09805863.9A patent/EP2376119B1/en active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003064473A2 (en) * | 2002-01-30 | 2003-08-07 | Roberto Burioni | Human monoclonal antibody fab fragments directed against hcv e2 glycoprotein and endowed with in vitro neutralizing activity |
Non-Patent Citations (1)
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2012513457A (ja) | 2012-06-14 |
| KR20110096591A (ko) | 2011-08-30 |
| WO2010073204A1 (en) | 2010-07-01 |
| US8623363B2 (en) | 2014-01-07 |
| BRPI0923569A2 (pt) | 2016-01-26 |
| EP2376119A1 (en) | 2011-10-19 |
| US20110256140A1 (en) | 2011-10-20 |
| RU2011130522A (ru) | 2013-01-27 |
| KR101450955B1 (ko) | 2014-10-15 |
| CN102264393A (zh) | 2011-11-30 |
| ITTO20080964A1 (it) | 2010-06-23 |
| ES2541323T3 (es) | 2015-07-17 |
| CN102264393B (zh) | 2013-09-11 |
| BRPI0923569B1 (pt) | 2021-09-21 |
| EP2376119B1 (en) | 2015-04-22 |
| MX2011006722A (es) | 2011-07-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6022515B2 (ja) | 抗ａ型インフルエンザウイルス中和抗体およびその使用 | |
| RU2596409C2 (ru) | Моноклональное антитело против hcv в качестве лекарственного средства для терапевтического лечения и профилактики инфекций hcv | |
| CA2776249C (en) | Rsv-specific binding molecule | |
| Tarr et al. | An alpaca nanobody inhibits hepatitis C virus entry and cell‐to‐cell transmission | |
| JP6462599B2 (ja) | Ｒｓｖ融合タンパク質のエピトープ及びそのエピトープを認識する抗体 | |
| JP5475774B2 (ja) | ヒトサイトメガロウイルス中和抗体およびその使用 | |
| CN106519034A (zh) | 抗pd‑1抗体及其用途 | |
| US20140322204A1 (en) | Treatment and prevention of viral infections | |
| BRPI0914012A2 (pt) | anticorpo humano, composição farmacêutica, molécula de ácido nucléico, célula, clone de célula b imortalizado, polipeptídeo imunogênico isolado ou purificado, método de inibição da infecção pelo vírus da dengue. método de tratamento da infecção pelo vírus da dengue, método de triagem de polipeptídeos, método monitoramento da qualidade das vascinas contra o vírus da dengue, vacina, uso do anticorpo e epítopo | |
| JP2019516348A (ja) | 重症熱性血小板減少症候群ウイルスの外膜糖タンパク質に結合する抗体及びその用途 | |
| JP2023018064A (ja) | 抗ｆａｍ１９ａ５抗体及びその用途 | |
| KR20020091093A (ko) | 씨형간염 치료제 | |
| JP2005510201A (ja) | Ｈｉｖ−１に対する中和ヒトモノクローナル抗体、それらの産生および使用 | |
| JP2014526886A (ja) | マクロファージ遊走阻止因子（ｍｉｆ）とｄ−ドーパクロームトートメラーゼ（ｄ−ｄｔ）に交差反応性がある抗体 | |
| CN106749645B (zh) | 一种全人源抗丙型肝炎病毒的中和抗体 | |
| TW201620931A (zh) | 具有抗ｃ型肝炎病毒的感染抑制活性的抗體 | |
| CN107286237B (zh) | 一种抗丙型肝炎病毒抗体的获取以及应用 | |
| US20170313764A1 (en) | Hepatitis c virus specific antibody | |
| KR20220012297A (ko) | 항-b형 간염 바이러스 항체 및 이의 용도 | |
| AU2012254920A1 (en) | Improvements in or relating to treatment and prevention of viral infections | |
| JP2013230152A (ja) | ウイルス感染の治療及び予防又は治療及び予防の改善 | |
| WO2014065822A1 (en) | Hepatitis c virus neutralizing epitopes, antibodies, and methods |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA94 | Acknowledgement of application withdrawn (non-payment of fees) |
Effective date: 20160315 |
|
| FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20160413 |