BRPI0920973B1

BRPI0920973B1 - composição aquosa contendo hormônio estimulanete de folículos

Info

Publication number: BRPI0920973B1
Application number: BRPI0920973-5A
Authority: BR
Inventors: Hajme Asada; Hiroshige Kataoka
Original assignee: Aska Pharmaceutical Co., Ltd
Priority date: 2008-11-04
Filing date: 2009-11-02
Publication date: 2021-02-23
Also published as: US20110275567A1; BRPI0920973B8; US8329649B2; IL212641A; AU2009312235B2; CA2742659C; EP2366401B1; MX2011004453A; KR101668502B1; CN102202682A; JP5554244B2; BRPI0920973A2; AU2009312235A1; ES2548378T3; KR20110093812A; EP2366401A1; WO2010052879A1; IL212641A0; JPWO2010052879A1; EP2366401A4

Abstract

composição aquosa estáveis contendo hormônio estimulador de folículos, que consiste de hormônio estimulador estimulador de folículos e histidina como agente estabilizador.

Description

Área Técnica

A presente invenção refere-se a uma composição aquosa contendo hormônio estimulador de foliculos.

Técnica Antecedente

O hormônio estimulador de foliculos (doravante também abreviado como "FSH", do inglês Follicle Stimulating Hormone)é um hormônio sintetizado e secretado por células produtoras de hormônio gonadotrófico da pituitária anterior. O FSH tem uma ação de estimulação do crescimento de foliculos ovarianos imaturos e amadurecimento das células no ovário. Como medicamento, o FSH tem sido usado como agente indutor da ovulação na tecnologia reprodutiva assistida ("ART", do inglês Assisted Reproductive Technology) .

Preparações de gonadotropina menopáusica humana (hMG, do inglês human Menopausal Gonadotropin)extraida da urina de mulheres pós menopáusicas têm sido usadas convencionalmente na forma de composições contendo FSH. As preparações de hMG contêm FSH e hormônio luteinizante ("LH", do inglês Lutenizing Hormone), sendo que a proporção de FSH para LH é de cerca de 1:1. Em paises estrangeiros, "preparações recombinantes de FSH" produzidas por recombinação de genes sem usar a urina humana como matéria prima têm sido usadas recentemente, e além disso no Japão Follistim (marca registrada) foi aprovado em 2005. Como essas preparações recombinantes não usam urina como matéria prima, elas se caracterizam por não conter impurezas e têm qualidade constante.

As proteinas bioativas são geralmente instáveis no estado de solução aquosa, e essa tendência aumenta quando a pureza de uma proteina se torna mais alta. Em soluções aquosas, as proteinas são hidrolizadas da mesma maneira que compostos de baixo peso molecular, bem como causam mudanças químicas como racemização, causando ainda mudanças de estruturas de ordem superior (mudanças físicas), pois são compostos de polímero. Exemplos dessas mudanças físicas incluem desnaturação, agregação, adsorção, precipitação, e semelhantes. No processo de mudança física, considera-se que a desnaturação ocorre como um gatilho, e fenômenos como agregação, adsorção e precipitação são causados subsequentemente. Desnaturação significa mudança das estruturas tridimensionais (estruturas terciárias e quaternárias) como o desdobramento de cadeias dobradas e, como a desnaturação na maioria dos casos leva à perda de atividade fisiológica, é importante preveni-la, para maior estabilidade das preparações de proteínas ou peptídeos.

Para suprimir as mudanças químicas e físicas nas preparações de proteínas, proteínas contaminantes como a albumina sérica humana têm sido geralmente adicionadas como agentes estabilizadores. Porém, para evitar o risco de contaminação de vírus e semelhantes, o uso de preparações recombinantes tornou-se recentemente o procedimento principal. Para as preparações recombinantes, examinaram-se vários métodos de estabilização como substitutos para a adição de proteínas contaminantes.

Por exemplo, investigou-se o aumento da estabilidade de preparações de proteínas adicionando-se um composto que age formando uma ligação de hidrogênio com uma molécula de proteína ou aumentando a hidratação de uma molécula de proteína, como sacarídeos, surfactantes e aminoácidos (vide, por exemplo, Buli. Chem. Soa., Jpn., 53, pp.2451- 2455, 1980; J. Biol. Chem., 256, pp.7193-7201, 1981; Pharm. Res., 10, pp.954-962, 1993; Int. J. Pharm., 96, pp.41-49, 1993; Pharm. Res., 8, pp.1258-1263, 1991; Pharm. Res.,10, pp.649-659, 1993, e semelhantes). Quanto aos aminoácidos entre esses compostos, DE-A-2916711, por exemplo, revela que glicina - ou alanina, prolina, glutamina e semelhantes têm um efeito de estabilização para os fatores de coagulação do sangue, e a patente US No. 4.440.679 descreve que arginina, lisina e/ou glicina têm um efeito estabilizador para o fator VIII, fibronectina e semelhantes. DE-A-1985644 também revela que a arginina, lisina, histidina, fenilalanina, triptofan, tirosina, ácido aspártico e/ou ácido glutâmico têm um efeito estabilizador para a antitrombina III. Entretanto, os efeitos de estabilização desses aminoácidos são específicos para as proteínas ou peptideos alvo e, portanto, não se pode prever, a partir dessas descobertas, os aminoácidos ou as combinações de dois ou mais tipos de aminoácidos que terão o efeito de estabilização mais efetivo para proteínas ou peptideos arbitrários.

Quanto ao FSH, por exemplo, no documento (Patente) 1 descreve-se que a metionina estabiliza a gonadotropina em uma composição aquosa. Além disso, quanto ao efeito de estabilização da histidina para proteínas, sabe-se que, por exemplo, a histidina tem uma efeito de estabilização em preparações liquidas de proteína relacionadas ao fator de coagulação sanguinea (documento (Patente) 2), imunoglobulina (documento (Patente) 3), eritropoietina (documento (Patente) 4) e semelhantes. Além do mais, o documento (Patente) 5 revela uma preparação de FSH contendo glicina, metionina, um surfactante não iônico, e um agente tampão fosfato como agentes de estabilização. Contudo, não se sabe até agora se a histidina tem um efeito estabilizador para FSH em uma composição aquosa. Também não se sabe se uma combinação de histidina e um outro aminoácido tem um efeito de estabilização para FSH em uma composição aquosa.

Referências da Técnica Antecedente Documentos (Patentes)

Documento (Patente) 1: Publicação Não Examinada de Patente Japonesa (KOKAI) No. 10-202997

Documento (Patente) 2: Publicação Não Examinada de Patente Japonesa (KOKAI) No.2002-275090

Documento (Patente) 3: Publicação Não Examinada de Patente Japonesa (KOHYO) No. 2007-511566

Documento (Patente) 4: Publicação de Patente Internacional W002/011753

Documento (Patente) 5: Publicação Não Examinada de PatenteJaponesa (KOHYO) No. 2009-509953

Documento (Patente) 6: DE-A-2916711

Documento (Patente) 7: Patente US No. 4.440.679

Documento (Patente) 8: DE-A-1985644

Outros Documentos (Não-Patentes)

Documento (Não-Patente) 1: Buli. Chem. Soc. Jpn., 53,pp.2451-2455, 1980

Documento (Não-Patente) 2: <J. Biol. Chem. , 256, pp.7193- 7201, 1981

Documento (Não-Patente) 3: Pharm. Res., 10, pp.954-962,1993

Documento (Não-Patente) 4: Int. J. Pharm., 96, pp.41-49, 1993

Documento (Não-Patente) 5: Pharm. Res., 8, pp.1258-1263, 1991

Documento (Não-Patente) 6: Pharm. Res.,10, pp.649-659, 1993.

Sumário da Invenção Objetivo da Invenção

Um objetivo da presente invenção é prover uma composição aquosa contendo hormônio estimulador de foliculos. Mais especificamente, o objetivo da presente invenção é prover um meio para a estabilização do hormônio estimulador de foliculos em uma composição aquosa, usando um aminoácido.

Meios para Alcançar o Objetivo

Os inventores da presente invenção conduziram várias pesquisas sobre substâncias que estabilizam o hormônio estimulador de foliculos no estado de solução aquosa, e descobriram que a histidina tinha um efeito de estabilização muito superior e que alcançava um efeito de estabilização ainda mais alto quando adequadamente combinada com outro aminoácido, sacarideo, tampão, ou semelhante. A presente invenção foi realizada com base nas descobertas citadas acima.

Assim, a presente invenção provê uma composição aquosa contendo hormônio estimulador de foliculos e histidina como agente estabilizador.

De acordo com incorporações preferenciais da presente invenção, provêem-se: a composição aquosa citada acima, em que a concentração de histidina é de 0,05 a 10,0 mg/ml; a composição aquosa citada acima, em que a concentração de histidina é de 0,2 a 5,0 mg/ml, e a composição aquosa citada acima em que a concentração de histidina é de 0,25 a 2.0 mg/ml. De acordo com uma incorporação preferencial da presente invenção, provê-se também a composição aquosa citada acima que contém ainda metionina e, de acordo com mais incorporações preferenciais, provêem-se: a solução aquosa citada acima em que a concentração de metionina é de 0,05 a 10,0 mg/ml; a já citada composição aquosa em que a concentração de metionina é de 0,2 a 5,0 mg/ml, e a composição aquosa citada acima em que a concentração de metionina é de 0,25 a 2,0 mg/ml. Além disso, provê-se também a composição aquosa citada acima que contém um hormônio estimulador de foliculos humano recombinante genético como o hormônio estimulante de foliculos.

De acordo com incorporações preferenciais da presente invenção, provêem-se: a composição aquosa citada acima que contém ainda um, ou dois, ou mais tipos de substâncias selecionadas no grupo que consiste de um sacarideo, propileno glicol e creatinina, e a composição aquosa citada acima que contém ainda um, ou dois, ou mais tipos de substâncias selecionadas no grupo que consiste de xilitol, inositol, propileno glicol, sucrose, gluconato de cálcio, gluconato de sódio, manitol, macrogol 600 e creatinina.

De acordo com mais uma incorporação preferencial da presente invenção, provê-se a já citada composição aquosa que contém ainda um surfactante. De acordo com mais incorporações preferenciais da presente invenção, provêem- se: a já citada composição aquosa na qual o surfactante é um surfactante selecionado no grupo que consiste de um surfactante iônico, um surfactante anfotérico, e um surfactante não iônico; a já citada composição aquosa na qual o surfactante é um surfactante não iônico; a já citada composição aquosa na qual o surfactante consiste de Tween 80 e/ou Tween 20, e a já citada composição aquosa em que o surfactante é Tween 80.

De acordo com outra incorporação preferencial da presente invenção, provê-se a composição aquosa citada acima que contém ainda um agente tampão. De acordo com mais incorporações preferenciais, provêem-se: a citada composição aquosa que contém um agente tampão selecionado no grupo que consiste de um agente tampão fosfato, um agente tampão citrato, um agente tampão acetato, um agente tampão borato, um agente tampão tartrato, e um agente tampão tris; a composição aquosa citada acima que contém um agente tampão fosfato ou um agente tampão citrato; a composição aquosa citada acima que tem um valor de pH de 6,5 a 8,0, preferivelmente de 7,0 a 7,8; a já citada composição aquosa na qual o agente de tonicidade é cloreto de sódio; a já citada composição aquosa que contém ainda um ácido policarboxilico selecionado no grupo que consiste de EDTA, ácido citrico, ácido málico e ácido glucônico; a já citada composição aquosa em que o ácido policarboxilico é EDTA, e a já citada composição aquosa em que o meio aquoso é uma solução salina tamponada com fosfato.

Em um outro aspecto da presente invenção, provêem-se: um agente para estabilizar uma solução aquosa contendo hormônio estimulador de foliculos como ingrediente ativo, que consiste de histidina, e o agente estabilizador acima, que consiste de histidina e metionina.

Em outro aspecto ainda da presente invenção, provêem- se: um método para estabilizar uma solução aquosa contendo hormônio estimulador de foliculos como ingrediente ativo, que consiste na etapa de adição de histidina e metionina à solução aquosa, e o já citado método, que consiste na etapa de adição de histidina e metionina.

Efeito da Invenção

Na composição aquosa da presente invenção,, o hormônio estimulador de foliculos é estabilizado com histidina e, desse modo, as mudanças fisicas do hormônio estimulador de foliculos são substancialmente reduzidas ou eliminadas. Portanto, a composição é útil como composição farmacêutica estável na qual a redução da atividade do hormônio durante o armazenamento e distribuição é eliminada.

Breve Descrição dos Desenhos

A Figura 1 mostra uma vista ampliada dos gráficos de HPLC obtidos para composições contendo hormônio estimulador de foliculo nas áreas dos picos da subunidade - e subunidade -. Os gráficos foram obtidos para uma composição preparada adicionando-se um FSH recombinante genético em uma concentração de 150 IU/ml, sucrose na concentração de 50 mg/ml, e Tween 80 na concentração de 0,01% a 10 mM PBS, e adicionando-se também histidina à mistura, após armazenamento a 40° por 8 semanas, e uma composição preparada adicionando-se um FSH recombinante genético em uma concentração de 150 IU/ml e Tween 80 na concentração de 0,01% a 10 mN PBS, após armazenamento a 5 ou 40° por 8 semanas.

A Figura 2 é uma vista ampliada de gráficos de HPLC obtidos para hormônio estimulador de foliculos nas áreas dos picos da subunidade- e subunidade-. Os gráficos foram obtidos para uma composição preparada adicionando-se um FSH recombinante genético numa concentração de 150 IU/ml, sucrose na concentração de 50 mg/ml e Tween 8 0 na concentração de 0,01% a 10 mM PBS, e adicionando-se também metionina à mistura, após armazenamento a 40° por 8 semanas e uma composição preparada adicionando-se um FSH recombinante genético numa concentração de 150 IU/ml e Tween 80 na concentração de 0,01% a 10 mM PBS, após armazenamento a 5 ou 40° por 8 semanas.

A Figura 3 mostra uma vista ampliada de gráficos de HPLC obtidos para composições contendo hormônio estimulador de foliculos nas áreas dos picos da subunidade - e subunidade Os gráficos foram obtidos para uma composição preparada adicionando-se um FSH recombinante genético numa concentração de 150 IU/ml, sucrose na concentração de 50 mg/ml e Tween 80 na concentração de 0,01% a 10 mM PBS, adicionando-se ainda metionina e histidina à mistura, após armazenamento a 40° por 8 semanas, e uma composição preparada adicionando-se um FSH recombinante genético na concentração de 150 IU/ml, e Tween 80 na concentração de 0,01% a 10 mM PSB, após armazenamento a 5 ou 40° por 8 semanas.

Modos de Realizar a Invenção

Na presente invenção, também pode-se usar o hormônio estimulador de foliculos natural separado da urina humana. O efeito da presente invenção se mostra de forma marcante quando se usa o hormônio estimulador de foliculos altamente purificado. Consequentemente, é preferível usar hormônio estimulador de foliculos altamente purificado, preferivelmente hormônio estimulador de foliculos altamente purificado consistindo substancialmente de substância única. De acordo com a presente invenção, do ponto de vista acima é preferível usar como hormônio estimulador de foliculos, o hormônio estimulador de foliculos humano preparado conforme uma técnica de recombinação genética e substancialmente isento de proteinas contaminantes.

A concentração do hormônio estimulador de foliculos na composição aquosa da presente invenção não é particularmente limitada. A concentração é, por exemplo, de cerca de 50 a 500 IU/ml, preferivelmente de cerca de 100 a 300 IU/ml. A unidade internacional (IU, do inglês International Unit)do hormônio estimulador de foliculos é descrita no documento sobre o padrão internacional de FSH pelo NIBSC {National Institute for Biological Standards and Control, htpp://www.nibsc.ac.uk/documents/ifu/98-704 .pdf), ou semelhantes.

A concentração de histidina na composição aquosa da presente invenção também não é particularmente limitada. A concentração é, por exemplo, de cerca de 0,05 a 10,0 mg/ml, preferivelmente de cerca de 0,2 a 5,0 mg/ml, mais preferivelmente de cerca de 0,25 a 2,0 mg/ml. Apesar da concentração de metionina na composição aquosa da presente invenção também não ser particularmente limitada, a concentração é, por exemplo, de cerca de 0,05 a 10,0 mg/ml, preferivelmente de cerca de 0,2 a 5,0 mg/ml e, mais preferivelmente, de cerca de 0,25 a 2,0 mg/ml.

A composição aquosa da presente invenção pode conter ainda um tipo, ou dois, ou mais tipos de substâncias selecionadas no grupo que consiste de um sacarideo, propileno glicol e creatinina. Como sacarideo, podem ser usados monossacarideos, dissacarideos, álcoois de açúcar, ácidos aldônicos e seus sais, ciclitóis, macrogóis, e semelhantes. Exemplos de monossacarideos incluem, por exemplo, glicose, manose, galactose, frutose, xilose, treose, e semelhantes. Exemplos de dissacarideos incluem sucrose, maltose, lactose, celobiose, trealose e semelhantes. Exemplos de álcoois de açúcar incluem manitol, xilitol, sorbitol, eritritol, glicerol e semelhantes. Exemplos dos ácidos aldônicos ou seus sais incluem ácido glucônico, ácido galactônico, ácido manônico e semelhantes e seus sais. Exemplos de ciclitóis incluem inositol e exemplos de macrogóis incluem macrogol 200, macrogol 300, macrogol 400, macrogol 600, macrogol 1000, macrogol 1500, macrogol 1540, macrogol 4000, macrogol 6000, macrogol 10000, macrogol 20000 e semelhantes.

A composição aquosa da presente invenção pode conter preferivelmente um, ou dois, ou mais tipos de substâncias selecionadas no grupo que consiste de xilitol, inositol, propileno glicol, sucrose, gluconato de cálcio, gluconato de sódio, manitol, macrogol 600 e creatinina.

Quando a composição aquosa da presente invenção contiver sucrose, manitol ou inositol como sacarideo, o sacarideo poderá ser usado em uma concentração, por exemplo, de cerca de 25 a 125 mg/ml e, preferivelmente, poderá ser acrescentado em uma concentração de cerca de 50 a 100 mg/ml. Quando o xilitol estiver contido na composição aquosa da presente invenção como sacarideo, o xilitol poderá ser usado em uma concentração, por exemplo, de cerca de 1 a 100 mg/ml e, preferivelmente, poderá ser acrescentado em uma concentração de cerca de 5 a 75 mg/ml. Quando gluconato de cálcio ou gluconato de sódio estiver contido na composição aquosa da presente invenção como sacarideo, o gluconato poderá ser usado em uma concentração, por exemplo, de cerca de 0,2 a 75 mg/ml, e poderá ser adicionado, preferivelmente, em uma concentração de cerca de 1 a 50 mg/ml. Quando macrogol 600 estiver contido na composição aquosa da presente invenção como sacarideo, o surfactants poderá ser usado em uma concentração, por exemplo, de cerca de 0,2 a 75 mg/ml e poderá, preferivelmente, ser acrescentado em uma concentração de cerca de 1 a 50 mg/ml. Quando propileno glicol estiver contido na composição aquosa da presente invenção, o glicol poderá ser usado em uma concentração de, por exemplo, cerca de 1 a 100 mg/ml e, preferivelmente, poderá ser acrescentado em uma concentração de cerca de 5 a 75 mg/ml. Quando creatinina estiver contida na composição aquosa da presente invenção, a creatinina poderá ser usada em uma concentração, por exemplo, de cerca de 0,1 a 50 mg/ml e poderá, preferivelmente, ser adicionada em uma concentração de cerca de 0,5 a 30 mg/ml.

A composição aquosa da presente invenção pode conter um tipo, ou dois, ou mais tipos de surfactantes. Embora o tipo do surfactante não seja particularmente limitado, pode-se usar um tipo, ou dois, ou mais tipos de surfactantes selecionados no grupo que consiste de um surfactante iônico, um surfactante anfolitico, e um surfactante não iônico. Apesar da concentração do surfactante não ser particularmente limitada, o surfactante pode ser usado em uma concentração de cerca de 0,001 a 0,1% e pode, preferivelmente, ser acrescentado em uma concentração de cerca de 0,005 a 0,05%, com base no volume total da composição aquosa.

Exemplos de surfactante iônico incluem, por exemplo, ácido cólico, ácido deoxicólico, e semelhantes; exemplos de surfactante anfolitico incluem, por exemplo, CHAPS (3- [(colamidopropil)dimetilamônio]-1-propanosulfonato), CHAPSO (3-[(3-colamidopropil)dimetilamônio]-2-hidroxi-l- propanosulfonato) e semelhantes, e exemplos de surfactante não iônico incluem, por exemplo, os Tween (marca registrada), TRITON (marca registrada), PLURONIC (marca registrada) Carbowax (marca registrada) e semelhantes. Os nomes mencionados como exemplos específicos de surfactante não iônico são os que representam séries de surfactantes. Por exemplo, os surfactantes Tween incluem os surfactantes com nomes de produto como Tween 20, Tween 40, Tween 60, Tween 80 e semelhantes. Entre esses, os surfactantes não iônicos são usados preferencialmente na presente invenção. Entre os surfactantes não iônicos, Tween 20 e Tween 80 são mais preferenciais e Tween 80 é especialmente preferencial.

A composição aquosa da presente invenção pode conter ainda um agente tampão, e a composição pode conter, por exemplo, um agente tampão selecionado no grupo que consiste de um agente tampão fosfato, um agente tampão citrato, um agente tampão acetato, um agente tampão borato, um agente tampão tartrato, um agente tampão tris e, preferivelmente, a composição aquosa pode conter um agente tampão citrato ou um agente tampão fosfato

Quando se usa um agente tampão citrato, o agente pode ser usado em uma concentração, por exemplo, de cerca de 10 a 250 mM, e pode ser acrescentado, preferivelmente, em uma concentração de cerca de 25 a 75 mM. Quando se usa um agente tampão fosfato, ou um tampão salino-fosfato, o agente pode ser usado em uma concentração de, por exemplo, cerca de 2 a 50 mM e, preferivelmente, pode ser adicionado em uma concentração de cerca de 5 a 15 mM. Embora o pH da composição aquosa da presente invenção não seja particularmente limitado, a composição pode ser preparada de modo a ter um valor de pH, por exemplo, de 6,5 a 8,0; preferivelmente, de 7,0 a 7,8, podendo ser ajustado de modo a ter o valor desejado de pH, com um modificador de pH adequado, tal como ácido hidroclórico e hidróxido de sódio. A composição aquosa da presente invenção é preferivelmente preparada de modo a ser isotônica com os fluidos corporais, e pode conter um agente de tonicidade com essa finalidade. Como agente de tonicidade, por exemplo, pode-se usar cloreto de sódio, glicerol e semelhantes, e o cloreto de sódio pode ser usado preferencialmente.

A composição aquosa da presente invenção pode conter um ácido policarboxilico selecionado no grupo que consiste de EDTA, ácido citrico, ácido fitico, ácido málico, e ácido glucônico. Preferivelmente, pode conter EDTA. Quando a composição aquosa contiver um agente quelante, o agente pode ser usado em uma concentração, por exemplo, de cerca de 0,1 a 10,0 mg/ml, e pode ser adicionado preferivelmente em uma concentração de cerca de 0,2 a 5,0 mg/ml.

Como meio aquoso da composição aquosa da presente invenção, pode-se usar, por exemplo, água, água destilada para injeção, solução salina fisiológica, tampão fosfato, tampão salino-fosfato e semelhantes e pode-se usar preferivelmente o tampão salino-fosfato.

Embora o método para preparação da composição aquosa da presente invenção não seja particularmente limitado, a composição pode ser preparada, por exemplo, dissolvendo-se o hormônio estimulador de foliculos e histidina em um meio aquoso apropriado, tal como água, água destilada para injeção, solução salina fisiológica ou tampão salino- fosfato e, opcionalmente, acrescentando-se um, ou dois, ou mais tipos de aminoácidos, sacarideos, propileno glicol, creatinina, surfactantes, agentes tampão, modificadores de pH, agentes de tonicidade e semelhantes explicados acima, conforme for necessário. A composição pode ser submetida a um processo de esterilização tal como esterilização por filtragem, conforme necessário, para preparar uma composição aquosa para injeção. A composição aquosa da presente invenção pode ser usada como composição farmacêutica para injeção para, por exemplo, tratamento da infertilidade e semelhantes.

Exemplos

A presente invenção será explicada mais especificamente com referência a exemplos. Entretanto, o escopo da presente invenção não selimita aos exemplos seguintes.

Exemplo 1: Exame da proporção restante usando-se aminoácido

Composições aquosas foram preparadas adicionando-se150 IU/ml de um FSH recombinante genético, 50 mg/ml sucrose e 0,01% a 50 mM e 0,01% Tween 80 a 50 mM tampão citrato, 10 mM tampão salino-fosfato (PBS, do inglês Phosphate Buffered Saline), ou 10 mM tampão fosfato (PB) e adicionando-se ainda aminoácidos (concentração: 0,5 mg/ml) à mistura em combinações com os tampões conforme mostra a Tabela 1 abaixo. Uma porção de 0,5 ml de cada composição aquosa foi colocada em um recipiente de 2 ml, que foi selado e armazenado a 50° por duas semanas. Após as duas semanas, a quantidade de FSH foi medida por um imunoensaio, e calculou-se a sua proporção em relação à quantidade de FSH medida no inicio da experiência (proporção restante). Os resultados são mostrados na Tabela 1 abaixo. Tabela 1

Tabela 1 (cont.)

Exemplo 2: Exame da proporção restante usando-se uma combinação de aminoácidos

Composições aquosas foram preparadas adicionando-se 5 150 IU/mg FSH recombinante genético, 50 mg/ml sucrose, e0,01% Tween 80 a 10 mM PBS e adicionando-se ainda histidina e/ou metionina à mistura conforme mostra a Tabela 2 abaixo, nas respectivas concentrações. Como controle, preparou-se uma composição aquosa adicionando-se 150 IU/ml FSH recombinante genético e 0,01% Tween 80 a 10 mM PBS. Uma porção de 0,5 ml de cada composição aquosa foi colocada em um recipiente de 2 ml, que foi selado e armazenado a 40° por 8 semanas. No inicio da experiência, e após 5 semanas e 8 semanas, cada composição aquosa foi analisada por HPLC de fase reversa (as Figuras de 1 a 3 mostram os gráficos de HPLC obtidos após 8 semanas) e os valores obtidos das áreas de pico da subunidade - e subunidade - foram corrigidos com base nos valores de áreas de pico das subunidades obtidos com uma amostra padrão de FSH (10 g/ml solução de FSH recombinante genético congelado armazenado a -80°, descongelado antes do uso). Então, as proporções restantes de subunidades nas composições aquosas foram calculadas como proporções das quantidades medidas após os periodos, em relação às quantidades medidas no inicio da experiência. As quantidades de FSH foram calculadas totalizando-se os valores das áreas de picos das subunidades. Os resultados são mostrados na Tabela 2 abaixo. Tabela 2

Com base nesses resultados de medições, pode-se compreender que a histidina e a metionina mostram um alto efeito de estabilização para a subunidade - e subunidade -r respectivamente. Além disso, a preparação de FSH contendo ambas, histidina e metionina como agentes estabilizantes mostrou-se extremamente estável.

Exemplo 3: Exame da proporção restante para a concentração de histidina

Composições aquosas foram preparadas adicionando-se 150 IU/ml FSH recombinante genético, 50 mg/ml sucrose e 0,01% Tween 80 a 50 mM tampão citrato ou 10 mM PBS, acrescentando-se ainda histidina à mistura nas combinações mostradas na Tabela 3 abaixo. A proporção restante foi então calculada da mesma maneira que no Exemplo 1. A Tabela 3 abaixo mostra os resultados. Tabela 3

Exemplo 4: Exame e comparação da proporção restante usando-se sacarideo

Composições aquosas foram preparadas adicionando-se 150 IU/ml FSH recombinante genético, 0,5 g/ml histidina e 0,01% Tween 80 a 50 mM tampão citrato ou 10 mM PBS, e adicionando-se ainda um sacarideo, propileno glicol ou creatinina à mistura nas combinações mostradas na Tabela 4 abaixo, e a proporção restante foi examinada da mesma maneira que se fez no Exemplo 1. A Tabela 4 abaixo mostra os resultados. Os resultados obtidos não se adicionando 5 histidina também são mostrados como exemplos comparativos. Tabela 4

Tabela 4 (cont.)

Exemplo 5: Exame e comparação da proporção restante usando-se surfactante

Composições aquosas foram preparadas adicionando-se 5 150 IU/ml FHS recombinante genético, 0,5 mg/ml histidina e50 mg/ml sucrose a 50 mM tampão citrato, 10 mM PBS ou 10 mM PB, e adicionando-se ainda um surfactante à mistura em combinações com os tampões conforme mostra a Tabela 5 abaixo, e as porcentagens restantes de FSH nas composições foram calculadas da mesma maneira que no Exemplo 1. A Tabela 5 abaixo mostra os resultados. Tabela 5

Tabela 5 (cont.)

Aplicabilidade industrial

A composição aquosa da presente invenção é útil como uma composição farmacêutica estável na qual a redução da 5 atividade durante o armazenamento e distribuição é eliminada.

Claims

1. Composição aquosa caracterizada por compreender hormônio folículo-estimulante, histidina e metionina como agente estabilizante.

2. Composição aquosa de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a concentração de histidina ser de 0,05 a 10,0 mg/mL.

3. Composição aquosa, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada por compreender um hormônio folículo estimulante genético humano recombinante como o hormônio folículo estimulante.

4. Composição aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada por ainda compreender um ou dois ou mais tipos de substâncias selecionadas a partir do grupo que consiste em um sacarídeo, propileno glicol e creatinina.

5. Composição aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada por ainda compreender um ou dois ou mais tipos de substâncias selecionadas do grupo que consiste em xilitol, inositol, propilenoglicol, sacarose, gluconato de cálcio, gluconato de sódio, manitol, macrogol 600 e creatinina.

6. Composição aquosa, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a concentração de metionina ser de 0,05 a 10 mg / mL.

7. Composição aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada por ainda compreender um surfactante.

8. Composição aquosa, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por o surfactante ser um surfactante não iônico.

9. Composição aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada por ainda compreender um agente tampão de fosfato ou um agente tampão de citrato.

10. Composição aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada por ter um valor de pH de 6,5 a 8,0.

11. Composição aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada por ainda compreender cloreto de sódio como um agente de tonicidade.

12. Composição aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada por ainda compreender EDTA como um ácido policarboxílico.

13. Uso do agente definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender histidina e metionina para estabilizar uma composição farmacêutica aquosa contendo hormônio folículo-estimulante como ingrediente ativo.